TW201607531A - 癌幹細胞之增殖抑制劑 - Google Patents

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Abstract

本發明課題為提供一種增殖抑制劑，其係抑制現存抗癌劑治療法中表現出抵抗性的癌幹細胞之增殖，透過細胞凋亡來發揮作用。 本發明為一種癌幹細胞之增殖抑制劑，其係以類視色素促效劑(宜為他米巴羅汀)單劑或其與類視色素合成物促效劑(宜為蓓薩羅丁)兩劑作為有效成分之癌幹細胞之增殖抑制劑，而且藉由併用各種抗癌劑來增強抗癌劑的效果。

Description

癌幹細胞之增殖抑制劑
本發明關於一種癌幹細胞之增殖抑制劑，詳細而言關於一種在現存抗癌劑治療法中表現出抵抗性的癌幹細胞之增殖抑制劑。
醫學的發展之中，癌症治療是進步極快的領域，其治療法種類繁多。儘管如此，在日本厚生勞働省的人口動態調查或世界保健機構的調查中，預測癌症死亡人數今後還會增加。其中一個原因是在現存的抗癌劑治療中表現出抵抗性的癌幹細胞的存在，而正受到矚目。
癌細胞會因為遺傳變異的累積或癌細胞周圍的微小環境變化等變得具有高增殖能力、浸潤能力、轉移能力，然而並不是構成癌塊的癌細胞的全部都兼具這些特徵。近年來解明了具有這些特徵，使癌症發生並且惡化能力高的細胞，只佔了全體的極小部分(非專利文獻1)。具有這種特徵的癌細胞，也具有自行複製能力與可分化成多種細胞的多分化能力這兩個可在幹細胞共通觀察到的特徵，因此被稱為癌幹細胞。目前為止，在急性白血病、乳 癌、大腸癌、腦腫瘤、前列腺癌、胰臟癌等的癌種之中，可觀察到其存在。
另外，近年來逐漸發現癌幹細胞在現存抗癌劑治療法中會表現出抵抗性。例如在急性白血病的情況，癌幹細胞會留在被稱為幹細胞壁龕的微小環境，而進入細胞分裂休止的休眠期(G0期)，此狀態下，會對於抗癌劑的治療產生抗性。另外，許多固態癌的幹細胞的P糖蛋白等的表現高，會對抗癌劑表現出抗性。此外還判明了抗癌劑治療後的癌組織中，癌幹細胞存在比率比治療前還高。
這些現象被認為是抗癌劑治療後無法根治癌症而復發的一大原因，逐漸發現以癌幹細胞為標靶的治療劑的開發是根治癌症的重要方法。目前為止已有文獻報告出以癌幹細胞為標靶的治療劑可抑制癌的增殖，增強現存抗癌劑的治療效果。然而，目前臨床現場並未建立以癌幹細胞為標靶的治療劑，現況中希望開發出這種藥劑(非專利文獻2)。於是，本發明人等為了開發出使用癌幹細胞標記，可臨床應用，並以癌幹細胞為標靶的新治療劑，而進行了檢討(非專利文獻3)。
先前技術文獻 非專利文獻
非專利文獻1：Proc. Natl. Acad. Sci. USA 100, 3983-3988(2003)
非專利文獻2：Nature 453, 338-344(2008)
非專利文獻3：Mol. Cancer Res. 7, 330-338(2009)
然而非常希望有一種癌幹細胞之增殖抑制劑，能夠更有效抑制在現存的抗癌劑治療法中表現出抵抗性的癌幹細胞之增殖。
於是，本發明的目在於提供一種癌幹細胞之增殖抑制劑，可有效抑制對於現存的抗癌劑治療法表現出抵抗性的癌幹細胞的增殖。
本發明人等為了解決上述課題，著眼於癌幹細胞內資訊傳達路徑而鑽研檢討。
亦即，癌幹細胞會藉由許多細胞內資訊傳達路徑而維持未分化狀態，而具有維持癌的能力。阻礙這些資訊傳達路徑的物質，可藉由誘導癌幹細胞的分化或細胞凋亡來抑制癌的增殖，被認為是新抗癌劑的目標。
於是本發明人等，使用類視色素(retinoid)及類視色素合成物(rexinoid)，在檢討類視色素及類視色素合成物所發揮的增殖、生存、分化、細胞凋亡等的生理學作用，包括使癌幹細胞分化、細胞凋亡等的增殖抑制作用時，認為可成為新的抗癌劑。
在檢討癌幹細胞的增殖抑制作用時，由於癌 幹細胞是癌細胞中一部分的集團，因此決定以癌幹細胞標記作為指標來進行檢討，人類胰臟癌細胞會表現出各種癌幹細胞標記，故使用此細胞進行檢討。
結果發現，藉由單獨使用類視色素促效劑，尤其是他米巴羅汀(Am-80)、或與類視色素合成物促效劑併用，尤其是蓓薩羅丁，可抑制人類胰臟癌細胞的細胞數量、形態、幹細胞標記的表現。另外，類視色素受體(RAR)及類視色素合成物受體(RXR)是核內轉錄因子的其中一個，考慮到與抑制表觀遺傳作用的化合物或藥劑的交互作用，因此與含有這些抑制化合物或作用機制相異的分子標的藥之抗癌劑併用，結果發現顯著表現出癌幹細胞的增殖抑制作用。本發明基於這樣的見解而完成。
亦即，本發明關於下述(1)~(7)。
(1)一種癌幹細胞之增殖抑制劑，其係以類視色素促效劑作為有效成分。
(2)如前述(1)所記載之癌幹細胞之增殖抑制劑，其中前述類視色素促效劑為他米巴羅汀(Am-80)。
(3)如前述(1)或(2)所記載之癌幹細胞之增殖抑制劑，其中進一步以類視色素合成物促效劑作為有效成分。
(4)如前述(3)所記載之癌幹細胞之增殖抑制劑，其中前述類視色素合成物促效劑為蓓薩羅丁。
(5)如前述(1)~(4)中任一項之癌幹細胞之增殖抑制劑，其中含有抗癌劑。
(6)如前述(5)所記載之癌幹細胞之增殖抑制劑，其中含有類視色素促效劑0.5~20mg/人類個體，含有類視色素促效劑與類視色素合成物促效劑合計0.5~500mg/人類個體，且含有抗癌劑1.0~1000mg/人類個體。
(7)如前述(5)或(6)所記載之癌幹細胞之增殖抑制劑，其中前述抗癌劑係選自DNA交互作用劑、代謝拮抗劑、微管蛋白交互作用劑、分子標的治療劑、表觀遺傳之作用阻礙劑及荷爾蒙劑所構成之群。
依據本發明，藉由單獨投予類視色素促效劑、或與類視色素合成物促效劑合併投予，可減少癌幹細胞。另外，進一步藉由投予抗癌劑，可減少或縮小腫瘤塊的體積。另外，同時投予類視色素促效劑及類視色素合成物促效劑與抗癌劑的方法也有用。依據本發明，可治療的癌症例如有在抗癌劑治療中表現出抵抗性的急性骨髓性白血病、非何杰金氏淋巴腫等的血液癌、胰臟癌、肝細胞癌、大腸癌等的消化器官癌、肺癌、乳癌、前列腺癌及卵巢癌等。
圖1表示在相異濃度的Am80存在下將Panc-1以Am80懸浮培養1週，細胞數目變化之圖形。
圖2表示在懸浮培養條件下對Panc-1實施Am80處理，ALDH陽性細胞數的減少之圖形。
圖3表示在懸浮培養條件下對Panc-1實施Am80處理，CD24/CD44/ESA陽性細胞數的減少之圖形。
圖4表示在懸浮培養條件下並且在Am80存在下培養Panc-1，胰臟組織分化標記上昇之圖形。
圖5表示對MIA Paca2細胞實施Am80與蓓薩羅丁的共處理1週，細胞增殖活性的抑制之圖形。
圖6表示對MIA Paca2細胞實施Am80與5-aza-dC的共處理1週，細胞增殖活性的抑制之圖形。
圖7表示對MIA Paca2細胞實施Am80與SAHA的共處理1週，細胞增殖活性的抑制之圖形。
圖8表示對MIA Paca2細胞實施Am80與VPA的共處理1週，細胞增殖活性的抑制之圖形。
圖9表示Am80對人類胰臟癌細胞的細胞遊走能力產生的影響之顯微鏡照片。
圖10表示Am80對人類胰臟癌細胞的癌轉移抑制效果之圖形。
圖11表示Am80對人類胰臟癌細胞的致腫瘤抑制效果之圖形。
圖12表示對移值到無毛小鼠的人類胰臟癌幹細胞投予Am80的抑制效果之圖形。
圖13表示Am80對人類胰臟癌細胞的致腫瘤抑制效果之病理標本照片。
圖14表示Am80與抗癌劑．吉西他賓對人類胰臟癌細胞在體外的併用效果之圖形。
圖15表示Am80與抗癌劑．吉西他賓對人類胰臟癌細胞/無毛小鼠在體內的併用效果之圖形。
圖16表示Am80與表觀遺傳阻礙劑VPA對人類胰臟癌細胞/無毛小鼠在體內的併用效果之圖形。
圖17表示Am80與5-AZ對人類白血病細胞Kasumi-1的併用效果之等效線圖。
圖18表示對MCF-7細胞實施Am80與5-AZ的共處理96小時，細胞增殖活性的抑制之圖形。
圖19表示對LNCaP細胞實施Am80與5-AZ的共處理96小時，細胞增殖活性的抑制之圖形。
以下針對本發明的實施形態具體說明。
本發明的癌幹細胞之增殖抑制劑是以類視色素促效劑作為有效成分。在本發明中，類視色素促效劑包括其藥劑學上可容許的有機或無機的酸加成鹽。特別合適的類視色素促效劑可列舉他米巴羅汀(Am80)。
另外，本發明的癌幹細胞之增殖抑制劑適合與類視色素合成物促效劑併用。類視色素合成物促效劑還包括其藥劑學上可容許的有機或無機的酸加成鹽，特別合適者可列舉蓓薩羅丁(Targretin)。
本發明的癌幹細胞之增殖抑制劑，藉由併用 各種抗癌劑，而具有增強抗癌劑的抗癌活性的作用。
在本發明中，作為抗癌劑的DNA交互作用劑可列舉烷基化劑之環磷醯胺(cyclophosphamide)、美法崙(melphalan)、順鉑(Cisplatin)、卡鉑(Carboplatin)等，另外還可列舉DNA拓樸異構酶I阻礙劑的喜樹鹼(Camptothecin)、DNA拓樸異構酶II阻礙劑的依托泊苷(Etoposide)、道諾黴素(Daunorubicin)、阿黴素(doxorubicin)等。合適者可列舉可口服投予環磷醯胺、美法崙、順鉑、喜樹鹼、阿黴素。
作為抗癌劑的代謝拮抗劑，可列舉葉酸拮抗劑例如甲氨蝶呤(Methotrexate)及三甲氨蝶呤(Trimethotrexate)、嘧啶拮抗劑例如5-氟尿嘧啶、5-aza-dC、氮雜胞苷、阿糖胞苷(Cytarabine)及吉西他濱(Gemcitabine)、嘌呤拮抗劑例如氟達拉濱(Fludarabine)。合適者可列舉可口服投予甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶、5-aza-dC、氮雜胞苷、阿糖胞苷、吉西他濱、氟達拉濱。
作為抗癌劑的微管蛋白阻礙劑，合適者可列舉太平洋紫杉醇(Paclitaxel)、歐洲紫杉醇(Docetaxel)。
作為抗癌劑的分子標的治療劑，可列舉環氧合酶2阻礙劑的塞來昔布(Celecoxib)、羅非昔布(rofecoxib)、增殖因子訊號阻礙劑的厄洛替尼(Erlotinib)、伊馬替尼(imatinib)等。合適者可列舉可口服投予吉非替尼(Gefitinib)、伊馬替尼。
作為抗癌劑的表觀遺傳作用阻礙劑，可列舉 DNA甲基化阻礙劑之氮雜胞苷、組蛋白去乙醯酶阻礙劑的丙戊酸、SAHA(Vorinostat)、Romidepsin(FK228)。合適者可列舉可口服投予氮雜胞苷、丙戊酸、SAHA(Vorinostat)。
作為抗癌劑的荷爾蒙劑，可列舉醋酸亮丙瑞林(Leuprolide Acetate)、醋酸戈舍瑞林(Goserelin Acetate)、抗雌激素劑的泰莫西芬(Tamoxifen)、抗雄激素劑的氟他胺(flutamide)、比卡魯胺(Bicalutamide)、恩雜魯胺(Enzalutamide)等。合適者可列舉可口服投予泰莫西芬、氟他胺、比卡魯胺、恩雜魯胺。
抗癌劑的組合可列舉例如太平洋紫杉醇(或歐洲紫杉醇)與順鉑與TS-1的組合，歐洲紫杉醇與草酸鉑的組合，歐洲紫杉醇與分子標的藥的組合等，然而並不受該等所限定。
本發明的癌幹細胞之增殖抑制劑，可藉由將有效量以口服，經直腸、局部、或非口服、靜脈內或腫瘤內的注射之任一方式來投予，有效地阻礙人類的癌幹細胞及癌塊的成長。
本發明的癌幹細胞之增殖抑制劑可為錠劑、膠囊、丸劑、核糖體等的固態或膠體狀、或可為液狀(參考Cancer Chemotherapy Handbook version 2,15-34(1994))。
藉由本發明的癌幹細胞之增殖抑制劑進行治療時，可依照所治療的癌症的類型設定在任何適當的量，適用有效量的方法會隨著所治療的癌幹細胞的存在比例而 變。其中一個例子可設定在含有類視色素促效劑與類視色素合成物促效劑合計0.5~500mg/人類個體，且含有抗癌劑1.0~1000mg/人類個體。另外，類視色素促效劑適合定為0.5~20mg/人類個體。
本發明的癌幹細胞之增殖抑制劑，宜單獨使用類視色素促效劑，或與類視色素合成物促效劑併用，同時投予抗癌劑，使癌幹細胞分化，導致細胞凋亡，抑制癌細胞增殖或使其縮小。為了抑制癌幹細胞的增殖，可因應必要投予2週~2年。
[實施例]
以下基於實施例對本發明作說明。此外，下述實施例為例示，理所當然不會限定本發明。
[實施例1]
<Am80對人類胰臟癌細胞球體的增殖抑制效果>
若使用人類胰臟癌細胞株，以在DMEM/F12中添加B27、20ng/mL EGF、20ng/mL bFGF、及4μg/mL heparin的培養基，使用低貼附性培養皿進行培養，則會形成細胞塊，能夠以懸浮狀態來進行培養，在幾個癌幹細胞標記與其他癌症文獻所報告的標記增加的狀態下進行培養。首先，將此含有癌幹細胞標記陽性細胞的細胞塊以添加Am80的培養基培養1週，解析對於細胞塊的增殖或癌幹細胞標記的表現量的影響。結果顯示，依存於他米巴羅汀 (Am80)的濃度，細胞塊的增殖會受到抑制。細胞塊的數量減少，細胞數也依存於濃度而減少(圖1)。若進一步將此細胞塊以含有Am80的培養基培養合計2週，則細胞塊進一步變小，細胞數減少。由以上的結果，判明了Am80具有抑制含有胰臟癌幹細胞的細胞集團增殖的作用。
[實施例2]
<Am80對人類胰臟癌細胞Panc-1球體的ALDH活性的抑制效果>
如實施例1所示般，Am80會抑制胰臟癌細胞株的懸浮培養狀態下的細胞塊形成，因此認為其根源的癌幹細胞有減少的可能性。已知造血幹細胞或前驅細胞等的醛去氫酶(ALDH)活性高、分化細胞的活性低。於是在添加Am80並且懸浮培養1週的胰臟癌細胞中加入前驅物Bodipy-aminoacetaldehyde(ALDEFLUOR,Stem Cell Technologies)，以流式細胞儀定量解析醛去氫酶活性代謝產生的Bodipy-aminoacetate的螢光陽性細胞數量。結果發現，若添加Am80進行培養，則ALDH活性依存於濃度而降低，表示癌幹細胞量有減少的可能性(圖2)。
[實施例3]
<Am80對存在於人類胰臟癌細胞Panc-1球體的CD24+/CD44+/ESA+細胞的抑制效果>
使用將各種癌幹細胞表面標記的表現以蛋白質層級作 螢光標識的1次抗體，以流式細胞儀對於添加Am80並且懸浮培養1週的胰臟癌細胞進行解析，結果觀察到尤其是CD24+/CD44+/ESA+陽性細胞的存在率會因為添加Am80而明顯減少。尤其在10μM的Am80存在下，CD24+/CD44+/ESA+陽性細胞的存在率減半。亦即表示Am80有使癌幹細胞減少的可能性(圖3)。
[實施例4]
<對人類胰臟癌細胞球體的分化標記增強效果>
接下來，由添加Am80懸浮培養1週的胰臟癌細胞萃取total RNA，以胰臟組織特異的分化標記所對應的引子進行定量RT-PCR，結果觀察到Pdx1或升糖素等的基因表現依存於Am80的濃度而上昇的情形。此結果表示Am80有促進含有癌幹細胞的細胞集團的分化的可能性(圖4)。
[實施例5]
<併用Am80與蓓薩羅丁(bexarotene)對人類胰臟癌細胞MIA-Paca2球體的細胞增殖活性的影響>
將含有癌幹細胞標記陽性細胞的MIA-Paca2細胞塊以添加Am80(10nM-1μM)與蓓薩羅丁的培養基懸浮培養1週後，添加MTT試藥(Cell Counting Kit-8,Dojindo)進一步培養3小時，然後測定450nm的吸光度(OD450)，解析對細胞塊的細胞增殖活性的影響。結果顯示，依存於Am80與蓓薩羅丁的濃度，細胞塊的細胞增殖活性緩慢受到抑制 (圖5)。
[實施例6]
<併用Am80與DNA甲基阻礙劑．5-aza-dC對人類胰臟癌細胞MIA-Paca2球體的增殖活性的影響>
將含有癌幹細胞標記陽性細胞的MIA-Paca2細胞塊以添加Am80(10nM-1μM)與5-aza-dC的培養基懸浮培養1週後，添加MTT試藥(Cell Counting Kit-8,Dojindo)進一步培養3小時，然後測定450nm的吸光度，解析對細胞塊的細胞增殖的影響。結果顯示，依存於Am80與5-aza-dC的濃度，細胞塊的細胞增殖活性會受到抑制(圖6)。
[實施例7]
<併用Am80與組蛋白去乙醯酶阻礙劑．SAHA對人類胰臟癌細胞MIA-Paca2球體的增殖抑制的影響>
將含有癌幹細胞標記陽性細胞的MIA-Paca2細胞塊以添加Am80(10nM-1μM)與SAHA的培養基懸浮培養1週後，添加MTT試藥(Cell Counting Kit-8,Dojindo)進一步培養3小時，然後測定450nm的吸光度，解析對細胞塊的細胞增殖活性的影響。結果顯示，依存於Am80與SAHA的濃度，細胞塊的細胞增殖活性會緩慢受到抑制(圖7)。
[實施例8]
<併用Am80與組蛋白去乙醯酶阻礙劑．丙戊酸(VPA)對人類胰臟癌細胞MIA-Paca2球體的增殖抑制的影響>
將含有癌幹細胞標記陽性細胞的MIA-Paca2細胞塊以添加Am80(6.3nM~100nM)與VPA的培養基懸浮培養1週後，添加MTT試藥(Cell Counting Kit-8,Dojindo)進一步培養3小時，然後以450nm的吸光度來測定對細胞塊的細胞增殖的影響。結果顯示，Am80與VPA表現出相乘的細胞塊的細胞增殖阻礙活性(圖8)。
[實施例9]
<Am80對人類胰臟癌幹細胞的細胞遊走能力的影響>
將含有胰臟癌幹細胞的胰臟癌細胞以抗體磁珠分離成CD133陽性細胞與陰性細胞後，添加1μM的Am80，在博登量測器(Boyden chamber)進行培養，觀察遊走至膜裏側的細胞。結果顯示，在CD133陽性細胞的癌幹細胞的部份，Am80顯著抑制細胞遊走能力(圖9)。
[實施例10]
<Am80對人類胰臟癌細胞的癌轉移抑制效果>
將含有胰臟癌幹細胞的胰臟癌細胞(1×106個)移植至無毛小鼠的胰臟，測定一個月後轉移至肝臟所形成的腫瘤大小(Tumor volume)。Am80是以3mg/kg．day投予一個月。此結果與對照群相比，較能夠抑制胰臟癌的轉移(圖10)。
[實施例11]
<Am80對人類胰臟癌細胞的致腫瘤抑制效果>
將含有胰臟癌幹細胞的胰臟癌細胞(1×106個)移植到無毛小鼠的皮下，2週後，對於觀察到形成腫瘤的小鼠以3mg/kg．day投予Am80一個月(Days after Am80 treatment)。結果顯示，並未觀察到對體重(Body weight)產生影響(A)，然而與對照群相比，較能夠抑制體內胰臟癌的增殖(B)(圖11)。
[實施例12]
<Am80對移植到無毛小鼠的人類胰臟癌幹細胞的抑制效果>
將含有胰臟癌幹細胞的胰臟癌細胞(1×106個)移植到無毛小鼠的皮下，2週後，對於觀察到形成腫瘤的小鼠以3mg/kg．day投予Am80一個月。然後將腫瘤取出，以胰蛋白酶處理，使用抗CD133抗體，以流式細胞儀測定胰臟癌幹細胞的比例，結果可知，Am80與對照群相比，較具有抑制體內胰臟癌幹細胞的作用(圖12)。
[實施例13]
<Am80對人類胰臟癌細胞的致腫瘤抑制效果>
將含有胰臟癌幹細胞的胰臟癌細胞(1×106個)移植至無毛小鼠的皮下，2週後，對於觀察到形成腫瘤的小鼠以 3mg/kg．day投予Am80一個月。製作出各腫瘤的病理標本，並嘗試評估細胞組織形態，結果可知，與未投予Am80的對照群相比，胰臟癌組織的形態呈現分化型(圖13)。
[實施例14]
<併用抗癌劑．吉西他賓與Am80對人類胰臟癌細胞的效果>
將人類胰臟癌細胞在懸浮培養狀態下加入吉西他賓(10nM)，培養1週之後，進一步添加Am80，懸浮培養1週，計算細胞塊的數目(Number of colonies formed)。結果可知，對於抗癌劑處理後的胰臟癌細胞，Am80在體外也具有球體形成抑制效果(圖14)。
[實施例15]
<併用抗癌劑．吉西他賓與Am80對人類胰臟癌細胞的效果>
將含有胰臟癌幹細胞的胰臟癌細胞(1×106個)移植到無毛小鼠的皮下，2週後，對於觀察到形成腫瘤的小鼠以3mg/kg．day每天投予Am80，以50mg/kg每隔3天投予吉西他賓一個月(Days after Am80 and Gem treatment)。結果可知，與對照群(未投予Am80及吉西他賓)或單獨投予吉西他賓相比，同時投予Am80與吉西他賓較顯著抑制體內胰臟癌的增殖(圖15)。此處Gem表示吉西他賓。
[實施例16]
<併用表觀遺傳阻礙劑VPA與Am80對人類胰臟癌細胞的效果>
將含有胰臟癌幹細胞的胰臟癌細胞(1×106個)移植到無毛小鼠的皮下，2週後，對於觀察到形成腫瘤的小鼠以3mg/kg．day每天投予Am80，以500mg/kg每隔3天投予VPA，投予一個月(Days after Am80 and VPA treatment)。結果可知，與對照群(未投予Am80及VPA)或單獨投予VPA、單獨投予Am80相比，同時投予Am80與VPA較顯著抑制體內胰臟癌的增殖(圖16)。
[實施例17]
<併用Am80與Docetaxel(DXL)對人類胰臟癌細胞MIA-Paca2/無毛小鼠的增殖抑制的影響>
使用套管針將含有癌幹細胞標記陽性細胞的人類胰臟癌細胞MIA-Paca2的腫瘤片移植至6週齡的雌性BALB/cAJcl-nu無毛小鼠(4隻/群，只有對照群是5隻)的背側部皮下。從腫瘤體積達到100~200mm3的時間點開始投予。Am80是以2mg/kg投予1次/天，連日口服投予21天，DXL是以5mg/kg投予至靜脈內，從第1天開始每隔4天投予3次。併用群是以與各單劑相同用量、投予法來投予，在投予結束翌日(第22天)測定腫瘤徑。將腫瘤的長徑及短徑的測定值代入長徑×短徑2/2的式子求得腫瘤 體積(mm3)。此外，對照群是將生理食鹽水投予至腹腔內，從第1天開始每隔4天投予3次。結果顯示，Am80與DXL的併用效果高於各單劑效果，而且表現出相乘的細胞增殖阻礙活性。將結果揭示於下述表1。
[實施例18]
<併用Am80與DNA甲基化阻礙劑．氮雜胞苷(5-AZ)對人類白血病細胞株Kasumi-1的增殖抑制的影響>
將含有癌幹細胞標記陽性細胞的人類白血病細胞株Kasumi-1以添加20%FBS的RPMI1640培養基進行培養，使用等效線圖(Isobrogram)，檢討Am80與5-AZ的併用所產生的增殖抑制作用。其IC50值分別為1.0μM、8.4μM。將這些濃度定為1.0時，求得併用效果的比率，在將兩軸的1.0連結而成的直線上的情況，表現出相加效果，在直線下側的情況，表現出相乘效果。Am80與5-AZ的併用，在增殖抑制作用之中，表現出相乘效果(圖17)。
[實施例19]
<併用Am80與DNA甲基化阻礙劑．5-AZ對人類乳癌細胞株MCF-7的增殖抑制的影響>
將含有癌幹細胞標記陽性細胞的人類乳癌細胞株MCF-7以添加2%FBS的RPMI1640培養基進行培養，檢討Am80與5-AZ的併用所產生的增殖抑制作用。暴露96小時的IC50值分別為1μM、20μM，因此Am80是檢討公比為2且濃度範圍為0.125μM至1μM的增殖抑制作用，另外5-AZ是檢討公比為2且濃度範圍為2.5μM至20μM的增殖抑制作用。在併用的情形，使用這些濃度來檢討增殖抑制作用。Am80與5-AZ的併用，在增殖抑制作用之中，表現出相乘效果(圖18)。
[實施例20]
<併用Am80與Docetaxel(DXL)對人類乳癌細胞株MCF-7/無毛小鼠的增殖抑制的影響>
使用套管針將含有癌幹細胞標記陽性細胞的人類乳癌細胞株MCF-7的腫瘤片移植至6週齡的雌性BALB/cAJcl-nu無毛小鼠(5隻/群)的背側部皮下。從腫瘤體積達到100-200mm3的時間點開始投予。Am80是以1mg/kg投予1次/天，連日口服投予21天，DXL是以3.5mg/kg投予至靜脈內，從第1天開始每隔4天投予3次。併用群是以與各單劑相同的用量、投予法來投予，在投予結束翌日(第22天) 測定腫瘤徑。使用測徑器測定腫瘤的長徑及短徑，代入長徑×短徑2/2的式子求得腫瘤體積(mm3)。此外，對照群是將生理食鹽水投予至腹腔內，從第1天開始每隔4天投予3次。結果顯示，對於增殖緩慢的人類乳癌細胞株MCF-7，Am80與DXL的併用效果高於各單劑的效果，而且表現出相乘的細胞增殖阻礙活性。將結果揭示於下述表2。
[實施例21]
<併用Am80與DNA甲基化阻礙劑．5-AZ對人類前列腺癌細胞株LNCaP的增殖抑制的影響>
將含有癌幹細胞標記陽性細胞的人類前列腺癌細胞株LNCaP以添加10%FBS的RPMI1640培養基進行培養，檢討Am80與5-AZ的併用所產生的增殖抑制作用。暴露96小時的IC50值分別為2μM、25μM，因此Am80是檢討公比為2且濃度範圍為0.125μM至1μM的增殖抑制作用，另外，5-AZ是檢討公比為2且濃度範圍為1.56μM至 12.5μM的增殖抑制作用。在併用的情況，使用這些濃度來檢討增殖抑制作用。Am80與5-AZ的併用，在增殖抑制作用之中，表現出相乘效果(圖19)。
[實施例22]
<併用Am80與Docetaxel(DXL)對人類前列腺癌細胞株LNCaP/無毛小鼠的增殖抑制的影響>
使用套管針將含有癌幹細胞標記陽性細胞的人類前列腺癌細胞株LNCaP的腫瘤片移植至6週齡的雌性BALB/cAJcl-nu無毛小鼠(4隻/群)的背側部皮下。從腫瘤體積達到100-200mm3的時間點開始投予。Am80是以1mg/kg投予1次/天，連日口服投予21天，DXL是以5mg/kg投予至靜脈內，從第1天開始每隔4天投予3次。併用群是以與各單劑相同用量、投予法來投予，在投予結束翌日(第22天)測定腫瘤徑。使用測徑器測定腫瘤的長徑及短徑，代入長徑×短徑2/2的式子求得腫瘤體積(mm3)。此外，對照群是將生理食鹽水投予至腹腔內，從第1天開始每隔4天投予3次。結果顯示，對於人類前列腺癌細胞株LNCaP，Am80與DXL的併用效果高於各單劑的效果，而且表現出相乘的細胞增殖阻礙活性。將結果揭示於下述表3。
若使用類視色素促效劑．他米巴羅汀(Am-80)單劑或與類視色素合成物促效劑．蓓薩羅丁(Targretin)兩劑併用，則會抑制人類胰臟癌幹細胞的標記表現及增殖，另外，藉由併用各種抗癌劑，可觀察到增強抗癌劑的效果。此外，對於各種癌症，藉由併用Am80與各種抗癌劑，可觀察到增強抗癌劑的效果。

Claims (7)

  1. 一種癌幹細胞之增殖抑制劑，其係以類視色素促效劑作為有效成分。
  2. 如申請專利範圍第1項之癌幹細胞之增殖抑制劑，其中前述類視色素促效劑為他米巴羅汀(Am-80)。
  3. 如申請專利範圍第1或2項之癌幹細胞之增殖抑制劑，其中進一步以類視色素合成物(rexinoid)促效劑作為有效成分。
  4. 如申請專利範圍第3項之癌幹細胞之增殖抑制劑，其中前述類視色素合成物促效劑為蓓薩羅丁。
  5. 如申請專利範圍第1或2項之癌幹細胞之增殖抑制劑，其中含有抗癌劑。
  6. 如申請專利範圍第5項之癌幹細胞之增殖抑制劑，其中含有類視色素促效劑0.5~20mg/人類個體，含有類視色素促效劑與類視色素合成物促效劑合計0.5~500mg/人類個體，且含有抗癌劑1.0~1000mg/人類個體。
  7. 如申請專利範圍第5項之癌幹細胞之增殖抑制劑，其中前述抗癌劑係選自DNA交互作用劑、代謝拮抗劑、微管蛋白交互作用劑、分子標的治療劑、表觀遺傳之作用阻礙劑及荷爾蒙劑所構成之群組。
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