TW201534349A - ＴＮＦＲ：Ｆｃ融合多肽之替代調配物 - Google Patents

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Abstract

本發明係關於適於儲存含有TNFR：Fc之多肽之穩定水性醫藥組合物。

Description

TNFR：Fc融合多肽之替代調配物
本發明係關於適於儲存含有TNFR：Fc之多肽之不含一些所選胺基酸之穩定水性醫藥組合物。
通常在使用前儲存治療性多肽製劑。然而，具體而言若多肽在不存在穩定劑(例如精胺酸)下以水性形式儲存延長之時段則係不穩定的。依賴水性儲存之替代係製備乾燥凍乾形式之多肽，但是，經乾燥多肽之重構通常導致聚集或變性。此多肽聚集由於其可導致免疫原性而係不合意的。
融合至Fc結構域之TNF(腫瘤壞死因子)受體(TNFR：Fc)之市售可溶性形式稱為依那西普(etanercept)。依那西普(商標名ENBREL®)藉由充當TNF抑制劑干擾腫瘤壞死因子(TNF)。當前將由連接至人類IgG1之Fc部分之人類75kDa(p75)腫瘤壞死因子受體(TNFR)之細胞外配體結合部分組成之此二聚融合多肽與L-精胺酸及/或L-半胱胺酸一起調配為聚集抑制劑以預防多肽之聚集(參見EP1478394 B1)。
然而，精胺酸可在一些人中造成嚴重副效應。在注射精胺酸後可能發生嚴重過敏反應(稱為過敏性)以及胃部不適(包括噁心、胃痙攣或糞便數量增加)。其他潛在副效應包括血壓降低及血液中之多種化學物質及電解質發生改變，例如鉀含量升高、氯化物含量升高、鈉含 量降低、磷酸鹽含量降低、血液尿素氮含量升高及肌酸酐含量升高。理論上，精胺酸可增加出血之風險，增加血糖含量，增加鉀含量且可使鐮狀細胞疾病之症狀惡化。
半胱胺酸係非必需胺基酸且其與胱胺酸密切相關，此乃因胱胺酸係由兩個接合在一起之半胱胺酸分子組成。半胱胺酸係不穩定的營養素且易於轉化為胱胺酸。身體中胱胺酸過多可造成胱胺酸病，該病係罕見疾病，其可導致在身體中形成胱胺酸晶體且產生膀胱結石或腎結石。人們亦已知罹患糖尿病及胱胺酸尿症之人可能具有利用半胱胺酸補充品之副效應。
WO2013/006454揭示含有不含精胺酸之多肽之組合物，其中與EP1478394 B1中所揭示類似之組合物中所使用之精胺酸已置換為鹽，該鹽根據所提供之實例為140mM(參見實例1)。未提及在高溫下穩定。實際上，該文獻中所揭示之組合物係以液體形式儲存在2-8℃下或進行冷凍。
本發明藉由提供容許儲存TNFR：Fc多肽之新穎穩定液體調配物而解決該等問題。本發明者已驚奇地觀察到如本文所揭示之穩定水性組合物可完全不含精胺酸及半胱胺酸來製備且其在高溫下係高度穩定的。
本發明之第一態樣
本發明之第一態樣係基於以下發現：某一量之鹽存於包含為融合至人類IgG1之Fc區之人類p75腫瘤壞死因子受體之細胞外配體結合部分之經分離多肽之水性調配物中，可使得蛋白質在高溫(高於5℃)下之穩定性增加。此外，所選擇之鹽濃度應使得其接近生理身體鹽濃度。
因此，本發明係關於包含以下之水性組合物： - 經分離多肽，其為融合至人類IgG1之Fc區之人類p75腫瘤壞死因子受體之細胞外配體結合部分；- 鹽，其以80mM至130mM之濃度存在；及- 賦形劑，其選自海藻糖及蔗糖及其組合之群，其特徵在於該組合物中既不存在精胺酸亦不存在半胱胺酸。
圖1顯示針對所有試樣發現之顯示相對解摺疊溫度(unfolding temperature)(T起始/℃)以及使用介於330nm與310nm間之螢光比率發現之誤差槓之柱狀圖。
圖2A及圖2B顯示針對所有調配物在初始時間量測pH及滲透壓之柱狀圖。
圖3A顯示在所有時間(0至14天)及條件(-20℃、25℃、50℃、3次冷凍/解凍(-20℃/25℃)及3天攪動)下之蛋白質濃度量測(280nm下之吸光度)。
圖3B顯示調配物F3在至多6個月之時間(0個月、1個月、3個月及6個月)及條件(-20℃、2-8℃、25℃、1次、2次及4次冷凍/解凍(-20℃/25℃))下之蛋白質濃度量測(280nm下之吸光度)。
圖4A顯示在所有時間(0至14天)及條件(-20℃、25℃、50℃、3次冷凍/解凍(-20℃/25℃)及3天攪動)下之濁度量測值(330nm下之吸光度)。
圖4B(1)顯示調配物F3在至多6個月之時間(0個月、1個月、3個月及6個月)及條件(-20℃、2-8℃、25℃、1次、2次及4次冷凍/解凍(-20℃/25℃))下之濁度量測值(330nm下之吸光度)。
圖4B(2)顯示調配物F1、F5、F6及F8與原廠藥(Innovator)(t=0及3個月及在25℃下)相比在至多3個月之時間(0個月、1個月及3個月)及條件(-20℃、2-8℃、25℃、1次、2次及4次冷凍/解凍(-20℃/25℃))下之 濁度量測值(330nm下之吸光度)。
圖5A顯示藉由HIAC針對F1、F2、F3及F4(1、2、3及4)在所有條件(-20℃、25℃、50℃、3次冷凍/解凍(-20℃/25℃)及3天攪動)下使用Standards-Duke Scientific Count Cal量測之亞可視粒子分析。
圖5B顯示藉由HIAC針對調配物F3在t=0個月、1個月及3個月及在-20℃、2-8℃、25℃、1次及2次冷凍/解凍(1×及2×FzTh)(在-20℃/25℃下)下使用Standards-Duke Scientific Count Cal量測之亞可視粒子分析。
圖5C(1)顯示藉由HIAC針對調配物F1、F3、F5、F6及F8在t=0個月、1個月及3個月及F3(亦在t=6個月)在-20℃及2-8℃下使用Standards-Duke Scientific Count Cal量測之亞可視粒子分析。
圖5C(2)顯示藉由HIAC針對調配物F1、F3、F5、F6及F8在t=0個月、1個月及3個月及F3(亦在t=6個月)在25℃下及冷凍/解凍(在-20℃/25℃下)(1×、2×、4×(1、2、4))下針對F1、F3、F5、F6及F8量測之亞可視粒子分析。
圖6A顯示在時間0天及14天在所有條件(-20℃、25℃、50℃、3次冷凍/解凍(-20℃/25℃)及3天攪動)下培育之利用考馬斯(Coomassie)染色之SDS-PAGE凝膠。(A)中為F1試樣，(B)中為F2試樣，(C)中為F3試樣且(D)中為F4試樣。
圖6B(1)顯示針對調配物F3在t=3個月在所有條件(-20℃、2-8℃、25℃、2次冷凍/解凍(在-20℃/25℃下))下培育之利用考馬斯染色之SDS-PAGE凝膠。
圖6B(2)顯示針對調配物F3在t=6個月在所有條件(-20℃、2-8℃、25℃、4次冷凍/解凍(在-20℃/25℃下))下培育之利用考馬斯染色之SDS-PAGE凝膠。
圖6C顯示針對調配物F5、F6及F7及原廠藥(對照)在t=0及在1次 冷凍/解凍(在-20℃/25℃下)後之條件下利用考馬斯染色之SDS-PAGE凝膠。
圖6D顯示針對調配物F8、F9及F1及原廠藥(對照)在t=0及在1次冷凍/解凍(在-20℃/25℃下)後之條件下利用考馬斯染色之SDS-PAGE凝膠。
圖6E(1)顯示針對調配物F1及F5在t=1個月在-20℃、2-8℃及25℃下及2個冷凍/解凍循環(在-20℃/25℃下)後之條件下利用考馬斯染色之SDS-PAGE凝膠。
圖6E(2)顯示針對調配物F1及F5在t=3個月在-20℃、2-8℃及25℃下及4個冷凍/解凍循環(在-20℃/25℃下)後之條件下利用考馬斯染色之SDS-PAGE凝膠。
圖6F(1)顯示針對調配物F6及F8在t=1個月在-20℃、2-8℃及25℃下及2個冷凍/解凍循環(在-20℃/25℃下)後之條件下利用考馬斯染色之SDS-PAGE凝膠。
圖6F(2)顯示針對調配物F6及F8在t=3個月在-20℃、2-8℃及25℃下及4個冷凍/解凍循環(在-20℃/25℃下)後之條件下利用考馬斯染色之SDS-PAGE凝膠。
圖7A至圖7D顯示在所有調配物中針對所有條件(-20℃(7A)、25℃(7B)、50℃(7C)、3次冷凍/解凍及3天攪動(7D))在所有時間點之尺寸排除HPLC之層析圖。已量測峰%且示於表中。
圖7E(1)顯示調配物F3針對t=3個月在-20℃、2-8℃、25℃及2次冷凍/解凍(2×FxTh)(在-20℃/25℃下)條件下之尺寸排除HPLC之層析圖。
圖7E(2)顯示調配物F3針對t=6個月在-20℃、2-8℃、25℃及4次冷凍/解凍(2×FxTh)(在-20℃/25℃下)條件下之尺寸排除HPLC之層析圖。
圖7F顯示調配物F3針對t=0個月、1個月、3個月及6個月在25℃下及原廠藥在t=3個月及25℃下之尺寸排除HPLC之層析圖。
圖7G(1)顯示調配物F3針對t=0個月及3個月在25℃下及與原廠藥(對照)在t=0相比之尺寸排除HPLC之層析圖。
圖7G(2)顯示調配物原廠藥針對t=0個月及3個月在25℃下之尺寸排除HPLC之層析圖。
圖7H提供在調配物F3中針對t=0個月、1個月及3個月在-20℃、2-8℃、25℃及1次及2次冷凍/解凍(1×及2×FxTh)(在-20℃/25℃下)之條件下之利用尺寸排除HPLC之較長期研究之表格式結果。
圖7I顯示調配物F1、F5、F6、F7、F8、F9及原廠藥(對照)在t=0之尺寸排除HPLC之層析圖。
圖7J顯示調配物F1、F5、F6、F7、F8、F9及原廠藥1個冷凍/解凍循環(在-20℃/25℃下)後之尺寸排除HPLC之層析圖。
圖7K(1)顯示調配物F1、F5、F6、F8針對t=1個月在-20℃下之尺寸排除HPLC之層析圖。
圖7K(2)顯示調配物F1、F3、F5、F6及F8針對t=3個月在-20℃下之尺寸排除HPLC之層析圖。
圖7L(1)顯示調配物F1、F5、F6、F8針對t=1個月在2-8℃下之尺寸排除HPLC之層析圖。
圖7L(2)顯示調配物F1、F3、F5、F6及F8針對t=3個月在2-8℃下之尺寸排除HPLC之層析圖。
圖7M(1)顯示調配物F1、F5、F6、F8針對t=1個月在25℃下之尺寸排除HPLC之層析圖。
圖7M(2)顯示調配物F1、F3、F5、F6、F8及原廠藥針對t=3個月在25℃下之尺寸排除HPLC之層析圖。
圖7N(1)顯示調配物F1、F5及F8針對t=1個月在25℃下之尺寸排 除HPLC之層析圖。
圖7N(2)顯示調配物F1、F3、F5、F8及原廠藥針對t=3個月在25℃下之尺寸排除HPLC之層析圖。
圖7O顯示調配物F1、F3、F5及F8針對t=1個月在25℃下之尺寸排除HPLC之層析圖。
圖7P顯示調配物F1、F5、F6及F8在2個冷凍/解凍循環(在-20℃/25℃下)後之尺寸排除HPLC之層析圖。
圖7Q、圖7R及圖7S顯示調配物F1、F3、F5、F6及F8針對條件-20℃(圖7Q)、2-8℃(7R)及25℃(7S)在至多6個月(對於調配物F3)之時間點及至多3個月(對於調配物F1、F5、F6及F8)之時間點之尺寸排除HPLC之層析圖之圖形概括。已量測且表示峰%(前峰%、主峰%及後峰%)
圖7T顯示調配物F1、F3、F5、F6及F8在t=0及1個及2個冷凍/解凍循環(1×及2×FxTh)(在-20℃/25℃下)後之條件下之尺寸排除HPLC之層析圖之圖形概括。已量測且表示峰%(前峰%、主峰%及後峰%)。柱條係以下列調配物順序：F1、F3、F5、F6及F8針對每一條件(即t=0、1×FxTh或2×FxTh)指示。
圖7U顯示調配物F3針對t=0個月、1個月、3個月及6個月在-20℃、2-8℃及25℃儲存條件下之尺寸排除HPLC之層析圖之圖形概括。
圖8A至8D顯示包括在所有調配物中針對所有條件(-20℃(8A)、25℃(8B)、50℃(8C)、3次冷凍/解凍(-20℃/25℃)及3天攪動(8D))在所有時間點之基於細胞之效能分析(相對效能%，如與參考標準之效能相比)之分析之圖形。
圖8E顯示包括在調配物F3中針對下列條件：-20℃、2-8℃、25℃在時間0個月、1個月、3個月及6個月及1×、2×及4×冷凍/解凍(在-20℃/25℃下)後之基於細胞之效能分析(相對效能%，如與參考標準之效 能相比)之分析之圖形。亦在圖旁提供數據表。
圖8F顯示包括與原廠藥在3個月後在25℃下相比調配物F1、F3、F5、F6及F8在3個月後(且對於F3，亦在6個月後)在-20℃、2-8℃、25℃下及4×冷凍/解凍(在-20℃/25℃下)後之基於細胞之效能分析(相對效能%，如與參考標準之效能相比)之分析之圖形。亦在圖旁提供數據表。
圖9顯示在初始時間量測pH及滲透壓之柱狀圖。
圖10顯示在所有時間(0至14天)及條件(-20℃、25℃、50℃、3次冷凍/解凍及3天攪動)下之蛋白質濃度量測值(280nm下之吸光度)。
圖11顯示在所有時間(0至14天)及條件(-20℃、25℃、50℃、3次冷凍/解凍及3天攪動)下之濁度量測值(330nm下之吸光度)。
圖12顯示藉由HIAC在所有條件(-20℃、25℃、50℃、3次冷凍/解凍及3天攪動)下使用Standards-Duke Scientific Count Cal量測之亞可視粒子分析。
圖13顯示在所有條件(-20℃、25℃、50℃、3次冷凍/解凍及3天攪動)下在時間0天及14天培育之利用考馬斯染色之SDS-PAGE凝膠。(A)中為F1試樣且(B)中為F4試樣。
圖14顯示在所有調配物中針對所有條件(-20℃(14A)、25℃(14B)及3次冷凍/解凍及3天攪動(14C))在所有時間點之尺寸排除HPLC之層析圖。已量測峰%且示於表中。
圖15顯示包括在所有調配物中針對所有條件(-20℃(15A)、25℃(15B)、3次冷凍/解凍及3天攪動(15C))在所有時間點之基於細胞之效能分析(相對效能%，如與參考標準之效能相比)之分析之圖形。
本發明係關於包含以下之水性組合物：- 經分離多肽，其為融合至人類IgG1之Fc區之人類p75腫瘤壞死 因子受體之細胞外配體結合部分；- 鹽，其以80mM至130mM之濃度存在；及- 賦形劑，其係選自由海藻糖及蔗糖及其組合組成之群，其特徵在於該組合物中既不存在精胺酸亦不存在半胱胺酸。
較佳地，該組合物之特徵另外在於該組合物中不存在游離胺基酸。例如，該組合物既不包含精胺酸亦不包含半胱胺酸、脯胺酸、甘胺酸、甲硫胺酸、組胺酸、絲胺酸、纈胺酸、離胺酸、麩胺酸鹽。
如本文所使用，術語「組合物(composition或compositions)」可指包含所製備多肽從而使得其適於注射及/或投與有需要之個體之調配物。「組合物」亦可稱作「醫藥組合物」。在某些實施例中，本文提供之組合物實質上係無菌的且不含有任何對接受者過度有毒或有傳染性之藥劑。另外，如本文所使用，溶液或水性組合物可意指含有溶解於適宜溶劑(例如，水及/或其他溶劑(例如，有機溶劑))或互不混溶性溶劑混合物中之一或多種化學物質之流體(液體)製劑。另外，如本文所使用，術語「約」意指所指示值±其值之2%，較佳地，術語「約」確切地意指所指示值(±0%)。
應注意，儘管本發明組合物不以單獨或添加至該組合物中之形式包含精胺酸或半胱胺酸(或較佳地，任何其他胺基酸，例如脯胺酸、甘胺酸、甲硫胺酸、組胺酸、絲胺酸、纈胺酸、離胺酸、麩胺酸鹽)，但多肽本身可在其鏈中含有精胺酸或半胱胺酸(或任何其他胺基酸，例如脯胺酸、甘胺酸、甲硫胺酸、組胺酸、絲胺酸、纈胺酸、離胺酸、麩胺酸鹽)胺基酸殘基。
在某些實施例中，藉由任一標準方法純化含有多肽之所表現Fc結構域。當以細胞內方式產生含有多肽之Fc結構域時，藉由(例如)離心或超濾去除微粒碎片。當多肽分泌至培養基中時，可首先使用標準多肽濃度過濾器濃縮來自該等表現系統之上清液。亦可添加蛋白酶抑 制劑以抑制蛋白質水解，且可包括抗生素以預防微生物之生長。在一些實施例中，使用(例如)羥磷灰石層析、凝膠電泳、透析及親和層析及/或已知或有待被發現之純化技術之任一組合純化含有多肽之Fc結構域。例如，可使用蛋白質A來純化含有基於人類γ 1、γ 2或γ 4重鏈之多肽之Fc結構域(Lindmark等人，1983,J.Immunol.Meth.62：1-13)。
亦可端視需要而使用其他多肽純化技術，例如在離子交換管柱上分級分離、乙醇沈澱、反相HPLC、在二氧化矽上層析、在肝素SEPHAROSETTM上層析、在陰離子或陽離子交換樹脂(例如聚天冬胺酸管柱)上層析、層析聚焦、SDS-PAGE及硫酸銨沈澱。可使用其他多肽純化技術。
在較佳實施例中，鹽濃度為80mM至130mM，較佳地90mM至130mM，例如105mM至130mM，例如約90mM、100mM或125mM。較佳地，鹽濃度(較佳地NaCl)為約90mM。無論濃度如何，鹽較佳地係氯化鈉，但亦可使用其他鹽，例如氯化鉀、檸檬酸鈉、硫酸鎂、氯化鈣、次氯酸鈉、硝酸鈉、硫化汞、鉻酸鈉及二氧化鎂。鹽濃度之此具體範圍容許獲得在高溫、甚至高達50℃下穩定之本發明組合物。另外，此範圍內之值比先前技術中使用之值(例如140mM)更接近人體內之生理滲透壓，從而產生更適於在(例如)皮下投與中使用之組合物。
在另一較佳實施例中，經分離多肽係依那西普。依那西普之Fc組份含有恆定重2(CH2)結構域、恆定重3(CH3)結構域及鉸鏈區，但不含有人類IgG1之恆定重1(CH1)結構域。可藉由重組DNA技術在中國倉鼠卵巢(Chinese hamster ovary，CHO)哺乳動物細胞表現系統中產生依那西普。其係由934個胺基酸組成且具有/約150千道爾頓(kilodalton)之表觀分子量(Physicians' Desk Reference,2002,Medical Economics公司)。
經分離多肽之濃度較佳地為10mg/mL至100mg/mL，更佳地介於20mg/mL與60mg/mL之間，且甚至更佳地濃度為約25mg/mL或約50mg/mL。較佳地，濃度為約50mg/mL。
在另一較佳實施例中，賦形劑係濃度為10mg/mL至80mg/mL、較佳地30mg/mL至65mg/mL且更佳地濃度為60mg/mL海藻糖且呈海藻糖二水合物形式之海藻糖。在另一較佳實施例中，賦形劑為濃度為5mg/mL至80mg/mL之蔗糖，較佳地，蔗糖係在10mg/mL至40mg/mL之範圍內存在。在更佳實施例中，蔗糖之濃度為10mg/mL。在另一更佳實施例中，蔗糖之濃度為34mg/mL。在另一較佳實施例中，賦形劑係蔗糖與海藻糖之間之組合，其中濃度分別在5mg/mL至80mg/mL及10mg/mL至80mg/mL之範圍內。較佳地，賦形劑為濃度為約34mg/mL之蔗糖。更佳地，賦形劑為濃度為約10mg/mL之蔗糖。
本發明組合物可進一步包含水性緩衝液。較佳地，該水性緩衝液係磷酸鈉、磷酸鉀、檸檬酸鈉或檸檬酸鉀、馬來酸、乙酸銨、叁-(羥基甲基)-胺基甲烷(tris)、乙酸鹽、琥珀酸鹽、二乙醇胺、組胺酸或其組合。在更佳實施例中，該水性緩衝液係磷酸鈉。在另一更佳實施例中，該水性緩衝液係琥珀酸鹽。在另一更佳實施例中，該水性緩衝液係組胺酸。無論組合物中單獨或組合使用之緩衝液如何，其濃度較佳地介於15mM與100mM之間，較佳地在20mM至30mM之範圍內。在較佳實施例中，該濃度較佳地介於20mM與100mM之間，較佳地在25mM至50mM之範圍內。在更佳實施例中，該濃度為約22mM或約25mM。在另一較佳實施例中，該濃度為約50mM。較佳緩衝液為磷酸鈉及琥珀酸鹽緩衝液，最佳者係濃度為約22mM之此最後一種緩衝液(琥珀酸鹽緩衝液)。
在另一實施例中，無論水性緩衝液不存在抑或存在，本發明組合物除已提供於組合物中之賦形劑(海藻糖或蔗糖)以外皆亦可進一步包含一或多種賦形劑。在某些實施例中，本文所闡述組合物中一或多種賦形劑之濃度為約0.001重量%至5重量%，而在其他實施例中，一或多種賦形劑之濃度為約0.1重量%至2重量%。賦形劑在業內眾所周知且可藉由已知方法來製造且其可購自商業供應商。較佳地，該賦形劑係乳糖、甘油、木糖醇、山梨醇、甘露醇、麥芽糖、肌醇、葡萄糖、牛血清白蛋白、人類血清白蛋白(SA)、重組血球凝集素(HA)、右旋糖酐、聚乙烯醇(PVA)、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、聚乙烯亞胺、明膠、聚乙烯吡咯啶酮(PVP)、羥乙基纖維素(HEC)、聚乙二醇、乙二醇、二甲亞碸(DMSO)、二甲基甲醯胺(DMF)、脯胺酸、L-絲胺酸、麩胺酸、丙胺酸、甘胺酸、離胺酸、肌胺酸、γ-胺基丁酸、聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80、十二烷基硫酸鈉(SDS)、聚山梨醇酯、聚氧乙烯共聚物、磷酸鉀、乙酸鈉、硫酸銨、硫酸鎂、硫酸鈉、氧化三甲胺、甜菜鹼、鋅離子、銅離子、鈣離子、錳離子、鎂離子、3-[(3-膽醯胺丙基)-二甲基銨基]-1-丙烷硫酸鹽(CHAPS)、蔗糖單月桂酸酯或其組合。在更佳實施例中，賦形劑係聚山梨醇酯20，且在甚至更佳實施例中，聚山梨醇酯20係以0.1%之濃度存在。在另一更佳實施例中，賦形劑係甘胺酸，且在甚至更佳實施例中，甘胺酸係以0.5%之濃度存在。
在另一較佳實施例中，組合物之pH為pH 6.0至pH 7.0，選自6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8及6.9之任一pH皆可。在更佳實施例中，組合物之pH為約6.3。
在具體實施例中，本發明組合物包含50mg/mL依那西普、25mM磷酸鈉緩衝液、10mg/mL蔗糖、125mM氯化鈉，其中組合物之pH為6.3。
在另一具體實施例中，本發明組合物包含50mg/mL依那西普、25mM磷酸鈉緩衝液、10mg/mL蔗糖、100mM氯化鈉，其中組合物之pH為6.3。
在另一具體實施例中，本發明組合物包含50mg/mL依那西普、50mM磷酸鈉緩衝液、60mg/mL海藻糖二水合物、0.1%聚山梨醇酯20，其中組合物之pH為約pH 6.2。
在另一具體實施例中，本發明組合物包含50mg/mL依那西普、25mM磷酸鈉、34mg/mL蔗糖、90mM氯化鈉，其中組合物之pH為6.3。
在另一具體實施例中，本發明組合物包含50mg/mL依那西普、25mM磷酸鈉、10mg/mL蔗糖、90mM氯化鈉、0.5%甘胺酸，其中組合物之pH為6.3。
在另一具體實施例中，本發明組合物包含50mg/mL依那西普、22mM琥珀酸鹽、10mg/mL蔗糖、90mM氯化鈉，其中組合物之pH為6.3。較佳地，此組合物不含其他胺基酸(除依那西普中所包含者外)。較佳地，此組合物既不包含精胺酸亦不包含半胱胺酸、離胺酸、脯胺酸、麩胺酸鹽、絲胺酸、甲硫胺酸。
可非經腸(例如皮下、肌內、靜脈內、腹膜腔內、腦脊髓內、關節內、滑膜內及/或鞘內)投與本文所揭示之組合物。
包含於本發明組合物中之經分離多肽之治療效應在業內已知且包括(但不限於)治療類風濕性關節炎、牛皮癬性關節炎、關節黏連性脊椎炎、肉芽腫病、克隆氏病(Crohn’s disease)、慢性阻塞性肺疾病、C型肝炎、子宮內膜異位、氣喘、惡病質、牛皮癬或異位性皮膚炎或其他發炎或自體免疫相關疾病、病症或病況。該等組合物可以足以治療病症(減輕其症狀，停止或減慢其進展)之量(例如，治療有效量)投與。
以下實例用於闡釋本發明，且不應將其視為限制本發明之範圍。
實例
組合物之製備
藉由簡單混合以下各項來製備以下組合物：
來源材料：
工程驗證材料，其含有62.5mg/mL依那西普、1.2mg/mL Tris、40mg/mL甘露醇、10mg/mL蔗糖，pH為7.4。儲存在-20℃下
使用大量Enbrel®商業調配物作為對照試樣(在本文中指定為「Enbrel」或「原廠藥」)。商業Enbrel調配物含有50mg/mL依那西普、25mM磷酸鈉、25mM精胺酸、100mM NaCl、10mg/mL蔗糖，pH為6.3。
使用存於與Enbrel調配物相同之調配物中之依那西普作為內部對照(50.9mg/mL依那西普、25mM磷酸鈉、25mM精胺酸、100mM NaCl、10mg/mL蔗糖，pH為6.3)。此調配物稱為F1。
候選調配物：
F2：存於水性調配物(49.4mg/mL依那西普、25mM磷酸鈉、100mM NaCl、10mg/mL蔗糖，pH 6.3)中之依那西普
F3：存於水性調配物(49.5mg/mL依那西普、25mM磷酸鈉、125mM NaCl、10mg/mL蔗糖，pH 6.3)中之依那西普
F4：存於水性調配物(50.9mg/mL依那西普、50mM磷酸鈉、60mg/mL海藻糖二水合物，pH 6.2，0.1%聚山梨醇酯20)中之依那西普
F5：存於水性調配物(50.0mg/mL依那西普、25mM磷酸鈉、90mM NaCl、34mg/mL蔗糖，pH 6.3)中之依那西普
F6：存於水性調配物(50.0mg/mL依那西普、25mM磷酸鈉、90mM NaCl、10mg/mL蔗糖、0.5%(5mg/mL)甘胺酸，pH 6.3)中之依那 西普
F7：存於水性調配物(50.0mg/mL依那西普、28mM組胺酸/HCl、90mM NaCl、10mg/mL蔗糖、6mg/mL甘胺酸，pH 6.3)中之依那西普
F8：存於水性調配物(50.0mg/mL依那西普、22mM琥珀酸鹽、90mM NaCl、10mg/mL蔗糖，pH 6.3)中之依那西普。琥珀酸鹽緩衝液係使用22mM琥珀酸並添加NaOH以將pH調節至6.3來製備。
實例1
內源蛋白質螢光發射光譜及靜態光散射
獲得在266nm處激發之內源蛋白質螢光發射光譜以及在266nm及473nm二者處之靜態光散射數據。將每一試樣加載至微光析槽陣列(MCA)中並置於Optim 1000中，以說明膠體及構形穩定性中之差異。在此研究中，使熱升溫實驗之溫度以1℃步距自15℃增加至95℃，並使試樣在每一溫度下保持60秒以容許熱平衡。在等溫實驗中，使溫度保持在62℃下並以200次重複量測試樣且在量測之間保持60秒。
利用266nm及473nm雷射來源照射試樣之時間稱作曝光時間。曝光時間之選擇取決於大量因素，例如螢光發射之強度及試樣光漂白之敏感性。在所有該等試樣之情形下，使用1秒之曝光時間。
隨著曝光時間改變，可改變物理狹縫之大小，從而控制進入檢測器之光之量。增加此開口之大小可使所測得螢光信號增加，但使儀器之光譜解析率降低。
藉由Optim 1000實施之分析包含兩個連續水平(初級及次級)。Optim 1000軟體提供自動初級及次級分析。與任一自動數據擬合軟體一樣，必須多加小心以確保輸入數據之品質良好從而使得自動功能返回可靠結果。所有結果皆已由受過培訓之分析師實施手動核對。
初級分析自原始螢光發射及光散射數據提取光譜參數：
‧Optim可使用數學功能來提供初級水平資訊(例如預期波長(亦稱為重心平均值))，該資訊正變得較常用於科學文獻中。此著眼於平均發射波長(或質心)，且此係消除光譜數據中之任何噪音之良好方法。
‧自介於260nm與270nm間之累積強度(瑞利(Rayleigh)散射UV激發光)計算散射光強度。散射效率極依賴波長，故波長愈短，藉由溶液中之分子散射光之效率愈大。266nm雷射之散射係平均分子量發生小的改變之極敏感探針。
在此研究中，使用介於350nm與330nm間之螢光強度之比率來研究抗體之熱解摺疊，且使用來自266nm及473nm雷射之散射光強度來量測熱誘導之試樣聚集。
次級分析自初級分析採取參數且確定試樣之解鏈溫度「Tm」及聚集起始溫度「Tagg」(若該等溫度存在)。解鏈溫度確定為以溫度之函數繪製之原始數據中之拐點。
聚集起始溫度確定為相對於數據中之噪音散射光強度增加高於臨限值之溫度。自所測得之最低溫度，將測得之每一散射強度值添加至所有先前測得值之數據集中。在每一點處，隨著分析進行，應用線性擬合且確定擬合優度。若數據顯著偏離直線(其中顯著性係藉由數據中之噪音來確定)，則將此數據定義為聚集起始之溫度。若其不顯著偏離直線，則使演算法行進至數據集中之下一點且針對此偏離進行再次測試。此方法已針對各種蛋白質及條件進行測試且其係穩健的。在形成及沈澱大聚集之極端情形下，若懸浮物中之粒子離開入射雷射之聚焦體積，則光散射信號實際上可下降。然而，雖然之後發生任何沈澱，但可重複檢測初始起始。
在所有靜態光散射數據之情形下，無論試樣是否似乎自溶液沈澱出，所有點皆包括在內。不同重複實驗中之同一試樣將有時沈澱且 有時不沈澱，但在每一情形下，聚集過程之開始係可重複的。
結論
發現所有試樣間之Tagg及T起始數據極為類似。
‧在F1緩衝液中，發現產物具有63.7±0.3℃之螢光T起始及66.8±0.3℃之Tagg。
‧在F2緩衝液中，發現產物具有63.2±0.1℃之螢光T起始及65.9±0.1℃之Tagg。
‧在F3緩衝液中，發現產物具有63.4±0.3℃之螢光T起始及65.6±0.4℃之Tagg。
‧在F4緩衝液中，發現產物具有63.3±0.1℃之螢光T起始及64.8±0.1℃之Tagg。
‧在F5緩衝液中，發現產物具有64.5±0.4℃之螢光T起始及63.0±0.6℃之Tagg。
‧在F6緩衝液中，發現產物具有63.9±0.5℃之螢光T起始及65.4±0.2℃之Tagg。
‧在F7緩衝液中，發現產物具有61.0±0.7℃之螢光T起始及63.6±0.1℃之Tagg。
‧在F8緩衝液中，發現產物具有64.0±0.0℃之螢光T起始及66.2±0.8℃之Tagg。
‧發現Enbrel原廠藥本身具有63.4±0.1℃之螢光T起始及65.6±0.1℃之Tagg。
因此，該數據指示所有試樣間之膠體及構形穩定性高度類似。
圖1顯示調配物F1、F5、F6、F7、F8及原廠藥(對照)之結果，其中趨勢為F5>F8>F6>F1>Enbrel>F7。
在熱升溫實驗後，實施等溫實驗。在分析及綜述熱升溫結果後，似乎所有試樣皆具有約64℃之Tagg值，且因此選擇62℃之溫度用 於等溫實驗，即其僅低於Tagg，且其接近到足夠使試樣在合理時段內經歷構形及膠體改變。
發現螢光之T起始值係介於63.2℃與63.7℃之間且具有63.4℃之平均值及0.3℃之相對低的標準偏差，從而指示5個試樣(F1至F4及Enbrel液體調配物)間具有高度可比性。
所有試樣之穩定性仍然皆可視為極其相當。
實例2
短應力穩定性研究
方法
實施短期(2週)穩定性研究以便在實施較長期研究前評估可能的調配物。此外，針對F3調配物實施長達6個月之長期穩定性研究且針對F5、F6及F8調配物實施至多3個月之長期穩定性。
測試下列9種調配物：
除攪動及冷凍-解凍應力以外，在暴露於兩個升高之溫度(25℃及50℃)及一個實時溫度後，評價每一調配物在t=0天、3天、7天及14天之穩定性。
在F3調配物之情形下，除利用1個、2個及4個經受-20℃冷凍/25℃解凍之冷凍-解凍循環之冷凍-解凍應力以外，在暴露於三個溫度(2-8℃、-20℃及25℃)後以及時間點0個月、1個月、3個月及6個月評價穩定性。
在F5、F6及F8調配物之情形下，除利用1個、2個及4個經受-20℃冷凍/25℃解凍之冷凍-解凍循環之冷凍-解凍應力以外，亦在暴露於三個溫度(2-8℃、-20℃及25℃)後以及時間點0個月、1個月及3個月評價穩定性。
採用一組8個分析型分析來評價每一調配物之穩定性。
‧pH(僅t=0)
‧滲透壓(僅t=0)
‧蛋白質濃度(A280nm)
‧濁度(A330nm)
‧HIAC
‧還原型SDS-PAGE(考馬斯藍染色)
‧尺寸排除-HPLC(SE-HPLC)
‧基於細胞之效能
pH及滲透壓
圖2A及圖2B顯示在初始時間量測pH及滲透壓之柱狀圖。在將試樣設置為每一該等條件前，針對所有調配物量測之該等值皆在目標pH或理論滲透壓值之範圍內。
蛋白質濃度/A280
圖3A顯示在所有時間(0至14天)及條件(-20℃、25℃、50℃、3次冷凍/解凍(3×FzTh)及3天攪動)下之蛋白質濃度量測值(280nm下之吸光度)。針對所有試樣在所有時間點及條件下獲得之數據皆在目標值之範圍內且在分析之差異性內。
圖3B顯示調配物F3在0個月、1個月、3個月及6個月及條件(-20℃、2-8℃、25℃、1次、2次及4次冷凍/解凍(1×、2×及4×FzTh))下之蛋白質濃度量測值(280nm下之吸光度)。對於所有條件在至多3個月，觀察到蛋白質濃度自目標(50mg/mL)略微增加，但其仍在分析差異性內。用於構築該圖3B之數據提供於下表中：
下表概述針對調配物F1、F5、F6、F8及原廠藥(對照，僅25℃，t=0及t=3)在t=0及t=3個月在-20℃、2-8℃及25℃下及在4個於-20℃/25℃下冷凍-解凍之循環後獲得之數據。所有調配物之蛋白質濃度皆為或接近目標(50mg/mL)。
除F1以外，調配物F5、F6及F8在時間=3個月在所有條件下之蛋白質濃度量測值(280nm下之吸光度)皆在所有該等調配物之目標值處(未顯示圖)。
濁度/A330
圖4A顯示在所有時間(0至14天)及條件(-20℃、25℃、50℃、3次冷凍/解凍(3×FzTh)及3天攪動)下之濁度量測值(330nm下之吸光度)。根據該等結果，在50℃條件下檢測到濁度顯著增加，且F3隨時間呈現最低增加。在-20℃、25℃、冷凍-解凍或攪動下在任一調配物中觀察到並未發生顯著改變。
圖4B(1)顯示調配物F3在時間t=0個月、1個月及3個月及條件(-20℃、2-8℃、25℃、1次冷凍/解凍(1×及2×FzTh(-20/25℃))下之濁度量測值(330nm下之吸光度)。如在圖4B(1)中可看出，觀察到在25℃下經受3個月儲存之試樣之濁度略微增加。在試樣於-20℃、2-8℃下儲存3個月及經受2個冷凍-解凍循環後，觀察到並未發生改變。用於 構築該圖4B(1)之數據提供於下表中：
下表概述針對調配物F1、F5、F6、F7、F8、F9在t=0及t=3個月及在1個、2個及4個冷凍-解凍循環(在-20℃/25℃下)後及原廠藥(對照)在t=0及25℃獲得之數據。調配物F1、F5及F8之濁度未呈現重大改變。F6在儲存於25℃下時之濁度呈現最高變化。
如上所述，針對調配物F5、F8或F1在1個月或3個月在所有條件下且如與t=0相比觀察到濁度並未進一步顯著增加(圖4B(2))。
HIAC(液體粒子計數)
方法：
該等實驗使用HIAC 9703液體粒子計數系統。HIAC由進樣器、粒子計數器及Royco感測器組成。Royco感測器能夠對介於2μm至100μm之間之粒子進行分級及計數。該儀器可計數10,000計數/mL之粒子。
‧試樣體積(mL)：0.2
‧流速mL/min：10
‧運行數(每個試樣)：4(丟棄第一運行)
程序：
‧起初，未加稀釋分析試樣，但由於該等試樣之黏度較高，確定需要將其稀釋來獲得較精確之結果。
‧使試樣達到室溫並保持1hr。
‧在適當調配物緩衝液中1：3稀釋試樣，脫氣(1.5hr)並小心混合，之後進行量測。
‧利用EZY-Cal 5μm及15μm粒子大小對照標準實施Standards-Duke Scientific Count Cal：系統適宜性核對。起初，分析對照標準以驗證感測器之解析率。
圖5A顯示藉由HIAC在所有條件(-20℃、25℃、50℃、3次冷凍/解凍(3×FzTh)及3天攪動)下使用Standards-Duke Scientific Count Cal量測之亞可視粒子分析。
如在圖5A中可看出，針對F1、F2及F4在50℃條件下測得亞可視粒子計數顯著增加，且F2早自7天顯示最高增加。
針對任一調配物在-20℃、25℃、3×FzTh或在3d RT攪動後觀察到並未發生顯著改變。F3調配物在所有條件及時間點下儲存後如與t=0對照相比未呈現亞可視粒子有所改變。
圖5B顯示藉由HIAC針對調配物F3在t=0個月、1個月及3個月及在-20℃、2-8℃、25℃、1次及2次冷凍/解凍(1×及2×FzTh，在-20℃/25℃下)下使用Standards-Duke Scientific Count Cal量測之亞可視粒子分析。如在圖5B中可看出，觀察到對於25℃條件在3個月之亞可視粒子計數略微進一步增加。-20℃條件截止3個月時呈現最顯著的亞可視粒子增加。對於2-8℃時間點在3個月後或在2個冷凍-解凍循環後觀察到自t=0並未發生改變。在-20℃條件下觀察到亞可視粒子計數自1個月略微進一步增加。
用於構築該圖5B之數據提供於下表中：
圖5C(1及2)顯示藉由HIAC針對調配物F1、F3、F5、F6及F8在t=0個月、1個月及3個月及在-20℃、2-8℃(圖5C(1))、25℃、1次、2次、3次及4次冷凍/解凍(1×、2×、3×及4×FzTh(在-20℃/25℃下))(圖5C(2))使用Standards-Duke Scientific Count Cal量測之亞可視粒子分析。
用於構築該圖5C(1)之數據提供於下表中。
圖5C(2)顯示藉由HIAC針對調配物F1、F5、F6及F8在t=0、t=1個月及t=3個月及1次、2次及4次冷凍/解凍(1×、2×及4×FzTh)(在-20℃/25℃下)下使用Standards-Duke Scientific Count Cal量測之亞可視粒子分析。
用於構築圖5C(2)之數據提供於下表中。
如在圖5C中可看出，針對F1、F3、F5、F6及F8自t=0針對2-8℃時間點在3個月後觀察到亞可視粒子計數並未發生顯著改變。另外，在25℃下之性能類似之F1及F6之亞可視粒子隨至多3個月之時間有所增加。在25℃下F8並未隨時間發生顯著改變，從而顯示此調配物具有穩定性。
針對對照試樣(原廠藥產物)在25℃下在3個月後觀察到亞可視粒子計數並未發生顯著改變。原廠藥產物隨時間且如與F1、F3、F5、F6及F8相比呈現最高粒子計數(參見下表)。
SDS-PAGE
圖6A顯示在所有條件(-20℃、25℃、50℃、3次冷凍/解凍及3天攪動)下在時間0天及14天培育之利用考馬斯染色之SDS-PAGE凝膠。(A)中為F1試樣，(B)中為F2試樣，(C)中為F3試樣且(D)中為F4試樣。
在所有調配物中針對50℃條件在所有時間點皆觀察到顯著改 變，其中第14天試樣顯示可能共價改質之高分子量(HMW)物質，如藉由所存在之其他HMW條帶(>約250kDa)及低分子量(LMW)分解物質(<50kDa)所證實，該等對於所有調配物在50℃下早自3天即存在。
在任一調配物中針對所有其他條件及時間點且如與參考標準相比觀察到並未發生改變。
圖6B(1)顯示針對調配物F3在t=3個月在所有條件(-20℃、2-8℃、25℃、2次冷凍/解凍(在-20℃/25℃下))下培育之利用考馬斯染色之SDS-PAGE凝膠。
在25℃下在3個月後觀察到改變，且出現約100kDa及約140kDa處之額外條帶，且在約50kDa及約30kDa處之LMW(低分子量)分解條帶之強度有所增加。
在2個冷凍-解凍循環(-20℃/25℃)後觀察到改變，且約30kDa及約50kDa之條帶變黑。
圖6B(2)顯示針對調配物F3在t=6個月在所有條件(-20℃、2-8℃、25℃、4次冷凍/解凍(在-20℃/25℃下))下培育之利用考馬斯染色之SDS-PAGE凝膠。
針對F3在25℃下在6個月後觀察到改變，且出現約100kDa處之額外條帶，且在約50kDa及約30kDa處之LMW分解條帶之強度有所增加。
圖6C顯示針對調配物F5、F6及F7及原廠藥(對照)在t=0及在1次冷凍/解凍(在-20℃/25℃下)後之條件下利用考馬斯染色之SDS-PAGE凝膠。
調配物F5、F6、F7及原廠藥(對照)在t=0與參考標準相當。
調配物F5、F6、F7在1個冷凍-解凍循環(在-20℃/25℃下)後與參考標準相當。
圖6D顯示針對調配物F8、F9及F1及原廠藥(對照)在t=0及在1次 冷凍/解凍(在-20℃/25℃下)後之條件下利用考馬斯染色之SDS-PAGE凝膠。
調配物F8、F9、F1在t=0及在1個冷凍-解凍循環(在-20℃/25℃下)後與參考標準相當。
圖6E(1)顯示針對調配物F1及F5在t=1個月在-20℃、2-8℃及25℃下及在2個冷凍/解凍循環(在-20℃/25℃下)後之條件下利用考馬斯染色之SDS-PAGE凝膠。
調配物F1及F5在所有條件下在1個月時間點與參考標準相當。
在25℃下在1個月後顯示調配物F5之其他約100kDa條帶之少量證據。
圖6E(2)顯示針對調配物F1及F5在t=3個月在-20℃、2-8℃及25℃下及在4個冷凍/解凍循環(在-20℃/25℃下)後之條件下利用考馬斯染色之SDS-PAGE凝膠。
F5在25℃下在3個月後且如與F1在25℃下在3個月後相比，略微證實約100kDa、約50kDa及約30kD處之極微弱條帶之出現，此亦顯示該等其他條帶。
圖6F(1)顯示針對調配物F6及F8在t=1個月在-20℃、2-8℃及25℃下及2個冷凍/解凍循環(在-20℃/25℃條件下)後利用考馬斯染色之SDS-PAGE凝膠。
調配物F6及F8在-20℃及2-8℃下在1個月後(包括2個冷凍/解凍循環(在-20℃/25℃下))顯示與參考標準相當。
調配物F6在25℃下在1個月後顯示主要條帶幾乎完全丟失，且若干其他低分子量分解條帶顯而易見。
圖6F(2)顯示針對調配物F6及F8在t=3個月在-20℃、2-8℃及25℃下及2個冷凍/解凍循環(在-20℃/25℃條件下)後利用考馬斯染色之SDS-PAGE凝膠。
針對F6在25℃下在3個月後觀察到顯著改變，且150kD條帶消失且出現若干LMW分解條帶。F6及F8二者顯示出現約50kDa及約30kD處之極微弱條帶之僅少量證據。
SE HPLC(尺寸排除HPLC)
條件：
‧管柱：TSKGel SuperSW3000 4.6×300mm,4μm(Tosoh,18675)CV=2.5mL
‧管柱溫度：25℃
‧流動相：0.2M磷酸鹽緩衝液，pH 6.8
‧流速：0.35mL/min
‧運行時間：20min
‧試樣負載：37.6μg
‧自動進樣器溫度：4℃
圖7顯示在所有調配物中針對所有條件(-20℃(7A)、25℃(7B)、50℃(7C)、3次冷凍/解凍及3天攪動(7D))在所有時間點之尺寸排除HPLC之層析圖。已量測峰%且示於表中。
在所有調配物中針對50℃條件在所有時間點皆觀察到顯著改變，其中F2之總體性能最差，且前峰聚集早在3天即急劇增加(分別為26.3%及22.7%)。F1及F3顯示在50℃下在3天後之前峰聚集增加相對更緩和(分別為11.9%及9.3%)，但所有四種調配物在14天後之前峰聚集皆增加至>50%。
25℃條件亦使得所有調配物在7天後之主峰面積%及前峰%略微改變，在14天進一步增加，其中在此條件下F4顯示最高之前峰聚集增加(0.5%)且F3顯示最低之總體聚集增加。
在任一調配物中在暴露於攪動及冷凍-解凍之條件或在-20℃下儲存至多14天時觀察到並未發生顯著改變。
圖7E(1)顯示調配物F3針對t=3個月在-20℃、2-8℃、25℃及2次冷凍/解凍(2×FxTh)(在-20℃/25℃下)條件下之尺寸排除HPLC之層析圖。
對於此調配物於25℃暴露3個月且如與所有其他條件相比，觀察到顯著前峰聚集及後峰降解。
圖7E(2)顯示調配物F3針對t=6個月在-20℃、2-8℃、25℃及4次冷凍/解凍(4×FxTh)(在-20℃/25℃下)條件下之尺寸排除HPLC之層析圖。
對於此調配物於25℃暴露6個月且如與所有其他條件在6個月後及在4個冷凍-解凍循環後相比，觀察到顯著前峰聚集及後峰降解。
圖7F顯示調配物F3針對t=0個月、1個月、3個月及6個月在25℃下及調配物原廠藥在25℃下在t=3個月後之尺寸排除HPLC之層析圖。
如與1個月及3個月之時間點相比，調配物F3顯示前峰聚集及後峰聚集進一步增加。
原廠藥在25℃下保持3個月顯示最高之總體前峰%且其係如與F3在所有其他測試條件(包括25℃在6個月)下相比。
圖7G(1)顯示調配物F3針對t=0個月及3個月在25℃下及與原廠藥(對照)在t=0下相比之尺寸排除HPLC之層析圖。
原廠藥(對照)在t=0較F3在25℃下在3個月後呈現之總體前峰聚集顯著更高，但後峰降解產物更少。
圖7G(2)顯示調配物原廠藥在t=0及3個月在25℃下之尺寸排除HPLC之層析圖。
如與原廠藥在t=0相比，觀察到原廠藥在3個月後在25℃下之前峰聚集及後峰降解產物二者有所增加。
圖7H提供在調配物F3中針對t=0在-20℃、2-8℃、25℃及1次及2 次冷凍/解凍(1×及2×FxTh)(在-20℃/25℃下)之條件下利用尺寸排除HPLC之較長期研究之表格式結果。
調配物F3顯示前峰聚集顯著進一步增加(0.9%，自t=1個月在25℃下)且後峰降解產物略微進一步增加(自1個月LMW-1峰進一步增加0.1%)。
圖7I顯示調配物F1、F5、F6、F7、F8、F9及原廠藥(對照)在t=0之尺寸排除HPLC之層析圖。
所有該等調配物在t=0皆呈現相當之層析圖譜。
調配物F9在t=0較F1、F6、F6、F7及F8呈現略微更高之前峰。
如與F1、F5、F6、F7、F8及F9在t=0相比，原廠藥(對照)在t=0呈現顯著更高之前峰%及後峰%。
圖7J顯示調配物F1、F5、F6、F7、F8及F9在1個冷凍/解凍循環(在-20℃/25℃下)後之尺寸排除HPLC之層析圖。
調配物F1、F5、F6、F7及F8在1個冷凍-解凍循環後係相當的，其中F9顯示略微更高之前峰%(然而自t=0未進一步增加)。
以下表提供在調配物F1、F5、F6、F7、F8及F9及原廠藥(對照)中針對t=0及在1個冷凍/解凍循環(1×FxTh)(在-20℃/25℃下)後之條件下利用尺寸排除HPLC之較長期研究之結果。
如與F1、F5、F6、F7、F8及F9在t=0相比，對照(原廠藥)呈現最高之前峰聚集%。
圖7K(1)顯示調配物F1、F5、F6、F8針對t=1個月在-20℃下之尺寸排除HPLC之層析圖。
在1個月後在-20℃儲存條件下顯示調配物之間無顯著差異。僅觀察到調配物F5之後峰略小。
圖7K(2)顯示調配物F1、F3、F5、F6、F8針對t=3個月在-20℃下之尺寸排除HPLC之層析圖。
對於F1、F5、F6及F8在3個月後在-20℃儲存條件下顯示調配物之間無顯著差異。對於F3在3個月後在-20℃下且如與所有其他調配物相比，觀察到更高之前峰及後峰。
圖7L(1)顯示調配物F1、F5、F6、F8針對t=1個月在2-8℃下之尺寸排除HPLC之層析圖。
在1個月後在2-8℃儲存條件下顯示調配物之間無顯著差異。觀察到調配物F5之後峰略小。
圖7L(2)顯示調配物F1、F3、F5、F6、F8針對t=3個月在2-8℃下 之尺寸排除HPLC之層析圖。
在3個月後在2-8℃儲存條件下顯示調配物之間無顯著差異。對於F3在3個月後在2-8℃下且如與所有其他調配物相比，觀察到更高之前峰及後峰。
圖7M(1)顯示調配物F1、F5、F6、F8針對t=1個月在25℃下之尺寸排除HPLC之層析圖。
在F6中在1個月後在25℃條件下觀察到急劇改變，且主峰之完全丟失使得後峰降解。在1個月後在25℃下觀察到所有其他調配物(F1、F5、F8)中皆未發生顯著改變。
圖7M(2)顯示調配物F1、F3、F5、F6、F8及原廠藥針對t=3個月在25℃下之尺寸排除HPLC之層析圖。
對於F1、F3、F5、F6、F8在25℃儲存條件下3個月後顯示調配物之間無顯著差異，且觀察到F5之後峰略小。對於F3，在25℃下3個月後，原廠藥顯示觀察到最高之前峰及後峰。F6之圖譜呈現急劇改變，且主峰完全丟失。
圖7N(1)顯示調配物F1、F5及F8針對t=1個月在25℃下之尺寸排除HPLC之層析圖。
圖7N(2)顯示調配物F1、F3、F5、F8及原廠藥針對t=3個月在25℃下之尺寸排除HPLC之層析圖。
在3個月後在25℃儲存條件下，F1、F3、F5及F8調配物之間無顯著差異。如與所有其他調配物相比，原廠藥顯示顯著前峰聚集及後峰降解產物。
圖7O顯示調配物F1、F3、F5及F8針對t=1個月在25℃下之尺寸排除HPLC之層析圖。
在1個月後在25℃下，調配物F3呈現最高之前峰聚集%。
圖7P顯示調配物F1、F5、F6及F8在2個循環冷凍/解凍(在-20℃ /25℃下)後之尺寸排除HPLC之層析圖。
在2個冷凍-解凍循環(在-20℃/25℃下)後，顯示調配物之間無顯著差異。僅觀察到調配物F5之後峰略小。
下表提供在調配物F1中針對t=0個月、1個月及3個月在-20℃、2-8℃及25℃儲存條件下及在1次、2次及4次冷凍/解凍(1×、2×及4×FxTh)(在-20℃/25℃下)後之條件下之利用尺寸排除HPLC之較長期研究之結果。
下表提供在調配物F5中針對t=0個月、1個月及3個月在-20℃、2-8℃及25℃儲存條件下及在1次、2次及4次冷凍/解凍(1×、2×及4×FxTh)(在-20℃/25℃下)後之條件下之利用尺寸排除HPLC之較長期研究之結果。
下表提供在調配物F6中針對t=0個月、1個月及3個月在-20℃、2-8℃及25℃儲存條件下及在1次、2次及4次冷凍/解凍(1×、2×及4× FxTh)(在-20℃/25℃下)後之條件下之利用尺寸排除HPLC之較長期研究之結果。
下表提供在調配物F8中針對t=0個月、1個月及3個月在-20℃、2-8℃及25℃儲存條件下及在1次、2次及4次冷凍/解凍(1×、2×及4×FxTh)(在-20℃/25℃下)後之條件下之利用尺寸排除HPLC之較長期研究之結果。
圖7Q、圖7R及圖7S顯示調配物F1、F3、F5、F6及F8中針對條件-20℃(圖7Q)、2-8℃(7R)及25℃(7S)在至多6個月之時間點(對於調配物F3)及至多3個月之時間點(對於調配物F1、F5、F6及F8)之尺寸排除HPLC之層析圖之圖形概括。已量測且表示峰%(前峰%、主峰%及後峰%)。
圖7T顯示調配物F1、F3、F5、F6及F8中在t=0及在1個及2個冷凍/解凍循環(1×及2×FxTh)(在-20℃/25℃下)後之條件下之尺寸排除 HPLC之層析圖之圖形概括。已量測且表示峰%(前峰%、主峰%及後峰%)。柱條係以下列調配物順序：F1、F3、F5、F6及F8針對每一條件(即t=0、1×FxTh或2×FxTh)指示。
以下表提供在調配物原廠藥中針對t=0在25℃儲存條件下利用尺寸排除HPLC之較長期研究之結果。
下表提供在調配物F3中針對t=0個月、1個月、3個月及6個月在-20℃、2-8℃及25℃儲存條件下及在1次、2次及4次冷凍/解凍(1×、2×及4×FxTh)(在-20℃/25℃下)後之條件下之利用尺寸排除HPLC之較長期研究之結果。
結果顯示於圖7U中。F3顯示在6個月前峰聚集顯著進一步增加(在25℃下自t=3個月增加1.1%)且後峰降解產物略微進一步增加(自3個月後峰進一步增加2.1%)。
基於細胞之效能分析
方法：
-針對較短時間點(0天、3天、7天及14天)
‧兩批式測試試樣(在t=0及t=3天(d)後及在t=7及t=14d時間點後)。
‧所有試樣皆由單一分析師在生物分析中測試一次，只是對照試 樣係在六(6)測試天中之每一天進行測試。
‧採取A280nm下之吸光度量測值來測定初級稀釋物及後續試樣稀釋物之精確濃度。
‧總體分析性能係可接受的。106個劑量反應曲線(來自53個板)中之三(3)個曲線需要有一個孔在至多2個不同濃度下經遮蓋以滿足孔間差異性分析準則
‧孔間差異性CV%20%
‧分析窗口(D/A)6
‧R2 0.98
將47個測試試樣之相對效能量測一次且將對照量測六(6)個不同次數。對照之平均相對效能為100.2%，其中95% CI來自96.9%至103.6%。
‧對照之六個獨立量測之分析差異性(GCV%)為3.2%。此方法之低分析差異性顯示，自單一量測獲得之測試試樣之相對效能值係可接受的。
‧基於單一量測，大多數測試試樣之相對效能接近100%(與參考標準之相對效能相當)。
‧測試試樣當於升高之溫度(50℃)下儲存三(3)天時開始失去效能且效能在稍後時間點有所下降。
-對於更長時間點(3個月及6個月)
‧一批式測試試樣(包括t=6個月(F3)及t=3個月(對於所有其他試樣及條件)。
‧所有試樣皆由單一分析師在生物分析中測試一次。所用參考標準係E16 ADS Lot DC-4168-85。
‧採取A280nm下之吸光度量測值來測定初級稀釋物及後續試樣稀釋物之精確濃度。
‧總體分析性能係可接受的。所有劑量反應曲線(12個劑量反應曲線，來自6個板)皆滿足孔間差異性分析準則而無需遮蓋任何孔。TME 0498-01中指定之分析接受準則係如下：
- 孔間差異性CV%20%
-分析窗口(D/A)6
- R2 0.98
‧該分析中用於劑量反應曲線之分析窗口在約4至4.5之範圍內。劑量反應曲線之所有關鍵參數(A、B、C及D)皆在歷史數據之正常範圍內。之前已顯示，較小分析窗口(>3)可不包含分析精確度，且因此接受此分析之結果。
在此情形下，使用Softmax Pro v5.2分析數據來驗證分析接受準則及遮蓋孔(若需要)。
基於細胞之生物分析結果：
圖8顯示包括在所有調配物中針對所有條件(-20℃(8A)、25℃(8B)、50℃(8C)、3次冷凍/解凍及3天攪動(8D))在所有時間點之基於細胞之效能分析(相對效能%，如與參考標準之效能相比)之分析之圖形。
在所有調配物中在50℃條件下檢測效能差異(如與參考標準之效能相比)，且所有測試試樣早在3天皆失去效能且藉由在50℃下儲存14天顯著增加。
F3顯示在14天後在50℃下之效能最高，且剩餘42.2%相對效能。
除冷凍-解凍及RT攪動之條件以外，在-20℃、25℃及50℃下所有調配物之相對效能皆接近100%。
圖8E顯示包括在調配物F3中針對下列條件：-20℃、2-8℃、25℃在時間點t=0、t=1個月、t=3個月及t=6個月及在1×、2×及4×冷凍/解凍(在-20℃/25℃下)後之基於細胞之效能分析(相對效能%，如與參考標 準之效能相比)之分析之圖形。亦在圖旁提供數據表。
調配物F3在至多6個月及在4個冷凍-解凍循環(在-20℃/25℃下)後之所有條件下皆顯示相對效能%，該等相對效能%與參考標準相當且在分析差異性內(20%)。針對F3在25℃下在3個月後測得最低相對效能值%(89.5%)。
圖8F顯示包括與原廠藥在3個月後在25℃下相比調配物F1、F3、F5、F6及F8在3個月後(且對於F3，在6個月後)在-20℃、2-8℃、25℃下及在-20℃/25℃下4×冷凍/解凍後之基於細胞之效能分析(相對效能%，如與參考標準之效能相比)之分析之圖形。亦在圖旁提供數據表。
與原廠藥在所有條件下相比，觀察到F1、F3、F5及F8間之相對效能%無顯著差異。所有試樣之相對效能皆與參考標準相當。F6在3個月後在25℃下無剩餘效能。
所有試樣之相對效能皆與參考標準相當。
總體概括
基於來自所實施分析且如上表所顯示之總體最高穩定性及相對效能，鑒定調配物F5(50mM磷酸鈉、90mM NaCl、34mg/mL蔗糖，pH 6.3)及F8(50mM琥珀酸鹽/NaOH、90mM NaCl、10mg/mL蔗糖，pH 6.3)為主導調配物，從而指示F8之性能與F1(原廠藥液體調配物)相當或較其更好且較F3及F6調配物亦更好。項目
1.一種水性組合物，其包含：- 經分離多肽，其為融合至人類IgG1之Fc區域之人類p75腫瘤壞 死因子受體之細胞外配體結合部分；- 鹽，其以90mM至130mM之濃度存在；及- 賦形劑，其係選自海藻糖及蔗糖或其組合之群，其特徵在於該組合物中既不存在精胺酸亦不存在半胱胺酸。
2.如項目1之組合物，其中該鹽濃度為105mM至130mM。
3.如項目1或2中任一項之組合物，其中該鹽濃度為125mM。
4.如項目1至3中任一項之組合物，其中該鹽為氯化鈉。
5.如項目1至4中任一項之組合物，其中該經分離多肽為依那西普。
6.如項目1至5中任一項之組合物，其中該賦形劑係濃度為20mg/mL至80mg/mL之海藻糖。
7.如項目1至6中任一項之組合物，其中該賦形劑係以5mg/mL至80mg/mL之濃度存在之蔗糖。
8.如項目1至7中任一項之組合物，其中該組合物進一步包含水性緩衝液。
9.如項目8之組合物，其中該水性緩衝液係磷酸鈉、磷酸鉀、檸檬酸鈉或檸檬酸鉀、琥珀酸、馬來酸、乙酸銨、叁-(羥基甲基)-胺基甲烷(tris)、乙酸鹽、二乙醇胺、組胺酸或其組合。
10.如項目8或9中任一項之組合物，其中該水性緩衝液係以20mM至100mM之濃度存在。
11.如項目1至10中任一項之組合物，其進一步包含一或多種賦形劑。
12.如項目11之組合物，其中該賦形劑係乳糖、甘油、木糖醇、山梨醇、甘露醇、麥芽糖、肌醇、葡萄糖、牛血清白蛋白、人類血清白蛋白、重組血球凝集素、右旋糖酐、聚乙烯醇、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、聚乙烯亞胺、明膠、聚乙烯吡咯啶酮(PVP)、羥乙基纖 維素(HEC)、聚乙二醇、乙二醇、二甲亞碸(DMSO)、二甲基甲醯胺(DMF)、脯胺酸、L-絲胺酸、麩胺酸、丙胺酸、甘胺酸、離胺酸、肌胺酸、γ-胺基丁酸、聚山梨醇酯-20、聚山梨醇酯-80、十二烷基硫酸鈉、聚山梨醇酯、聚氧乙烯共聚物、磷酸鉀、乙酸鈉、硫酸銨、硫酸鎂、硫酸鈉、氧化三甲胺、甜菜鹼、鋅離子、銅離子、鈣離子、錳離子、鎂離子、3-[(3-膽醯胺丙基)-二甲基銨基]-1-丙烷硫酸鹽、蔗糖單月桂酸酯或其組合。
13.如項目1至12中任一項之組合物，其中該組合物之pH為pH 6.0至pH 7.0。
14.如項目1至13中任一項之組合物，其包含50mg/mL依那西普、25mM磷酸鈉緩衝液、10mg/mL蔗糖、125mM氯化鈉，其中該組合物之pH為6.3。
15.如項目1至13中任一項之組合物，其包含50mg/mL依那西普、50mM磷酸鈉緩衝液、60mg/mL海藻糖二水合物、0.1%聚山梨醇酯20，其中該組合物之pH為pH 6.2。
16.如項目1至13中任一項之組合物，其包含50mg/mL依那西普、25mM磷酸鈉緩衝液、90mM氯化鈉、24mg/mL蔗糖，其中該組合物之pH為pH 6.3。
17.如項目1至13中任一項之組合物，其包含50mg/mL依那西普、25mM磷酸鈉緩衝液、90mM氯化鈉、10mg/mL蔗糖、5mg/mL甘胺酸，其中該組合物之pH為pH 6.3。
18.如項目1至13中任一項之組合物，其包含50mg/mL依那西普、22mM琥珀酸鹽、90mM NaCl、10mg/mL蔗糖，其中該組合物之pH為pH 6.3。
本發明之第二態樣
本發明之第二態樣係關於適於儲存含有TNFR：Fc之多肽之不含一 些所選胺基酸及一些所選鹽之穩定水性醫藥組合物。
本發明之第二態樣係基於以下發現：根據下文所揭示之技術特徵之水性調配物可使得蛋白質在高溫(高於5℃)下之穩定性增加。
因此，本發明之第二態樣係關於包含以下之水性組合物：- 經分離多肽，其為融合至人類IgG1之Fc區域之人類p75腫瘤壞死因子受體之細胞外配體結合部分；- 單糖或二糖；- 水性緩衝液，其特徵在於該組合物既不含有精胺酸亦不含有半胱胺酸、選自氯化鈉、氯化鉀、檸檬酸鈉、硫酸鎂、氯化鈣、次氯酸鈉硝酸鈉、硫化汞、鉻酸鈉及二氧化鎂之鹽。
本發明係關於包含以下之水性組合物：- 經分離多肽，其為融合至人類IgG1之Fc區域之人類p75腫瘤壞死因子受體之細胞外配體結合部分；- 單糖或二糖；- 水性緩衝液，其特徵在於該組合物既不含有精胺酸亦不含有半胱胺酸、選自氯化鈉、氯化鉀、檸檬酸鈉、硫酸鎂、氯化鈣、次氯酸鈉硝酸鈉、硫化汞、鉻酸鈉及二氧化鎂之鹽。
如在本發明之此第二態樣中所使用，術語「組合物(composition或compositions)」可係指包含所製備多肽從而使得其適於注射及/或投與有需要之個體之調配物。「組合物」亦可稱作「醫藥組合物」。在某些實施例中，本文提供之組合物實質上係無菌的且不含有任何對接受者過度有毒或有傳染性之藥劑。另外，如本發明之此第二態樣中所使用，溶液或水性組合物可意指含有溶解於適宜溶劑(例如，水及/或其他溶劑(例如，有機溶劑))或互不混溶性溶劑混合物中之一或多種化學 物質之流體(液體)製劑。另外，如本文所使用，術語「約」意指所指示值±其值之2%，較佳地，術語「約」確切地意指所指示值(±0%)。
應注意，儘管本發明之此第二態樣之組合物不單獨的或添加至該組合物中包含精胺酸或半胱胺酸，但多肽本身可在其鏈中含有精胺酸或半胱胺酸胺基酸殘基。
在某些實施例中，藉由任一標準方法純化含有多肽之所表現Fc結構域。當以細胞內方式產生含有多肽之Fc結構域時，藉由(例如)離心或超濾去除微粒碎片。當多肽分泌至培養基中時，可首先使用標準多肽濃度過濾器濃縮來自該等表現系統之上清液。亦可添加蛋白酶抑制劑以抑制蛋白質水解，且可包括抗生素以預防微生物之生長。在一些實施例中，使用(例如)羥磷灰石層析、凝膠電泳、透析及親和層析及/或已知或有待被發現之純化技術之任一組合純化含有多肽之Fc結構域。例如，可使用蛋白質A來純化含有基於人類γ 1、γ 2或γ 4重鏈之多肽之Fc結構域(Lindmark等人，1983,J.Immunol.Meth.62：1-13)。
亦可端視需要而使用其他多肽純化技術，例如在離子交換管柱上分級分離、乙醇沈澱、反相HPLC、在二氧化矽上層析、在肝素SEPHAROSETTM上層析、在陰離子或陽離子交換樹脂(例如聚天冬胺酸管柱)上層析、層析聚焦、SDS-PAGE及硫酸銨沈澱。可使用其他多肽純化技術。
在本發明之此第二態樣之較佳實施例中，經分離多肽係依那西普。依那西普之Fc組份含有恆定重2(CH2)結構域、恆定重3(CH3)結構域及鉸鏈區，但不含有人類IgG1之恆定重1(CH1)結構域。可藉由重組DNA技術在中國倉鼠卵巢(CHO)哺乳動物細胞表現系統中產生依那西普。其係由934個胺基酸組成且具有/約150千道爾頓之表觀分子 量(Physicians' Desk Reference,2002,Medical Economics公司)。
經分離多肽之濃度較佳地為10mg/mL至100mg/mL，更佳地介於20mg/mL與60mg/mL之間，且甚至更佳地濃度為約25mg/mL或約50mg/mL。
在本發明之此第二態樣之另一較佳實施例中，單糖或二糖係選自海藻糖及蔗糖。較佳地，海藻糖係以20mg/mL至80mg/mL、更佳地40mg/mL至60mg/mL且甚至更佳地60mg/mL之濃度且較佳地以海藻糖二水合物之形式存在。較佳地，蔗糖係以10mg/mL至80mg/mL、更佳地40mg/mL至60mg/mL且甚至更佳地60mg/mL之濃度存在。在本發明之此第二態樣之另一較佳實施例中，賦形劑係蔗糖與海藻糖間之組合。
在本發明之此第二態樣之另一較佳實施例中，本發明組合物之水性緩衝液係選自磷酸鈉、磷酸鉀、檸檬酸鈉或檸檬酸鉀、馬來酸、乙酸銨、叁-(羥基甲基)-胺基甲烷(tris)、乙酸鹽、二乙醇胺及其組合。無論緩衝液係單獨抑或組合用於組合物中，該緩衝液之濃度較佳地介於20mM與150mM之間，更佳地該濃度為約50mM且更佳水性緩衝液係磷酸鈉。
在本發明之此第二態樣之另一實施例中，本發明組合物可進一步包含一或多種賦形劑。在本發明之此第二態樣之某些實施例中，本文所闡述組合物中之一或多種賦形劑之濃度為約0.001重量%至5重量%，而在本發明之此第二態樣之其他實施例中，一或多種賦形劑之濃度為約0.1重量%至2重量%。賦形劑在業內眾所周知且可藉由已知方法來製造且其可購自商業供應商。較佳地，該賦形劑係乳糖、甘油、木糖醇、山梨醇、甘露醇、麥芽糖、肌醇、葡萄糖、牛血清白蛋白、人類血清白蛋白(SA)、重組血球凝集素(HA)、右旋糖酐、聚乙烯醇 (PVA)、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、聚乙烯亞胺、明膠、聚乙烯吡咯啶酮(PVP)、羥乙基纖維素(HEC)、聚乙二醇、乙二醇、二甲亞碸(DMSO)、二甲基甲醯胺(DMF)、脯胺酸、L-絲胺酸、麩胺酸、丙胺酸、甘胺酸、離胺酸、肌胺酸、γ-胺基丁酸、聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80、十二烷基硫酸鈉(SDS)、聚山梨醇酯、聚氧乙烯共聚物、磷酸鉀、乙酸鈉、硫酸銨、硫酸鎂、硫酸鈉、氧化三甲胺、甜菜鹼、鋅離子、銅離子、鈣離子、錳離子、鎂離子、3-[(3-膽醯胺丙基)-二甲基銨基]-1-丙烷硫酸鹽(CHAPS)、蔗糖單月桂酸酯或其組合。在更佳實施例中，賦形劑係聚山梨醇酯20，且在甚至更佳實施例中，聚山梨醇酯20係以0.1%之濃度存在。
在本發明之此第二態樣之另一較佳實施例中，組合物之pH為pH 6.0至pH 7.0，選自6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8及6.9之任一pH皆可。在更佳實施例中，組合物之pH為6.2。
在本發明之此第二態樣之具體實施例中，組合物包含50mg/mL依那西普、50mM磷酸鈉緩衝液、60mg/mL海藻糖二水合物，其中該組合物之pH為pH 6.2。
在本發明之此第二態樣之具體實施例中，組合物包含50mg/mL依那西普、50mM磷酸鈉緩衝液、60mg/mL海藻糖二水合物、0.1%聚山梨醇酯20，其中該組合物之pH為pH 6.2。
在本發明之此第二態樣之具體實施例中，組合物包含50mg/mL依那西普、50mM磷酸鈉緩衝液、60mg/mL蔗糖，其中該組合物之pH為pH 6.2。
在本發明之此第二態樣之具體實施例中，組合物包含50mg/mL依那西普、50mM磷酸鈉緩衝液、60mg/mL蔗糖、0.1%聚山梨醇酯20，其中該組合物之pH為pH 6.2。
可非經腸(例如皮下、肌內、靜脈內、腹膜腔內、腦脊髓內、關 節內、滑膜內及/或鞘內)投與本發明之此第二態樣中所揭示之組合物。
包含於本發明之此第二態樣之組合物中之經分離多肽之治療效應在業內已知且包括(但不限於)治療類風濕性關節炎、牛皮癬性關節炎、關節黏連性脊椎炎、肉芽腫病、克隆氏病、慢性阻塞性肺疾病、C型肝炎、子宮內膜異位、氣喘、惡病質、牛皮癬或異位性皮膚炎或其他發炎或自體免疫相關疾病、病症或病況。該等組合物可以足以治療病症(減輕其症狀，停止或減慢其進展)之量(例如，治療有效量)投與。
以下實例用於闡釋本發明之第二態樣，且不應將其視為限制本發明之範圍。
本發明之此第二態樣之實例
組合物之製備
藉由簡單混合以下各項來製備以下組合物：
來源材料：
工程驗證材料，其含有62.5mg/mL依那西普、1.2mg/mL Tris、40mg/mL甘露醇、10mg/mL蔗糖，pH 7.4。儲存在-20℃下
參考調配物(本文稱為「Enbrel」)：
使用大量Enbrel®商業調配物作為對照試樣。商業調配物含有50mg/mL依那西普、25mM磷酸鈉、25mM精胺酸、100mM NaCl、10mg/mL蔗糖，pH 6.3。
候選調配物：
F1：存於與Enbrel調配物相同之調配物中之依那西普作為內部對照(50.9mg/mL依那西普、25mM磷酸鈉、25mM精胺酸、100mM NaCl、10mg/mL蔗糖，pH 6.3)
F2：存於水性調配物(49.4mg/mL依那西普、25mM磷酸鈉、100 mM NaCl、10mg/mL蔗糖，pH 6.3)中之依那西普
F3：存於水性調配物(49.5mg/mL依那西普、25mM磷酸鈉、125mM NaCl、10mg/mL蔗糖，pH 6.3)中之依那西普
F4：存於水性調配物(50.9mg/mL依那西普、50mM磷酸鈉、60mg/mL海藻糖二水合物、pH 6.2、0.1%聚山梨醇酯20)中之依那西普
在一些實驗中，亦使用大量商業Enbrel®作為參考(參見上文)。
實例1
內源蛋白質螢光發射光譜及靜態光散射
獲得在266nm處激發之內源蛋白質螢光發射光譜以及在266nm及473nm二者處之靜態光散射數據。將每一試樣加載至微光析槽陣列(MCA)中並置於Optim 1000中，以說明膠體及構形穩定性中之差異。在此研究中，使熱升溫實驗之溫度以1℃步距自15℃增加至95℃，並使試樣在每一溫度下保持60秒以容許熱平衡。在等溫實驗中，使溫度保持在62℃下並以200次重複量測試樣且在量測之間保持60秒。
利用266nm及473nm雷射來源照射試樣之時間稱作曝光時間。曝光時間之選擇取決於大量因素，例如螢光發射之強度及試樣光漂白之敏感性。在所有該等試樣之情形下，使用1秒之曝光時間。
隨著曝光時間改變，可改變物理狹縫之大小，從而控制進入檢測器之光之量。增加此開口之大小使所測得螢光信號增加，但使儀器之光譜解析率降低。
藉由Optim 1000實施之分析包含兩個連續水平(初級及次級)。Optim 1000軟體提供自動初級及次級分析。與任一自動數據擬合軟體一樣，必須多加小心以確保輸入數據之品質良好從而使得自動功能返回可靠結果。所有結果皆已由受過培訓之分析師實施手動核對。
初級分析自原始螢光發射及光散射數據提取光譜參數：
‧Optim可使用數學功能來提供初級水平資訊(例如預期波長(亦 稱為重心平均值))，該資訊正變得較常用於科學文獻中。此著眼於平均發射波長(或質心)，且此係消除光譜數據中之任何噪音之良好方法。
‧自介於260nm與270nm間之累積強度(瑞利散射UV激發光)計算散射光強度。散射效率極依賴波長，故波長愈短，藉由溶液中之分子散射光之效率愈大。266nm雷射之散射係平均分子量發生小的改變之極敏感探針。
在此研究中，使用介於350nm與330nm間之螢光強度之比率來研究抗體之熱解摺疊，且使用來自266nm及473nm雷射之散射光強度來量測熱誘導之試樣聚集。
次級分析自初級分析採取參數且確定試樣之解鏈溫度「Tm」及聚集起始溫度「Tagg」(若該等溫度存在)。解鏈溫度確定為以溫度之函數繪製之原始數據中之拐點。
聚集起始溫度確定為相對於數據中之噪音散射光強度增加高於臨限值之溫度。自所測得之最低溫度，將測得之每一散射強度值添加至所有先前測得值之數據集中。在每一點處，隨著分析進行，應用線性擬合且確定擬合優度。若數據顯著偏離直線(其中顯著性係藉由數據中之噪音來確定)，則將此數據定義為聚集起始之溫度。若其不顯著偏離直線，則使演算法行進至數據集中之下一點且針對此偏離進行再次測試。此方法已針對各種蛋白質及條件進行測試且其係穩健的。在形成及沈澱大聚集之極端情形下，若懸浮物中之粒子離開入射雷射之聚焦體積，則光散射信號實際上可下降。然而，雖然之後發生任何沈澱，但可重複檢測初始起始。
在所有靜態光散射數據之情形下，無論試樣是否似乎自溶液沈澱出，所有點皆包括在內。不同重複實驗中之同一試樣將有時沈澱且有時不沈澱，但在每一情形下，聚集過程之開始係可重複的。
結論
發現所有試樣間之Tagg及T起始數據極為類似。
‧在F1緩衝液中，發現產物具有63.7±0.3℃之螢光T起始及66.8±0.3℃之Tagg。
‧在F2緩衝液中，發現產物具有63.2±0.1℃之螢光T起始及65.9±0.1℃之Tagg。
‧在F3緩衝液中，發現產物具有63.4±0.3℃之螢光T起始及65.6±0.4℃之Tagg。
‧在F4緩衝液中，發現產物具有63.3±0.1℃之螢光T起始及64.8±0.1℃之Tagg。
‧發現Enbrel原廠藥本身具有63.4±0.1℃之螢光T起始及65.6±0.1℃之Tagg。
因此，該數據指示所有試樣間之膠體及構形穩定性高度類似。
發現螢光之T起始值係介於63.2℃與63.7℃之間且具有63.4℃之平均值及0.3℃之相對低的標準偏差，從而指示5個試樣(F1至F4及Enbrel液體調配物)間具有高度可比性。
如在所有實驗中指示之F4調配物之構形及膠體穩定性構形似乎與Enbrel液體調配物極為類似。
實例2
短應力穩定性研究
方法
實施短期(2週)穩定性研究以便在實施較長期研究前評價可能的調配物。
測試下列4種調配物：
除攪動及冷凍-解凍應力以外，在暴露於兩個升高之溫度(25℃及50℃)及一個實時溫度後，評價每一調配物在t=0天、3天、7天及14天之穩定性。
採用一組8個分析型分析來評價每一調配物之穩定性。
‧pH(僅t=0)
‧滲透壓(僅t=0)
‧蛋白質濃度(A280nm)
‧濁度(A330nm)
‧HIAC
‧還原型SDS-PAGE(考馬斯藍染色)
‧尺寸排除-HPLC
‧基於細胞之效能
pH及滲透壓
圖9顯示在初始時間量測pH及滲透壓之柱狀圖。在將試樣設置為每一該等條件前，針對所有調配物量測之該等值皆在目標pH或理論滲透壓值之範圍內。
蛋白質濃度/A280
圖10顯示在所有時間(0至14天)及條件(-20℃、25℃、50℃、3次冷凍/解凍(3×FzTh)及3天攪動)下之蛋白質濃度量測值(280nm下之吸光度)。針對所有試樣在所有時間點及條件下獲得之數據皆在目標值之範圍內且在分析之差異性內。
濁度/A330
圖11顯示在所有時間(0至14天)及條件(-20℃、25℃、50℃、3次冷凍/解凍(3×FzTh)及3天攪動)下之濁度量測值(330nm下之吸光度)。根據該等結果，在50℃條件下檢測到濁度顯著增加，且F3隨時間呈現最低增加。在-20℃、25℃、冷凍-解凍或攪動下在任一調配物中觀察到並未發生顯著改變。
HIAC(液體粒子計數)
方法：
該等實驗使用HIAC 9703液體粒子計數系統。HIAC由進樣器、粒子計數器及Royco感測器組成。Royco感測器能夠對介於2μm至100μm之間之粒子進行分級及計數。該儀器可計數10,000計數/mL之粒子。
程序：
‧起初，未加稀釋分析試樣，但由於該等試樣之黏度較高，確定需要將其稀釋來獲得較準確之結果。
‧使試樣達到室溫並保持1hr。
‧在適當調配物緩衝液中1：3稀釋試樣，脫氣(1.5hr)並小心混合，之後進行量測。
‧利用EZY-Cal 5μm及15μm粒子大小對照標準實施Standards-Duke Scientific Count Cal：系統適宜性核對。起初，分析對照標準以驗證感測器之解析率。
圖12顯示藉由HIAC在所有條件(-20℃、25℃、50℃、3次冷凍/解凍(3×FzTh)及3天攪動)下使用Standards-Duke Scientific Count Cal量測之亞可視粒子分析。
針對F1、F2及F4在50℃條件下測得亞可視粒子計數顯著增加，且F2早自7天顯示最高增加。
針對任一調配物在-20℃、25℃、3×FzTh或在3d RT攪動後觀察 到並未發生顯著改變。
F4在所有條件及時間點下儲存後如與t=0對照相比未呈現亞可視粒子有所改變。
SDS-PAGE
圖13顯示在所有條件(-20℃、25℃、50℃、3次冷凍/解凍及3天攪動)下在時間0天及14天培育之利用考馬斯染色之SDS-PAGE凝膠。(A)中為F1試樣且(D)中為F4試樣。
在所有調配物中針對50℃條件在所有時間點皆觀察到顯著改變，其中第14天試樣顯示可能共價改質之高分子量(HMW)物質，如藉由所存在之其他HMW條帶(>約250kDa)及低分子量(LMW)分解物質(<50kDa)所證實，該等對於所有調配物在50℃下早自3天即存在。
在任一調配物中針對所有其他條件及時間點且如與參考標準相比觀察到並未發生改變。
SE HPLC(尺寸排除HPLC)
條件：
‧管柱：TSKGel SuperSW3000 4.6×300mm,4μm(Tosoh,18675)CV=2.5mL
‧管柱溫度：25℃
‧流動相：0.2M磷酸鹽緩衝液，pH 6.8
‧流速：0.35mL/min
‧運行時間：20min
‧試樣負載：37.6μg
‧自動進樣器溫度：4℃
圖14顯示在所有調配物中針對以下條件(-20℃(14A)、25℃(14B)、3次冷凍/解凍及3天攪動(14C))在所有時間點之尺寸排除HPLC之層析圖。已量測峰%且示於表中。
25℃條件使得所有調配物在7天後之主峰面積%及前峰%略微改變，在14天進一步增加，其中F4顯示最高之前峰聚集增加(0.5%)，但此增加無關緊要不值得考慮。
在任一調配物中在暴露於攪動及冷凍-解凍之條件或在-20℃下儲存至多14天時觀察到並未發生顯著改變。
基於細胞之效能分析
方法：
‧兩批式測試試樣(在t=0及t=3d後及在t=7及t=14d時間點後)。
‧所有試樣皆由單一分析師在生物分析中測試一次，只是對照試樣係在六(6)測試天中之每一天進行測試。
‧採取A280nm下之吸光度量測值來測定初級稀釋物及後續試樣稀釋物之精確濃度。
‧總體分析性能係可接受的。106個劑量反應曲線(來自53個板)中之三(3)個曲線需要有一個孔在至多2個不同濃度下經遮蓋以滿足孔間差異性分析準則
‧孔間差異性CV%20%
‧分析窗口(D/A)6
‧R2 0.98
將47個測試試樣之相對效能量測一次且將對照量測六(6)個不同次數。對照之平均相對效能為100.2%，其中95% CI來自96.9%至103.6%。
‧對照之六個獨立量測之分析差異性(GCV%)為3.2%。此方法之低分析差異性顯示，自單一量測獲得之測試試樣之相對效能值係可接受的。
‧基於單一量測，大多數測試試樣之相對效能接近100%(與參考標準之相對效能相當)。
基於細胞之生物分析結果：
圖15顯示包括在所有調配物中針對所有條件(-20℃(15A)、25℃(15B)、3次冷凍/解凍及3天攪動(15C))在所有時間點之基於細胞之效能分析(相對效能%，如與參考標準之效能相比)之分析之圖形。
如自圖15可看出，除冷凍-解凍及RT攪動之條件以外，在-20℃及25℃下所有調配物之相對效能皆接近100%。
本發明之第二態樣之項目
1.一種水性組合物，其包含：- 經分離多肽，其為融合至人類IgG1之Fc區域之人類p75腫瘤壞死因子受體之細胞外配體結合部分；- 單糖或二糖；- 水性緩衝液，其特徵在於該組合物既不含有精胺酸亦不含有半胱胺酸、選自氯化鈉、氯化鉀、檸檬酸鈉、硫酸鎂、氯化鈣、次氯酸鈉硝酸鈉、硫化汞、鉻酸鈉及二氧化鎂之鹽。
2.如項目1之組合物，其中該經分離多肽係依那西普。
3.如項目1或2中任一項之組合物，其中該單糖或二糖係選自海藻糖及蔗糖及其組合。
4.如項目3之組合物，其中該海藻糖係以20mg/mL至80mg/mL之濃度存在。
5.如項目3之組合物，其中該蔗糖係以10mg/mL至80mg/mL之濃度存在。
6.如項目1至5中任一項之組合物，其中該水性緩衝液係選自磷酸鈉、磷酸鉀、檸檬酸鈉或檸檬酸鉀、馬來酸、乙酸銨、叁-(羥基甲基)-胺基甲烷(tris)、乙酸鹽、二乙醇胺或其組合。
7.如項目6之組合物，其中該水性緩衝液係以20mM至150mM之 濃度存在。
8.如項目1至7中任一項之組合物，其進一步包含一或多種賦形劑。
9.如項目8之組合物，其中該賦形劑係乳糖、甘油、木糖醇、山梨醇、甘露醇、麥芽糖、肌醇、葡萄糖、牛血清白蛋白、人類血清白蛋白、重組血球凝集素、右旋糖酐、聚乙烯醇、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、聚乙烯亞胺、明膠、聚乙烯吡咯啶酮(PVP)、羥乙基纖維素(HEC)、聚乙二醇、乙二醇、二甲亞碸(DMSO)、二甲基甲醯胺(DMF)、脯胺酸、L-絲胺酸、麩胺酸、丙胺酸、甘胺酸、離胺酸、肌胺酸、γ-胺基丁酸、聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80、十二烷基硫酸鈉、聚山梨醇酯、聚氧乙烯共聚物、磷酸鉀、乙酸鈉、硫酸銨、硫酸鎂、硫酸鈉、氧化三甲胺、甜菜鹼、鋅離子、銅離子、鈣離子、錳離子、鎂離子、3-[(3-膽醯胺丙基)-二甲基銨基]-1-丙烷硫酸鹽、蔗糖單月桂酸酯或其組合。
10.如項目1至9中任一項之組合物，其中該組合物之pH為pH 6.0至pH 7.0。
11.如項目1至10中任一項之組合物，其包含50mg/mL依那西普、50mM磷酸鈉緩衝液、60mg/mL海藻糖二水合物，其中該組合物之pH為pH 6.2。
12.如項目1至10中任一項之組合物，其包含50mg/mL依那西普、50mM磷酸鈉緩衝液、60mg/mL蔗糖，其中該組合物之pH為pH 6.2。
13.如項目1至10中任一項之組合物，其包含50mg/mL依那西普、50mM磷酸鈉緩衝液、60mg/mL海藻糖二水合物、0.1%聚山梨醇酯20，其中該組合物之pH為pH 6.2。
14.如項目1至10中任一項之組合物，其包含50mg/mL依那西 普、50mM磷酸鈉緩衝液、60mg/mL蔗糖、0.1%聚山梨醇酯20，其中該組合物之pH為pH 6.2。

Claims (15)

  1. 一種水性組合物，其包含：經分離多肽，其為融合至人類IgG1之Fc區域之人類p75腫瘤壞死因子受體之細胞外配體結合部分；鹽，其以80mM至130mM之濃度存在；及賦形劑，其係選自海藻糖及蔗糖或其組合之群，其特徵在於該組合物中既不存在精胺酸亦不存在半胱胺酸。
  2. 如請求項1之組合物，其中該鹽濃度為90mM。
  3. 如請求項1至2中任一項之組合物，其中該鹽為氯化鈉。
  4. 如請求項1至3中任一項之組合物，其中該經分離多肽為依那西普(etanercept)。
  5. 如請求項1至4中任一項之組合物，其中該賦形劑係以5mg/mL至80mg/mL之濃度存在之蔗糖。
  6. 如請求項1至5中任一項之組合物，其中該組合物進一步包含水性緩衝液。
  7. 如請求項6之組合物，其中該水性緩衝液係磷酸鈉、磷酸鉀、檸檬酸鈉或檸檬酸鉀、琥珀酸、馬來酸、乙酸銨、叁-(羥基甲基)-胺基甲烷(tris)、乙酸鹽、二乙醇胺、組胺酸或其組合。
  8. 如請求項6或7中任一項之組合物，其中該水性緩衝液係以15mM至100mM之濃度存在。
  9. 如請求項8之組合物，其中該水性緩衝液係以20mM至30mM之濃度存在。
  10. 如請求項6至9中任一項之組合物，其中該水性緩衝液係琥珀酸(琥珀酸鹽)。
  11. 如請求項1至10中任一項之組合物，其進一步包含一或多種賦形 劑。
  12. 如請求項11之組合物，其中該賦形劑係乳糖、甘油、木糖醇、山梨醇、甘露醇、麥芽糖、肌醇、葡萄糖、牛血清白蛋白、人類血清白蛋白、重組血球凝集素、右旋糖酐、聚乙烯醇、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、聚乙烯亞胺、明膠、聚乙烯吡咯啶酮(PVP)、羥乙基纖維素(HEC)、聚乙二醇、乙二醇、二甲亞碸(DMSO)、二甲基甲醯胺(DMF)、脯胺酸、L-絲胺酸、麩胺酸、丙胺酸、甘胺酸、離胺酸、肌胺酸、γ-胺基丁酸、聚山梨醇酯-20、聚山梨醇酯-80、十二烷基硫酸鈉、聚山梨醇酯、聚氧乙烯共聚物、磷酸鉀、乙酸鈉、硫酸銨、硫酸鎂、硫酸鈉、氧化三甲胺、甜菜鹼、鋅離子、銅離子、鈣離子、錳離子、鎂離子、3-[(3-膽醯胺丙基)-二甲基銨基]-1-丙烷硫酸鹽、蔗糖單月桂酸酯或其組合。
  13. 如請求項1至12中任一項之組合物，其中該組合物之pH為pH 6.0至pH 7.0。
  14. 如請求項1至13中任一項之組合物，其包含50mg/mL依那西普、22mM琥珀酸鹽、90mM NaCl、10mg/mL蔗糖，其中該組合物之pH為pH 6.3。
  15. 如請求項1至14中任一項之組合物，其包含50mg/mL依那西普、25mM磷酸鈉緩衝液、90mM氯化鈉、34mg/mL蔗糖，其中該組合物之pH為pH 6.3。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BRPI0611901A2 (pt) 2005-06-14 2012-08-28 Amgen, Inc composição, liofilizado, kit, e, processo para preparar uma composição
GB201612317D0 (en) * 2016-07-15 2016-08-31 Philogen Spa Antibody compositions
AU2017345490B2 (en) * 2016-10-21 2022-07-07 Amgen Inc. Pharmaceutical formulations and methods of making the same
EP3533441A4 (en) * 2016-10-28 2019-12-04 Celltrion Inc. STABLE PHARMACEUTICAL FORMULATION
GB201717966D0 (en) * 2017-10-31 2017-12-13 Xenikos Bv Immunotoxins, formulations thereof and their use in medicine
CA3042126A1 (en) 2018-05-03 2019-11-03 Michael A. Portman Methods of treating kawasaki disease
CN110495447A (zh) * 2019-09-10 2019-11-26 湖南思为康医药有限公司 一种免疫细胞玻璃化冻存保护液及冻存免疫细胞的方法

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2618832T3 (es) * 2002-02-27 2017-06-22 Immunex Corporation Composición TNFR-FC estabilizada que comprende arginina
US20080071063A1 (en) * 2006-02-03 2008-03-20 Medimmune, Inc. Protein Formulations
RU2600847C2 (ru) * 2010-05-10 2016-10-27 Интас Биофармасьютикалс Лимитед Жидкий состав полипептидов, содержащих fc-домен иммуноглобулина
JP5996631B2 (ja) * 2011-04-20 2016-09-21 サンド・アクチエンゲゼルシヤフト ＴＮＦＲ：Ｆｃ融合タンパク質の安定した医薬液剤
UY34105A (es) * 2011-06-03 2012-07-31 Lg Life Sciences Ltd Formulación líquida estable de etanercept
DK2726090T3 (da) * 2011-07-01 2020-01-20 Biogen Ma Inc Argininfri tnfr: fc-fusionspolypeptidsammensætninger
US10493151B2 (en) * 2011-10-18 2019-12-03 Coherus Biosciences, Inc. Etanercept formulations stabilized with sodium chloride
JP6220789B2 (ja) * 2011-10-18 2017-10-25 コヒラス・バイオサイエンシズ・インコーポレイテッド 糖およびポリオールの組合せによって安定化されたエタネルセプト製剤
CA2878508A1 (en) * 2012-07-09 2014-01-16 Coherus Biosciences, Inc. Etanercept formulations exhibiting marked reduction in sub-visible particles
WO2014064637A1 (en) * 2012-10-26 2014-05-01 Lupin Limited Stable pharmaceutical composition of tnfr:fc fusion protein
WO2014078627A1 (en) * 2012-11-19 2014-05-22 Merck Sharp & Dohme Corp. Liquid formulations for tnfr:fc fusion proteins

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