TW201447302A - 測試口臭之方法 - Google Patents
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Abstract
本發明係關於用於測試口臭，特別來自於洋蔥與大蒜之口臭的方法。本文中所說明者為用於測試口腔保健組成物於減少口臭之功效的方法，該方法包含如下之步驟：a)用口腔保健組成物清潔口腔之至少一部分；b)測試來自於經清潔口腔呼出氣味之第一個樣品，以提供第一個試驗結果，其代表於該呼出氣味中所檢測之至少一種口臭組份的第一個量；c)將口腔暴露於包括或能夠形成至少一種口臭組份之口臭物質；且d)測試來自於該口腔呼出氣味之第二個樣品，以提供第二個試驗結果，其代表於該呼出氣味中所檢測之至少一種口臭組份的第二個量。
Description
本發明係關於用於測試口臭，特別來自於洋蔥與大蒜之口臭的方法。本文中所說明者為用於測試口腔保健組成物於減少口臭之功效的方法，該方法包含如下之步驟：a)用口腔保健組成物清潔口腔之至少一部分；b)測試來自於經清潔口腔呼出氣味之第一個樣品，以提供第一個試驗結果，其代表於該呼出氣味中所檢測之至少一種口臭組份的第一個量；c)將口腔暴露於包括或能夠形成至少一種口臭組份之口臭物質；且d)測試來自於該口腔呼出氣味之第二個樣品，以提供第二個試驗結果，其代表於該呼出氣味中所檢測之至少一種口臭組份的第二個量。
由於存有多種抗氧化劑、生物類黃酮及硫化物，洋蔥或大蒜合併於飲食中被認為提供有利的治療效益。然而，硫化物之存在通常伴隨著不好的氣味或口臭，使得洋蔥或大蒜臭味不受歡迎。據了解，一些人有特殊的飲食，其可導致那些人於其等之氣息中傾向遭受過度洋蔥或大蒜之臭味。
提供專門調配用來抵消洋蔥或大蒜臭味之口腔保健組成物，如潔牙劑、牙膏、漱口劑或漱口水係為已知。已知許多潛在之活性組份或摻合物合併於口腔保健組成物中用於此目的。然而，仍需要更有效的口腔保健組成物及活性組份用來有效打擊來自於洋蔥或大蒜之口臭。進一步研究與開發用於發展此等口腔保健組成物係對應地需要。
當口腔保健組成物係專門調配目標於來自洋蔥或大蒜之口臭時，潛在之活性組份與組份之組合物、以及組份量之選擇非常廣泛。此外，使用者常困惑的是，是否該臭味減少係藉由氣味遮蔽(藉另一個氣味覆蓋惡臭)或藉著將該惡臭化合物消除或轉化成較不臭的化合物而達成，後者為對付惡臭之較佳方式。
此外，用於提供其他技術效應之功效，如抗口腔保護、抗牙菌斑之功效，及抗微生物功效之潛在的媒劑與其他活性組份極為寬廣。
任何專門調配之口腔保健組成物，其係如何有效地對抗來自於洋蔥或大蒜口臭之任何程度之確定性是不可預測的。因此，每種調配物對抗來自於洋蔥或大蒜口臭之功效必須予以單獨測試。
此等試驗是費時，費工且昂貴。此外，於研究及發展過程中，可用作為可靠工具之一致性及健全之量化結果難以達成。
需要可用於測定任何特別調配物如何有效對抗，例如，來自於洋蔥或大蒜口臭之有效且可靠之試驗口腔保健組成物的測試方法。
亦需要像這樣比已知測試方法耗時更少、費力更少且
成本更低之測試方法。
此外，需要可於研究及發展過程中用作為可靠之工具，可容易地達成一致性與健全量化結果之測試方法，用於具有所期望之功效的口腔保健組成物。
本發明係藉由提供用於測試口腔保健組成物於減少口臭之功效的方法來解決於此方面技藝中之上述需要，該方法包含至少下列步驟：用口腔保健組成物清潔口腔之至少一部分，且測試該清潔之口腔，以提供於該呼出氣味中所檢測之至少一種口臭組份之基線量；將該口腔暴露於含有至少一種口臭組份之口臭物質；由該口腔獲得呼出氣味之樣品，以檢測於該呼出氣味中至少一種口臭組份的第一個量，其係代表該口腔保健組成物之預防效果；任意地，將用口腔保健組成物清潔後於該呼出氣味中所檢測之至少一種口臭組份之量，與用不同之口腔保健組成物所清潔之量相較，且選擇具有較低量之口腔保健組成物用於提供對抗口腔中至少一種惡臭組份的預防效果之方法；用該口腔保健組成物清潔口腔之至少一部分；
由該口腔獲得呼出氣味之樣品，以檢測於該呼出氣味中至少一種口臭組份之量，其係代表該口腔保健組成物於減少口臭之功效；且任意地，將用口腔保健組成物清潔後於該呼出氣味中所檢測之至少一種口臭組份之量，與用不同之口腔保健組成物所清潔之量相較，且選擇具有較低量之口腔保健組成物用於減少該口腔中至少一種惡臭組份之方法。
如全文中所使用者，範圍係以簡略方式使用來說明該範圍內之各個及每一個數值。於該範圍內之任何數值可選擇作為該範圍之終端。
本發明之進一步具體例將由詳細的說明及各實例而顯而易見。
因此，本發明係提供用於測試口腔保健組成物於減少口臭之功效的方法，該方法包含下列之步驟：a1.用口腔保健組成物清潔口腔之至少一部分，且測試該清潔之口腔，以提供於該呼出氣味中所檢測之至少一種口臭組份之基線量；b1.將該口腔暴露於含有至少一種口臭組份之口臭物質；c1.由該口腔獲得呼出氣味之樣品，以檢測於該呼出氣味中至少一種口臭組份之量，其係代表該口腔保健組成物之預防效果；且d1.將用口腔保健組成物清潔後於該呼出氣味中所檢測之至少一種口臭組份之量，與用不同之口腔保健組成物所清潔之量相較，且選擇具有較低量之口腔保健組成物用於提供預防效果對抗口腔中至少一種惡臭組份之方法。
本發明之另一方面係提供用於測試口腔保健組成物於減少口臭之功效與選擇之方法，其中，該方法包含下列之步驟：e1.將該口腔暴露於含有至少一種口臭組份之口臭物質；f1.用該口腔保健組成物清潔口腔之至少一部分；g1.由該口腔獲得呼出氣味之樣品，以檢測於該呼出氣味中至少一種口臭組份之量，其係代表該口腔保健組成物於減少口臭之功效；且h1.將於步驟e1中用口腔保健組成物清潔後於該呼出氣味中所檢測之至少一種口臭組份之量，與用不同之口腔保健組成物所清潔之量相較，且選擇具有較低量之口腔保健組成物用於減少該口腔中至少一種惡臭組份之方法。
本發明之另一方面係提供用於測試口腔保健組成物於減少口臭之功效與選擇之方法，其中該方法包含下列之步驟：a2.用口腔保健組成物清潔口腔之至少一部分，且測試該清潔之口腔，以提供於該呼出氣味中所檢測之至少一種口臭組份之基線量；b2.將該口腔暴露於含有至少一種口臭組份之口臭物質；c2.由該口腔獲得呼出氣味之樣品，以檢測於該呼出氣味中至少一種口臭組份之量，其係代表該口腔保健組成物之預防效果；d2.任意地，將用口腔保健組成物清潔後於該呼出氣味中所檢測之至少一種口臭組份的量，與用不同之口腔保健組成物所清潔之量相較，且選擇具有較低量之口腔保健組成物用於提供對抗口腔中至少一種惡臭組份的預防效果之方法；e2.用來自於步驟a2之口腔保健組成物清潔口腔之至少一部分；
f2.由該口腔獲得呼出氣味之樣品，以檢測於該呼出氣味中至少一種口臭組份之量，其係代表該口腔保健組成物於減少口臭之功效；且g2.任意地，將用步驟e2中之口腔保健組成物清潔後於該呼出氣味中所檢測之至少一種口臭組份之量，與用不同之口腔保健組成物所清潔之量相較，且選擇具有較低量之口腔保健組成物用於減少該口腔中至少一種惡臭組份之方法。
本發明之另一方面係提供用於測試口腔保健組成物於減少口臭之功效與選擇之方法，其中該方法包含如下之步驟：a2.用口腔保健組成物清潔口腔之至少一部分，且測試該清潔之口腔，以提供於該呼出氣味中所檢測之至少一種口臭組份之基線量；b2.將該口腔暴露於含有至少一種口臭組份之口臭物質；c2.由該口腔獲得呼出氣味之樣品，以檢測於該呼出氣味中至少一種口臭組份之量，其係代表該口腔保健組成物之預防效果；d2.將用口腔保健組成物清潔後於該呼出氣味中所檢測之至少一種口臭組份之量，與用不同之口腔保健組成物所清潔之量相較，且選擇具有較低量之口腔保健組成物用於提供對抗口腔中至少一種惡臭組份的預防效果之方法；e2.用來自於步驟a2之口腔保健組成物清潔口腔之至少一部分；f2.由該口腔獲得呼出氣味之樣品，以檢測於該呼出氣味中至少一種口臭組份之量，其係代表該口腔保健組成物於減少口臭之功效；且g2.將用步驟e2中之口腔保健組成物清潔後於該呼出氣味中所檢測之至少一種口臭組份的量，與用不同之口腔保健組成物所清潔之
量相較，且選擇具有較低量之口腔保健組成物用於減少該口腔中至少一種惡臭組份之方法。
任意地，該口臭物質係選自於洋蔥與大蒜中至少一種。
任意地，根據本發明之口腔保健組成物為潔牙劑、漱口水、漱口劑、牙膏、凝膠、牙霜(dental cream)、口香糖，或可攜式劑量物品如，但非侷限於，含片、薄荷糖、小球體、薄餅、棒棒糖、調配於小型可攜式噴霧器(噴霧瓶)中用於口腔施用之液體、調配於小型可攜式滴劑瓶中用於口腔施用之液體，或軟靭錠劑("嚼易(chewie)")。
於一些具體例中，該等或各個清潔步驟係包括用牙膏或潔牙劑凝膠之口腔保健組成物刷牙。
於一些替代具體例中，各個清潔步驟係包含用漱口水或漱口劑之口腔保健組成物沖洗口腔。
任意地，該惡臭組份為除了具有雜環部分之硫化物外之硫化物。
任意地，所試驗之惡臭組份為至少一種口臭組份，其選自由下列組成之群組：乙硫醇、二甲基硫醚、3,4-二甲基噻吩(thiophene)、甲基-1-丙烯基二硫醚、三甲基硫醚、二丙基硫醚及3-巰基-2-巰基甲基丙酸(化學結構描繪於如下表1中)。
進一步任意地，每一個測試步驟係試驗用來檢測至少三種選自於乙硫醇、二甲基硫醚、3,4-二甲基噻吩、甲基-1-丙烯基二硫醚、三甲基硫醚、二丙基硫醚及3-巰基-2-巰基甲基丙酸之口臭組份。
仍進一步任意地，每一個測試步驟係試驗用來檢測全部選自於乙硫醇、二甲基硫醚、3,4-二甲基噻吩、甲基-1-丙烯基二硫醚、三甲基硫醚、二丙基硫醚及3-巰基-2-巰基甲基丙酸之口臭組份。
於本發明之具體例中，該口腔保健組成物可包含羰基化合物如醛與酮，以便該硫化物轉化成氣味較少之化合物(參見如下之一般圖示)：
亦參見馬啟之高等有機化學-反應、機制與結構(第6版)，邁可B.史密斯與傑里馬啟編輯，1277頁(2007)。
於本發明之另一個具體例中，該口腔保健組成物可包含一種或多種之羰基化合物如醛及酮，包膠硫化物之化合物、焦磷酸四鈉(tetrasodium pyrophospate)、香味劑及其組合物。
任意地，每一個獲得之步驟係包括下列之子步驟：i.於固相微量萃取(SPME)纖維上收集至少一種口臭組份；ii.將所收集之至少一種口臭組份使用色層分離法予以分離；且iii.將經分離之至少一種口臭組份的量使用質譜法予以測定，以提供量化代表於該呼出氣味之個別樣品中至少一種口臭組份之量。
任意地，該色層分離法為氣相色層分離法(GC)及/或該質譜法(MS)為三段四極質譜法。
任意地，步驟b1或b2分別於步驟a1或a2後進行由10至30分鐘，步驟c1或c2分別於步驟a1或a2後進行由15至45分鐘，且步驟e1或e2分別於步驟a1或a2後進行由30至60分鐘。
於本發明之一個具體例中，於步驟d1或d2中所選擇之口腔保健組成物係與於步驟a1或a2中所選擇之原口腔保健組成物不一樣。
於本發明之一個具體例中，於步驟g1或g2中所選擇之口腔保健組成物係與於步驟a1或a2中所選擇之原口腔保健組成物不一樣。
因此，本發明之較佳具體例係提供測試方案，使用相關之儀器，以有效地於人類口中測量洋蔥之臭味組成份且以洋蔥臭味減少功能來篩選口腔保健組成物之功效。
本發明之較佳具體例亦提供用來測量於口中，特別是口腔之頂部空間之洋蔥臭味的分析方法，其係用體內固相微量萃取(SPME)技術，使用色層分離法，特別氣相色層分離法，及質譜法，尤其是三段四極質譜法進行。
本發明方法之較佳具體例可有效地指示於人類口中多至七種蔥氣味組成份之濃度含量且可以洋蔥臭味減少之功能用於篩選口腔保健產品的功效。
本發明方法之較佳具體例可提供體內方法能夠區別對照口腔保健組成物如牙膏，與試驗口腔保健組成物如牙膏，特別調配用於預防及由口腔去除洋蔥氣味者。
於一些具體例中，本發明係提供方法用來測試口腔保健組成物於減少口臭之功效。於該測試方法中，該口臭係由臭味物質所生成，例如選自於洋蔥與大蒜中至少一種。典型地，該口臭物質係包含經測量劑量之口臭物質，雖然可採用原料或天然之物質，其典型地係以方便且可再製之形式，如粉末或萃出物。
本發明已特別應用於減少洋蔥及/或大蒜臭味之功效的試驗中。然而，本發明亦可用於測試其他口臭物質或組份。
於一個方面中，該方法可提供口腔保健組成物於預防
上減少由該口臭物質所產生之口臭之能力的指示。
首先於經清潔之口腔上進行清新試驗，其中將呼出氣味之樣品測試存在於經清潔之口部頂空(headspace)中預先決定的口臭組份。然後將口腔暴露於該口臭物質之劑量，且將呼出氣味之其他樣品測試存在於有氣味之口部頂空中預先決定之口臭組份。
二個呼出氣味樣品之比較指出該口腔保健組成物預防上防止該口腔頂空免於隨後由早先暴露於洋蔥/大蒜所產生之臭味的能力。
於第一步驟中，該方法用所要試驗之口腔保健組成物清潔口腔之至少一部分。該清潔步驟典型地包含用牙膏或潔牙劑凝膠之口腔保健組成物刷牙。或者，該清潔步驟可包含用漱口水或漱口劑之口腔保健組成物沖洗口腔。該清潔步驟宜具有預先決定之時限，且例如可能需時由30秒至2分鐘，典型地約1分鐘。
用於確認口腔清潔之採樣與檢測技術中所說明之方法一般亦使用於本發明中用於其他採樣與檢測步驟。
將經清潔口腔之呼出氣味的樣品予以測試，以測定於該呼出氣味中所檢測之至少一種口臭組份之基線量，其應為零或低含量之惡臭組份。
於該具體例中，該測試步驟係於固相微量萃取(SPME)纖維上收集至少一種口臭組份。該測試方案中之志願受試人將SPME
纖維組件(assembly)2放入其等之口中M。將該纖維組件2用聚合材料之隔離管4以避免直接與口接觸。該纖維組件2可典型地包含具有75微米塗層之Carboxen®/聚二甲基矽氧烷(CAR/PDMS)之稠合矽石纖維作為基體活性群組，適當之纖維組件2具有黑色的平集線器(black plain hub)，其可得自於Supelco公司(Bellefonte，PA，USA)。然而，其他市售可得之SPME纖維組件亦可採用。該志願受試人經由鼻吸入且經由口呼出進入該管4及纖維組件2中。
然後，將於纖維組件2中所收集之口臭組份使用色層分離法，典型地氣相色層分離法予以分離。
例如，於一個具體例中，氣相色層分離法(GC)係使用商品名稱為GC7890A，由安捷倫科技公司(Agilent Technologies，Palo Alto，CA，USA)所銷售者。然而，其他市售可得之氣相色層分離法設備亦可採用。
於一個實例中，於該氣相色層分離法中烘箱溫度係保持於35℃ 1分鐘，且然後將該溫度以15℃/分鐘速率升高至160℃，且再保持於此2.667分鐘。總計運行時間可為12分鐘。氦氣係用作為載體氣體且流速可為1毫升/分鐘。該注入器溫度可設置於250℃。SLBTM-5ms GC管柱(30米x 0.25毫米x 0.25微米薄膜厚度，可得自於席格馬歐德里奇公司)(Sigma-Aldrich，Bellefonte，PA)可用於分離於纖維組件2中所收集之口臭組份。
於纖維組件2中所收集之口臭組份分離後，將一些分離之口臭組份使用質譜法予以測定，以提供量化代表於該呼出氣味樣品中至少一種口臭組份之量。
典型地，該質譜儀包含7000MS三段四極質譜儀(Triple
Quadrupole Mass Spectrometer)可得自於安捷倫科技公司(Palo Alto，CA，USA)。然而，其他市售可得之質譜儀設備可以採用。
於該質譜儀上之典型參數設定如下。用於溶劑延遲之非電離作用可為由0至0.5分鐘。該質譜法檢測可於0.5分鐘開啟。
該質譜儀係記錄所檢測之各個組份，以各自之採集時間之多個計數。本發明之方法可用於只檢測單一組份。然而，於較佳之具體例中，係檢測多個組份，每一個具有各自之採集時間，且於各採集時間之計數係代表個別組份存在之量。
於一些具體例中，其中該方法係用於檢測洋蔥及/或大蒜臭味，所要檢測之至少一種口臭組份係選自於乙硫醇、二甲基硫醚、3,4-二甲基噻吩、甲基-1-丙烯基二硫醚、三甲基硫醚、二丙基硫醚及3-巰基-2-巰基甲基丙酸中至少一種。於一個具體例中，七種口臭組份中之至少二種，且於另一個具體例中，七種口臭組份係個別地檢測。
當此等特別之口臭組份使用7000MS三段四極質譜儀檢測且典型之參數設定係如上所述者時，其採集時間如下：由0.5至3.0分鐘，可檢測到乙硫醇具有先質離子於57.8及產物離子於31.3且該碰撞能量為20eV。由3.0至4.5分鐘，可檢測到二甲基硫醚具有先質離子於93.7m/z及產物離子於79.0m/z且該碰撞能量為20eV。由4.5至5.4分鐘，可檢測到3,4-二甲基噻吩具有先質離子於110.8m/z及產物離子於77.1m/z且該碰撞能量為20eV。由5.4至5.8分鐘，可檢測到甲基-1-丙烯基二硫醚具有先質離子於119.7m/z及產物離子於75.1m/z且該碰撞能量為10eV。由5.8至6.3分鐘，可檢測到二甲基三硫醚具有先質離子於125.7m/z及產物離子於79.0
m/z且該碰撞能量為20eV。由6.3至7.7分鐘，可檢測到二丙基硫醚具有先質離子於149.7m/z及產物離子於43.2m/z且該碰撞能量為10eV。由7.7至8.5分鐘，可檢測到3-巰基-2-巰基甲基丙酸具有先質離子於151.7m/z及產物離子於88.0m/z且該碰撞能量為10eV。將各組份之總計數予以記錄用來指示已檢測到之組份的量。可將二種或所有組份之計數加入以提供單一參數代表由個別組份所組合之口臭。
於一些具體例中，該測試步驟進一步包括子步驟，其係將代表於呼出氣味之個別樣品中所檢測之至少二種或所有口臭組份之量之計數加總，以提供該呼出氣味樣品之單量化總計數值。該單量化總計數值係表示於清潔口腔頂空中與該口臭物質相關之口臭。
此後，將該口腔暴露於包括或能夠形成至少一種口臭組份之口臭物質。典型地，該口臭物質包含經計量之劑量。典型地，暴露於口臭物質係於口腔起始清潔開始後進行由10至30分鐘，更典型地約20分鐘。
例如，為了製備經計量劑量之洋蔥臭味物質，可將約0.5克洋蔥粉末懸浮於5毫升水中，超聲處理達2分鐘，且用0.45微米PTFE濾器過濾。
該洋蔥氣味可藉由用3毫升該洋蔥臭味溶液沖洗口腔達1分鐘而引進該口腔中。
將來自於經口臭物質處理之口腔呼出氣味之樣品予以測試以提供試驗結果，其代表於該呼出氣味中所檢測之至少一種口臭組份的量。任意地，該樣品係於起始清潔步驟開始後，以由15至45分鐘之期間採集。
該測試係如上所述用於清潔口腔頂空之採樣而進行，亦即，使用SPME纖維組件2，且然後進行如上所述之相同的氣相色層分離法及質譜法過程。含有口臭物質之口腔頂空的採樣係提供所檢測之各個組份以各自之採集時間的多個計數。
再次，本發明之方法可用於只檢測單一組份。然而，於其他具體例中，係檢測多個組份，其每一個具有各自之採集時間，且以各個採集時間之計數代表個別組份存在的量。於一些具體例中，該測試步驟將代表於呼出氣味之個別樣品中所檢測之口臭組份至少二種或所有的量之計數加總，以提供於呼出氣味各自樣品之單量化總計數值。該單量化總計數值係代表於含有該口臭物質之口腔頂空中與該口臭物質有關之口臭。
該試驗結果可與基線結果相較，以提供該口腔保健組成物於預防性地減少由該口臭物質所產生之口臭之能力的指示。
於進一步之方面中，該方法進一步提供該口腔保健組成物於再清新口腔與減少由先前暴露於該口臭物質所產生之口臭之能力的指示。
其後，為了測定該口腔保健組成物之再清新能力，該
方法再次用所要測試之口腔保健組成物清潔至少一部份該有氣味的口腔。
該清潔步驟再次典型地包括用牙膏或潔牙劑凝膠之口腔保健組成物刷牙。或者，該清潔步驟可包括用漱口水或漱口劑之口腔保健組成物沖洗口腔。該清潔步驟較佳具有預先決定的時限，且例如費時由30秒至2分鐘，典型地約1分鐘。典型地，該清潔係由經口臭物質處理之口腔使用纖維組件2於呼出氣味之第二次樣品採樣後，於由0至5分鐘之期間內進行。
於進一步測試步驟中，將來自於經口臭物質處理且隨即清潔口腔之呼出氣味的第二個樣品予以測試以提供第二個試驗結果，其代表於該呼出氣味中所檢測之至少一種口臭組份的第二個量。任意地，該第二個樣品係於起始清潔步驟開始後，以由30至60分鐘之期間採集，局部地40分鐘。
該測試係如上所說明之用於經清潔口腔頂空之採樣而進行。使用其他SPME纖維組件2，且然後進行相同之氣相色層分離法及質譜法程序如上所說明者。該採樣係提供所檢測之各個組份，以各自之採集時間之多個計數。再次，本發明之方法可用於只檢測單一組份。然而，於較佳之具體例中，係檢測多個組份，其每一個具有各自之採集時間，且以各個採集時間之計數代表個別組成物存在之量。於一些具體例中，該測試步驟將代表呼出氣味之個別樣品中所檢測之至少二種或所有口臭組份量之計數加總，以提供該呼出氣味樣品之單量化總計數值。該單量化總計數值代表於含有該
口臭物質且隨即清潔之口腔頂空中與該口臭物質相關之口臭。
第二次試驗結果可與第一次試驗結果相比較，以提供該口腔保健組成物於再清新及減少由暴露於口臭物質所產生之口臭之能力的指示。
說明於前之測試方案可用於比較不同口腔保健組成物於減少口臭，特別是洋蔥及/或大蒜臭味之成果。例如，經調配用於提供口臭減少之第一個口腔保健組成物可用作為試驗樣品，且第二個口腔保健組成物可用作為對照樣品。
於該色譜圖中來自於GC-MC讀數之譜峰可轉換成個別惡臭組份之計數，其可藉由其等之個別採集時間來確認。因此，該計數數據係提供用於個別惡臭組份檢測量之數值。
本發明亦提供用於測試口腔保健組成物於減少口臭之功效的組成物，其包含至少一種化合物，其選自於由乙硫醇、二甲基硫醚、3,4-二甲基噻吩、甲基-1-丙烯基二硫醚、三甲基硫醚、二丙基硫醚及3-巰基-2-巰基甲基丙酸所組成之群組。
於本發明之另一個具體例中，用於測試口腔保健組成物於減少口臭之功效的組成物係包含至少三種化合物，其選自由乙硫醇、二甲基硫醚、3,4-二甲基噻吩、甲基-1-丙烯基二硫醚、三甲基硫醚、二丙基硫醚及3-巰基-2-巰基甲基丙酸所組成之群組。
於本發明之另一個具體例中，用於測試口腔保健組成物於減少口臭之功效的組成物係包含乙硫醇、二甲基硫醚、3,4-二甲基噻吩、甲基-1-丙烯基二硫醚、三甲基硫醚、二丙基硫醚及3-巰基-2-巰基甲基丙酸。
於本發明之另一個具體例中，如上所說明之用於測試
口腔保健組成物於減少口臭之功效的組成物係沒有另外的組成份。
本發明亦提供藉由如上所說明之方法檢測之口腔用組成物，其中，該口腔保健組成物為潔牙劑、漱口水、漱口劑、牙膏、凝膠、牙霜、口香糖，或可攜式劑量物品如，但非侷限於，含片、薄荷糖、小球體、薄餅、棒棒糖、調配於小型可攜式噴霧器(噴霧瓶)中用於口腔施用之液體、調配於小型可攜式滴劑瓶中用於口腔施用之液體，或軟靭錠劑，其係藉由至少一種化合物選自於下列組成之群組：乙硫醇、二甲基硫醚、3,4-二甲基噻吩、甲基-1-丙烯基二硫醚、三甲基硫醚、二丙基硫醚及3-巰基-2-巰基甲基丙酸及包含一種或多種之羰基化合物、包覆呋喃或吡咯化合物類之化合物、焦磷酸四鈉(tetrasodium pyrophospate)、香味劑及其組合物來減少口臭。
於檢測口腔保健組成物之另一個具體例中，該減少口臭之口腔保健組成物，至少三種化合物係選自由乙硫醇、二甲基硫醚、3,4-二甲基噻吩、甲基-1-丙烯基二硫醚、三甲基硫醚、二丙基硫醚及3-巰基-2-巰基甲基丙酸所組成之群組。
於檢測口腔保健組成物之另一個具體例中，該減少口臭之口腔保健組成物係由乙硫醇、二甲基硫醚、3,4-二甲基噻吩、甲基-1-丙烯基二硫醚、三甲基硫醚、二丙基硫醚及3-巰基-2-巰基甲基丙酸之組合物。
本發明係以下列之非限制性實例闡明。
根據本發明之體外試驗方法係用來研究牙膏組成物於減少洋蔥口臭之成果。
使用本發明方法之具體例將牙膏予以測試，以測定其(a)於施用洋蔥臭味物質之前，於下文中稱為刺激，藉由刷牙預防性地避免洋蔥臭味於口腔頂空中，及(b)，於用該刺激沖洗口腔後，藉由刷牙去除口腔頂空中之洋蔥臭味之能力。
步驟1-口腔頂空之第一次清潔
該志願受試人用各自之牙膏刷其等之牙齒達1分鐘期間。
步驟2-清潔口腔頂空之採樣
該志願受試人經由其等之口呼氣至SPME(固相微量萃取)纖維組件中達1分鐘期間，以便將來自於清潔口腔呼出氣味之第一個樣品進行測試且將所需之口臭組份於SPME纖維上收集。該纖維組件係藉由聚合材料之隔離管避免與口直接接觸。該纖維組件係包含具有75微米Carboxen®/聚二甲基矽氧烷(CAR/PDMS)之塗層之稠合矽石纖維作為基體活性群組，該纖維組件具有黑色的平集線器且可得自於速貝可(Supelco)公司(Bellefonte，PA，USA)。該志願受試人經由鼻吸氣且經由口呼出進入該管及纖維組件中。
於纖維組件中所收集之口臭組份使用氣相色層分離法予以分離。該氣相色層分離法係採用安捷倫科技公司所販售商品名稱為GC7890A之氣相色層分離法(GC)。於該氣相色層分離法中，
該烘箱溫度係保持於35℃達1分鐘，且然後將該溫度以15℃/分鐘速率升高至160℃，且再保持於此達2.667分鐘。總計運行時間可為12分鐘。氦氣係用作為載體氣體且流速可為1毫升/分鐘。該注入器溫度可設置於250℃。得自於席格馬歐德里奇公司之SLBTM-5ms GC管柱(30米x 0.25毫米x 0.25微米薄膜厚度)可用於分離於纖維組件中所收集到之口臭組份。
於纖維組件中所收集到之口臭組份分離後，將該分離之口臭組份的量使用質譜法予以測定，以提供量化代表於該呼出氣味樣品中口臭組份之量。
該質譜儀包括7000MS三段四極質譜儀，其可得自於安捷倫科技公司。用於溶劑延遲之非電離作用可為由0至0.5分鐘。該質譜法檢測係於0.5分鐘開啟。
該質譜儀係記錄所檢測之各個組份，以各自之採集時間之多個計數。檢測到七種口臭組份，每一個具有各自之採集時間，且於各採集時間之計數係代表個別組份存在之量。
於檢測洋蔥臭味之實例中，所檢測之口臭組份為乙硫醇、二甲基硫醚、3,4-二甲基噻吩、甲基-1-丙烯基二硫醚、三甲基硫醚、二丙基硫醚及3-巰基-2-巰基甲基丙酸。
當檢測到此等特別的口臭組份時，其使用7000MS三段四極質譜儀且參數設定係如上所述者之採集時間如下。
由0.5至3.0分鐘，可檢測到乙硫醇具有先質離子於57.8及產物離子於31.3且該碰撞能量為20eV。由3.0至4.5分鐘，可檢測到二甲基硫醚具有先質離子於93.7m/z及產物離子於79.0m/z且該碰撞能量為20eV。由4.5至5.4分鐘，可檢測到3,4-二甲基噻吩具有先
質離子於110.8m/z及產物離子於77.1m/z且該碰撞能量為20eV。由5.4至5.8分鐘，可檢測到甲基-1-丙烯基二硫醚具有先質離子於119.7m/z及產物離子於75.1m/z且該碰撞能量為10eV。由5.8至6.3分鐘，可檢測到二甲基三硫醚具有先質離子於125.7m/z及產物離子於79.0m/z且該碰撞能量為20eV。由6.3至7.7分鐘，可檢測到二丙基硫醚具有先質離子於149.7m/z及產物離子於43.2m/z且該碰撞能量為10eV。由7.7至8.5分鐘，可檢測到3-巰基-2-巰基甲基丙酸具有先質離子於151.7m/z及產物離子於88.0m/z且該碰撞能量為10eV。將各組份之總計數予以記錄用來指示已檢測到之組份的量。
步驟3-口臭物質引進口中
其後，將該志願受試人之口腔暴露於經計量劑量之洋蔥臭味物質。暴露至口臭物質係於起始清潔該口腔開始後進行約15至20分鐘。
為了製備經計量劑量之洋蔥臭味物質，將約0.5克洋蔥粉末懸浮於5毫升水中，超聲處理達2分鐘，且用0.45微米PTFE濾器過濾。將該洋蔥氣味藉著用3毫升洋蔥臭味溶液沖洗達1分鐘而引進該口腔中。
步驟4-有氣味之口腔頂空的第一次採樣
於進一步測試步驟中，將來自於經口臭物質處理之口腔呼出氣味之第一個樣品予以測試以提供第一個試驗結果，其代表於該呼出氣味中所檢測之至少一種口臭組份的第一個量。第一個樣品係於起始清潔步驟開始後，以20分鐘期間採集。
該測試係如上所說明之用於清潔口腔頂空之採樣而進行。使用其他SPME纖維組件2，且然後進行相同之氣相色層分離
法及質譜法程序如上所說明者。該採樣係提供所檢測之各個組份，以各自之採集時間之多個計數。再次，本發明之方法係用來檢測七種口臭組份，如於前面之採樣中者。
步驟5-口腔頂空之第二次清潔
進一步之測試係進行以提供該口腔保健組成物於再清新口腔且減少由先前暴露於口臭物質所產生之口臭之能力的指示。
將所要測試之口腔保健組成物再次用於清潔口腔。該清潔步驟再次包含用牙膏刷牙達1分鐘時限。將清潔於由0至5分鐘期間內進行，接續於由經口臭物質處理之口腔呼出氣味之第一個樣品採樣。
步驟6-有氣味然後經清潔之口腔頂空之第二次採樣
於進一步測試步驟中，類似於第一個採樣試驗，將來自於經口臭物質處理且隨即清潔之口腔呼出氣味之第二個樣品進行試驗以提供第二個試驗結果，其代表於該呼出氣味中所檢測之七種口臭組份之第二個量。第二個樣品係於起始清潔步驟開始後，以40分鐘期間採期。
該試驗係如上所說明之用於前面的採樣而進行。使用其他SPME纖維組件，且然後進行相同之氣相色層分離法及質譜法程序如上所說明者。該採樣係提供所檢測之各個組份，以各自之採集時間之多個計數。再次，本發明之方法係用來檢測該七種口臭組份，如於前面之採樣中者。
步驟7-第一次與第二次採樣結果之比較
將第一次與第二次採樣之色譜圖之數據，藉由比較所
檢測之七種口臭組份，各個之第一次與第二次採樣之計數值之量化而分析。
為了測定所要測試之口腔保健組成物於預防性地防止洋蔥臭味於口腔頂空中之能力，將所檢測之七種口臭組份各個之第一次與第二次計數值進行比較。
為了測定所要測試之口腔保健組成物於去除已存在於口腔頂空中之洋蔥臭味之能力，將所檢測之七種口臭組份各個之第一次與第二次計數值進行比較。
藉由比較一種口腔保健組成物對另一種口腔保健組成物之結果，各個口腔保健組成物對抗口臭之功效可使用健全及可重複之試驗予以量化。於更有效之組成物時，如與較不有效之組成物相比，去除臭味之功效可以計數值中減少百分比來表示。
當然，其他數據分析技術可予以採用，用來分析該計數值以提供所測試之口腔保健組成物絕對或相對之功效的指示。
於各個之第一次與第二次採樣時，將代表於呼出氣味之個別樣品中所檢測之七種口臭組份全部之量的計數加在一起以提供該呼出氣味樣品之單量化總計數值。於個別採樣中，該單量化總計數值代表與該口臭物質有關之口臭。
再次，於一種口腔保健組成物對另一種口腔保健組成物時，藉由比較單量化總計數值，各個口腔保健組成物對抗口臭之功效可使用健全與可重複之試驗來量化。
根據本發明之體外試驗方法係用於研究不同之牙膏組成物於減少洋蔥口臭之成果。
將對照牙膏與含洋蔥臭味劑之試驗牙膏於志願者上使用本發明方法之具體例測量以測定(a)於施用該刺激前，藉由刷牙預防性地防止口腔頂空中之洋蔥臭味，及(b)於用該刺激沖洗口腔後，藉由刷牙去除口腔頂空中之洋蔥臭味，其等各自之能力。使用如上所說明之用於實例1之相同的步驟順序。於各個順序中，該對照牙膏與試驗牙膏係獨立地進行測試。
使用相同的洋蔥臭味物質。將三個採樣中之每一個予以測定所有的七種口臭組份。化合物1為乙硫醇，化合物2為二甲基硫醚，化合物3為3,4-二甲基噻吩，化合物4為甲基-1-丙烯基二硫醚，化合物5為二甲基三硫醚，化合物6為二丙基硫醚及化合物7為3-巰基-2-巰基甲基丙酸。
該臭味預防試驗，由第一次(20分鐘後)與第二次(40分鐘後)採樣之分析計數數據顯示四組不同之小組成員的結果，係顯示於表2-5中。
表2-5之重要字詞：
RT(停滯時間以分鐘計)
A(惡臭化合物編號-(1)乙硫醇，(2)二甲基硫醚，(3)3,4-二甲基噻吩，(4)甲基-1-丙烯基二硫醚，(5)三甲基硫醚，(6)二丙基硫醚及(7)3-巰基-2-巰基甲基丙酸。
第一次採樣數據(牙膏作為預防劑之效用)
對照牙膏-含焦磷酸四鈉(TSPP)及香料
B(對照牙膏-臭味係由三段四極MS偵測器計數-於起始清潔該口腔20分鐘後暴露於洋蔥溶液)
C(對照牙膏+1%含羰基化合物之組成物-臭味係由三段四極MS偵測器計數-於起始清潔該口腔20分鐘後暴露於洋蔥溶液)
D(惡臭化合物減少百分比%-B對C比較)
第二次採樣數據(牙膏於再清新及去除臭味之效用)
對照牙膏-含焦磷酸四鈉(TSPP)及香料
E(對照牙膏-臭味係由三段四極MS偵測器計數-於第二次清潔該口腔20分鐘後；於起始清潔40分鐘後暴露於洋蔥溶液)
F(對照牙膏+1%含羰基化合物之組成物-臭味係由三段四極MS偵測器計數-於第二次清潔該口腔20分鐘後；於起始清潔40分鐘後暴露於洋蔥溶液)。
G(惡臭化合物減少百分比%-E對F比較)
如上之數據顯示本發明之SPME-GC/MS方法允許快速測定具有羰基化合物之牙膏提供個別之惡臭化合物較低之總體計數，且與不含羰基化合物之相同牙膏相比，能夠只用一個試驗樣品提供數據用於七種惡臭化合物。此係藉由該試驗牙膏對抗口臭以提供預防功效以及減少惡臭組份之能力的量化指標。
藉由本發明之SPME-GC/MS方法，檢測臭味之所有的主要組份，可以確認係臭味減少係來自於實際減少惡臭化合物之量，而不是遮蔽的結果，亦即，羰基化合物之存在改善臭味去除比具有TSPP及香料之比較牙膏好。
此外，亦可看出雖然惡臭化合物整體上減少，但於效用上於小組成員之間有差異性。例如，於表3中該小組成員可以保持於起始臭味挑戰後使用1%含羰基化合物之組成物(相對於對照組減少64.8%)，但於第二次臭味挑戰後(相對於對照組減少56.2%)切換組
成物至更有效的調配物。相反的，於表4中該小組成員於起始臭味挑戰後可能想要由1%含羰基化合物之組成物切換(相對於對照組減少45.4%)，但於第二次臭味挑戰後使用該組成物(相對於對照組減少65.4%)。
有了該快速獲得有關臭味處理之數據，不僅可發展改進惡臭之組成物，而且此等組成物可於其他不太有效之組成物中被選定且藉由併入不同或額外之試劑來減少惡臭化合物，促進組成物定製成個人之需要(例如，於所有四個小組成員中化合物(3)係減少，但於34.9%至73.7%之範圍內)。
本發明所請求之方法係提供用於選擇適當潔牙劑用來提供預防效果用來處理臭味，以及用於選擇適當之潔牙劑用來提供減少惡臭組份之方式。
雖然本發明之特別具體例業已闡明且說明，對精於此方面技藝之人士應顯而易見，其可在不背離如後附申請專利範圍中所定義之本發明之範圍下逕行各種變化及修改。
Claims (23)
- 一種用於測試口腔保健組成物於減少口臭之功效與選擇之方法，其中該方法包括下列之步驟：a1.用口腔保健組成物清潔口腔之至少一部分，且測試該清潔之口腔以提供於該呼出氣味中所檢測之至少一種口臭組份之基線量；b1.將該口腔暴露於含有至少一種口臭組份之口臭物質；c1.由該口腔獲得呼出氣味之第一個樣品，以檢測於該呼出氣味中至少一種口臭組份之第一個量，其係代表該口腔保健組成物之預防效果；且d1.將用口腔保健組成物清潔後於該呼出氣味中所檢測之至少一種口臭組份的第一個量，與用不同之口腔保健組成物所清潔之第一個量相較，且選擇具有較低之第一個量之口腔保健組成物用於提供對抗口腔中至少一種惡臭組份的預防效果之方法。
- 一種用於測試口腔保健組成物於減少口臭之功效與選擇之方法，其中該方法包含下列之步驟：e1.將該口腔暴露於含有至少一種口臭組份之口臭物質；f1.用該口腔保健組成物清潔口腔之至少一部分；g1.由該口腔獲得呼出氣味之樣品，以檢測於該呼出氣味中至少一種口臭組份之量，其係代表該口腔保健組成物於減少口臭之功效；且h1.將用步驟e1中之口腔保健組成物清潔後於該呼出氣味中所檢測之至少一種口臭組份的第二個量，與用不同之口腔保健組成物所清潔之第二個量相較，且選擇具有較低之第二個量之口腔保健組成物用於減少口腔中至少一種惡臭組份之方法。
- 一種用於測試口腔保健組成物於減少口臭之功效與選擇之方法，該方法包括一項或多項下列之步驟：a2.用口腔保健組成物清潔口腔之至少一部分，且測試該清潔之口腔以提供於該呼出氣味中所檢測之至少一種口臭組份之基線量；b2.將該口腔暴露於含有至少一種口臭組份之口臭物質；c2.由該口腔獲得呼出氣味之第一個樣品，以檢測於該呼出氣味中至少一種口臭組份之第一個量，其係代表該口腔保健組成物之預防效果；d2.任意地，將用口腔保健組成物清潔後於該呼出氣味中所檢測之至少一種口臭組份的第一個量，與用不同之口腔保健組成物所清潔之第一個量相較，且選擇具有較低之第一個量之口腔保健組成物用於提供對抗口腔中至少一種惡臭組份的預防效果之方法；e2.用來自於步驟a2之口腔保健組成物清潔口腔之至少一部分；f2.由該口腔獲得呼出氣味之第二個樣品，以檢測於該呼出氣味中至少一種口臭組份之第二個量，其係代表該口腔保健組成物於減少口臭之功效；且g2.任意地，將用步驟e2中之口腔保健組成物清潔後於該呼出氣味中所檢測之至少一種口臭組份的第二個量，與用不同之口腔保健組成物所清潔之第二個量相較，且選擇具有較低之第二個量之口腔保健組成物用於減少口腔中至少一種惡臭組份之方法。
- 如前述申請專利範圍中任一項之方法，其中該口臭物質係選自於洋蔥與大蒜中至少一種。
- 如前述申請專利範圍中任一項之方法，其中該清潔步驟包括：(i)用為牙膏或潔牙劑凝膠之口腔保健組成物刷牙，及/或(ii)用為漱 口水或漱口劑之口腔保健組成物沖洗口腔。
- 如前述申請專利範圍中任一項之方法，其中該惡臭組份為除了具有雜環部分之硫化物外之硫化物。
- 如前述申請專利範圍中任一項之方法，其中該惡臭組份為至少一種口臭組份，其選自由乙硫醇、二甲基硫醚、3,4-二甲基噻吩、甲基-1-丙烯基二硫醚、三甲基硫醚、二丙基硫醚及3-巰基-2-巰基甲基丙酸所組成之群組。
- 如前述申請專利範圍中任一項之方法，其中該惡臭組份為至少三種口臭組份，其選自由乙硫醇、二甲基硫醚、3,4-二甲基噻吩、甲基-1-丙烯基二硫醚、三甲基硫醚、二丙基硫醚及3-巰基-2-巰基甲基丙酸所組成之群組。
- 如前述申請專利範圍中任一項之方法，其中該口臭組份為乙硫醇、二甲基硫醚、3,4-二甲基噻吩、甲基-1-丙烯基二硫醚、三甲基硫醚、二丙基硫醚與3-巰基-2-巰基甲基丙酸之組合物。
- 如前述申請專利範圍中任一項之方法，其中該口腔用組成物含有多種化合物之一種，其係選自由羰基化合物、包覆硫化物之化合物、焦磷酸四鈉、香味劑及其組合物所組成之群組。
- 如前述申請專利範圍中任一項之方法，其中各個獲得之步驟包括下列之子步驟：i.於固相微量萃取(SPME)纖維上收集至少一種口臭組份；ii.使用色層分離法分離所收集之至少一種口臭組份；且iii.使用質譜法測定經分離之至少一種口臭組份之，以提供量化代表於該呼出氣味之個別樣品中至少一種口臭組份之量。
- 如前述申請專利範圍中任一項之方法，其中該色層分離法為氣相色層分離法(GC)及/或該質譜法(MS)為三段四極質譜法(triple quadrupole mass spectrometry)。
- 如前述申請專利範圍中任一項之方法，其中步驟b1或b2分別於步驟a1或a2後進行由10至30分鐘，步驟c1或c2分別於步驟a1或a2後進行由15至45分鐘，且步驟e1或e2分別於步驟a1或a2後進行由30至60分鐘。
- 如申請專利範圍第3項之方法，其中該方法包括如下之步驟：a2.用口腔保健組成物清潔口腔之至少一部分，且測試該清潔之口腔以提供於該呼出氣味中所檢測之至少一種口臭組份之基線量；b2.將該口腔暴露於含有至少一種口臭組份之口臭物質；c2.由該口腔獲得呼出氣味之第一個樣品，以檢測於該呼出氣味中至少一種口臭組份之第一個量，其係代表該口腔保健組成物之預防效果；d2.將用口腔保健組成物清潔後於該呼出氣味中所檢測之至少一種口臭組份的第一個量，與用不同之口腔保健組成物所清潔之第一個量相較，且選擇具有較低之第一個量之口腔保健組成物用於提供對抗口腔中至少一種惡臭組份的預防效果之方法；e2.用來自於步驟a2之口腔保健組成物清潔口腔之至少一部分；f2.由該口腔獲得呼出氣味之第二個樣品，以檢測於該呼出氣味中至少一種口臭組份之第二個量，其係代表該口腔保健組成物於減少口臭之功效；且g2.將用步驟e2中之口腔保健組成物清潔後於該呼出氣味中所檢測之至少一種口臭組份的第二個量，與用不同之口腔保健組成物所 清潔之第二個量相較，且選擇具有較低之第二個量之口腔保健組成物用於減少該口腔中至少一種惡臭組份之方法。
- 如前述申請專利範圍中任一項之方法，其中於步驟d1或d2中所選擇之口腔用組成物係與於步驟a1或a2中所選擇之原口腔用組成物不一樣。
- 如前述申請專利範圍中任一項之方法，其中於步驟g1或g2中所選擇之口腔用組成物係與於步驟a1或a2中所選擇之原口腔用組成物不一樣。
- 一種用於測試口腔保健組成物於減少口臭之功效的組成物，其包含至少一種化合物，其選自由乙硫醇、二甲基硫醚、3,4-二甲基噻吩、甲基-1-丙烯基二硫醚、三甲基硫醚、二丙基硫醚及3-巰基-2-巰基甲基丙酸所組成之群組。
- 如申請專利範圍第17項之組成物，其包含至少三種化合物，其選自由乙硫醇、二甲基硫醚、3,4-二甲基噻吩、甲基-1-丙烯基二硫醚、三甲基硫醚、二丙基硫醚及3-巰基-2-巰基甲基丙酸所組成之群組。
- 如申請專利範圍第18項之組成物，其包含乙硫醇、二甲基硫醚、3,4-二甲基噻吩、甲基-1-丙烯基二硫醚、三甲基硫醚、二丙基硫醚及3-巰基-2-巰基甲基丙酸之組合物。
- 如申請專利範圍第17-19項中任一項之組成物，其中沒有另外的組成份。
- 一種藉由如申請專利範圍第1-16項中任一項之方法所檢測之口腔保健組成物，其中該口腔保健組成物為潔牙劑、漱口水、漱口劑、牙膏、凝膠、牙霜(dental cream)、口香糖，或可攜式劑量物 品例如，但非侷限於，含片、薄荷糖、小球體、薄餅、棒棒糖、調配於小型可攜式噴霧器(噴霧瓶)中用於口腔施用之液體、調配於小型可攜式滴劑瓶中用於口腔施用之液體，或軟靭錠劑，其係藉由至少一種選自由乙硫醇、二甲基硫醚、3,4-二甲基噻吩、甲基-1-丙烯基二硫醚、三甲基硫醚、二丙基硫醚及3-巰基-2-巰基甲基丙酸所組成之群組之化合物及包含一種或多種之羰基化合物、包覆呋喃或吡咯化合物類、焦磷酸四鈉、香味劑及其組合物來減少口臭。
- 如申請專利範圍第21項之口腔保健組成物，其中該口腔保健組成物減少口臭，至少三種化合物係選自由乙硫醇、二甲基硫醚、3,4-二甲基噻吩、甲基-1-丙烯基二硫醚、三甲基硫醚、二丙基硫醚及3-巰基-2-巰基甲基丙酸所組成之群組。
- 如申請專利範圍第22項之口腔保健組成物，其中該口腔保健組成物係由乙硫醇、二甲基硫醚、3,4-二甲基噻吩、甲基-1-丙烯基二硫醚、三甲基硫醚、二丙基硫醚及3-巰基-2-巰基甲基丙酸之組合物來減少口臭。
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