TW201309731A

TW201309731A - 新穎之半胱天冬酶－２抑制劑

Info

Publication number: TW201309731A
Application number: TW101102789A
Authority: TW
Inventors: David Chauvier
Original assignee: Chiesi Farma Spa
Priority date: 2011-02-01
Filing date: 2012-01-30
Publication date: 2013-03-01
Also published as: TW201247653A

Abstract

本發明係有關於新穎化合物、其醫藥組成物及其用途，該等化合物抑制前-細胞凋亡半胱天冬酶-2以預防及/或治療涉及半胱天冬酶-2活性之疾病及損傷，更特別為新生兒腦缺血。

Description

新穎之半胱天冬酶-2抑制劑

本發明係屬藥物生物學及化學領域，且係有關於新穎化合物、其醫藥組成物及其用途，該等化合物抑制前-細胞凋亡半胱天冬酶-2以預防及/或治療涉及半胱天冬酶-2活性之疾病及損傷。

在胚胎發生期間出現神經元細胞死亡係為去除過量神經元而確保適當前-突觸連結及後-突觸連結，及允許機能性成人腦部形成。除了與正常老化相關聯的後-有絲分裂死亡外，環境或遺傳的突變因子可能於急性損傷(例如缺氧-缺血、中風、脊索損傷、創傷)或慢性神經退化疾病期間誘發成年人的神經元死亡。與此等病症相關聯的細胞死亡可能以三個分開機轉出現，顯現具有壞死、自體吞噬、或細胞凋亡之形態學及生物化學特徵。生理性及病理性神經元死亡二者係經常與缺陷性細胞凋亡調節與傳訊路徑相關聯，造成此種主動細胞自殺機轉在哺乳動物細胞內可劃分成半胱醯基天冬酸鹽特異性蛋白酶(半胱天冬酶(caspase))依賴型路徑相對於半胱天冬酶(caspase)非依賴型路徑。

神經元細胞凋亡乃主動細胞自殺機轉，可劃分成循序時期，包括起始、決定、執行、及分解。此一事件串級係由特定機構的活化所驅策，涉及半胱胺酸依賴型天冬酸鹽特異性蛋白酶(半胱天冬酶(caspase))的活化及粒線體，該粒線體係可作為決定性(或放大器)調節胞器。確實，粒線體變異包括粒線體內膜電化學梯度的喪失，及細胞凋亡生成因子諸如細胞色素c Smac/Diablo及細胞凋亡誘導因子的釋放。一旦從粒線體釋放，此等效應物觸發半胱天冬酶依賴型及/或半胱天冬酶非依賴型細胞質及細胞核解體。因此，粒線體因子組合半胱天冬酶，促成細胞凋亡的分解期，結果導致細胞縮小、細胞核凝結、細胞凋亡體的發射、及出現「吞噬我」信號，諸如在吞噬作用前磷脂基絲胺酸轉位至漿膜的外小葉。

至目前為止，於人體已經識別數種半胱天冬酶。更明確言之，有兩類型細胞凋亡半胱天冬酶：起始物(頂點)半胱天冬酶及效應物(履行者)半胱天冬酶。起始物半胱天冬酶(例如半胱天冬酶-2、半胱天冬酶-8、半胱天冬酶-9、半胱天冬酶-10)裂解效應物半胱天冬酶之無活性原型而藉此活化之。效應物半胱天冬酶(例如半胱天冬酶-2、半胱天冬酶-6、半胱天冬酶-7)又轉而裂解細胞內部的其它蛋白質酶基質而觸發細胞凋亡程序。

業界已經揭示數種半胱天冬酶抑制劑。可抑制半胱天冬酶-2活性之化合物已報告於WO 2004/103389、WO 2005/105829及WO 2006/056487。

更明確言之，五胜肽5-(2,6-二氟苯氧基)-3(R,S)-{2(S)-[2(S)-(3-甲氧基羰基-2(S)-{3-甲基 -2(S)-[(喹啉-2-羰基)-胺基]-丁醯基胺基}-丙醯基胺基)-3-甲基-丁醯基胺基]-丙醯基胺基}-4-側氧基-戊酸甲酯為選擇性半胱天冬酶-2抑制劑，揭示於WO 2005/105829，目前正在研究發展用於新生兒腦損傷之治療。

該化合物具有如下報告之化學式

業界已將該化合物引用為喹啉-2-羰基-(S)-Val-(S)-Asp(OMe)-(S)-Val-(S)-Ala-(R,S)-Asp(OMe)-CH₂OC₆H₃(2,6-F₂)或TRP 601。

但特別係就藥力學及ADME(吸附、分布、代謝及排泄)等方面而言，仍然需要有具有改良性質的半胱天冬酶-2抑制劑。

更明確言之，高度優異地係提供更有效的半胱天冬酶-2抑制劑來用於新生兒腦缺血的治療，新生兒腦缺血乃早產兒的神經發育損傷的主要起因且仍然成為主要有待滿足的醫療需求。

本發明係有關於通式(I)之半胱天冬酶-2抑制劑

其中：n為0或1；A表示N、N(H)、O、S、或N-O(亦即N-氧化物)；相鄰於A基團之_…當A為O或S時可以是單鍵，或當A為N(H)或N時可以是單鍵或雙鍵；X彼此為相同或相異，且分別係選自鹵原子，較佳為氟；X₁表示H或鹵原子；及R₁彼此為相同或相異，且分別係選自H及線性或分支(C₁-C₄)烷基，較佳係選自H、甲基及乙基。

於第二態樣中，本發明提供醫藥組成物，包含通式(I)化合物作為活性成分及選擇性地，一或多種醫藥上可接受之賦形劑。

於第三態樣中，本發明提供通式(I)化合物用作為藥物。

於第四態樣中，本發明提供通式(I)化合物用於暗示半胱天冬酶-2活性之疾病諸如新生兒腦損傷的預防及治療。

於第五態樣中，本發明提供通式(I)化合物用於藥物之製備而用於暗示半胱天冬酶-2活性之疾病諸如新生兒腦損傷的預防及治療之用途。

於第六態樣中，本發明提供用於暗示半胱天冬酶-2活性之疾病諸如新生兒腦損傷的預防及治療之方法，該方法包含投予治療上有效量之通式(I)化合物。

[定義]

除非另行定義，否則此處使用的全部技術性及科學性術語具有熟請技藝人士一般瞭解本主旨所屬的相同定義。

「鹵原子」一詞包括氟、氯、溴及碘。

「線性或分支(C₁-C₄)烷基」表示法係指其中組成碳原子數係在1至4之範圍的直鏈及分支烷基。烷基之特例為甲基、乙基、正丙基、異丙基、及第三丁基。

「劑量」一詞表示投予藥物之單位用量。

「治療特定疾病的化合物之有效量」乃足夠改善或以某種方式減輕疾病相關聯的症狀之用量。

「高化學純度」一詞係指一種化合物其中藉標準分析方法，諸如薄層層析術(TLC)或高效液相層析術(HPLC)測量時容易檢測得的雜質總量係低於5%，優異地低於2.5%，較佳地低於1.0%，更佳地低於0.5% w/w。

「預防」一詞表示減低疾病發作風險之辦法。

「治療」一詞表示獲得有利的或期望的結果包括臨床效果之辦法。有利的或期望的臨床效果可包括但非限於緩和或改善一或多個症狀或病況、減低疾病程度、穩定(換言之不惡化)疾病狀態、預防疾病的擴散、延遲或減慢疾病的進行、改善或減輕疾病狀況、及緩解(包括部分或全部)，包括可檢測或不可檢測。本術語也表示相較於未接受治療的預期存活而可延長之存活期。

本發明係有關於通式(I)半胱天冬酶-2抑制劑。

當A為N及_…為雙鍵時，本發明也涵蓋喹啉環上的相對應N-氧化物。

於本發明之較佳具體例中，A為N及_…為雙鍵故形成一個喹啉環。

更佳地，半胱天冬酶-2抑制劑為通式(I)化合物其中n=1

其中X、X₁及R₁各自具有如上定義之意義。

此外，本發明涵蓋醫藥上可接受之鹽類及/或其溶劑合物。

醫藥上可接受之鹽類包括其中酸性官能基當存在時係與合宜鹼反應而形成例如鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鎂鹽、銨鹽及氯鹽。

當A為N及_…為雙鍵時，醫藥上可接受之鹽類也包括經由喹啉環之氮用作為鹼與強無機酸或強有機酸反應而形成例如鹽酸鹽類及三氟甲烷磺酸鹽類所獲得者。

通式(I)化合物為胺基酸序列纈胺醯基-天冬醯基-纈胺醯基-丙胺醯基-天冬醯基之衍生物且含有非對稱中心，具有絕對組態相對應於L序列之R組態或相對應於D序列之S組態。

本發明包括光學立體異構物及其混合物。

較佳地，胺基胺殘基的非對稱中心纈胺醯基及丙胺醯基具有絕對組態(S)，而天冬醯基殘基可以是(S)或(R,S)。

通式(II)化合物之較佳群組為其中R₁為H，X各自為F，及X₁為H。

因此於本發明之較佳具體例中之一者中，半胱天冬酶-2抑制劑為化合物2-喹啉基羰基-(S)-纈胺醯基-(S)-天冬醯基-(S)-纈胺醯基-(S)-丙胺醯基-(R,S)-天冬醯基2,3,5,6-四氟苯基酯。

通式(II)化合物之另一較佳群組為其中R₁為甲基，X各自為F，及X₁為H。

因此於本發明之較佳具體例中之一者中，半胱天冬酶-2抑制劑為化合物5-(2,3,5,6-四氟苯氧基)-3(R,S)-{2(S)-[2(S)-(3-甲氧基羰基-2(S)-{3-甲基-2(S)-[(喹啉-2-羰基)-胺基]-丁醯基胺基}-丙醯基胺基)-3-甲基-丁醯基胺基]-丙醯基胺基}-4-側氧基-戊酸甲酯，後文也以內部代碼引述為TRP 701。

該後述化合物也可稱作為2-喹啉基羰基-(S)-纈胺醯基-(S)-天冬醯基(甲基酯)-(S)-纈胺醯基-(S)-丙胺醯基-(R,S)-天冬醯基(甲基酯)2,3,5,6-四氟苯基酯或喹啉-2-羰基-(S)-Val-(S)-Asp(OMe)-(S)-Val-(S)-Ala-(R,S)-Asp(OMe)-CH₂OC₆H(2,3,5,6-F₄)。

通式(II)化合物之另一較佳群組為其中R₁為乙基，X各自為F，及X₁為H。

因此於本發明之較佳具體例中之一者中，半胱天冬酶-2抑制劑為化合物2-喹啉基羰基-(S)-纈胺醯基-(S)-天冬醯基(乙基酯)-(S)-纈胺醯基-(S)-丙胺醯基-(R,S)-天冬醯基(乙基酯)2,3,5,6-四氟苯基酯。

除非另行提供，否則本發明包括全部該等化合物，其中該環載基團A為於任何適當自由位置透過醯胺基鍵聯而經以分子的殘餘部分取代，如式(I)表示。

本發明化合物具有極高親脂性，容易通過血腦障壁及擴散入腦部。此外，添加更多個鹵原子特別為氟原子至端末苯氧基上，使得所得化合物比較具有較少個鹵原子的化合物諸如TRP 601賦與更快速的作用起始。不欲受理論所限，隨後假說在芳香環上補充鹵原子甚至促成相關化合物的電子離域，而如此又轉而使得更容易與半胱天冬酶-2袋狀物內的活性位置之活性巰基(SH)快速交互作用。

通式(I)化合物可藉已知方法製備。若干可用之方法係報告於反應圖1、2及3，其中A、X、X₁及R₁具有前文報告之定義。

採用的條件及反應劑係揭示於WO 2005/105829，有關此種合成之教示係以引用方式併入此處。

但該等合成路徑不應視為限制可供本發明化合物之製備利用的合成方法之範圍。

反應圖係有關通式(I)化合物其中n=1及_…為雙鍵之製備，但也適用於其中n=0及_…為單鍵之化合物之製備，如此因而係使用適當中間產物。

起始物料及反應物為已知，或即便本身並非市售可購得，但方便依據已知方法製備。

優異地，通式(I)化合物係以高化學純度用於醫藥組成物之製備以供以任何方便方式投藥。

本發明化合物之適當劑量可由臨床醫師容易地確定且將係取決於病人類別、年齡、疾病本質及藥物遞送模式。每千克體重約0.01毫克至約5毫克劑量為有用，較佳地為約0.1至3毫克/千克，更佳地為約0.5至2毫克/千克。

醫藥組成物可經由以適當劑量混合通式(I)化合物及一或多種醫藥上可接受之賦形劑而製備。依據欲治療的醫事疾病或病況本質及病人類別，醫藥組成物可經配方來藉任何適當途徑遞送，包括口服、靜脈、腸道外、吸入、鼻內、局部、皮下、肌肉、直腸、腹內、腦室內、海馬迴內或其它腦內遞送、機械遞送器材之腦內植入，諸如浸漬以本發明化合物的明膠海綿(Gelfoam®)。適當劑型包括熟諳技藝人士已知之全部劑型，諸如錠劑、膠囊劑、散劑、持續釋放配方、軟膏劑、膠漿劑、乳膏劑、栓劑、眼用滴劑、穿皮貼片、糖漿劑、溶液劑、懸浮液劑、噴霧劑、噴霧器用之溶液劑、鼻用噴劑、等。

適當已知賦形劑包括載劑、稀釋劑、濕潤劑、乳化劑、黏結劑、包衣劑、填充劑、滑動劑、潤滑劑、崩散劑、保藏劑、界面活性劑、pH緩衝物質等。賦形劑之實例係提供於Ed.Rowe等人之the Handbook of Pharmaceutical Excipients,5^th ed.(2006),Pharmaceutical Press。

於較佳具體例中，組成物係調配藉靜脈、皮下、腹內或腦內途徑遞送。

於本發明之若干具體例中，組成物可調配成微脂粒溶液劑型或微懸浮液劑型。於其它具體例中，可調配成水性溶液劑型，選擇性地，pH係經緩衝。

通式(I)化合物須溶解於其中的溶劑可只包含水，或包含水與選自於下列所組成的組群中之可與水相溶混的助溶劑之混合物：乙醇、丙二醇、聚乙二醇、聚丙二醇、及甘油或其混合物。

於較佳具體例中，組成物係調配成水性溶液劑型，選擇性地pH係經緩衝，包含通式(II)化合物其中R₁為H，X各自為F，及X₁為H或其鹽，其劑量為0.02至0.25毫克/千克，更佳地為0.05至0.2毫克/千克。

若有所需，組成物也可包含一或多種其它治療劑，較佳為目前用於新生兒疾病之治療的治療劑。

通式(I)化合物可用於寬廣範圍之涉及半胱天冬酶-2活性的疾病之預防目的或治療目的。

舉例言之，該等化合物可優異地用於預防、減輕、及治療以細胞死亡為特徵的病變，特別係用於缺氧性-缺血性(H-I)腦損傷及類中風情況腦損傷：例如，全面性或局部性、暫時性或永久性、成人或新生兒H-I(帶有或不帶有缺氧/低血糖的局部缺血)、起源於腦部或心臟層面、帶有或不帶有再度灌流，或MCAO(中腦動脈梗阻)。

較佳地，本發明化合物係用於新生兒腦傷之治療，涵蓋早產兒的周產期動脈性中風(PAS)、周產期缺氧性-缺血性腦病變(HIE)、及室周白質軟化症(白質損傷)，更佳地係用於周產期缺氧性-缺血性腦病變之治療。

本發明化合物也可用於：-預防及/或治療慢性退化性疾病期間的細胞凋亡，例如神經退化病，包括阿茲海默氏病、杭丁頓氏病、帕金森氏病、多發性硬化症、肌萎縮性脊側索硬化症、脊延髓萎縮、普利昂蛋白(prion)疾病、失智症，或-預防及/或治療視網膜周細胞凋亡、視網膜神經元細胞凋亡青光眼、因局部缺血導致視網膜損傷、糖尿病性視網膜病變，或-預防及/或治療癲癇，或-預防及/或治療脊索損傷期間的細胞凋亡，或預防及/或治療因創傷性腦損傷所致之細胞凋亡、視網膜缺血，或-預防及/或治療於病灶性腦缺血病理狀況期間之細胞凋亡或-提供腦保護效果，或-預防及/或治療與自體免疫病及移植排斥相關聯的由細胞毒性T細胞及天然殺手細胞所媒介的細胞凋亡，或-預防及/或治療心細胞之細胞死亡，包括心臟衰竭、心肌病、心臟之病毒性感染或細菌性感染、心肌缺血、心肌梗塞、及心肌缺血、冠狀動脈繞道移植體，或 -預防及/或治療粒線體藥物毒性，例如因化學治療或HIV治療所致，或-預防及/或治療病毒性感染或細菌性成染期間之細胞死亡，或-預防及/或治療發炎或發炎性疾病、發炎性腸病；敗血症及敗血性休克，或-防止從濾泡至卵母細胞階段、從卵母細胞至成熟卵階段、及精子(例如冷凍方法及移植卵巢組織方法、人工受孕)的細胞死亡，或-保持女性及男性於化學治療後的生育力，或-保持雌性及雄性動物的生育力，或預防及/或治療黃斑部變性及青光眼，或-預防及/或治療急性肝炎、慢性活動性肝炎、B型肝炎、及C型肝炎，或-預防及/或治療落髮，而該落髮係由於雄性禿、放射線、化學治療或情緒壓力所致，或-治療或改善皮膚損傷(因暴露於高劑量輻射、熱、燒燙傷、化學物質、陽光、及自體免疫病所致)，或-預防骨髓發育不良症候群(MDS)中骨髓細胞的細胞死亡，或-預防及/或治療胰炎，或-預防及/或治療呼吸症候群，或-預防及/或治療骨關節炎、類風濕性關節炎、乾癬、腎小球腎炎、動脈粥狀硬化症、及移植體對宿主病，或-預防及/或治療與細胞凋亡相關聯的疾病狀態。

本發明係進一步藉下列實施例舉例說明。

[實施例] [實例1-試管內活性]

2-喹啉基羰基-(S)-纈胺醯基-(S)-天冬醯基(甲基酯)-(S)-纈胺醯基-(S)-丙胺醯基-(R,S)-天冬醯基(甲基酯)2,3,5,6-四氟苯基酯(TRP 701)比較其它化合物之試管內半胱天冬酶-2抑制活性係依據如下方案評估。

人類重組半胱天冬酶-2(25-50U；BIOMOL，美國賓州普利茅斯)係在最終100微升終檢定分析緩衝液(50 mM HEPES、pH 7.4、100 mM NaCl、0.1% CHAPS、10 mM DTT、1 mM EDTA、10%甘油)內與抑制劑(0.001-2 μM)預先培養30分鐘，及然後混合200 μM螢光生成性半胱天冬酶酶基質(BIOMOL)Ac-VDVAD-AMC。相對應於抑制50%半胱天冬酶活性之濃度的IC₅₀值係使用穩態螢光辦法從劑量-反應S形曲線決定。藉人類重組半胱天冬酶-2裂解以AMC為基礎之酶基質的情況係於37℃經2小時後，在螢光微孔板讀取器上，當以405奈米激光時藉監視於510奈米之發光測量。

用於比較性目的之化合物為：TRP 601(喹啉-2-羰基-(S)-Val-(S)-Asp(OMe)-(S)-Val-(S)-Ala-(R,S)-Asp(OMe)-CH₂OC₆H₃(2,6-F₂))係標示以代碼 MZ77027；rac-TRP 601亦即外消旋TRP 601係標示以代碼BS 03140；M3為化合物2-喹啉基羰基-S-纈胺酸，此乃結構上與TRP 601相關的無活性化合物；及TRP 600(喹啉-2-羰基-(S)-Val-(S)-Asp(OMe)-(S)-Val-(S)-Ala-(R,S)-Ala((R,S)-CH₂OC₆H₃(2,6-F₂))，另一種結構上與TRP 601相關的無活性化合物。

劑量-反應S形曲線係報告於附圖。曲線為三個獨立回合的平均。

TRP 701顯然為選擇性半胱天冬酶-2抑制劑。也顯示可抑制半胱天冬酶-2活性，具有類似於TRP 601的IC₅₀，亦即約為60-90 nM。

[實施例2-當發生病理狀況時於試管內對半胱天冬酶-2動力學及腦組織保留的影響]

半胱天冬酶-2的活化動力學及基於組織學參數之功效係透過方便的動物模型評估，亦即半胱天冬酶-2乃早期活化。此種模型允許比較2-喹啉基羰基-(S)-纈胺醯基-(S)-天冬醯基(甲基酯)-(S)-纈胺醯基-(S)-丙胺醯基-(R,S)-天冬醯基(甲基酯)2,3,4,5,6-五氟苯基酯(TRP 701)與TRP 601之半胱天冬酶-2抑制強度及保護效果。

此種新生兒中風模型(腦缺血帶有再度灌流)導致同側半影(penumbra)之發展，在48小時造成腦皮質損傷(梗塞)。本實驗模型具有如同臨床症狀所見的實際再度灌流步驟且就腦部成熟及血腦障壁而言係與人類新生兒有關。損傷樣式係極為類似足月嬰兒生產時所見或生產時受傷後出現在隨後數日/數月的情況。

該實驗模型係在7日齡幼大鼠(威斯達(Wistar)種系)執行。在兩性P7威斯達大鼠誘發單側暫時性病灶缺血，如先前描述(Renolleau S et al Stroke.1998 Jul；29(7)：1454-60)。7日齡幼大鼠(Janvier,Le Genest-St-Isle法國)係以水合三氯乙醛(腹內注射，350毫克/千克)或氣體麻醉劑而麻醉。簡言之，左中腦動脈係在比腦靜脈的較低高度凝結，及然後夾上夾子來梗阻左總頸動脈。50分鐘後，移開夾子，頸部血流的回復係藉顯微鏡檢術加以證實。於手術過程中，體溫係維持於37-38℃。當再度灌流時(相當於缺血發作後一小時)，測試項目係依據贊助商界定的投藥途徑投予。要緊地，載媒體及測試項目劑量必須在同窩鼠內隨機分配，考慮與減少同窩鼠間之反應差異。然後將幼鼠移至孵育器(37℃)直至復原，接著送返其母鼠處。

幼大鼠係在再度灌流至再度灌流後48小時殺死，取出腦部。再度灌流後逐漸地出現梗塞病變(蒼白區段)，反映出同側腦半球的腦損傷過程，而在有效藥物治療之情況下此種現象應該減少。

為了確立半胱天冬酶-2活性及決定中風後半胱天冬酶-2 活性程度是否受TRP 701相較於TRP 701治療的修改，進行腦部的酶催化檢定分析。要緊地，活體內腦部的半胱天冬酶-2抑制作用許可與腦組織保護作用產生交互關係。進行時，半胱天冬酶-2活性須在只相對應於受傷腦部的缺血半影(penumbra)測量。為了方便測量活性間之任何差異，恰在斬首後移出幼大鼠腦部(缺血後24小時)。對側腦半球(CL)及同側腦半球(IL，含有梗塞)經快速冷凍及維持於-80℃。解凍後，同側腦半球迅速作顯微切片，以便排它地取得半影區，該半影區具有依據再度灌流後時間或多或少明確鮮明的白色。在對側腦半球的對偶區也取相對應部分來測量半胱天冬酶特有活性之臨界值(半胱天冬酶-2，C2；半胱天冬酶-3，C3；半胱天冬酶-9，C9)。然後各個組織快速在冰中處理。樣本(1至2立方毫米)置於玻璃試管內，試管內含有800微升緩衝液B(HEPES 10mM pH 7.4、KCl 42mM、MgCl₂ 5mM、DTT 1mM、CHAPS 0.5%、EDTA 0.1mM)臨時補充以蛋白酶抑制劑：PMSF 1 mM、亮抑酶肽(leupeptin)1微克/毫升、抑肽素(pepstatin)A 1微克/毫升、細胞遲緩素(cytochalasin)B 1 μM、木瓜凝乳酶(chymopapain)10微克/毫升、抗痛素(antipain)1微克/毫升。試管置於冰浴內，以玻璃手拉坯進行手動軋碎。軋碎後的組織在解凍前至少於-80℃維持24小時及去除碎屑(10分鐘，4℃，2000g)。100微克上清液係於緩衝液A(特異性半胱天冬酶活性緩衝液)內稀釋，及於特定市售半胱天冬酶酶基質(50 μM)：用於半胱天冬酶-2(C2)、半胱天冬酶-3(C3)、及半胱天冬酶-9(C9)存在下於37℃培養2-3小時。半胱天冬酶活性係藉光譜螢光測量法監測(λex=380奈米；λem=465奈米)。

為了確立TRP 701的保護效果，幼大鼠係在再度灌流後48小時殺死，取出腦部。然後腦部在4% PFA內固定2日。在低溫恆溫器上切下50微米冠狀腦切片，收集在經明膠塗覆的切片上。從前紋狀體至後海馬迴(Bregma +3毫米至-6.5毫米)可選擇18個切片，以相等間隔距離0.5毫米切片。病變區係在經甲苯酚紫染色的切片上使用影像分析器測量，個別冠狀切片間距係用來計算在同側腦半球的梗塞體積及%梗塞體積(基於卡瓦萊利原理(Cavalieri principle))。

圖1為TRP 701相較於其它化合物之試管內活性。

Claims

一種通式(I)之具有半胱天冬酶-2抑制劑活性之化合物其中：n為0或1；A表示N、N(H)、O、S、或N-O，亦即N-氧化物；相鄰於A基團之_…當A為O或S時可以是單鍵，或當A為N(H)或N時可以是單鍵或雙鍵；X彼此為相同或相異，且分別係選自鹵原子；X₁表示H或鹵原子；及R₁彼此為相同或相異，且分別係選自H及線性或分支(C₁-C₄)烷基；及其醫藥上可接受之鹽及/或溶劑合物。
如申請專利範圍第1項之化合物，其中，A為N及_…為雙鍵。
如申請專利範圍第2項之化合物，其係呈喹啉N-氧化物形式。
如申請專利範圍第1或2項之化合物，其係具有通式(II)，其中R₁、X、及X₁係如申請專利範圍第1項中所定義。
如申請專利範圍第1至4項中任一項之化合物，其中，X表示氟原子。
如申請專利範圍第5項之化合物，其中，X₁為H。
如申請專利範圍第1至6項中任一項之化合物，其中，R₁為H。
如申請專利範圍第1至6項中任一項之化合物，其中，R₁為甲基或乙基。
如申請專利範圍第8項之化合物，其係為5-(2,3,5,6-四氟苯氧基)-3(R,S)-{2(S)-[2(S)-(3-甲氧基羰基-2(S)-{3-甲基-2(S)-[(喹啉-2-羰基)-胺基]-丁醯基胺基}-丙醯基胺基)-3-甲基-丁醯基胺基]-丙醯基胺基}-4-側氧基-戊酸甲酯。
一種醫藥組成物，其係包含申請專利範圍第1至9項中任一項定義之通式(I)化合物作為活性成分，及選擇性地一或多個醫藥上可接受之賦形劑。
如申請專利範圍第10項之醫藥組成物，其中，該活性成分之劑量為0.01毫克至5毫克/千克體重。
如申請專利範圍第1至9項中任一項定義之通式(I)化合物，其係用作為藥物。
如申請專利範圍第1至9項中任一項定義之通式(I)化合物，其係用於涉及半胱天冬酶-2活性之疾病的預防或治療。
如申請專利範圍第13項之化合物，其中，該疾病係源自缺氧-缺血性(H-I)腦部損傷。
如申請專利範圍第13或14項之化合物，其中，該疾病係為新生兒腦部損傷。
如申請專利範圍第15項之化合物，其中，該疾病係選自於由新生兒的周產期動脈中風(PAS)、周產期缺氧-缺血性腦病變(HIE)、及腦室周圍白質軟化症所組成之組群。