TW201240607A - Composition comprising partially and/or extensively hydrolysed proteins and oligosaccharides, for use in the prevention and/or treatment of skin conditions and skin diseases - Google Patents

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201240607 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於預防及/或治療皮膚病況（例如，促進皮膚 健康）及皮膚疾病（尤其異位性皮膚炎）之組合物。 . 【先前技術】 . 異位性皮膚炎係慢性發癢性皮膚病況，其在兒童中常見 但可在任何年齡發生。其亦稱為濕疹或異位性濕療。在年 幼兒童年齡組中食物過敏與異位性皮膚炎密切相關，且經 常懷疑患有異位性皮膚炎之兒童係食物過敏。 異位性皮膚炎通常發生在具有異位傾向之人中。此意味 著’該等個體可能出現以下三種緊密關聯之病況中之任一 或所有病況：異位性皮膚炎、氣喘及栝草熱（過敏性鼻 炎）。 異位性皮膚炎之現象如以下所述而發生》皮殄中之敏感 性皮膚部位因應某些誘發物而發紅。該等誘發物因人而 異。在嬰兒及年幼兒童情形中，應當心之常見誘發物之清 單包括牛乳及嬰兒配方之其他可能成份（例如，小麥或大 豆）。異位性皮膚炎可變成惡性循環。某物刺激兒童皮 膚’使其發紅並發炎。因其發癢，兒童會抓撓該處，從而 加重皮膚發炎。皮膚之外保護層喪失，且受影響區甚至對 刺激物變得更敏感並容易變乾。嬰兒繼續暴露於最初誘發 該等發作之事物。皮疹進一步發展且循環自身持續進行。 異位性皮膚炎無已知的單一原因。其可能反映一種以上 病況。關於潛在機制有許多理論。當前研究正在調查聚角 160459.doc 201240607 蛋白微絲蛋白（filaggrin)基因突變、皮膚細胞（角化細胞）之 缺陷、免疫系統、皮膚表面微生物（細菌、病毒及酵母菌） 及許多其他因素之作用。 所有皮膚病況及皮膚疾病皆可影響一般人群或具有過敏 風險之人群或過敏性（因此患病）人群。 該等皮膚病況及皮膚疾病、且具體而言異位性皮膚炎對 嬰兒、幼兒或兒童之影響尤其重大，此乃因其具有經歷強 烈生長及增殖階段之敏感性皮膚，從而致使其甚至更易受 皮膚疾病影響。家族中無過敏史且變得過敏之嬰兒群體正 在增加。 低致敏性食品係一類不太可能引起過敏反應之食物。已 研發出尤其用於嬰兒配方之低致敏性食品，此乃因嬰兒及 兒童在其生命之最初幾個月/年中出現過敏之可能性正逐 漸增大。 在嬰兒營養方面，人類母乳代表無爭議之金標準（g〇id standard)。在目標定為具有過敏風險之嬰兒時，充當人類 母乳之替代品或補充品之嬰兒配方應滿足嬰兒之營養要 求，具有可接受之味道且具有低致敏性及致耐受性（即， 能夠誘導口㈣受性）。對牛乳之口㈣受性之誘導已聞 述於咖2簡中。業内已知，對牛乳及含有牛乳蛋白質 之嬰兒配方過敏係由於以下事實：牛乳之蛋白質與母乳之 蛋白質不同且可構成人類之過敏原。公認之主要牛乳過敏 原係礼白蛋白(aLA)、卜乳球蛋白(bLG)及牛血清 (BSA)。牛乳清蛋白質及/或赂蛋白通常用作嬰兒配方中之 160459.doc 201240607 ‘蛋白質來源。為降低致敏性，藉由酶來水解牛乳蛋白 質，且從而還原為肽。當前旨在預防過敏之由該等牛乳蛋 白質水解產物組成之低致敏性配方亦包含其他營養素，例 如動物油、植物油、澱粉、麥芽糊精、乳糖及蔗醣。亦可 將該等蛋白質水解產物納入成人乳飲料或食物補充品中。 低致敏性嬰兒配方之缺點在於其成本遠高於常規牛乳配方 之成本。 然而’業内仍需要低致敏性嬰兒配方來預防及/或治療 嬰兒及甚至年幼兒童可能出現之皮膚疾病（尤其異位性皮 膚炎）。 人乳寡醣（HMO)共同係人乳中之第三大固體組份，位於 乳糖及脂肪之後。HMO通常由還原端之乳糖及非還原端之 碳水化合物核心（通常含有岩藻醣或唾液酸）組成。已分離 且表徵大約100種乳寡醣，然而，該等寡醣僅佔其餘待表 徵寡醣總數之極小部分。 在過去，出於不同目的使用HMO成份來研發嬰兒配方， 例如岩藻醣基化寡醣、乳-N-四醣、乳-N-新四醣或唾液酸 基化寡醣。 來自 Abbott Laboratories之EP 0 975 235 B1 闡述包含一 或多種人乳寡醣之合成營養組合物，其中組合物中之Hm〇 選自八種HM0(3-岩藻醣基乳糖、乳-N-岩藻五醣ΠΙ、乳_ Ν-岩藻五醣II、二岩藻醣基乳糖、2，-岩藻醣基乳糖、乳_ Ν -石藻五酶1'乳-Ν-新四醣及乳-Ν·岩藻五酶V)之群，其 中該組合物意欲用於以下情形：正常健康嬰兒、兒童、成 16C459.doc 201240607 人或具有特殊需求之個體，例如彼等伴隨某些病理病況 者。此歐洲專利陳述，一般而言，寡醣保護嬰兒免於呼吸 道、胃腸道及泌尿-生殖道之病毒及細菌感染。未提及關 於異位性皮膚炎問題及更一般而言預防及/或治療皮膚疾 病之問題》 自前述内容可看出，業内需要有效營養組合物以尤其在 嬰兒及年幼兒童中預防繼發性異位性皮膚炎或促進皮膚健 康，且其可便利並安全地投與。 業内需要藉由與虛弱個體（例如嬰兒或幼兒）相容且並非 基於藥物之干預來改善皮膚病況或皮膚疾病（例如異位性 皮膚炎）。 業内需要藉由與虛弱個體（例如嬰兒或幼兒）相容且並非 基於藥物之干預來改善皮膚病況或皮膚疾病（例如異位性 皮膚炎）。 業内需要降低該等皮膚病況及皮膚疾病之頻率、發生 率、嚴重性及/或持續時間之長期效應。此外，業内需要 「在以後之生活中」’尤其係在干預後數年變得可量測之 效應。 業内需要目標定為具有或不具有過敏風險之嬰兒、幼兒 及兒童之食物干預’其尤其誘導皮膚上之過敏表現之降 低。 業内需要該誘導皮膚健康之維持或改善之干預。 【發明内容】 本發明者已驚奇地發現，投與特定人類寡醣與特定水解 1604S9.doc 201240607 蛋白質之混合物尤其有效地用於預防及/或治療皮膚病況 及皮膚疾病’且具體而言用於預防及/或治療異位性皮膚 炎及用於促進皮膚健康。 因此’本發明提供用於預防及/或治療皮膚病況及皮膚 疾病之組合物’該營養組合物包含至少一種N_乙醯基乳糖 胺、至少一種唾液酸基化寡醣及至少一種岩藻醣基化寡醣 以及包含部分及/或廣泛水解蛋白質之水解產物。 組合物較佳係合成營養組合物。組合物作為合成營養組 合物包含三種不同類型之用途。在第一種情形中，個體且 尤其嬰兒係健康的’且由於家族中無過敏史而不具有任何 過敏風險。在第二種情形中，個體且尤其嬰兒係健康的， 但由於家族中有過敏史而具有過敏風險。在第三種情形 中，個體且尤其嬰兒具有過敏性，且因此患病。第二種及 第三種情形係本發明之較佳目標，第三種情形係甚至更佳 之目標。 【實施方式】 本文中所用之以下術語具有以下含義。 術語「嬰兒」意指年齡在12個月以内之兒童。 術語「年幼兒童」意指年齡介於1歲與3歲之間之兒童。 術語「嬰兒配方」意指意欲用於在生命之最初4個月至6 個月期間之嬰兒之特定營養用途且本身滿足此類人之營養 要求之食品（1991年5月14曰關於嬰兒配方及較大嬰兒配方 (follow-on f0rmulae)之歐洲委員會指令（Eur〇pean

Commission Directive) 91/321/EEC 第 1.2條）。 16G459.doc 201240607 術語「較大嬰兒配方」意指意欲用於年齡超過4個月之 嬰兒之特定營養用途且構成此類人逐蕲多樣化之飲食中之 主要液體要素之食品。 術°。初生嬰兒配方（starter infant f〇rmula)」意指意欲 用於在生命之最初4個月期間之嬰兒之特定營養用途之食 品。 術香「幼兒食物」意指意欲用於在生命第1年期間之嬰 兒之特定營養用途之食品。 術語「嬰兒榖類組合物」意指意欲用於在生命第1年期 間之嬰兒之特定營養用途之食品。 術語「成長乳」意指適應年幼兒童之特定營養需求之基 於乳之飲品。 術sf「離乳期」意指藉由嬰兒飲食中之其他食物替代母 乳之階段。 術香「皮膚疾病」意指異位性皮膚炎及其他相關皮膚問 題。濕療係異位性皮膚炎。 術S吾「預防及/或治療皮膚疾病」意指預防皮膚疾病 (即，異位性皮膚炎及其他相關皮膚問題、具體而言異位 性皮膚炎）及降低其頻率及/或發生率及/或嚴重性及/或持 續時間。發生率係指任何皮膚疾病之數量。頻率係指同一 皮膚疾病之數量。此預防涵蓋降低該等皮膚疾病在以後之 生活中之頻率及/或嚴重性。術語「在以後之生活中」涵 蓋干預終止後之效應。「在以後之生活中」之效應較佳可 係該干預終止後2週至4週、2個月至丨2個月或2年至12年 160459.doc 201240607 (例如，2年、5年、10年）。 術語「皮膚病況」意指刺激、阻塞皮膚或使皮膚發炎之 病況。皮膚病況可引起皮膚疾病之症狀，例如發紅、腫 脹、發熱及發癢。 術語「預防及/或治療皮膚病況」意指促進皮膚健康及/ 或預防皮膚脫水及/或增強皮膚水合及/或降低皮膚皮瘆、 粗糙及/或乾燥。此預防進一步涵蓋確立顯性或隱性表現 组’該表現型伴隨該等皮膚病況在以後之生活中之頻率、 發生率、嚴重性及/或持續時間之降低。 術語「增強對過敏原之口服耐受性」意指當口服時降低 對過敏原之敏感性。 術語「營養組合物」意指給予個體營養之組合物。此營 養組合物通常係口服或靜脈内服用，且其通常包括脂質或 脂肪來源及蛋白質來源。 術5吾「合成混合物」意指藉由化學及/或生物方式獲得 之混合物’其可在化學上與哺乳動物乳中天然存在之混合 物相同。八要至少-種組合物組份係藉由化學及/或生物 (例如’酶）方式獲得’即可稱該組合物係合成組合物。 術°〇 &致敏性營養組合物」意指不太可能引起過敏反 應之營養組合物。 # 唾液酸基化寡意、指具有唾液酸殘基之寡醣。 術°° 4膽基化寡糖」意指具有岩藻酿殘基之寡酷。 術語「益菌生，音扣 」恩知不可消化性碳水化合物，其藉由選 擇性刺激人類社胳士 ^ °腸中之健康細菌（例如雙歧桿菌 160459.doc 201240607 (bifidobacteria))之生長及/或活性來有益地影響宿主 {Gibson GR ' Roberfroid MB.Dietary modulation of the human colonic microbiota: introducing the concept of prebiotics. J Nutr. 1995; 125:1401 -12)。 術語「益生菌」意指對宿主之健康或身體狀況具有有益 效應之微生物細胞製劑或微生物細胞組份（Salminen S、 Ouwehand A. 、 Benno Y.等人，r Probiotics: how should they be defined j Trends Food Sci. Technol. 1999:10 107-10)。 「過敏」係已由内科醫師檢測到並可以不定時方式或以 更持久方式治療之過敏。其亦可定性為「已宣告過敏 (declared allergy)」° 除非另有說明，否則所有百分比均以重量計。 本發明組合物通常為低致敏性的。 該組合物含有至少一種N-乙醢基-乳糖胺。換言之，其 含有N-乙醯基-乳糖胺及/或含有N-乙醯基-乳糖胺之寡醣。 含有N-乙醯基-乳糖胺之適宜寡醣包括乳-N-四醣（LNT)及 乳-N-新四醣（LNnT)。 因此，根據本發明，N-乙醯基-乳糖胺較佳選自包含乳-N-四醣（LNT)及乳-N-新四醣（LNnT)之群。 如（例如）在美國專利第5,288,637號及WO 96/10086中所 闡述，LNT及LNnT可藉由使用醣基轉移酶將醣類單元自供 體部分酶促轉移至受體部分來化學合成。另一選擇為，如 在 Wrodnigg，T.M.; Stutz，A.E. (1999) Angew. Chem. Int· 160459.doc •10· 201240607

Ed. 38:827-828中所闡述’ LNT及LNnT可藉由將游離或結 合至寡醣（例如’乳酮醣）之酮-己醣（例如，果醣）化學轉化 為N-乙醯基己醣胺或含N-乙酿基己醣胺之寡.醣來製備。然 後可將以此方式產生之N-乙酿基-乳糖胺轉移至作為受體 部分之乳糖。 較佳地’本發明組合物以乾重計含有H §至3 g N_乙醯 基-乳糖胺乳糖/100 g組合物。 根據本發明，唾液酸基化寡醣選自包含3，_唾液酸基乳糖 及6'-唾液酸基乳糖之群。較佳地，3，_唾液酸基乳糖及6，_ 唾液酸基乳糖二者均存在於該組合物中。在此實施例中， 3·-唾液酸基乳糖與6'-唾液酸基乳糖之間之比率較佳在介於 5:1與1:2之間之範圍内。 3’-及6'-形式之唾液酸基乳糖可藉由層析或過濾技術自天 然來源（例如動物乳）分離。另一選擇為，其可藉由生物技 術方法使用特定唾液酸基轉移酶或唾液酸酶（神經胺酸酶） 藉由基於酶之發酵技術（重組或天然酶）、藉由化學合成或 藉由微生物發酵技術來產生。在後一情形中，微生物可表 現其天然酶及受質或可經改造以產生各別受質及酶。可使 用單一微生物培養物或混合培養物。可由受體受質自聚合 度（DP)=1往前之任一聚合度為起點開始形成唾液酸基寡 酶。另一選擇為，唾液酸基乳糖可藉由化學合成自乳糖及 游離N·-乙醯基神經胺酸（唾液酸）來產生。唾液酸基乳糖亦 可購自（例如）Ky〇wa Hakko Kogyo(日本）。 較佳地’本發明組合物以乾重計含有〇 〇5 §至2 g、更佳 160459.doc 11 201240607 o.l g至2 g之唾液酸基化寡醣/100 g組合物。 岩藻醣基化寡醣可選自包含以下之群：2，_岩藻醣基乳 糖、3-岩藻醣基乳糖、二岩藻醣基乳糖 '乳_N_岩藻五醣 (換言之’乳-N·岩藻五醣I、乳岩藻五醣h、乳_N_岩藤 五醣III及乳-N-岩藻五醣V)、乳-N-二岩藻六醣j、岩藻醣 基乳-N-六醣、二岩藻醣基乳-N-六醣I及二岩藻醣基乳 新六醣II。尤佳岩藻醣基化寡醣係2，_岩藻醣基乳糖（2 FL) 〇 岩藻醣基化募醣可藉由層析或過濾技術自天然來源（例 如動物乳）分離。另一選擇為，其可藉由生物技術方法使 用特定岩藻醣基轉移酶及/或岩藻醣苷酶經由使用基於酶 之發酵技術（重組或天然酶）或微生物發酵技術來產生。在 後一情形中’微生物可表現其天然酶及受質或可經改造以 產生各別受質及酶。可使用單一微生物培養物及/或混合 培養物。可由受體受質自聚合度（DP)=1往前之任一聚合度 為起點開始形成岩藻醣基化寡醣。另一選擇為，岩藻酷基 化寡醣可藉由化學合成自乳糖及游離岩藻醣產生。岩藻醣 基化募醣亦可購自（例如）Ky〇wa Hakko Kogyo(日本）。 較佳地’本發明組合物以乾重計含有〇 · 1 g至3 g岩蕩醣 基化寡醣/100 g組合物。 在較佳實施例中，本發明組合物包含總量為〇.〇5 g至3 g 之N-乙醯基化乳糖胺、唾液酸基化寡醣及岩藻醣基化寡醣/ 100 g組合物。 尤其對於認為具有牛乳過敏風險之嬰兒，業内高度期望 160459.doc 12- 201240607 供應部分及/或廣泛水解之蛋 製造部分及/或廣泛水解蛋白 施且為業内所熟知。 白質。在本發明水解產物内 質之水解製程可根據需要實 本發明水解產物通㈣部分水解蛋自^敍水解蛋白 質構成。但本發明水解產物亦可包含部分水解蛋白質及廣 泛水解蛋白質之混合物。 水解蛋白質可視水解反應進行之程度描述為「部分水 解」或「廣泛水解」。當前’根據WA〇(世界過敏組織， World Allergy 〇rganizati〇n)關於牛乳蛋白質過敏⑷财)之 準則，廣泛水解產物尚無統一之法律/臨床定義，但 -致認為，已證明水解配方係患有CMA之嬰兒之有用且廣 泛使用之蛋白質來源。在本發明中’部分水解蛋白質係 <)0%至70%之蛋白質/肽群具有小於1〇〇〇道耳頓⑽叫之 分子量者，而廣泛水解蛋白質係至少95%之蛋白質/肽群且 有小於議道耳頓之分子量者。當前，工業中使用該等定 義。部分水解蛋白質通常視為低致敏性（HA)，而廣泛水解 •蛋白質通常視為非致敏性。 本發明水解產物包含較佳介於丨〇%與i 〇〇%之間且更佳 介於15%與95%之間之蛋白質/肽群具有小於1〇〇〇道耳頓之 分子量之水解蛋白質。 本發明水解產物之水解程度可以雙醣/TN %來描述。廣 泛使用相對於總氮之非蛋白質氮作為藉由酶促水解產生之 可溶肽之量度。NPN/TN%意指（非蛋白質氮除以總氮）χ 100。ΝΡΝ/ΤΝ% 可如在 AcUer-Nissen J-，1979，J. Agric J3 16Q459.doc 201240607 F0od Chem.，27 (6)，1256-1262中所詳述來量測。一般而 言，廣泛水解蛋白質描述為具有大於95%之NPN/TN%，而 部分水解蛋白質描述為具有在75%至85%之範圍内之 NPN/TN% 〇在較佳實施例中，本發明水解蛋白質具有在 70%至90%，較佳75%至85%之範圍内之NPN/TN %。後一 水解蛋白質係「部分」水解蛋白質。該等水解蛋白質之特 徵亦可在於，其60%至70%之蛋白質/肽群具有小於1000道 耳頓之分子量。 根據本發明，水解蛋白質之水解程度在介於50與100之 間，較佳介於65與99之間之NPN/TN %範圍内。 在期望「廣泛」水解蛋白質之另一較佳實施例中，本發 明水解產物具有在大於95%之範圍内之NPN/TN % »此水 解產物之特徵亦可在於，其至少95%之蛋白質/肽群具有小 於1000道耳頓之分子。 水解程度亦可使用與游離離胺酸反應之試劑（例如三硝 基苯磺酸（TNBS))來量測。本發明水解蛋白質之TNBS反應 性氮％胺基（離胺酸）N /TN通常在8%至15%，較佳9%至14% 之範圍内。 本發明組合物可進一步包含至少一種益生菌菌株，該益_ 匕亀蛰铢敕ik银雙歧桿菌及/A乳酸桿菌（Lactobacilli)。 適宜益生菌菌株包括以商標LGG得自Valio Oy(芬蘭）之 鼠李醋乳酸桿菌ATCC 53 103、 鼠李醣乳酸桿菌CGMCC 1.3724、類乾酪乳酸桿菌 CNCM 1-2116、由 BioGaia A.B 以 1604S9.doc -14- 201240607 商標Reuteri出售之路氏乳酸桿菌（Lacio6acz7/w·? rewierz·)、 約氏乳酸桿菌（Z^cio6acz7/w·? /oAwjom·/) CNCM 1-1225、由 BLIS Technologies有限公司（紐西蘭）以名稱KI2出售之唾液 鏈球菌（iSVrepiococrcrw·? ya/ivaWw·?) DSM 13084，尤其由 Christian Hansen公司（丹麥）以商標Bb 12出售之乳酸雙歧 桿菌（方/aciz’j) CNCM 1_3446、由 Morinaga Milk Industry有限公司（曰本）以商標BB536出售之長雙歧桿 菌/owgwm) ATCC BAA-999、由 Danisco以 商標 Bb-03 出售之短雙歧桿菌6reve)、由 Morinaga以商標M-16V出售之短雙歧桿菌、由Procter & Gamble公司以商標Bifantis出售之嬰兒雙歧桿菌 及由 Institut Rosell (Lallemand) 以商標R0070出售之短雙歧桿菌。 較佳地，本發明組合物以乾重計含有10e3 cfu至10el2 cfu，更佳10e7cfu至10el2cfu之益生菌菌株/g組合物。 本發明組合物可進一步包含至少一種益菌生，其量通常 介於0.3重量％與10重量％組合物之間。 益菌生通常不在胃或小腸中分解並吸收，且因此其在進 入結腸時保持完整，其在結腸中經有益細菌選擇性發酵， 在此意義上，其係不可消化的。益菌生之實例包括某些寡 醣，例如果寡醣（FOS)及半乳寡醣（GOS)。可使用益菌生之 組合，例如90% GOS與10%短鏈果寡醣（例如BENEO-Orafti 以商標Orafti®寡果醣（先前係Raftilose®)出售之產品中）或 10%菊醣（例如BENEO-Orafti以商標Orafti®菊醣（先前係 160459.doc -15- 201240607

Raftihne®)出售之產品中醣）之組合。益菌生之尤佳組合係 70%短鏈果寡醣及30%菊醣，其係由BENE〇-〇rafti以商標 「Prebio 1」出售之產品醣。 本發明組合物較佳係合成營養組合物。在此情形中，其 可係初生嬰兒配方、嬰兒配方、幼兒食物、嬰兒穀類組合 物、較大嬰兒配方或成長乳，且該組合物較佳係初生嬰兒 配方。 根據較佳實施例，本發明組合物用於患有過敏（尤其係 食物過敏）之嬰兒及年幼兒童。在一實施例中，嬰兒及年 幼兒里患有已宣告過敏病況或病狀或過敏狀態。在一實施 例中，本發明之組合物及用途尤其適於具有過敏風險、具 有家族過敏史或已經歷數次過敏（尤其係呼吸過敏或皮膚 過敏）發作之嬰兒及兒童。在一實施例中，本發明之組合 物及用途適合於具有過敏風險或已經歷過敏（尤其係呼吸 過敏或皮膚過敏）發作之青少年或成人。 本發明組合物可在離乳期之前及/或期間使用。 因此，本發明組合物較佳用於降低異位性皮膚炎之頻率 及/或發生率及/或嚴重性及/或持續時間及/或用於促進皮 膚健康。 在一實施方案中，本發明組合物用於促進皮膚健康及/ 或用於預防皮膚脫水及/或用於增強皮膚水合及/或用於降 低皮膚皮疹、粗糙及乾燥及/或用於增強對過敏原之口服 耐受性。 本發明組合物尤佳用於增強對過敏原之口服耐受性。 I60459.doc • 16- 201240607 本發明亦包括包含至少一種N_乙醯基乳糖胺、至少一種 唾液酸基化寡醣、至少一種岩藻醣基化募醣以及包含部分 及/或廣泛水解蛋白質之水解產物之組合物作為合成營養 劑之用途，其用於預防及/或治療皮膚病況及皮膚疾病（較 佳·異位性皮膚炎）及用於增強對過敏原之口服耐受性。 此用途涵蓋組合物係較佳以單位劑量形式提供之補充品 之情形。 本發明組合物可進一步包含其他營養化合物，該等其他 營養化合物與所主張寡醣及水解蛋白質協同作用以遞送對 皮膚（例如皮膚過敏或異位性皮膚炎）之所主張益處。該等 其他化合物可係（例如）低致敏性蛋白質（即，除水解或部分 水解蛋白質以外）、低乳糖成份、低乳糖醣類或水解醣 類。人們假定，可藉由以下事實確立成份之協同作用：各 成份一起幫助維持效應物之低生理含量始終低於皮膚效應 (列如異位性皮膚炎）開始顯示之閾值。 上文所述所有用途尤其意欲用於嬰兒及年幼兒童。 不希望受理論限制，本發明者認為，上文所述寡醣與部 分及/或廣泛水解蛋白質之組合在預防及/或治療皮膚病況 及皮膚疾病（尤其異位性皮膚炎）中之效力可能為乳酸菌受 到特定寡醣摻合物及特定水解產物之刺激所誘發之黏膜免 疫調節劑效應之協同作用組合的結果。本發明者認為大多 數具有最低發炎刺激性之黏膜相關微生物叢之確立係藉由 選擇性促進有益共生乳酸菌及同時調節諸如半乳糖凝集素 (例如’半乳糖凝集素]及半乳糖凝集素_3)等發炎調節劑 I60459.doc 17 201240607 來達成。此外，該組合物可調節内源性微生物叢之代謝， 從而導致產生有助於激活腸黏膜下面之免疫細胞之短鍵脂 肪酸。誘發黏膜免疫系統之後，激活之免疫細胞、免疫活 性化合物及/或免疫媒介物將循環至遠端位置（包括皮膚）， 其將在該等位置發揮免疫調節活性。總之，該等機制將有 助於平衡潛在皮膚發炎病況，從而改善相關臨床表現（例 如皮膚炎及濕疹）。另外，本發明者認為，該特別引發之 免疫性可轉為降低對外源性刺激物之皮膚敏感性及增強皮 膚障壁功能，從而降低與反應性皮膚相關之皮膚皮疹、粗 糙及乾燥。 寡醣及部分及/或廣泛水解蛋白質可在相同組合物中投 與或可依序投與。 若欲用於出生0至12個月大之年齡組，則組合物較佳係 以液體形式食用之營養組合物。其可係營養完整配方，例 如嬰兒配方、較大嬰兒配方或成長乳。對於年幼兒童組而 言，另一選擇為，組合物可係（例如）汁液飲料或其他冷凍 或常溫保存（shelf stable)飲品或湯，或幼兒食物或嬰兒穀 類組合物。 本發明組合物含有蛋白質來源，其較佳含量係低於2〇 g/100 kca卜甚至更佳為低於i 8 g/1〇〇 kca卜蛋白質通常 係完整蛋自質與水解蛋自質之混合物，該等水解蛋白質係 本發明水解產物之-部分。咸信蛋白f之類型對於本發明 报關鍵，且較佳係包含高於最低需要量的必需胺基酸（尤 «㈣以確保良好生長。另外’蛋白質之水解部分 160459.doc •18- 201240607 蛋白質之水解部分&水解乳清蛋 通常不含乳糖。較佳地， 白質組成。 可使用基於乳清、胳蛋白及其混合物之蛋白質來源以及 基於大五之蛋白質來源。就乳清蛋白質而言*白質來源 可基於酸乳清或甜乳清或其混合物。 本發明部分水解及/或廣泛水解蛋白質之供應尤其有利 於被認為具有牛乳過敏風險之嬰兒。由於需要水解蛋白 質’故可根據需要並如業内所熟知來實施水解製程。例 如，乳清蛋白質水解產物可藉由在一或多個步驟中酶促水 解乳清部分來製備。若用作起始材料之乳清部分實質上不 含乳糖時’則發現在水解製程期間之蛋白質顯然較不會受 到離胺酸封阻。此使離胺酸封阻程度可自約15重量％之總 離胺酸降低至小於約1G重量％之離胺酸，例如約7重量％之 離胺酸，此顯著改善蛋白質來源之營養品質。 蛋白質來源較佳含有約h5重量％至約2 5重量％之精胺 酸’以呈游離鹼形式較佳。 蛋白質來源可根據需要包括其他游離胺基酸，例如游離 胺基酸L-酪胺酸及£·組胺酸。 本發明組合物通常含有碳水化合物來源。此在本發明營 養組。物係嬰兒g&方之情形中尤佳。在此情形中，儘管較 佳碳水化合物來源係乳糖，但仍可使用嬰兒配方中常用之 任一碳水化合物來源，例如乳糖、蔗醣、麥芽糊精、澱粉 及其混合物。 本發明組合物通常含有脂質來源。若本發明營養組合物 16C459.doc 201240607 係嬰兒配方，則此尤其適當。在此情形中，脂質來源可係 適用於嬰兒配方之任一脂質或脂肪。較佳脂肪來源包括標 櫊油酸、高油酸向曰葵油及高油酸紅花油。亦可添加必^ 脂肪酸亞麻油酸及α_次亞麻油酸，亦可添加少量含有大量 預形成花生四稀酸及二十二碳六稀酸之油，例如魚油或微 生物油。脂肪來源之η_6與η_3脂肪酸之比率較佳為約5」至 約15:1 ;例如約8:1至約1 〇: 1。 本發明之營養組合物亦較佳以營養顯著量含有認為在日 常飲食中所必需之所有維生素及礦物質。已確立對某些維 生素及礦物之最基本要求。本發明組合物中視情況存在之 礦物、維生素及其他營養素之實例包括維生素A、維生素 B1、維生素B2、維生素B6、維生素m2、維生素£、維生 素維生素C、維生素D、葉酸、肌醇、終驗酸、生物 素、泛酸、膽鹼、鈣、磷、碘、鐵、鎂、銅、鋅、錳、 钟納砸絡、翻、牛確酸及L肉鹼。礦物通常以 鹽形式添力σ _定礦物及其他維生素之存在及量將視既定 群體而變化。 若需要，則本發明組合物可含有乳化劑及穩定劑，例如 大旦卵磷酯、單-及二甘油脂之檸檬酸酯及諸如此類。 本發明組合物亦可含有可能具有有益效應之其他物質， 例如乳鐵蛋白、核苷酸、核苷及諸如此類。 現在藉助實例闡述本發明組合物。 配方可以任—適宜方式製備。例如，其可藉由以合適比 例將部分及/或廣泛水解蛋白質、碳水化合物來源及脂肪 160459.doc •20. 201240607 來源摻和在-起來製備1使用，則乳化劑可於此時納 入。維生素及礦物可於此時添加，但其通常在錢添加以 避免熱降解。可s摻和前將任何親脂，陡維生素、乳化劑及 諸如此類溶解於脂肪來源中。然後可混人水（較佳為經過 逆滲透之水）以形成液體混合物。水溫便利地在介於約 f;0°C與約80 C之間之範圍内以幫助成份之分散。可使用市 售液化劑來形成液體混合物。若欲使最後產物具有液體形 式，則將於此階段添加N_乙醯基_乳糖胺、唾液酸基化寡 醣及岩藻醣基化募醣。若欲使最後產物為粉末，則若需要 亦可在此階段添加該等寡醣。然後在（例如）兩個階段中將 液體混合物均質化。 然後，可藉由（例如）將液體混合物迅速加熱至介於約 8()°C與約150°C之間之範圍内之溫度並保持介於約5秒與約 :5分鐘之間之持續時間，來熱處理液體混合物以降低細菌 載量。此可藉助蒸汽注入、高壓爸或熱交換器（例如，板 式熱交換器）來實施。 然後，可藉由（例如）急驟冷卻將液體混合物冷卻至約 60°C與約85°C之間。然後，可在（例如）兩個階段中再次將 液體混合物均質化，在第一階段中介於約1〇 Mpa與約3〇 Mpa之間，且在第二階段中介於約2 Mpa與約1〇厘沖之 間。然後，可進一步冷卻均質化混合物以添加任何熱敏感 性組份，例如維生素及礦物質。宜在此時調整均質化混合 物之pH及固體含量。 將均質化混合物轉移至適宜乾燥裝置（例如，喷霧乾燥 I60459.doc •21· 201240607 器或冷凍乾燥器）中並轉化為粉末。粉末之水分含量應小 於約5重量％。N-乙醯基_乳糖胺、唾液酸基化寡醣及岩藻 醣基化寡醣可在此階段藉由與益生菌菌株（若使用）一起乾 燥混合後添加’或由其以晶體糖漿形式與益生菌菌株（若 使用）一起摻和並噴霧乾燥（或冷凍乾燥）後添加。 若液體組合物較佳，則可將均質化混合物滅菌然後無菌 填充至適宜容器中，或可首先將其填充至容器中且然後經 滅菌釜處理。 在另一實施例中，本發明組合物可係補充品，其以足以 在個體中達成期望效應之量包括N_乙酿基_乳糖胺、唾液 酸基化寡醣及岩藻醣基化寡醣以及部分及/或廣泛水解蛋 白質。此投與形式更適於較年長兒童及成人。 將根據欲投與補充品之方式來選擇欲包括於補充品中之 寡醣之量。例如，若欲一天兩次投與補充品，則每份補充 品可含有0.05 g至1.5 g之N·乙醞基-乳糖胺、0.05 g至1 §之 唾液酸基化募醣及0.05 g至1.5 g之岩藻醣基化寡醣。 補充品可呈（例如）錠劑、膠囊、軟錠或液體之形式。補 充品可進一步含有保護性水膠體（例如膠、蛋白質、改質 澱粉）、黏合劑、膜形成劑、囊封劑/材料、壁/殼材料、基 質化合物、包衣、乳化劑、表面活性劑、增溶劑（油、脂 肪、躐、卵罐脂等）、吸附劑 '載劑、填充劑' 共化合 物、分散劑' 潤濕劑、處理助劑（溶劑）、流動劑、遮味 劑、增重劑、膠凝劑（jellifying agent)及凝膠形成劑。補充 品亦可含有習用醫藥添加劑及佐劑、賦形劑及稀釋劑，包 160459.doc •22· 201240607 括（但不限於）水、任何來源之明膠、植物膠、磺酸木質 素、滑石、醣、澱粉、阿拉伯膠（gum arabic)、植物油、 聚伸烧基二醇、橋味劑、防腐劑、穩定劑、乳化劑、緩衝 劑、潤滑劑、著色劑、潤濕劑、填充劑及諸如此類。 另外，依照諸如USRDA等政府機構之推薦，補充品可含 有適於口服或非經腸投與之有機或無機載劑材料以及維生 素、痕量礦物元素及其他微量營養素。 本發明嬰兒配方之組合物之實例於下文給出。此組合物 僅以說明方式給出。另一實例基於市售NAN HA嬰兒配方 (低致敏性且具有水解蛋白質）（來自Nestl0，瑞士），以下文 所述量添加本發明特定寡醣。 營養素 每 100 kcal 每升 能量(kcal) 100 670 水解產物(g) 77%NTN/TN 10% TBNS反應性離胺酸 N/TN 1.83 12.3 脂肪(g) 5.3 35.7 亞麻油酸(g) 0.79 5.3 α-次亞麻油酸(mg) 101 675 乳糖(g) 11.2 74.7 益菌生(70% FOS、30°/。菊 糖)(g) 0.64 4.3 礦物(g) 0.37 2.5 Na (mg) 23 150 K(mg) 89 590 Cl (mg) 64 430 Ca (mg) 62 410 P(mg) 31 210 Mg (mg) 7 50 Mn(ng) 8 50 Se _ 2 13 維生素A (pg RE) 105 700 維生素D (pg) 1.5 10 維生素E(mgTE) 0.8 5.4 1604ii9.doc •23- 201240607 維生素ΚΙ (μ8) 8 54 維生素C (mg) 10 67 維生素B1 (mg) 0.07 0.47 維生素B2(mg) 0.15 1.0 於驗酸(mg) 1 6.7 維生素B6 (mg) 0.075 0.50 葉蔽㈣） 9 60 泛酸(mg) 0.45 3 維生素B12(pg) 0.3 2 生物素(Mg) 2.2 15 膽驗(mg) 10 67 Fe (mg) 1.2 8 I(^g) 15 100 Cu (mg) 0.06 0.4 Zn (mg) 0.75 5 3'唾液酸基乳糖(mg) 30 200 6'唾液酸基乳糖(mg) 6 40 LNnT (mg) 30 200 2FL (mg) 300 2000 實驗數據： 發現總結 下文概述之發現顯示，寡醣之特定摻合物促進諸如長雙 歧桿菌嬰兒亞種（Bifidobacterium longum subsp infantis)等 乳酸菌之代謝活性及生長。不希望受理論限制，此效應可 部分解釋以下觀測結果：發現若剖腹產出生之兒童出現異 位性過敏且尤其異位性濕疹直至2歲，則在其母親之早期 乳中該等特定寡醣摻合物之量相對較低。此表明，根據本 發明，提供具有安全量之特定寡醣摻合物以及水解蛋白質 (完全、廣泛或部分）之營養組合物可幫助重新確立嬰兒腸 道中細菌之天然平衡及/或由此在預防及/或治療皮膚病況 及皮膚疾病（較佳異位性皮膚）炎方面正面影響健康狀態。 研究模型1:長雙歧桿菌嬰兒亞種之刺激 方法= 160459.doc -24- 201240607 使長雙歧桿菌嬰兒亞種（ATCC15697)在API生長培養基 中厭氧生長，該API生長培養基補充有1% (w/v)葡萄糖或 1% (w/v) 2'岩藻醣基乳糖（2FL)或1% (w/v)乳-N-新四醣 (LNnT)或1% (w/v) 6'唾液酸基乳糖（6SL)或1% (w/v)之等量 2FL、LNnT及6SL之組合。稀釋每一過夜培養物，以在含 有0.1°/。葡萄糖作為碳源之DMEM(杜貝克氏改良伊氏培養 基，Dulbeccos modified Eagle Medium)中具有 0.1之起始 OD600。所用此培養基不含任何其他碳水化合物補充品或 具有額外之1% (w/v)葡萄糖或1% (w/v) 2'岩藻醣基乳糖 (2FL)或 1% (w/v)乳-N-新四醣（LNnT)或 1% (w/v) 6’唾液酸 基乳糖（6SL)或1% (w/v)之等量2FL、LNnT及6SL之組合。 由此在37°C厭氧條件下調整DMEM培養基之條件。 再培育一夜之後，藉由在600 nm下量測OD來監測細菌 之生長。然後使條件培養基離心且經由0.22微米過濾器過 濾上清液以移除細菌。藉由HPLC使用Hi-Plex Η管柱及UV 檢測器來定量條件培養基中之乙酸鹽。 結果： 驚奇地發現，由等份之岩藻醣基化寡醣（例如，2'FL)、 N-乙醯基化寡醣（例如，LNnT)及唾液酸基化寡醣（例如， 6SL)組成之寡醣摻合物顯著提高乳酸菌（例如，雙歧桿菌） 之代謝活性，如藉由乙酸鹽之形成可見（圖1)。 寡醣摻合物亦刺激該細菌之生長（圖2)。 圖1圖解說明實驗結果，其指示雙歧桿菌（長雙歧桿菌嬰 兒亞種）在不含額外碳水化合物或具有以下額外物質之 16C459.doc -25- 201240607 DMEM培養基中之代謝刺激：葡萄糖（Glc)或乳_N•新四癒 (LNnT)或2'岩蒗鳙基乳糖（2FL)或6’唾液酸基乳糖（6SL)或 LNnT、6SL及2FL之摻合物。（n = 6 ;顯示帶有sem之平均 值；指明ANOVA顯著性（p<0.01))。 注意.僅LNnT、6SL及2FL之摻合物顯著刺激乙酸鹽之產 生。 圖2圖解說明實驗結果’其顯示雙歧桿菌（長雙歧桿菌嬰 兒亞種）在不含額外碳水化合物或具有以下額外物質之培 養基中之活體外生長：葡萄糖（Glc)或乳-N-新四醣（LNnT) 或2'岩藻醣基乳糖（2FL)或6'唾液酸基乳糖（6SL)或LNnT、 6SL及2FL之摻合物。（n=4 ;顯示帶有SEM之平均值；藉由 小寫字母指明ANOVA顯著性（p<〇.〇l))。 研究模型2:母乳樣品之回顧性流行病學分析及直至2歲時 過敏疾病之發生 方法= 自約52個剖腹產出生之嬰兒母親對之隊列分析早期乳樣 品中存在之特定寡醣之量。為此，將脫脂乳樣品在水中稀 釋10倍至100倍，並藉由配備有CarboPac PA1管柱（Dionex) 及電化學檢測器之HPAEC (Dionex)來分析。利用可靠寡醣 標準品實施寡醣鑑別及量化。將嬰兒中過敏疾苈、 姜位從遜敏、ΓΟ異位從诸#之不存在或存在對由2FL、 LNnT及6SL組成（圖 3)或由 2FL、LNnT、LNT(乳-N-四醣）、 6SL及3SL(3'唾液酸基乳糖）組成（圖4)之寡醣摻合物之量作 圖。 160459.doc • 26· 201240607 圖3圖解說明實驗結果，其顯示在剖腹產出生之兒童中 直至2歲時⑷過敏疾病、（B)異位性過敏、（c)異位性濕療 不存在（否）及發生（是）。對在母乳中量測之特定募醣摻 口物之量作圖。此處，代表之募醣摻合物係2,岩藻醣基乳 糖（2FL)、乳_N_新四醣（LNnT)& 6，唾液酸基乳糖（6sl)之總 和。（指明統計顯著性） 圖4圖解說明實驗結果，其顯示在剖腹產出生之兒童中 直至2歲時（A)過敏疾病、（B)異位性過敏、（C)異位性濕疹 <不存在（否）及發生（是）。對在母乳中量測之特定募醣摻 合物之量作圖。此處，代表之寡醣摻合物係2,岩藻醣基乳 糖（2FL)、乳-N-新四醣（LNnT)、乳-N-四醣（LNT)、6·唾液 酸基乳糖（6SL)及3'唾液酸基乳糖（3SL)之總和。（指明統計 顯著性） 結果： 驚奇地發現’在兒童出現過敏疾病（圖3A、4A)時，早期 乳中特定寡醣掺合物之含量傾向於相對較低《對於異位性 疾病且尤其異位性濕疹’量測到若兒童直至2歲為止出現 該等過敏’則其母親之早期乳中寡膽#合物之含量顯著較 低0 160459.doc •27·

Claims (1)

1. 201240607 七、申請專利範圍： 1. 一種組合物，其包含至少一種N-乙醯基乳糖胺、至少一 種唾液酸基化募醣及至少一種岩藻醣基化募酶及包含部 分及/或廣泛水解蛋白質之水解產物，該組合物用於預防 • 及/或治療皮膚病況及皮膚疾病’較佳係異位性皮膚炎。 2. 如請求項1之組合物，其中該水解產物包含水解蛋白 質’該水解蛋白質具有較佳介於10%與100%之間，且更 桂介於1 5%與95%之間之分子量小於1000道耳頓（Dah〇n) 之蛋白質/肽群。 3 ·如蜎求項1及2中任一項之組合物，其中該等水解蛋白質 之水解程度在介於5〇與1〇〇之間’較佳介於65與99之間 之NPN/TN%之範圍内。 4. 如請求項1及2中任一項之組合物，其中該等水解蛋白質 之TNBS反應性氮％胺基（離胺酸）Ν/Τ1^8β/(^15%，較佳 9 %至14 °/〇之範圍内。 5. 如請求項1及2中任一項之組合物’其中該Ν_乙醯基·乳糖 胺選自包含乳四醣及乳_Ν_新四醣之群。 6’如响求項1及2中任一項之組合物，其中該唾液酸基化寡 ' 釀選自包含3’-唾液酸基乳糖及6，·唾液酸基乳糖之群，且 ， 該組合物較佳包含3，_唾液酸基乳糖及6,_唾液酸基乳糖二 者，3’-唾液酸基乳糖與6，_唾液酸基乳糖之間之比率較佳 在介於5:1與1:2之間之範圍内。 7.如印求項1及2中任一項之組合物，其中該岩藻醣基化寡 糖選自包含以下之群：2，_岩蕩酷基乳糖、3_岩藻釀基乳 160459.doc 201240607 糖、二岩藻醋基乳糖、乳-N-岩藻五醣（換言之，乳_N•岩 藻五醣I、乳-N-岩藻五醣Π、乳_N_岩藻五醣⑴及乳…·岩 藻五聽V)、乳-N-二岩藻六醣I、岩藻聽基乳_ν·六酿、二 岩藻醣基乳-Ν-六醣I及二岩蒸醣基乳·Ν_新六醣„，且該 岩藻醣基化寡醣較佳係2'-岩藻醣基乳糖（2_FL)。 8. 如s青求項1及2中任一項之組合物，其中該組合物進一步 包含至少一種益生菌菌株，該益生菌菌株較佳係雙歧桿 嵐（Bifidobacteria)反 / 故乳後桿菌（Lact〇bacim) 〇 9. 如請求項1及2中任一項之組合物，其中該組合物進一步 包含至少一種益菌生。 10. 如請求項1及2中任一項之組合物，其中該組合物係初生 嬰兒配方（starter infant formula)、嬰兒配方、較大嬰兒 配方（follow-〇n f0rmulae)、幼兒食物配方、嬰兒縠類配 方或成長乳’且該組合物較佳係初生嬰兒配方。 11. 如请求項1及2中任一項之組合物，其用於患有過敏尤 其食物過敏之嬰兒及年幼兒童。 12. 如請求項1及2中任一項之組合物，其在離乳期之前及/或 期間使用。 13. 如請求項1及2中任—項之組合物，其用於預防該等皮膚 疾病（具體而言異位性皮膚炎），及降低其頻率及/或發生 率及/或嚴重性及/或持續時間。 14. 如請求項⑻中任一項之組合物，其用於促進皮膚健康 及/或用於預防皮膚脫水及/或用於增強該皮膚之水合及/ 或用於降低皮膚皮疹、粗糙及/或乾燥及/或用於增強對 160459.doc 201240607 過敏原之口服耐受性。 15.如請求項1及2中任一項之組合物，1 0卿’其用於增強對過敏原 16. 之口服耐受性。 -種組合物之用途，該組合物包含至少一種N•乙酿基乳 糖胺、至少-種唾液酸基化募膽、至少一種岩藻醣基化 寡醣及包含部分及/或廣泛水解蛋白質之水解產物，該组 合物用於製造合成營養劑，該合成營養劑用於預防及/或 治療皮膚病況及皮膚錢’較佳為異位性皮膚炎，且用 於增強對過敏原之口服耐受性。 17.如請求項16之用途，其中該組合物係較佳以單位劑量形 式提供之補充品。 160459.doc