TW201216999A - Nano emulsion injection of vinca alkaloids and the preparation thereof - Google Patents

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201216999 六、發明説明： 【發明所屬之技術領域】 本發明涉及一種奈来翌 ^ 1劑注射液及其製備方法，具體 地說涉及長春化生物鹼奈半八假 【先前技術】 主射液及其製備方法。 的代類藥物，作為第一 比長春花驗等其他長春花座'療效確切，而且神經毒性 聯合用藥方案眾多，對非j驗小。在臨床上應用廣泛且 給f方便，且品種_二，肺癌和乳腺癌車交為有效， I、市場銷售強勁。 國内目刖上市產品為县 名為諾維本'蓋諾'民諾^濱酒石酸鹽注射液（商品 ,, 負）和軟膠囊，尚無其他劑型 的產品上市。

由於目前上市普軌料是呈酸性的高滲溶液，在使 用時血管刺激性較為嚴重，對靜脈刺激性較大，易發生靜 脈炎。具體可表現為皮膚色素沉著、血管/疼痛或變硬等症 狀。研究表明，約有1/3的患者會發生以上不良反應，而 其中5%的患者反應嚴重。因此在臨床使用時需要快速靜 滴’30分鐘内滴完’化療前後用地塞米松各靜脈输液1次， 並用大量生理鹽水沖洗血管。因而臨床應用時存在諸多不 便。 國内現有多篇關於長春瑞濱乳劑的專利申請。中國專 利申請CN1859898A公開了長春花生物鹼類化合物的次微 米級的0/W型乳液，其製備出的乳液粒徑均在115nm以上。 3 95016 201216999 並且該專利指出長春花生物 驗礼劑的pH值為酸性（ PH3-5)且採用高濃度的穩定 ]如 . 齊（穩疋劑與樂物的電荷比為 1 . 1到1 〇. 1，一般用量為戋丨流丨h 里馬礼劑的丨.5至7. 5%)，才 乳液穩定麟長春花生_ )才錢 利申請試，過將長春_、、s^ 滴粒子的内相，避免藥物和 主月曰負礼 血s内皮細胞的直接接觸，爽 降低或避免其血管刺激性。作 疋由於該製劑的酸性較強， 在使用時仍存在4的血管刺激性，但如果提高其邱 驗性來降低血管刺激性’又無法使乳液穩定存在。 由於長春花生物_化合物本身的水溶性較好，製備 0/W型乳㈣，使其最大化包封於油滴巾是賴製劑十分 關鍵的指標。中國專利申請CN1771954A、CN1679576A和 CN16340 58A也都公開了長春花生物鹼的乳液，這些乳液中 都未對粒徑進行特殊控制，粒徑均是次微乳的粒徑範圍（即 平均粒徑均在l〇〇nm·以上），因此製備出的乳液粒徑都較 大。在這些文獻中，為了使藥物進入油相中，均用到了油 相增溶劑、助溶劑或類似作用的高濃度穩定劑，組方複雜， 輔料用量大。例如，或採用10-羥基_2一癸烯酸或/和脫水 山梨醇脂肪酸酯類做為油相增溶劑，增加長春瑞濱在油相 中的脂溶性；或採用乙醇、丨，2_丙二醇等做為助溶劑，將 靜脈輸液用量的長春花生物驗加溶到乳劑的油相中。這此 製劑中採用了大量複雜的輔料，但在包封率方面仍不能得 到滿意的結果，且大量輔料的使用也帶來了安全性隱患。 同時，經過研究發現上述方法製備出的乳劑在放置過程中 95016 4 201216999 並不穩定，藥物很容易由油相轉移至水相，導致保存過程 中包封率下降。 此外，長春花生物驗類注射脂肪乳液在使用時’需要 '使乳液的粒徑達到微米級或更小，因此在製備長春花生物 鹼類化合物的乳劑時，往往是先製備成一般的含藥乳液， 再對乳液進行高強度的勻制，在勻化的過程中會產生較高 的壓力和溫度，這對藥物的穩定性產生了不利的影響.。 針對這些問題，如何提供一種包封率高、放置過程中 馨藥物不易從油相中玫漏、人體耐受性好的長春花生物驗乳 劑是十分重要的。 '【發明内容】 本發明的目的是克服原有長春花生物驗注射液的臨 床刺激性、降低毒性，提供一種包封率高、安全、穩定的 長春花生物鹼奈米乳劑注射液；本發明的另一目的是針對 現有技術不足，提供一種新的方法製備乳劑，解決原有乳 赢劑製備過程中活性成分在油相溶解慢或難溶解等問題。 本發明提供的注射液是含有長春花生物鹼或其鹽.、注 射用油、表面活性劑和水的穩定的水包油型乳劑注射液， 經研究發現，在pH值7至9的條件下，當乳滴的平均粒徑 控制在lOOnm以下時，可提高藥物的包封率，藥物在放置 過程中不易從油相中洩漏，更適合人體使用，並且該製劑 能夠在更溫和的條件下進行製備。 本發明提供了一種長春花生物鹼奈米乳劑注射液，其 特徵在於所述的注射液是含有長春花生物鹼或其鹽、注射 5 95016 201216999 用油、表面活性劑和注射用水的水包油型乳劑注射液，其 中乳劑中乳滴的平均粒徑小於1 〇〇nm，乳劑pH值為7至9。 本發明所述的長春花生物驗是提取或合成、半合成的 長春花生物鹼，所述的鹽是長春花生物鹼與藥學上可用的 酸反應得到的鹽。長春花生物鹼類包括但不局限于長春瑞 濱、長春鹼、長春新鹼、長春地辛、異長春鹼；長春花生 物鹼鹽類包括但不局限於酒石酸鹽、馬來酸鹽、乳酸摘、 蘋果酸鹽、鹽酸鹽、磷酸鹽、硫酸犟；較佳為長春瑞濱或 長春瑞濱的酒石酸鹽。 長春花生物鹼的用量範圍占所述奈米乳劑注射液的 〇· 05 至 5% (w/v)，更優較佳為 〇· 05 至丨.〇%(w/v)。、 、本發明所述的注射用油選自礦物油、植物油、動物油 或合成油的一種或哆種。所述的植物油選 油、玉米油、挪子油、莲麻油、鹤膽子油、掠= 脂肪酸甘油三醋.、花生油、棉軒油或其混合物；所述的動 物油選自魚油、録蠘油或其混合物。較佳為大豆油、 脂肪酸甘油三酯或其混合物。 注.射用油的用量範圍占所述奈米乳劑注射液的 30% (w/ν)，更佳為5至2〇%以八）。 王 本發明所述的表面活性劑選自鱗赌、非 生劑或其混合物，__㈣脂、豆磷脂或其二： 較佳為蛋料磷脂；所述的非離子表面活_選自^ 婦類和聚乙二醇類非離子表面活性劍 /氧乙 聚氧乙烯_，聚氧乙職化訪油、吐_^為 95016 6 201216999 吐溫40、吐溫60、吐溫一8〇、吐溫85、泊洛沙姆⑽或其 /昆合物，聚乙一醇類非離子表面活性劑較佳為聚乙二醇硬 、月曰酸酉曰15、聚乙二醇_維生素E玻⑽醋或其混合物；所 述非離子表面活性劑更佳為泊洛沙姆188、聚乙二醇硬脂 酸酯15。較佳複合使用磷脂和非離子表面活性劑，能夠有 效降低乳劑的粒徑並提高乳劑的物理穩定性。較佳的複入 ^面活性劑為：_脂和泊洛沙姆188,㈣脂和聚乙: 醇硬月曰酉夂酉曰15 ’更佳為蛋黃㈣脂和泊 蛋黃印磷脂和聚乙二醇硬脂酸酯… 次者 表面難劑用量範圍占所述奈米乳敝射液的 2(U (w/v)，更佳為2至戰w/v)。 劑注=其^’_種更佳的長春花生物驗奈米乳 或其米乳航射液0.05至u 一％的長春瑞濱 至—或中鏈 =所述奈米乳劑注射液2幻〇 w/v ==:=r 一:姆188，： 姆188,或者蛋主 日15更佳為蛋頁㈣脂和泊洛沙 本發明所二二:乙:广硬脂酸§1 15。 劑。所述的金屬整人制1液還可含有金屬螯合 鈉鹽、乙-π σ 1為乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸一 乙-胺四乙酸二舞鹽或其混合物；較佳為乙二:： 95016 7 201216999 乙酸二鈉鹽。金屬螯合劑用量範圍占所述奈米乳劑注射液 的 0-0.5 % (w/v)。 本發明提供的注射液還可含有抗氧劑，所述的抗氧劑 包括水溶性抗氧劑和油溶性抗氧劑，水溶性抗氧劑為亞硫 酸鈉、亞硫酸氫納、焦亞硫酸納、抗壞血酸、抗壞血酸納、 L-半胱氨酸或其混合物，較佳為亞硫酸鈉；油溶性抗氧劑 為維生素E。抗氧劑用量範圍占所述奈米乳劑注射液的0 - 至％(诹/^)。 加入金屬螯合劑和抗氧化劑，可以提高乳劑的化學穩 定性。 本發明提供的注射液還可含有滲透壓調節劑。所述的 滲透壓調節劑是甘油、山梨醇、甘露醇、葡萄糖、氣化鈉 或其混合物；較佳為甘油。滲透壓調節劑用量範圍占所述 奈米乳劑注射液的0至5% (w/v)。 .本發明提供的注射液還可含有助表面活性劑，既有表 面活性作用，又能調節體系中乳滴的電荷，增加乳滴間的 斥力，提高製劑穩定性。所述的助表面活性劑是油酸、油 酸鈉、膽酸、膽酸鈉、去氧膽酸、去氧膽酸鈉或其混合物； 較佳為油酸納。助表面活性劑用量範圍占所述奈米乳劑注 射液的0至1. 5% (w/v)。 所述乳劑中可以含有低濃度的增加長春花生物鹼在 油相中脂溶性的物質，但較佳是不含增加長春花生物驗.在 油相中脂溶性的物質。 本發明還提供了製備上述長春花生物鹼奈米乳劑注 8 95016 201216999 射液的方法。 第（一）種方法： 該方法包括以下步驟： 分別製備油相和水相；將油相與水相混合均勻，製成 初乳；向初乳中加入長春花生物驗或其鹽；調節pH為7 至9，繼續加入水定容至全量，經高壓均質機勻化至乳滴 平均粒徑在lOOnm以下。 比如：在惰性氣體保護下，將注射用油和處方中其他 •視需要添加的油溶性辅料攪拌均勻成油相；將表面活性劑 和處方中其他視需要添加的水溶性輔料加入適量的注射用 水中，攪拌均勻成水相； 在高速攪拌下，將油相與水相混合均勻，製成初乳； 向初乳中加入長春花生物鹼或其鹽； 調節pH為7至9，繼續加入水定容至全量，經高壓均 質機勻化至乳滴平均粒徑在lOOnm以下。 • 第（二）種方法： 由於本發明乳液的平均粒徑控制在lOOnm以下和pH 為7至9，藥物在此條件下易於進入油相，通過簡單的攪 拌等方式就可使藥物進入油相，因此除第（一）種方法外， 可選用更溫和的製備方法來製備該產品，該方法包括以下 步驟： 分別製備油相和水相；將油相與水相混合均勻，並經 高壓均質機勻化製成平均粒徑在lOOnm以下的空白乳；向 空白乳中加入長春花生物鹼或其鹽；調節pH值為7至9， 95016 h 201216999 _護下’將注射用油和處方中其他 將表面活性劑 的注射用 充分攪拌，繼續加入水定容至全旦 比如：在惰性氣 里 視需要添加的油溶性輔 ^ 工珂用 在南速授拌下，將油相 質機勻化製成平均粒徑在〇、.均勻，並經高壓均 向w ,φα m以下的空白乳「 向工白礼中加人長春花生物鹼或_. 調節PH值為7至9，繼續加入水^容至全量 上述兩種製備方法令，表面活 中外’也可溶解或分散于油相中 :了〜散在水相 油相中。 將蛋黃卵磷脂溶解于 的平= :=:=::，，_ =大=度分散，藥物“該體心== =較大的轉性能差異，高度分散的乳滴又具有足夠大 ^表面積，使長春花生㈣_迅_散到油水界面膜 處，並進人油相。本方料是對含藥錢進行高強度、 =細at_麻得含藥奈錢，_在奈米空白乳 的基礎上添加藥物，因此避免了高強度㈣化過程對藥物 穩定性產生的不利影響。 、 因此，較佳使用第（二）種方式進行製備。 與現有技m目比，本發明通過㈣乳㈣平均粒徑和 pH條件，達到： 95016 10 201216999 1. 減小產品刺激性 奈米乳外觀呈透明或略帶乳光的半透明狀，黏度低，注 射給藥時更能減少靜脈刺激性，乳液的pH更適合人體接受。 2. 降低毒性 噁心嘔吐是化療藥物最常見的不良反應，甚至有的病 人無法進食。長春瑞濱作為抗腫瘤藥亦存在此不良反應。 本發明產品由於具有和脂肪乳相近的處方組分，因而能為 機體提供必需的能量，維持正常細胞結構，提高患者臨床 鲁财受性。 本品粒徑小於lOOnm，與普通乳劑相比更能降低毒性。 3. 工藝簡單、包封率高 本發明產品可優選採用高壓均質法製備出空白奈米 乳，由於粒徑小於lOOnm，乳滴高度分散，藥物加入該體 系後，在油水兩相間有較大的溶解性能差異，高度分散的 乳滴又具有足夠大的表面積使長春瑞濱能夠迅速擴散到界 I 面膜處，並進入油相.，從而提高產品包封率。本發明通過 簡單的攪拌等方式就可使藥物進入油相，避免了高強度均 質化過程對藥物穩定性產生的不利影響。 4. 製劑穩定性高 奈米乳粒徑均勻，一般在10至lOOnm，體系穩定，可 以長期放置且離心不分層，因而與普通乳劑相比，製劑穩 定性更高，藥物不易洩漏。 5. 製劑處方簡單 本發明的製劑中藥物可很容易的進入油相，使用簡單 11 95016 201216999 的輔料就可達到目的，因此本發明的乳劑中可以不含或含 較低量的油相增溶劑、助溶劑，或起類似作用的將長春花 生物鹼保持在油相中的穩定劑，從而簡化了製劑處方。 本發明的長春瑞濱奈米乳注射劑與現有技術中其他 技術相比，通過簡單的處方及製備工藝使長春瑞濱擴散到 油水界面膜中，提高了長春瑞濱在產品中的濃度，降低了 用藥刺激性。另外，藥物以奈米小球的形式輸送到體内， 可以改變藥物在體内的分佈，達到高度靶向性，並能在一 定程度上控制藥物的釋放速度，從而增加藥物的溶解度和 .吸收速率，提高藥效和降低毒性。— 【實施方式】 以下通過實施例進一步說明本發明。 藥物含量和有關物質測定的色譜條件：以十八烷基矽 烷鍵合矽膠為填充劑，以0.2%癸烷磺酸鈉曱醇溶液 -50mMNaH2P〇4緩衝溶液（磷酸調pH4. 20 ) 61:39為流動相， 檢測波長267nm ;流速：1. OmL/min ;柱溫40°C。 包封率測定方法：取本品適量，加水稀釋，用超濾器 超遽’棄去初濾•液’取續滤液為供試品溶液。分別吸取供 試品溶液、對照品溶液20//L注入液相色譜儀，記錄色譜 圖，以外標法計算製劑水相中藥物含量，記為W;另按含 量測定方法計算本品的藥物總含量，記為W。。按下式計算 樣品的包封率。 包封率=W〇 X100% 12 95016 201216999 實施例1 長春瑞濱酒石酸鹽 0. 2% 大豆油 7. 5% 中鏈油 7.5% 蛋黃1卩填脂 5% 聚乙二醇硬脂酸酯15 4% 甘油 2. 5% 油酸鈉 0. 1% VE 0. 05% 亞硫酸納 0. 05% EDTA-2Na 0. 01% 注射用水 加至100% 在惰性氣體保護下，將注射用大豆油75g、中鏈油75g 和維生素E 0. 5g擾拌均勻成油相；另將蛋黃卵攝脂5Og、 亞硫酸納0. 5g、油酸納lg、甘油25g、EDTA-2Na 0. lg和 聚乙二醇硬脂酸酯15 40g加入700ml注射用水中，攪拌均 勻成水相；在高速攪拌下，將油相與水相混合均勻，並經 高壓均質機勻化製成空白乳，取樣檢測，至平均粒徑在 100nm以下，加入長春瑞濱酒石酸鹽2g、調節pH值至8. 0, 加水定容至1000ml，充分攪拌；灌裝、充氮氣、熔封。 實施例2 處方組成同實施例1，不同之處在於製備步驟中調節 pH值至7. 0。 實施例3 13 95016 201216999 處方組成同實施例1，不同之處在於製備步驟中調節 pH值至6. 5。 實施例4 處方組成同實施例1，不同之處在於製備步驟中調節 pH值至4. 5。 實施例5 處方組成同實施例1，不同之處在於製備步驟中調節 pH值至9. 0。 實施例6 處方組成同實施例1，製備步驟：在惰性氣體保護下， 將注射用大豆油75g、中鍵油75g和維生素E 0. 5g授拌均 勻成油相；另將蛋黃卵構脂50g、亞硫酸納0. 5g、油酸納 lg、甘油25g、EDTA-2Na 0. lg和聚乙二醇硬脂酸酯15 40g 加入700ml注射用水中，攪拌均勻成水相；在高速攪拌下， 將油相與水相混合均勻，並經高壓均質機勻化製成初乳， 加入長春瑞濱酒石.酸鹽2g、調節pH值至8. 0，加水定容至 1000ml，充分攪拌，二次高壓均質機乳化，取樣檢測，至 平均粒徑在1 OOnm以下；灌裝、充氮氣、溶封。 按照包封率的測定方法測定上述實施例1至6的包封 率，見表1。 14 95016 201216999 表1實施例1製6產品的包封率 包封率（％) 實施例1 98. 7 實施例2 87.3 實施例3 74.9 實施例4 23. 5 實施例5 99. 1 實施例6 98.9 由上述貫施例1至5可知：乳劑的pfj值對藥物包封

•率有顯著影響。酸性pH值條件下，藥物的包封率較低，pH 值為4·5時，甚至不到50%，隨pH值升高，乳劑包封率明 顯增大，中性至偏鹼性的pH值下，包封率達到8〇%以上。 由實施例1和6可知：向製備好的空白奈米乳劑中加 入藥物後採用㈣方法獲得的產品，與實施例6採用常規 的高壓均質方法製備的產品相比，包封率無顯著差別。 實施例7 處方組成同實施例1，不同之處在於製備步驟為： 情性氣體保護下，將注射用A豆油75g、t鏈油％和 生素E 0. 5g攪拌均勻成油相；另將蛋黃卵磷脂、亞 酸鋼〇. 5g、油酸鈉lg、甘油25g、刪_2Na 〇· ig和聚 二醇硬脂酸酯15 *加入雇1注射用水中，攪拌均勻 水相；在高速祕下，將油相與水相混合㈣，並 均質機勻化製成空白乳，取樣檢測，至平均粒徑在測 以下，加入長春瑞濱酒石酸鹽2g、調節pH值至8 〇，加 定容至刪ml，充分擾拌；縣、充氮氣、騎，。 95016 15 201216999 見表2 測定實施例1、7的粒徑和包封率， 進行結果比較， 封率

比較結果可知：在處方組成相同的 粒徑在10°nm以下時，载藥後產品的包封率有所提， 實施例8 干，所钕呵。 〇. 2% 5. 0% .5. 〇% 3% 3% 2. 5% 〇. 15% 0. 05% 0. 2% 加至100% 長春瑞濱酒石酸鹽 大豆油

中鏈油 蛋黃印磷脂 泊洛沙姆188 甘油 油酸納 VE 亞硫酸納. 注射用水 在惰性氣體保護下，將注射用大豆油5Gg、中鍵油5〇j 3=々_成油相;另將蛋黃咖 泊洛々、姆188 3Gg、亞硫_ 2g、油酸鋼l 5g和甘 加入抓1注射用水中，授拌均勻成水相；在高速_下， 將油相與水相混合㈣，並經高㈣該勻化製成空白 95016 16 201216999 乳，取樣檢測，至平均粒徑在lOOnm以下；加入長春瑞濱 酒石酸鹽2g、調節pH值至8. 0，加水定容至1000ml，充 分授拌，灌裝、充氮氣、熔封。 實施例9 長春瑞濱酒石酸鹽 0.2% 大豆油 5.0% 中鏈油 5.0% 蛋黃卵填脂 8% _甘油’ 2.5% 油酸納 0.05% 注射用水 加至100% 在惰性氣體保護下，將注射用大豆油50g和中鏈油50g 授拌均勻成油相；另將蛋黃卵構脂80g、油酸鈉0. 5g和甘 油25g加入700ml注射用水中，擾拌均勻成水相；在高速 攪拌下，將油相與水相混合均勻，並經高壓均質機勻化製 成初乳，加入長春瑞濱酒石酸鹽2g、調節pH值至8. 0，加 水定容至1 000ml，充分攪拌，二次高壓均質機乳化，取樣 檢測，至平均粒徑在lOOnm以下；灌裝、充氮氣、熔封。 實施例10 長春瑞濱酒石酸鹽 0. 2°/〇 中鏈油 10% 蛋黃印破脂 .2% 聚乙二醇硬脂酸酯15 2% 甘油 17 2. 5% 95016 201216999 油酸納 VE EDTA-2Na 注射用水 0. 15% 0. 05% 0. 02% 加至100% 在惰性氣體保護下，將注射用中鏈油100g和維生素E 〇· 5g授拌均勻成油相；另將蛋黃印礎脂脚、聚乙二醇硬 脂酸醋15 2Gg、EDTA_2Na G 2g、油酸納❿和甘油咖 加入700ml注射用水中，攪拌均勻成水相；在高速攪拌下， 將油相與水相混合均句，並經高麼均質機句化製成初乳， 加入長春瑞濱酒石酸鹽2g、調節pH值至8 〇,加水定容至 1000ml ’充分攪拌，二次高壓均質機乳化，取樣檢測，至 平均粒徑在100ηηι以下；灌裝、充氮氣、熔封。 按照含量和有關物質的色譜條件測定實施例1、8至10， 見表3和4。 表3 〇月測定結果

粒徑（nm) ~~94~~ ~~89~~ "~~87~ 含量（％) 98.7— 97.6— "99. 2~ 98.9— 有關物質（％) 〇2 〇5 0758 0751 18 95016 201216999 果(25。〇 —-ΖΖΖ[~^ΙΤϊϊϋΓΓ~Γ 含景 T施杳ΓΓ^ ~^δ ^U〇；

由上述4個實例的結果比較可知：在加速1個月後， =同處方的㈣、含量和有隱質會有不同的變化，其 ^施=1 8、10的穩定性較好^分析原因，複合表面活担 祕提高產品的物理敎性，加速條件下放置，粒徑變化 不大，制抗氧缺金屬螯合劑能在—定 的化學穩定性。 ππτ座口口 實施例11 鹽 0. 05% 5% 5% 5% 0. 1% 加至100% 長春瑞濱酒石酸 大豆油 蛋黃即構脂 葡萄糖 油酸納 注射用水 在惰性氣體保護下，將注射用大豆油5Gg、蛋黃⑻ 脂50g授拌均勻成油相，另將葡萄糖响和油酸納^加 600ml注射用水中，勝均勻成水相，在高賴摔下，^ 油相與水相混合均勻，並經高壓均質機勻化製成空白乳 取樣檢測，至平均粒徑在刚⑽以下；加人長春瑞濱心 95016 19 201216999 酸鹽0. 5g、調節pH值至7. 5， 加水定容至1 000ml，充分 攪拌，灌裝、充氮氣、熔封。 實施例12 長春瑞濱酒石酸鹽 0. 5% 大豆油 '10% 大豆磷脂 10% 甘油 2. 25% 油酸鈉 0. 3% EDTA-2Na 0. 05% 注射用水 加至100% 在惰性氣體保護下，將注射用大豆油l〇〇g攪拌均勻 成油相，另將大豆碌脂10Og、 甘油22. 5g、油酸納3g和 EDTA-2Na0.5g加入600ml注射用水中，攪拌均勻成水相， 在高速攪拌下，將油相與水相混合均勻，製成初乳，向初 乳中加入長春瑞濱酒石酸鹽5g 、調節pH值到8. 5，加水 定容至1000ml，經高壓均質機勻化至平均粒徑在lOOnm以 下，灌裝、充氮氣、溶封。 實施例13 長春瑞濱酒石酸鹽 1.0% 大豆油 10% 蛋黃印填脂 3% 聚乙二醇-維生素E琥珀酸酯 3% 甘油 2. 5% 油酸納 0. 3% 20 95016 201216999 EDTA-2Na 0.01% 抗壞血酸 0.2% 注射用水 加至100% 在惰性氣體保護下，將注射用大豆油100g、蛋黃卵磷 脂30g攪拌均勻成油相，另將聚乙二醇-維生素E琥珀酸酯 30g、甘油25g、油酸納3g、EDTA-2Na 0. lg和抗壞血酸2g 加入800ml注射用水中，攪拌均勻成水相，在高速攪拌下， 將油相與水相混合均勻，並經高壓均質機勻化製成空白 馨乳，取樣檢測，至平均粒徑在100nm以下；加入長春瑞濱 酒石酸鹽10g，調節pH值至9. 0，加水定容至1000ml，充 分攪拌，灌裝、充氮氣、熔封。 實施例14 長春瑞濱 0.2% 中鏈油 10% 蛋黃卵填脂 4% 吐溫-80 0.5% 甘油 2.25% 油酸鈉 0.1% 亞硫酸納 維生素E 注射用水 0.2% 0. 05% 加至100% 在惰性氣體保護下，將注射用中鏈油100g和維生素E 〇. 5g攪拌均勻成油相，預熱至70°C，另將吐溫-80 5g、亞 硫酸鈉2g、甘油22. 5g、油酸鈉lg和蛋黃卵填脂40g加入 21 95016 201216999 650ml注射用水中，攪拌均勻成水相，預熱至70°C，在高 速攪拌下，將油相與水相混合均勻，並經高壓均質機勻化 製成初乳，加入長春瑞濱2g、調節pH值至7. 0，加水定 容至1000ml，二次高壓均質機乳化，取樣檢測，至平均粒 徑在lOOnm以下；灌裝、充氮氣、熔封。 實施例15 長春瑞濱 0.5% 中鏈油 5% 蛋黃卵碌脂 4% 聚氧乙烯蓖麻油 3% 甘油 2.25% 油酸納 0.3% EDTA-2Na 0.01% 維生素E 0.05% 抗壞血酸 0.1% 注射用水 加至100% 在惰性氣體保護下，將注射用中鏈油50g、維生素E 〇.5g攪拌均勻成油相，另將蛋黃卵磷脂40g、聚氧乙烯蓖 麻油30g、甘油22. 5g、油酸納3g、EDTA-2Na 0. lg和抗壞 血酸lg加入600ml注射用水中，攪拌均勻成水相，在高速 攪拌下，將油相與水相混合均勻，並經高壓均質機勻化製 成初乳，加入長春瑞濱5g、調節pH值至7. 5，加水定容 至1000ml，充分攪拌，二次高壓均質機乳化，取樣檢測， 至平均粒徑在lOOnm以下；灌裝、充氮氣、熔封。 22 95016 201216999 實施例16 長春瑞濱酒石酸鹽 5% 大豆油 10% 中鍵油 5% 蛋黃1卩填脂 12% 泊洛沙姆188 6% 甘油 2. 25% 油酸鈉 0. 15% 維生素E 0. 05% 注射用水 加至100% 在惰性氣體保護下，將注射用大豆油100g、中鏈油 50g、維生素E0.5g攪拌均勻成油相，預熱至80°C ;另將 蛋黃卵填脂120g、甘油22. 5g、油酸納1. 5g和泊洛沙姆 188 60g加入650ml注射用水中，攪拌均勻成水相，預熱 至80°C ;在高速攪拌下，將油相與水相混合均勻，並經高 壓均質機勻化製成初乳，加入長春瑞濱酒石酸鹽50g、調 節pH值至9.0，加水定容至1000ml，充分擾拌，二次高壓 均質機乳化，取樣檢測， 充氮氣、溶封。 實施例17 至平均粒徑在l〇〇nm以下；灌裝、 長春新驗硫酸鹽 2% 中鏈油 20% 大豆填脂 10% 聚乙二醇硬脂酸酯15 5% 23 95016 201216999 甘油 2. 5% 油酸鈉 0.2% 維生素E 0. 05% 注射用水 加至100% 在惰性氣體保護下，將注射用中鏈油200g、維生素E 〇.5g攪拌均勻成油相，預熱至60°C ;另將大豆磷脂100g、 甘油25g、油酸鈉2g和聚乙二醇硬脂酸醋15 50g加入 700ml注射用水中，攪拌均勻成水相，預熱至60°C ;在高 速攪拌下，將油相與水相混合均勻，並經高壓均質機勻化 製成初乳，加入長春新鹼硫酸鹽20g、調節pH值至8. 5， 加水定容至1000ml，充分攪拌，二次高壓均質機乳化，取 樣檢測，至平均粒徑在lOOnm以下；灌裝、充氮氣、熔封。 實施例18 長春地辛硫酸鹽 芝麻油 大豆卵填脂 泊洛沙姆188 甘油 油酸納 維生素E 亞硫酸納 注射用水 0. 5% 15% 10% 2% 2. 25% 0. 1°/〇 0. 05% 0. 1% 加至100% 在惰性氣體保護下，將注射用芝麻油150g、維生素E 〇. 5g授拌均勻成油相，另將大豆卵填脂100g、油酸鋼lg、 24 95016 201216999 甘油22. 5g、無水亞硫酸納1 g、泊洛沙姆188 20g加入60Om 1 注射用水中，攪拌均勻成水相，在高速攪拌下，將油相與 水相混合均勻，並經高壓均質機勻化製成初乳，加入長春 地辛硫酸鹽5g、調節pH值至9. 0，加水定容至100Om 1， 充分攪拌，二次高壓均質機乳化，取樣檢測，至平均粒徑 在lOOnm以下；灌裝、充氮氣、熔封。 以實施例1的產品為例，考察根據本發明制得的成品 的理化特徵： • 【形態學考察】吸取樣品適量，稀釋後，用磷鎢酸染色， 透射電鏡下觀察本品。形態圖見圖2。經穿透式電子顯微 鏡觀察，長春瑞濱酒石酸鹽奈米乳劑形態均為球形或近球 形。 【相容穩定性】為滿足臨床用藥需求，本品常用氯化鈉注 射液（0.9%)和葡萄糖注射液（5%)進行稀釋。分別用上述稀 釋介質稀釋5倍、10倍，分別於0、1、2、4、6h取樣測 I 定粒徑。實驗發現：本品經0. 9%氯化鈉注射液和5%葡萄糖 注射液稀釋後6h内粒徑無明顯變化。 【刺激性實驗】取健康家兔3只。將家兔固定於兔箱中， 75%酒精消毒，緩慢耳緣靜脈注射，左側耳朵注射奈米乳劑 注射液，右側耳朵注射0.9%氯化鈉注射液作為陰性對 照，連續注射3次，隔日1次，均以蠕動泵定速輸液。給 藥後觀察製劑對家兔血管的刺激，並觀察注射部位有無瘀 血、水腫和組織壞死等現象。最後一次給藥後24小時後犧 牲家兔，取注射部位組織10%甲醛固定，常規石蠟包埋、 25 95016 201216999 切片，蘇木素伊紅染色，顯微鏡觀察。長春瑞濱奈米乳連 續三次注射後，組織病理學檢查均未見明顯異常，說明該 製劑靜脈注射對血管無明顯刺激性，結果見圖3。 【溶血性實驗】取家兔一隻，自心職採血約咖置於三 角燒瓶二，用竹簽勝去除纖維蛋白，然後將血液移入刻 度離。管内’加入生理鹽水約5ml，混勻後轉，分離 =分鐘，去除上清液，再加生理鹽水混勾離心，如此反 条Γ，至上清液無色透明，將所得紅細胞按其容積， 生理I水稀釋成2%的紅血球細胞&液（2繼）。取試管7 水、、谷伴下，4 5|的iT序加人下列各種溶液，輕輕搖勻，於3Γ(： 水冷保k4小時，判斷並記錄結果。

95016 26 201216999 第1圖是本發明長春花生物鹼奈米乳劑注射液的粒徑 分佈圖。 第2圖是本發明長春花生物鹼奈米乳劑注射液的形態 圖。 第3圖是本發明長春花生物鹼奈米乳劑注射液的刺激 性實驗結果。 【主要元件符號說明】 盔

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Claims (1)

1. 201216999 七、申請專利範圍： 1. 一種長春花生物驗奈米乳劑注射液，⑽徵在於該注射 液是含有長春花生物驗或其鹽、注射用油、表面活性劑 和注射用水的水包油型乳劑注射液，其中乳劑注射液中 札滴的平均粒徑小於刚⑽，乳劑注射液邱值為7至& 2·如申請專利_第丨韻述的奈輕敝射液，並㈣ 射液中不含增加長春花生物驗在.油相中脂二 3.如申請專利範圍第丨項所述的 長春花生物鹼是提取或合成、 長春其中該 '且該鹽是長春花生物驗與㈣上可春化生物驗， 鹽。 樂予上可用的酸反應得到的 (=料利範㈣3項所述的奈料劑注射液， 春地辛或異長春驗;該鹽;二=、:春新驗、長 5. 酸鹽、硫酸鹽、編鹽、;::::酸^ .如申請專利範圍第4項所述的奈米 二、 長春花生物驗類為長春瑞濱·二、:…，液’其中該 6. 如申請專利範圍第i項所=鹽4酒石酸鹽。 注射用、、由、鹿白⑽、斤述的奈米乳劑注射液，其中.該 種或多種 油、植物油、動物油或合成油中的一 7. 如申請專利範圍第6項所述的 =油選自大豆油、紅花油、玉米 鴉膽子油、棕櫚油、中_旨㈣甘H花m 化王》由、棉 95016 28 201216999 籽油或其混合物；該動物油選 物。 廷目”、、，由鯨蠟油或其混合 8. 如申請專利範圍第7項所遽的夺丨 ㈣油為大豆油、中鍵脂肪酸甘油三睹或二:中該 9. 請專利範圍第1項所述的奈米乳劑;主射二 =面活性劑選自㈣、非離子型表面活性劑或其# 第9項所述的奈米乳劑注射液，其中該 仏U㈣脂、豆磷脂或其混合物；該非離子表面活 =選自聚氧乙締類和聚乙二醇類非離子表面活性劑。 •如^請專利範圍第J項所述的奈米乳劑注射液，其中 該磷脂為蛋黃卵磷脂。 :申吻專利範圍第」0項所述的奈米乳劑注射液，其中 該聚氧乙烯類非離子表面活性劑選自吐溫2q、吐溫 吐溫60、吐溫80、吐溫85、聚氧乙烯藍麻油、聚 氧=婦氫化莲麻油、泊洛沙姆188.或其混合物；該聚乙 :醇類非離子表面活性劑選自聚乙二醇硬脂酸酯15、 聚乙二醇-維生素£琥珀酸酯或其混合物。 ]3·二申清專利範圍第12項所述的-奈米乳劑注射液，其中 氧乙稀類非離子表面活性劑為泊洛沙姆188;該聚 乙一醇類非離子表面活性劑為聚乙二醇硬脂酸酯15。 Κ如申請專利範圍第丨至13項中任—項所述的奈求乳劑 注射液，其中·· 5亥長春花生物鹼占該奈米乳劑注射液的0. 05至5 29 95016 201216999 w/v % ； 該注射用油占該奈米乳劑注射液的2至 該表面活性劑占該奈米乳劑注射液的〗 %。 . 射液的1至20 W/V 15.如=，14項所述的奈米乳劑注射液· uH化生物驗占該奈米乳敎射_0^' 該^用油占該奈米乳劑注射液的5至2〇 W %。 礼劑注射液的2至10 w/v 16.如申請專利範圍第】至巧項中任 丄 '注較，㈣奈咖晴t =桃$米乳劑 乳劑注射液⑽[l Gw/v%的長春 肩或其酒石酸鹽； 占該奈米乳劑注射液5至2〇 w/v%的大豆油或中 鏈脂肪酸甘油三酯或其混合物； 占該奈米乳劑注射液2至1〇 w/v %的複合表面活 劑該.複合表面活性劑為卵磷脂和泊洛沙姆188，或 者卵磷脂和聚乙二醇硬脂酸酯15。 •如申5月專利㈣第1至16項中任-項所述的奈米乳劑. 射液，其中該注射液進一步含有金屬螯合劑，該金屬 螯s劑選自乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸二鈉鹽、乙二 乙k 一弼鹽或其混合物；該金屬螯合劑占該奈米乳 劑注射液的0至〇.5 w/v %。 30 95016 201216999 18·如申請專·圍第15_17項中任—項所述的奈米乳劑 主射液4中該注射液進一步含有抗氧劑，該抗氧劑選 自水溶性抗氧劑和油雜抗氧劑，其巾水雜抗氧劑選 自^亞硫酸納、亞硫酸氫鋼、焦亞硫酸鋼、抗壞企酸、抗 f酉夂納L-半胱氨酸或其混合物；油溶性抗氧劑選自 、隹生素E ’其中該抗氧劑占該奈米乳劑注射液的〇至1 w/v %。 i至18項中任—項所述的奈米乳劑 、、射液其中該注射液進一步含有滲透壓調節劑，該渗 ^壓調—選自甘油、山梨醇、甘露醇、葡萄糖、氯化 鈉或其混合物；其中該參透壓調節劑占該奈米㈣注射 液的0至5 w/v %。 ^專利範圍第丨至19項中任—項所述的奈米乳劑 、液’其中該注射液進一步含有助表面活性劑，該助 t面活性劑選自油酸、油酸鋼、膽酸、膽酸納、去氧膽 =去氧膽酸納或其混合物；其中該助表面活性劑占所 述不米乳劑注射液的〇至L5 w/v %。 21·^製備申請專利範圍第1至20項中任-項所述的長 ^化生物驗奈米乳劑注射液的方法，該方法包括以下步 鄉· 分別製備油相和水相； f间速攪拌下’將油相與水相混合均勾，製成初乳; 二初礼中加入長春花生物鹼或其鹽； D周即pH值為7至9，繼續加入水定容至全量，經 95016 31 201216999 高壓均質機勻化至乳滴平均粒徑在l〇〇nm以下。 22. —種製備申請專利範圍第1至20項中任一項所述的長 春花生物鹼奈米乳劑注射液的方法，該方法包括以下步 驟： 分別製備油相和水相； 在高速攪拌下，將油相與水相混合均勻，並經高壓 均質機勻化製成平均粒徑在lOOnm以下的空白乳； 向空白乳中加入長春花生物驗或其鹽； 調節pH值為7至9，充分攪拌，繼續加入水定容 至全量。 32 95016