TW201142293A - Predictive markers useful in the treatment of fragile X syndrome (FXS) - Google Patents

Predictive markers useful in the treatment of fragile X syndrome (FXS) Download PDF

Info

Publication number
TW201142293A
TW201142293A TW100115217A TW100115217A TW201142293A TW 201142293 A TW201142293 A TW 201142293A TW 100115217 A TW100115217 A TW 100115217A TW 100115217 A TW100115217 A TW 100115217A TW 201142293 A TW201142293 A TW 201142293A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
hydroxy
cyclohexyl
fmr1
phenylethynyl
individual
Prior art date
Application number
TW100115217A
Other languages
English (en)
Inventor
Baltazar Gomez-Mancilla
Yunsheng He
Donald Johns
Joanne Meyer
Charles Paulding
Original Assignee
Novartis Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=44121075&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=TW201142293(A) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Novartis Ag filed Critical Novartis Ag
Publication of TW201142293A publication Critical patent/TW201142293A/zh

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/5308—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for analytes not provided for elsewhere, e.g. nucleic acids, uric acid, worms, mites
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/106—Pharmacogenomics, i.e. genetic variability in individual responses to drugs and drug metabolism
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/154—Methylation markers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Description

201142293 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於一種個人化治療方法。特定言之，本發明 係針對預測患有X染色體脆折症之個體是否將對用特定治 療劑治療作出臨床反應。 【先前技術】 X染色體脆折症（FXS)為遺傳型智力遲鈍之最常見病因， 其在世界範圍之發病率為男性1/4000及女性1/8000。FXS 之發病率比其他與X染色體有關之智力遲鈍高10至20倍。 FXS為單基因疾病，且主要由引發X染色體脆折性智力遲 鈍1(FMR1)基因之過度曱基化及沉默的CGG重複序列擴增 所致。不存在FMR1蛋白（FMRP)可能造成代謝型麩胺酸受 體5(mGluR5)信號傳導所介導之蛋白質合成刺激過度且因 此導致FXS表型多樣性。mGluR5拮抗劑可能降低mGluR5 信號傳導並校正由缺乏X染色體脆折性智力遲鈍蛋白所致 對於FXS無特效療法且臨床實踐因不同國家而各異。用 於治療FXS症狀之最常見藥物為刺激劑（亦即哌醋曱酯 (methylphenidate))、選擇性血清素再吸收抑制劑（SSRI)(例 如氟西汀（fluoxetine))、α-腎上腺素受體促效劑（例如可樂 定（clonidine))、 情緒穩定劑（例如卡馬西平 (carbamazepine))及抗精神病藥（例如利培酮（risperidone)、 奥氮平（olazapine))。此等藥物中之任一者皆會因其功效有 限且可能存在不良副作用而放棄使用。近年來，亦已表明 155387.doc 201142293 mGluR拮抗劑之作用。 日益增加之證據表明，s去 w考之遺傳概況可決定患者對治 療劑治療之反應性。假定許多 了 7席床可用於患有FXS之個 體，可測定影響例如對特宕= a J郊對特疋樂物之反應的遺傳因子以便向 患者提供個人化治療方宝。姑结7ιτι ’、案该專個人化治療方案可能使對 患者之治療效益最大，同B#胳 取八丨』時將可旎與替代性治療方案有關 之相關副作用減至最少。闵而，承μ , 取夕因而，需要鑑別可用於預測患者 是否有可能對特定療法作出反應的因子。 【發明内容】 本發明係基於#現可使用肖定生物標記來選擇可能對用 mGluR5拮抗劑治療作出反應的患有Fxs之個體。特定言 之，已發現，來自患有FXS之個體之樣本中與對照相比之 X染色體脆折性智力遲鈍1(FMR1)基因區之甲基化狀態及/ 或FMR1基因表現量降低及/或騰…蛋白（FMRp)之量降低 可用於預測該個體是否將對mGiUR5治療作出反應。因 而’本發明允許治療提供者在投與mGluR5拮抗劑之前鑑 別對mGluR5治療作出反應的患有fxs之個體及對該治療無 反應的患有FXS之個體。 在一態樣中，本發明包括一種測定患有FXS之個體對用 mGluR5拮抗劑治療之反應性的方法。該方法包括提供來 自患有X染色體脆折症之個體的核酸樣本；測定該樣本中 之X染色體脆折性智力遲鈍1(FMR1)基因區之曱基化程 度；及若該樣本中所存在之所有或基本上所有FMR1基因 區已甲基化，則將該個體歸為mGluR5反應者。FMR1啟動 I55387.doc 201142293 子之甲基化程度可藉由此項技術中已知的任何方法來測 定，包括選自以下之檢定：甲基化敏感性限制酶消化組合 南方墨點法或定量PCR(基於探針或SYBR綠）中之至少一 者；或亞硫酸氫鹽DNA修飾組合曱基化特異性 PCR(MSP)、定量甲基化特異性PCR(基於探針或SYBR綠） 或焦磷酸定序中之至少一者。在一實例中，甲基化程度係 使用諸如MSP之定性檢定來測定，且若僅偵測到甲基化之 相關FMR1基因區，亦即在相關FMR1基因區中未偵測到未 甲基化FMR1，則將個體鑑別為mGluR5反應者。在另一實 例中，甲基化程度係使用定量檢定來測定，且若FMR1基 因區之甲基化程度測定為99.5%或99.5%以上，則將個體鑑 別為mGluR5反應者。定量檢定之一個實例為曱基化敏感 性限制酶消化組合qPCR。 在另一態樣中，本發明包括一種測定患有FXS之個體對 用mGluR5拮抗劑治療之反應性的方法，該方法包括提供 來自患有FXS之個體的核酸樣本；測定該樣本中之X染色 體脆折性智力遲鈍1(FMR1)基因區之甲基化程度，其中若 該樣本中所存在之所有或基本上所有FMR1基因區已甲基 化，則將該個體鑑別為mGluR5反應者；及向鑑別為 mGluR5反應者之個體投與mGluR5括抗劑。 在又一態樣中，本發明包括一種用於測定患有FXS之個 體對用mGluR5拮抗劑治療之反應性的方法，該方法包括 提供來自患有FXS之個體的核酸樣本；及使用甲基化敏感 性分析儀測定該樣本中之X染色體脆折性智力遲鈍 155387.doc 201142293 1(FMR1)基因區之甲基化程度，其中若該樣本中所存在之 所有或基本上所有FMR1基因區已甲基化，則將該個體鑑 別為mGluR5反應者。 在又一態樣中，本發明包括一種測定患有FXS之個體對 用mGluR5拮抗劑治療之反應性的方法，該方法包括提供 來自患有FXS之個體的核酸樣本；測定該樣本中之X染色 體脆折性智力遲鈍1(FMR1)基因區之甲基化程度，其中若 所有FMR1基因區已甲基化，或若FMR1基因區之曱基化程 度測定為99.5%或99.5%以上，或具有8或8以上之Act，則 將該個體鑑別為mGluR5反應者；及向鑑別為mGluR5反應 者之個體投與mGluR5结抗劑。 在又一態樣中，本發明包括一種測定患有FXS之個體對 用mGluR5拮抗劑治療之反應性的方法，該方法包括提供 來自患有FXS之個體的核酸樣本；測定該樣本中之X染色 體脆折性智力遲鈍1(FMR1)基因區之曱基化程度，其中該 樣本中相對於對照之曱基化程度指示該個體是否為 mGluR5反應者。 在另一態樣中，本發明包括一種測定患有FXS之個體對 用mGluR5拮抗劑治療之反應性的方法，該方法包括自患 有X染色體脆折症之個體分離RNA樣本；進行檢定以偵測 該RNA樣本中之FMR1 mRNA轉錄本；及若未偵測到FMR1 mRNA轉錄本或偵測到之FMR1 mRNA表現量與對照相比降 低，則將該個體歸為mGluR5反應者。mRNA轉錄本可使用 此項技術中已知的任何方法來偵測，包括北方墨點分析、 155387.doc 201142293 反轉錄-聚合酶鏈式反應（RT-PCR)、RT-PCR ELISA、基於 TaqMan之定量RT-PCR(基於探針之定量RT-PCR)及基於 S YBR綠之定量RT-PCR 〇 在又一態樣中，本發明包括一種測定患有FXS之個體對 用mGluR5拮抗劑治療之反應性的方法；該方法包括自患 有X染色體脆折症之個體分離樣本；進行檢定以偵測該樣 本中之FMR1蛋白；及若該樣本缺乏FMR1蛋白（FMRP)之 存在或與對照相比量降低，則將該個體歸為mGluR5反應 者。FMRP偵測可藉由此項技術中已知的任何方法進行， 包括ELISA、流式細胞測量術、血液塗片測試（免疫染 色）、西方墨點法、HPLC及質譜分析。 在本文所述之任何方法中，mGluR5拮抗劑可為（-)-(3aR，4S，7aR)-4-羥基-4-間曱苯基乙炔基-八氫-吲哚-1-甲酸 曱酯。 【實施方式】 本發明部分地基於發現F M R1基因轉錄沉默之患有X染色 體脆折症（FXS)之個體可能對用mGluR5拮抗劑治療作出反 應。因此，本發明係針對一種預測患有FXS之個體是否為 mGluR5反應者的方法。相關樣本中之FMR1基因區之曱基 化程度、FMR1 mRNA表現缺乏及FMR1蛋白（FMRP)缺乏 可以個別或組合形式充當預測患者對mGluR5拮抗劑之反 應性的生物標記。 如本文所使用，「mGluR5反應者」為可能在用mGluR5拮 抗劑進行治療性處理後顯示改良之行為症狀的患有FXS之 155387.doc 201142293 個體，如使用異常行為檢核表-社區版（Aberrant Behavior Checklist-Community Edition ; ABC-C)行為量度所評定 (Bihm等人，Am. J. Ment Retard 96:209-211)。ABC-C 量測 檢查各種行為，包括行為刻板、活動過度、言語不當及興 趣狹窄。在用mGluR5拮抗劑治療後顯示ABC-C評分降低 之個體歸類為mGluR5反應者。亦可藉由其他方法評定行 為症狀，諸如臨床整體印象（Clinical Global Impression ; CGI)量表、社會反應量表（Social Responsiveness Scale ; SRS)或重複行為量表-修訂版（Repetitive Behavior Scale-Revised ; RBS-R) 。 根據此 等測試 ，顯 示改 良之個 體亦將 確定為mGluR5反應者。 mGluR5拮抗劑 本發明可用於測定哪些患有FXS之個體可能對用mGluR5 拮抗劑治療作出反應。mGluR5拮抗劑之實例包括肽模擬 物、蛋白質、肽、核酸、小分子或其他候選藥物。 mGluR5拮抗劑之一實例為（-)-(3aR，4S,7aR)-4-羥基-4-間甲 苯基乙炔基-八氫-吲哚-1-甲酸曱酯。mGluR5拮抗劑（-)-(3aR,4S，7aR)-4-羥基-4-間曱苯基乙炔基-八氫-吲哚-1-甲酸 曱酯以及其製造方法揭示於美國專利第7,3 48,3 53號中，該 專利之揭示内容以引用的方式併入本文中。mGluR5拮抗 劑（-)-(3aR,4S，7aR)-4-羥基-4-間曱苯基乙炔基-八氫引哚-1-曱酸甲酯具有以下結構式： 155387.doc 201142293
預期其他mGLUR5拮抗劑，諸如美國專利第7,348,353號 中所揭示之mGLUR5拮抗劑用於本發明方法中。 〇 在一實施例中，mGluR5拮抗劑為式（I)化合物：
其中： R1表示視情況經取代之烷基或視情況經取代之苯曱基；及 R2表示氫（H)、視情況經取代之烷基或視情況經取代之 苯甲基；或 R1及R2與其所連接之氮原子一起形成視情況經取代之具 有14個以下環原子之雜環； R3表不鹵素、烧基、烧氧基、烧基胺基或二烧基胺基； R4表示羥基（OH)、鹵素、烷基或烷氧基； Q表示CH、CR4或N ; V表示CH、CR4或N ; W表示CH、CR4或N ; X表示CH或N ; 155387.doc 201142293 Y表示CH、CR3或N ; Z表示CH2、NH或O ;及 其限制條件為Q、V及W不同時為N ; 呈游離鹼或酸加成鹽形式。 在另一實施例中，mGluR5括抗劑為式（π)化合物，其中 式（II)化合物為Q、V及W中之至少一者為N的式（I)化合 物；呈游離鹼或酸加成鹽形式。 在又一實施例中，mGluR5拮抗劑為式（in)化合物，其中 式（III)化合物為Y為CR3的式（II)化合物；呈游離鹼或酸加 成鹽形式。 下文疋義式（I)、式（II)及式（III)及相應中間化合物中所 存在之較佳取代基、較佳數值範圍或較佳基團範圍。 X較佳表示CH。 Y較佳表示CH或CR3，其中R3較佳表示鹵素，尤其較佳 為氣。 Z較佳表示NH。 R較佳表示氟、氯、Cm烷基，例如曱基。 R尤其較佳表示氯。 R1及R2較佳與其所連接之氮原子一起形成未經取代或經 取代之具有3至11個環原子及丨至4個雜原子之雜環；雜原 子係選自由N、〇、s組成之群；取代基係選自由側氧基 (=〇)、羥基、鹵素、胺基、硝基、氰基、Ci 4烧基、Ci 氧基、Cw烷氧基烷基、Ci_4烷氧基羰基、烷氧基羰基 烷基、Cm鹵烷基、C6_10芳基、鹵素_C6〗〇芳基、Cqo芳氧 155387.doc •10- 201142293 基及C6-1Q芳基- Cl_4燒基組成之群。 R及R與其所連接之氮料—起形成未經取代、經單取 代或經兩次取代之具有5至9個環原子及⑴個雜原子之雜 環；雜原子係選自由N及〇組成之群；取代基係選自由齒 素及C 1 · 4 基組成之群。 R及R較佳與其所連接之氮原子―起形成未經取代、經 單取代或經兩次取代之選自由以下組成之群的雜環：
〇 且取代基係選自由氟、氯、曱基、乙基、丙基、丁基、 三氟曱基、氟丙基及二氟丙基組成之群。 R1及R2較佳彼此獨立地表示視情況經Cl_c4烷氧基或鹵 ， 素取代之匚丨-匕烷基或苯甲基。 ' 上述一般或較佳基團定義適用於式（I)、式（II)及式（III) 之最終產物，且亦相應地適用於各情況下製備所需之起始 物質或中間物。此等基團定義可彼此任意組合，亦即包括 所提供之較佳範圍之間的組合。此外，個別定義可能不適 用0 155387.doc •11· 201142293 根據本發明，含有上述較佳含義之組合的式（j)、式（Η) 及式（III)化合物較佳。 根據本發明，含有上文所列出之尤其較佳含義之組合的 式（I)、式（II)及式（III)化合物尤其較佳。 根據本發明，含有上文所列出之極佳含義之組合的式⑴ 化合物極佳。 R2表示未經取代或經取代之雜環的式（1)、式（11)及式 (III)化合物較佳。 如以下所示之式（Ila)至式（IIe)化合物尤其較佳：
其中取代基具有本說明書中所提供之含義；
其中取代基具有本說明書中所提供之含義；
其中取代基具有本說明書中所提供之含義；
155387.doc 201142293 且其他取代基具 其中R4表示C^C：4烷基，較佳為曱基 有本說明書中所提供之含義；
(He) 其中R4表示鹵素’較佳為氯，且其他取代基具有本說明 書中所提供之含義。
本發明之其他較佳化合物具有如下所示之式（111勾至式 (Hie)：
其中所有取代基均具有本說明書中所提供之含義；
(勸)
其中取代基具有本說明書中所提供之含義；
{lilc) 其中取代基具有本說明書中所提供之含義；
(Hid) 155387.doc -13- 201142293 ，且其他取代基具 其中R表示C1-C4烧基，較佳為甲某 有本說明書中所提供之含義；
且其他取代基具有本說明 其中R4表示鹵素，較佳為氣， 書中所提供之含義。 特定式（I)、式（II)及式（ΙΠ)化合物包括本文所提供之實 例中所述之化合物。 在另一實施例中，mGluR5拮抗劑為式（iv)化合物：
其中 m為0或1 ; η為0或1 ;及 Α為經基； X為氣；及 Y為氫；或 A與X或與γ形成單鍵； R〇為氫、（Cl-4)烷基、（Ci 4)烷氧基、三氟甲基、鹵素、 氰基、硝基、_COORl(其中RiS(Cl 4)烷基）或-cor2(其中 R2為氫或（Cw)烷基）；及 155387.doc * 14 · 201142293 R 為-COR3、-COOR3、-CONR4R^ _s〇2R6，其中 ^為 (Ci·4)烧基、（(^3.7)¾烧基或視情泥經取代之苯基、2.处咬 基或2-嘆吩基；I及&獨立地為氫或（Ci_4)烷基，且以為 (Ci_4)烧基、（C3·7)^烧基或視情況經取代之苯基.r，為气 或（Cw)烷基；及 R”為氫或（Cm)烷基；或 R'與R"—起形成基團-CH2-(CH2)m-，其中m為〇、1或2, 在該情況下η及m中之一者不為〇 ; 其限制條件為當η為0時，R〇不為氫、三氣甲基及甲氧 基；A為羥基；X及Y均為氫；r為c〇〇Et ;及尺，與R"一起 形成基團-(CH2)2_， 呈游離鹼或酸加成鹽形式。 例示性式（IV)化合物包括： (_)-(3aR，4S，7aR)-4-羥基_4_間曱苯基乙炔基-八氫-吲 哚-1 -曱酸甲酯 (-)-(3aR，4S，7aR)-4-羥基_4·間曱苯基乙炔基八氫-吲 哚-1 -甲酸乙酯 (-)-(3aR，4S，7aR)-呋喃-2-基_(4-羥基_4-間曱苯基乙炔基- 八氯-°引π朵-1 -基）-曱嗣 (±)-(3aRS，4SR，7aRS)-4-(3-氯苯基乙炔基）_4_羥基 _八氫 _ 吲哚-1-曱酸乙酯 (士）-(3aRS，4SR，7aRS)-4-(3-氟-苯基乙炔基）_4_ 經基 _八氫 _ 吲哚-1-曱酸乙酯 (3aRS，4SR，7aRS)-4-羥基_4_苯基乙炔基_八氫吲哚]•甲 155387.doc •15· 201142293 酸（S)(四氫呋喃-3-基）酯 (3 aRS，4 SR，7aRS)-4 -經基-4 -苯基乙快基-八氣-π引π朵_ 1 _甲 酸（R)(四氫呋喃-3-基）酯 (3aRS，4SR，7aRS)-4-經基-4-(3 -氣苯基乙炔基）_八氫_0引 哚-1-甲酸（S)(四氫呋喃-3-基）酯 (±)-(3aRS，4SR，7aRS)-4-羥基-4-間甲苯基乙炔基-八氫_„引 哚-1-甲酸乙酯 (±)-(3aRS，4SR，7aRS)-4-(4 -氟-苯基乙炔基）-4-經基—八氫 _ 吲哚-1 -甲酸乙酯 (土）_(3牡1^8,4811，73尺8)-4-(3-氣苯基乙快基）-4-經基_1_甲項 醯基-八氫-吲哚 (±)-(3aRS，7aRS)-4-苯基乙炔基-2,3,3&，6,7,7&-六氫_。引 哚-1-甲酸乙酯及（±)-(RS)-4-苯基乙炔基_2,3,5,6,7,7&-六氯_ π弓丨η朵-1 -甲酸乙酉旨 (±)-(3RS，7aRS)-2,2,2-三氟-1-(4-苯基乙炔基 _2,3,3a 6, 7,7a-六氫-吲哚-1-基）-乙酮 (土）-(RS)_4_間曱笨基乙炔基_2,3,5,6,7,7a-六氫弓卜朵小甲 酸乙酯 (±)-(31^,7&118)-4-間甲苯基乙炔基_2,3,33,6,7,7&-六氫_11引 哚-1 -甲酸乙酯 (±)-(3RS，7aRS)-4-(4-氣-苯基乙快基）-2,3,3a，6,7,7a-六氫 _ 吲哚_ 1 -甲酸乙酯 (士）-(3RS，7aRS)-4-(2-氟-苯基乙快基）_2,3,3a,6,7,7a-六氫 _ α引。朵-1 -甲酸乙醋 155387.doc •16- 201142293 (±)-(3118,7&1^)-4-(3-1-苯基乙炔基）_2 3 3a 6,7,7a_六氫_ 吲哚-1-甲酸乙酯 (±)-(RS)-4-(3氟苯基乙炔基）_2,3,5,6,7,7a-六氫-0引哚-1-甲酸乙酯 (±)-(3RS，7aRS)-4-(3-曱氧基 _ 苯基乙快基）_2,3,3a，6,7,7a- 六氫-吲哚-1-甲酸乙酯 (±)-(RS)-4-(3-f 氧基-苯基乙快基）_2,3,5,6,7,7&-六氫-°引 哚-1-甲酸乙酯 (±)-(3&118,4118,7&811)-4-羥基-4_苯基乙炔基_八氫-異吲 哚-2-曱酸乙酯 (土 )-(3aRS，4RS，7aSR)-4-羥基·4-間甲苯基乙炔基-八氫-異 吲哚-2-曱酸乙酯 (士)-(3aRS，4RS，7aSR)-4-羥基-4-對甲苯基乙炔基-八氫-異 吲哚-2-曱酸乙酯 (±)-(3aRS，4RS，7aSR)-4-(3-氛基-苯基乙炔基）_4_ 羥基八 氫-異吲哚-2-甲酸乙酯 (±)-(3aRS，4RS，7aSR)-4-羥基-4-(3-甲氧基-苯基乙炔基_ 八氫-異吲哚-2-曱酸乙酯 (±)-(3aRS，4RS，7aSR)-4-(3U 基乙炔基）_4_經基-八氫_ 異吲哚-2-甲酸乙酯 (±)-(3aRS，4RS，7aSR)-4-羥基-4-苯基乙快基-八氫-異, 哚-2-甲酸第三丁酯 (±)-(3aRS，4RS，7aSR)-4-羥基_4·間甲苯基乙炔基-八氫_異 吲哚-2-曱酸第三丁酯 155387.doc -17- 201142293 (土)-(3aRS，4RS，7aSR)-4-經基-4 -間甲苯基乙快基-八氣-異 吲哚-2-甲酸甲酯 (±)-(3aRS，4RS，7aSR)-呋喃-2-基-(4-羥基-4-間曱苯基乙 块基-八風-異0弓丨0朵-2-基）-甲嗣 (±)-(3aRS，4RS，7aSR) -環丙基-(4 -經基-4-間曱苯基乙快 基-八風-異°引β朵-2-基）-甲嗣 (土)_(3&尺8,4尺8,738尺)-(4-經基-4-間甲苯基乙快基-八氫_ 異°弓丨0朵-2 -基）-0比〇定-3 -基-曱嗣 (±)-((lSR，3SR)-3-羥基-3-間甲苯基乙炔基-環己基）_曱 基-胺基曱酸甲酯及（±H(lRS，3SR)-3-羥基-3-間甲苯基乙炔 基-環己基基-胺基甲酸甲酉旨 (土)-(lRS，3SR)-(3-羥基-3-間曱苯基乙炔基-環己基）-(4-曱 氧基-苯曱基）-胺基曱酸乙酯 (土）-(lRS，3RS)-(3-羥基-3-間曱苯基乙炔基-環己基）-(4-甲 氧基-苯曱基）-胺基曱酸乙酯 (±)-[(lRS，3SR)-3-羥基-3-(3-曱氧基-苯基乙炔基）-5,5-二 曱基-環己基]-曱基-胺基甲酸甲酯 (±)_(lRS，3SR)-(3-羥基·5,5-二曱基-3 -間甲苯基乙炔基-環己基）-曱基-胺基曱酸曱酯 (±)-[(lRS，3SR)-3-(3-氟-苯基乙炔基）_3_羥基-5,5-二甲基-環己基]-曱基-胺基曱酸曱酯 (±)-[(lRS，3RS)-3-(3-氟-苯基乙炔基）_3_羥基-環己基]-曱 基-胺基曱酸甲酯 (±H(lRS，3SR)-3-(3-氟-苯基乙炔基卜3-羥基-環己基]-曱 155387.doc •18- 201142293 基-胺基甲酸曱酯 (±)-[(lRS，3RS)-3-羥基-3-(3_甲氧基-苯基乙炔基）_環己 基]-曱基-胺基甲酸甲酯 (士）-[(1尺8,3 81〇-3-羥基-3-(3-曱氧基-苯基乙炔基）_環己 基]-曱基-胺基甲酸甲酯 (±)-[(lRS，3RS)-3-(3-氯-苯基乙块基）_3_羥基_環己基]_曱 基-胺基曱酸甲酯 (士）-[(11^，3 811)-3-(3-氯-苯基乙快基）_3_羥基_環己基]_曱 基-胺基甲酸甲酯 (±)-(lRS，3RS)-N-(3-羥基_3_間甲苯基乙炔基_環己基）_乙 醯胺 (士）-(lRS，3SR)-N-(3-羥基_3_間曱苯基乙炔基_環己基）乙 醯胺 (±)-(lRS，3RS)-(3-羥基-3-間甲苯基乙炔基_環己基）·胺基 甲酸乙酯 (士)-(lRS，3SR)-(3-羥基_3_間曱苯基乙炔基環己基）_胺基 甲酸乙酯 (士)-(lRS，3RS)-[3-(3-氟·苯基乙炔基）_3_羥基_環己基]_胺 基甲酸乙酯 (士）-(lRS’3SR)-[3-(3-氟-苯基乙炔基）羥基_環己基]_胺 基曱酸乙酯 (±)-(lRS，3RS)-[3-(3-曱氧基_苯基乙炔基）_3_羥基·環己 基]-胺基甲酸乙酯 (d：HlRS，3RS)-N-[3-(3-氟-苯基乙炔基）_3_羥基_環己基 -19- 155387.doc 201142293 乙醯胺 (土 )-(lRS，3SR)-N-[3-(3-氟-苯基乙炔基）_3_羥基-環己基 乙醯胺 (±)-(lRS，3SR)-[3-羥基-3_(3-曱氧基-苯基乙炔基）_環己 基]-胺基甲酸乙酯 (±)-(lRS，3RS)-N-[3-羥基-3-(3-甲氧基-苯基乙炔基）_環 己基]-乙醯胺 (土 )-(lRS，3SR)-N-[3-羥基-3-(3-曱氧基-苯基乙炔基）_環 己基]•乙醯胺 (±)-(lRS，3RS)-[3-羥基-3-(3-甲氧基-苯基乙炔基）_環己 基]-胺基甲酸第三丁酯 (±)-(lRS，3SR)-[3_羥基-3-(3 -曱氧基-苯基乙炔基）_環己 基]-胺基曱酸第三丁酯 (±)-(lRS，3RS)-(3-羥基-3-間曱笨基乙炔基_環己基胺基 甲酸第三丁酯 (±)-(lRS，3SR)-(3-羥基間曱苯基乙炔基_環己基）_胺基 甲酸第三丁酯 ^-(㈣’如⑷…-氟-苯基乙炔基卜㈣基-環己基卜胺 基甲酸第三丁酯 (±)-(lRS，3SR)-(3♦氟_苯基乙块基）_3_經基環己基]胺 基甲酸第三丁酯 (±)-(11^，31^)-[3七_氣_苯基乙炔基）_3_經基_環己基]_胺 基甲酸曱酯 ㈤-㈣呂…尺印办氟-苯基乙炔基卜經基環己基卜胺 155387.doc •20· 201142293 基甲酸甲酯 (±)-(3-苯基乙炔基-環己-2-稀基）-胺基曱酸乙酯及（±)_3_ 苯基乙炔基-環己-3-稀基）-胺基甲酸乙酯 (±)_曱基-(3 -苯基乙块基-環己_3_稀基）-胺基甲駿乙酯 (±)-(4aRS，5RS，8aSR)-5-羥基-5-苯基乙炔基-八氫-喹啉 -1-曱酸乙酯 (±)-[(4aRS，5SR，8aSR)-5-(3-氯-苯基乙炔基）_5_ 羥基-八 風-喧琳-1-基]-11 夫喃-2-基-曱嗣 (±)-[(4aRS，5RS，8aSR)-5-(3-氣-苯基乙炔基）_5_ 羥基-八 鼠·啥琳基]-咬°南-2-基-甲嗣 (±)-(4&1^，5118,8&31〇-5-(3-氣-苯基乙炔基）_5_羥基-八氫-喹啉-1-曱酸第三丁酯 (土）-[(4aRS，5 SR，8aSR)-5-(3 -氯-苯基乙快基）_5_ 經基-八 鼠-啥嚇 -1 -基]-嗎琳-4 -基-曱嗣 (土)-[(4&118,5 SR，8aSR)-5-(3 -氣-苯基乙快基）_5_ 經基八 氫基]-(4-曱基-旅嗪-1-基）-甲酮 (±)-(4aRS，5RS，8aSR)-5-(3 -氯-苯基乙炔基）_5_ 經基·八氫 _ 喹啉-1-甲酸乙酯及（±)-(4aRS，5SR，8aSR)-5-(3-氯-苯基乙炔 基）_ 5 -經基-八氮-喧琳-1 -甲酸乙S旨 (±)-(4aRS，5SR，8aSR)-5-羥基-5-間甲苯基乙炔基-八氫_喧 啉-1-甲酸乙酯 (土 )-(4aRS，5RS，8aSR)-5-羥基-5-間曱苯基乙炔基_八氫_啥 啉-1-甲酸乙酯。 在另一實施例中，mGluR調節劑為式（v)化合物： 155387.doc -21- 201142293
其中： R1表示氫或烷基； R2表示未經取代或經取代之雜環，或 R表示未經取代或經取代之芳基. R3表示烷基或鹵素； X表示單鍵或烷二基H兄間雜有―或多4固氧原子或 幾基或碳氧基，呈游離驗或酸加成鹽形式。 例示性式（V)化合物包括： 呋喃-3-曱酸[(lS，3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基）_3_羥基-環己 基]-醯胺 呋喃-2-甲酸[(1R，3R)_3_(3•氯-苯基乙炔基）-3-經基_環己 基]-醯胺 吱喃-2-曱酸[(lS，3S)_3_(3_氣-苯基乙炔基）_3_經基-環己 基]-醯胺 3H-味。坐_4_甲酸[(1R，3R)_3_(3_氯笨基乙炔基）_3'經基_ 環己基]-醯胺 3H_咪唑_4_f酸[(1S，3S)_3-(3_氯-苯基乙炔基）_3-羥基-環 己基]-醯胺 办_3-甲酸[(1R，3R)_3_(3_氯-苯基乙炔基）-3-4H-[1，2,4]彡吵 羥基-環己基l·鱗月安 155387.doc • 22- 201142293 4H-[1,2,4]三。坐-3 -甲酸[(lS，3S)-3-(3 -氯-笨基乙炔基）-3-羥基-環己基]-醯胺 2-曱基-呋喃-3-甲酸[(士)-(1R，3R)_3-(3-氯-苯基乙炔基）-3-羥基-環己基]-醢胺 N-[(±)-(lR，3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基）-3-羥基-環己基] -3,4-二氟-苯曱醯胺 苯并[1，3]間二氧雜環戊烯-2-甲酸[(±)-(lR，3R)-3-(3-氣-苯基乙炔基）-3-羥基-環己基]-醯胺 5-曱基-吡嗪-2-曱酸[(士)-(lR，3R)-3-(3-氣-苯基乙炔基）_3_ 羥基-環己基]-醯胺 喹喏啉-2-甲酸[(±)-(lR，3R)-3-(3-氣-苯基乙炔基）_3_經 基-環己基]-醯胺 苯并0夫喃-2-甲酸[(土)-(lR，3R)-3-(3 -氯-苯基乙块基）_3_經 基-環己基]-醯胺 苯并噁唑-2_甲酸[(±)-(lR，3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基經 基-環己基]-醯胺 2,5-二曱基-呋喃-3-甲酸[(±)-(lR,3R)-3-(3-氣-苯基乙块 基）-3-羥基-環己基]-醯胺 (R,S) -四氫-0夫喃-3 -甲酸[(±)-(lR，3R)-3-(3 -氣-苯基乙咏 基）-3-羥基-環己基]-醯胺 呋喃-3-曱酸（（1R.SRJ-S-羥基-S-間甲苯基乙炔基-環已 基-酿胺 呋喃-3-曱酸（（lS，3S)-3-羥基-3-間曱苯基乙炔基-環己 基）-酿胺 155387.doc -23- 201142293 呋喃_3-甲酸（(士Hi R.SRJ-S_羥基-s-間甲苯基乙炔基-環 己基_醯胺 吱喃_2-曱酸（（1R，3R)·3-羥基_3_間甲苯基乙炔基-環己 基）-醯胺 吱喃·2-曱酸（（1S，3S)·3-羥基_3·間曱苯基乙炔基-環己 基）-醯胺 吱鳴_2_曱酸（(士 M1R，3R)-3·羥基-3-間曱苯基乙炔基-環 己基）-醯胺 異噁唑-5-甲酸（（1R，3R)_3_經基_3_間曱苯基乙炔基-環己 基）-酿胺 異鳴唑_5-甲酸（（lS，3S)-3-羥基-3-間曱苯基乙炔基-環己 基）-醯胺 異噁唑-5-甲酸（(士 )-(1R，3R)_3-羥基_3_間甲苯基乙炔基-環己基）-醯胺 5-曱基-0比°秦-2-甲酸（(土）_(1尺，311)-3 -經基-3-間曱苯基乙 炔基-環己基）-醯胺 4H-[1，2,4]三唑-3-曱酸（(土）-(lR，3R)-3-羥基-3-間甲苯基 乙炔基-環己基）-醯胺 3H-咪唑-4-甲酸（(±)-(lR,3R)-3-羥基-3-間甲苯基乙炔基_ 環己基）-醯胺 四氫-哌喃-4-曱酸（(土）-(lR，3R)-3-羥基-3-間曱苯基乙炔 基-環己基）-醯胺 1-甲基-1H-咪唑-4-甲酸（(±MlR，3R)-3-羥基-3-間甲苯基 乙炔基-環己基）-醯胺 -24· 155387.doc 201142293 (R,S)·四氫-呋喃-2-曱酸（(土）-(1R，3R)_3-經基-3·間甲苯基 乙炔基-環己基）-酿胺 (R，S)·四氫-0夫喃冬甲酸（(土）_(1R，3R)_3-羥基-3-間甲苯基 乙炔基-環己基）-酿胺 呋喃-3-甲酸[(1R，3R)_3_(3_敦-苯基乙炔基）_3·經基-環己 基]-醯胺 呋喃-3-甲酸[(1S，3S)_3_(3_氣-苯基乙炔基）_3_經基-環己 基]-醯胺 Ο 吱嗔_2_甲酸[(1R，3R)_3_(3_氟-苯基乙炔基）-3-經基-環己 基]-醯胺 吱喃_2_甲酸[(1S，3S)-3_(3_氟-苯基乙块基）-3-經基-環己 基]-醯胺 311-〇米0坐-4-甲酸[(±)_(1尺，3尺)-3-(3-敗-苯基乙块基）_3-經 基-環己基]_醯@ !^-[(18,31§)-3-(3_乳_本基乙快基）-3-經基-環己基]-3,4-二 g 氟-苯甲醯胺 1^-[(1尺，3风）-3-(3-氯_本基乙快基）-3-經基-環己基]-3,4-二 氟-苯甲醯胺 吡啶-2-f酸[(1S，3S)_3_(3-氯-苯基乙炔基）_3-羥基-環己 基]-醯胺 吡啶-2-甲酸[(1R，3R)_3_(3-氣·苯基乙炔基）-3_羥基-環己 基]-醯胺 N-[(lS，3S)-3-(3_氣-苯基乙炔基）_3_羥基-環己基]·菸鹼醯胺 N-[(lR，3Rh3_(3 -氯-苯基乙炔基）-3_羥基-環己基]-菸驗 -25- 155387.doc 201142293 酿胺 苯并[1，3]間二氧雜環戊烯-2-甲酸[(1S，3S)-3_(3-氯·苯基 乙炔基）-3-羥基-環己基]-醯胺 5-曱基-吡嗪-2-曱酸[(lS，3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基）-3-羥 基-環己基]-醯胺 2_曱基-吱喘-3 -曱酸[(lS，3S)-3-(3 -氣-苯基乙炔基）-3-經 基-環己基]-醯胺 (R) -四氫-呋喃-2-甲酸[(1R，3R)-3_(3-氣-苯基乙快基）-3-羥基-環己基]-醯胺 (S) -四氮夫喃_2-甲酸[(1 R，3R)_3 _(3 -氣-本基乙炔基）-3_ 羥基-環己基]-醯胺 異°惡°坐-5 -曱酸[(1 S，3S)-3-(3 -氣-苯基乙快基）-3-經基-環 己基]-醯胺 5-甲基_吡°秦-2-甲酸[(1R，3R)_3_(3_氣苯基乙炔基）-3_羥 基-環己基]-醯胺 2_曱基-咬喃-3 -甲酸[(1R，3R)_3_(3_氯-苯基乙炔基）-3-羥 基-環己基]-醯胺 異„惡β坐_5-甲酸[(1R，3R)_3_(3_氯-苯基乙炔基）_3_羥基-環 己基]-醯胺 5_氯_咬喃-2-甲酸[(1R，3R)-3_(3_氣-笨基乙炔基）-3_經基_ 環己基]-醯胺 5_氯_吱喃_2_甲酸[(lS，3S)_3_(3_氯-苯基乙快基）_3_經基_ 環己基]-醯胺 (S)-四氫-呋喃-3-甲酸[(1R，3R)-3-(3_氣-苯基乙炔基）-3_ -26 - 155387.doc 201142293 羥基-環己基]-醯胺 (R)-四氫-呋喃酸[(1ί1，3Κ>3-(3-氣·苯基乙炔基）-3-羥基-環己基l·醯胺
Kf_|XlS，3S；)-3-(3-氯-苯基乙炔基）_3_羥基-環己基]_異菸鹼 醯胺 氯-苯基乙炔基）_3·羥基-環己基]_異菸 驗醯胺 3 5_二氟比啶-2-甲酸[(1R，3R)_3-(3-氯-苯基乙炔基）-3-羥基-環己基l·醯胺 3 5_二氟比咬-2-甲酸[(1S，3S)-3_(3-氣-苯基乙炔基）-3-經 基-環己基l·醯胺 6曱基_0比唆_2- f酸[GS，38)-3^3 -氣-苯基乙炔基）_3_經 基-環己基]-醯胺 „ L # 酸[(1尺，31〇-3-(3-氣-苯基乙炔基）_3_羥 6-曱基比咬Ί 基-環己基]-醯胺 # s氣。比咬2-甲酸[(iR，3R)_3-(3_風本基乙炔基）-3_經基_ 環己基]-醯胺 δ氯吡啶_2_甲酸[(lS，3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基）-3·羥基_ 環己基]-醯胺
。田酸丨（iR，3R)_3-(3_氣-苯基乙炔基）-3_羥基-δ-氯-吡啶-2-〒眼L 環己基]-醢胺 > w甘
0 φ酸[(18,3 8)-3-(3_虱-本基乙炔基）-3-羥基-6-氯-吡啶-2- T 環己基]_醯胺 «比洛-2-甲酸[(lR，3R)-3-(3 -氣-苯基乙快 5-氯-1-甲基 155387.doc -27- 201142293 基）-3-羥基-環己基]·•醯胺 5氣4曱基_1H_吡咯-2-曱酸[(lS，3S)-3-(3-氣-苯基乙炔 基）-3-羥基-環己基]-醯胺 5氣1H 0比哈_2-甲酸氣笨基乙诀基）-3-經 基-環己基]-醯胺 5-氯-1H-吡咯-2_甲酸[(1S，3S)_3_(3_氣-笨基乙炔基）_3_羥 基-環己基]-醯胺 N_[(ls，3S；)-3-(3-氯-苯基乙炔基）-3_羥基-環己基]_4_二甲 基胺基-苯甲醯胺 1H-0比0各-3-曱酸[(lS，3S)_3-(3 -氣-本基乙炔基）_3_經基-環 己基]-醯胺 N-[(lS，3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基）-3 -經基環己基]-4-曱 基-苯甲醯胺 N-[(lS,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基）-3-羥基-環己基]_4-曱 基-苯甲醯胺 N-[(lS，3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基）-3-羥基-環己基]_3_氣_ 苯甲醯胺 N-[(lS，3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基）-3-羥基-環己基]_2_乙 基•丁醯胺 N-[(lS，3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基）_3_羥基_環己基]_4_(2,5_ 二甲氧基-苯基）-4-側氧基-丁醯胺 2-(2-苯甲氧基-乙氧基）-N-[(lS，3S)-3-(3-氯-苯基乙炔 基）-3-羥基-環己基]_乙醯胺 N-[(lS，3S)-3_(3-氣，苯基乙炔基）_3_羥基-環己基]_2•苯 155387.doc -28- 201142293 基-乙醯胺 N-[(lS，3S)_3-(3-氯-苯基乙炔基）·3_羥基-環己基]-3-(1Η- 吲哚-4-基）-丙醯胺 2-苯并[1，3]間二氧雜環戊烯-5-基-N-[(lS，3S)-3-(3-氯-苯 基乙炔基）-3-羥基·環己基]-乙醯胺 N-[(lS，3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基）-3-羥基-環己基]-2-苯氧 基-丙醯胺 N-[(lS，3S)-3-(3 -氯-苯基乙炔基）-3-羥基-環己基]-2-(2-氟-苯基）-乙醯胺 5-羥基-1H-吲哚-2-甲酸[(lS,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基）-3-羥基-環己基]-醯胺 卜曱基-1H-吡咯-2-甲酸[(lS,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基）-3- 羥基-環己基]-醯胺 N-[(lS，3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基）-3-羥基-環己基]-對苯二 甲酸甲酯 N-[(lS，3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基）-3-羥基-環己基]-2-(2-三 氣曱氧基-苯基）-乙酿胺 5-氯-N-[(lS,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基）-3-羥基-環己基]-2- 羥基-苯甲醯胺 N-[(lS,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基）-3-羥基-環己基]-4-羥 基笨甲醯胺 N-[(lS，3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基）-3-羥基-環己基]-2-羥 基-笨甲醯胺 4-胺基-N-[(lS,3S)-3-(3-氣-苯基乙炔基）-3_羥基-環己 155387.doc • 29- 201142293 基]-苯甲醯胺 4-胺基-5-氣-N-[(lS，3S)-3-(3_氣-苯基乙炔基）_3_羥基_% 胺基-4-氣-N-[(lS，3S)-3-(3-氣-苯基乙炔基）_3_羥基_環己 基]-苯甲醯胺 3-胺基-N-[(lS，3S)-3-(3j _苯基乙炔基）_3_羥基-環己 基]-4-曱基苯甲醯胺 2- 胺基-N-[(lS，3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基）_3_羥基_環己 基]-菸鹼醯胺 N-[(lS，3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基）_3_羥基-環己基]_4_經 基-3-甲氧基-苯甲醯胺 N-[(lS，3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基）_3_經基-環己基]_2—氟_ 苯曱醯胺 N-[(lS,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基;)_3_羥基-環己基]-4-曱績 醯基-苯甲醯胺 吡啶-2-甲酸[(lS，3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基）-3-羥基-環己 基]-醯胺 3- 胺基-吡嗪-2-甲酸[(lS,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基）-3-羥 基-環己基]-醯胺 6-胺基-N-[(lS，3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基）-3_羥基-環己 基]-终驗酿胺 4- (4-胺基-苯曱醯基胺基）-苯甲酸[(1尺，3尺)-3-(3-氯-苯基 乙炔基）-3-羥基-環己基]-醯胺 2,6-二側氧基-l,2,3,6-四氫-嘧啶-4-甲酸[(1S，3S)_3-(3-氯-苯基乙炔基）-3-羥基-環己基]-醯胺 155387.doc -30- 201142293 N-[(lS，3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基）_3_羥基_環己基]_異菸鹼 醯胺 3 -氯-N-[( 1 S，3S)-3-(3 -氣-苯基乙炔基）_3_經基-環己基]_ 苯曱醯胺 N-[(lS，3S)-3-(3-氣-苯基乙炔基）_3_羥基-環己基]_2,3_二 . 曱氧基-苯甲醯胺 N-[(lS，3S)-3-(3-氣·苯基乙炔基）-3-羥基-環己基]-4-側氧 基-4-苯基-丁醯胺 〇 2-氯-N-[(lS，3S)-3-(3-氣-苯基乙炔基）_3_羥基-環己基]_ 菸鹼醯胺 5-漠-N-[(lS,3S)-3-(3 -氯·苯基乙炔基）-3-羥基環己基]- 菸鹼醯胺 異喹啉-1-甲酸[(1S，3S)_3_(3_氣-苯基乙炔基）-3_羥基-環 己基]-醯胺 0比嗓_2_甲酸[(lS，3S)-3-(3-氯-本基乙炔基）_3-幾基-環己 f $ 基]*"酿胺 U 3_苯甲醯基-吡啶-2-甲酸[(1S，3S)-3-(3-氣-苯基乙炔基） -3-羥基·環己基]-醯胺 . N_[(1S 3Sp3-0氯-苯基乙炔基羥基-環己基]-2-曱 基-菸鹼醯胺 么9申酸[(1S，3S)-3-(3_氣-苯基乙炔基）_3_羥基-環 己基]-醯胺 噠嗪_4_甲酸[(1S，3S)-3_(3-氣-苯基乙炔基）·3-羥基-環己 基]-醯胺 -31- 155387.doc 201142293 N-[(lS，3S)-3-〇氯-苯基乙炔基）-3-經基·環己基]_2_甲基 硫基·終驗醢胺 N-[(lS，3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基）-3-經基-環己基]-4-三氟 甲基-於驗醢胺 2-氯-N-[(lS，3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基）_3_羥基-環己基]_ 異菸鹼醯胺 2-氯-N-[(lS，3S)-3-(3-氣-苯基乙炔基）_3_羥基-環己基]-6-甲基-於驗醯胺 6-氯-1^-[(18,3 3)-3-(3-氯-苯基乙炔基）-3-經基-環己基]-於驗醯胺 2-氯-N-[(lS，3S)-3-(3 -氯-苯基乙快基）-3-經基-環己基]_6_ 曱基-異菸鹼醯胺 N-[(1S 3S)-3-(3-氣-苯基乙块基）-3-經基衣己基]_2_(4,5-二曱氧基_3_側氧基-1，3-二氫-異苯并呋喃_卜基）_乙醯胺 1，4,5,6--四氫-環戊二烯幷吡唑·S-甲酸[(1S，3S)_3-(3_氣-苯基乙炔基）-3-羥基-環己基醯胺 N-[(lS，3S)-3-(3 -氯-苯基乙炔基）_3_幾基-環己基] 吲哚-2-基）-丙醯胺 6_[(1S，3S)_3_(3-氯-苯基乙炔基）-3_羥基-環己基胺曱醯 基]-吡啶-2-曱酸異丙酯 喹啉-6-曱酸[(lS，3S)-3-(3-氯-苯基6炔基）-3-羥基-環己 基]-醯胺 5_甲基-異噁唑-4-甲酸[(1S，3S)-3-(3_氯-笨基乙炔基）-3- 經基-環己基醯胺 • 32- 155387.doc 201142293 本弁σ夫鳴-3 -甲酸[(lS，3S)-3-(3 -氣-苯基乙快基）-3 -幾基-環己基]-醯胺 N-[(lS，3S)-3-(3-氯-苯基乙块基）_3、經基_環己基]-2-(2-甲 氧基-苯氧基乙醯胺。 在另一實施例中，mGluR調節劑為式（VI)化合物：
其中： R1表示氫或炫基； R2表示未經取代或經取代之雜環，或 R2表示未經取代或經取代之芳基； R3表不烧基或鹵素； 呈游離鹼或酸加成鹽形式。 Q mGluR5拮抗劑之其他實例包括如WO 2004八)14881中所 定義之式（I)化合物及如w〇 2007/021575中所定義之式（I) 化合物；此等公開案之内容以引用的方式併入本文中。 本發明可用於測定哪些患有FXS之個體可能對用mGiuR5 拮抗劑治療作出反應。mGluR5拮抗劑之實例包括肽模擬 物、蛋白質、肽、核酸、小分子或其他候選藥物。 mGluR5拮抗劑之一實例為㈠_(3aR，4S，7aR)_4_羥基_4_間甲 苯基乙炔基-八氫-吲哚曱酸曱酯。mGluR5拮抗劑 (-)-(3aR，4S，7aR)-4-羥基_4_間曱苯基乙炔基_八氫』引哚 155387.doc -33- 201142293 甲酸曱酯以及其製造方法揭示於美國專利第7,348,353號 中’該專利之揭示内容以引用的方式併入本文中。 mGluR5括抗劑（-H3aR，4S，7aR)-4-經基-4-間曱苯基乙炔基-八氫-吲哚-丨_甲酸甲酯具有以下結構式：
預期其他mGLUR5 ’諸如美國專利第7,348,353號中所揭 示之mGLUR5括抗劑用於本發明方法中。 在一實施例中，mGluR5拮抗劑為式（I)化合物：
其中： R表不視情況經取代之烷基或視情況經取代之苯甲基；及 R2表示氫（H)、視情況經取代之烷基或視情況經取代之 苯甲基；或 R1及R2與其所連接之氮原子一起形成視情況經取代之具 有14個以下環原子之雜環· R表示！i素、燒基、垸氧基、烧基胺基或二烷基胺基； 155387.doc -34- 201142293 R4表示羥基（OH)、鹵素、烷基或烷氧基； Q表示CH、CR4或N ; V表示CH、CR4或N ; W表示CH、CR4或N ;
• X表示CH或N
- Y表示CH、CR3或N Z表示CH2、NH或Ο ;及 其限制條件為Q、V及W不同時為N ; ❹ 呈游離鹼或酸加成鹽形式。 在另一實施例中，mGluR5拮抗劑為式（II)化合物，其中 式（II)化合物為Q、V及W中之至少一者為N的式（I)化合 物；呈游離鹼或酸加成鹽形式。 在又一實施例中，mGluR5拮抗劑為式（III)化合物，其中 式（III)化合物為Y為CR3的式（II)化合物；呈游離鹼或酸加 成鹽形式。 Q 下文定義式（I)、式（II)及式（III)及相應中間化合物中所 存在之較佳取代基、較佳數值範圍，或較佳基團範圍。 X較佳表示CH。 ' Y較佳表示CH或CR3，其中R3較佳表示鹵素，尤其較佳 • 為氯。 Z較佳表示NH。 R3較佳表示敗、氯、Ci_4烧基，例如曱基。 R3尤其較佳表示氣。 R1及R2較佳與其所連接之氮原子一起形成未經取代或經 155387.doc -35- 201142293 取代之具有3至11個環原子及1至4個雜原子之雜環；雜原 子係選自由N、Ο、S組成之群；取代基係選自由側氧基 (=〇)、羥基、鹵素、胺基、硝基、氰基、Ci 4烷基、Ci 4烷 氧基、Cw烷氧基烷基、Cm烷氧基羰基、Cl 4烷氧基羰基 烷基、Ci.4鹵烷基、C6-10芳基、齒素_c6i〇芳基、c6i〇芳氧 基及芳基-C!·4烧基組成之群。 R及R與其所連接之氮原子一起形成未經取代、經單取 代或經兩次取代之具有5至9個環原子及丨至3個雜原子之雜 環；雜原子係選自由N及〇組成之群；取代基係選自由函 素及C 1 _ 4烧基組成之群。
一起形成未經取代、經
且取代基係選自由氟、氯、曱基、乙』 三氟甲基、氟丙基及二氟丙基組成之群。 R1及R2較佳彼此獨立地表示視情況經 素取代之C1 - C 4炫基或笨甲基。 三氟甲基、 乙基、丙基、丁基、 視情況經<:1-(:4烷氧基或鹵 155387.doc -36 - 201142293 上述一般及較佳基團定義適用於式（1)、式（II)及式（ΠΙ) 之最終產物’且亦相應地適用於各情況下製備所需之起始 物質或中間物。此等基團定義可彼此任意組合，亦即包括 所提供之較佳範圍之間的組合。此外，個別定義可能不適 用。 根據本發明，含有上述較佳含義之組合的式G)、式（π) 及式（III)化合物較佳。 根據本發明，含有上文所列出之尤其較佳含義之組合的 式⑴、式（II)及式（III)化合物尤其較佳。 根據本發明，含有上文所列出之極佳含義之組合的式⑴ 化合物極佳。 R2表示未經取代或經取代之雜環的式（1)、式（π)及式 (ΠΙ)化合物較佳。 如以下所示之式（Ila)至式（lie)化合物尤其較佳：
其中取代基具有本說明書中所提供之含義；
{lib) 其中取代基具有本說明書中所提供之含義；
155387.doc -37- 201142293 其中取代基具有本說明書中所提供之含義 R*、
(Hd) 且其他取代基具 其中R4表示CrC4烷基，較佳為曱基 有本說明書中所提供之含義；
(He) 其中R4表示鹵素，較佳為氣， 且其他取代基具有本說明 書中所提供之含義。 本發明之其他較佳化合物具有如 八令如下所不之式（Ilia)至式 (Hie)：
其中所有取代基均具有本說明書中所提供之含義；
其中取代基具有本說明書中所提供之含義；
155387.doc -38- 201142293 其中取代基具有本說明書中所提供之含義.
(Illd) 且其他取代基具 其中R4表示Ci-C4院基，較佳為甲基， 有本說明書中所提供之含義；
其中R4表示鹵素，較佳為氯，且其他取代基具有本說明 書中所提供之含義。 特定式（I)、式（II)及式（III)化合物包括本文所提供之實 例中所述之化合物。 在另一實施例中，mGluRS拮抗劑為式（IV)化合物：
其中 Π1為0或1 ; η為0或1 ;及 Α為羥基； X為氫；及 Y為鼠；或 155387.doc •39- 201142293 A與X或與γ形成單鍵； R〇為氫、（Cu)烷基、（Cw)烷氧基、三氟甲基、_素、 氰基、硝基、-COORi(其中1^為（CV4)烷基）或-COR2(其中 r2為氫或（CN4)烷基）；及 R 為 _COR3、-COOR3、_conr4r5 或 _so2r6，其中尺3為 (Ci·4)烧基、（C3_7)環烧基或視情況經取代之苯基、2-〇比„定 基或2-噻吩基；R_4及R_5獨立地為氫或（Cw)烧基，且r6為 (Cm)烧基、（C3_7)環烧基或視情況經取代之苯基；r，為氫 或（Cw)烷基；及
Rn為氫或（Cw)烷基；或 R’與R"—起形成基團_CH2_(CH2)m-，其中m為〇、1或2， 在該情況下η及m中之一者不為0 ; 其限制條件為當η為0時，R〇不為氫、三氟甲基及曱氧 基；A為經基；X及Y均為氫；R為COOEt ;及R，與R" —起 形成基團-(CH2)2-; 呈游離驗或酸加成鹽形式。 例示性式（IV)化合物包括： (-)-(3aR，4S，7aR)-4-羥基-4-間曱苯基乙炔基-八氫-0引 哚-1 -甲酸曱酯 (-)-(3aR,4S，7aR)-4-羥基-4-間甲苯基乙炔基-八氫 哚-1 -甲酸乙酯 (-)-(3aR，4S，7aR)-°夫喃-2-基-(4-經基-4-間曱苯基乙炔基_ 八氫-吲哚-1-基）-甲酮 (土)-(3&118,48尺，73118)-4-(3-氯苯基乙炔基）_4_經基_八氫_ 155387.doc -40- 201142293 吲哚-1 -曱酸乙酯 (±)-(3&118,4811，7&118)-4-(3-氟-苯基乙快基）_4_羥基_八氣 吲哚-1 -甲酸乙酯 (3aRS，4SR，7aRS)-4-羥基-4-苯基乙炔基_八氫_。引。朵]•甲 酸（S)(四氯咬ϋ南-3 -基）S旨 • (3aRS，4SR，7aRS)-4·經基-4-苯基乙炔基-八氫_0引Β朵_卜甲 酸（R)(四氯咬喃-3-基）酉旨 (3aRS，4SR，7aRS)-4-羥基-4-(3-氯苯基乙炔基）_八氫引 〇 卜 哚-1-甲酸-(S)(四虱呋喃-3-基）酯 (±)-(3aRS，4SR，7aRS)-4-羥基-4-間曱苯基乙炔基_八氫_„引 哚-1-甲酸乙酯 (±)-(3aRS，4SR,7aRS)-4-(4-氟-苯基乙快基）_4-經基-八氫― 吲哚-1 -甲酸乙酯 (±)-(3aRS，4SR，7aRS)-4-(3-氣苯基乙炔基）_4_ 羥基-1-甲磺 醢基-八氫-β引η朵 Q (土）_(3aRS，7aRS)-4-苯基乙炔基-2,3,3a，6,7,7a-六氫-。引哚- l-甲酸乙酯及（土HRS)-4-苯基乙炔基_2,3,5,6,7,7a-六氫-吲 哚-1-甲酸乙酯 (±)-(3RS，7aRS)-2,2,2-三氟-1-(4-苯基乙炔基 _2,3,3a，6, • 7,7a-六氮-°引β朵-1 -基）-乙嗣 (±)-(RS)-4 -間甲苯基乙快基- 2,3,5,6,7,7a-六氫-〇弓卜朵-1-曱 酸乙酯 (±)-(3RS，7aRS)-4 -間甲苯基乙快基- 2,3,3a,6,7,7a-六氫-0 引 哚-1-甲酸乙酯 155387.doc -41- 201142293 (±)-(3RS，7aRS)-4-(4-氣-苯基乙炔基3 7 ^ 〇引°朵-1 -甲酸乙西旨 (士)-(3RS，7aRS)-4-(2-氟-苯基乙炔基）_2,3,3a，6,7,7a_六氫-吲哚-1 -曱酸乙酯 (±)-(3RS，7aRS)-4-(3-氟-苯基乙炔基）_2,3,3£1，6,7,7&_六氣_ 吲哚-1 -曱酸乙酯 (±)-(RS)-4-(3 -氟-笨基乙炔基）_2,3,5,6,7,7a-六氫-吲嘴 曱酸乙酯 (±)-(3RS，7aRS)-4-(3-甲氧基 _ 苯基乙炔基）_2,3,3a，6,7,7a_ 六氫·•吲哚-1-甲酸乙酯 (±)-(RS)-4-(3 -甲氧基-苯基乙炔基）_2,3,5,6,7,7a_六氫_。引 哚-1 -曱酸乙酯 (土)-(3aRS，4RS,7aSR)-4-羥基-4-苯基乙炔基-八氫-異％ 哚-2-甲酸乙酯 (土)-(3aRS，4RS，7aSR)-4-羥基_4_間曱苯基乙炔基-八氫_異 吲哚-2-曱酸乙酯 (±)-(3aRS，4RS，7aSR)-4-羥基-4-對甲苯基乙块基-八氫_異 吲哚-2-曱酸乙酯 (士)-(3丑118,4118,738尺)-4-(3-氰基_苯基乙炔基）-4-經基_八 氫-異吲哚-2-甲酸乙酯 (±)-(3aRS，4RS，7aSR)-4-羥基-4-(3-曱氧基-苯基乙炔基_ 八氫-異σ引11 朵-2-甲酸乙醋 (±)-(3aRS，4RS，7aSR)-4-(3 -氟-苯基乙炔基）-4-經基-八氫· 異吲哚-2-甲酸乙酯 155387.doc -42- 201142293 (±)-(3aRS,4RS,7aSR)-4-羥基-4-苯基乙炔基-八氫-異〇弓丨 哚-2-甲酸第三丁酯 (士）-(3aRS,4RS，7aSR)-4-羥基-4·間曱苯基乙炔基八氫-異 吲哚-2-曱酸第三丁酯 (±)-(3aRS，4RS，7aSR)-4-羥基-4-間曱苯基乙炔基-八氫-異 吲哚-2-曱酸曱酯 (±)-(3aRS,4RS，7aSR)-呋喃-2-基-(4-羥基-4-間甲苯基乙 块基-八氫-異°引"朵-2-基）-甲銅 (±)-(3aRS，4RS，7aSR)-環丙基-(4-經基-4-間甲苯基乙炔 基-八氫-異叫卜朵-之-基）-曱_ (士）-(3aRS，4RS，7aSR)-(4-羥基-4-間甲苯基乙炔基-八氫_ 異0引0朵-2 -基）-。比咬-3 -基-甲嗣 (士）-((18尺，3 8尺)-3-羥基-3-間曱苯基乙炔基-環己基）_曱 基-胺基曱酸曱酯及（±)-((lRS，3SR)-3-羥基-3-間曱苯基乙快 基-環己基）-f基-胺基甲酸甲酯 (±)-(lRS，3SR)-((3-羥基-3-間甲苯基乙炔基-環己基）_(4_ 甲氧基-苯甲基）-胺基甲酸乙酯 (±)-(lRS，3RS)-((3-羥基-3-間曱苯基乙炔基-環己基）_(4_ 甲氧基-苯甲基）-胺基曱酸乙酯 (±)-[(lRS，3SR)-3-羥基-3_(3-曱氧基-苯基乙炔基）_5,5_二 甲基-環己基]-甲基-胺基甲酸曱酯 (±)-(lRS，3SR)-(3-羥基-5,5-二甲基-3-間曱苯基乙炔基-環己基）-甲基-胺基曱酸曱酉旨 (±)-[(lRS，3SR)-3-(3-氟-苯基乙炔基）-3-羥基-5,5-二甲基- 155387.doc •43- 201142293 環己基]-甲基-胺基甲酸甲酯 (±)-[(lRS,3RS)-3-(3 -氣-苯基乙快基）_3_經基_環己基]-甲 基-胺基曱酸曱酯 (±)-[(lRS,3SR)-3-(3 -氣-苯基乙炔基）經基_環己基]_甲 基-胺基曱酸曱酯 (±)-[(lRS，3RS)-3-羥基-3-(3-曱氧基-苯基乙炔基）·環己 基]-甲基-胺基曱酸甲酯 (±)-[(lRS，3SR)-3-經基-3-(3_曱氧基-笨基乙炔基）環己 基]-曱基-胺基曱酸曱酯 (±)-[(1尺8,3118)-3-(3-氯-苯基乙炔基）_3-經基_環己基]_曱 基-胺基曱酸甲酯 (士）-[(lRS，3SR)-3-(3-氣-笨基乙炔基）_3_經基_環己基]_曱 基-胺基甲酸曱酯 (±)-(lRS，3RS)-N-(3-羥基-3-間曱苯基乙炔基_環己基乙 醯胺 (±)-(lRS，3SR)-N-(3-羥基-3-間甲苯基乙炔基-環己基）_乙 醯胺 (士）-(lRS，3RS)-(3-羥基-3-間曱苯基乙炔基-環己基）-胺基 甲酸乙酯 (±)-(lRS，3SR)-(3-羥基-3-間甲苯基乙炔基-環己基）-胺基 甲酸乙酯 (±)-(lRS,3RS)-[3-(3-氟-苯基乙炔基）_3_羥基-環己基]-胺 基甲酸乙酯 (±)-(1118,3 811)-[3-(3-氟-苯基乙炔基）_3_羥基-環己基]-胺 155387.doc -44- 201142293 基甲酸乙酯 (±)-(lRS，3RS)-[3-(3-甲氧基_苯基乙炔基）_3_經基_環己 基]-胺基曱酸乙酯 (±)-(lRS，3RS)-N-[3-(3-氟-苯基乙炔基）_3•羥基_環己基]_ 乙醯胺 (±)-(1118,3 811)->1-[3-(3-氟-苯基乙炔基）_3_羥基_環己基]_ 乙醯胺 (±)-(lRS，3SR)-[3-羥基-3-(3 -甲氧基苯基乙炔基）_環己 基]•胺基曱酸乙酯 (±)-(1厌8,3118)->1-[3-經基_3-(3-曱氧基-苯基乙炔基）_環 己基]-乙醯胺 (士)-(1118,3 81〇-：^-[3-羥基_3-(3-甲氧基_苯基乙炔基）_環 己基]-乙醯胺 (士)-(11^，3118)-[3-羥基-3-(3-曱氧基_苯基乙炔基）_環己 基]-胺基曱酸第三丁酯 (土 )-(11^，3 811)-[3-經基-3-(3-甲氧基-笨基乙炔基）_環己 基]-胺基甲酸第三丁酯 (士)-(lRS，3RS)-(3-羥基-3-間曱笨基乙炔基_環己基胺基 甲酸第三丁酯 (士)-(lRS，3SR)-(3-羥基_3_間曱苯基乙炔基_環己基胺基 曱酸第三丁酯 (土)-(lRS，3RS)-(3-(3-氟-苯基乙炔基）_3_羥基_環己基]_胺 基曱酸第三丁酯 (士)-(lRS，3SR)-(3-(3-氟-苯基乙炔基）_3_經基-環己基]_胺 155387.doc •45- 201142293 基曱酸第三丁酯 (±)-(lRS，3RS)-[3-(3-氟-苯基乙炔基）_3_羥基_環己基]胺 基曱酸曱酯 (±)-(11^，3 311)-[3-(3-氟-苯基乙炔基）_3_羥基_環己基卜胺 基甲酸曱酯 (±)-(3-苯基乙炔基-環己-2-烯基）_胺基曱酸乙酯及（士）_3_ 苯基乙炔基-環己-3-烯基）-胺基曱酸乙酯 (±)-甲基-(3-苯基乙炔基-環己-3-烯基）_胺基曱酸乙酯 (±)-(4aRS，5RS，8aSR)-5-經基-5-苯基乙快基_八氫_喧啉_ 1 -甲酸乙酯 (±)-[(4aRS，5SR，8aSR)-5-(3-氣-苯基乙炔基）_5_ 羥基 _八 氯-唾琳-1-基]-11 夫喃-2-基-曱酉同 (±)-[(4aRS，5RS,8aSR)-5-(3-氯-苯基乙炔基）_5_ 經基-八 氮-啥琳-1-基]-D夫喃-2-基-曱嗣 (±)-(4aRS，5RS，8aSR)-5-(3-氯-苯基乙炔基）-5-羥基-八氫_ 喹啉-1 -甲酸第三丁酯 (±)-[(4aRS，5SR，8aSR)-5-(3 -氯-苯基乙炔基）_5_ 經基-八 氯-喧淋-1-基]-嗎嚇^-4-基-甲嗣 (±)-[(4aRS，5SR,8aSR)-5-(3 -氯-苯基乙炔基）_5_ 羥基-八 氫-啥琳-1-基]-(4 -甲基-痕°秦-1-基）-甲嗣 (±)-(4aRS，5RS，8aSR)_5-(3-氯-苯基乙炔基）_5_羥基-八氫_ 喹啉-1-甲酸乙酯及（土)-(4aRS，5SR，8aSR)-5-(3-氯-苯基乙炔 基）-5-羥基-八氫-喹啉-1-曱酸乙酯 (±)-(4aRS，5SR,8aSR)-5-羥基-5-間曱苯基乙炔基-八氫-喹 155387.doc -46- 201142293 啉-1-曱酸乙酯 ㈤-(4aRS，5RS，8aSR)领基，f苯基乙炔基·八氮4 琳-1 -甲酸乙醋。 在另一實施例中，mGluR調節劑為式（V)化合物：
其中： R1表示氫或烷基； R2表示未經取代或經取代之雜環，或 R2表示未經取代或經取代之芳基； R3表示烷基或鹵素； X表示單鍵或烧一基’視情況間雜有一或多個氧原子或 羰基或羰氧基；呈游離鹼或酸加成鹽形式。 例示性式（V)化合物包括： 呋喃-3-甲酸[(lS，3S)-3-(3-氯·苯基乙炔基）_3_羥基_環己 基]-醯胺 呋喃-2-甲酸[(1R，3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基）-3-羥基-環己 基]-醯胺 0夫0^_2-甲酸[(lS，3S)-3-(3-乳-苯基乙快基）_3_經基_環己 基]-醯胺 3H-咪唑-4-甲酸[(1R，3R)_3-(3 -氯-苯基乙炔基）-3-羥基-環己基]-醯胺 -47- 155387.doc 201142293 3H-咪唑-4-甲酸[(lS，3S)_3-(3_氣-苯基乙炔基>3_羥基-環 己基]-醯胺 4H-[1 2,4]三0坐-3-甲酸[(1汉，3尺)_3_(3-鼠-本基乙快基）_3_ 經基-環己基]-酿胺 4H-[1，2,4]三 17坐 _3 -甲酸[(lS，3S)-3-(3 -氣-束基乙块基）_3_ 羥基-環己基]•醯胺 2-曱基-呋喃-3 -甲酸[(士 H1R，3R)_3_(3-氯-苯基乙炔基）-3-羥基-環己基]-醯胺 N-[(±)-(lR，3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基）-3-經基-環己基] -3,4-二氟-苯甲醯胺 苯并[1,3]間二氧雜環戊烯-2-甲酸[(土)_(1R，3r)-3-(3-氣-苯基乙炔基）-3-羥基-環已基]-酿胺 5-曱基比唤-2-甲酸[(土 )-(1R，3R)-3_(3_氣-苯基乙炔基）-3-羥基-環己基]-醯胺 哇 0若嘛-2-曱酸[(士）_(1R，3R)_3_(3_乳-本基乙块基）_3-經 基-環己基]-醯胺 苯并呋喃_2_甲酸[(士)-(lR，3R)-3-(3-氣-苯基乙炔基）_3_羥 基-環己基]-醯胺 苯并噁唑-2-甲酸[(土)-(lR，3R)-3-(3-氣-苯基乙炔基）-3-羥 基-環己基]-醯胺 2,5-二曱基-呋喃-3-甲酸[(士)-(1R，3R)-3-(3-氣-苯基乙炔 基）-3-羥基-環己基]-醯胺 (R，S)四氫呋喃-3-曱酸[(土）-(1R，3R)-3-(3-氣-苯基乙炔 基）-3-羥基-環己基]-醯胺 155387.doc • 48. 201142293 呋喃-3-曱酸（（1R，SRJ-S-羥基-S-間甲苯基乙炔基-環己 基-醯胺 呋喃-3-甲酸（（lS，3S)-3-羥基-3-間甲苯基乙炔基-環己 基）-醯胺 呋喃-3-甲酸（(±)-(lR，SRJ-S-羥基-S-間曱苯基乙炔基-環 - 己基·醯胺 呋喃-2-曱酸（（lR，3R)-3-羥基-3-間甲苯基乙炔基-環己 基）-酿胺 〇 呋喃-2-甲酸（（lS，3S)-3-羥基-3-間曱苯基乙炔基-環己 基）-醯胺 呋喃-2-甲酸（(±)-(lR，3R)-3-羥基-3-間曱苯基乙炔基-環 己基）-醯胺 異噁唑-5-甲酸（（lR，3R)-3-羥基-3-間甲苯基乙炔基-環己 基）-醯胺 異噁唑-5-甲酸（（lS，3S)-3-羥基-3-間甲笨基乙炔基-環己 基）-酿胺 異噁唑-5-甲酸（(±)-(lR，3R)-3-羥基-3-間曱苯基乙炔基_ 環己基）-醯胺 5-甲基-吡嗪-2-曱酸（(±)-(lR，3R)-3-羥基-3-間曱苯基乙 . 炔基-環己基）-醯胺 4H-[1,2,4]三唑-3-曱酸（(±)-(lR，3R)-3-羥基-3-間甲苯基 乙炔基-環己基）_醯胺 3H-咪唑-4-曱酸（(±)-(lR,3R)-3-羥基-3-間曱苯基乙炔基-環己基）-醯胺 155387.doc -49- 201142293 四氫-哌喃-4-曱酸（(±M1R，3R)-3-羥基-3-間曱苯基乙炔 基-環己基）-醯胺 1-甲基-1H-味0坐-4-甲酸（(±)-(1尺，3汉)-3-經基-3 -間曱苯基 乙炔基-環己基）-酿胺 (R,S)四氫呋喃-2-甲酸（(士 H1R，3R)-3_羥基-3-間甲苯基乙 炔基-環己基）-醯胺 (R，S)四氫呋喃_3-甲酸（(土)_(1R，3R)-3-羥基-3-間甲苯基乙 炔基-環己基）_醯胺 吱喃-3 -甲酸[(1R，3R)_3_(3_氟-苯基乙炔基）-3-經基-環己 基]-醯胺 吱喃_3 -甲酸[(1 S，3S)_3_(3_敗-苯基乙炔基）-3-羥基-環己 基]-醯胺 呋喃_2-甲酸[(1R，3R)_3_(3_氟-苯基乙炔基）-3-羥基-環己 基]-醯胺 吱喃-2-甲酸[(lS，3S)-3-(3-氟-本基乙炔基）_3_經基_環己 基]-醯胺 3H-咪唑甲酸[(±H1R，3R)_3_(3_氟_苯基乙炔基）_3-羥 基-環己基]_醢月安 !^-[(18,33)-3-(3_氯-苯基乙快基）_3-羥基-環己基]-3,4-二 氟-苯甲醯胺 N-[；(lR，3R)-3-(3_氯-苯基乙块基）_3'羥基-環己基]_3,4_二 氟-苯曱醯胺 吡啶-2-甲酸[(1S，3S)_3_(3_氯-苯基乙炔基）·3-經基-環己 基]-醯胺 -50- 155387.doc 201142293 0比啶-2-甲酸[(1R，3R)_3_(3 -氯-苯基乙炔基）-3-羥基-環己 基]-醯胺 N-[(lS，3S)-3-(3 -氯-苯基乙炔基）-3-沒基-環己基]-終驗醯 胺 _ N-[(1R，3 R)-3-(3 -氯-苯基乙炔基）-3 -經基-環己基]-於驗 .醯胺 苯并[1，3]間二氧雜環戊烯-2—甲酸[(1S，3S)-3_(3-氣-苯基 乙炔基）-3-羥基-環己基醯胺 Ο 5_甲基-nb°秦-2 -甲酸[(^,38)-3-(3-氣-苯基乙块基）-3-經 基-環己基]-醯胺 2_曱基-呋喃-3-甲酸[(1S，3S)-3-(3-氯-苯基乙快基）-3-羥 基-環己基]-醯胺 (R)四氫咬喃’酸[(1R，3R)_3-(3·氣-苯基乙快基）_3_經 基-環己基]-醯胺 (s)四氫呋喃-2- f酸[(1R，3R)_3_(3_氯-苯基乙炔基）-3-羥 r. 基-環己基]-醯胺 J 異噁唑_5_甲酸[(U，3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基）-3-羥基-環 己基]-醯胺 也ο爷酸[(1R，3R)_3_(3_氯-苯基乙炔基）-3-羥 5 -甲基-0比♦ τ , 基-環己基]-醯胺
> α笋酸[(1R，3R)_3-(3-氣-苯基乙炔基）-3-經 2-甲基-呋喃T 基-環己基]-醯胺 + 祕f(lR，3R)-3-(3-氯-笨基乙炔基）-3-羥基-環 異噁唑-5-曱酸 己基]-醯胺 •51 - 155387.doc 201142293 5氯咬喃_2_甲酸[(lR，3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基）-3-羥基· 環己基]-醯胺 5氣_呋喃_2_甲酸[(lS，3S)_3-(3_氯-苯基乙炔基）_3_羥基_ 環己基]-醢胺 (s)四氫呋喃-3-甲酸[(1R，3R)-3_(3-氯-苯基乙炔基）-3_羥 基-環己基l·醯胺 (11)四氫呋喃-3-甲酸[(111，31^-3_(3_氣_苯基乙炔基）-3-羥 基-環己基]-醯胺 N_[(；lS，3S)-3-(：3-氯-笨基乙炔基）-3-羥基-環己基]_異菸鹼 酿胺 N_|XlR，3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基）-3_羥基-環己基l·異菸 鹼醯胺 3 5_二氟-吼啶-2-甲酸[(1R，3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基）_3_ 經基-環己基]-酿妝 3 5-二氟比咬-2_甲酸[(1S，3S)_3-(3_氯-苯基乙炔基）_3_經 基-環己基]-醯胺 6-甲基-β比咬-2-甲酸[(1S，3S)_3~(3_氣-苯基乙炔基）-3·羥 基-環己基]-醯胺 6_甲基比啶-2-甲酸[(1R，3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基）-3經 基-環己基]-醯胺 S-氯-吡啶-2-曱酸[(1R，3R)-3_(3-氣-苯基乙炔基）-3-羥基-環己基]-醯胺 δ-氯-吡啶甲酸[(18,38)-3_(3_氯_苯基乙炔基）-3-羥基-環己基]-醯胺 • 52- 155387.doc 201142293 心rHR 3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基）-3-羥基-δ-氯比d甲酸[(1K，·^ 環己基]-醯胺 〇7 a^lYlS 3S)-3-(3_亂-本基乙快基）-3-輕基-6-氯-吡啶-2-f酸； 環己基]-醯胺 - 5-氯]-甲基-^比咯_2·甲酸[(1R，3R)-3-(3-氯-苯基乙炔 .基）-3-羥基-環己基]-酿胺 5-氣-1-曱基-1H-吡咯-2-甲酸[(1S，3S)-3_(3_氯-苯基乙炔 基）-3-羥基-環己基酿胺 O 5j_1H_D比咯-2-甲酸[(1R，3R)_3_(3_氣-苯基乙炔基）-3-經 基-環己基]-醯胺 5-氯-1H-吡咯_2-甲酸[(1S，3S)_3_(3-氯-苯基乙炔基）_3_羥 基-環己基]-醯胺 N_|XIS -氯-本基乙块基）_3經基-環己基]-4-二曱 基胺基-苯甲醯胺 lH-π比洛_3_甲酸"[(lS，3S)-3-(3 -氯-本基乙快基）_3_經基-環 g 己基]-酿胺 N-[(lS，3S)-3-(3-氯-苯基乙快基）-3-羥基-環己基]-4-甲 基·苯甲醯胺 N-[(lS，3S)-3-(3 -氯-苯基乙炔基）-3-羥基-環己基]-4-曱 基-苯甲醯胺 N-[(lS，3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基）-3-羥基-環己基]_3-氟-苯甲醯胺 N-[(lS，3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基）-3-羥基-環己基]_2_乙 基-丁醯胺 155387.doc -53- 201142293 N-[(lS，3S)-3-(3-氣-苯基乙炔基）-3-羥基-環己基]-4-(2,5-二甲氧基-苯基）-4_側氧基-丁醯胺 2-(2-苯曱氧基-乙氧基）-N-[(lS，3S)-3-(3-氯-苯基乙炔 基）-3-羥基-環己基]-乙醯胺 N-[(lS，3S)-3-(3-氣-苯基乙炔基）-3-羥基-環己基]-2-苯 基-乙醯胺 N-[(lS，3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基）-3-羥基-環己基]-3-(1Η-吲哚-4-基）-丙醯胺 2-苯并[1,3]間二氧雜環戊烯-5-基-N-[(lS，3S)-3-(3-氯-苯 基乙炔基）-3-羥基-環己基]-乙醯胺 N-[(lS，3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基）-3-羥基-環己基]-2-苯氧 基-丙醯胺 N-[(lS，3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基）-3-羥基-環己基]-2-(2- 氟-苯基）-乙醯胺 5-羥基-1H-吲哚-2-曱酸[(lS,3S)-3-(3-氣-苯基乙炔基）-3-羥基-環己基]-醯胺 1-甲基-1H-吡咯-2-曱酸[(lS,3S)-3-(3-氣-苯基乙炔基）-3-羥基-環己基]-醯胺 N-[(lS，3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基）-3-羥基-環己基]-對苯二 曱酸甲酯 N-[(lS,3S)-3-(3-氣-苯基乙炔基）-3-羥基-環己基]-2-(2-三 氟曱氧基-苯基）-乙醯胺 5-氯-N-[(lS，3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基）-3-羥基-環己基]-2- 羥基-苯曱醯胺 155387.doc -54- 201142293 N-[(lS，3S)-3-(3-氣-苯基乙炔基）_3_羥基-環己基]_4•羥 基-苯甲醯胺 N-[(lS，3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基）_3_羥基_環己基]_2_羥 基-苯甲醯胺 4_胺基-N-[(lS，3S)-3-(3 -氯-苯基乙块基）經基_環己 基]-苯曱醯胺 4-胺基-5-氯-N-[(lS，3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基）_3_羥基_3_ 胺基-4-氯-N-[(l S,3S)-3-(3 -氯-苯基乙快基）_3_經基_環己 基]-苯甲酿胺 3 -胺基-N-[(lS，3S)_3-(3 -氯-苯基乙快基）_3·經基-環己 基]_4_甲基-苯曱酿胺 2- 胺基-N-[(l S，3S)_3-(3·氯-苯基乙块基）_3_經基-環己 基]-菸鹼醯胺 N-[(lS，3S)-3-(3_氯-苯基乙炔基）-3-羥基-環己基]_4_羥 基-3-甲氧基-苯甲醯胺 N_[(lS，3S)-3-(3_氣-苯基乙块基）·3-經基-環己基]-2-氟-苯甲醯胺 N-[(lS，3S)-3-(3_氣-苯基乙快基）-3_經基-環己基]-4-甲續 醯基-苯f醯胺 0比咬2-璆酸鼠-本基乙快基）-3-經基-環己 基]-醯胺 基-2-甲酸[(1S，3S)-3_(3_氯-苯基乙块基）-3-經 3- 胺基-吡嗲 其·-環己声·]-緣胺 土 ^ T rnS，3S)-3-(3·氯-苯基乙炔基）-3-羥基-環己 6-胺基 155387.doc -55· 201142293 基]-於驗酿胺 4- (4-胺基-苯曱醯基胺基）_苯曱酸[(1R，3R)-3-(3-氣-笨基 乙炔基）-3-經基-環己基]-酿胺 2,6 -二側氧基-1，2,3,6 四氫 〇密唆-4-曱酸[(lS，3S)-3-(3 -氣-苯基乙炔基）-3-經基-環己基]-醯胺 N-[( lS，3S)-3-(3 -氯-苯基乙炔基）_3-羥基-環己基]-異終驗 醯胺 3-氯-N-[(lS，3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基）-3-羥基-環己基]_ 苯曱醯胺 N-[(lS，3S)-3-(3-氣-苯基乙炔基）-3-羥基-環己基]_2,3-二 曱氧基-苯甲醯胺 N-[(lS,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基）-3-羥基-環己基]-4-側氧 基-4-苯基-丁醯胺 2-氯-N-[(lS,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基）-3-羥基-環己基]- 菸鹼醯胺 5- 溴-N-[(lS,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基）-3-羥基-環己基]-菸鹼醯胺 異β奎琳-1-甲酸[(lS，3S)-3-(3 -氯-本基乙快基）_3_輕基-環 己基]-醯胺 吡嗪-2-曱酸[(lS，3S)_3_(3-氯-苯基乙炔基）-3-羥基-環己 基]-酿胺 3 -苯曱醯基-0比咬_2_甲酸[(1 S，3S)_3_(3-氣-苯基乙炔基）-3-羥基-環己基]_醯胺 N-[(lS，3S)-3-(3 -氣-苯基乙炔基）-3-羥基-環己基]-2-甲 155387.doc -56- 201142293 基-終驗酿胺 喹喏啉-2-甲酸[(18,38)_3_(3-氯-笨基乙炔基）-3-羥基-環 己基]-醯胺 噠嗪-4-甲酸[(18,38)_3_(3_氯_苯基乙炔基）-3-羥基-環己 ' 基]-醯胺 N-[(lS，3S)-3-(3_氯-苯基乙炔基）-3-羥基·環己基]_2_甲基 硫基-菸鹼醯胺 N-[(lS，3S)-3-〇氯-笨基乙炔基）-3-羥基-環己基]-4-三氟 甲基-菸鹼醯胺 2-氯-N-[(lS，3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基）_3_羥基-環己基]_ 異於驗酿胺 2-氣-N-[(lS，3S)-3_(3-氣-苯基乙快基）_3_羥基-環己基;|_6_ 甲基-菸鹼醯胺 6-氯-N-[(lS,3S)-3-(3-氣-苯基乙炔基卜3_羥基-環己基]_ 菸鹼醯胺 Q 2_氯-N_[(ls，3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基）-3-羥基-環己基]-6- 曱基-異於驗醯胺 N-[(lS，3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基）_3_羧基-環己基]-2-(4,5-二甲氧基-3-側氧基-1，3-二氫-異苯并呋喃-i_基）-乙醯胺 1，4,5,6-四氫環戊二烯幷吡唑_8-曱酸[(18,3 8)-3-(3-氯-苯 基乙炔基）-3-羥基-環己基]-醯胺 N-[(lS，3S)-3-(3-氯-笨基乙炔基）小經基-環己基]_3-(lH-吲哚-2-基）_丙醯胺 0-[(lS，3S)-3-(3-氣-笨基乙炔基）_3_羥基-環己基胺甲醯 155387.doc -57· 201142293 基]-^比咬-2-曱酸異丙西曰 喹啉-6-甲酸[(1S，3S)_3_(3_氯-苯基乙炔基）-3-羥基-環己 基]-醯胺 5-曱基-異噁唑-4-曱酸[(1S，3S)-3-(3_氯-苯基乙炔基）_3_ 經基-環己基酿胺 苯并呋喃-3-曱酸[(lS，3S)-3-(3-氯、笨基乙炔基）_3_羥基_ 環己基]-醯胺 >1-[(18,38)-3-(3-氣-苯基乙炔基）_3_羥基_環己基]_2_(2_甲 氧基-苯氧基）-乙醯胺。 在另一實施例中，mGhiR調節劑為式（VI)化合物：
其中： R1表示氫或烷基； R2表示未經取代或經取代之雜環，或 R2表示未經取代或經取代之芳基； R3表示烧基或鹵素； 呈游離驗或酸加成鹽形式。 mGluR5拮抗劑之其他實似白紅 …貝1夕ij a栝如WO 2004/014881中所 定義之式⑴化合物及如WO 2007/021575中所定義之式⑴ 化合物；Λ等公開案之内容以引用的方式併入本文中。 生物標記 155387.doc -58- 201142293 來自患有FXS之個體之樣本中的FMR1基因甲基化程 度、缺乏FMR1 mRNA表現之存在及缺乏FMR1蛋白之存在 可以個別或任何組合形式充當預測該個體對用mGluR5拮 抗劑治療之反應性的生物標記。 可測定來自相關個體之樣本中此等生物標記之存在。樣 本可為任何樣本，包括諸如血液之流體樣本、諸如口腔細 胞之細胞樣本或諸如皮膚或毛囊之組織樣本。 如本文所使用，「預測」指示本文所述之方法提供資訊 以使健康照護提供者能夠確定患有FXS之個體將對mGluR5 治療作出反應的可能性。在相關樣本中相關生物標記測定 為陽性後，將向該個體投與mGluR5拮抗劑。 FMR1啟動子-曱基化分析 FMR1基因甲基化程度指示患者是否將對mGluR5拮抗劑 治療作出反應。特定言之，若測定個體之所有或基本上所 有相關FMR1基因區已曱基化，則確定該個體為將對用 mGluR5拮抗劑治療作出反應的個體。 FMR1基因序列在此項技術中為已知的（GenBank L29074 L38501)(Nucleic Acids Res. 2002年 7月 15 日；30(14):3278-85)(Hum Mol Genet. 2010年4月 15 曰；19(8):1618-32. Epub 2010年1月29日）。圖1描述FMR1啟動子區及FMR1基因之 5’-UTR。圖1中亦展示FREE1/2之序列及位置、FMR1基因 中之經典CpG島及CGG重複序列。序列編號來自GenBank L29074 L38501。具有52個CpG位點之經典CpG島位於位置 13439至13809。CGG重複序列位於位置13833至13892。 155387.doc -59- 201142293 FREE1位於位置13227至13439(經典CpG島之上游）。 FREE2位於位置13951至14199(CGG重複序列之下游）。 根據本發明分析曱基化狀態的FMR1基因可具有任何長 度，只要其包括至少一個CpG位點即可。在一實例中，所 分析之FMR1基因區為具有52個CpG位點的FMR1經典CpG 島（參看圖1;此區在該圖中以粗體表示；SEQ ID ΝΟ:1)。 在另一實例中，分析FMR1經典CpG島之上游區（FREE 1)及/ 或下游區（FREE2)。FREE1及FREE2之曱基化與FMR1經典 CpG島高度相關（Hum Mol Genet. 2010年4月15日； 19(8):1618-32. Epub 2010年 1 月 29 曰）° 在又一實例中，分析位於FMR1基因之5'-UTR中之CGG 重複序列的甲基化狀態，且其可用於確定個體是否為 mGluR5反應者。 在另一實例中，分析一部分FMR1啟動子區的曱基化狀 態。在一特定實例中，FMR1啟動子區為具有22個CpG位 點的區域，且具有SEQ ID NO:2之核苷酸序列（如下所示； CpG位點以粗體顯示且加下劃線）。 5GCCACTGAGTGCACCTCTGCAGAAATGGGCGTTCTGGCCCTCGCGAGGCAGTGCGAC CTGTCACCGCCCTTCAGCCTTCCCGCCCTCCACXAAGCCCGCGCACGCCCGGCCCGCG CGTCTGTCTTTCGACCCGGCAC(XCGGCCGGTTCCCAGCAGCGCGCATGCGCGCGCTC CCAGGCCACTTGiAGAGAGAGGG-3 (SEQ E) ΝΟΛ) 。 在另一實例中，可加以分析的一部分FMR1啟動子區為 具有 15個 CpG之 SEQ ID NO:3。
5TGCAGAAATGGGCGTTCTGGCCCTCGCGAGGCAGTG
CGACCTGTCACCGCCCTTCAGCCTTCCCGCCCTCCACCA
AGCCCGCGCACGCCCGGCCCGCGCGTCTGTCTTTCGAC 155387.doc -60- 201142293 CCG_GCAC-3(SEQ ID NO:3 ; CpG位點以粗體顯示且加下 劃線）。 藉由偵測該FMR1基因區之胞嘧啶中存在或不存在甲基 修飾或偵測甲基修飾程度來確定FMR1基因區之曱基化程 度。 可使用各種方法來測定相關個體之甲基化狀態。使用諸 如MSP之定性檢定，當在生物樣本之相關區域中僅偵測到 甲基化FMR1時，確定個體為反應者。該種患者在本文中 亦稱為生物樣本中之「所有」FMR1基因均甲基化或「完 全曱基化」之個體。為清楚起見，使用該定性檢定歸為反 應者的個體為在相關區域中未偵測到未甲基化FMR1的個 體。相比而言，具有「部分曱基化」之FMR1基因區的個 體係指在相關基因區中存在曱基化及未曱基化FMR1的個 體（例如基因區域之甲基化程度小於80%)，且該種個體為 mGluR5無反應者。 適用於本發明方法之另一方法為定量檢定方法，諸如曱 基化敏感性限制酶消化組合定量PCR、基質輔助雷射解吸 附/電離飛行時間質譜（MALDI-TOF-MS)、即時PCR(methyl light)。若個體之所有或基本上所有FMR1基因已曱基化， 則確定該個體為mGluR5反應者。如本文所使用，「基本上 所有」為當生物樣本中之甲基化FMR1基因區顯示之甲基 化程度為例如99.5%或高於99.5%，例如99.6%、99.7%、 99.8%或99.9%時，或當生物樣本中之曱基化FMR1基因區 顯示之ACt為8.0或高於8.0，例如8.5時。使用如本文所述 155387.doc -61- 201142293 之定量檢定方法，當「所有或基本上所有j相關FMR1基 因區已甲基化時，個體亦可稱為具有「完全曱基化」之相 關FMR1基因區。該種個體為mGluR5反應者。 本發明不受用於評定樣本中FMR1基因區之甲基化程度 的檢定類型限制。實際上，出於本發明之目的，可採用可 用於測定基因之甲基化狀態的任何檢定。用於評定曱基化 模式之檢定類型之實例包括但不限於： (i) 曱基化敏感性限制酶消化組合以下至少一者： 雜交、定量PCR、限制性標記基因體掃描 (RLGS)或基於陣列分析非參照物依賴性曱基化 狀態（aPRIME); (ii) 亞硫酸氫鹽DNA修飾組合以下至少一者：甲基 化特異性PCR(MS-PCR)、定量曱基化特異性 PCR(qMS-PCR)、基於探針之甲基化特異性 PCR、焦磷酸定序、選殖/定序、MS-巢式PCR、 定量分析曱基化等位基因（QUAMA)、重甲基偵 測、曱基化敏感性高解析度熔融（MS-HRM)、曱 基結合（MB)-PCR、PCR及去氧核糖核苷單磷酸 鹽（dNMP)分析或甲基化依賴性片段分離 (MDFS)； (iii) 完全水解後進行高效液相層析（HPLC); (iv) 甲基化DNA沈澱與甲基化敏感性限制酶之組合 (COMPARE-MS)； (v) 組合亞硫酸氫鹽限制分析（COBRA);在奈米電 155387.doc -62- 201142293 晶體或其他基於電子之裝置中直接或間接偵測 曱基化DNA分子；及 (vi)甲基-BEAMing(珠粒、乳液、擴增及磁學）技 術。 在一實例中，甲基化程度可使用曱基化特異性PCR (MSP)測定。MSP為基於亞硫酸氫鹽轉化率之PCR技術， 其可用於測定DNA CpG甲基化。MSP涉及最初由亞硫酸氫 鈉修飾DNA，將所有未曱基化而非甲基化之胞嘧啶轉化成 尿嘧啶。接著，用分別對曱基化DNA及未甲基化DNA具有 特異性之兩對引子擴增DNA，且測定曱基化狀態。引子通 常包括至少兩個CpG位點。MSP法描述於美國專利第 5,786，146號、美國專利第6,017,704號、美國專利第 6,200,756號及美國專利第6,265，171號中，該等專利之全部 内容以引用的方式併入本文中。在一實例中，使用MSP檢 定，當在FMR1基因之相關區域中由甲基化DNA特異性引 子偵測到曱基化FMR1且由未甲基化DNA特異性引子未偵 測到未甲基化FMR1時，將個體歸為mGluR5反應者。
在另一實例中，可使用包括諸如定量PCR(qPCR)之擴增 方法的方法測定相關FMR1基因區中之曱基化程度。偵測 曱基化之各種不同qPCR方法在此項技術中為已知的，且 包括 HeavyMethyl 或 Methylight。使用 HeavyMethyl方法， 最初用亞硫酸氫鈉修飾FMR1基因區。接著，使DNA與藉 由以甲基化特異性方式結合至經亞硫酸氫鹽處理之DNA而 提供特異性的非可伸長寡核苷酸阻斷劑接觸。接著使DNA 155387.doc -63- 201142293 與具有與非可伸長募核等酸阻斷劑重疊之結合位點的引子 組接觸。當阻斷劑結合時，引子不能結合且因此不產生擴 增子。相反，若阻斷劑不結合，則引子可結合且產生_ 子（C〇ttreU等人NUCleic —es. 2004; 32⑴，2004)。 使用MethyUght^，最初用亞硫酸氫鈉修飾相關 歷1基因區。接著使用與不含CPG二核苷酸之區域雜交 的PCR引+擴增基因區。藉由使用僅與由未甲基化DNA之 亞硫酸氫鹽轉化所產生之序列（或者與已轉化之甲基化序 列）雜交的勞光標記探針，螢光探針㈣可指示探針雜交 之序列的曱基化狀態。 藉由用曱基化敏感性限制酶切割DNA隨後選擇性地鑑別 及/或分析經切割或未經切割之DNA來偵測相關區域之甲 基化的方法在此項技術中為已知的。該方法可涵蓋在限制 酶消化後擴增完整DNA，參看例如美國專利申請案第 10/971，986號、第11/〇71，〇13號及第1〇/971,339號。 在一實例中，本發明之方法包括用甲基化敏感性限制酶 消化FMR1基因啟動子區及擴增相關區域。可藉由偵測可 擴增產物之存在來測定DNA之甲基化狀態。將僅擴增未經 限制酶裂解之DNA。曱基化敏感性限制酶可為例如包括 CG作為其識別位點之一部分且在c已曱基化時可裂解的 McrBC。此外，可使樣本與包括CG作為其識別位點之—部 分且僅在C未甲基化時可裂解的限制酶接觸。消化後， 藉由即時PCR使用前置/反置寡核苷酸及偵測探針擴增所要 FMR1啟動子區。偵測核酸序列之探針通常具有分別共價 I55387.doc -64· 201142293 連接至其5'及3·端的螢光報導子或螢光團（諸如6-羧基螢光 素（FAM)及四氯螢光素（ΤΕΤ))及淬滅劑（諸如四曱基若丹明 (tetramethylrhodamine ; TAMRA)或黑洞淬滅劑（BHQ))。 可用於此檢定中之引子之說明性實例包括前置引子 (FI) : TGCAGAAATGGGCGTTCT(SEQ ID NO:4);反置引 子（Rl) : GTGCCGGGTCGAAAGAC(SEQ ID NO:5);及探 針（PI):染料-CTGAAGGGCGGTGACAGGTCG(SEQ ID NO:6)-淬滅劑（例如染料---FAM ;淬滅劑---BHQ1)。使用 此方法，測定臨床截止區構成之ACt(McrBC與未處理通道 之間的PCR循環臨限值之差）。ACt值亦可使用數學算法表 示為甲基化百分比（例如參看Holemon等人，Biotechniques 43:683-693, 2007)。在一實例中，8.0或8.0以上之ACt(其對 應於99.95%或99.95%以上FMR1基因區已曱基化之樣本）確 定患者之所有或基本上所有FMR1基因區已甲基化且因此 為mGluR5反應者。 上述方法可用於曱基化分析儀。通常，該方法包括測定 樣本中之FMR1曱基化程度，將結果轉化成電腦可讀形 式，及應用數學算法將結果分類為分類組，亦即mGluR5 反應者。 通常上述方法包括對照樣本，諸如完全甲基化之樣本及 部分曱基化之樣本。可使用自X染色體脆折症患者之B淋 巴細胞（Camden，NJ)純化之DNA來產生適當對照或可使用 已經測定具有特定曱基化狀態的臨床樣本。通常上述方法 包括對照樣本。取自完全曱基化（或95%以上甲基化）之個 155387.doc -65- 201142293 體的樣本可充當陽性對照且部分甲基化之樣本可充當陰性 對照。該等樣本在此項技術中可容易地獲得，或可購自例 如ATCC(美國菌種保存中心（American Type Culture Collection ; ATCC))、國家生物標準暨控制中心（The National Institute for Biological Standards and Control ； NIBSC)或克瑞爾醫學研究所（Coriell institute for medical research)。在一實例中，陽性對照可為來自NIBSC之完全 甲基化樣本（07/170 ; Hertfordshire，England)，且陰性對 照可為來自NIBSC之部分甲基化樣本（07/174 ; Hertfordshire，England)。基於用於測定樣本之甲基化狀 態的技術，對照可與測試樣本同時運作，或可表示為預定 值。在一實例中，預定值為使用定量PCR(如本文所述）獲 得的ACt值。 本發明之寡核苷酸亦包括該等序列之變異體或實質上與 本發明寡核苷酸相似之序列。變異體包括改變一或多個 (諸如2、3、4、5、6、7、8、9或10個）鹼基但仍可黏接至 相關FMR1啟動子序列上之特定位置的序列。當關於黏接 或雜交使用時，術語「實質上」意謂寡核苷酸或探針核酸 序列應充分互補以便與其各別核酸雜交或黏接。如本文所 使用，術語「雜交」係指使一股核酸與一互補股接合的過 程。在一實例中，寡核苷酸具有14至30個鹼基。在另一實 例中，寡核皆酸具有1 8至3 0個驗基5且包括序列S E Q ID N0:4、SEQ ID N0:5 或 SEQ ID NO:6 或其變異體。 寡核苷酸可藉由化學合成使用此項技術中已知的任何適 155387.doc -66- 201142293 合方法來製備，或可藉由例如限制消化自生物樣本獲得。 寡核苷酸可根據此項技術中已知的任何技術加以標記’包 括使用放射性標記、螢光標記、酶標記、蛋白質、半抗 原、抗體、序列標籤及其類似物。 FMRl mRNA 測定 FMR1 mRNA含量亦可用作測定個體是否可能對mGluR5 作出反應的預測標記。來自患有FXS之個體之缺乏FMR1 mRNA轉錄本或與對照相比FMRl mRNA轉錄本之量降低的 樣本確定為mGluR5反應者。此測定可僅用於將個體歸類 為mGluR5反應者，或可與FMR1基因曱基化狀態及FMR1 蛋白測定中之一或二者一起用作補充其他檢定結果之手 段。 FMRl mRNA含量係使用熟習此項技術者已知的許多技 術中之任一者來量測，包括但不限於北方墨點分析、核酸 酶保護檢定（NPA)、原位雜交、反轉錄-聚合酶鏈式反應 (RT-PCR)、RT-PCR ELISA、基於 TaqMan之定量 RT-PCR (基於探針之定量RT-PCR)及基於S YBR綠之定量RT-PCR。 使用本發明之方法，當在樣本中未偵測到FMRl mRNA 時，將個體歸類為mGluR5反應者。mGluR5 mRNA轉錄本 之量降低或較低的個體亦為mGluR5反應者，例如與對照 (健康個體）相比僅具有50%(4%、30%、20%、10%、9%、 8%、7%、6%、5°/。、4%、3%、2%或 1%)FMR1 mRNA轉錄 本的樣本。 在一實例中，偵測mRNA含量涉及使分離之mRNA與可 155387.doc -67- 201142293 與由所偵測之FMR1基因編碼之mRNA雜交的寡核苷酸接 觸。核酸探針通常可為例如全長cDNA或其一部分，諸如 長度至少為7、15、30、50或100個核苷酸且足以在嚴格條 件下與mRNA特異性雜交的寡核苷酸。mRNA與探針雜交 指示所關注之標記得以表現。 在一種形式中，將mRNA固定於固體表面上且與探針接 觸，例如藉由使分離之mRNA在瓊脂糖凝膠上跑膠，並使 mRNA自凝膠轉移至諸如硝化纖維素之膜。 在另一實例中，FMR1 mRNA含量可藉由反轉錄-聚合酶 鏈式反應（RT-PCR)、RT-PCR ELISA、基於TaqMan之定量 RT-PCR(基於探針之定量RT-PCR)及基於SYBR綠之定量 RT-PCR加以測定。若核酸分子以極低數目存在，貝'J此等 偵測流程尤其適用於偵測該等分子。如本文所使用，擴增 引子定義為可黏接至基因之5'或3’區（分別為+及-股，或反 之亦然）且含有介於兩者之間的短區的一對核酸分子。一 般而言，擴增引子之長度為約10至30個核苷酸且側接長度 為約50至200個核苷酸之區域。在適當條件及適當試劑 下，該等引子可擴增包含由該等引子側接之核苷酸序列的 核酸分子。 蛋白質 FMR1蛋白含量亦可用作測定個體是否可能對mGluR5作 出反應的預測標記。來自患有FXS之個體之缺乏FMR1蛋 白之存在或與對照相比FMR1蛋白之量降低的樣本確定為 mGluR5反應者。此測定可僅用於將個體歸類為mGluR5反 155387.doc -68- 201142293 應者，或可與FMR1基因曱基化狀態及FMRl mRNA測定中 之一或二者一起用作補充其他檢定結果之手段。 可使用此項技術中之任何已知方法來偵測FMR1蛋白， 該等方法包括但不限於免疫細胞化學染色、ELISA、流式 細胞測量術、西方墨點法、免疫組織化學、分光光度測定 法、HPLC、質譜及時差式螢光共振能量轉移（TR-FRET)。 使用本發明之方法，當在樣本中未偵測到FMR1蛋白 時，將個體歸類為mGluR5反應者。mGluR5蛋白之量降低 或較低的個體亦為mGluR5反應者，例如與對照（健康個體） 相比樣本中僅具有 50%(400/。、30%、20%、10%、、 8%、7%、6%、5%、40%、3%、2% 或 1%)FMR1 蛋白之重 的樣本。 用於偵測樣本中之FMR1蛋白的一種方法為利用能夠與 標記蛋白特異性相互作用的結合蛋白。較佳可使用經標# 抗體、其結合部分或其他FMR1結合搭配物。抗體玎為# 株或多株來源，或可以生物合成方式產生。FMR1結合择 配物亦可為天然存在之分子或由合成產生。複合FMR1 # 白之量，例如與結合蛋白質締合之FMR1蛋白之量係像用 此項技術中所述之標準蛋白質偵測法來測定。免疫檢定# 計、理論及方案之詳細综述可在此項技術中之許多本久中 獲得，包括 Practical Immunology, Butt，W. R.，編，
Dekker，New York，1984。 多種檢定可用於以經標記抗體偵測蛋白質。在一少檢定 中，固定FMR1分子（若存在）且將其與經標記抗體，起培 155387.doc •69- 201142293 月。經標記抗體結合至經时之無分+。洗務移除未結合 分子後，檢定樣本中標記之存在。 在兩步檢定中，將經固定之FMR1分子與未標記抗體一 起培月接著使FMR1 -未標記抗體複合物（若存在）結合至 對未標記抗體具特異性之第二經標記抗體。洗務樣本且檢 疋標記之存在。 用於標記抗體之標記的選擇將視應用而變。然而，熟習 此項技術者可容易地確定標記之選擇。 抗體可經放射性原子、酶、發色部分或螢光部分或比色 標籤標記。標籤標記之選擇亦將視所要探測限制而定。酶 松疋（ELISA)通㊉允許偵測由帶有酶標籤之複合物與酶受 質相互作用所形成之有色產物。放射性原子之一些實例包 括P、 1、4及14卩。酶之一些實例包括辣根過氧化酶、 鹼性磷酸酶、β_半乳糖苷酶及葡萄糖_6_磷酸脫氫酶。發色 邛刀之些貫例包括螢光素及若丹明。抗體可藉由此項技 術中已知的方法結合至此等標記。舉例而言，酶及發色分 子可利用諸如二醛、碳化二亞胺、二順丁烯二醯亞胺及其 類似物之偶合劑結合至抗體。或者，結合可經由配位體_ 受體對發生。一些適合之配位體-受體對包括例如生物素_ 抗生物素蛋白或生物素_抗生蛋白鏈菌素及抗體_抗原。 在一態樣中，本發明涵蓋使用夾層技術來偵測企清及其 他生物流體中iFMR1蛋白。該技術需要兩個能夠結合相 關蛋白質之抗體：例如一個固定於固體支撐物上，而一個 游離於溶液中，但經某種可容易地偵測之化合物標記。可 155387.doc • 70- 201142293 用於第二抗體之化學標記之實例包括但不限於放射性同位 素、螢光化合物及酶或當曝露於反應物或酶受質時產生有 色產物或電化學活性產物的其他分子。當將含有FMR1蛋 白之樣本置於此系統中時，FMR1蛋白結合至經固定之抗 體及經標記之抗體二者。結果為處於支撐物表面上之「夾 層」免疫複合物。藉由洗去未結合樣本組分及過量經標記 抗體，並量測與支撐物表面上之蛋白質複合之經標記抗體 的量來偵測複合蛋白質。夾層免疫檢定具有高度特異性且 極敏感，其限制條件為使用具有良好偵測極限之標記。 較佳藉由放射免疫檢定或酶聯免疫檢定、競爭性結合酶 聯免疫檢定、點潰墨法、西方墨點法、層析（較佳為高效 液相層析（HPLC))或此項技術中已知的其他檢定來偵測樣 本中FMR1之存在。 點潰墨法通常由熟習此項技術者實施，使用抗體作為探 針來谓測所要蛋白質（Promega Protocols and Applications Guide，第 2版，1991，第 263 頁，Promega Corporation)。 使用點潰墨法裝置將樣本塗覆於膜。將經標記之探針與該 膜一起培育，且偵測蛋白質之存在。 熟習此項技術者熟知西方墨點分析（Sambrook等人， Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 1989,第 3卷，第 18 章，Cold Spring Harbor Laboratory)。在西方墨點法 中，藉由SDS-PAGE分離樣本。將凝膠轉移至膜。將膜與 經標記之抗體一起培育以偵測所要蛋白質。 上述檢定涉及諸如但不限於免疫點墨、免疫擴散、免疫 155387.doc -71 - 201142293 電泳或免疫沈澱之步驟。 在另一實例中’使用時差式共振能量轉移（TR_FRET)偵 測樣本中FMRP之存在。TR_FRET已用於偵測許多不同分 子’包括 cAMP(Gabriei 等人，2〇〇3，Assay Drug Dev 丁6(^11〇1.1,291-303)及突變型15〇1州(贾〇 2010/015 592)。在 一貫例中’該方法包括使生物樣本與經爛系元素離子穴狀 化合物（諸如销或轼穴狀化合物）標記之第一 FMRP特異性 抗體及經諸如XL-665(獲自（^3則0之1〇5 kDa藻紅蛋白雜六 聚體結構）之適當螢光分子或D2受體標記之第二FMRP特異 性抗體接觸。本發明方法中，選擇抗體以便當其結合 FMRP時，鑭系元素穴狀化合物發射能量，引起螢光團之 近接度依賴性時差式FRET發射。樣本中之FMRP之量係藉 由量測螢光團所發出之螢光來定量。可使用任何FMRP特 異性抗體，諸如 F4055(Sigma，RTGKDRNQKKEKPD SVDG ； SEQ ID NO:7) ； 2160(millipore ； ITVAFENNWQPD RQIPFHD ； SEQ ID NO:8)及 H00002332-M03(Abnova ; ATKDTFHKIKLDVPEDLRQMCAKEAAHKDFKKAVGAFSV TYDPENYQLVI ; SEQ ID NO:9)。 診斷性及預後性檢定 本文所述之方法可用作鑑別可能對mGluR5拮抗劑作出 反應之患有X染色體脆折症之個體的診斷性檢定，或可用 作鑑別有患X染色體脆折症之風險且將受益於接受mGluR5 拮抗劑之個體的預後性檢定。預後性檢定可出於預測目的 或預防目的而使用以治療有患FXS之風險之個體。 155387.doc -72- 201142293 本發明方法不僅亦可用於經鑑別患有FXS之個體，而且 亦用於在FMR1基因啟動子中展現CGG重複序列長度擴增 (例如超過55個重複序列）的任何個體。預想該群體將受益 於mGluR5治療。因而，本發明提供一種方法，其中自在 FMR1基因啟動子中展現CGG重複序列長度擴增之個體獲 得測試樣本，且測定FMR1基因之沉默，例如藉由測定 FMR1啟動子之甲基化狀態，從而偵測FMR1蛋白及/或 FMR1 mRNA之存在。存在以下任一者或其任何組合指示 個體為mGluR5反應者：是否所有或基本上所有FMR1基因 區已曱基化，樣本中缺乏FMR1蛋白或mRNA，樣本中缺乏 FMR1蛋白或缺乏mRNA。 本發明方法可用作預後性檢定以確定是否應向個體投與 mGluR5拮抗劑以防止X染色體脆折症發作或減輕X染色體 脆折症之嚴重程度。在一實例中，可使用此項技術中已知 的任何標準方法確定個體有患FXS之風險，諸如偵測CGG 重複序列或評估該個體之家族史。一旦已確定個體有患 FXS之風險，進一步評估該個體中任一或多個以下生物標 記之存在：是否所有或基本上所有FMR1基因區已甲基 化、樣本中缺乏FMR1蛋白或mRNA。存在一或多個本文所 述之生物標記可用於指示應向該個體投與mGluR5拮抗劑 以便防止X染色體脆折症發作或減輕X染色體脆折症之嚴 重程度。在一實例中，應監測經確定有患FXS風險之新生 兒之一或多個本文所述之生物標記之存在以便防止X染色 體脆折症發作或減輕X染色體脆折症之嚴重程度。使用本 155387.doc -73- 201142293 發明方法早期干預將使mGluR5之治療效益最大化。 本文所述之預後性檢定亦可用於在FMR1基因中展現 CGG重複序列長度擴增的任何個體。若基於本文所述之方 法確定個體為將在臨床上對mGluR5拮抗劑作出反應的個 體，則將向該個體投與mGluR5拮抗劑。一般而言，宜向 患有FXS之個體投與介於約5至1500 mg、較佳約10至約 1000 mg化合物範圍内之每日劑量。在一實例中，將向患 有FXS之個體投與10 mg、25 mg或100 mg之每曰劑量。 套組 本發明亦涵蓋用於偵測生物樣本（測試樣本）中之FMR1 基因區之曱基化狀態、FMR1 mRNA表現或FMR1蛋白含量 的套組。該等套組可用於確定患有FXS之個體是否可能對 用mGluR5拮抗劑治療作出反應。舉例而言，該套組可包 含經標記之化合物或能夠偵測生物樣本中之FMR1蛋白或 mRNA的試劑，及用於測定生物樣本中以下各物之量的工 具：FMR1蛋白（例如抗-FMR1抗體或結合至編碼FMR1蛋白 之DNA的寡核苷酸探針）或mRNA轉錄本。該套組亦可包括 可如上文所論述用於測定FMR1基因區之甲基化程度的引 子。此外，該套組可包括適當對照樣本。 該套組亦可包含例如緩衝劑、防腐劑或蛋白質穩定劑。 該套組亦可包含偵測可偵測劑（例如酶或受質）所必需之組 分。該套組亦可含有可加以檢定並與所含有之測試樣本相 比較的對照樣本或一系列對照樣本。該套組之各組分通常 密封於個別容器内，且所有各種容器均與其使用說明書一 155387.doc -74- 201142293 起處於單一包裝内。 以下非限制性實例說明本發明。 實例 實例1 :建立研究以鑑別是否存在對（-)-(3aR，4S，7aR)-4-經 基-4-間甲苯基乙炔基-八氫-吲哚-1-甲酸甲酯治療作出反應 的一部分患者 本發明實例係作為探查mGluR5拮抗劑（-)-(3aR,4S,7aR) -4-羥基-4-間甲苯基乙炔基-八氫-吲哚-1-甲酸曱酯是否可 向患有FXS之個體提供有利治療的臨床試驗的追蹤研究而 進行。建立本研究以鑑別是否存在對（-)-(3aR，4S，7aR)-4-羥 基-4-間甲苯基乙炔基-八氫-吲哚-1-曱酸曱酯治療作出反應 的一部分患者。在試圖鑑別對（-)-(3aR,4S,7aR)-4-羥基-4-間曱苯基乙炔基-八氫-吲哚-1-甲酸曱酯治療作出反應之該 部分患者時，進行研究以探查該研究中FMR1曱基化/ mRNA表現與（-)-(3aR,4S，7aR)-4-羥基-4-間曱苯基乙炔基-八氫-吲哚-1-甲酸曱酯功效之間的關係。 慼名檬名··在完成臨床研究的30位患者中，26位同意進 行藥物基因學/藥物基因體學評估。根據得自 Gentra(Minneapolis，ΜΝ)之說明書，自全血萃取基因體 DNA。根據得自Qiagen(Valencia，CA)之說明書，自全血 萃取總RNA。成功萃取並分析總共26個DNA樣本及24個 RNA樣本。此外，正常對照DNA係購自Coriell Institute(Camden，NJ)。 严差/fc##盔尸獪定.·用亞硫酸氫鹽（Qiagen， 155387.doc -75- 201142293
Valencia ， CA)處理基因體DNA 。使用來自 Chemicon(Temecula，CA)之 CpG WIZ脆·性 X 染色體擴增套 組，根據製造商說明書進行MSP。分析總共26位患者及4 個正常對照。 定量 RT-PCR(qRT-PCR)檢定： 藉由Taqman即時PCR量測FMR1 mRNA表現。引子及探 針係由 Applied Biosystems(Foster City，CA ; X 染色體脆 折性智力遲鈍1 Hs 00924544_ml，甘油醛-3-磷酸脫氫酶Hs 99999905_ml ;泛素 CHs 00824723_ml)設計。 使用對照基因、GAPDH及UBC之表現量來針對樣本間變 異性進行調整。資料以經校正之Ct(循環臨限值）的形式提 供。236之Ct值被視為檢定之背景值。分析總共24位患者 及9個正常對照。 益破鑀扇產定序··用亞硫酸氫鹽（Qiagen，Valencia， CA)處理基因體DNA。使用以下引子擴增具有22個CpG位 點之 FMR1 啟動子：5'-GTTATTGAGTGTATTTTTGTAG AAATGGG-3'(SEQ ID NO:10)；及 S'-CCCTCTCTCTTC AAATAACCTAAAAAC-3，（SEQ ID NO:ll)。使用來自 Invitrogen(Carlsbad，CA)之 ΤΑ選瘦套組選殖 196-bp FMR1 啟動子，且使用ABI3730XL(Foster City，CA)對每位患者 之7至13個純系進行定序。更多詳情可見於BMD報告中。 分析總共26位患者及4個正常對照。 .結耒，初步MSP分析顯示8位患者完全曱基化，18位患 者部分甲基化。完全曱基化之患者不表現FMR1 mRNA， 155387.doc -76- 201142293 而部分甲基化之患者表現不同量之mRNA。資料表明周邊 血液中之FMR1甲基化與轉錄密切相關。更重要的是，在 第19天，完全曱基化或不表現FMR1 mRNA之患者在對卜 (3aR’4S’7aR)-4-羥基-4-間甲苯基乙炔基-八氫-吲哚曱酸 甲醋之反應方面顯示與安慰劑相比顯著更大程度之改良 » (ABC-C : p<〇.〇〇l ; CGI功效指數：jxo.ooi)# i 至表 4)。 相比而言’在部分甲基化或表現FMR1 mRNA之患者中， 〇 在㈠-(3aR，4S，7aR)_4-羥基-4-間甲苯基乙炔基-八氫-吲哚_ 1-曱酸曱酯與安慰劑之間不存在顯著差異。 為了獲得更多關於甲基化模式之資訊且驗證MSP檢定， 對具有22個CpG位點之FMR1啟動子進行亞硫酸氫鹽定 序。除了二位患者可能至少部分地由於每位患者所定序之 純系數目有限而出現偏差以外，所有患者之亞硫酸氫鹽定 序資料均與MSP資料一致《為了進一步評估FMR1甲基化 Q 對㈠-(3aR，4s，7aR)_4-經基-4-間甲苯基乙炔基-八氫_0引哚 -1-甲酸甲酯功效之影響’藉由综合考慮初步MSP、亞硫酸 虱鹽疋序及其他MSP資料將三位存在偏差之患者之甲基化 狀態重新分類。三位患者中有兩位可合理地重新分類。餘 下一位無法基於現有資料重新分類，且不進行功效分析。 新統计分析顯不’在完全曱基化患者中，（_)_ (3aR，4S，7aR)-4-經基-4-間曱苯基乙炔基-八氫_β弓卜朵_ι_甲酸 甲酯反應保持顯著高於安慰劑（ABC-C : ρ<〇·〇〇ι ; CGI功 155387.doc -77- 201142293 效指數：p<〇.001)(表5至表6)。 總而言之，總體資料指示FMR1曱基化或mRNA表現可充 當經（-)-(3aR，4S，7aR)-4-羥基-4-間曱苯基乙炔基-八氫-吲 哚-1 -甲酸甲酯治療之FXS患者之臨床反應的預測生物標 記。 表1 : FMR1甲基化狀態之ABC-C結果 治療 90% CI 90% CI 研究群體 天數 功效變數 差異Α 下限 上限 Ρ值“ 子標度之總和 -30.85 -41.37 -20.32 <0.001 子標度1(易激惹） -4.33 -7.28 -1.39 0.020 完全曱基 化之患者 19 子標度π(嗜睡） -6.55 -10.75 -2.35 0.014 (n-8) 子標度111(刻板） -3.96 -6.92 -1.01 0.032 子標度IV(活動過度） -8.77 -11.71 -5.82 <0.001 子標度V(言語不當） -4.48 -6.20 -2.75 <0.001 子標度之總和 5.66 -2.33 13.65 0.241 子標度1(易激惹） -0.67 -2.67 1.34 0.580 部分曱基 化之患者 19 子標度11(嗜睡） 3.76 0.41 7.11 0.066 (n=18) 子標度111(刻板） 0.89 -0.58 2.35 0.315 子標度IV(活動過度） 0.42 -2.13 2.98 0.782 子標度V(言語不當） 1.09 -0.49 2.67 0.253 *(-)-(3aR，4S，7aR)-4-羥基-4-間甲苯基乙炔基-八氫-叫h朵-1-曱酸曱酯相對於安慰劑。 針對基線值加以調整。 **混合模型。 ABC-C評分降低指示改良。 155387.doc -78- 201142293 表2 : FMR1甲基化狀態之CGI詰果 Ο
研究群體 天數功效變數 治療 盖異* 90% CI 下限 90% CI 上限 P值** 完全曱基化之患者19 CGI整體改良 -1.94 -2.45 -1.44 <0.001 (n=8) CGI功效指數 1.86 1.31 2.42 <0.001 部分甲基化之患者W CGI整體改良 0.67 0.15 1.18 0.035 (n=18) CGI功效指數 -0.58 -1.10 -0.07 0.064 *(-；K3aR，4S，7aR)-4-羥基-4-間曱苯基乙炔基-八氫弓丨嗓_1_甲酸曱酯相對於安慰劑。 針對基線值加以調整。 **混合模型。 CGI總體改良降低指示改良。 CGI功效指數降低指示改良。 表3 : FMR1 mRMA表現之ABC· .C結果 治療 90% CI 90% CI 研究群體 天數 功效變數 差異* 下限 上限 P值** 子標度之總和 -32.19 -45.00 -19.38 <0.001 子標度1(易激惹） -3.69 -7.26 -0.13 0.089 个衣％ FMR1 子標度11(嗜睡） -6.71 -12.03 -1.39 0.042 mRNA之患 iy 子標度ιπ(刻板） -3.03 -6.70 0.64 0.167 者(n-7) 子標度IV(活動過度） -9.12 -12.80 -5.44 <0.001 子標度V(言語不當） -4.66 -6.84 -2.48 0.005 子標度之總和 2.23 -5.39 9.85 0.627 子標度1(易激惹） -0.81 -2.86 1.25 0.513 表現FMR1 mRNA之患 19 子標度11(嗜睡） 1.93 -1.07 4.93 0.287 者(n=17) 子標度111(刻板） 0.32 -1.08 1.73 0.703 子標度IV(活動過度） -0.16 -2.71 2.39 0.916 子標度V(言語不當） 1.09 -0.59 2.77 0.280 奸卩设紙了叫斗羥基斗間曱苯基乙炔基-八氫一卜朵小曱酸甲醋相對於安慰劑。 針對基線值加以調整。 **混合模型。 ABC-C評分降低指示改良。 155387.doc -79- 201142293 表4 : FMRl mRMA表現之CGI結果 研究群體 天數 功效變數 治療 差異* 90% CI 下限 90% CI 上限 P值** 不表現FMRl mRNA 1 〇 CGI整體改良 -2.02 -2.64 -1.41 <0.001 之患者(n=7) ly CGI功效指數 1.99 1.30 2.68 <0.001 表現FMRl mRNA之 1 Λ CGI整體改良 0.56 0.02 1.09 0.087 患者(n=17) iy CGI功效指數 -0.47 -1.00 -0.06 0.147 *(-)-(3aR，4S，7aR)-4-經基-4-間甲苯基乙块基-八氫-η引哚_ι_曱酸甲酯相對於安慰劑。 針對基線值加以調整。 **混合模型。 CGI總體改良降低指示改良。 CGI功效指數降低指示改良》 表5 : FMR1曱基化狀態之ABC-C結果（重新分類 研究群體 天數功效變數 治療 90% CI 90% CI 差異*下限 上限 Ρ值i 完全曱基化 之患者（藉 由MSP及定 序 確 定)(n=7) 19 子標度之總和 子標度1(易激惹） 子標度11(嗜睡） 子標度ΠΙ(刻板） 子標度IV(活動過度） 子標度V(言語不當） -27.82 -2.66 -5.53 -5.06 -8.55 -4.31 -39.05 -5.37 -10.87 -8.66 -12.27 -6.26 -16.59 0.05 -0.18 -1.46 -4.84 -2.36 <0.001 0.106 0.090 0.027 <0.001 0.001 部分曱基化 之患者（藉 由MSP及定 序確定） (n=18) 19 子標度之總和 子標度1(易激惹） 子標度π(嗜睡） 子標度ΠΙ(刻板） 子標度IV(活動過度） 子標度V(言語不當） 3.10 -1.15 2.66 0.78 -0.21 0.81 -5.61 -3.45 -0.81 -0.70 -2.85 -0.80 l-HSalMSJaRH-羥基_4_間甲苯基乙炔基. 針對基線值加以調整。 **混合模型。 ABC-C評分降低指示改良。 11.82 1.16 6.13 2.25 2.43 2.41 0.554 0.410 0.206 0.383 0.894 0.403 八氫木-1-曱酸甲酉旨相對於安慰劑 155387.doc -80· 201142293 表6 : FMR1曱基化狀態之CGI結果（重新分類） 研究群體 天數 功效變數 治療 差異* 90% CI 下限 90% 上限 P值** 完全曱基化之患者 (藉由MSP及定序確 19 CGI整體改良 -1.78 -2.34 -1.22 <0.001 定)(n=7) CGI功效指數 1.76 1.13 2.39 <0.001 部分甲基化之患者 (藉由MSP及定序確 19 CGI整體改良 0.58 0.04 1.11 0.079 定)(n=18) CGI功效指數 -0.43 -0.96 0.11 0.193 *(-)-(3aR，4S，7aR)-4-羥基-4-間曱苯基乙炔基-八氫弓卜朵-1-曱酸甲酯相對於安慰劑。針 對基線值加以調整。 〇 **混合模型。 CGI總體改良降低i指示改良。 CGI功效指數降低指示改良。 實例2 :基於Taqman探針之即時PCR檢定後限制酶消化用 於測定FMR1啟動子甲基化 磁术禳羔.*在自同意進行實例1中之藥物基因學/藥物基 因體學評估之患者純化的26例基因體DNA中，12例具有足 0 以藉由基於探針之曱基化檢定加以分析的量。 基於探針之甲基化檢定： 該檢定係基於來自Orion Genomics(St. Louis，MO)之 ‘ MethylScreen技術。然而，其組合MethylScreen限制酶 DNA處理與基於TaqMan水解探針之即時PCR。簡而言之， 為了評定FMR1啟動子區之曱基化狀態，用來自NEB (Ipswich，MA)之McrBC及Hhal獨立地且一致地根據製造 商說明書消化自EDTA抗凝血劑血液純化之基因體DNA ’ 產生以下4種狀況：1)無酶消化；2) McrBC消化；3) Hhal 155387.doc • 81 - 201142293 消化；及4) McrBC及Hhal雙重消化，均在37°C下培育16小 時，接著在65°C下滅活20分鐘。限制酶McrBC具有曱基化 依賴性’意謂其僅裂解曱基化DNA ;而限制酶Hhal具有甲 基化敏感性，意謂其僅裂解未甲基化之DNA。各狀況均含 有相同量400 ng之輸入DNA以進行即時PCR偵測，因此藉 由比較各消化狀況與無酶消化對照，可藉由即時PCR使用 引子對（前置引子 5'-tgcagaaatgggcgttct(SEQ ID NO:4);反 置引子 5’-gtgccgggtcgaaagac(SEQ ID NO:5))及 FAM標記之 探針（探針 5' FAM-ctgaagggcggtgacaggtcg-BHQl(SEQ ID NO:6))定量酶消化後可擴增DNA之剩餘量。在即時PCR偵 測前，在37°C下用限制酶Alul處理酶消化混合物1小時， 接著在65°C下滅活20分鐘。PCR擴增子涵蓋相關區域中之 15個CpG島。消化狀況與對照之差由PCR循環臨限值（ACt) 之變化體現。臨床截止區構成約5至14之dCt(McrBC與未處 理通道之間的PCR循環臨限值之差）範圍。此與94%至100% CTA之曱基化百分比範圍相關。藉由根據演算法計算，可 確定樣本DNA之FMR1啟動子區的曱基化百分比。 .结耒.·實例1中所述之原始驗證概念研究中的12位患者 中，基於探針之曱基化分析顯示3位患者完全曱基化，9位 患者部分曱基化，產生與MSP檢定相似之結果。完全甲基 化之患者具有介於-9.95至-10.27範圍内之ACt，且具有介 於99.9至99.92範圍内的甲基化百分比。部分曱基化之患者 具有介於-1.77至-7.29範圍内的ACt及介於70.68至99.36範 圍内的曱基化百分比。完全甲基化之患者不表現FMR1 155387.doc -82- 201142293 mRNA，而部分甲基化之患者表現不同量之mRNA。資料 表明周圍血液中之FMR1甲基化與轉錄密切相關。更重要 的是，在第19天，完全曱基化及/或不表現FMR1 mRNA之 患者在對（-)-(3aR,4S，7aR)-4-羥基-4-間曱苯基乙炔基-八氫-吲哚-1-曱酸甲酯之反應方面顯示與安慰劑相比顯著更大程 度之改良（ABC-C : p<0.001 ; CGI功效指數：p<0.001)。相 比而言，在部分甲基化或表現FMR1 mRNA之患者中， 在（-)-(3aR,4S,7aR)-4-羥基-4-間曱苯基乙炔基-八氫-吲 哚-1-甲酸曱酯與安慰劑之間不存在顯著差異。 實例3 :使用時差式螢光共振能量轉移（TR-FRET)免疫檢 定進行FMRP測定 以下抗體用於TR-FRET免疫檢定：F4055(Sigma， RTGKDRNQKKEKPDSVDG(SEQ ID NO:7)) ； 2160 (millipore ; ITVAFENNWQPDRQIPFHD ; SEQ ID NO:8)及 H000023 3 2-M03(Abnova ； ATKDTFHKIKLDVPEDLRQM CAKEAAHKDFKKAVGAFSVTYDPENYQLVI ； (SEQ ID NO:9))。 由F4055-H00002332-M03抗體組合進行人類FMRP蛋白镇 測之溫度依賴性信號動力學 用eGFP質體（空白組）或人類FMRP質體（經FMRP轉染）短 暫轉染HEK293T細胞。將細胞於M-PER(Pierce)溶解緩衝 液、150 nM NaCl及蛋白酶抑制劑中溶解。每低容量384孔 中载入1 pg總蛋白（5 μΐ)及1 μΐ抗體偵測緩衝液。結果示於 圖2中。 155387.doc -83 · 201142293 由MAB2160-F40S5抗體組合進行人類FMRP蛋白摘測之溫 度依賴性信號動力學 用eGFP質體（空白組）或人類FMRP質體（經FRMP轉染）短 暫轉染HEK293T細胞。將細胞於M-PER(Pierce)溶解緩衝 液、150 nM NaCl及蛋白酶抑制劑中溶解。每低容量384孔 中載入1 pg總蛋白（5 μΐ)及1 μΐ抗體偵測緩衝液（最終抗體 量：每孔 0.6 ng Millipore MAB2160-Tb 及每孔 20 ng Sigma F4055-d2)。結果示於圖3中。 內源性人類FMRP蛋白偵測原代人類織維母細胞 將健康對照纖維母細胞（BJ1及MG63)或完全曱基化之X 染色體脆折症患者纖維母細胞（GM05848B、GM09497A及 GM07072)於M-PER(Pierce)溶解緩衝液、150 nM NaCl及蛋 白酶抑制劑中溶解。將總蛋白濃度調節至12.5 pg總蛋白/5 μΐ(約8000個細胞/1 μΐ)。每低容量384孔中載入各細胞溶解 物之蛋白質濃度稀釋物及1 μΐ抗體偵測緩衝液（最終抗體 量：每孑L0.3 ng Millipore MAB2160-Tb及每孑L3 ng Abnova H00002332-M03-d2)。結果示於圖 4中。 【圖式簡單說明】 圖1描述FMIU啟動子及5' UTR序列。 圖2描述顯示由F4055-H0002332-M03抗體組合進行人類 FMRP蛋白偵測之溫度依賴性信號動力學的條形圖。 圖3描述顯示由MAB21 60-F4055抗體組合進行人類FMRP 蛋白偵測之溫度依賴性信號動力學的條形圖。 圖4描述顯示原代人類纖維母細胞中之内源性人類FMRP 蛋白偵測的條形圖。 155387.doc -84-
201142293 序列表 <110>瑞士商諾華公司 <ΠΟ>用於X染色體跪折症(FXS)治療之預測標記 <130>ΡΑΤ054191 <140〉100115217 <141〉2011-04-29 <150> 61/330,299; 61/379,197 <151> 2010-04-30 ; 2010-09-01 <160> 11 <170> Patentln version 3.5 <210> 1 <211> 1020 <2I2> DMA <2Π>智人 <400> 1 tgccact£tt cctagttcaa agtcttcttc tgtctaatcc ttcaccccta ttctcgcctt ccactccacc tcccgctcag tcagactgcg ctactttgaa ccggaccaaa ccaaaccaaa ccaaaccaaa ccaaaccaga ccagacaccc cctcccgcgg aatcccagag aggccgaact gggataaccg gatgcatttg atttcccacg ccactgagtg cacctctgca gaaatgggcg tictggccct cgcgaggcag tgcgacctgt caccgccctt cagccttccc gccctccacc aagcccgcgc acgcccggcc cgcgcgtctg tctttcgacc cggcaccccg gccggitccc agcagcgcgc atgcgcgcgc tcccaggcca cttgaagaga gagggcgggg ccgaggggct gagcccgcgg ggggagggaa cagcgttgat cacgtgacgt ggtttcagtg tttacacccg cagcgggccg msttcggc ctcagtcagg cgctcagctc cgtttcggtt tcacttccgg tsgagggccg cctctgagcg ggcggcgggc cgacggcgag cgcgggcggc ggcggtgacg gaggcgccgc tgccaggggg cgtgcggcag cgcggcggcg gcggcggcgg cggcggcggc Egaggcggcg gcggC2£Cgg cggcggcggc ggctgggcct cgagcgcccg cagcccacct ctcgggggcg £gctcccggc £〇tagcam ctgaagagaa gatggaggag ctggtggtgg aagtscgggg ctccaatggc gctttctaca aggtacttgg ctctagggca ggccccatct icgcccttcc ttccctccct tttcttcttg gtgtcggcgg gaggcaggcc cggggccctc ttcccgagca ccgcgcclgg gtgccagggc acgctcggcg ggatgttgtt gggagggaag gactggactt ggggcctgtt ggaagcccct ctccgactcc gagaggccct agcgcctatc <210> 2 <211> 196 <2I2> DMA <213>智人 <400> 2 gccactgagt gcacctctgc agaaatgggc gttctggccc tcgcgaggca gtgcgacctg tcaccgccct tcaficcttcc csccctccac caagcccgcg cacgcccggc cc^cgcgtct 155387.doc 60 120 180 240 300 360 420 480 540 600 660 720 780 840 900 960 1020 60 120 180201142293 gtctttcgac ccggcacccc ggccg£ttcc cagcagcgcg catgcgcgcg ctcccaggcc acttgaagag agaggg 196 <210> 3 <211> 120 <212> DNA <213>智人 <4〇〇> 3 igcagaaatg ggcgttctgg ccctcgcgag gcagtgcgac ctgtcaccgc ccttcagcct icccgccctc caccaagccc gcgcacgccc ggcccgcgcg tctgtctttc gacccggcac 60 120 <210> 4 <211> 18 <212> DNA <?·Π>智人 <400> 4 tgcagaaatg ggcgttct 18 <210> 5 <211> 17 <212> DNA <213>智人 <400> 5 gtgccgggtc gaaagac 17 <210> 6 <211> 21 <212> DNA <213>智人 <400> 6 ctgaagggcg gtgacaggtc g 21 <210> 7 <211> 18 <212> PRT <2ί3>智人 <400> 7 Arg Thr Gly Lys Asp Arg Asn Gin Lys Lys Glu Lys Pro Asp Ser Val 15 10 15 A$p Gly <210> 8 <2U> 19 <212> PRT <213>智人 <400> 8 Ι!ε 丁hr Va] Aia Phe Glu Mrt Asn Trp Gin Pro Asp Arg Gin lie Pro 15 10 15
Phe His Asp <210> 9 155387.doc -2- 201142293 <211> 50 <212> PRT <213> + 人 <400> 9
Ala Thr Lys Asp Thr Phe His Lys lie Lys Leu Asp Val Pro Glu Asp 15 10 15
Leu Arg Gin Met Cys Ala Lys Glu Ala Ala His Lys Asp Phe Lys Lys 20 25 30
Ala Val Gly Ala Phe Ser Val Thr Tyr Asp Pro Glu Asn Tyr Gin Leu 35 40 45
Val He 50
<210> 10 <211> 29 <212> DNA <213>智人 <400> 10 29 gttattgagt gtatttttgt agaaatggg <210> Π <211> 27 <212> DNA <213>智人 <400> 11 27 ccctctctct tcaaataacc taaaaac
155387.doc

Claims (1)

  1. 201142293 七、申請專利範圍· 1. 一種測定患有X染色體脆折症（FXS)之個體對用mGluR5 拮抗劑治療之反應性的方法，該方法包含： 自患有X染色體脆折症之個體分離RNA樣本； - 進行測定該RNA樣本中之FMR1 mRNA轉錄本之檢 . 定；及 若該樣本之FMR1 mRNA表現量與對照相比降低，則 將該個體歸為mGluR5反應者。 〇 2.如請求項1之方法，其中該檢定係選自由北方墨點分 析、反轉錄-聚合酶鏈反應（RT-PCR)、RT-PCR ELISA、 基於TaqMan之定量RT-PCR(基於探針之定量RT-PCR)及 基於S YBR綠之定量RT-PCR組成之群。 3. 一種測定患有FXS之個體對用mGluR5拮抗劑治療之反應 性的方法，該方法包含： 自患有X染色體脆折症之個體分離樣本； 進行測定該樣本中之FMR1蛋白之量之檢定；及 〇 若該樣本之FMR1蛋白（FMRP)量與對照相比降低，則 將該個體歸為mGluR5反應者。 • 4.如請求項3之方法，其中該檢定係選自由免疫組織化 . 學、ELISA、流式細胞測量術、西方墨點法、HPLC及質 譜分析組成之群。 5. 一種測定患有X染色體脆折症（FXS)之個體對用mGluR5 拮抗劑治療之反應性的方法，該方法包含： 提供來自患有FXS之個體的核酸樣本； 155387.doc 201142293 測定該樣本中之X染色體脆折性智力遲鈍1(FMR1)基因 區之甲基化程度，其中該樣本中相對於對照之甲基化程 度指示該個體是否為mGluR5反應者。 6. 一種測定患有X染色體脆折症（FXS)之個體對用mGluR5 拮抗劑治療之反應性的方法，該方法包含： 提供來自患有X染色體脆折症之個體的核酸樣本； 測定該樣本中之X染色體脆折性智力遲鈍1(FMR1)基因 區之甲基化程度；及 若該樣本中所存在之FMR1基因區完全曱基化，則將 該個體歸為mGluR5反應者。 7. 如請求項1、3、5或6中任一項之方法，其中該mGluR5拮 抗劑為（-)-(3&11，48,7&1〇-4-羥基-4-間曱苯基乙炔基-八氫-吲哚-1 -曱酸曱酯。 8. 如請求項6之方法，其中該測定可使用選自以下之檢定 進行：曱基化敏感性限制酶消化與南方墨點法或定量 PCR(基於探針或SYBR綠）中之至少一者組合；或亞硫酸 氫鹽DNA修飾與曱基化特異性PCR(MSP)、定量甲基化 特異性PCR(基於探針或SYBR綠）或焦磷酸定序中之至少 一者組合。 9. 一種測定患有X染色體脆折症（FXS)之個體對用mGlu!l5 拮抗劑治療之反應性的方法，該方法包含： 測定來自患有FXS之個體之樣本中FMR1 mRNA轉錄 本、FMR1蛋白之存在、或FMR1基因區之曱基化或其任 何組合；及 155387.doc 201142293 若該樣本之FMRl mRNA含量與對照相比降低、FMRl 蛋白之量與對照相比降低、或若所存在之FMR1基因區 完全甲基化，則將該個體歸為mGluR5反應者。 10.如請求項9之方法，其中該方法包含測定FMRl mRNA及 FMR1蛋白之存在。 - 11.如請求項6、8或9中任一項之方法，其中該FMR1基因區 為 SEQ ID NO:l、SEQ ID NO:2或 SEQ ID NO:3。 12. 如請求項1、3、5、6或9中任一項之方法，其中該方法 〇 進一步包含投與mGluR5拮抗劑。 13. 如請求項12之方法，其中該mGluR5拮抗劑為（-)-(3aR，4S，7aR)-4-羥基-4-間曱苯基乙炔基-八氫-吲哚-1-曱 酸甲酯。 14. 一種診斷套組，其係用於測定患有X染色體脆折症（FXS) 之個體是否為mGluR5拮抗劑反應者，該套組包含： 用於量測FMRl mRNA轉錄本、FMR1蛋白含量、或 q FMR1基因區之曱基化或其任何組合的試劑； 及使用說明書。 155387.doc
TW100115217A 2010-04-30 2011-04-29 Predictive markers useful in the treatment of fragile X syndrome (FXS) TW201142293A (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US33029910P 2010-04-30 2010-04-30
US37919710P 2010-09-01 2010-09-01

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TW201142293A true TW201142293A (en) 2011-12-01

Family

ID=44121075

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW100115217A TW201142293A (en) 2010-04-30 2011-04-29 Predictive markers useful in the treatment of fragile X syndrome (FXS)

Country Status (21)

Country Link
US (1) US20130052644A1 (zh)
EP (1) EP2563934A1 (zh)
JP (1) JP2013524840A (zh)
KR (1) KR20130100906A (zh)
CN (1) CN102869791A (zh)
AU (1) AU2011245372A1 (zh)
BR (1) BR112012027816A2 (zh)
CA (1) CA2797854A1 (zh)
CL (1) CL2012003027A1 (zh)
EC (1) ECSP12012317A (zh)
GT (1) GT201200293A (zh)
IL (1) IL222534A0 (zh)
MA (1) MA34263B1 (zh)
MX (1) MX2012012615A (zh)
PE (1) PE20130213A1 (zh)
RU (1) RU2012151273A (zh)
SG (1) SG184458A1 (zh)
TN (1) TN2012000485A1 (zh)
TW (1) TW201142293A (zh)
WO (1) WO2011137206A1 (zh)
ZA (1) ZA201207481B (zh)

Families Citing this family (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2600901B1 (en) 2010-08-06 2019-03-27 ModernaTX, Inc. A pharmaceutical formulation comprising engineered nucleic acids and medical use thereof
CA2821992A1 (en) 2010-10-01 2012-04-05 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
WO2012084873A1 (en) * 2010-12-20 2012-06-28 Novartis Ag 4- (hetero) aryl - ethynyl - octahydro - indole - 1 - carboxylic acid esters
JP2014511687A (ja) 2011-03-31 2014-05-19 モデルナ セラピューティクス インコーポレイテッド 工学操作された核酸の送達および製剤
US9464124B2 (en) 2011-09-12 2016-10-11 Moderna Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acids and methods of use thereof
US9428535B2 (en) 2011-10-03 2016-08-30 Moderna Therapeutics, Inc. Modified nucleosides, nucleotides, and nucleic acids, and uses thereof
HRP20220717T1 (hr) 2011-12-16 2022-07-22 Modernatx, Inc. Modificirani pripravci mrna
WO2013131981A1 (en) 2012-03-08 2013-09-12 Novartis Ag Predictive markers useful in the diagnosis and treatment of fragile x syndrome (fxs)
US9572897B2 (en) 2012-04-02 2017-02-21 Modernatx, Inc. Modified polynucleotides for the production of cytoplasmic and cytoskeletal proteins
US9254311B2 (en) 2012-04-02 2016-02-09 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of proteins
JP2015513912A (ja) 2012-04-02 2015-05-18 モデルナ セラピューティクス インコーポレイテッドＭｏｄｅｒｎａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ． タンパク質の産生のための修飾ポリヌクレオチド
US9283287B2 (en) 2012-04-02 2016-03-15 Moderna Therapeutics, Inc. Modified polynucleotides for the production of nuclear proteins
EP2922554B1 (en) 2012-11-26 2022-02-23 ModernaTX, Inc. Terminally modified rna
US8980864B2 (en) 2013-03-15 2015-03-17 Moderna Therapeutics, Inc. Compositions and methods of altering cholesterol levels
WO2014152600A2 (en) * 2013-03-15 2014-09-25 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Measurement of cellular fmrp levels for high throughput drug screening and diagnosis of fragile x syndrome
AU2014329452B2 (en) 2013-10-03 2019-06-20 Moderna Therapeutics, Inc. Polynucleotides encoding low density lipoprotein receptor
AU2014337504B2 (en) * 2013-10-14 2020-01-30 Indiana University Research And Technology Corporation Use of acamprosate to modulate ERK 1-2 activation in animal models for FXS and ASD and individuals diagnosed with FXS and ASD
CN103981253A (zh) * 2014-03-27 2014-08-13 江苏佰龄全基因生物医学技术有限公司 一种用于检测脆性x染色体综合征的cgg重复数及agg插入信息的pcr试剂盒
WO2022104098A1 (en) * 2020-11-13 2022-05-19 Children's Hospital Medical Center Refined uses of gabaa receptor modulators in treatment of fragile x syndrome

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6017704A (en) 1996-06-03 2000-01-25 The Johns Hopkins University School Of Medicine Method of detection of methylated nucleic acid using agents which modify unmethylated cytosine and distinguishing modified methylated and non-methylated nucleic acids
US5786146A (en) 1996-06-03 1998-07-28 The Johns Hopkins University School Of Medicine Method of detection of methylated nucleic acid using agents which modify unmethylated cytosine and distinguishing modified methylated and non-methylated nucleic acids
US6143504A (en) * 1998-10-27 2000-11-07 Arch Development Corporation Methods and compositions for the diagnosis of fragile X syndrome
GB0128996D0 (en) * 2001-12-04 2002-01-23 Novartis Ag Organic compounds
KR20050033070A (ko) 2002-08-09 2005-04-08 아스트라제네카 에이비이 메타보트로픽 글루타메이트 수용체-5의 조절제로서[1,2,4]옥사디아졸
JP4453297B2 (ja) 2003-05-27 2010-04-21 トヨタ自動車株式会社 車両用遊星歯車式多段変速機
TW200801005A (en) 2005-08-15 2008-01-01 Astrazeneca Ab Acetylenic piperazines as metabotropic glutamate receptor antagonists
US20090042195A1 (en) * 2005-10-07 2009-02-12 Bradford Coffee Methods and systems for screening for and diagnosing dna methylation associated abnormalities and sex chromosome aneuploidies
US7855053B2 (en) * 2006-07-19 2010-12-21 The Regents Of The University Of California Methods for detecting the presence of expanded CGG repeats in the FMR1 gene 5′ untranslated region
AU2009279181A1 (en) 2008-08-04 2010-02-11 Novartis Ag Bioassay for polyQ protein
US20100248239A1 (en) * 2009-03-24 2010-09-30 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods and materials for detecting fragile x mutations

Also Published As

Publication number Publication date
WO2011137206A1 (en) 2011-11-03
US20130052644A1 (en) 2013-02-28
MX2012012615A (es) 2012-12-17
KR20130100906A (ko) 2013-09-12
RU2012151273A (ru) 2014-06-10
ZA201207481B (en) 2013-06-26
IL222534A0 (en) 2012-12-31
JP2013524840A (ja) 2013-06-20
TN2012000485A1 (en) 2014-04-01
CL2012003027A1 (es) 2014-02-14
PE20130213A1 (es) 2013-03-19
SG184458A1 (en) 2012-11-29
AU2011245372A1 (en) 2012-11-29
MA34263B1 (fr) 2013-05-02
ECSP12012317A (es) 2013-01-31
CA2797854A1 (en) 2011-11-03
CN102869791A (zh) 2013-01-09
BR112012027816A2 (pt) 2017-08-08
EP2563934A1 (en) 2013-03-06
GT201200293A (es) 2014-06-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TW201142293A (en) Predictive markers useful in the treatment of fragile X syndrome (FXS)
US12012634B2 (en) Methods for diagnosing, prognosing, and treating parkinson's disease or parkinsonism
US11618925B2 (en) Methods and compositions for screening and treating developmental disorders
Luo et al. Association of ACE2 genetic polymorphisms with hypertension-related target organ damages in south Xinjiang
US20230220468A1 (en) Methods for detecting a genetic variation in attractin-like 1 (atrnl1) gene in subject with parkinson's disease
US11549145B2 (en) Methods and compositions for inhibiting and treating neurological conditions
Maass et al. PDE3A mutations cause autosomal dominant hypertension with brachydactyly
Chen et al. Relationship between genetic variants of ACE 2 gene and circulating levels of ACE 2 and its metabolites
Dorn Adrenergic signaling polymorphisms and their impact on cardiovascular disease
Mancama et al. Investigation of promoter variants of the histamine 1 and 2 receptors in schizophrenia and clozapine response
JP2010524432A (ja) サーチュイン活性のバイオマーカーおよびその使用方法
KR20220063311A (ko) 간질 폐렴의 위험을 예측하는 방법
Hoshino et al. Association of hepatocyte growth factor promoter polymorphism with severity of interstitial lung disease in Japanese patients with systemic sclerosis
US20080293054A1 (en) Hmgcr isoforms in Prediction of Efficacy and Identification of Cholesterol-Modulating Compounds
US20080249103A1 (en) Sirtuin polymorphisms and methods of use thereof
Thompson et al. G protein-coupled receptor pharmacogenetics
CA2736913A1 (en) Means and methods for evaluating a therapy with a p38 map kinase inhibitor
CA2515339A1 (en) Use of a novel polymorphism in the hsgk1 gene in the diagnosis of hypertonia and use of the sgk gene family in the diagnosis and therapy of the long qt syndrome
US20100166880A1 (en) Method for treatment and diagnosis of glutamate dehydrogenase disorders
WO2009001095A2 (en) Novel schizophrenia associated genes
US20130096212A1 (en) Method and a Kit to Predict Response to Antidepressant Treatment
WO2013131981A1 (en) Predictive markers useful in the diagnosis and treatment of fragile x syndrome (fxs)
TW202307217A (zh) 用於診斷及治療於染色體2的2:107,510,000至107,540,000位點具有單一核苷酸多型性的個體的方法
Ariens et al. Coagulation Factor XIII-A Subunit Missense Mutation in the Pathobiology of Autosomal Dominant Multiple Dermatofibromas
Zhang Genetic and functional analyses of diabetic nephropathy with focus on chromosome 3q