CN102869791A - 用于脆性x染色体综合征(fxs)治疗的预测标记 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物标记用于测定患有脆性X染色体综合征(FXS)的个体对mGluR5拮抗剂治疗的反应性的用途。
Description
技术领域
本发明涉及一种个体化治疗方法。具体说，本发明涉及预测患有脆性X染色体综合征的个体是否将对用特定治疗剂治疗作出临床反应。
背景技术
脆性X染色体综合征(FXS)为遗传型智力低下的最常见病因，其在世界范围的发病率为男性1/4000及女性1/8000。FXS的发病率比其他与X染色体有关的智力低下高10至20倍。FXS为单基因疾病，且主要由引发脆性X染色体智力低下1(FMR1)基因的过度甲基化及沉默的CGG重复序列扩增所致。不存在FMR1蛋白(FMRP)可能造成代谢型谷氨酸受体5(mGluR5)信号传导所介导的蛋白质合成刺激过度且因此导致FXS表型多样性。mGluR5拮抗剂可能降低mGluR5信号传导并校正由缺乏脆性X染色体智力低下蛋白所致的缺陷。
对于FXS无特效疗法且临床实践因不同国家而各异。用于治疗FXS症状的最常见药物为刺激剂(亦即哌醋甲酯(methylphenidate))、选择性血清素再吸收抑制剂(SSRI)(例如氟西汀(fluoxetine))、α-肾上腺素受体促效剂(例如可乐定(clonidine))、情绪稳定剂(例如卡马西平(carbamazepine))及抗精神病药(例如利培酮(risperidone)、奥氮平(olazapine))。此等药物皆因其功效有限且可能存在不良副作用而放弃使用。近年来，亦已表明mGluR拮抗剂的作用。
日益增加的证据表明，患者的遗传概况可决定患者对治疗剂治疗的反应性。假定许多疗法可用于患有FXS的个体，可测定影响例如对特定药物的反应的遗传因子以便向患者提供个体化治疗方案。该等个体化治疗方案可能使对患者的治疗效益最大，同时将可能与替代性治疗方案有关的相关副作用减至最少。因而，需要鉴别可用于预测患者是否有可能对特定疗法作出反应的因素。
发明内容
本发明基于发现可使用特定生物标记来选择可能对mGluR5拮抗剂治疗作出反应的患有FXS的个体。具体说，已发现，来自患有FXS的个体的样品中与对照相比的脆性X染色体智力低下1(FMR1)基因区的甲基化状态及/或FMR1基因表达量降低及/或FMR1蛋白(FMRP)的量降低可用于预测该个体是否将对mGluR5治疗作出反应。因而，本发明允许治疗提供者在给予mGluR5拮抗剂之前鉴别对mGluR5治疗作出反应的患有FXS的个体及对该治疗无反应的患有FXS的个体。
在一个方面，本发明包括一种测定患有FXS的个体对mGluR5拮抗剂治疗的反应性的方法。该方法包括提供来自患有脆性X染色体综合征的个体的核酸样品；测定该样品中脆性X染色体智力低下1(FMR1)基因区的甲基化程度；及若该样品中所存在的所有或基本上所有FMR1基因区已甲基化，则将该个体归为mGluR5反应者。FMR1启动子的甲基化程度可藉由本领域中已知的任何方法来测定，包括选自以下检测：甲基化敏感性限制酶消化组合Southern印迹法或定量PCR(基于探针或SYBR绿)中的至少一者；或亚硫酸氢盐DNA修饰组合甲基化特异性PCR(MSP)、定量甲基化特异性PCR(基于探针或SYBR绿)或焦磷酸测序中的至少一者。在一实例中，甲基化程度使用定性检测如MSP来测定，且若仅检测到甲基化的相关FMR1基因区，亦即在相关FMR1基因区中未检测到未甲基化FMR1，则将个体鉴别为mGluR5反应者。在另一实例中，甲基化程度使用定量检测来测定，且若FMR1基因区的甲基化程度测定为99.5%或99.5%以上，则将个体鉴别为mGluR5反应者。定量检测的一个实例为甲基化敏感性限制酶消化组合qPCR。
在另一方面，本发明包括一种测定患有FXS的个体对mGluR5拮抗剂治疗的反应性的方法，该方法包括提供来自患有FXS的个体的核酸样品；测定该样品中的脆性X染色体智力低下1(FMR1)基因区的甲基化程度，其中若该样品中所存在的所有或基本上所有FMR1基因区已甲基化，则将该个体鉴别为mGluR5反应者；及向鉴别为mGluR5反应者的个体给予mGluR5拮抗剂。
在又一方面，本发明包括一种用于测定患有FXS的个体对mGluR5拮抗剂治疗的反应性的方法，该方法包括提供来自患有FXS的个体的核酸样品；及使用甲基化敏感性分析仪测定该样品中的脆性X染色体智力低下1(FMR1)基因区的甲基化程度，其中若该样品中所存在的所有或基本上所有FMR1基因区已甲基化，则将该个体鉴别为mGluR5反应者。
在又一方面，本发明包括一种测定患有FXS的个体对mGluR5拮抗剂治疗的反应性的方法，该方法包括提供来自患有FXS的个体的核酸样品；测定该样品中的脆性X染色体智力低下1(FMR1)基因区的甲基化程度，其中若所有FMR1基因区已甲基化，或若FMR1基因区的甲基化程度测定为99.5%或99.5%以上，或具有8或8以上的Δct，则将该个体鉴别为mGluR5反应者；及向鉴别为mGluR5反应者的个体给予mGluR5拮抗剂。
在又一方面，本发明包括一种测定患有FXS的个体对mGluR5拮抗剂治疗的反应性的方法，该方法包括提供来自患有FXS的个体的核酸样品；测定该样品中的脆性X染色体智力低下1(FMR1)基因区的甲基化程度，其中该样品中相对于对照的甲基化程度指示该个体是否为mGluR5反应者。
在另一方面，本发明包括一种测定患有FXS的个体对mGluR5拮抗剂治疗的反应性的方法，该方法包括自患有脆性X染色体综合征的个体分离RNA样品；进行检测以检测该RNA样品中的FMR1mRNA转录物；及若未检测到FMR1mRNA转录物或检测到的FMR1mRNA表达量与对照相比降低，则将该个体归为mGluR5反应者。mRNA转录物可使用本领域中已知的任何方法来检测，包括Northern印迹分析、逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、RT-PCRELISA、基于TaqMan的定量RT-PCR(基于探针的定量RT-PCR)及基于SYBR绿的定量RT-PCR。
在又一方面，本发明包括一种测定患有FXS的个体对mGluR5拮抗剂治疗的反应性的方法；该方法包括自患有脆性X染色体综合征的个体分离样品；进行检测以检测该样品中的FMR1蛋白；及若该样品缺乏FMR1蛋白(FMRP)的存在或与对照相比量降低，则将该个体归为mGluR5反应者。FMRP检测可藉由本领域中已知的任何方法进行，包括ELISA、流式细胞测量术、血液涂片测试(免疫染色)、Western印迹法、HPLC及质谱分析。
在本文所述的任何方法中，mGluR5拮抗剂可为(-)-(3aR,4S,7aR)-4-羟基-4-间甲苯基乙炔基-八氢-吲哚-1-甲酸甲酯。
附图简要说明
图1描述FMR1启动子及5'UTR序列。
图2描述显示由F4055-H0002332-M03抗体组合进行人FMRP蛋白检测的温度依赖性信号动力学的柱状图。
图3描述显示由MAB2160-F4055抗体组合进行人FMRP蛋白检测的温度依赖性信号动力学的柱状图。
图4描述显示原代人纤维母细胞中的内源性人FMRP蛋白检测的柱状图。
发明详述
本发明部分地基于发现FMR1基因转录沉默的患有脆性X染色体综合征(FXS)的个体可能对mGluR5拮抗剂治疗作出反应。因此，本发明涉及一种预测患有FXS的个体是否为mGluR5反应者的方法。相关样品中的FMR1基因区的甲基化程度、FMR1mRNA表达缺乏及FMR1蛋白(FMRP)缺乏可以单独或组合形式充当预测患者对mGluR5拮抗剂的反应性的生物标记。
如本文所使用，“mGluR5反应者”为可能在用mGluR5拮抗剂进行治疗性处理后显示改良的行为症状的患有FXS的个体，如使用异常行为检查表-社区版(Aberrant Behavior Checklist-Community Edition；ABC-C)行为量度所评定(Bihm等人，Am.J.Ment Retard 96:209-211)。ABC-C量测检查各种行为，包括行为刻板、活动过度、言语不当及兴趣狭窄。在用mGluR5拮抗剂治疗后显示ABC-C评分降低的个体归类为mGluR5反应者。亦可藉由其他方法评定行为症状，诸如临床整体印象(Clinical Global Impression；CGI)量表、社会反应量表(Social Responsiveness Scale；SRS)或重复行为量表-修订版(Repetitive BehaviorScale-Revised；RBS-R)。根据此等测试，显示改良的个体亦将确定为mGluR5反应者。
mGluR5拮抗剂
本发明可用于测定哪些患有FXS的个体可能对mGluR5拮抗剂治疗作出反应。mGluR5拮抗剂的实例包括肽模拟物、蛋白质、肽、核酸、小分子或其他候选药物。mGluR5拮抗剂实例之一为(-)-(3aR,4S,7aR)-4-羟基-4-间甲苯基乙炔基-八氢-吲哚-1-甲酸甲酯。mGluR5拮抗剂(-)-(3aR,4S,7aR)-4-羟基-4-间甲苯基乙炔基-八氢-吲哚-1-甲酸甲酯以及其制造方法揭示于美国专利第7,348,353号中，该专利的揭示内容以引用的方式并入本文中。mGluR5拮抗剂(-)-(3aR,4S,7aR)-4-羟基-4-间甲苯基乙炔基-八氢-吲哚-1-甲酸甲酯具有以下结构式：
预期其他mGLUR5拮抗剂，诸如美国专利第7,348,353号中所揭示的mGLUR5拮抗剂用于本发明方法中。
在一实施方式中，mGluR5拮抗剂为式(I)化合物：
其中：
R1表示任选取代的烷基或任选取代的苯甲基；及
R2表示氢(H)、任选取代的烷基或任选取代的苯甲基；或
R1及R2与其所连接的氮原子一起形成任选取代的具有14个以下环原子的杂环；
R3表示卤素、烷基、烷氧基、烷基氨基或二烷基氨基；
R4表示羟基(OH)、卤素、烷基或烷氧基；
Q表示CH、CR4或N；
V表示CH、CR4或N；
W表示CH、CR4或N；
X表示CH或N；
Y表示CH、CR3或N；
Z表示CH2、NH或O；及
其限制条件为Q、V及W不同时为N；
呈游离碱或酸加成盐形式。
在另一实施方式中，mGluR5拮抗剂为式(II)化合物，其中式(II)化合物为Q、V及W中至少一者为N的式(I)化合物；呈游离碱或酸加成盐形式。
在又一实施方式中，mGluR5拮抗剂为式(III)化合物，其中式(III)化合物为Y为CR3的式(II)化合物；呈游离碱或酸加成盐形式。
下文定义式(I)、式(II)及式(III)及相应中间化合物中所存在的优选取代基、优选数值范围或优选基团范围。
X优选表示CH。
Y优选表示CH或CR3，其中R3优选表示卤素，尤其优选为氯。
Z优选表示NH。
R3优选表示氟、氯、C1-4烷基，例如甲基。
R3尤其优选表示氯。
R1及R2优选与其所连接的氮原子一起形成未经取代或经取代的具有3至11个环原子及1至4个杂原子的杂环；杂原子选自由N、O、S组成的组；取代基选自由氧代(=O)、羟基、卤素、氨基、硝基、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷氧基烷基、C1-4烷氧基羰基、C1-4烷氧基羰基烷基、C1-4卤烷基、C6-10芳基、卤素-C6-10芳基、C6-10芳氧基及C6-10芳基-C1-4烷基组成的组。
R1及R2与其所连接的氮原子一起形成未经取代、经单取代或经两次取代的具有5至9个环原子及1至3个杂原子的杂环；杂原子选自由N及O组成的组；取代基选自由卤素及C1-4烷基组成的组。
R1及R2优选与其所连接的氮原子一起形成未经取代、经单取代或经两次取代的选自由以下组成的组的杂环：
且取代基选自由氟、氯、甲基、乙基、丙基、丁基、三氟甲基、氟丙基及二氟丙基组成的组。
R1及R2优选彼此独立地表示任选经C1-C4烷氧基或卤素取代的C1-C4烷基或苯甲基。
上述一般或优选基团定义适用于式(I)、式(II)及式(III)的最终产物，且亦相应地适用于各情况下制备所需的起始物质或中间体。此等基团定义可彼此任意组合，亦即包括所提供的优选范围之间的组合。此外，个别定义可能不适用。
根据本发明，优选含有上述优选含义的组合的式(I)、式(II)及式(III)化合物。
根据本发明，尤其优选含有上文所列出的尤其优选含义的组合的式(I)、式(II)及式(III)化合物。
根据本发明，特别优选含有上文所列出的极佳含义的组合的式(I)化合物。
优选R2表示未经取代或经取代的杂环的式(I)、式(II)及式(III)化合物。
尤其优选如以下所示的式(IIa)至式(IIe)化合物：
其中取代基具有本说明书中所提供的含义；
其中取代基具有本说明书中所提供的含义；
其中取代基具有本说明书中所提供的含义；
其中R4表示C1-C4烷基，优选为甲基，且其他取代基具有本说明书中所提供的含义；
其中R4表示卤素，优选为氯，且其他取代基具有本说明书中所提供的含义。
本发明的其他优选化合物具有如下所示的式(IIIa)至式(IIIe)：
其中所有取代基均具有本说明书中所提供的含义；
其中取代基具有本说明书中所提供的含义；
其中取代基具有本说明书中所提供的含义；
其中R4表示C1-C4烷基，优选为甲基，且其他取代基具有本说明书中所提供的含义；
其中R4表示卤素，优选为氯，且其他取代基具有本说明书中所提供的含义。
特定式(I)、式(II)及式(III)化合物包括本文所提供的实施例中所述的化合物。
在另一实施方式中，mGluR5拮抗剂为式(IV)化合物：
其中
m为0或1；
n为0或1；及
A为羟基；
X为氢；及
Y为氢；或
A与X或与Y形成单键；
R0为氢、(C1-4)烷基、(C1-4)烷氧基、三氟甲基、卤素、氰基、硝基、-COOR1(其中R1为(C1-4)烷基)或-COR2(其中R2为氢或(C1-4)烷基)；及
R为-COR3、-COOR3、-CONR4R5或-SO2R6，其中R3为(C1-4)烷基、(C3-7)环烷基或任选取代的苯基、2-吡啶基或2-噻吩基；R4及R5独立地为氢或(C1-4)烷基，且R6为(C1-4)烷基、(C3-7)环烷基或任选取代的苯基；R'为氢或(C1-4)烷基；及
R"为氢或(C1-4)烷基；或
R'与R"一起形成基团-CH2-(CH2)m-，其中m为0、1或2，在该情况下n及m中之一者不为0；
其限制条件为当n为0时，R0不为氢、三氟甲基及甲氧基；A为羟基；X及Y均为氢；R为COOEt；及R'与R"一起形成基团-(CH2)2-；
呈游离碱或酸加成盐形式。
例示性式(IV)化合物包括：
(-)-(3aR,4S,7aR)-4-羟基-4-间甲苯基乙炔基-八氢-吲哚-1-甲酸甲酯
(-)-(3aR,4S,7aR)-4-羟基-4-间甲苯基乙炔基-八氢-吲哚-1-甲酸乙酯
(-)-(3aR,4S,7aR)-呋喃-2-基-(4-羟基-4-间甲苯基乙炔基-八氢-吲哚-1-基)-甲酮
(±)-(3aRS,4SR,7aRS)-4-(3-氯苯基乙炔基)-4-羟基-八氢-吲哚-1-甲酸乙酯
(±)-(3aRS,4SR,7aRS)-4-(3-氟-苯基乙炔基)-4-羟基-八氢-吲哚-1-甲酸乙酯
(3aRS,4SR,7aRS)-4-羟基-4-苯基乙炔基-八氢-吲哚-1-甲酸(S)(四氢呋喃-3-基)酯
(3aRS,4SR,7aRS)-4-羟基-4-苯基乙炔基-八氢-吲哚-1-甲酸(R)(四氢呋喃-3-基)酯
(3aRS,4SR,7aRS)-4-羟基-4-(3-氯苯基乙炔基)-八氢-吲哚-1-甲酸(S)(四氢呋喃-3-基)酯
(±)-(3aRS,4SR,7aRS)-4-羟基-4-间甲苯基乙炔基-八氢-吲哚-1-甲酸乙酯
(±)-(3aRS,4SR,7aRS)-4-(4-氟-苯基乙炔基)-4-羟基-八氢-吲哚-1-甲酸乙酯
(±)-(3aRS,4SR,7aRS)-4-(3-氯苯基乙炔基)-4-羟基-1-甲磺酰基-八氢-吲哚
(±)-(3aRS,7aRS)-4-苯基乙炔基-2,3,3a,6,7,7a-六氢-吲哚-1-甲酸乙酯及(±)-(RS)-4-苯基乙炔基-2,3,5,6,7,7a-六氢-吲哚-1-甲酸乙酯
(±)-(3RS,7aRS)-2,2,2-三氟-1-(4-苯基乙炔基-2,3,3a,6,7,7a-六氢-吲哚-1-基)-乙酮
(±)-(RS)-4-间甲苯基乙炔基-2,3,5,6,7,7a-六氢-吲哚-1-甲酸乙酯
(±)-(3RS,7aRS)-4-间甲苯基乙炔基-2,3,3a,6,7,7a-六氢-吲哚-1-甲酸乙酯
(±)-(3RS,7aRS)-4-(4-氯-苯基乙炔基)-2,3,3a,6,7,7a-六氢-吲哚-1-甲酸乙酯
(±)-(3RS,7aRS)-4-(2-氟-苯基乙炔基)-2,3,3a,6,7,7a-六氢-吲哚-1-甲酸乙酯
(±)-(3RS,7aRS)-4-(3-氟-苯基乙炔基)-2,3,3a,6,7,7a-六氢-吲哚-1-甲酸乙酯
(±)-(RS)-4-(3-氟-苯基乙炔基)-2,3,5,6,7,7a-六氢-吲哚-1-甲酸乙酯
(±)-(3RS,7aRS)-4-(3-甲氧基-苯基乙炔基)-2,3,3a,6,7,7a-六氢-吲哚-1-甲酸乙酯
(±)-(RS)-4-(3-甲氧基-苯基乙炔基)-2,3,5,6,7,7a-六氢-吲哚-1-甲酸乙酯
(±)-(3aRS,4RS,7aSR)-4-羟基-4-苯基乙炔基-八氢-异吲哚-2-甲酸乙酯
(±)-(3aRS,4RS,7aSR)-4-羟基-4-间甲苯基乙炔基-八氢-异吲哚-2-甲酸乙酯
(±)-(3aRS,4RS,7aSR)-4-羟基-4-对甲苯基乙炔基-八氢-异吲哚-2-甲酸乙酯
(±)-(3aRS,4RS,7aSR)-4-(3-氰基-苯基乙炔基)-4-羟基-八氢-异吲哚-2-甲酸乙酯
(±)-(3aRS,4RS,7aSR)-4-羟基-4-(3-甲氧基-苯基乙炔基-八氢-异吲哚-2-甲酸乙酯
(±)-(3aRS,4RS,7aSR)-4-(3-氟-苯基乙炔基)-4-羟基-八氢-异吲哚-2-甲酸乙酯
(±)-(3aRS,4RS,7aSR)-4-羟基-4-苯基乙炔基-八氢-异吲哚-2-甲酸叔丁酯
(±)-(3aRS,4RS,7aSR)-4-羟基-4-间甲苯基乙炔基-八氢-异吲哚-2-甲酸叔丁酯
(±)-(3aRS,4RS,7aSR)-4-羟基-4-间甲苯基乙炔基-八氢-异吲哚-2-甲酸甲酯
(±)-(3aRS,4RS,7aSR)-呋喃-2-基-(4-羟基-4-间甲苯基乙炔基-八氢-异吲哚-2-基)-甲酮
(±)-(3aRS,4RS,7aSR)-环丙基-(4-羟基-4-间甲苯基乙炔基-八氢-异吲哚-2-基)-甲酮
(±)-(3aRS,4RS,7aSR)-(4-羟基-4-间甲苯基乙炔基-八氢-异吲哚-2-基)-吡啶-3-基-甲酮
(±)-((1SR,3SR)-3-羟基-3-间甲苯基乙炔基-环己基)-甲基-氨基甲酸甲酯及(±)-((1RS,3SR)-3-羟基-3-间甲苯基乙炔基-环己基)-甲基-氨基甲酸甲酯
(±)-(1RS,3SR)-(3-羟基-3-间甲苯基乙炔基-环己基)-(4-甲氧基-苯甲基)-氨基甲酸乙酯
(±)-(1RS,3RS)-(3-羟基-3-间甲苯基乙炔基-环己基)-(4-甲氧基-苯甲基)-氨基甲酸乙酯
(±)-[(1RS,3SR)-3-羟基-3-(3-甲氧基-苯基乙炔基)-5,5-二甲基-环己基]-甲基-氨基甲酸甲酯
(±)-(1RS,3SR)-(3-羟基-5,5-二甲基-3-间甲苯基乙炔基-环己基)-甲基-氨基甲酸甲酯
(±)-[(1RS,3SR)-3-(3-氟-苯基乙炔基)-3-羟基-5,5-二甲基-环己基]-甲基-氨基甲酸甲酯
(±)-[(1RS,3RS)-3-(3-氟-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-甲基-氨基甲酸甲酯
(±)-[(1RS,3SR)-3-(3-氟-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-甲基-氨基甲酸甲酯
(±)-[(1RS,3RS)-3-羟基-3-(3-甲氧基-苯基乙炔基)-环己基]-甲基-氨基甲酸甲酯
(±)-[(1RS,3SR)-3-羟基-3-(3-甲氧基-苯基乙炔基)-环己基]-甲基-氨基甲酸甲酯
(±)-[(1RS,3RS)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-甲基-氨基甲酸甲酯
(±)-[(1RS,3SR)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-甲基-氨基甲酸甲酯
(±)-(1RS,3RS)-N-(3-羟基-3-间甲苯基乙炔基-环己基)-乙酰胺
(±)-(1RS,3SR)-N-(3-羟基-3-间甲苯基乙炔基-环己基)-乙酰胺
(±)-(1RS,3RS)-(3-羟基-3-间甲苯基乙炔基-环己基)-氨基甲酸乙酯
(±)-(1RS,3SR)-(3-羟基-3-间甲苯基乙炔基-环己基)-氨基甲酸乙酯
(±)-(1RS,3RS)-[3-(3-氟-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-氨基甲酸乙酯
(±)-(1RS,3SR)-[3-(3-氟-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-氨基甲酸乙酯
(±)-(1RS,3RS)-[3-(3-甲氧基-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-氨基甲酸乙酯
(±)-(1RS,3RS)-N-[3-(3-氟-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-乙酰胺
(±)-(1RS,3SR)-N-[3-(3-氟-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-乙酰胺
(±)-(1RS,3SR)-[3-羟基-3-(3-甲氧基-苯基乙炔基)-环己基]-氨基甲酸乙酯
(±)-(1RS,3RS)-N-[3-羟基-3-(3-甲氧基-苯基乙炔基)-环己基]-乙酰胺
(±)-(1RS,3SR)-N-[3-羟基-3-(3-甲氧基-苯基乙炔基)-环己基]-乙酰胺
(±)-(1RS,3RS)-[3-羟基-3-(3-甲氧基-苯基乙炔基)-环己基]-氨基甲酸叔丁酯
(±)-(1RS,3SR)-[3-羟基-3-(3-甲氧基-苯基乙炔基)-环己基]-氨基甲酸叔丁酯
(±)-(1RS,3RS)-(3-羟基-3-间甲苯基乙炔基-环己基)-氨基甲酸叔丁酯
(±)-(1RS,3SR)-(3-羟基-3-间甲苯基乙炔基-环己基)-氨基甲酸叔丁酯
(±)-(1RS,3RS)-(3-(3-氟-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-氨基甲酸叔丁酯
(±)-(1RS,3SR)-(3-(3-氟-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-氨基甲酸叔丁酯
(±)-(1RS,3RS)-[3-(3-氟-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-氨基甲酸甲酯
(±)-(1RS,3SR)-[3-(3-氟-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-氨基甲酸甲酯
(±)-(3-苯基乙炔基-环己-2-烯基)-氨基甲酸乙酯及(±)-3-苯基乙炔基-环己-3-烯基)-氨基甲酸乙酯
(±)-甲基-(3-苯基乙炔基-环己-3-烯基)-氨基甲酸乙酯
(±)-(4aRS,5RS,8aSR)-5-羟基-5-苯基乙炔基-八氢-喹啉-1-甲酸乙酯
(±)-[(4aRS,5SR,8aSR)-5-(3-氯-苯基乙炔基)-5-羟基-八氢-喹啉-1-基]-呋喃-2-基-甲酮
(±)-[(4aRS,5RS,8aSR)-5-(3-氯-苯基乙炔基)-5-羟基-八氢-喹啉-1-基]-呋喃-2-基-甲酮
(±)-(4aRS,5RS,8aSR)-5-(3-氯-苯基乙炔基)-5-羟基-八氢-喹啉-1-甲酸叔丁酯
(±)-[(4aRS,5SR,8aSR)-5-(3-氯-苯基乙炔基)-5-羟基-八氢-喹啉-1-基]-吗啉-4-基-甲酮
(±)-[(4aRS,5SR,8aSR)-5-(3-氯-苯基乙炔基)-5-羟基-八氢-喹啉-1-基]-(4-甲基-哌嗪-1-基)-甲酮
(±)-(4aRS,5RS,8aSR)-5-(3-氯-苯基乙炔基)-5-羟基-八氢-喹啉-1-甲酸乙酯及(±)-(4aRS,5SR,8aSR)-5-(3-氯-苯基乙炔基)-5-羟基-八氢-喹啉-1-甲酸乙酯
(±)-(4aRS,5SR,8aSR)-5-羟基-5-间甲苯基乙炔基-八氢-喹啉-1-甲酸乙酯
(±)-(4aRS,5RS,8aSR)-5-羟基-5-间甲苯基乙炔基-八氢-喹啉-1-甲酸乙酯。
在另一实施方式中，mGluR调节剂为式(V)化合物：
其中：
R1表示氢或烷基；
R2表示未经取代或经取代的杂环，或
R2表示未经取代或经取代的芳基；
R3表示烷基或卤素；
X表示单键或烷二基，任选间杂有一或多个氧原子或羰基或羰氧基；呈游离碱或酸加成盐形式。
示例性式(V)化合物包括：
呋喃-3-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
呋喃-2-甲酸[(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
呋喃-2-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
3H-咪唑-4-甲酸[(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
3H-咪唑-4-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
4H-[1,2,4]三唑-3-甲酸[(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
4H-[1,2,4]三唑-3-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
2-甲基-呋喃-3-甲酸[(±)-(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
N-[(±)-(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-3,4-二氟-苯甲酰胺
苯并[1,3]间二氧杂环戊烯-2-甲酸[(±)-(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
5-甲基-吡嗪-2-甲酸[(±)-(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
喹喔啉-2-甲酸[(±)-(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
苯并呋喃-2-甲酸[(±)-(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
苯并
唑-2-甲酸[(±)-(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
2,5-二甲基-呋喃-3-甲酸[(±)-(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
(R,S)-四氢-呋喃-3-甲酸[(±)-(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
呋喃-3-甲酸((1R.SRJ-S-羟基-S-间甲苯基乙炔基-环己基-酰胺
呋喃-3-甲酸((1S,3S)-3-羟基-3-间甲苯基乙炔基-环己基)-酰胺
呋喃-3-甲酸((±)-(1R.SRJ-S-羟基-S-间甲苯基乙炔基-环己基-酰胺
呋喃-2-甲酸((1R,3R)-3-羟基-3-间甲苯基乙炔基-环己基)-酰胺
呋喃-2-甲酸((1S,3S)-3-羟基-3-间甲苯基乙炔基-环己基)-酰胺
呋喃-2-甲酸((±)-(1R,3R)-3-羟基-3-间甲苯基乙炔基-环己基)-酰胺
异
唑-5-甲酸((1R,3R)-3-羟基-3-间甲苯基乙炔基-环己基)-酰胺
异
唑-5-甲酸((1S,3S)-3-羟基-3-间甲苯基乙炔基-环己基)-酰胺
异
唑-5-甲酸((±)-(1R,3R)-3-羟基-3-间甲苯基乙炔基-环己基)-酰胺
5-甲基-吡嗪-2-甲酸((±)-(1R,3R)-3-羟基-3-间甲苯基乙炔基-环己基)-酰胺
4H-[1,2,4]三唑-3-甲酸((±)-(1R,3R)-3-羟基-3-间甲苯基乙炔基-环己基)-酰胺
3H-咪唑-4-甲酸((±)-(1R,3R)-3-羟基-3-间甲苯基乙炔基-环己基)-酰胺
四氢-吡喃-4-甲酸((±)-(1R,3R)-3-羟基-3-间甲苯基乙炔基-环己基)-酰胺
1-甲基-1H-咪唑-4-甲酸((±)-(1R,3R)-3-羟基-3-间甲苯基乙炔基-环己基)-酰胺
(R,S)-四氢-呋喃-2-甲酸((±)-(1R,3R)-3-羟基-3-间甲苯基乙炔基-环己基)-酰胺
(R,S)-四氢-呋喃-3-甲酸((±)-(1R,3R)-3-羟基-3-间甲苯基乙炔基-环己基)-酰胺
呋喃-3-甲酸[(1R,3R)-3-(3-氟-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
呋喃-3-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氟-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
呋喃-2-甲酸[(1R,3R)-3-(3-氟-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
呋喃-2-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氟-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
3H-咪唑-4-甲酸[(±)-(1R,3R)-3-(3-氟-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-3,4-二氟-苯甲酰胺
N-[(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-3,4-二氟-苯甲酰胺
吡啶-2-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
吡啶-2-甲酸[(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-烟酰胺
N-[(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-烟酰胺
苯并[1,3]间二氧杂环戊烯-2-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
5-甲基-吡嗪-2-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
2-甲基-呋喃-3-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
(R)-四氢-呋喃-2-甲酸[(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
(S)-四氢-呋喃-2-甲酸[(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
异
唑-5-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
5-甲基-吡嗪-2-甲酸[(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
2-甲基-呋喃-3-甲酸[(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
异
唑-5-甲酸[(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
5-氯-呋喃-2-甲酸[(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
5-氯-呋喃-2-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
(S)-四氢-呋喃-3-甲酸[(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
(R)-四氢-呋喃-3-甲酸[(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-异烟酰胺
N-[(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-异烟酰胺
3,5-二氟-吡啶-2-甲酸[(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
3,5-二氟-吡啶-2-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
6-甲基-吡啶-2-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
6-甲基-吡啶-2-甲酸[(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
S-氯-吡啶-2-甲酸[(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
δ-氯-吡啶-2-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
δ-氯-吡啶-2-甲酸[(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
6-氯-吡啶-2-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
5-氯-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酸[(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
5-氯-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
5-氯-1H-吡咯-2-甲酸[(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
5-氯-1H-吡咯-2-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-4-二甲基氨基-苯甲酰胺
1H-吡咯-3-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-4-甲基-苯甲酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-4-甲基-苯甲酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-3-氟-苯甲酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-2-乙基-丁酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-4-(2,5-二甲氧基-苯基)-4-氧代-丁酰胺
2-(2-苯甲氧基-乙氧基)-N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-乙酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-2-苯基-乙酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-3-(1H-吲哚-4-基)-丙酰胺
2-苯并[1,3]间二氧杂环戊烯-5-基-N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-乙酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-2-苯氧基-丙酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-2-(2-氟-苯基)-乙酰胺
5-羟基-1H-吲哚-2-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
1-甲基-1H-吡咯-2-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-对苯二甲酸甲酯
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-2-(2-三氟甲氧基-苯基)-乙酰胺
5-氯-N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-2-羟基-苯甲酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-4-羟基-苯甲酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-2-羟基-苯甲酰胺
4-氨基-N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-苯甲酰胺
4-氨基-5-氯-N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-3-氨基-4-氯-N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-苯甲酰胺
3-氨基-N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-4-甲基-苯甲酰胺
2-氨基-N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-烟酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-4-羟基-3-甲氧基-苯甲酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-2-氟-苯甲酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-4-甲磺酰基-苯甲酰胺
吡啶-2-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
3-氨基-吡嗪-2-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
6-氨基-N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-烟酰胺
4-(4-氨基-苯甲酰基氨基)-苯甲酸[(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
2,6-二氧代-1,2,3,6-四氢-嘧啶-4-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-异烟酰胺
3-氯-N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-苯甲酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-2,3-二甲氧基-苯甲酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-4-氧代-4-苯基-丁酰胺
2-氯-N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-烟酰胺
5-溴-N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-烟酰胺
异喹啉-1-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
吡嗪-2-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
3-苯甲酰基-吡啶-2-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-2-甲基-烟酰胺
喹喔啉-2-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
哒嗪-4-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-2-甲基硫烷基-烟酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-4-三氟甲基-烟酰胺
2-氯-N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-异烟酰胺
2-氯-N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-6-甲基-烟酰胺
6-氯-N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-烟酰胺
2-氯-N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-6-甲基-异烟酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-2-(4,5-二甲氧基-3-氧代-1,3-二氢-异苯并呋喃-1-基)-乙酰胺
1,4,5,6-四氢-环戊二烯并吡唑-S-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-3-(1H-吲哚-2-基)-丙酰胺
6-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基氨甲酰基]-吡啶-2-甲酸异丙酯
喹啉-6-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
5-甲基-异唑-4-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
苯并呋喃-3-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-2-(2-甲氧基-苯氧基)-乙酰胺。
在另一实施方式中，mGluR调节剂为式(VI)化合物：
其中：
R1表示氢或烷基；
R2表示未经取代或经取代的杂环，或
R2表示未经取代或经取代的芳基；
R3表示烷基或卤素；
呈游离碱或酸加成盐形式。
mGluR5拮抗剂的其他实例包括如WO 2004/014881中所定义的式(I)化合物及如WO 2007/021575中所定义的式(I)化合物；此等公开案的内容以引用的方式并入本文中。
本发明可用于测定哪些患有FXS的个体可能对mGluR5拮抗剂治疗作出反应。mGluR5拮抗剂的实例包括肽模拟物、蛋白质、肽、核酸、小分子或其他候选药物。mGluR5拮抗剂实例之一为(-)-(3aR,4S,7aR)-4-羟基-4-间甲苯基乙炔基-八氢-吲哚-1-甲酸甲酯。mGluR5拮抗剂(-)-(3aR,4S,7aR)-4-羟基-4-间甲苯基乙炔基-八氢-吲哚-1-甲酸甲酯以及其制造方法揭示于美国专利第7,348,353号中，该专利的揭示内容以引用的方式并入本文中。mGluR5拮抗剂(-)-(3aR,4S,7aR)-4-羟基-4-间甲苯基乙炔基-八氢-吲哚-1-甲酸甲酯具有以下结构式：
预期其他mGLUR5，诸如美国专利第7,348,353号中所揭示的mGLUR5拮抗剂可用于本发明方法中。
在一实施方式中，mGluR5拮抗剂为式(I)化合物：
其中：
R1表示任选取代的烷基或任选取代的苯甲基；及
R2表示氢(H)、任选取代的烷基或任选取代的苯甲基；或
R1及R2与其所连接的氮原子一起形成任选取代的具有14个以下环原子的杂环；
R3表示卤素、烷基、烷氧基、烷基氨基或二烷基氨基；
R4表示羟基(OH)、卤素、烷基或烷氧基；
Q表示CH、CR4或N；
V表示CH、CR4或N；
W表示CH、CR4或N；
X表示CH或N
Y表示CH、CR3或N
Z表示CH2、NH或O；及
其限制条件为Q、V及W不同时为N；
呈游离碱或酸加成盐形式。
在另一实施方式中，mGluR5拮抗剂为式(II)化合物，其中式(II)化合物为Q、V及W中至少一者为N的式(I)化合物；呈游离碱或酸加成盐形式。
在又一实施方式中，mGluR5拮抗剂为式(III)化合物，其中式(III)化合物为Y为CR3的式(II)化合物；呈游离碱或酸加成盐形式。
下文定义式(I)、式(II)及式(III)及相应中间化合物中所存在的优选取代基、优选数值范围，或优选基团范围。
X优选表示CH。
Y优选表示CH或CR3，其中R3优选表示卤素，尤其优选为氯。
Z优选表示NH。
R3优选表示氟、氯、C1-4烷基，例如甲基。
R3尤其优选表示氯。
R1及R2优选与其所连接的氮原子一起形成未经取代或经取代的具有3至11个环原子及1至4个杂原子的杂环；杂原子选自由N、O、S组成的组；取代基选自由氧代(=O)、羟基、卤素、氨基、硝基、氰基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C1-4烷氧基烷基、C1-4烷氧基羰基、C1-4烷氧基羰基烷基、C1-4卤烷基、C6-10芳基、卤素-C6-10芳基、C6-10芳氧基及C6-10芳基-C1-4烷基组成的组。
R1及R2与其所连接的氮原子一起形成未经取代、经单取代或经两次取代的具有5至9个环原子及1至3个杂原子的杂环；杂原子选自由N及O组成的组；取代基选自由卤素及C1-4烷基组成的组。
R1及R2优选与其所连接的氮原子一起形成未经取代、经单取代或经两次取代的选自由以下组成的组的杂环：
且取代基选自由氟、氯、甲基、乙基、丙基、丁基、三氟甲基、氟丙基及二氟丙基组成的组。
R1及R2优选彼此独立地表示任选经C1-C4烷氧基或卤素取代的C1-C4烷基或苯甲基。
上述一般及优选基团定义适用于式(I)、式(II)及式(III)的最终产物，且亦相应地适用于各情况下制备所需的起始物质或中间体。此等基团定义可彼此任意组合，亦即包括所提供的优选范围之间的组合。此外，个别定义可能不适用。
根据本发明，优选含有上述优选含义的组合的式(I)、式(II)及式(III)化合物。
根据本发明，尤其优选含有上文所列出的尤其优选含义的组合的式(I)、式(II)及式(III)化合物。
根据本发明，特别优选含有上文所列出的极佳含义的组合的式(I)化合物。
优选R2表示未经取代或经取代的杂环的式(I)、式(II)及式(III)化合物。
尤其优选如以下所示的式(IIa)至式(IIe)化合物：
其中取代基具有本说明书中所提供的含义；
其中取代基具有本说明书中所提供的含义；
其中取代基具有本说明书中所提供的含义；
其中R4表示C1-C4烷基，优选为甲基，且其他取代基具有本说明书中所提供的含义；
其中R4表示卤素，优选为氯，且其他取代基具有本说明书中所提供的含义。
本发明的其他优选化合物具有如下所示的式(IIIa)至式(IIIe)：
其中所有取代基均具有本说明书中所提供的含义；
其中取代基具有本说明书中所提供的含义；
其中取代基具有本说明书中所提供的含义；
其中R4表示C1-C4烷基，优选为甲基，且其他取代基具有本说明书中所提供的含义；
其中R4表示卤素，优选为氯，且其他取代基具有本说明书中所提供的含义。
特定的式(I)、式(II)及式(III)化合物包括本文所提供的实施例中所述的化合物。
在另一实施方式中，mGluR5拮抗剂为式(IV)化合物：
其中
m为0或1；
n为0或1；及
A为羟基；
X为氢；及
Y为氢；或
A与X或与Y形成单键；
R0为氢、(C1-4)烷基、(C1-4)烷氧基、三氟甲基、卤素、氰基、硝基、-COOR1(其中R1为(C1-4)烷基)或-COR2(其中R2为氢或(C1-4)烷基)；及
R为-COR3、-COOR3、-CONR4R5或-SO2R6，其中R3为(C1-4)烷基、(C3-7)环烷基或任选取代的苯基、2-吡啶基或2-噻吩基；R4及R5独立地为氢或(C1-4)烷基，且R6为(C1-4)烷基、(C3-7)环烷基或任选取代的苯基；R'为氢或(C1-4)烷基；及
R"为氢或(C1-4)烷基；或
R'与R"一起形成基团-CH2-(CH2)m-，其中m为0、1或2，在该情况下n及m中之一者不为0；
其限制条件为当n为0时，R0不为氢、三氟甲基及甲氧基；A为羟基；X及Y均为氢；R为COOEt；及R'与R"一起形成基团-(CH2)2-；
呈游离碱或酸加成盐形式。
示例性式(IV)化合物包括：
(-)-(3aR,4S,7aR)-4-羟基-4-间甲苯基乙炔基-八氢-吲哚-1-甲酸甲酯
(-)-(3aR,4S,7aR)-4-羟基-4-间甲苯基乙炔基-八氢-吲哚-1-甲酸乙酯
(-)-(3aR,4S,7aR)-呋喃-2-基-(4-羟基-4-间甲苯基乙炔基-八氢-吲哚-1-基)-甲酮
(±)-(3aRS,4SR,7aRS)-4-(3-氯苯基乙炔基)-4-羟基-八氢-吲哚-1-甲酸乙酯
(±)-(3aRS,4SR,7aRS)-4-(3-氟-苯基乙炔基)-4-羟基-八氢-吲哚-1-甲酸乙酯
(3aRS,4SR,7aRS)-4-羟基-4-苯基乙炔基-八氢-吲哚-1-甲酸(S)(四氢呋喃-3-基)酯
(3aRS,4SR,7aRS)-4-羟基-4-苯基乙炔基-八氢-吲哚-1-甲酸(R)(四氢呋喃-3-基)酯
(3aRS,4SR,7aRS)-4-羟基-4-(3-氯苯基乙炔基)-八氢-吲哚-1-甲酸-(S)(四氢呋喃-3-基)酯
(±)-(3aRS,4SR,7aRS)-4-羟基-4-间甲苯基乙炔基-八氢-吲哚-1-甲酸乙酯
(±)-(3aRS,4SR,7aRS)-4-(4-氟-苯基乙炔基)-4-羟基-八氢-吲哚-1-甲酸乙酯
(±)-(3aRS,4SR,7aRS)-4-(3-氯苯基乙炔基)-4-羟基-1-甲磺酰基-八氢-吲哚
(±)-(3aRS,7aRS)-4-苯基乙炔基-2,3,3a,6,7,7a-六氢-吲哚-1-甲酸乙酯及(±)-(RS)-4-苯基乙炔基-2,3,5,6,7,7a-六氢-吲哚-1-甲酸乙酯
(±)-(3RS,7aRS)-2,2,2-三氟-1-(4-苯基乙炔基-2,3,3a,6,7,7a-六氢-吲哚-1-基)-乙酮
(±)-(RS)-4-间甲苯基乙炔基-2,3,5,6,7,7a-六氢-吲哚-1-甲酸乙酯
(±)-(3RS,7aRS)-4-间甲苯基乙炔基-2,3,3a,6,7,7a-六氢-吲哚-1-甲酸乙酯
(±)-(3RS,7aRS)-4-(4-氯-苯基乙炔基)-2,3,3a,6,7,7a-六氢-吲哚-1-甲酸乙酯
(±)-(3RS,7aRS)-4-(2-氟-苯基乙炔基)-2,3,3a,6,7,7a-六氢-吲哚-1-甲酸乙酯
(±)-(3RS,7aRS)-4-(3-氟-苯基乙炔基)-2,3,3a,6,7,7a-六氢-吲哚-1-甲酸乙酯
(±)-(RS)-4-(3-氟-苯基乙炔基)-2,3,5,6,7,7a-六氢-吲哚-1-甲酸乙酯
(±)-(3RS,7aRS)-4-(3-甲氧基-苯基乙炔基)-2,3,3a,6,7,7a-六氢-吲哚-1-甲酸乙酯
(±)-(RS)-4-(3-甲氧基-苯基乙炔基)-2,3,5,6,7,7a-六氢-吲哚-1-甲酸乙酯
(±)-(3aRS,4RS,7aSR)-4-羟基-4-苯基乙炔基-八氢-异吲哚-2-甲酸乙酯
(±)-(3aRS,4RS,7aSR)-4-羟基-4-间甲苯基乙炔基-八氢-异吲哚-2-甲酸乙酯
(±)-(3aRS,4RS,7aSR)-4-羟基-4-对甲苯基乙炔基-八氢-异吲哚-2-甲酸乙酯
(±)-(3aRS,4RS,7aSR)-4-(3-氰基-苯基乙炔基)-4-羟基-八氢-异吲哚-2-甲酸乙酯
(±)-(3aRS,4RS,7aSR)-4-羟基-4-(3-甲氧基-苯基乙炔基-八氢-异吲哚-2-甲酸乙酯
(±)-(3aRS,4RS,7aSR)-4-(3-氟-苯基乙炔基)-4-羟基-八氢-异吲哚-2-甲酸乙酯
(±)-(3aRS,4RS,7aSR)-4-羟基-4-苯基乙炔基-八氢-异吲哚-2-甲酸叔丁酯
(±)-(3aRS,4RS,7aSR)-4-羟基-4-间甲苯基乙炔基-八氢-异吲哚-2-甲酸叔丁酯
(±)-(3aRS,4RS,7aSR)-4-羟基-4-间甲苯基乙炔基-八氢-异吲哚-2-甲酸甲酯
(±)-(3aRS,4RS,7aSR)-呋喃-2-基-(4-羟基-4-间甲苯基乙炔基-八氢-异吲哚-2-基)-甲酮
(±)-(3aRS,4RS,7aSR)-环丙基-(4-羟基-4-间甲苯基乙炔基-八氢-异吲哚-2-基)-甲酮
(±)-(3aRS,4RS,7aSR)-(4-羟基-4-间甲苯基乙炔基-八氢-异吲哚-2-基)-吡啶-3-基-甲酮
(±)-((1SR,3SR)-3-羟基-3-间甲苯基乙炔基-环己基)-甲基-氨基甲酸甲酯及(±)-((1RS,3SR)-3-羟基-3-间甲苯基乙炔基-环己基)-甲基-氨基甲酸甲酯
(±)-(1RS,3SR)-((3-羟基-3-间甲苯基乙炔基-环己基)-(4-甲氧基-苯甲基)-氨基甲酸乙酯
(±)-(1RS,3RS)-((3-羟基-3-间甲苯基乙炔基-环己基)-(4-甲氧基-苯甲基)-氨基甲酸乙酯
(±)-[(1RS,3SR)-3-羟基-3-(3-甲氧基-苯基乙炔基)-5,5-二甲基-环己基]-甲基-氨基甲酸甲酯
(±)-(1RS,3SR)-(3-羟基-5,5-二甲基-3-间甲苯基乙炔基-环己基)-甲基-氨基甲酸甲酯
(±)-[(1RS,3SR)-3-(3-氟-苯基乙炔基)-3-羟基-5,5-二甲基-环己基]-甲基-氨基甲酸甲酯
(±)-[(1RS,3RS)-3-(3-氟-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-甲基-氨基甲酸甲酯
(±)-[(1RS,3SR)-3-(3-氟-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-甲基-氨基甲酸甲酯
(±)-[(1RS,3RS)-3-羟基-3-(3-甲氧基-苯基乙炔基)-环己基]-甲基-氨基甲酸甲酯
(±)-[(1RS,3SR)-3-羟基-3-(3-甲氧基-苯基乙炔基)-环己基]-甲基-氨基甲酸甲酯
(±)-[(1RS,3RS)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-甲基-氨基甲酸甲酯
(±)-[(1RS,3SR)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-甲基-氨基甲酸甲酯
(±)-(1RS,3RS)-N-(3-羟基-3-间甲苯基乙炔基-环己基)-乙酰胺
(±)-(1RS,3SR)-N-(3-羟基-3-间甲苯基乙炔基-环己基)-乙酰胺
(±)-(1RS,3RS)-(3-羟基-3-间甲苯基乙炔基-环己基)-氨基甲酸乙酯
(±)-(1RS,3SR)-(3-羟基-3-间甲苯基乙炔基-环己基)-氨基甲酸乙酯
(±)-(1RS,3RS)-[3-(3-氟-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-氨基甲酸乙酯
(±)-(1RS,3SR)-[3-(3-氟-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-氨基甲酸乙酯
(±)-(1RS,3RS)-[3-(3-甲氧基-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-氨基甲酸乙酯
(±)-(1RS,3RS)-N-[3-(3-氟-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-乙酰胺
(±)-(1RS,3SR)-N-[3-(3-氟-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-乙酰胺
(±)-(1RS,3SR)-[3-羟基-3-(3-甲氧基-苯基乙炔基)-环己基]-氨基甲酸乙酯
(±)-(1RS,3RS)-N-[3-羟基-3-(3-甲氧基-苯基乙炔基)-环己基]-乙酰胺
(±)-(1RS,3SR)-N-[3-羟基-3-(3-甲氧基-苯基乙炔基)-环己基]-乙酰胺
(±)-(1RS,3RS)-[3-羟基-3-(3-甲氧基-苯基乙炔基)-环己基]-氨基甲酸叔丁酯
(±)-(1RS,3SR)-[3-羟基-3-(3-甲氧基-苯基乙炔基)-环己基]-氨基甲酸叔丁酯
(±)-(1RS,3RS)-(3-羟基-3-间甲苯基乙炔基-环己基)-氨基甲酸叔丁酯
(±)-(1RS,3SR)-(3-羟基-3-间甲苯基乙炔基-环己基)-氨基甲酸叔丁酯
(±)-(1RS,3RS)-(3-(3-氟-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-氨基甲酸叔丁酯
(±)-(1RS,3SR)-(3-(3-氟-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-氨基甲酸叔丁酯
(±)-(1RS,3RS)-[3-(3-氟-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-氨基甲酸甲酯
(±)-(1RS,3SR)-[3-(3-氟-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-氨基甲酸甲酯
(±)-(3-苯基乙炔基-环己-2-烯基)-氨基甲酸乙酯及(±)-3-苯基乙炔基-环己-3-烯基)-氨基甲酸乙酯
(±)-甲基-(3-苯基乙炔基-环己-3-烯基)-氨基甲酸乙酯
(±)-(4aRS,5RS,8aSR)-5-羟基-5-苯基乙炔基-八氢-喹啉-1-甲酸乙酯
(±)-[(4aRS,5SR,8aSR)-5-(3-氯-苯基乙炔基)-5-羟基-八氢-喹啉-1-基]-呋喃-2-基-甲酮
(±)-[(4aRS,5RS,8aSR)-5-(3-氯-苯基乙炔基)-5-羟基-八氢-喹啉-1-基]-呋喃-2-基-甲酮
(±)-(4aRS,5RS,8aSR)-5-(3-氯-苯基乙炔基)-5-羟基-八氢-喹啉-1-甲酸叔丁酯
(±)-[(4aRS,5SR,8aSR)-5-(3-氯-苯基乙炔基)-5-羟基-八氢-喹啉-1-基]-吗啉-4-基-甲酮
(±)-[(4aRS,5SR,8aSR)-5-(3-氯-苯基乙炔基)-5-羟基-八氢-喹啉-1-基]-(4-甲基-哌嗪-1-基)-甲酮
(±)-(4aRS,5RS,8aSR)-5-(3-氯-苯基乙炔基)-5-羟基-八氢-喹啉-1-甲酸乙酯及(±)-(4aRS,5SR,8aSR)-5-(3-氯-苯基乙炔基)-5-羟基-八氢-喹啉-1-甲酸乙酯
(±)-(4aRS,5SR,8aSR)-5-羟基-5-间甲苯基乙炔基-八氢-喹啉-1-甲酸乙酯
(±)-(4aRS,5RS,8aSR)-5-羟基-5-间甲苯基乙炔基-八氢-喹啉-1-甲酸乙酯。
在另一实施方式中，mGluR调节剂为式(V)化合物：
其中：
R1表示氢或烷基；
R2表示未经取代或经取代的杂环，或
R2表示未经取代或经取代的芳基；
R3表示烷基或卤素；
X表示单键或烷二基，任选间杂有一或多个氧原子或羰基或羰氧基；呈游离碱或酸加成盐形式。
示例性式(V)化合物包括：
呋喃-3-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
呋喃-2-甲酸[(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
呋喃-2-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
3H-咪唑-4-甲酸[(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
3H-咪唑-4-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
4H-[1,2,4]三唑-3-甲酸[(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
4H-[1,2,4]三唑-3-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
2-甲基-呋喃-3-甲酸[(±)-(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
N-[(±)-(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-3,4-二氟-苯甲酰胺
苯并[1,3]间二氧杂环戊烯-2-甲酸[(±)-(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
5-甲基-吡嗪-2-甲酸[(±)-(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
喹喔啉-2-甲酸[(±)-(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
苯并呋喃-2-甲酸[(±)-(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
苯并唑-2-甲酸[(±)-(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
2,5-二甲基-呋喃-3-甲酸[(±)-(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
(R,S)四氢呋喃-3-甲酸[(±)-(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
呋喃-3-甲酸((1R,SRJ-S-羟基-S-间甲苯基乙炔基-环己基-酰胺
呋喃-3-甲酸((1S,3S)-3-羟基-3-间甲苯基乙炔基-环己基)-酰胺
呋喃-3-甲酸((±)-(1R,SRJ-S-羟基-S-间甲苯基乙炔基-环己基-酰胺
呋喃-2-甲酸((1R,3R)-3-羟基-3-间甲苯基乙炔基-环己基)-酰胺
呋喃-2-甲酸((1S,3S)-3-羟基-3-间甲苯基乙炔基-环己基)-酰胺
呋喃-2-甲酸((±)-(1R,3R)-3-羟基-3-间甲苯基乙炔基-环己基)-酰胺
异
唑-5-甲酸((1R,3R)-3-羟基-3-间甲苯基乙炔基-环己基)-酰胺
异唑-5-甲酸((1S,3S)-3-羟基-3-间甲苯基乙炔基-环己基)-酰胺
异
唑-5-甲酸((±)-(1R,3R)-3-羟基-3-间甲苯基乙炔基-环己基)-酰胺
5-甲基-吡嗪-2-甲酸((±)-(1R,3R)-3-羟基-3-间甲苯基乙炔基-环己基)-酰胺
4H-[1,2,4]三唑-3-甲酸((±)-(1R,3R)-3-羟基-3-间甲苯基乙炔基-环己基)-酰胺
3H-咪唑-4-甲酸((±)-(1R,3R)-3-羟基-3-间甲苯基乙炔基-环己基)-酰胺
四氢-吡喃-4-甲酸((±)-(1R,3R)-3-羟基-3-间甲苯基乙炔基-环己基)-酰胺
1-甲基-1H-咪唑-4-甲酸((±)-(1R,3R)-3-羟基-3-间甲苯基乙炔基-环己基)-酰胺
(R,S)四氢呋喃-2-甲酸((±)-(1R,3R)-3-羟基-3-间甲苯基乙炔基-环己基)-酰胺
(R,S)四氢呋喃-3-甲酸((±)-(1R,3R)-3-羟基-3-间甲苯基乙炔基-环己基)-酰胺
呋喃-3-甲酸[(1R,3R)-3-(3-氟-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
呋喃-3-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氟-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
呋喃-2-甲酸[(1R,3R)-3-(3-氟-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
呋喃-2-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氟-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
3H-咪唑-4-甲酸[(±)-(1R,3R)-3-(3-氟-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-3,4-二氟-苯甲酰胺
N-[(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-3,4-二氟-苯甲酰胺
吡啶-2-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
吡啶-2-甲酸[(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-烟酰胺
N-[(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-烟酰胺
苯并[1,3]间二氧杂环戊烯-2-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
5-甲基-吡嗪-2-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
2-甲基-呋喃-3-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
(R)四氢呋喃-2-甲酸[(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
(S)四氢呋喃-2-甲酸[(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
异
唑-5-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
5-甲基-吡嗪-2-甲酸[(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
2-甲基-呋喃-3-甲酸[(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
异
唑-5-甲酸[(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
5-氯-呋喃-2-甲酸[(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
5-氯-呋喃-2-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
(S)四氢呋喃-3-甲酸[(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
(R)四氢呋喃-3-甲酸[(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-异烟酰胺
N-[(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-异烟酰胺
3,5-二氟-吡啶-2-甲酸[(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
3,5-二氟-吡啶-2-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
6-甲基-吡啶-2-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
6-甲基-吡啶-2-甲酸[(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
S-氯-吡啶-2-甲酸[(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
δ-氯-吡啶-2-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
δ-氯-吡啶-2-甲酸[(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
6-氯-吡啶-2-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
5-氯-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酸[(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
5-氯-1-甲基-1H-吡咯-2-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
5-氯-1H-吡咯-2-甲酸[(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
5-氯-1H-吡咯-2-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-4-二甲基氨基-苯甲酰胺
1H-吡咯-3-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-4-甲基-苯甲酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-4-甲基-苯甲酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-3-氟-苯甲酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-2-乙基-丁酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-4-(2,5-二甲氧基-苯基)-4-氧代-丁酰胺
2-(2-苯甲氧基-乙氧基)-N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-乙酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-2-苯基-乙酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-3-(1H-吲哚-4-基)-丙酰胺
2-苯并[1,3]间二氧杂环戊烯-5-基-N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-乙酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-2-苯氧基-丙酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-2-(2-氟-苯基)-乙酰胺
5-羟基-1H-吲哚-2-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
1-甲基-1H-吡咯-2-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-对苯二甲酸甲酯
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-2-(2-三氟甲氧基-苯基)-乙酰胺
5-氯-N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-2-羟基-苯甲酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-4-羟基-苯甲酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-2-羟基-苯甲酰胺
4-氨基-N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-苯甲酰胺
4-氨基-5-氯-N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-3-氨基-4-氯-N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-苯甲酰胺
3-氨基-N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-4-甲基-苯甲酰胺
2-氨基-N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-烟酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-4-羟基-3-甲氧基-苯甲酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-2-氟-苯甲酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-4-甲磺酰基-苯甲酰胺
吡啶-2-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
3-氨基-吡嗪-2-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
6-氨基-N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-烟酰胺
4-(4-氨基-苯甲酰基氨基)-苯甲酸[(1R,3R)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
2,6-二氧代-1,2,3,6四氢嘧啶-4-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-异烟酰胺
3-氯-N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-苯甲酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-2,3-二甲氧基-苯甲酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-4-氧代-4-苯基-丁酰胺
2-氯-N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-烟酰胺
5-溴-N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-烟酰胺
异喹啉-1-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
吡嗪-2-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
3-苯甲酰基-吡啶-2-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-2-甲基-烟酰胺
喹喔啉-2-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
哒嗪-4-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-2-甲基硫烷基-烟酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-4-三氟甲基-烟酰胺
2-氯-N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-异烟酰胺
2-氯-N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-6-甲基-烟酰胺
6-氯-N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-烟酰胺
2-氯-N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-6-甲基-异烟酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-2-(4,5-二甲氧基-3-氧代-1,3-二氢-异苯并呋喃-1-基)-乙酰胺
1,4,5,6-四氢环戊二烯并吡唑-S-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-3-(1H-吲哚-2-基)-丙酰胺
6-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基氨甲酰基]-吡啶-2-甲酸异丙酯
喹啉-6-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
5-甲基-异
唑-4-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
苯并呋喃-3-甲酸[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-酰胺
N-[(1S,3S)-3-(3-氯-苯基乙炔基)-3-羟基-环己基]-2-(2-甲氧基-苯氧基)-乙酰胺。
在另一实施方式中，mGluR调节剂为式(VI)化合物：
其中：
R1表示氢或烷基；
R2表示未经取代或经取代的杂环，或
R2表示未经取代或经取代的芳基；
R3表示烷基或卤素；
呈游离碱或酸加成盐形式。
mGluR5拮抗剂的其他实例包括如WO 2004/014881中所定义的式(I)化合物及如WO 2007/021575中所定义的式(I)化合物；此等公开案的内容以引用的方式并入本文中。
生物标记
来自患有FXS的个体的样品中的FMR1基因甲基化程度、缺乏FMR1mRNA表达的存在及缺乏FMR1蛋白的存在可以单独或任何组合形式充当预测该个体对mGluR5拮抗剂治疗的反应性的生物标记。
可测定来自相关个体的样品中此等生物标记的存在。样品可为任何样品，包括流体样品如血液、细胞样品如口腔细胞或组织样品如皮肤或毛囊。
如本文所使用，“预测”指示本文所述的方法提供信息以使健康护理提供者能够确定患有FXS的个体将对mGluR5治疗作出反应的可能性。在相关样品中相关生物标记测定为阳性后，将向该个体给予mGluR5拮抗剂。
FMR1启动子-甲基化分析
FMR1基因甲基化程度指示患者是否将对mGluR5拮抗剂治疗作出反应。具体说，若测定个体的所有或基本上所有相关FMR1基因区已甲基化，则确定该个体为将对mGluR5拮抗剂治疗作出反应的个体。
FMR1基因序列在本领域中为已知(GenBank L29074L38501)(NucleicAcids Res.2002年7月15日;30(14):3278-85)(Hum Mol Genet.2010年4月15日;19(8):1618-32.电子公开于2010年1月29日)。图1描述FMR1启动子区及FMR1基因的5'-UTR。图1中亦展示FREE1/2的序列及位置、FMR1基因中的经典CpG岛及CGG重复序列。序列编号来自GenBank L29074L38501。具有52个CpG位点的经典CpG岛位于位置13439至13809。CGG重复序列位于位置13833至13892。FREE1位于位置13227至13439(经典CpG岛的上游)。FREE2位于位置13951至14199(CGG重复序列的下游)。
根据本发明分析甲基化状态的FMR1基因可具有任何长度，只要其包括至少一个CpG位点即可。在一实例中，所分析的FMR1基因区为具有52个CpG位点的FMR1经典CpG岛(参看图1；此区在该图中以粗体表示；SEQ ID NO:1)。在另一实例中，分析FMR1经典CpG岛的上游区(FREE1)及/或下游区(FREE2)。FREE1及FREE2的甲基化与FMR1经典CpG岛高度相关(Hum Mol Genet.2010年4月15日；19(8):1618-32.Epub 2010年1月29日)。
在又一实例中，分析位于FMR1基因的5'-UTR中CGG重复序列的甲基化状态，且其可用于确定个体是否为mGluR5反应者。
在另一实例中，分析一部分FMR1启动子区的甲基化状态。在一特定实例中，FMR1启动子区为具有22个CpG位点的区域，且具有SEQ ID NO:2的核苷酸序列(如下所示；CpG位点以粗体显示且加下划线)。
5GCCACTGAGTGCACCTCTGCAGAAATGGG
TTCTGGCCCT
AGGCAGTG
ACCTGTCAC
CCCTTCAGCCTTCC
CCCTCCACCAAGCC
CA
CC
GCC
TCTGTCTTT
ACC
GCACCC
GC
GTTCCCAGCAG
CATG
CTCCCAGGCCACTTGAAGAGAGAGGG-3(SEQ ID NO：2)
在另一实例中，可加以分析的一部分FMR1启动子区为具有15个CpG的SEQ ID NO:3。
5TGCAGAAATGGG
TTCTGGCCCT
AGGCAGTG
ACCTGTCAC
CCCTTCAGCCTTCC
CCCTCCACCAAGCCCACC
GCC
TCTGTCTTT
ACC
GCAC-3(SEQID NO：3；CpG位点以粗体显示且加下划线)。
藉由检测该FMR1基因区的胞嘧啶中存在或不存在甲基修饰或检测甲基修饰程度来确定FMR1基因区的甲基化程度。
可使用各种方法来测定相关个体的甲基化状态。使用定性检测如MSP，当在生物样品的相关区域中仅检测到甲基化FMR1时，确定个体为反应者。该种患者在本文中亦称为生物样品中的“所有”FMR1基因均甲基化或“完全甲基化”的个体。为清楚起见，使用该定性检测归为反应者的个体为在相关区域中未检测到未甲基化FMR1的个体。相比而言，具有“部分甲基化”的FMR1基因区的个体指在相关基因区中存在甲基化及未甲基化FMR1的个体(例如基因区域的甲基化程度小于80%)，且该种个体为mGluR5无反应者。
适用于本发明方法的另一方法为定量检测方法，诸如甲基化敏感性限制酶消化组合定量PCR、基质辅助激光解吸附/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)、实时PCR(甲基光(methyl light))。若个体的所有或基本上所有FMR1基因已甲基化，则确定该个体为mGluR5反应者。如本文所使用，“基本上所有”为当生物样品中的甲基化FMR1基因区显示的甲基化程度为例如99.5%或高于99.5%，例如99.6%、99.7%、99.8%或99.9%时，或当生物样品中的甲基化FMR1基因区显示的ΔCt为8.0或高于8.0，例如8.5时。使用如本文所述的定量检测方法，当“所有或基本上所有”相关FMR1基因区已甲基化时，个体亦可称为具有“完全甲基化”的相关FMR1基因区。该种个体为mGluR5反应者。
本发明不受用于评定样品中FMR1基因区的甲基化程度的检测类型限制。实际上，出于本发明的目的，可采用可用于测定基因的甲基化状态的任何检测。用于评定甲基化模式的检测类型的实例包括但不限于：
(i)甲基化敏感性限制酶消化组合以下至少一者：杂交、定量PCR、限制性标记基因组扫描(RLGS)或基于阵列分析非参照物依赖性甲基化状态(aPRIME)；
(ii)亚硫酸氢盐DNA修饰组合以下至少一者：甲基化特异性PCR(MS-PCR)、定量甲基化特异性PCR(qMS-PCR)、基于探针的甲基化特异性PCR、焦磷酸测序、克隆/测序、MS-巢式PCR、定量分析甲基化等位基因(QUAMA)、重甲基检测、甲基化敏感性高分辨率熔融(MS-HRM)、甲基结合(MB)-PCR、PCR及脱氧核糖核苷单磷酸盐(dNMP)分析或甲基化依赖性片段分离(MDFS)；
(iii)完全水解后进行高效液相层析(HPLC)；
(iv)甲基化DNA沉淀与甲基化敏感性限制酶的组合(COMPARE-MS)；
(v)组合亚硫酸氢盐限制性分析(COBRA)；在纳米晶体管或其他基于电子的装置中直接或间接检测甲基化DNA分子；及
(vi)甲基-BEAMing(珠粒、乳液、扩增及磁学)技术。
在一实例中，甲基化程度可使用甲基化特异性PCR(MSP)测定。MSP为基于亚硫酸氢盐转化率的PCR技术，其可用于测定DNA CpG甲基化。MSP涉及最初由亚硫酸氢钠修饰DNA，将所有未甲基化而非甲基化的胞嘧啶转化成尿嘧啶。接着，用分别对甲基化DNA及未甲基化DNA具有特异性的两对引物扩增DNA，且测定甲基化状态。引物通常包括至少两个CpG位点。MSP法描述于美国专利第5,786,146号、美国专利第6,017,704号、美国专利第6,200,756号及美国专利第6,265,171号中，该等专利的全部内容以引用的方式并入本文中。在一实例中，使用MSP检测，当在FMR1基因的相关区域中由甲基化DNA特异性引物检测到甲基化FMR1且由未甲基化DNA特异性引物未检测到未甲基化FMR1时，将个体归为mGluR5反应者。
在另一实例中，可使用包括诸如定量PCR(qPCR)的扩增方法的方法测定相关FMR1基因区中的甲基化程度。检测甲基化的各种不同qPCR方法在本领域中为已知的，且包括重甲基(HeavyMethyl)或甲基光(Methylight)。使用重甲基方法，最初用亚硫酸氢钠修饰FMR1基因区。接着，使DNA与藉由以甲基化特异性方式结合至经亚硫酸氢盐处理的DNA而提供特异性的非可延长寡核苷酸阻断剂接触。接着使DNA与具有与非可延长寡核苷酸阻断剂重叠的结合位点的引物组接触。当阻断剂结合时，引物不能结合且因此不产生扩增子。相反，若阻断剂不结合，则引物可结合且产生扩增子(Cottrell等人Nucleic AcidsRes.2004;32(1),2004)。
使用甲基光方法，最初用亚硫酸氢钠修饰相关FMR1基因区。接着使用与不含CpG核苷酸的区域杂交的PCR引物扩增基因区。藉由使用仅与由未甲基化DNA的亚硫酸氢盐转化所产生的序列(或者与已转化的甲基化序列)杂交的荧光标记探针，荧光探针检测可指示探针杂交的序列的甲基化状态。
藉由用甲基化敏感性限制酶切割DNA随后选择性地鉴别及/或分析经切割或未经切割的DNA来检测相关区域的甲基化的方法在本领域中为已知的。该方法可涵盖在限制酶消化后扩增完整DNA，参看例如美国专利申请案第10/971,986号、第11/071,013号及第10/971,339号。
在一实例中，本发明的方法包括用甲基化敏感性限制酶消化FMR1基因启动子区及扩增相关区域。可藉由检测可扩增产物的存在来测定DNA的甲基化状态。将仅扩增未经限制酶裂解的DNA。甲基化敏感性限制酶可为例如包括CG作为其识别位点的一部分且在C已甲基化时可裂解的McrBC。此外，可使样品与包括CG作为其识别位点的一部分且仅在C为甲基化时可裂解的限制酶接触。消化后，可藉由实时PCR使用正向/反向寡核苷酸及检测探针扩增所要FMR1启动子区。检测核酸序列的探针通常具有分别共价连接至其5'及3'端的荧光报导子或荧光团(诸如6-羧基荧光素(FAM)及四氯荧光素(TET))及淬灭剂(如四甲基罗丹明(tetramethylrhodamine；TAMRA)或黑洞淬灭剂(BHQ))。
可用于此检测中的引物的说明性实例包括正向引物(F1)：TGCAGAAATGGGCGTTCT(SEQ ID NO:4)；反向引物(R1)：GTGCCGGGTCGAAAGAC(SEQ ID NO:5)；及探针(P1)：染料-CTGAAGGGCGGTGACAGGTCG(SEQ ID NO:6)-淬灭剂(例如染料---FAM；淬灭剂---BHQ1)。使用此方法，测定临床截止区构成的ΔCt(McrBC与未处理通道之间的PCR循环临限值之差)。ΔCt值亦可使用数学算法表示为甲基化百分比(例如参看Holemon等人,Biotechniques 43:683-693,2007)。在一实例中，8.0或8.0以上的ΔCt(其对应于99.95%或99.95%以上FMR1基因区已甲基化的样品)确定患者的所有或基本上所有FMR1基因区已甲基化且因此为mGluR5反应者。
上述方法可用于甲基化分析仪。通常，该方法包括测定样品中的FMR1甲基化程度，将结果转化成计算机可读形式，及应用数学算法将结果分类为分类组，亦即mGluR5反应者。
通常上述方法包括对照样品，如完全甲基化的样品及部分甲基化的样品。可使用自脆性X染色体综合征患者的B淋巴细胞(Camden，NJ)纯化的DNA来产生适当对照或可使用已经测定具有特定甲基化状态的临床样品。通常上述方法包括对照样品。取自完全甲基化(或95%以上甲基化)的个体的样品可充当阳性对照且部分甲基化的样品可充当阴性对照。该等样品在本领域中可容易地获得，或可购自例如ATCC(美国菌种保存中心(American Type CultureCollection；ATCC))、国家生物标准暨控制中心(The National Institute forBiological Standards and Control；NIBSC)或克瑞尔医学研究所(Coriell institutefor medical research)。在一实例中，阳性对照可为来自NIBSC的完全甲基化样品(07/170；Hertfordshire，England)，且阴性对照可为来自NIBSC的部分甲基化样品(07/174；Hertfordshire，England)。基于用于测定样品的甲基化状态的技术，对照可与测试样品同时运作，或可表示为预定值。在一实例中，预定值为使用定量PCR(如本文所述)获得的ΔCt值。
本发明的寡核苷酸亦包括该等序列的变异体或实质上与本发明寡核苷酸相似的序列。变异体包括改变一或多个(诸如2、3、4、5、6、7、8、9或10个)碱基但仍可退火至相关FMR1启动子序列上的特定位置的序列。当关于退火或杂交使用时，术语“实质上”意谓寡核苷酸或探针核酸序列应充分互补以便与其各别核酸杂交或退火。如本文所使用，术语“杂交”指使一股核酸与一互补链接合的过程。在一实例中，寡核苷酸具有14至30个碱基。在另一实例中，寡核苷酸具有18至30个碱基，且包括序列SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6或其变异体。
寡核苷酸可藉由化学合成使用本领域中已知的任何适合方法来制备，或可藉由例如限制消化自生物样品获得。寡核苷酸可根据本领域中已知的任何技术加以标记，包括使用放射性标记、荧光标记、酶标记、蛋白质、半抗原、抗体、序列标签及其类似物。
FMR1mRNA测定
FMR1mRNA含量亦可用作测定个体是否可能对mGluR5作出反应的预测标记。来自患有FXS的个体的缺乏FMR1mRNA转录物或与对照相比FMR1mRNA转录物的量降低的样品确定为mGluR5反应者。此测定可单独用于将个体归类为mGluR5反应者，或可与FMR1基因甲基化状态及FMR1蛋白测定中之一或二者一起用作补充其他检测结果的手段。
FMR1mRNA含量使用本领域技术人员已知的许多技术中的任一者来量测，包括但不限于Northern印迹分析、核酸酶保护检测(NPA)、原位杂交、逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、RT-PCR ELISA、基于TaqMan的定量RT-PCR(基于探针的定量RT-PCR)及基于SYBR绿的定量RT-PCR。
使用本发明的方法，当在样品中未检测到FMR1mRNA时，将个体归类为mGluR5反应者。mGluR5mRNA转录物的量降低或较低的个体亦为mGluR5反应者，例如与对照(健康个体)相比仅具有50%(4%、30%、20%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%或1%)FMR1mRNA转录物的样品。
在一实例中，检测mRNA含量涉及使分离的mRNA与可与由所检测的FMR1基因编码的mRNA杂交的寡核苷酸接触。核酸探针通常可为例如全长cDNA或其一部分，诸如长度至少为7、15、30、50或100个核苷酸且足以在严格条件下与mRNA特异性杂交的寡核苷酸。mRNA与探针杂交指示所关注的标记得以表达。
在一种形式中，将mRNA固定于固体表面上且与探针接触，例如藉由使分离的mRNA在琼脂糖凝胶上跑胶，并使mRNA自凝胶转移至膜如硝化纤维素膜。
在另一实例中，FMR1mRNA含量可藉由逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、RT-PCR ELISA、基于TaqMan的定量RT-PCR(基于探针的定量RT-PCR)及基于SYBR绿的定量RT-PCR加以测定。若核酸分子以极低数目存在，则此等检测流程尤其适用于检测该等分子。如本文所使用，扩增引物定义为可退火至基因的5'或3'区(分别为+及-链，或反之亦然)且含有介于两者之间的短区的一对核酸分子。一般而言，扩增引物的长度为约10至30个核苷酸且侧接长度为约50至200个核苷酸的区域。在适当条件及适当试剂下，该等引物可扩增包含由该等引物侧接的核苷酸序列的核酸分子。
蛋白质
FMR1蛋白含量亦可用作测定个体是否可能对mGluR5作出反应的预测标记。来自患有FXS的个体的缺乏FMR1蛋白的存在或与对照相比FMR1蛋白的量降低的样品确定为mGluR5反应者。此测定可单独用于将个体归类为mGluR5反应者，或可与FMR1基因甲基化状态及FMR1mRNA测定中之一或二者一起用作补充其他检测结果的手段。
可使用本领域的任何已知方法来检测FMR1蛋白，该等方法包括但不限于免疫细胞化学染色、ELISA、流式细胞测量术、Western印迹法、免疫组织化学、分光亮度测定法、HPLC、质谱及时差式荧光共振能量转移(TR-FRET)。
使用本发明的方法，当在样品中未检测到FMR1蛋白时，将个体归类为mGluR5反应者。mGluR5蛋白的量降低或较低的个体亦为mGluR5反应者，例如与对照(健康个体)相比样品中仅具有50%(40%、30%、20%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、40%、3%、2%或1%)FMR1蛋白的量的样品。
用于检测样品中的FMR1蛋白的一种方法为利用能够与标记蛋白特异性相互作用的结合蛋白。优选可使用经标记抗体、其结合部分或其他FMR1结合伙伴。抗体可为单克隆或多克隆来源，或可以生物合成方式产生。FMR1结合伙伴亦可为天然存在的分子或由合成产生。复合FMR1蛋白的量，例如与结合蛋白质缔合的FMR1蛋白的量使用本领域中所述的标准蛋白质检测法来测定。免疫检测设计、理论及方案的详细综述可在本领域中的许多本文中获得，包括Practical Immunology(实践免疫学),Butt,W.R.编,MD出版社(MarcelDekker),纽约,1984。
多种检测可用于以经标记抗体检测蛋白质。在一步检测中，固定FMR1分子(若存在)且将其与经标记抗体一起培育。经标记抗体结合至经固定的靶分子。洗涤移除未结合分子后，检测样品中标记的存在。
在两步检测中，将经固定的FMR1分子与未标记抗体一起培育。接着使FMR1-未标记抗体复合物(若存在)结合至对未标记抗体具特异性的第二经标记抗体。洗涤样品且检测标记的存在。
用于标记抗体的标记的选择将视应用而变。然而，本领域技术人员可容易地确定标记的选择。
抗体可经放射性原子、酶、发色部分或荧光部分或比色标签标记。标签标记的选择亦将视所要探测限制而定。酶检测(ELISA)通常允许检测由带有酶标签的复合物与酶底物相互作用所形成的有色产物。放射性原子的一些实例包括32P、125I、3H及14P。酶的一些实例包括辣根过氧化酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶及葡萄糖-6-磷酸脱氢酶。发色部分的一些实例包括荧光素及罗丹明。抗体可藉由本领域中已知的方法结合至此等标记。举例而言，酶及发色分子可利用诸如二醛、碳二亚胺、二顺丁烯二酰亚胺及其类似物的偶合剂结合至抗体。或者，结合可经由配体-受体对发生。一些适合的配体-受体对包括例如生物素-抗生物素蛋白或生物素-抗生蛋白链菌素及抗体-抗原。
在一实施方式中，本发明涵盖使用夹层技术来检测血清及其他生物流体中的FMR1蛋白。该技术需要两个能够结合相关蛋白质的抗体：例如一个固定于固体支撑物上，而一个游离于溶液中，但经某种可容易地检测的化合物标记。可用于第二抗体的化学标记的实例包括但不限于放射性同位素、荧光化合物及酶或当暴露于反应物或酶底物时产生有色产物或电化学活性产物的其他分子。当将含有FMR1蛋白的样品置于此系统中时，FMR1蛋白结合至经固定的抗体及经标记的抗体二者。结果为处于支撑物表面上的“夹层”免疫复合物。藉由洗去未结合样品组分及过量经标记抗体，并量测与支撑物表面上的蛋白质复合的经标记抗体的量来检测复合蛋白质。夹层免疫检测具有高度特异性且极敏感，其限制条件为使用具有良好检测极限的标记。
优选藉由放射免疫检测或酶联免疫检测、竞争性结合酶联免疫检测、打点印迹法、Western印迹法、层析(优选为高效液相层析(HPLC))或本领域中已知的其他检测来检测样品中FMR1的存在。
打点印迹法通常由本领域技术人员实施，使用抗体作为探针来检测所要蛋白质(Promega Protocols and Applications Guide(普洛麦格实验方案和应用指南),第2版，1991,第263页，Promega Corporation(普洛麦格公司))。使用打点印迹法装置将样品涂覆于膜。将经标记的探针与该膜一起培育，且检测蛋白质的存在。
本领域技术人员熟知Western印迹分析(Sambrook等人，Molecular Cloning,A Laboratory Manual(分子克隆，实验室手册),1989,第3卷，第18章，ColdSpring Harbor Laboratory(冷泉港实验室出版社))。在Western印迹法中，藉由SDS-PAGE分离样品。将凝胶转移至膜。将膜与经标记的抗体一起培育以检测所要蛋白质。
上述检测涉及诸如但不限于免疫印迹、免疫扩散、免疫电泳或免疫沉淀的步骤。
在另一实例中，使用时差式共振能量转移(TR-FRET)检测样品中FMRP的存在。TR-FRET已用于检测许多不同分子，包括cAMP (Gabriel等人，2003,Assay Drug Dev Technol.1,291-303)及突变型多Q(WO 2010/015592)。在一实例中，该方法包括使生物样品与经镧系元素离子穴状化合物(诸如铕或铽穴状化合物)标记的第一FMRP特异性抗体及经诸如XL-665(获自CisBio的105kDa藻红蛋白杂六聚体结构)的适当荧光分子或D2受体标记的第二FMRP特异性抗体接触。本发明方法中，选择抗体以便当其结合FMRP时，镧系元素穴状化合物发射能量，引起荧光团的近接度依赖性时差式FRET发射。样品中的FMRP的量藉由量测荧光团所发出的荧光来定量。可使用任何FMRP特异性抗体，诸如F4055(Sigma，RTGKDRNQKKEKPD SVDG；SEQ ID NO:7)；2160(millipore；ITVAFENNWQPD RQIPFHD；SEQ ID NO:8)及H00002332-M03(Abnova；ATKDTFHKIKLDVPEDLRQMCAKEAAHKDFKKAVGAFSVTYDPENYQLVI；SEQ ID NO:9)。
诊断性及预后性检测
本文所述的方法可用作鉴别可能对mGluR5拮抗剂作出反应的患有脆性X染色体综合征的个体的诊断性检测，或可用作鉴别有患脆性X染色体综合征的风险且将受益于接受mGluR5拮抗剂的个体的预后性检测。预后性检测可出于预测目的或预防目的而使用以治疗有患FXS的风险的个体。
本发明方法不仅可用于经鉴别患有FXS的个体，而且亦用于在FMR1基因启动子中展现CGG重复序列长度扩增(例如超过55个重复序列)的任何个体。预想该群体将受益于mGluR5治疗。因而，本发明提供一种方法，其中自在FMR1基因启动子中展现CGG重复序列长度扩增的个体获得测试样品，且测定FMR1基因的沉默，例如藉由测定FMR1启动子的甲基化状态，从而检测FMR1蛋白及/或FMR1mRNA的存在。存在以下任一者或其任何组合指示个体为mGluR5反应者：是否所有或基本上所有FMR1基因区已甲基化，样品中缺乏FMR1蛋白或mRNA，样品中缺乏FMR1蛋白或缺乏mRNA。
本发明方法可用作预后性检测以确定是否应向个体给予mGluR5拮抗剂以防止脆性X染色体综合征发作或减轻脆性X染色体综合征的严重程度。在一实例中，可使用本领域中已知的任何标准方法确定个体有患FXS的风险，诸如检测CGG重复序列或评估该个体的家族史。一旦已确定个体有患FXS的风险，进一步评估该个体中任一或多个以下生物标记的存在：是否所有或基本上所有FMR1基因区已甲基化、样品中缺乏FMR1蛋白或mRNA。存在一或多个本文所述的生物标记可用于指示应向该个体给予mGluR5拮抗剂以便防止脆性X染色体综合征发作或减轻脆性X染色体综合征的严重程度。在一实例中，应监测经确定有患FXS风险的新生儿的一或多个本文所述的生物标记的存在以便防止脆性X染色体综合征发作或减轻脆性X染色体综合征的严重程度。使用本发明方法早期干预将使mGluR5的治疗效益最大化。
本文所述的预后性检测亦可用于在FMR1基因中展现CGG重复序列长度扩增的任何个体。若基于本文所述的方法确定个体为将在临床上对mGluR5拮抗剂作出反应的个体，则将向该个体给予mGluR5拮抗剂。一般而言，宜向患有FXS的个体给予介于约5至1500mg、优选约10至约1000mg化合物范围内的每日剂量。在一实例中，将向患有FXS的个体给予10mg、25mg或100mg的每日剂量。
试剂盒
本发明亦涵盖用于检测生物样品(测试样品)中的FMR1基因区的甲基化状态、FMR1mRNA表达或FMR1蛋白含量的试剂盒。该等试剂盒可用于确定患有FXS的个体是否可能对mGluR5拮抗剂治疗作出反应。举例而言，该试剂盒可包含经标记的化合物或能够检测生物样品中的FMR1蛋白或mRNA的试剂，及用于测定生物样品中以下各物的量的工具：FMR1蛋白(例如抗-FMR1抗体或结合至编码FMR1蛋白的DNA的寡核苷酸探针)或mRNA转录物。该试剂盒亦可包括可如上文所论述用于测定FMR1基因区的甲基化程度的引物。此外，该试剂盒可包括适当对照样品。
该试剂盒亦可包含例如缓冲剂、防腐剂或蛋白质稳定剂。该试剂盒亦可包含检测可检测剂(例如酶或底物)所必需的组分。该试剂盒亦可含有可加以检测并与所含有的测试样品相比较的对照样品或一系列对照样品。该试剂盒的各组分通常密封于个别容器内，且所有各种容器均与其使用说明书一起处于单一包装内。
以下非限制性实例说明本发明。
实施例
实施例1：建立研究以鉴别是否存在对(-)-(3aR,4S，7aR)-4-羟基-4-间甲苯基乙炔基八氢-吲哚-1-甲酸甲酯治疗作出反应的一部分患者
本发明实施例作为探查mGluR5拮抗剂(-)-(3aR,4S,7aR)
-4-羟基-4-间甲苯基乙炔基-八氢-吲哚-1-甲酸甲酯是否可向患有FXS的个体提供有利治疗的临床试验的追踪研究而进行。建立本研究以鉴别是否存在对(-)-(3aR,4S,7aR)-4-羟基-4-间甲苯基乙炔基-八氢-吲哚-1-甲酸甲酯治疗作出反应的一部分患者。在试图鉴别对(-)-(3aR,4S,7aR)-4-羟基-4-间甲苯基乙炔基-八氢-吲哚-1-甲酸甲酯治疗作出反应的该部分患者时，进行研究以探查该研究中FMR1甲基化/mRNA表达与(-)-(3aR,4S,7aR)-4-羟基-4-间甲苯基乙炔基-八氢-吲哚-1-甲酸甲酯功效之间的关系。
临床样品：在完成临床研究的30位患者中，26位同意进行药物基因学/药物基因组学评估。根据得自根塔公司(Gentra，Minneapolis，MN)的说明书，自全血提取基因组DNA。根据得自恰根公司(Qiagen，Valencia，CA)的说明书，自全血提取总RNA。成功提取并分析总共26个DNA样品及24个RNA样品。此外，正常对照DNA购自科林研究所(Coriell Institute，Camden，NJ)。
甲基化特异性PCR(MSP)检测：用亚硫酸氢盐(Qiagen，Valencia，CA)处理基因组DNA。使用来自开米康(Chemicon，Temecula，CA)的CpG WIZ脆性X染色体扩增试剂盒，根据制造商说明书进行MSP。分析总共26位患者及4个正常对照。
定量RT-PCR(qRT-PCR)检测：
藉由Taqman实时PCR量测FMR1mRNA表达。引物及探针由应用生物系统公司(Applied Biosystems，Foster City，CA；脆性X染色体智力低下1Hs00924544_m1，甘油醛-3-磷酸脱氢酶Hs 99999905_m1；泛素C Hs00824723_m1)设计。
使用对照基因、GAPDH及UBC的表达量来针对样品间变异性进行调整。数据以经校正的Ct(循环临限值)的形式提供。≥36的Ct值被视为检测的背景值。分析总共24位患者及9个正常对照。
亚硫酸氢盐测序：用亚硫酸氢盐(Qiagen，Valencia，CA)处理基因组DNA。使用以下引物扩增具有22个CpG位点的FMR1启动子：5'-GTTATTGAGTGTATTTTTGTAGAAATGGG-3'(SEQ ID NO:10)；及5'-CCCTCTCTCTTCAAATAACCTAAAAAC-3'(SEQ ID NO:11)。使用来自英杰公司(Invitrogen，Carlsbad，CA)的TA克隆试剂盒克隆196-bp FMR1启动子，且使用ABI3730XL(Foster City，CA)对每位患者的7至13个纯系进行测序。更多详情可见于BMD报告中。分析总共26位患者及4个正常对照。
结果：初步MSP分析显示8位患者完全甲基化，18位患者部分甲基化。完全甲基化的患者不表达FMR1mRNA，而部分甲基化的患者表达不同量的mRNA。数据表明周围血液中的FMR1甲基化与转录密切相关。更重要的是，在第19天，完全甲基化或不表达FMR1mRNA的患者在对(-)-(3aR,4S,7aR)-4-羟基-4-间甲苯基乙炔基-八氢-吲哚-1-甲酸甲酯的反应方面显示与安慰剂相比显著更大程度的改良(ABC-C：p<0.001；CGI功效指数：p<0.001)(表1至表4)。相比而言，在部分甲基化或表达FMR1mRNA的患者中，在(-)-(3aR,4S,7aR)-4-羟基-4-间甲苯基乙炔基-八氢-吲哚-1-甲酸甲酯与安慰剂之间不存在显著差异。
为了获得更多关于甲基化模式的信息且验证MSP检测，对具有22个CpG位点的FMR1启动子进行亚硫酸氢盐测序。除了三位患者可能至少部分地由于每位患者所测序的纯系数目有限而出现偏差以外，所有患者的亚硫酸氢盐测序数据均与MSP数据一致。为了进一步评估FMR1甲基化对(-)-(3aR,4S,7aR)-4-羟基-4-间甲苯基乙炔基-八氢-吲哚-1-甲酸甲酯功效的影响，藉由综合考虑初步MSP、亚硫酸氢盐测序及其他MSP数据将三位存在偏差的患者的甲基化状态重新分类。三位患者中有两位可合理地重新分类。余下一位无法基于现有数据重新分类，且不进行功效分析。新统计分析显示，在完全甲基化患者中，(-)-(3aR,4S,7aR)-4-羟基-4-间甲苯基乙炔基-八氢-吲哚-1-甲酸甲酯反应保持显著高于安慰剂(ABC-C：p<0.001；CGI功效指数：p<0.001)(表5至表6)。
总而言之，总体资料指示FMR1甲基化或mRNA表达可充当经(-)-(3aR,4S,7aR)-4-羟基-4-间甲苯基乙炔基-八氢-吲哚-1-甲酸甲酯治疗的FXS患者的临床反应的预测生物标记。
表1：FMR1甲基化状态的ABC-C结果
*(-)-(3aR,4S,7aR)-4-羟基-4-间甲苯基乙炔基-八氢-吲哚-1-甲酸甲酯相对于安慰剂。针对基线值加以调整。
**混合模型。
ABC-C评分降低指示改良。
表2：FMR1甲基化状态的CGI结果
*(-)-(3aR,4S,7aR)-4-羟基-4-间甲苯基乙炔基-八氢-吲哚-1-甲酸甲酯相对于安慰剂。针对基线值加以调整。
**混合模型。
CGI总体改良降低指示改良。
CGI功效指数降低指示改良。
表3：FMR1mRMA表达的ABC-C结果
*(-)-(3aR,4S,7aR)-4-羟基-4-间甲苯基乙炔基-八氢-吲哚-1-甲酸甲酯相对于安慰剂。针对基线值加以调整。
**混合模型。
ABC-C评分降低指示改良。
表4：FMR1mRMA表达的CGI结果
*(-)-(3aR,4S,7aR)-4-羟基-4-间甲苯基乙炔基-八氢-吲哚-1-甲酸甲酯相对于安慰剂。针对基线值加以调整。
**混合模型。
CGI总体改良降低指示改良。
CGI功效指数降低指示改良。
表5：FMR1甲基化状态的ABC-C结果(重新分类)
*(-)-(3aR,4S,7aR)-4-羟基-4-间甲苯基乙炔基-八氢-吲哚-1-甲酸甲酯相对于安慰剂。针对基线值加以调整。
**混合模型。
ABC-C评分降低指示改良。
表6：FMR1甲基化状态的CGI结果(重新分类)
*(-)-(3aR,4S,7aR)-4-羟基-4-间甲苯基乙炔基-八氢-吲哚-1-甲酸甲酯相对于安慰剂。针对基线值加以调整。
**混合模型。
CGI总体改良降低指示改良。
CGI功效指数降低指示改良。
实施例2：基于Taqman探针的实时PCR检测后限制酶消化用于测定FMR1启动子甲基化
临床样品：在自同意进行实施例1中的药物基因学/药物基因组学评估的患者纯化的26例基因组DNA中，12例具有足以藉由基于探针的甲基化检测加以分析的量。
基于探针的甲基化检测：
该检测基于来自奥利恩基因组公司(Orion Genomics，St.Louis，MO)的甲基筛选(MethylScreen)技术。然而，其组合甲基筛选限制酶DNA处理与基于TaqMan水解探针的实时PCR。简而言之，为了评定FMR1启动子区的甲基化状态，用来自NEB(Ipswich，MA)的McrBC及HhaI独立地且一致地根据制造商说明书消化自EDTA抗凝血剂血液纯化的基因组DNA，产生以下4种状况：1)无酶消化；2)McrBC消化；3)HhaI消化；及4)McrBC及HhaI双重消化，均在37℃下培育16小时，接着在65℃下灭活20分钟。限制酶McrBC具有甲基化依赖性，意谓其仅裂解甲基化DNA；而限制酶HhaI具有甲基化敏感性，意谓其仅裂解未甲基化的DNA。各状况均含有相同量400ng的输入DNA以进行实时PCR检测，因此藉由比较各消化状况与无酶消化对照，可藉由实时PCR使用引物对(正向引物5'-tgcagaaatgggcgttct(SEQ ID NO:4)；反向引物5'-gtgccgggtcgaaagac(SEQ ID NO:5))及FAM标记的探针(探针5'FAM-ctgaagggcggtgacaggtcg-BHQ1(SEQ ID NO:6))定量酶消化后可扩增DNA的剩余量。在实时PCR检测前，在37℃下用限制酶AluI处理酶消化混合物1小时，接着在65℃下灭活20分钟。PCR扩增子涵盖相关区域中的15个CpG岛。消化状况与对照的差由PCR循环临限值(ΔCt)的变化体现。临床截止区构成约5至14的dCt(McrBC与未处理通道之间的PCR循环临限值之差)范围。此与94%至100%CTA的甲基化百分比范围相关。藉由根据算法计算，可确定样品DNA的FMR1启动子区的甲基化百分比。
结果：实施例1中所述的原始验证概念研究中的12位患者中，基于探针的甲基化分析显示3位患者完全甲基化，9位患者部分甲基化，产生与MSP检测相似的结果。完全甲基化的患者具有介于-9.95至-10.27范围内的ΔCt，且具有介于99.9至99.92范围内的甲基化百分比。部分甲基化的患者具有介于-1.77至-7.29范围内的ΔCt及介于70.68至99.36范围内的甲基化百分比。完全甲基化的患者不表达FMR1mRNA，而部分甲基化的患者表达不同量的mRNA。数据表明周围血液中的FMR1甲基化与转录密切相关。更重要的是，在第19天，完全甲基化及/或不表达FMR1mRNA的患者在对(-)-(3aR,4S,7aR)-4-羟基-4-间甲苯基乙炔基-八氢-吲哚-1-甲酸甲酯的反应方面显示与安慰剂相比显著更大程度的改良(ABC-C：p<0.001；CGI功效指数：p<0.001)。相比而言，在部分甲基化或表达FMR1mRNA的患者中，在(-)-(3aR,4S,7aR)-4-羟基-4-间甲苯基乙炔基-八氢-吲哚-1-甲酸甲酯与安慰剂之间不存在显著差异。
实施例3：使用时差式荧光共振能量转移(TR-FRET)免疫检测进行FMRP测定
以下抗体用于TR-FRET免疫检测：F4055(西格玛(Sigma)，RTGKDRNQKKEKPDSVDG(SEQ ID NO:7))；2160(密理博(millipore)；ITVAFENNWQPDRQIPFHD；SEQ ID NO:8)及H00002332-M03(阿诺瓦(Abnova)；ATKDTFHKIKLDVPEDLRQMCAKEAAHKDFKKAVGAFSVTYDPENYQLVI；(SEQ ID NO:9))。
由F4055-H00002332-M03抗体组合进行人FMRP蛋白检测的温度依赖性信号动力学
用eGFP质体(模拟物)或人FMRP质体(经FMRP转染)短暂转染HEK293T细胞。将细胞于M-PER(皮尔斯公司(Pierce))溶解缓冲液、150nM NaCl及蛋白酶抑制剂中溶解。每低容量384孔中加载1μg总蛋白(5μl)及1μl抗体检测缓冲液。结果示于图2中。
由MAB2160-F4055抗体组合进行人FMRP蛋白检测的温度依赖性信号动力学
用eGFP质体(空白组)或人FMRP质体(经FRMP转染)短暂转染HEK293T细胞。将细胞于M-PER(Pierce)溶解缓冲液、150nM NaCl及蛋白酶抑制剂中溶解。每低容量384孔中加载1μg总蛋白(5μl)及1μl抗体检测缓冲液(最终抗体量：每孔0.6ng密理博MAB2160-Tb及每孔20ng西格玛F4055-d2)。结果示于图3中。
内源性人FMRP蛋白检测原代人纤维母细胞
将健康对照纤维母细胞(BJ1及MG63)或完全甲基化的脆性X染色体综合征患者纤维母细胞(GM05848B、GM09497A及GM07072)于M-PER(皮尔斯公司)溶解缓冲液、150nM NaCl及蛋白酶抑制剂中溶解。将总蛋白浓度调节至12.5μg总蛋白/5μl(约8000个细胞/1μl)。每低容量384孔中加载各细胞溶解物的蛋白质浓度稀释物及1μl抗体检测缓冲液(最终抗体量：每孔0.3ng密理博MAB2160-Tb及每孔3ng阿诺瓦H00002332-M03-d2)。结果示于图4中。
Claims (14)
1.一种测定患有脆性X染色体综合征(FXS)的个体对mGluR5拮抗剂治疗的反应性的方法，该方法包含：
自患有脆性X染色体综合征的个体分离RNA样品；
进行测定该RNA样品中的FMR1mRNA转录物的检测；及
若该样品的FMR1mRNA表达量与对照相比降低，则将该个体归为mGluR5反应者。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，该检测选自Northern印迹分析、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、RT-PCR ELISA、基于TaqMan的定量RT-PCR(基于探针的定量RT-PCR)及基于SYBR绿的定量RT-PCR。
3.一种测定患有FXS的个体对mGluR5拮抗剂治疗的反应性的方法，该方法包含：
自患有脆性X染色体综合征的个体分离样品；
进行测定该样品中的FMR1蛋白的量的检测；及
若该样品的FMR1蛋白(FMRP)量与对照相比降低，则将该个体归为mGluR5反应者。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，该检测选自免疫组织化学、ELISA、流式细胞测量术、Western印迹法、HPLC及质谱分析。
5.一种测定患有脆性X染色体综合征(FXS)的个体对mGluR5拮抗剂治疗的反应性的方法，该方法包含：
提供来自患有FXS的个体的核酸样品；
测定该样品中的脆性X染色体智力低下1(FMR1)基因区的甲基化程度，其中该样品中相对于对照的甲基化程度指示该个体是否为mGluR5反应者。
6.一种测定患有脆性X染色体综合征(FXS)的个体对mGluR5拮抗剂治疗的反应性的方法，该方法包含：
提供来自患有脆性X染色体综合征的个体的核酸样品；
测定该样品中的脆性X染色体智力低下1(FMR1)基因区的甲基化程度；及
若该样品中所存在的FMR1基因区完全甲基化，则将该个体归为mGluR5反应者。
7.如权利要求1、3、5或6中任一项所述的方法，其特征在于，该mGluR5拮抗剂为(-)-(3aR,4S,7aR)-4-羟基-4-间甲苯基乙炔基-八氢-吲哚-1-甲酸甲酯。
8.如权利要求6所述的方法，其特征在于，该测定可使用选自以下的检测进行：甲基化敏感性限制酶消化与Southern印迹法或定量PCR(基于探针或SYBR绿)中至少一者组合；或亚硫酸氢盐DNA修饰与甲基化特异性PCR(MSP)、定量甲基化特异性PCR(基于探针或SYBR绿)或焦磷酸测序中至少一者组合。
9.一种测定患有脆性X染色体综合征(FXS)的个体对mGluR5拮抗剂治疗的反应性的方法，该方法包含：
测定来自患有FXS的个体的样品中FMR1mRNA转录物、FMR1蛋白的存在、或FMR1基因区的甲基化或其任何组合；及
若该样品的FMR1mRNA含量与对照相比降低、FMR1蛋白的量与对照相比降低、或若所存在的FMR1基因区完全甲基化，则将该个体归为mGluR5反应者。
10.如权利要求9所述的方法，其中该方法包含测定FMR1mRNA及FMR1蛋白的存在。
11.如权利要求6、8或9中任一项所述的方法，其特征在于，该FMR1基因区为SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3。
12.如权利要求1、3、5、6或9中任一项所述的方法，其特征在于，该方法进一步包含给予mGluR5拮抗剂。
13.如权利要求12所述的方法，其特征在于，该mGluR5拮抗剂为(-)-(3aR,4S,7aR)-4-羟基-4-间甲苯基乙炔基-八氢-吲哚-1-甲酸甲酯。
14.一种诊断试剂盒，其用于测定患有脆性X染色体综合征(FXS)的个体是否为mGluR5拮抗剂反应者，该试剂盒包含：
用于量测FMR1mRNA转录物、FMR1蛋白含量、或FMR1基因区的甲基化或其任何组合的试剂；
及使用说明书。
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