TW201024283A - Synthesis and novel salt forms of (R)-3-((E)-2-(pyrrolidin-3-yl)vinyl)-5-(tetrahydropyran-4-yloxy)pyridine - Google Patents

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201024283 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於與神經元煙鹼乙醯膽鹼受體結合且調節 其活性之化合物、其新穎鹽、製備此等化合物之方法、含 有此等化合物之醫藥組成物及使用此等化合物來治療包括 與中樞神經系統（CNS )功能障礙有關之病狀及病症在内之 廣泛不同病狀及病症之方法。 【先前技術】 © 靶向神經元煙鹼受體（NNR)(亦稱為煙鹼乙醯膽鹼 爻體（nAChR ))之化合物的治療潛力已成為若干評論之主 題。例如參看 Breining 等人，J關.CAew 4〇: 3 (2005) ’ Hogg 及 Bertrand，Drug 咐.. 义3: 123 (2004)。在已提出NNR配位體作為治療劑之 適應症種類當有下文描述之CNS病症。在中樞神經系統及 周邊神經系統中皆存在nAChR亞型的異質分布。舉例而 言，主要在脊椎動物腦中之nAchR亞型為α4^2、^及 α 3点2，而主要在自主神經節中之nAChR亞型為“ 3 0 4且 神經肌肉接合點之nAChR亞型為al/9lr占及石。 一些煙鹼化合物之限制在於其由於非特異性結合多種 nAChR亞型而與多種非所要副作用有關。舉例而言，結合 及刺激肌肉與神經節nAChR亞型可產生副作用，這可限制 特定煙鹼結合化合物作為治療劑之效用。 藥物候選物之商業開發涉及許多步驟，包括開發<適 於大規模製造程序的成本效益合成方法。商業開發亦涉及 3 201024283 關於展現合適純度、化學穩定性、醫藥性f及便於便利處 理及加工之特徵的藥物物質鹽形式的研究。此外，含有藥 物物質之組成物應具有適當保存期限。亦即，其在物理化 學特徵方面不應展現顯著變化，諸如但不限於長時間储存 後之化學組成、含水量、密度、吸濕性、穩定性及溶解度。 此外’藥物向患者投予後可再現且恆定之血漿濃度特徵亦 為重要因素。 -般而S ’固體鹽形式對於經口調配物為較佳，因為 其傾向於以較佳方式展現此等特性；而在驗性藥物之情形 下，酸加成鹽通常為較佳鹽。然而，π同鹽形式在賦予此 等特性之能力方面變化極大’且這類特性無法以合理準綠 性預測。舉例而言’ 一些鹽在周圍溫度下為固冑，而其他 鹽在周圍溫度下為液體、黏稠油狀物或膠狀物。此外，一 些鹽形式在極職件下仍龍及光穩定，而其他鹽形式即 使在溫和得多之條件下亦容易分解，吸濕性亦存在極 大變化，較低吸濕性更為有利。因此，醫藥組成物中所用 之驗性藥物之合適酸加成鹽形式的開發為高度不可預測之 過程。 外消旋5-((Ε)_2十比略咬_3_基）乙稀基）_5 (四氫略喃-4_ 基氧基）比咬其合成及其半半乳糖二酸鹽形式係揭示於以 引用方式併入本文中之w〇G4/G78752及其對應案中。由於 單對映異構體優於其外消旋物之有利藥理學特性，因此 需要立體特異性合成，較佳為適於大規模製造之方法。此 卜需要呈現改良特性（諸如純度、穩定性、溶解度及生 201024283 物可用性）之鹽形式。此等新穎鹽形式之較佳特徵包括將 會提高活性成份及其醫藥組成物製成商業藥物產品的簡易 性或效率之特徵，及藥物在長時間内之改良穩定性。 【發明内容】 本發明之一態樣為（R)-3-((E)-2-(吼咯啶_3_基）乙烯 基）-5-(四氫哌喃_4_基氧基）吡啶或其醫藥上可接受之鹽。本 發明之一態樣為（R)-3-((E)-2-("比咯啶-3-基）乙烯基）_5_(四 氫哌喃-4 -基氧基）吡啶單_L·蘋果酸鹽，或其水合物或溶劑合 Ο 物。另一態樣為（R)_3_((E)-2-(n比洛嘴-3-基）乙稀基）_5-(四氫 哌喃-4-基氧基）吡啶半_半乳糖二酸鹽，或其水合物或溶劑合 物。另一態樣為（R)-3-((E)-2-(°比咯啶-3-基）乙烯基）_5-(四氪 哌喃-4-基氧基）吡啶乙二酸鹽，或其水合物或溶劑合物。另 一態樣為（R)-3-((E)-2-(吼咯啶-3-基）乙烯基）_5-(四氫哌喃 -4-基氧基）"比啶二·對甲苯甲醯基_D_酒石酸鹽，或其水合物 或溶劑合物。 本發明之一態樣為實質上不含（8)-3-(^)-2-^比咯啶-3-)乙烯基）-5-(四氫哌喃_4_基氧基）π比啶之（R)_3_((E)_2-(e比 咯啶-3-基）乙烯基）_5_(四氫哌喃_4_基氧基）„比啶或其醫藥上 可接受之鹽。在一具體實例中，（S)_3_((E)_2_(吡咯啶_3_基） 乙稀基）-5-(四氫哌喃_4_基氧基）吡啶係以少於25重量％之 量存在。在一具體實例中，（s)_3_((E)_2_(e比咯啶_3_基）乙烯 基）-5-(四氫旅喃_4-基氧基）吡啶係以少於15重量％之量存 在。在一具體實例中，（S)-3-((E)-2-(吡咯啶-3-基）乙烯 基）-5-(四氫派喃基氧基）吡啶係以少於5重量％之量存 5 201024283 在。在-具體實例中’⑻冬(⑻_2(料咬_3基）乙稀 基）-5-(四氫娘读_4·基氧基）啦咬係以少於2重量％之量存 在。在-具趙實例中，⑻小((e)_2 (料咬小基）乙稀 基叫四氫娘喃-4-基氧基㈣係以少於i重量％之量存 在°在—具體實例中，（Κ)·3_((Ε)_2_(料⑦_3基）乙稀 基四氫_ ·4_基氧基）㈣不含顯著量（s)_3 (⑻_2十比 咯咬冬基）乙烯基）_5-(四氫娘鳴-4-基氧基）吼咬。 本，明之一態樣為包含如本文所揭示之化合物及一或 多種醫藥上可接受之佐劑、載劑或賦形劑的醫藥組成物。 在-具體實例中1醫藥組成物進—步包含一或多種額外 治療劑。 本發明之-態樣包括化合物(r)_3·(⑻_2 (吡咯啶_3基) 乙烯基)·5·(四氫哌喃·4_基氧基)吡鱗-L-㈣酸鹽或半-半 乳糖二酸鹽或乙二酸鹽或二·對甲苯甲醯基·D•酒石酸鹽，其 係用作治療NNR介導之病症的醫藥品。 另一態樣包括治療或預防NNR介導之病症的方法，其 包含向需要這類治療之哺乳動物投予治療有效量之 (R) 3 ((E) 2 (»比洛咬_3_基）乙稀基）·5_(四氫旅喃_4_基氧基） °比咬或其醫藥上可接受之鹽。 另一態樣包括化合物（r)_3-((e)_2-(吡咯啶-3-基）乙烯 基）-5-(四氫哌喃_4-基氧基）吡啶或其醫藥上可接受之鹽的 用途，其係用於製備用以治療NNR介導之病症的藥物。 在前述化合物、方法或用途之一具體實例中，病症係 選自由CNS病症、發炎、與細菌及/或病毒感染有關之發炎 201024283 性反應、疼痛、代謝症候群、自體免疫病症組成之群。在 一具體實例中，CNS病症係選自精神分裂症之認知功能障 礙（CDS)、阿茲海默氏病（Alzheimers Disease，AD)、 注意力不足症（ADD )、初老期癡呆（阿茲海默氏病早期 發作）、阿茲海默型癡呆、輕度認知障礙、年齡相關之記 憶障礙及注意力不足過動症（ADHD )。 本發明之另一態樣包括醫藥組成物之投藥方案，其包 含以介於7至2200# g/kg之間的量投予（r)_3-((E)-2-(吡咯 ® 啶-3_基）乙烯基）-5-(四氫哌喃-4-基氧基）吡啶或其醫藥上可 接受之鹽。 在這些態樣及具體實例中，另一具體實例包括其中 (R)-3-((e)-2-(吼咯啶-3-基）乙烯基）-5-(四氫哌喃-4-基氧基） 0比咬以其單-L-蘋果酸鹽、半-半乳糖二酸鹽、乙二酸鹽或二 -對甲笨甲醯基_D-酒石酸鹽形式提供之情形。 另一態樣包括新穎中間物，包括（R)-2-(l-(第三丁氧幾 基）0比洛啶-3-基）丙二酸二乙酯；（R)-2-(l-(第三丁氧羰基）吡 〇 洛咬-3-基）丙二酸；（R)_3_(2_羥基乙基）吡咯啶_丨_甲酸第三 丁醋；及（R)-3-(2-碘乙基）吡咯啶-1·甲酸第三丁酯。 另一態樣包括藉由（R)-2-( 1 -(第三丁氧幾基）〇比略咬 基）丙二酸二乙酯、（R)-2-(l-(第三丁氧羰基）吡咯啶_3·基）丙 一酸、（R)-3-(2-經基乙基）《比洛咬-1·甲酸第三丁酯及 (R)_3-(2-碘乙基）吡咯啶_ι·甲酸第三丁酯中之一或多者的中 間〖生製備（r)_3_((e)_2-(°比洛咬-3-基）乙浠基）_5_(四氫η底喃 基氣基）吡啶之方法。 7 201024283 另一態樣包括藉由（R)-2-(l-(第三丁氧幾基）》比略咬 基）丙二酸二乙酯、（R)-2-(l-(第三丁氧幾基）ϋ比洛咬_3·基）丙 一酸、（R)-3-(2-經基乙基）《«比洛咬_ 1 -甲酸第三丁醋及 (R)-3-(2-蛾乙基）吡咯啶_1_甲酸第三丁酯中之一或多者的中 間性製備（R)-3 -乙烯基吡洛啶-1-甲酸第三丁酯之方法。 另一態樣包括相對於異構體（R)-3-((Z)-2-(吡咯啶_3_基） 乙烯基）-5-(四氫哌喃-4-基氧基）吡啶及（r)-3-(1-(吡咯啶_3_ 基）乙浠基）-5-(四氫娘β南_4_基氧基）。比D定純化（r)_3_((e)_2_ (0比略咬-3-基）乙稀基）-5-(四氫派喃-4-基氧基）β比咬之方 法’該方法係藉由使自由鹼轉化成乙二酸鹽且再生來進行。 態樣及具體實例之組合構成本發明之其他具體實例。 【實施方式】 定義 以下定義意欲闡明所定義之術語，而非對其進行限 制。若本文所用之特定術語未明確定義’則不應認為該術 語不確定。更確切言之，術語係以其已接受含義使用。 視上下文而定’如本文所用之術語「化合物」可用於 意謂（ί〇·3-((Ε)-2-(»比咯啶-3-基）乙烯基）-5-(四氫哌喃-4-基 氧基）°比咬（式I)之自由鹼形式或鹽形式，此將為顯而易 見的。熟習此項技術者將能夠辨別其差異。 如本文所用，「醫藥上可接受」一詞係指載劑、稀釋 劑、賦形劑或式I化合物之鹽形式與組成物之其他成份玎相 容，且對醫藥組成物之接受者無害。 如本文所用’ 「醫藥級」一詞係指適用作藥品之標準 201024283 化合物或組成物。關於本文之論述，本發明之醫藥級化人 物，尤其其鹽形式呈現適當特性’包括在藥物產品中使用 之純度、穩定性、溶解度及生物可用性。較佳特徵包括將 提高活性成份及其組成物製成商業藥物產品之簡易性或效 率的特徵。此外，可使用可放大成大規模製造之立體特異 性合成法合成本發明之醫藥級化合物，亦即呈現適當純度 及產量。

如本文所用，術語「醫藥組成物」係指本發明化合物 視情況與-或多種醫藥上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑 混合。醫藥組成物較佳對周圍條件展現一定程度之穩定 性，從而使其適於達成製造及商業化目的。 又μ 有效重」 治療量」或「有效 如本文所用，術語

·.，， -J --VVJ 50L 劑量」係指足以引起所要藥理學或治療作用，目此有效預 防或治療病症的本發明化合物之量。可藉由延遲或預防病 症進展以及與病症有關之症狀的發作來表明病症得到預 防。可藉由減輕或消除症狀、抑制或逆轉病症進展、以及 對患者之請狀態的任何其他貢獻來表⑼症得到治療。 如下文將更詳細描述且泉善 ’

(且參看® 1及圖2所描述，對低 至0.004y M/kg之劑詈的斗T 人 5T 的式1化合物或其醫藥上可接典夕路 觀測到統計學顯著作用，包 又之鹽 有效劑量可視諸如患者病# 作用。 醫藥組成物之方式之因音 又及投予 素而變化。因此，如本文所用，右 效劑量可小於1〇omg，在另一具體 =用有 在另一具體實例中，小於 j於50mg， 於1〇叫，或在另—具體實例中，小 9 201024283 於1 mg。此等有效劑量典型地表示以單獨劑量投予之量， 或作為一或多個投予劑量經24小時時段投予之量。 如本文所用’ 「實質上」或「足夠」品質、純度或純 等詞包括大於20%，較佳大於3〇%，且更佳大於4〇% (例 如大於50、60、70、8〇或9〇%中任一者）之品質或純度。 如本文所定義，術語「穩定性」包括化學穩定性及固 態穩定性’其中「化學穩定性」一詞包括在正常儲存條件 下以經分離形式或以醫藥組成物形式儲存本發明之鹽的潛 力，在醫藥組成物中，本發明之鹽係以與醫藥上可接受之 ❹ 載劑、稀釋劑、賦形劑或佐劑混合之形式提供（諸如在經 口劑型中，諸如錠劑、膠囊或其類似劑型），其中存在可 忽略之化學降解或分解，且「固態穩定性」一詞包括在正 常儲存條件下以經分離固體形式或固體醫藥組成物形式儲 存本發明之鹽的潛力，在固體醫藥組成物中本發明之鹽 係以與醫藥上可接受之載劑 '稀釋劑、賦形劑或佐劑混合 之形式提供（諸如在經口劑型中’諸如錠劑、膠囊或其^ 似劑型），其中存在可忽略之固態轉換，諸如結晶、再結 @ 晶、固態相變、水合、脫水、溶劑化或去溶劑化。 Γ正常儲存條件」之實例包括介於·8(Γ(：與5〇。〇之間， 較佳介於（TC與桃之間且更佳為周圍溫度，諸如饥至 3〇°C的-或多種溫度，介於巴之間，較佳為大氣壓 力之壓力，介於5與95%之間，較佳介於1〇至6〇%之間的 相對濕度，且暴露於460勒克司（lux)或較低之uv/可見 光，達長時間（諸如大於或等於6個月）。在該等條件下， 10 201024283 可發現少於5%，更佳少於？0/ ❹轉“、 且尤其少於1%之本發明之 鹽化學降解或分解，肖 涵姑讲本… 或（適虽時）發生固態轉換。熟習此 項技術者應瞭解，上述針對、、w 蔽 紂對'现度、壓力及相對濕度之上限 及下限代表正常儲存條件之極值，且在正常儲存期間將不 會經歷此等極值的特定組合（例如，机之溫度及（M巴之 壓力）。 之術語「病症 關之病狀、功能 除非另外說明，否則如本文所用 (disorder )」意謂任何與NNR受體活性有 障礙或疾病。 化合物 本發月之具體實例係關於（R)-3-((E)-2-(n比略咬-3-基） 乙烯基）-5-(四氫哌喃-4_基氧基）吡啶（式〖）或其醫藥上可 接受之鹽。

熟習此項技術者應瞭解，不同命名慣例可以不同方式 命名化合物。因此，化合物A可命名為（R)-3-((E)-2-(吡咯 咬-3-基）乙烯基）-5-(四氫旅喃-4-基氧基）"比咬，或（R)-3-(2-吡咯啶-3-基）-乙烯基）-5-((四氫-2H-哌喃-4-基）氧基）吡啶。 該等命名慣例不應用於向本說明書引入歧義。 在一具體實例中，式I化合物或其醫藥上可接受之鹽為 201024283 實質上純的。在一具趙實例中，式Ufc合物或其醫藥上可接 受之鹽實質上不含（S)-3-((E)_2_(„比咯啶_3_基）乙烯基）5 (四 氫哌喃-4-基氧基）吡啶。在一具體實例中，式χ化合物或其 醫藥上可接受之鹽相較於（S)-3_((E)_2·(吡咯啶_3基）乙烯 基）-5-(四氫哌喃-4-基氧基）吡啶以約75重量％，較佳大於 85重量％，更佳大於95重量％，更佳大於98重量％，且最 佳為99重量％或99重量％以上之量存在。 一具體實例係關 於1〇〇%純之（R)-3-((E)-2十比咯咬丄基）乙烯基）5 (四氫哌 °南-4 -基氧基）》比唆（式I)。 本發明之一具體實例係關於製備以重量計實質上不含 (S)-3-((E)-2-(。比洛咬·3_基）乙稀基）_5_(四氫哌味_4·基氧基） 他咬之（R)-3-(⑻-2十比略咬_3_基）乙烯基）_5_(四氫哌喃_4_ 基氧基）吡啶或其醫藥上可接受之鹽的方法。本發明之另一 具體實例係關於無需使用手性層析分離步驟製 於25重量％，較佳少於15重量％，更佳少於5重備量;有； 至更佳少於2重量％且最佳少於i重量％的⑻_3 (⑻_2·(口比 咯啶-3-基）乙烯基）·5_(四氫哌喃_4_基氡基）吼啶之 (R)-3-((E)-2-("比咯啶-3·基）乙烯基）5 (四氫哌喘_4基氧基） 口比咬或其醫藥上可接受之鹽的方法。在本發明之—具體土實 例中，提供不依靠層析分離即製造實質上純之以)_弘 (⑻-2-(吼咯咬-3-基）乙烯基）_5·(四氫哌κ基氧基）吼啶 的方法。 一般合成法 201024283 可如以引用的方式併入本文中之PCT W02004/078752 中所報導’使用3-乙烯基吡咯啶-1-曱酸第三丁酯與3-溴 -5-(四氫-2H-哌喃-4-基氧基）吡啶的鈀催化偶合，隨後移除 第二丁氧幾基保護基來合成外消旋3_((Ε)·2_(β比咯啶_3•基） 乙烯基）-5-(四氫哌喃_4_基氧基）吡啶。在外消旋合成中藉 由以亞曱基三笨基磷烷（維蒂希試劑（Wiuig reagent)) 處理3-甲醯基吡咯啶曱酸第三丁酯來製造所需之％乙烯 基比嘻咬_1_甲酸第二丁酯。而3甲醯基〇比咯唆甲酸第三 © 了酯可藉由㈣方法製帛，其並非單獨對映異構體合成之 理想十間物，因為其在維蒂希反應期間容易外消旋化。因 此，設計出一種新合成途徑，即特徵為立體化學保真度之 合成途徑。 可根據以下方法，使用市售起始物質及試劑來製備該 等化合物。

可如流程3中所述，經由（R)_3_乙烯基吡咯啶I曱酸第 二丁酯（化合物9)與3-溴-5·(四氫丑·哌喃-4-基氧基）-吡 啶（化合物U)的鈀催化之偶合製備（r)_3_((e)_2(吡咯啶 -3-基）乙烯基）-5-(四氫哌喃·4_基氧基）„比啶。 以甲烷磺酿氣處理市 (化合物1 )，獲得 流程1中閣述化合物9之製備。 售（R)-3 -經基〇比疼鳴-ΐ_甲酸第三丁輯 (R)-3-(曱基確醯氧基）η比略咬小甲酸第三了醋（化合物2)， 其接著與丙二酸二乙酯及合適鹼（例如第三丁醇鉀或乙醇 鈉）反應，獲得在手性碳周圍具有反向立體化學之（R)2_ (1-(第三了氧幾基）吼洛咬_3_基）丙二酸二乙醋（化合物3)。 13 201024283

用於此等反應之合適溶劑可選自甲苯、二甲笨、ι_甲美 -2-吡咯啶網、二甲基甲醯胺、二甲基乙酿胺、乙醇、第三 丁醇、四氫呋喃、1，2-二甲氧基乙烷、二聘烷及其混合物之 群。在一具體實例中，用於曱烷磺酸酯形成之溶劑為甲苯， 且用於丙二酸酯置換之溶劑為丨_甲基·2_吡咯啶_。在另一 具體實例中，用於丙二酸酯置換之溶劑為乙醇。用於此等 反應之合適鹼可選自三乙胺、二乙基異丙胺、二異丙基乙 胺、第三丁㈣、納金屬、氫化納、乙醇納、氳化卸及氮 化裡之群。在-具體實射，用㈣形成之驗為 二乙胺，且用於丙二酸酯置換之鹼為第三丁醇鉀。在另一 具體實例中，用於丙二酸酯置換之鹼為乙醇鈉。

以氫氧化鉀水溶液水解二酯3,產生（r)_2_(i•(第三丁氧 羰基）吡咯啶-3-基）丙二酸（化合物4) ’使其脫羧基化，獲 得w-2-(w第三丁氧叛基）„比略咬_3_基）乙酸（化合物5)。 用於此等反應之合適溶劑可選自水、乙醇、四氫呋喃、二 曱基甲醯胺、二甲基乙酿胺、12·二甲氧基乙烷、二聘烷、 1-甲基-2-㈣咬酮、曱苯、二甲亞礙及其混合物之群。在 一具體實例中，用於S旨水解之溶劑為四氫Μ水溶液，且 用於脫羧基作用之溶劑A Κ甲基_2_吡咯啶酮。在另—具體 實例令’肖於醋水解之溶劑4 6醇，且用於脫羧基作用之 溶劑為二甲亞礙與甲苯之現合物。用於水解反應之合適驗 可選自氫氧化鉀、氫氧化納、碳酸鉀、碳酸納、氫氧化鋇 及碳酸铯之群。在一具體實例中，鹼為氫氧化鉀。 還原化合物5,獲得（Κ)·3·(2_羥基乙基）吡咯啶_丨甲酸 14 201024283 第三丁酯（化合物6) ’其可與甲统罐酿氣反應’且接著與 顿化納反應’分別獲得（R)_3_(2_(曱基績酿氧基）乙基）°比哈咬 -1_甲酸第三丁醋（化合物7)及（R)-3-(2-硤乙基）*»比洛咬-1-甲酸第三丁酯（化合物8)。用於還原反應之合適溶劑可選 自四氫呋喃、乙醚、二腭烷、i，2_二甲氧基乙烷及其混合物 之群《在一具體實例中，溶劑為四氫吱喃。合適還原劑可 選自硼烷、二硼烷、硼烷·四氫呋喃複合物、硼烷-二甲基醚 複合物及硼烷-二甲基硫醚複合物之群。

❹ 用於甲烷續酸酯形成之合適溶劑可選自甲苯、二甲 苯、乙醚、四氫呋喃、1，2-二甲氧基乙烷、二聘烷及其混合 物之群。在一具體實例中，用於甲烷磺酸酯形成之溶劑為 甲苯。用於甲烷磺酸酯形成之合適鹼可選自三乙胺、二乙 基異丙胺及二異丙基乙胺之群。在一具體實例中，用於甲 烷磺酸酯形成之鹼為三乙胺。用於碘置換之合適溶劑可選 自1-甲基-2-吡咯啶酮、二甲基曱醯胺、二甲基乙醯胺、乙 醇、第三丁醇、四氫呋喃、L2-二甲氧基乙烷、二聘烷、二 曱亞颯及其混合物之群ϋ體實例中，用於峨置換之 溶劑為1,2-二甲氧基乙烷。 、 最終，以第三丁醇鉀處理化合物8，獲得化合物 ▼ v 双’nj η 於此反應之合適溶劑可選自12· ， 〒氧基乙烧、1-甲基2 吡咯啶酮、二甲基甲醯胺、二甲 . nDO 基乙醯胺、乙醇、四氫0夫 喃、一te烷及其混合物之群。在— - p m 具體實例中，溶劑為丨，2_ 此反應之合適驗可選自第三丁醇钾、 乙醇鈉及二氮二環十一烷之群鉀 ^力一具體實例中，驗為 15 201024283 第三丁醇鉀。 及上文論述 本發明之一具體實例係關於使用如流程 中所述之反應步驟來製備化合物9

流程1 9

流程2 T閣述3-漠·5·(四氫j依哌 (化合物12)之製備。3_溴·5_羥基吡啶（_、基氧基）_吡 經基四氫-2//-哌喃（化合物1：1)偶入 0物10)與 於偶合之合適條件包括在惰性溶劑中使|件化合物12。

與偶氮化合物（例如偶氮二甲酸二 膦（例如三苯助 ~' 知，亦稱為DEAD ) 實現偶合（例如甲苯）之條件。或者，可採用其他條件 其中3-溴-5-羥基吡啶之側氧基陰離子自四氫哌喃之4位 換離去基。 本發明之一具體實例係關於使用如流程2及上文所述 之反應步驟來製備化合物12之方法。 16 201024283

ΓΥ

11

OH

Br 12 流程2 流程3中說明製備（R)-3-((E)-2-(吡咯啶-3-基）乙烯 基）-5-(四氫哌喃-4-基氧基）*比啶（自由鹼形式）的最終步 驟。化合物9與12經由乙酸鈀介導之偶合反應偶合，獲得

G (R)-(E)-3-(2-(5-(四氫- 2H-派喃-4-基氧基）n比咬_3·基）乙稀基） 吡咯啶-1-甲酸第三丁酯（亦稱為（R)_5_(1_(第三丁氧羰 基）-(E)-2-(n比咯啶-3-基）乙烯基）·5_(四氫哌喃_心基氧基）〇比 啶，化合物13)，使其脫除保護基，獲得（R)_3_((E)_2_(吡 咯啶-3-基）乙烯基）_5_(四氫哌喃基氧基）吡啶（化合物 ❹ 14)。用於鈀催化之偶合反應的合適溶劑可選自卜甲基_2_ 吡咯啶酮、二甲基甲醯胺、二甲基乙醯胺及乙腈之群。在 -具體實财，溶㈣丨_甲基_2__㈣1独催化之 偶合反應的合適驗可選自三乙胺、二乙基異丙胺、二異丙 基乙胺之群。在-具體實例中，驗為二異丙基乙胺。用於 鈀催化之偶合反應的合適膦配位體可選自三·正丁基膦、三_ 第三丁基膦、三環己基膦、三苯膦及三，甲苯基狀群一。 在一具體實例中’膦配位趙為三環己基膦。用於把催化之 偶合反應的合適㈣化劑可選自乙料、氣^及參（二苯 甲基㈣）二把之群。在—具體實例中，催化劑為乙酸把。 用於脫除保護基反應之合適溶劑可 迎合削1選自水、二氣甲烷、氯 仿及二氣乙燒之群。在一具體實例中，溶劑為二氣甲烧。 17 201024283 遵賤 在另一具體實例中，用於脫除保護基反應之溶劑為水 用於脫除保護基反應之合適酸可選自三氟乙酸、 及硫酸之群。在一具體實例中，酸為三氟乙酸。

流程3 本發明之一具體實例係關於使用如上文流程丨'2及 . 中所述之反應步驟來製備化合物14的方法。本發明進〜3 係關於製備鹽形式之（R)-3-((E)-2-(吡嘻咬_3其 步 基）-5-(四氫哌喃-4-基氧基）吡啶蘋果酸鹽的方法，其包入 自由驗與L-韻果酸在2-丙醇與乙酸異丙酯之混合物或如^ 文所述之其他合適溶劑中反應的額外步驟。 ❹ 本發明之另一具體實例係關於化合物14之乙二酸遵的 形成’及乙一酸鹽作為純化中間物在化合物14的製造中之 用途。化合物9與12的鈀催化之偶合產生主要為化合物 (典型地表示75-80%之偶合產物）之材料混合物。其餘偶 合產物包括相應之Z異構體（R)-(Z)K2-(5 —(四氫_2H-哌喃 -4-基氧基）*比咬-3-基）乙浠基）η比洛咬_ι_曱酸第三丁醋，及所 謂的「外」異構體（R)-3-(l-(5-(四氫-2Η-娘淹·4_基氧基）《>比咬 18 201024283 -3-基）乙埽基）吼㈣小f酸第三丁醋，典型地分別表示約 5%及高it 20%之偶合產物。脫除異構體混合物之保護基， 隨後將自由驗轉化為乙二酸鹽，藉此出乎意料地且便=地 自主要的所要異構體移除此等次要異構體。乙二酸鹽在水 /2-丙醇混合物中初始沈澱，例如獲得化合物，其中異構 體雜質各自或較佳降低至<1%。可藉由再結晶實現進一步純 化0 經適於各種診斷用途之放射性同位素標記之本發明化 ❹合物的實例為例如化合物14之"C或】8f標記之類似物， 其將適用於正電子發射斷層攝影法。 ㈣另外說丨本文料之結構亦意欲包括僅在 • 存在一或多種同位素富集原子方面有所不同之化合物。舉 例而言，具有本發明結構但以氘或氚置換氫原子，或以1Sc 或14c置換碳原子，或以15N置換氮原子，或以丨7〇或ls〇 置換氧原子的化合物在本發明範疇内。該等同位素標記之 化合物適用作研究或診斷工具。 在下文所述之所有實施例中，必要時，根據合成化學 之一般原則對敏感性或反應性基團採用保護基。根據標準 有機合成法操縱保護基（T. W. Green及p. G. M. Wuts，

Protecting Groups in Organic Synthesis, ^ 3 M, John Wiley & Sons，New York (1999))。在化合物合成的適宜階段，使 用熟習此項技術者顯而易見之方法移除此等基團。方法以 及反應條件及其執行順序之選擇應與本發明化合物之製備 一致0 19 201024283 本發明亦提供合成適用作中間物之新穎化合物的方 法，該等化合物諸如（R)_2_(1_(第z 丁氧幾基）対咬_3基） 丙二酸二乙醋（化合物3)、叫2_(1_(第三丁氧幾基二 咬-3-基）丙二酸（化合物4)、（叫仰基乙基）吼略朴 甲酸第三丁醋（化合物6)及（幻_3 (2破乙基）吼略咬_卜甲 酸第二丁醋（化合物8)。 鹽形式

本發明之一態樣係關於（Ιι)_3_((Ε)_2·(β比咯啶_3基）乙 烯基）-5-(四氫哌喃_4_基氧基）咄啶的新穎鹽形式。呈自^鹼 形式之（R)_3·(⑻钟比哈咬_3_基）乙烤基）_5 (四氣嗓喃·4_ 基氧基）吡啶為水溶性有限之黏稠油狀物。然而，自由鹼可 與無機酸及有機酸反應來製備酸加成鹽，該等鹽具有有利 於製備醫藥組成物之物理特性，諸如結晶性、水溶性及針 對化學降解之穩定性。 〇 本發明係關於（R)-3-((E)-2_(吼咯啶·3_基）乙烯基）·5_ (四氫娘喃·4_基氧基）（狀醫藥上可接受之鹽。合適之醫藥 上可接受之鹽的實例包括無機酸加成鹽，諸如氣化物、溴 化物、硫酸鹽、磷酸鹽及硝酸鹽；有機酸加成鹽，諸如乙 酸鹽、半乳糖二酸鹽、丙酸鹽、琥始酸鹽、乳酸鹽、羥乙 酸鹽、蘋果酸鹽、酒石酸鹽、檸檬酸鹽”頃丁烯二酸鹽、 反丁稀二酸鹽、甲统輕鹽、冑f苯續酸鹽及抗冑血酸鹽； 與酸性胺&酸形成之鹽’冑如天冬胺酸鹽及麩胺酸鹽，·鹼 金屬鹽，諸如納鹽及_鹽；驗土金屬鹽，諸如鎮鹽及釣鹽； 銨鹽；有機鹼鹽，諸如三甲胺鹽、三乙胺鹽、吡啶鹽、甲 20 201024283 基°比咬鹽、二環己胺鹽及n，n,_二苯甲基乙二胺鹽；及與臉 性胺基酸形成之鹽，諸如離胺酸鹽及精胺酸鹽。在一些狀 況下，該等鹽可為水合物或諸如乙醇溶劑合物之溶劑合物。 本發明之一具體實例係關於（R)-3-((E)-2-(吼咯啶-3-基） 乙烯基)-5-(四氫哌靖_4_基氧基)吡啶的酸加成鹽，其中酸係 選自鹽酸、甲㈣酸、順丁稀二酸、鱗酸、t•經基_2_寮甲 酸丙-冑L-酒石酸、反丁婦二酸、棒樣酸、^類果酸、

R杏仁酸S-杏仁酸、琥拍酸、4_乙酿胺基苯甲酸、己二酸、 半乳糖一酸、一-對甲苯曱醯基_D_酒石酸、乙二酸、D_葡糠 酸酸、4_經基苯甲酸、4·甲氧基苯甲酸、⑽料10_樟腦續 酸、，⑽，3SH+)·樟腦酸及對f苯錢。本發明亦包括此等 鹽形式之水合物及溶劑合物。 本發明所包含之鹽的化學計算量可變化。舉例而言， 典型地，酸與（R)_3-(⑻_2十比洛咬_3基）乙埽基）_5_(四氫派 喃-4-基氧基)吡啶之莫耳比為1:2或1:卜但諸如3:1、】3、 2·3以及2:1之其他比率亦為可能的且同樣包括於本發明 定’該等鹽可具有包藏 構。因此’該等鹽可以 -基）乙稀基）_5_(四氣〇辰 所不同之水合物及其他 視形成本文所述之鹽的方式而 鹽形成期間所存在之溶劑的結晶結 溶劑相對於（R)-3-((E)-2-(吼咯啶_3 喃·4-基氧基比啶的化學計算量有 溶劑合物形式存在。 1本發m體實财1具錢：(R)_3_(⑻外比 基）乙婦基）-5-(四氫娘κ基氧基）〇比$為1:2之化 21 201024283 學計算量。在另一具體實例中，鹽具有酸：（R)3_((E)_2_(e|t 咯啶-3-基）乙烯基）-5-(四氫哌喃·4_基氧基）吡啶為1:1之化 學計算量。 本發明之另一具體實例係關於（R)_3_((E)_2_(e比咯啶_3_ 基）乙烯基）-5-(四氫哌喃·4_基氧基）吼啶單_L_蘋果酸鹽，或 其水合物或溶劑合物β 本發明之另一具體實例係關於（R)_3_((E)_2_(n比咯啶-3-基）乙稀基）-5-(四氫痕喃_4_基氧基”比啶半-半乳糖二酸鹽， 或其水合物或溶劑合物。 本發明之另一具體實例係關於（R)-3-((E)-2-(吡咯啶-3-基）乙烯基）-5-(四氫哌喃_4-基氡基）吡啶乙二酸鹽，或其水合 物或溶劑合物。 本發明之另一具體實例係關於（R)-3-((E)-2-(吡咯啶-3-基）乙稀基）-5-(四氫旅鳴-4-基氧基）0比咬二-對甲苯甲酿基 -D-酒石酸鹽’或其水合物或溶劑合物。 本發明之一具體實例係關於以下的（R)-3-((E)-2-(吼洛 咬-3-基）乙烯基）_5_(四氫哌喃_4_基氧基）吡啶鹽； 4·乙醢胺基苯甲酸 己二酸 _〇R,3S)-(+)-^g^^__ (1S)-(+)-i〇_樟腦磺酸 檸檬酸 _反丁稀二酸 ' *--------------—--- ~ ~ D·葡糖醛酸 201024283

1_窥基萘甲酸（Xinafoic) 順丁烯二酸

L-無果酸 丙二酸 (R) -杏仁酸 (S) -杏仁酸 甲烷磺酸 4-甲氧基笨甲酸 碟酸 琥珀酸 L -酒石酸

f 曱苯/5^j^1H20_ 或其水合物或溶劑合物 本發月之另一態樣係關於製備該等 可藉由在控制條件下結晶而獲得。 該等鹽 本發明亦係關於製備（R)-3侧_2十比_ _3基）乙稀 基）-5-(四氫哌喃·4_基氧基）吡啶鹽形式之方法，其包含以下 步驟： 、 (i)將自由鹼或實質上純（R)_3_((E)-2_(吡咯啶_3基） 乙烯基）-5-(四氫锒喃-4-基氧基比咬之自由驗於合適溶劑 中之溶液與上文所提及之任何純形式的酸或任何酸於合適 溶劑中之溶液（典型地，0.5至1當量之酸）混合； (ii ) (a)必要時，冷卻所得鹽溶液以引起沈殿，或 23 201024283 (11 ) (b)添加合適反溶 r ；： w _ ^ 阳U引起沈澱，或 (Ο (c)蒸發溶劑且 或步驟（ii) (b);及 新各劑，且重複步驟（ϋ) (a) 溶劑混合物、溶質濃度及溫度 (Ui)過濾且收集鹽 所採用之化學計算量 可有所改變。 可用於製備或再結晶鹽 限於）乙醇、甲醇、_、2_ ^表性溶劑包括（但不 ❹ 酸乙醋、曱苯、水、二 =、乙酸異丙醋，、乙 基甲基Μ , Ψ基乙基_、甲基異丁基酮、第三了 丞甲基醚、四氫呋喃、二氣 乳f坑、正庚烷及乙腈。 在一具體實例中，溶劑伤课 削係選自乙醇、丙醇、乙酸異两 6曰、水、己烷或其混合物，且 且用於沈澱之溫度介於16。(：应 2 5 C之間。 在一具體實例中，酸為l遽盅 敗馮L-蘋果酸，且所用溶劑為單獨 或與乙酸異丙g旨組合伟玥夕1 曰上。使用之2-丙醇。在另一具體實例中， 酸為乙二酸，且所用溶劑為2-丙醇水溶液。

在另一具體實例中，鹽為（R)_3_((E)2·(吡咯啶_3基）乙 烯基）-5-(四氫哌喃·4_基氧基比啶單_L蘋果酸鹽或半半乳 糖二酸鹽或乙二酸鹽或二-對甲笨甲醯基_D酒石酸鹽。 所得鹽之穩定性可以多種方式加以證實。可藉由動態 蒸軋吸附分析（dynamic vapor sorption，DVS )來評估獲得 及釋放大氣水分之傾向。 處理方法 (R)-3-((E)-2十比略咬_3_基）乙稀基）_5_(四氫π辰喃_4·基 24 201024283 氧基）吡啶、或其醫藥上可接受之鹽、或包含該等化合物之 醫藥組成物可用於預防或治療已提出或展示其他類型之煙 鹼化合物適用作治療劑之各種病狀或病症，諸如CNS病 症、發炎、與細菌及/或病毒感染有關之發炎性反應、疼痛、 代謝症候群、自體免疫病症或本文進一步詳細描述之其他 病症。該等化合物亦可用作受體結合研究（試管内及活體 内）中之診斷劑。該等治療及其他教示例如描述於本文先

參 前所列之參考案中，包括Williams等人，iVevvs 7(4): 205 (1994) ; Arneric 等人，1(1): 1-26 (1995) (1996) (1996) (1996) (1999) j^avand

Arneric 等人，/«ve". Drwgs· 5(1): 79-100 Bencherif 等人，X P/zarmaco/· TTier. 279: 1413

Lippiello ^ A , /. Pharmacol. Exp. Ther. 279: 1422 Damaj 等人，·/· PAar/waco/.五TTier. 291: 390 Chiari 等人，JwesiAeWo/ogy 91: 1447 (1999); homme and Eisenbach, Anesthesiology 91: 1455

(1999); Holladay 等人，乂 Med. CAem. 40(28): 4169-94 (1997) ； Bannon 等人，Science 279: 77 (1998) ； PCT WO 94/08992 ; PCT WO 96/31475 ; PCT WO 96/40682 ;及 Bencherif等人之美國專利第5,583,140號、Dull等人之美 國專利第5,597,919號、Smith等人之美國專利第5,604,231 號及Cosford等人之美國專利第5,852,041號。 本發明之一具體實例係關於（R)-3-((E)-2-(吡咯啶-3-基） 匕烯基）-5-(四氫哌喃-4-基氧基）吡啶或其醫藥上可接受之 蘇在藥物製造中之用途。 25 201024283 本發明之另-具體實㈣ 基）乙烯基）-5-(四氫哌 （比咯啶-3- 基氧基）吡啶單-L-蘋果酸鹽或半 _半乳糖二酸鹽或乙二酸_ 盟次平 之用途，其係用作藥物。對甲苯甲醯基①-酒石酸鹽 體實㈣關於治療或預防中樞神經系統 > 立 ，'包含向需要治療之哺乳動物投予治 療有效量之（ΐυ-3-((Ε)·2_(吡洛 4又予，口 ..^ w . ^ 啶·3-基）乙烯基）-5-(四氫哌 鳴-4-基氧基）》比咬或其醫藥上 接又之鹽，或单-L -頻果酸镑 或半-半乳糖二酸鹽或乙-+ 顶木歟鹽 〇 飞乙一酸鹽或二_對甲苯f醯基_d酒石 酸鹽。更具體言之，病症可選自 自由CNS病症、發炎、與細 菌及/或病毒感染有關之發炎性 天性反應、疼痛、代謝症候群、 自體免疫病症或本文進—舟μ A ^ ^步洋細描述之其他病症組成之 群。 、

Q 本發明之-具趙實例係關於醫藥組成物，其包含治療 有效量之（R)-3-((E)·2十比咯咬·3·基）乙烯基^ (凹氫哌嘀 -4-基氧基）》比淀或其t藥上可接受之鹽，或其單心蘋果酸骚 或半-半乳糖二酸鹽或乙二酸鹽或二_對曱笨甲醯基_D_酒石 睃鹽，及-或多種醫藥上可接受之載劑、稀釋劑、賦形 或佐劑。 本發明之一具體實例係關於本發明之醫藥組成物之用 途’其係用於製造用以治療CNS病症之藥物。 本發明之另一具體實例係關於（R)_3_((E)_2_(吡咯咬·3、 基）乙烯基）-5-(四氫娘喃-4-基氧基”比啶或其醫藥上可接受 之鹽' 或其單-L-蘋果睃鹽或半-半乳糖二酸鹽或乙二酸鹽或 26 201024283 對甲苯甲醯基_D，石酸鹽之用途，其係用於製造用以治 療或預防NNR介導之病症的藥物。 發月之$ I體實例係關於藉由投予（R)-3-((E)-2_ =嘻咬,基）乙烯基）_5 (四氫派鳴_4_基氧基）他咬或其醫 、可接又之鹽、或其單_L_蘋果酸鹽或半-半乳糖二酸鹽或 乙二酸鹽或二-對甲笼 本甲醯基-D-酒石酸鹽在有需要之個體 中調節NNR之方法。 CNS病症 ❹

G (()((E)2(比嘻唆_3_基）乙烯基）_5_(四氫派嗔冰基 氧基）吼咳或其醫藥上可接受之鹽，或其單_L_蘋果酸鹽或半 •半乳糖二酸鹽或乙二酸鹽或二_對甲苯甲醯基_ D _酒石酸 鹽，或包含該等化合物之醫藥組成物適用於治療或預防多 種CNS冑纟’包括神經退化性病症、神經精神異常 (neUr〇psychiatric disorder)、神經病症及成癮。該等化合 物及其醫藥組成物可用於治療或預防與年齡或其他方面有 關之認知缺乏及功能障礙；注意力障礙及癡呆包括由感 染物或代謝紊亂引起者；提供神經保護；治療痙攣及多發 性腦梗塞；治療情感障礙、強迫症及成瘾行為；提供止痛； 控制諸如由細胞因子及核因子/cB介導之發炎；治療發炎性 病症；提供疼痛緩解；及治療感染，如用於治療細菌、真 菌及病毒感染之抗感染劑。在可使用本發明化合物及醫藥 組成物治療或預防之病症、疾病及病狀中，包括年齡相關 之記憶障礙（AAMI)、輕度認知障礙（MCI)、年齡相關 之認知功能減退（ARCD )、初老期癡呆、早期發作之阿兹 27 201024283 海默氏病、老年癡呆症、阿茲海默型癡呆、阿茲海默氏病、 非癌呆性認知障礙（CIND ) '路易艘性礙呆（Lewy body dementia )、HIV 癡呆、AIDS 癡呆複合症（AIDS dementia complex)、血管型癡呆、唐氏症候群（Down syndrome)、 頭部創傷、創傷性腦損傷（TBI )、拳擊員癡呆、庫雅氏症 及普利旺病（Creutzfeld-Jacob Disease and prion disease )、 中風、缺血、注意力不足症、注意力不足過動症、閱讀障 礙、精神分裂症、類精神分裂症精神障礙（schizophreniform disorder )、分裂情感性精神障礙（schizoaffective Ο disorder )、精神分裂症中之認知功能障礙、精神分裂症中 之認知缺乏、包括帕金森氏病（parkinson's disease)、腦 炎後帕金森氏症、關島型帕金森氏症-癡呆 (parkinsonism-dementia of Gaum)、帕金森型額顳葉型癡 呆（frontotemporal dementia Parkinson, s Type，FTDP)之 帕金森氏症、皮克病（Pick’s disease )、尼曼-皮克病 (Niemann-Pick’s Disease )、亨廷頓氏病（Huntington’s Disease)、亨廷頓氏舞蹈病（Huntington’s chorea)、遲發 〇 性運動困難、運動增強、進行性核上麻痹、進行性核上輕 癱、腿不寧症候群、庫雅氏症、多發性硬化症、肌萎縮性 側索硬化（ALS )、運動神經元疾病（MND )、多系統萎縮 (multiple system atrophy，MSA )、皮質基底核退化症、 格巴二氏症候群（Guillain-Barr0 Syndrome，GBS)及慢性 發炎性脫髄勒多發性神經病（chronic infiammat〇ry demyelinating p〇lyneuropathy，CIDP)、癲癇症、自體顯性 28 201024283 遺傳性夜間發作之刚葉痛癇（aut0S0inal dominant nocturnal frontal lobe epilepsy )、躁症、焦慮、抑鬱症、經前焦慮症 (premenstrual dysphoria )、恐慌症、貪食症、厭食症、發 作性睡病、過度日間睡眠（excessive daytime sleepiness )、 雙極症、廣泛性焦慮症（generalized anxiety disorder )、強 迫症（obsessive compulsive disorder )、暴怒（rage outburst )、對立違抗性障礙（oppositional defiant disorder)、妥瑞症候群（Tourette’s syndrome )、自閉症、 ® 藥物及酒精成瘾、煙草成瘾及飲食障礙。 認知障礙或功能障礙可與以下病症有關：精神病症或 病狀，諸如精神分裂症及其他精神障礙，包括（但不限於） 精神障礙、類精神分裂症精神障礙、分裂情感性精神障礙、 妄想症、短期性精神障礙、共有型精神障礙及由一般醫學 病狀引起之精神障礙；癡呆及其他認知病症，包括（但不 限於）輕度認知障礙、初老期癡呆、阿茲海默氏病、老年 癡呆、阿茲海默型癡呆、年齡相關之記憶障礙、路易體性 癡呆、血管型癡呆、AIDS癡呆複合症、閱讀障礙、包括帕 金森氏病、帕金森氏病之認知障礙及癡呆之帕金森氏症、 多發性硬化之認知障礙、創傷性腦損傷引起之認知障礙、 其他一般醫學病狀引起之癡呆；焦慮症，包括（但不限於） 無畏瞻症之恐慌症、有畏瞒症之恐慌症、無恐慌症病史之 畏曠症、特定恐懼症、社交恐懼症、強迫症、創傷後壓力 症、急性壓力症、廣泛性焦慮症及一般醫學病狀引起之廣 泛性焦慮症；情感障礙’包括（但不限於）重度抑繫症、 29 201024283 輕度抑鬱症（dysthymic disorder )、雙極型抑繫症、雙極型 躁症、I型雙極症、與狂躁有關之抑鬱症、抑鬱性或混合性 發作、π型雙極症、循環情感性精神障礙（cyel()thymie disorder )及由一般醫學病狀引起之情感障礙；睡眠障礙（包 括（但不限於）睡眠異常、原發性失眠、原發性睡眠過度、 發作性睡病、深眠狀態病症（parasomnia disorder )、夢魔 症、睡眠驚恐病症（sleep terror disorder )及夢遊症；智力 遲鈍（mental retardation )、學習障礙、運動技能病症、溝 通障礙、廣泛性發展障礙、注意力不足及分裂性行為異常、 注意力不足症 '注意 '力不足過動症、嬰幼兒、兒童或成人 餵養與飲食異常、抽動性病症、排泄性病症、物質相關病 症（包括（但不限於）物質依賴、物質濫用、物質中毒、 物質戒斷（substance withdrawal )、酒精相關病症、安非他 命（amphetamine )或安非他命樣相關病症、咖啡因相關病 症（caffeine-related disorder )、大麻相關病症 (cannabis-related disorder )、古柯鹼相關病症 (cocaine-related disorder )、迷幻藥相關病症、吸入相關 病症、煙鹼相關病症、類鴉片相關病症、苯環己哌啶或苯 環己哌啶樣相關病症），及鎮痛、安眠或抗焦慮相關病症、 人格障礙（包括（但不限於）強迫性人格障礙及衝動控制 病症）^ 上文之病狀及病症例如在 American Psychiatric Association: Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders,第 4 版，Text Revision, Washington, DC, 201024283

American Psychiatric Association，2000 中進一步詳細論 述。此手冊亦可更詳細提及與物質使用、濫用及依賴有關 之症狀及診斷特徵。

一具體實例係關於在有需要之個體中治療或預防cNS 病症之方法，其包含向該個體投予（（r)_3 ((e) 2 (吡咯啶％ 基）乙烯基）-5-(四氫哌喃_4_基氧基）吡啶、或其醫藥上可接受 之鹽、或其單-L-蘋果酸鹽或半_半乳糖二酸鹽或乙二酸鹽或 一-對甲苯曱醯基酒石酸鹽，或包含該等化合物之醫藥組 〇 成物。 ’ 在另一具體實例中，CNS病症係選自精神分裂症之認 知功能障礙（CDS )、阿茲海默氏病（AD )、注意力不足 症（ADD )、初老期癡呆（阿茲海默氏病早期發作）、阿 兹海默型癡呆、輕度認知障礙、年齡相關之記憶障礙及注 意力不足過動症（ADHD )。在一具體實例中，CNS病症係 選自記憶改善及學習改善。 發炎 已知主要藉由迷走神經起作用之神經系統藉由抑制巨 噬細胞腫瘤壞死因子（TNF)的釋放來調節先天免疫反應之 量值。此生理學機制被稱為「膽驗激導性消炎路徑」（例 如參看 Tracey，「The inflammatory reflex,」Nature 42Q·· 853-9 (2002))。過度發炎及腫瘤壞死因子合成使得多種疾 病發病’且甚至引起死亡。此等疾病包括（但不限於）内 毒血症、類風濕性關節炎、骨關節炎、牛皮癬、哮喘、動 脈粥樣硬化、特發性肺纖維化及發炎性腸病。 31 201024283 可藉由投予本文所述之化合物治療或預防之發炎性病 狀包括（但不限於）慢性及急性發炎、牛皮癬、内毒血症、 痛風、急性假性痛風、急性痛風性關節炎、關節炎、類風 濕性關節炎、骨關節炎、同種異體移植排斥反應（allograft rejection)、慢性抑制排斥、哮喘、動脈粥樣硬化、單核性 吞噬細胞依賴性肺損傷、特發性肺纖維化、異位性皮炎、

慢性阻塞性肺病、成人呼·吸窘迫症候群、鐮狀細胞疾病中 之急性胸腔症候群、發炎性腸病、克羅恩氏病、潰瘍性結 腸炎、急性膽管炎、口瘡性口炎、結腸袋炎（p〇uchitis ) 、 Q 絲球體腎炎、狼瘡腎炎、血栓形成及移植物抗宿主反應。 舆細菌及/或病毒感染有關之發炎性反應 許多細菌及/或病毒感染與毒素形成所引起之副作用及 身體對細菌或病毒及/或毒素的天然反應有關。如上文所 述，身體對感染之反應通常涉及產生大量TNF及/或其他細 胞因子。此等細胞因子之過度表現可導致重大損傷，諸如 敗血性休克（當細菌為膿毒時）、内毒素休克、尿膿毒症、 病毒性肺炎及毒素休克症候群。 〇 細胞因子表現係由NNR介導，且可能藉由投予此等受 禮之促效劑或部分促效劑加以抑制。因此，可使用本文所 述為此等受體之促效劑或部分促效劑的化合物，從而使與 菌感染以及病毒及真菌▲染有目之發炎性反應減至最 少。該等細菌感染之實例包括炭疽、肉毒症及敗血症。此 等化合物中有一些亦可能具有抗微生物特性。 發月化。物亦可作為與現有療法組合之輔助療法用 32 201024283 ;處*細菌病毒及真菌感染’諸如抗生素、抗病毒劑及 抗真菌劑。亦可使用抗毒素來結合感染物所產生之毒素且 使所”、σ合之毒素通過身體而不產生發炎性反應。抗毒素之 實η揭示於例如Bundie等人之美國專利第⑷號 中其他有效針對細菌及其他毒素之藥劑亦可為有效的， 且其治療作用可藉由共投予本文所述之化合物進行補充。 疼痛 可投予該等化合物來治療及/或預防疼痛，包括急性、 神經性、發炎性、神經病性及慢性疼痛。可在如美國公開 專利申請案第20〇1〇〇56084 A1號（AUgeier等人）中所述 進行之持續性發炎性疼痛及神經痛模型中證實本文所述化 口物之鎮痛活性（例如，|炎性疼痛之完全弗氏佐劑大鼠 模型（complete Freund’s adjuvant rat model)之機械性痛覺 過敏，及神經痛之小鼠部分坐骨神經結紮模型中之機械性 痛覺過敏）。 ❺ 鎮痛作用適於治療各種起因或病源之疼痛，尤其適於 治療發炎性疼痛及相關之痛覺過敏、神經痛及相關之痛覺 過敏、慢性疼痛（例如，嚴重慢性疼痛、術後疼痛，及與 包括癌症、絞痛症、腎絞痛或膽絞痛、月經痛、偏頭痛及 痛風在内之各種病狀有關之疼痛）。發炎性疼痛可具有不 同起源，包括關節炎及類風濕性疾病、腱稍炎及灰管炎。 神經痛包括三叉神經痛或疱疹後神經痛、神經病、糖尿病 性神經痛、灼痛、下背痛及去神經傳入症候群（諸如臂叢 撕裂（brachial plexus avulsion ))。 33 201024283 一具趙實例係關於在有需要之個體中治療疼痛之方 法’其包含向該個體投予（(R)_3_((E)_2-(呲咯啶_3_基）乙烯 基）-5-(四氫哌喃-4-基氧基）吡啶、或其醫藥上可接受之鹽、 或其單-L_蘋果酸鹽或半-半乳糖二酸鹽或乙二酸鹽或二-對 甲苯甲醯基-D-酒石酸鹽’或包含該等化合物之醫藥組成物。 其他病症 除了治療CNS病症、發炎及疼痛之外，本發明化合物 亦可用於預防或治療NNR起作用之某些其他病狀、疾病及 病症。實例包括自體免疫病症，諸如狼瘡、與細胞因子釋 0 放有關之病症、感染繼發之惡病質（例如，如發生於aids、 AIDS相關複合症及贅瘤形成中）、肥胖症、類天疱瘡 (pemphitis )、尿失禁、視網膜疾病、傳染病、肌無力、 肌無力症候群（Eaton-Lambert syndrome )、肌張力障礙、 尚血壓、骨質疏鬆症、血管收縮、血管舒張、心律不整、工 型糖尿病、II型糖尿病、潰瘍、貪食症、厭食症、便秘及 腹瀉，以及公開PCT申請案wo 98/25619中所述之彼等適 應症。亦可投予本發明化合物來治療痙攣（諸如為癲癇症 ◎ 狀之痙攣），及治療諸如梅毒及庫雅氏症之病狀。 診斷用途 本發明之另一具體實例係關於可用作診斷劑及用於如 本文所述之受體結合研究之化合物。 尤其，當該等化合物經改質包括適當標記時，其可用 於諸如探針之診斷組成物中。探針可用於例如測定特異性 受體（尤其受體亞型）之相對數目及/或功能。為此， 34 201024283 本發明化合物最佳經諸如"C、18f、76Br、丨巧或i25j之放 射性同位素部分標記。 本發明之一具體實例係關於（(R)_3_((E) 2 (吡咯啶-3· 基）乙烯基）-5-(四氫哌喃_4_基氧基）吼啶，或其醫藥上可接受 之鹽、或其單-L-蘋果酸鹽或半_半乳糖二酸鹽或乙二酸鹽或 3二-對$甲苯曱醯基-D-酒石酸鹽，其中i至3個原子代表選自 H、F及3C之可偵測同位素或其中一個原子為選自ΐ8ρ、 UC及14C之可偵測同位素。 ® 可使用已知適用於所用標記之偵測方法來偵測所投予 之化〇物。偵測方法之實例為閃爍計數、正電子發射斷層 掃描（position emission topography，PET)、單光子放射 電腦斷層攝影法（single_ph〇t〇n emissi〇n c〇mputed tomography ’ SPECT)、r成像、磁共振成像（MRI)或磁 共振光4法（MRS )。上文所述之放射性標記適用於pET (例如 UC、18F 或 76Βγ)及 SPECT (例如！23l)成像，nc @ 半衰期為約20.4分鐘，i8F半衰期為約1〇9分鐘，半衰 期為約13小時且76Br半衰期為約16小時。需要高比活性 在非飽和？農度下觀察所選受體亞型。所投予之劑量典型地 為低劑量且提供高對比影像。以熟習放射性標記成像技術 者已知之方式進行劑量測定。該等化合物可在併有其他成 伤（諸如適用於調配診斷組成物之彼等類型之成份）之組 成物中投予。適用於進行本發明之化合物最佳以高純度形 式使用。在向個體（例如人類個體）投予化合物之後，該 化合物在個體中之存在可藉由適當技術成像及定量，以表 35 201024283 明所選NNR亞型之存在、量及官能。除了人類之外，該等 化合物亦可向諸如小鼠、大鼠、馬犬及猴之動物投予。 可使用任何適當技術及設備進行SPECT及PET成像。經放 射性標s己之化合物以高親和力結合選擇性NNR亞型（例如 a4yS2)，且較佳展示與其他煙鹼膽鹼激導性受體亞型（例 如，與肌肉及神經節有關之彼等受體亞型）的非特異性結 合可忽略。同樣，該等化合物可用作使煙鹼膽鹼激導性受 體亞型在個體體内非侵襲性成像，尤其在腦中用於與多種 CNS疾病及病症有關的診斷之試劑。 ❹

在一態樣中’診斷組成物可用於在諸如人類患者之個 體中診斷疾病之方法。該方法涉及向彼患者投予如本文所 述經可偵測標記之化合物，且偵測彼化合物與所選nnr亞 型（例如α4召2受體亞型）之結合。使用諸如pET及spEcT 之^斷工具的熟習此項技術者可使用本文所述經放射性標 記之化合物來診斷多種病狀及病症，包括與中樞及自主神 經系統功能障礙有關之病狀及病症。該等病症包括多種CNS 疾病及病症，諸如阿茲海默氏病、帕金森氏病及精神分裂 〇 症或本文所提及之任何病症。 受艘結合 本發明化合物可在針對結合NNR亞型（尤其2受 體亞型）之化合物的結合檢定中用作參考配位體。為此， 本發明化合物較佳經諸如3Η或之放射性同位素部分標 記。下文中詳細描述該等結合檢定之實例。 醫藥组成物 36 201024283 在一態樣中’本發明係關於包含本發明化合物及一或 多種醫藥上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑的醫藥組成 物。本發明之另一態樣提供製備醫藥組成物之方法，其包 括混合本發明化合物與一或多種醫藥上可接受之載劑、稀 釋劑或賦形劑。 本發明化合物之投予方式可發生改變。本發明化合物 較佳經口投予。用於經口投予之較佳醫藥組成物包括錠 劑、膠囊、囊片、糖漿、溶液及懸浮液。本發明之醫藥組 成物可以經改善釋放劑型提供，諸如延時釋放錠劑及膠囊 調配物。 該等醫藥組成物亦可經由注射投予，亦即經靜脈内、 肌肉内、皮下、腹膜内、動脈内、鞘内及腦室内注射。用 於注射之載劑可包括5%右旋糖溶液、生理食鹽水及磷酸鹽 缓衝之生理食鹽水。 該等組成物亦可使用例如直腸投予之其他方式投予。 ⑬該等化合物亦可藉由吸入投予，例如以氣霧劑形式；局部 投予，諸如以洗劑形式；經皮投予，諸如使用經皮貼片（例 如，藉由使用Novartis and Alza公司市售之技術）；藉由 粉末注射投予；或藉由經頰、舌下或鼻内吸收投予。 醫藥組成物可以單位劑型或多劑量或次單位劑型調 配。 本文所述之醫藥組成物的投予可為間歇投予，或以漸 進、連續、怪定或控制速率投予。該等醫藥組成物可向溫 血動物投予，例如哺乳動物，諸如小鼠、大鼠、貓、天竺 37 201024283 鼠'兔、馬、犬、豬、牛或猴；但宜向人類投予。 组合 本發明化合物可用於治療多種病症及病狀，且同樣， 可與適用於治療或預防彼等病症之多種其他治療劑組合使 用。因此’本發明之一具體實例係關於本發明化合物與其 他治療劑的組合投予。舉例而言，本發明化合物可與其他 NNR配位體（諸如伐余克林（vareniciine ))、抗氧化劑（諸 如自由基清除劑）、抗菌劑（諸如青黴素（penicillin )抗 生素）、抗病毒劑（諸如核苷類似物，如齊多夫定 (zidovudine)及無環鳥苷（aCyCi〇vir))、抗凝劑（諸如 殺鼠靈（warfarin))、消炎劑（諸如NSAID)、解熱劑、 鎮痛劑、麻醉劑（諸如手術中所用）、乙醯膽鹼酯酶抑制 劑（諸如多奈哌齊（donepezil )及加蘭他敏（galantamine ))、 抗精神病藥（諸如氟旅唆醇（haloperidol )、氣氮平 (clozapine )、奥氮平（olanzapine )及喧硫平（quetiapine ))、 免疫抑制劑（諸如環抱素（cyclosporin )及曱.胺嗓呤 (methotrexate ))、神經保護劑、類固醇（諸如類固醇激 素）、皮質類固醇（諸如地塞松（dexamethasone )、潑尼 松（predisone)及氫皮質酮（hydrocortisone))、維生素、 礦物、營養藥物、抗抑鬱藥（諸如丙味啡（imipramine )、 氟西( fluoxetine )、帕羅西汀（paroxetine )、依地普蘭 (escitalopram )、舍曲林（sertraline )、文拉法辛 (venlafaxine )及度洛西汀（duloxetine ))、抗焦慮劑（諸 如阿普吐侖（alprazolam )及丁螺環嗣（buspirone ))、抗 201024283 驚厥藥（諸如苯妥英（phenytoin )及加巴喷丁 (gabapentin))、血管擴張劑（諸如哌唑畊（praz〇sin) 及西地那非（sildenafil))、情緒穩定劑（諸如丙戊酸鹽 及阿利拉唑（aripiprazole))、抗癌藥（諸如抗增生劑）、 抗高血壓劑（諸如阿替洛爾（aten〇1〇1)、可樂寧（cl〇nidine)、 胺氣地平（amlopidine )、維拉帕米（verapamn )及奥美沙 坦（〇lmeSartan))、輕填劑、大便軟化劑、利尿劑（諸如 ❹

G 呋喃苯胺酸（furosemide))、解痙藥（諸如雙環胺）、抗 運動障礙劑及抗潰瘍藥（諸如埃索美拉唑（es〇mepraz〇ie)) 組合使用。此類治療劑組合可一起投予或單獨投予，且當 單獨投予時，投予可同時或以任何順序相繼發生。應選擇 化合物或藥劑之量及相對投予時序，以實現所要治療作 用。本發明化合物與其他治療劑之組合投予可藉由伴隨投 予〇)包括兩種化合物之一元醫藥組成物；或各包 括一種化合物之單獨醫藥組成物來組合進行。或者，該組 =以相繼方式單獨投予’其中首先投予—種治療劑轉 著技予另一種治療劑。該相繼投予在時間上可近可遠。 本發明之另一態樣係關於組合療法，其包含向個體投 予治療或預防有效量之本發明化合物，及一或多種其他治 療劑’包括化學治療劑、輕射治療劑、基因治療劑或免2 # ^ t ^ ^ ^ t #J 〇 # m :¾ 免疫 低谢量 (W-3-((E)_2•(料 <_3_基）乙稀基 氧基州其鹽為位於㈣壁中之、腦果之Γ質:： 39 201024283 泵負責將物質自腦中泵出。由於此泵，通常難以使治療有 效量之藥物進入腦中。此通常導致投予高劑量之藥物，該 等藥物在此等高劑量下可能對人體其他部分具有副作用。 儘管（（R)-3-((E)-2-(»比咯啶·3·基）乙烯基）_5_(四氫哌喃 -4-基氧基）吡啶為pGp泵之基質，但其可以低劑量投予同 時具有相對較長之作用持續時間。舉例而言，相較於NNR 的天然促效劑乙醢膽鹼，在試管内檢定中在α4石2處對 ((R)-3-((E)-2-(n比咯啶_3_基）乙烯基）·5_(四氫哌喃_4基氧基） 吡啶之反應為2倍大。 0 本發明之一具體實例係關於醫藥組成物之投予，該醫 藥組成物包含（（R)-3-((E)-2-("比咯啶_3-基）乙烯基）_5-(四氫 0辰喃-4-基氧基）η比啶或其醫藥上可接受之鹽，在某些具體實 例中，包含其單-L-蘋果酸鹽或半-半乳糖二酸鹽或乙二酸鹽 或二-對曱苯甲醯基-D_酒石酸鹽，其量介於每天i至22〇()

Vg之間。在另一具體實例中，該量為每天5〇至15〇〇"g。 在另一具體實例中，該量為每天50至1000#ge在一具體 實例中’該量為每天5〇至5 〇〇Ag。在另一具體實例中該 〇 量為每天75至3OOyg。在另一具體實例中，該量為每天 75至200y g。在另一具體實例中，該量為每天75至15〇 β g。 ((R)-3-((E)-2-(«比咯啶-3-基）乙烯基）_5_(四氫哌續_4_基 氧基）°比啶或其醫藥上可接受之鹽（在某些具體實例中，其 單-L-蘋果酸鹽或半-半乳糖二酸鹽或乙二酸鹽或二對甲苯 曱醯基-D-酒石酸鹽）的劑量可每天一次、兩次或三次投予。 40 201024283 一具體實例係關於每天—次# 人仅于。另一具體實例係關於每 天兩次投予。 本發明之另一具體實例係關於NNR促效劑，其具有介 於5與8小時之間的半衰期⑷。在-具體實例中，“介 於6與7小時之間。在另一具體實例中，—68小時。 本發明之另一具體實例係關於NNR促效劑，其具有介 於5與1〇小時之間的作用持續時間。在一具體實例中持 、續時間介於6至9小時之間。在另一具體實例中，持續時

Fa，A 8 小時。 在另一具體實例中，促效劑為α4)82Κ效劑。 在另一具體實例中，促效劑為（(Κ)_3_((Ε)_2_(吡咯啶_3_ 基）乙烯基）-5-(四氫哌喻-4-基氧基）吼啶。 實施例 提供以下實施例來說明本發明，且不應解釋為限制本 發明。在此等實施例中，除非另外說明，否則所有份數及 百分比均係以重量計。 ❿ 實施例1:用於特性化（R)-3-((E)-2-(吡咯啶-3-基）乙烯 基）·5-(四氩旅喃-4-基氧基）吡啶及其里形式之儀器及實驗 方案 核磁共振（NMR)光譜測定法 在裝備有自動取樣器之Varian Unity 300 MHz儀器或 Bruker 400 MHz儀器上收集NMR譜，且由DRX400控制台 加以控制。使用與Top spin v 1.3 (8級修補程序）一起運作 之ICONNMR V4.0.4 (模塊1 )，使用標準Bruker加載實驗 41 201024283 獲得自動化實驗。對於非常規光譜法，僅使用Topspin獲得 數據。 熔點 以對應於每分鐘約 5 °C之加熱速率的設定使用 Fisher-Johns熱台溶點設備。 差示掃描熱量測定（DSC) 在裝備有50位置自動取樣器之ΤΑ儀器Q1000或 Mettler DSC 823e上收集DSC數據。使用合格銦校正儀器 之能量及溫度校正。典型地，在針孔鋁盤中以1 〇°C /min將 〇 0·5-1.5 mg各樣本自25°C加熱至175-2001。在樣本上方保 持30 mL/min之氮氣淨化。 動態水分吸附分析（DVS) 使用由SMS分析軟體組控制之SMS DVS固有水分吸 附分析儀測定吸附等溫線。藉由儀器控制使樣本溫度保持 25 C °由乾氮氣與濕氮氣之混合氣流控制濕度，總流動速 率為200 mL/min。藉由接近樣本定位之經校正R〇tr〇nic探 針（動態範圍為1.0-100% RH)量測相對濕度。藉由微量天❹ 平（精度±0.005 mg)恆定監測樣本重量隨％RH之變化（質 量鬆弛）。 典型地，在周圍條件下將5-20 mg樣本置於配衡網孔之 不錄鋼吊籃中。樣本在桃⑽及饥（典型周圍條件） 下加載及卸載。如下文所述進行吸濕等溫線（2次掃描產生 1個完整循環）°在25°C下，在0-90% RH範圍内以10% RH 間隔進行標準等溫線。 42 201024283 DVS通用方法參數 參數 值 吸附-掃描1 40 - 90 解吸附/吸附-掃描2 90 -乾，乾-40 間隔（％RH) 10 掃描次數 2 流動速率（mL/min ) 200 溫度（°C) 25 穩定性（°C /min ) 0.2 吸附時間（h) 6小時暫停 由HPLC測定化學純度 在裝備有二極體陣列偵測器之Agilent HP 1100系列系 統上，使用ChemStation軟體VB.02.01-SR1進行純度分析。 用於化學純度測定之HPLC方法參數： 樣本製備 0.5mg/mL 於乙腈:水 1:1 (v/v)中 管柱： Phenomenex Luna Cl8 (2) > 150 x 4.6 mm 5 5 μπι 管柱溫度（°C): 25 注射（/iL): 5 偵測：波長，帶寬（nm): 255, 90 流動速率（mL/min): 1 A相： 水中之0.1%TFA B相： 乙腈中之0.085% TFA 時間表： 時間（min) A相％ B相％ 0 95 5 25 5 95 25.2 95 5 30 95 5 43 201024283 離子層析 在使用 IC Net 軟體 ν2·3 之 Metrohm 761 Advanced Compact 1C (用於陽離子）及 Metr〇hm 861 Advanced Compact 1C (用於陰離子）上收集數據。樣本製備為dms〇 中之1000 ppm儲備液。在測試之前，樣本以dmSO稀釋至 100 ppm °藉由與所分析離子之已知濃度的標準溶液相比較 實現定量。 用於陰離子之離子層析方法： 方法類型 陰離子交換 管柱： Metrosep A Supp 5-250 ( 4.0 x 250 mm ) 管柱溫度（°c): 周圍 注射（mL): 20 偵測： 傳導性偵測器 流動速率（mL/min): ----- 洗提劑： 0.7 — 之3.2mM碳酸鈉，l.OmM碳酸氫鈉 用於陽離子之離子層析方法：

〇 44 201024283 實施例2·合成（R)_3-(甲基磧斑氧基）”比洛咬甲酸第 三丁酯（2) 程序A :在-20至-30°C下，向（R)-3-羥基吡咯啶-ΐ_甲酸 第三丁醋（ 200 g ’ 1.07 mol)與三乙胺（167 g，163 m〇1) 於甲苯（700 mL)中之溶液中逐滴添加甲烷磺醯氣（156 g , 1.36 mol)，同時保持溫度在_1〇至_2〇。(：下。使溶液升溫至 周圍溫度且攪拌。反應溶液每小時取樣且由Hplc進行分析 ❺ 以確認反應是否完成。反應完成後，過濾懸浮液以移除三 乙胺鹽酸鹽。以約600 mL稀碳酸氫鈉水溶液洗滌濾液。使 有機層脫水且減壓濃縮’獲得呈黏稠油狀物之2 ( 26〇 g， 92%)，其無需進一步純化即使用。m NMR (CDCl3， MHz)6 5.27 (m，1H)，3 44 _ 3 76 (m，4H)，3 Q5 (s，3h)， 2.26 (m，1H)，2.15 (m，iH), 147 (s，9H)。 程序Β·向反應器中饋入（R)-3-經基吼洛咬-l_甲酸第三 丁醋（2.00 kg，10.7 m〇1)、甲苯（8 7〇 kg)及三乙胺（i ❹ kg，17.3 mol)。以氮氣吹洗反應器15分鐘。攪拌混合物 且冷部至3 C。在連續冰浴冷卻下緩慢添加甲烷磺醯氣（丨72 kg’mGl)(經2小時時段）（放熱反應）（添加完成後，

血度為14C)。混合物現因沈澱之三乙胺鹽酸鹽而變得黏 祠if拌該此口& 12小時，此時其升溫至2〇。匚。GC及TLC 析（節滿一 _染色）皆指示無剩餘起始物質。過遽混合 物以移除二乙胺鹽酸鹽，且使遽液回到反應器中。接著以 5/〇碳酸氮納水溶液（2X3 kg)洗滌濾液，各洗滌使用15分 鐘授拌時間及1 5分鐘沈降時間。用無水硫酸納使所得有機 45 201024283 層脫水且過濾。在真空下自濾液中移除揮發物首先在5〇 °C下歷時4小時，且接著在周圍溫度下歷時1()小時。殘餘 物稱重為3·00 kg(1〇6%產率）且由層析及職分析證實 與先前製備之樣本相同，例外在於其含有甲苯。 實施例3.合成（R)_2_(1•(第三丁氧幾基）吹略唆^基）丙 一酸二乙箱（3) 製備A:向第三丁醇鉀（187 g，t 62 於i曱基_2_ 吡嘻咬酮（1.19 L)中之溶液中添加丙二酸二乙醋（268 §， 1.67 mol) ’同時保持溫度低於35。。。將溶液加熱至俄❹ 且攪拌20-30分鐘。添加W-3-(甲基續醯氧基）《比洛咬小甲 酸第三丁酯Ui2g’ 420 mm〇1)，且將溶液加熱至65。〇且 擾拌6小時。反應溶液每2小時取樣且由Ηριχ進行分析以 碟認反應是否完成。反應完成後（10-12小時），使混合物 冷卻至約25eC。向溶液中添加去離子水（25〇mL)，且藉 由添加2 N鹽酸（65〇社）將pH值調整至3_4。過滤所得 懸浮液’且添加水（1.2L)及氣仿（1.4L)。充分混合溶 液’收集氣仿層且減壓蒸發’獲得黃色油狀物。將油狀物 〇 溶解於己烧（2_00 L)中，且以去離子水（2χ1 〇〇 L)洗滌。 在50_55°C下減壓濃縮有機層，獲得淺黃色油狀物（252 g)， 4 NMR分析指示為49 1% 3 ( 123 8 g)以及48 5%丙二酸 二乙酯（122 g)，及2% ^甲基·2·吡咯啶酮（5 g)。材料 未經進一步純化即用於下一步驟中。lH NMR (cdc13, 4〇〇 MHz) 5 4.20 (q, 4H), 3.63 (m, 1H), 3.48 (m, 1H), 3,30 (m, 1H)， 3.27 (d，J = 10 Hz，1H)，3 〇3 (m，1H)，2 8〇 (m，ih)， 46 201024283 2.08 (m，1H)，1.61 (m，1H)，1.45 (s，9H)，1.27 (t，6H)。 製備B:向保持於氮氣氛圍下之反應器中饋入 ( 200 proof)乙醇（5.50 kg)及21% (以重量計）乙醇鈉 之乙醇溶液（7.00 kg，21.6 mol)。攪拌混合物且升溫至 3〇°C。經20分鐘時段添加丙二酸二乙酯（3 5〇 kg，21 9 mol )。反應混合物接著在4〇〇c下加溫1 5小時。添加 (R)-3-(甲基磺醯氧基）吡咯啶-；l-甲酸第三丁酯（3 〇〇 kg實施 ❹例2程序B之產物’ 1〇·7 mol)於100%乙醇（5.50 kg)中 之溶液’且所得混合物在回流（78艺）下加熱2小時。Gc 及TLC分析（茚滿三酮染色）皆指示無剩餘起始物質。接 著冷卻經攪拌混合物至25。(：，以水（2.25 kg)稀釋，且用 濃鹽酸（1.27 kg，12.9 mol)於水（5.44 kg)中之溶液緩慢 處理。以甲基第三丁基醚（MTBE) ( 14.1 kg及11.4 kg) 洗務此混合物2次，各洗滌使用15分鐘攪拌時間及ι5分 鐘沈降時間。用無水硫酸鈉（1 kg)使合併之MTBE洗條液 ^ 脫水’過濾且在真空下在50°C下濃縮6小時。殘餘物（紅 色油狀物）稱重為4.45 kg，且由GC分析指示為49%所要 產物（自（R)_3-羥基吡咯啶-1-曱酸第三丁酯起始，總產率為 62%) 〇 實施例4.合成（R)-2-(l-(第三丁氧羰基）吡咯啶_3_基）丙 二酸（4) 程序 A:向含有 123.8g(380 mmol )3 及 121.8g(760 mmol)丙二酸二乙酯之實施例3程序a的產物（232 g)於 四氫吱喃（1.2 L)中之溶液中添加21%氫氧化鉀溶液（〇.5〇 47 201024283 L去離子水中，450 g)，同時保持溫度低於25〇c。將反應 混〇物加熱至45 C且攪拌1小時。反應溶液每小時取樣且 由HPLC進行分析以確認反應是否完成。反應完成後（23 小時），使混合物冷卻至約25它。收集水層且冷卻至5。 藉由添加4Ν鹽酸（750 mL )將pH值調整至2，且使所得 懸浮液在5-HTC下保持30分鐘。過濾混合物，且以己烷（i L)洗滌濾餅。用氣仿（丨L )萃取水性濾液，且氣仿層搁 置待用。藉由加熱至40 〇C使過濾步驟中所收集之固體再溶 解於氣仿（1 L )巾。H容液以移除未溶解之無機固體。Ο 合併氣仿層且在50_55〇C下減壓濃縮，獲得灰白色固體（15 g)。合併固體且溶解於乙酸乙酯（35〇mL)中，獲得懸浮 液，將該懸浮液升溫至55-6(TC歷時2小時。趁熱過濾懸浮 液，且以乙酸乙酯（2xl50 mL)及己烷（2χ25〇 mL)洗滌 所得濾餅，獲得83·〇 g ( 80·1%)呈白色固體狀之4,其未 經進一步純化即用於下一步驟中。4 NMR (d4-CH3〇H, 400 MHz) (5 3.60 (m? 1Η)? 3.46 (m, 1Η), 3.29-3.32 (m, 2Η), 2-72 (m, 1Η), 2.〇9 (m, 1H), 1.70 (m, 1H), 1.45 (s, 9H) 〇 Θ 程序B:在氮氣氛圍下，向氫氧化鉀（16〇 kg，4〇〇瓜〇1) 於去離子水（2.00 kg)中之經攪拌的冷卻溶液中添加含有 2.13 kg ( 6.47 m〇i) 3之實施例3程序B之產物（4乃kg) 於四氫呋喃（13.9 kg)中之溶液，同時保持溫度低於35乞。 加熱反應混合物，且保持40-451歷時24小時，此時GC 及TLC分析指出反應完成。將混合物冷卻至它，且以 MTBE(34kg)洗滌’使用15分鐘攪拌時間及15分鐘沈降 48 201024283 時間。收集水層且冷卻至rc。接著緩慢添加濃鹽酸（2 61 kg，26.5 mol)於去離子水（2.18 kg)中之混合物，在添加 期間及在添加後歷時15分鐘保持混合物溫度 < 丨5乞。藉由 進一步添加鹽酸將溶液之pH值調整至37〇藉由過濾收集 白色固體’以水（16 kg)洗滌’且在周圍溫度下真空脫水 6天。脫水固體稱重為1 .〇4 kg。將濾液冷卻至 0°c，且保 持彼溫度’此時藉由添加更多鹽酸來降低pH值（使用1.6 L _ ό N; 9.6 mol;最終PH = 2)。藉由過濾收集白色固體，以 水（8 L )洗滌’且在40°C下真空脫水3天。脫水固體稱重 為0.25 kg。由層析法證實合併固體（1,29 kg，73%產率） 與先前製備之樣本相同。 實施例5.合成（R)-2-(l-(第三丁氧羰基）吡咯啶_3·基）乙 酸（5) 程序A :在氮氣下，在11〇-112。(：下攪拌（R)-2-(l-(第三 丁氧幾基）°比u各咬_3 -基）丙二酸（83 g)於1-甲基-2-°比略咬 ◎ 嗣（0.42 L )中之溶液歷時2小時。反應溶液每小時取樣且 由HPLC進行分析以確認反應是否完成。反應完成後，使反 應溶液冷卻至20-251。使溶液與去離子水（1 .〇〇 L )混合， 且添加MTBE ( 1.00 L)。分離各相，且收集有機層。用 MTBE ( 1.〇0 l)萃取水相，接著用氯仿（ι·〇〇 L)萃取。 合併有機層’且在50-55°C下減壓濃縮，獲得油狀物。將此 油狀物溶解於MTBE ( 2.00 L)中，且以〇.6 N鹽酸（2x1.00 L)洗務2次。收集有機層’且在5〇-5 5。(：下減壓濃縮，獲 得半固體。使半固體懸浮於I:4乙酸乙酯/己烷（100 mL) 49 201024283 中，加熱至50°c，保持30分鐘，冷卻至_1〇。(：且過濾。減 壓濃縮濾液，獲得油狀物，將該油狀物溶解於MTBE (250 mL)中且以〇.6 N鹽酸（2x100 mL)洗滌2次。在50-55 。(：下減壓濃縮有機層’獲得半@體，使該半固㈣浮於ι:4 乙酸乙醋/己燒（5〇mL)中，加熱至5(rc，保持3〇分鐘， 冷卻至-io°c且過據。收集固體，懸浮於己烧（2〇〇社）中， 且藉由過濾進行收集，獲得54〇 g( 77 6%) 5。咕nmr (CDC13, 400 MHz) 6 11〇〇 (br s，1H)，3 63 (m，1H)，3 45 〇 (Μ, 1H), 3.30 (Μ, 1H), 2.97 (m, 1H), 2.58 (m} 1H), 2.44 (m, 2H), 2.09 (m, 1H), 1.59 (Μ, 1H), 1.46 (s, 9H) 〇 程序B:在氮氣下，在110〇c下攪拌（R)_2(1 (第三丁氧 羰基）吡咯啶_3_基）丙二酸（j 〇4 kg，3 8i 於卜曱基_2_ =哈咬嗣（6.49 kg)中之溶液料5小時，此時ΤΙχ及HpLc 分析指示反應完成。將反應混合物冷卻至25。(：（4小時）， ^與水（12.8 kg) * MTBE ( 9 44 kg)合併。劇烈挽摔混 口物20分鐘’且分離各相（1〇小時）。收集有機相，且使 ❹ ,相與酿（9.44kg)合併，挽拌15分鐘，且使其沈降 人45分鐘）。收集有機相，且使水相與MTBE ( 9 44 合併’授拌15分鐘’且使其沈降（15分鐘）。合併三 機相，以i N鹽酸（8.44 kg各份）洗務3次且以水（6 39 y 洗膝1次，各洗較用15分_拌時間及15分鐘沈降時 間。用無水硫酸鈉（2.0 kg)使所得溶液脫水且過濾。在μ C下減壓濃縮ί慮液（2’丨、時）’獲得固體❶此固體真空加熱 4小時’在3’C下加熱4小時’且在2rc下加熱16小時： 50 201024283 留下704 g ( 81%) 5 (由GC測定為99.7%純度）。 程序C (使用2作為起始物質，流線合成5):將乙醇 鈉之乙醇溶液（21重量％，343 g，1.05 mol)、乙醇（無水， 300 mL)與丙二酸二乙酯（168 g，ι·〇5 mol)之經攪拌混 合物加熱至40°C歷時1·5小時。向此混合物中添加（R)-3-(甲 基磺醯氧基）吡咯啶-1-甲酸第三丁酯（U8 g，0.592 mol) 於乙醇（100 mL)中之溶液，且將反應混合物加熱至78°c 歷時8小時。以水（2.0 L )稀釋冷卻之反應混合物且以6 Μ 〇 HC1 ( 100 mL)酸化至pH = 3。用甲苯（1.0 L)萃取水性 乙醇混合物’且真空濃縮有機相，獲得230 g紅色油狀物。 在85°C下’向22.5重量％氫氧化鉀水溶液（748 g，3.01 mol) 中添加該紅色油狀物。添加完成後，使反應溫度緩慢升至 102 C ’同時確保乙醇蒸餾。當反應溫度達到1 〇2。〇且蒸餾 減弱時，繼續再加熱90分鐘。將反應混合物冷卻至周圍溫 度’且以甲苯（2x400 mL )洗滌。向水層中添加6〇〇 mL 6 Μ ❹ 鹽酸’同時保持内部溫度低於20°C。此導致在約4-5之pH 值下開始形成沈澱物。過濾懸浮液，且以3〇〇 mL水洗滌濾 餅。將固體真空脫水’獲得77 g呈灰白色固體狀之 (R)-2-(l-(第三丁氧羰基比咯啶-3_基）丙二酸（相對於 (及）-3-(曱基磺醯氧基）吡咯啶4-甲酸第三丁醋之產率為 54 /ί» )。H NMR (DMSO-d6，400 MHz):5 3.47 (m, 1H); 3.32 (m, 1H); 3.24 (m, 1H); 3.16 (m, 1H); 3.92 (m, 1H); 2.86 (m, 1H); 1.95 (m，1H); 1.59 (m，ih); 1.39 (s，9H)。 將（i〇-2-(l-(第三丁氧羰基）吡咯啶_3_基）丙二酸（15 g， 51 201024283 55 mmol)於甲苯（150 mL)及二甲亞礙（2 mL)中之懸浮 液加熱至回流歷時2小時時段。使混合物達到周圍條件且 以MTBE( 150 mL)稀釋。以1〇%檸檬酸水溶液（2x200 mL) 洗滌有機溶液’且真空移除溶劑，獲得11,6 g呈灰白色固 體狀之（Λ )-2-(1-(第三丁氧徵基）_ η比洛咬-3-基）乙酸（92%產 率）。4 NMR (DMSO-d6，400 ΜΗζ): δ 12.1 (s, 1H); 3.36-3.48 (m, 1H); 3.20-3.34 (m, 1H); 3.05-3.19 (m, 1H; 2.72-2.84 (m, 1H); 2.30-2.42 (m, 1H), 2.22-2.30 (m, 2H); 1.85-2.00 (m，1H); 1.38-1.54 (m, 1H)，1.35 (2, 9H)。 © 實施例6.合成（R)-3-(2-羥基乙基）吡咯啶-1-甲酸第三丁 醆（6) 程序A:將（R)-2-(l-(第三丁氧羰基）吡咯啶·3_基）乙酸 (49.0 g ’ 214 mmol)於四氫呋喃（THF ) ( 200 mL)中之 溶液冷卻至-10°C。向燒瓶中緩慢添加250 mL ( 250 mmol) 1 Μ甲蝴院之THF溶液，同時保持溫度低於〇〇c。將溶液升 溫至周圍溫度且攪拌1小時。溶液每小時取樣且由HPLC 進行分析以確認反應是否完成。反應完成後，將溶液冷卻 〇 至0C ’且經30分鐘時段逐滴添加1〇%氫氧化鈉溶液（8〇 mL )以控制氣體逸出。用5〇〇 mL丨：j己烷/乙酸乙酯溶液萃 取該溶液。以飽和氣化鈉溶液洗滌有機層且用丨〇 g矽膠脫 水。藉由過濾移除矽膠，且以i 〇〇 m]L i:丨己烷/乙酸乙酯洗 滌。合併有機層，真空濃縮，獲得呈淡橙色油狀物之6 ( 42 g ’ 1.3% )，其在靜置時凝固。iH NMR (cdc13, 4〇〇 MHz)占 3.67 (m, 2H), 3.38-3.62 (m, 2H), 3.25 (m, 1H), 2.90 (m, 1H), 52 201024283 2.25 (m, 1H), 1.98-2.05 (m, ih), 1.61-1.69 (m, 2H), 1.48-1.59 (m，2H), 1.46 (s, 9H) 〇 程序B:向Μ)_2_(1_(第三丁氧羰基）吡咯啶·3基）乙酸 (683 g ’ 3.03 mol)於THF ( 2.5 kg)中之經攪拌溶液中緩 慢添加甲硼烷-THF複合物（THF中，3 9〇 kg或L i M， mol)，保持於氮氣下，且使用水浴保持溫度介於^與“ C之間。添加用時1 _75小時。在25°C下繼續攪拌1小時， 此後，GC分析指示反應完成。將反應混合物冷卻至<1〇它 且緩慢添加10%氫氧化鈉水溶液（〗22 kg)，此時保持低 於25°C。添加用時40分鐘。在25。(：下攪拌混合物i小時， 接著與1··1 ( v/v)庚烧/乙酸乙酷（7 L)合併。攪拌混合物 15分鐘，且分離成各相（1小時）。提取有機相，且水相 與第一伤7 L 1:1庚烧/乙酸乙酯合併。攪拌此混合物15分 鐘，且分離成各相（20分鐘）》再次提取有機相，且以氣 化鈉飽和水溶液（4.16 kg)洗滌合併之有機相，使用15分 ❹鐘混合時間及1小時沈降時間。有機相與石夕膠（140 g )合 併且攪拌1小時。添加無水硫酸鈉（7〇〇莒），且攪拌混合 物1.5小時。過濾混合物，且以1:1庚烷/乙酸乙酯（2 洗滌濾餅。在<40°C下真空濃縮濾液歷時6小時。所得油狀 物稱重為670 g ( 1〇3%產率）且含有痕量庚烷，但由nmr 分析證實在其他方面與先前製備的6之樣本相同。 實施例7: (R)-3-(2-(甲基磺醮氧基）乙基）吼略啶甲 酸第三丁酯（7) 程序A:向（R)-3-(2-羥基甲基）吡咯啶甲酸第三丁醋 53 201024283 之溶液（41.0 g，190 mmol)中添加甲苯（38〇 mL)中之三 乙胺（40mL) ’冷卻至-10°C。緩慢添加甲烷磺醯氣（2〇 〇 mL，256 mmol)，從而保持溫度為約_5至。將溶液升 溫至周圍溫度且攪拌1小時。溶液每小時取樣且由hplc 進行分析以確認反應是否完成。反應完成後，過濾溶液， 且以5%碳酸氫納溶液（250 mL )洗滌濾液。收集有機層且 以氣化鈉飽和水溶液（250 mL)洗滌。收集有機層，用碎 膠（10 g )脫水，且真空濃縮，獲得呈淡黃色黏稠油狀物之 7 ( 53.0 g，92.8%)。4 NMR (CDC13, 400 MHz) 5 4.26 (t, ❹ J = 6.8 Hz, 2H), 3.41-3.63 (m, 2H),3.27 (m, 1H), 3.02 (s, 3H), 2.92 (m, 1H), 2.28 (m, 1H), 2.05 (m, 1H), 1.83 (m, 2H), 1.50-1.63 (m，1H), 1.46 (s，9H)。 程序B:在氮氣氛圍下’攪拌三乙胺（46〇 g，4.5S m〇i ) 及（R)-3-(2-羥基甲基）吡咯啶_i -甲酸第三丁酯（全部樣本來 自實施例7程序B，3.03 mol)於甲苯（5.20 kg)之溶液且 冷卻至5°C。經1.25小時緩慢添加曱烷磺醯氣（470 g，4.1〇 mol) ’使用冰浴冷卻保持溫度低於15°c。使混合物逐漸升 ❹ 溫（經1.5小時）至35°C，且保持此溫度歷時1.25小時， 此時GC分析指示反應完成。將混合物冷卻至251，且溏 出固體，以甲苯（1.28 kg)洗滌濾餅。濾液與10%碳酸氫 鈉水溶液（4.0 kg) —起攪拌15分鐘，且分離各相歷時3〇 分鐘。有機相接著與氯化鈉飽和水溶液（3_9 kg) —起攪拌 30分鐘’且分離各相歷時2〇分鐘。有機相與矽膠（160 g) 合併且攪拌1小時《添加無水硫酸鈉（540 g)，且再攪拌 54 201024283 混合物40分鐘。接著過濾混合物，且以甲苯（46〇层）洗滌 濾餅。在5(TC下真空濃縮濾液歷時5小時，且所得油狀物 在23 C下在真空下再保持8小時。此留下798 g 7，由GC 分析測定為93%純。 實施例8 .合成（R)-3-乙稀基吼略咬甲酸第三丁酷 (9) 程序A :在50-60°C下攪拌（R)-3-((甲基磺醯氧基）乙基） -比洛唆曱酸第三丁酯（49 〇g，l67mm〇1)、碘化鈉（3〇 〇 ® g，200 mmo1)及I2·二曱氧基乙烷（ 450 mL)之溶液歷時 4小時。溶液每小時取樣且由HPlc進行分析以確認反應是 否完成。反應完成後’將溶液冷卻至_1〇。匸，添加固體第三 丁醇鉀（32.0 g，288 mmol)，同時保持溫度低於〇〇C。將 反應混合物升溫至周圍溫度且攪拌1小時。混合物每小時 取樣且由HPLC進行分析以確認反應是否完成。反應完成 後，經矽藻土墊過濾混合物（25 g乾基）。以1，2-二甲氧基 乙烷（100 mL )洗滌濾餅。真空濃縮合併之濾液，獲得具 ® 有懸浮固體之燈色油狀物。將油狀物溶解於己娱*( 400 mL ) 中’攪拌30分鐘且過濾，由此移除固體。用矽膠（10 g) 使有機層脫水，且真空濃縮，獲得呈無色油狀物之9(26.4 g * 82.9%) 。1H NMR (CDC13, 400 MHz) δ 5.77 (m, 1Η), 5.10 (dd, J = 1.2 Hz, J = 16 Hz, 1H), 5.03 (dd, J = 1.2 Hz, J =8.8 Hz, 1H), 3.41-3.59 (m, 2H), 3.29 (m, 1H), 3.05 (m, 1H), 2.78 (m, 1H), 2.01 (m, 1H), 1.62-1.73 (m, 1H), 1.46 (m, 9H)。 55 201024283 程序B :在55°C下，在氮氣下攪拌（R)-3-(2-(甲基績醯 氧基）乙基）吡咯啶-1-甲酸第三丁酯（792 g實施例7程序b 之產物，約 2.5 mol )、蛾化納（484 g，3.27 mol)及 1,2_ 二曱氧基乙烷（7.2 L)之溶液歷時4.5小時，此時gc分析 指示反應完成。將溶液冷卻至<l〇°C ’且逐份添加固艎第三 丁醇鉀（484 g，4.32 mol) ( 1.25小時添加時間），同時 保持溫度低於15°C。在5°C下攪拌反應混合物1小時，緩 慢升溫（6小時）至20°C，且在20°C下攪拌1小時《經梦 藻土墊過濾溶液（400 g乾基）。以1,2-二甲氧基乙烷（1.6 Ο kg )洗滌濾餅。真空濃縮合併之濾液，且半固體殘餘物與 庚烧（6.0 L ) —起擾拌2小時。藉由過濾（以440 mL庚烧 洗滌濾餅）移除固體’且在2(TC下真空濃縮濾液，獲得455 g 9 ( 90.7%純）。此材料之樣本（350 g )在20-23托（torr ) 下分餾，獲得296 g經純化9 (沸點130-133°C )(由GC 分析測定>99%純）。 實施例9:合成3-溴-5-(四氩-2H-哌喃-4-基氧基）吡啶 (12) 〇 將5-溴吡啶-3-醇（146 g，834 mmol)、四氫-2H-哌喃 -4-醇（128 g’ 1250 mmol)及三苯膦（ 329 g，1250 mmol) 於甲笨（2.0 L )中之溶液加熱至回流，且經由迪恩_斯達克 收集器（Dean-Stark trap )移除750 mL餾出物。將反應混 合物冷卻至60。(：，且經1小時時段逐滴添加547成125 mol) 40 /ί» ( w/w ) DEAD之甲本溶液。添加為放熱的，反應器溫 度在添加結束時接近95 。在115 °C下攪拌反應混合物18 56 201024283 小時，且對一部分反應溶液取樣且由HPLC進行分析以確認 反應是否完成。反應完成後，藉由蒸餾移除5〇〇 m]L溶劑， 且將反應蒼殘餘物冷卻至周圍溫度。以10%氫氧化鈉水溶 液（2x0.50 L)洗滌此有機層，真空濃縮，產生黏稠油狀物， 將該油狀物溶解於2N鹽酸（i.OL)中。在擾拌下添加碎 藻土（ 100 g )且過濾所得懸浮液。以2 N鹽酸（1 .〇 L )沖 洗該墊，且合併濾液，以二異丙醚（500 mL)萃取。去棄 此二異丙醚層，且以碳黑（l〇g)處理水層，在45-5 0°C下 ® 攪拌1小時。經矽藻土墊過濾懸浮液（25 g)。收集濾液， 冷卻至5C ’且以50%氫氧化納水溶液（250 mL )將pH值 調整至pH=13。以氣仿（1·〇 L，600 mL)萃取溶液2次， 且合併氣仿萃取物，真空濃縮，獲得呈暗紅色黏稠油狀物/ 低’溶點固體之1 2 ( 18 7 g ’ 8 7 % )，其未經進一步純化即使 用。iH NMR (CDC13, 400 ΜΗζ) δ 8.29 (s, 1Η), 8.24 (s, 1H)，7.38 (s，1H)，4.52 (m，1H)，3.98 (m, 2H)，3.60 (m，2H), 2.05 (m，2H), 1.81 (m，2H)。 實施例10 :合成（R)-(E)-3-(2-(5-(四氩-2H-哌喃-4·基氧 基）吡啶-3-基）乙烯基）吡咯啶-1-甲酸第三丁酯（13) 在130°C下攪拌（R)-3-乙烯基吡咯啶-1-甲酸第三丁酯9 (7.00 g，35.5 mmol) 、3 ->臭-5-(四風- 2H -娘喝-4 -基氧基） 吡啶 12 ( 10.0 g，38.8 mmol)、乙酸鈀（〇‘40 g，1·8 mmol)、 三環己基膦（1.0 g，3.57 mmol)及二異丙基乙胺（15 mL) 於1-甲基-2-吡咯啶酮（130 mL)中之混合物達17小時。將 反應物冷卻至周圍溫度，以水（800 mL )稀釋且用乙酸乙 57 201024283 醋（2x200 mL )萃取》用硫酸納使合併之有機萃取物脫水， 濃縮且藉由妙膠管柱層析（使用己烧中之〗〇〇〇/〇乙酸乙 酯）純化。在逆相HPLC (使用乙腈中之〇·〇5%三氟乙酸及 水中之0.05%三氟乙酸）上進一步純化此產物，獲得呈膠狀 物之（R)-(E)-3-(2-(5-(四氫-2Η-哌喃-4-基氧基）吼啶_3_基）乙 稀基）0比嘻咬-1-甲酸第三丁酯（ll.Og) 。ijj_NMR (CDC13， 400 MHz): (5 8.41 (s, 1 Η), 8.37 (d, J = 2.3 Hz, 1 H), 7.68 (s, 1 H), 6.48 (d, J = 16.1 Hz, 1 H), 6.43 (dd, J = 16.0, 6.4

Hz, 1 H), 4.71-4.66 (m, 1 H), 4.02-3.96 (m, 2 H), 3.68-3.52 〇 (m, 4 H), 3.44-3.34 (m, 1 H), 3.28-3.15 (m, 1 H), 3.09-2.98 (m, 1 H), 2.18-2.04 (m, 3 H), 1.90-1.78 (m, 3 H), 1.48 (s, 9 H) 〇 實施例11 :合成（R)-3-((E)-2-(吡咯咬-3-基）乙烯 基）-5-(四氩旅味-4·基氧基咬（14)半-半乳糖二酸盥 在周圍溫度下挽拌（R)-(E)-3-(2-(5-(四氫-2Η-α底喃-4-基 氧基）吡啶-3-基）乙烯基）吡咯啶-1-甲酸第三丁酯（18 g， 48.13 mmol)於二氣甲烷（40 mL)及三氟乙酸（40 mL) ❹ 中之溶液歷時2小時。在旋轉蒸發器上濃縮反應物，且使 殘餘物在飽和氣化鈉（50 mL)與氣仿（1〇〇 mL)之間分溶。 以10%氫氧化鈉水溶液鹼化混合物至pH 9。分離有機層且 用氣仿（2x100 mL)萃取水層。用硫酸鈉使合併之有機層 脫水且在旋轉蒸發器上濃縮，獲得呈膠狀物之 (R)-3-((E)-2-("比咯啶-3-基）乙烯基）_5_(四氫_2H-旅喃-4-基 氧基）"比咬（8_0g)。將此膠狀物溶解於甲醇（1〇〇mL)中， 58 201024283 且添加半乳糖二酸（3.0g，14.6 mmol)，將混合物加熱至 回流。過濾此熱溶液，且使濾液冷卻至周圍溫度。過濾結 晶產物’且使固體懸浮於丨〇%水之乙醇溶液（丨8〇 mL )中。 將懸浮液加熱至回流且過濾熱溶液。冷卻濾液至周圍溫 度。過濾結晶產物且在高真空泵上脫水，獲得（r)_3_((e)_2_ 吡咯啶-3-基乙烯基）_5_(四氫_2H_哌喃_4_基氧基）吡啶半半 乳糖二酸鹽（4.5 g)。熔點：179°C。iH-NMR (CD3OD，300 MHz)·· δ 8.04 (s, 1 Η), 8.01 (d, J = 2.2 Hz, 1 H), 7.36 (s, 1 H), 6.46 (d, J = 16.0 Hz, 1 H), 6.21 (dd, J = 16.0, 7.5 Hz, 1 H)，4.65-4.4.54 (m，1 H)，4.12 (s，1 H)，3.89-3.83 (m，2 H)， 4.80 (s, 1 H), 3.56-3.33 (m, 4 H), 3.27-3.18 (m, 1 H), 3.12-2.96 (m, 2 H), 2.23-2.14 (m, 1 H), 1.98-1.91 (m, 2 H), 1.88-1.78 (m，1 H)，1.68-1.58 (m，2 H); MS (m/z): 275 (M+l)。 實施例12:大規模合成（r)-3_((e)_2-(吡咯啶-3-基）乙烯 基）-5-(四氣哌喃-4-基氧基）吼啶（14)單-L-蘋果酸盥 ❿ 在氮氣氛圍下，攪拌3-溴-5-(四氫-2H-哌喃-4-基氧基） 吡啶（125 g，85%純度，410 mmol)、（R)-3-乙烯基吡咯啶 -1-甲酸第三丁酯（67.4 g，340 mmol )、乙酸鈀（Π) ( 8.1 g， 36 mmol)、三正丁基膦（15g，74 mmol)、碳酸鉀（74.0 g ’ 530 mmol)及 DMAC ( 0.85 L)之混合物且在 130°C 下 加熱’由LCMS監測反應是否完成。反應完成後，將反應 混合物冷卻至周圍溫度，且經矽藻土墊過濾（5〇 g乾基）， 以二異丙趟（0.60 L)洗蘇該整。渡液與二異丙醚（〇.60 L ) 59 201024283 及去離子水（0.50L)合併，且混合15分鐘。分離各相（15 分鐘）’且收集有機相。用第二份二異丙醚（〇 6〇 L)萃取 水相，使用1 5分鐘混合時間及15分鐘沈降時間。以去離 子水（2x0.50 L)洗滌合併之二異丙醚層，減壓濃縮，產生 暗紅色黏稍油狀物（136 g) ^將此油狀物溶解於二異丙醚 (1.40 L )中，且以冰浴冷卻至約j 〇。〇，隨後經j 5分鐘時 段經由滴液加料漏斗饋入6 N鹽酸（0.40 L )，保持溫度低 於20°C。使該兩相混合物升溫至周圍溫度（溫熱時開始放 氣）且攪拌，直至LCMS指示反應完成。反應完成後，分 離各相，且丟棄有機層。使用1〇%氫氧化鈉水溶液（〇 485 l) 將水層之pH值調整至pH 5_6，用氣仿（〇 25 L)萃取。丟 棄氣仿層。接著使用1〇%氫氧化鈉水溶液（〇 〇75 [)將水 層調整至pH>13，且再次用氣仿（〇5〇 L)萃取。減壓濃縮 氣仿萃取物，獲得紅色黏稠油狀物（55.0 g)。此材料藉由 NMR分析證實為所要（R)_3_((E)_2十比咯啶·3基）乙烯基）巧_ 四氫-2H_哌喃-4·基氧基）咄啶（約75%)與相應的z(約 及外」（約)異構链之混合物。此結果可經多次操 作再現。 ' 藉由轉化為乙二酸鹽自所要（R)_3_((E)2_(吡咯啶_3_基） 乙烯基）-5-四氫_2H_哌喃_4_基氧基）吡啶移除z及「外」雜 質。撥拌且在50-55X：下加熱（15分鐘），藉此製備乙二酸 (53.2 g ’ 591 mmol)於2_丙醇（〇 2〇 L)與去離子水㈠⑽ L)之混合物中的溶液。經5分鐘時段向保持於7〇 75〇c下 之（R)_3-((E)-2_(料咬_3_基）乙締基）_5四氫扣“㈣冰基 201024283 氧基）0比啶（82.0 g，由HPLC測定76%純，299 mmol)於 2-丙醇（1 .〇 L )中之經攪拌溶液中添加此溶液。添加乙二 酸會放熱（4-5C)，藉由調整添加速率控制放熱。移除熱 源’且經45分鐘緩慢冷卻溶液至45-5(TC。在約65-70°C時 開始迅速形成沈澱物，且隨著所得懸浮液冷卻而變得較 稠。藉由在45-5(TC下過濾收集固體，且以2-丙醇（2 X 0.25 L )及己烧（2x0.20 L )相繼洗滌。使棕黃色固體風乾2小 時，隨後稱重（95 g) 。NMR分析指示z及「外」雜質之 含量各降低至<1%。此結果可經多次操作再現。藉由自乙醇 /水中再結晶獲得純度更高之材料。鹽之化學計算量為2.3.1 酸/驗（參看實施例15)。 攪拌乙二酸（R)-3-((E)-2-(»比咯錠-3-基）乙烯基）_5_(四 氫-2H-n底味-4-基氧基）B比敍；（ 380 g)於去離子水（2.6 L) 中之溶液且以冰浴冷卻至約10°C。經15分鐘時段添加氫敦 化鈉水溶液（0.40 L，25%)，保持溫度低於3〇°c。接著添 加氯仿（1 ·6 L )，且劇烈攪拌混合物歷時20分鐘，過遽， 由此移除不溶性乙二酸鈉。分離各層，且氣仿層與SiHcycle Si-Thiol® ( 21.6 g)合併。攪拌混合物且在5〇_55〇c下加熱 3 -4小時’冷卻至周圍溫度且過濾。減壓濃縮據液，產生淡 紅色黏稠油狀物（221g)。將一份此自由鹼（216g)溶解 於2-丙醇（1.2 L·)中’加熱至70-75t且以固體L-蘋果酸 (106 g)處理，使用2-丙酵沖洗（1〇〇 mL)幫助轉移。固 體之溶解經3-5分鐘產生5-7°C放熱。使混合物保持75·78 。(：歷時10分鐘以確保固體完全溶解，且接著緩慢冷卻至周 201024283 圍溫度（90分鐘）。隨著溫度達到价，在溶液中接種一 些W-3-((E)_2_(„比咯啶_3_基）乙烯基）5 (四氫_2Η·痕喃冰 基氧基）吡啶單-L_蘋果酸鹽晶體。在周圍溫度下攪拌丨小 時，接著過濾懸浮液。以2-丙醇（2x0.80 洗滌所收集之 固體，風乾30分鐘，且在78。〇下真空脫水8小時。所得灰 白色材料稱重為297 g且由HPLC測定>99%純。 實施例13:篩選鹽形式之（R)__3_((e)_2_(吡咯啶_3基） 乙烯基）-5-(四氩哌喃-4-基氧基）吡啶的程序 向具有磁力攪拌棒之試管（4 mL )中鎮入等毫莫耳量 0 之（R)-3-((E)-2-(〇比咯啶-3-基）乙烯基）_5_(四氫哌喃·4·基氧 基）°比咬鹼及相關酸（淨），且藉助於加熱使其與5〇〇私l 2-丙醇或乙腈一起溶解。若冷卻時未發生沈澱，則添加乙酸 異丙酯（100 // L )作為反溶劑。 若未發生沈澱’則在適度加熱下在氮氣流下蒸發溶 劑’且嘗試替代溶劑。替代溶劑包括丙酮、乙酸乙酯、乙 酸異丙酯 '絕對乙醇、乙腈、己烧、第三丁醇、乙酸第三 丁酯及其摻合物。 〇 在續酸情形下避免使用醇。小心使用乙酸異丙酯，而 传:止使用丙酮及乙酸乙酯，因為證實（r)_3_((e)-2-°比咯0^ -3-基乙烯基）-5-(四氫-2H-哌喃-4-基氧基）吡啶的二級胺官能 基可與此等溶劑反應。 此等實驗之結果概述於表1中。 62 201024283 表1.初步鹽篩選中所用之酸 酸 結果 4-乙醯胺基苯曱酸 油狀物 己二酸 油狀物 (lR，3S)-(+)-樟腦酸 油狀物 (lS)-(+)-10-樟腦磺酸 油狀物 檸檬酸 膠黏膠狀物 反丁烯二酸 油狀物 ❹ D-葡糖搭酸 棕色膠狀物 鹽酸 紅色油狀物 4-羥基苯甲酸 膠黏膠狀物 1-經基-2-萘曱酸（Xinafoic) 棕色膠狀物 順丁烯二酸 油狀物 L-蘋果酸 晶體 丙二酸 油狀物 (R)-杏仁酸 油狀物 (S)-杏仁酸 油狀物 曱烷磺酸 油狀物 @ 4-曱氧基苯曱酸 油狀物 磷酸 膠狀物 琥珀酸 紅色油狀物 L-酒石酸 油狀物 對甲苯磺酸.H20 油狀物 如表1中所證實，難以發現（R)-3-((E)-2-吡咯啶-3-基乙 稀基）-5·(四風- 2H -旅喃-4 -基氧基比咬之固體鹽形式。下文 報導固體鹽及其合成之實施例。 63 201024283 · 實施例14 :製備（R)-3-((E)-2-(吡咯啶-3-基）乙烯 基）-5-(四氫娘喃_4-基氧基）"*唆單蘋果酸鹽 向加熱至接近沸騰的（R)-3-((E)-2-("比咯啶-3-基）乙烯 基）-5-(四氫哌喃-4-基氧基）吡啶（ 900 mg; 3.28 mmol)於 2-丙醇（5 mL )中之經攪拌溶液中分三份添加L-蘋果酸 (439.8 mg ; 3.2 8 mmol，淨）。在接近沸騰下攪拌溶液10 分鐘。添加乙酸異丙酯（1 mL )，停止加熱，且趁熱接種 溶液。在攪拌下使溶液冷卻至周圍溫度（22°C )，此時鹽 以白色粒狀固體形式沈澱。藉由加熱使鹽再溶解，趁熱再 © 接種，冷卻且在無攪拌下在周圍溫度下靜置24小時。藉由 吸濾收集所得片狀晶體，以乙酸異丙酯（5 mL )洗滌，且 在氮氣下脫水10分鐘。在真空烘箱中在7〇°C下進一步脫水 1.5小時’獲得1.267 g( 94.6%)淡黃色晶體（熔點=118-119 °C )。W-NMR (D20或d6-DMSO)與1:1酸：鹼化學計算量一 致。DSC展現最大值在丨19 62°c處之單獨放熱。DVS顯示 至多 80% R.H 之最小水攝取。ih_NMr (〇2〇, 400 MHz): 5 8.15 (s，1 H)，8.10 (s, 1 h)，7.58 (s，1 Η), 6.52 (d，1 H)， ◎ 6.28 (dd，1 H)，4.63 (m，1 H，經殘餘H2〇共振部分地遮蔽）， 4.22 (dd, 1 Η), 3.88 (m, 2 Η), 3.55 (m, 2 Η), 3.46 (dd, 1 Η), 3.38 (m, 1 Η), 3.25 (m, 1 Η), 3.11 (m, 1 Η), 3.02 (m, 1 Η), 2.65 (dd, 1 Η), 2.42 (dd, 1 Η), 2.20 (m, 1 Η), 1.96 (m, 2 Η), 1.85 (m, 1 Η), 1.68 (m, 2 Η) 〇 ^-NMR (d6-DMSO, 400 MHz): δ 8.20 (s, 1 H), 8.18 (s, 1 H), 7.52 (s, 1 H), 6.55 (d, 1 H), 6.46 (dd, 1 H), 4.68 (m, 1 H), 3.87 (m, 3 H), 3.49 (m, 2 H), 64 201024283 3.40 (dd，1 Η)，3.32 (m，1 Η)，3.18 (m，1 Η)，3.05 (m, ! Η)， 2.93 (m，1 H)，2.51 (dd，1 H，經殘餘 DMSO 部分地遮蔽）， 2.31 (dd，1 H)，2.14 (m, 1 H)，1_98 (m，2 H)，1.80 (m，！ H)， 1.58 (m，2 H)。 實施例15 :製備（R)-3-((E)-2-(吡咯啶_3-基）乙婦 基）-5-(四氫旅喊-4-基氧基咬乙二酸鹽 以一份固體形式之乙二酸（0.373 g，4.14 mmol)處理 (1.137 g，85%，針對純度折算為3.52 mmol)於2-丙醇（8 5 ® mL )及水（0.4 mL )中之溫溶液。攪拌所得混合物且加熱 至接近回流。少數固鱧開始自熱溶液中沈澱。將混合物冷 卻至周圍溫度。過濾（Biichner)灰白色固體，以2-丙醇（1〇 mL，8 mL )洗滌且在50°C下真空脫水（空氣洩漏）3小時， 獲得0.861 g(以乙二酸鹽化學計算量2.3計為5〇 8%產率， 針對起始物質之純度折算）灰白色粉末。自2_丙醇（8mL) 及水（1.3 mL)之混合物中再結晶出〇.765 g此材料之樣本， φ 在回流下加熱。冷卻至周圍溫度後，過濾（Biichner)所得 固體，以2-丙醇（10 mL)洗滌，在5〇t下真空脫水（空 氣洩漏）4小時，接著在70t：下在空氣洩漏下進一步真空 脫水24小時，獲得〇·441 g ( 57 6%回收率）灰白色至白: 固體，熔點180-181。(：。 C16H22N2〇2.2.3 c2h2〇4 之計算值：c，51 %; h，$ 57 n 實驗值：C，51.09, 51.24; H，5.67, 5.66; N，5.84,以2。’ !Η-ΝΜΚ (D20, 400 MHz) 5 8.23 (s, 1 H)s 8.20 (s, ! 7*96 (S ,1 H), 6.54 (d, 1 H), 6.40 (dd, 1 H)} 4.73 (m^ ! 65 201024283 H)；3-S4(m,2H),3,4(m>2H),3,5 (dd)1H)> 3 35 (m l - 3(. 1H)j 3.12 (m5lH),3.〇2 (m}1H)52>16(mjl H)，· 6(^2H)51.83(m, lH),1.68(m>2H)〇 實施例u:製備(R)_3_((E)_2_(〇tt…基)已稀 基W四氣娘K基氧㈣咬二七苯甲速基D酒石酸 鹽 向加熱至6〇t的叫3侧_2十比以_3基）乙稀 基）-5-(四氫略味_4_基氧基）口比咬（4〇 g，15_d於乙醇 (12.5 mL)溶液中之經攪拌溶液中添加固體二對曱笨曱醯❹ 基-D·酒石酸（5.3g，14mm〇1)。使溶液保持航歷時2·3 分鐘以確保固體完全溶解，接著移除熱源且經6〇分鐘冷 卻溶液至25-30t。使所得懸浮液保持25_3〇<t歷時3〇分 鐘，接著過濾以收集固體。以乙醇（2χ2〇 mL )洗滌固體， 風乾30分鐘，接著在真空烘箱中在5〇t下減壓脫水，直至 實現恆重，獲得呈灰白色固體狀之（r)_3((e)_2(吡咯啶_3_ 基）乙烯基）-5-(四氫略喃-4-基氧基）吼咬二-對曱苯曱醯基 -D-酒石酸鹽（6.7 g，72%)。NNNMR分析指示1:1鹽化學 ◎ 計算量。1H-NMR (DMSO-d6，400 ΜΗζ) δ 8.18 (s, 1 Η), 8.15 (s, 1H), 7.86 (d, 4 H), 7.47 (s, 1 H), 7.32 (d, 4 H), 6.43 (d, 1 H)，6.36 (m，1 H)，5.67 (s，2 H)，4.69 (m，1 H), 3.85 (m，2 H)，3.49 (m，2 H), 3.25 (m，2 H)，3.10 (m，1 H)，2.88 (m，2 H)，2.39 (s，6 H)，1.98 (m，3 H)，1.60 (m，3 H)。 生物檢定 實施例17 :在CNS nAChR處之放射性配位艎結合： 66 201024283 α 4肩2 NNR亞型 150-250 g之大鼠（雌性， 自大鼠皮質製備膜：使重

Sprague-Dawiey )保持！ 2小時亮/暗循環，且自由取用由 Nutrition Internati〇nal公司提供之水及食物。以7〇% c〇2 麻醉動物’接著割去頭部。#出腦且置於冰冷平台上。移 2

出大腦皮質且置於2G體積（重量：體積）之冰冷製備型緩衝 液（137 mM NaCn’ 10.7 福 KCH，5.8 mM KH2P〇4，8 mM mM碘乙酿胺，1 6 ❹

Na2HP04 ’ 20 mM HEPES (自由酸） mM EDTA，PH 7.4)中；添加溶解於f醇中之最終濃度為 100 μΜ的PMSF，且藉由p〇lytr〇n使懸浮液均質化。均質 物在4°C下在18,000 x g下離心2〇分鐘，將所得離心塊再 懸浮於20體積之冰冷水中。在冰上培育6〇分鐘接著藉 由在4°C下在18,000 X g下離心2〇分鐘收集新離心塊。將 最終離心塊再懸浮於1〇體積緩衝液中且儲存於_2(rc下。 自SH-EP1/人類α 4冷2純系細胞製備膜：彙聚來自4〇 個150 mm培養皿之細胞離心塊，且在2〇 mL之冰冷製備型 緩衝液中藉由 P〇lytr〇n( Kinematica GmbH, Switzerland)均 質化。均質物在4eC下在48,000 g下離心20分鐘。將所得 離心塊再懸浮於20 mL之冰冷製備型緩衝液中且儲存於_2〇 °C下。 檢定。在檢定當天，將冷凍之膜解凍且在48〇〇〇 χ g 下旋轉20分鐘。傾析上清液且丟棄。將離心塊再懸浮於達 爾伯克氏磷酸鹽緩衝之生理食鹽水（Duibecco，s phosphate buffered saline，PBS，Life Technologies ) ( pH 7.4)中且 67 201024283 以P〇lytr〇n均質化6秒。使用以牛血清白蛋白作為標準物 之Pi⑽BCA蛋白質檢定套組（Pierce Chemicai公司，

Rockford，IL )測定蛋白質濃度。 在競爭化合物（0.01 ^至1〇〇"M)及5nM[3H]煙鹼 存在下，在冰上之PBS (分別為5”L及刚"L)中培育 膜製劑（人類約5(^g蛋白質且大鼠^万2為2〇〇 3〇〇 蛋白質）歷時2-3 λ|、時。使用在〇 33%聚乙稀亞胺（w/v)

中預浸泡之GF/B過濾器在多流組織採集器（ Gaithersburg，MD )上迅速過濾，藉此終止培育組織在pBs (pH 7.4X中沖洗3次。向含有經洗滌組織之過濾器中添加 閃爍流體且使其達到平衡。接著藉由液體閃爍計數（22〇〇ca

Tr卜Carb LSC，Packard Instruments，50。/。效率，或 Wallac Trilux 1450 MicroBeta，40〇/〇效率，Perkin Elmer )對過濾器 進行計數以測定膜之結合放射能β

數據表示為每分鐘蛻變次數（DPM )。在各檢定内， 各點重複2-3次。對各點之重複值取平均值且針對藥物濃度 之對數繪圖。藉由最小二乘方非線性回歸測定IC5〇，其為產 生50%結合抑制之化合物濃度。使用cheng_prussof等式 (1973 )計算Ki值：

Ki = IC5〇/(l + N/Kd) 其中N為[3H]煙鹼之濃度且Kd為煙鹼之親和力（3 nM ’在單獨實驗中測定）。 實施例18 :在CNS nAChR處之放射性配位艘結合： a 7 NNR亞型 68 201024283 使重15〇·25〇 g之大鼠（雌性’ Sprague_Daw.iey)保持 12小時亮/暗循環，且自由取用由pMI Nutdti〇n

International公司提供之水及食物。以7〇% c〇2麻醉動物，

接著割去頭部。移出腦且置於冰冷平台上。移出海馬體且 置於ίο體積（重量：體積）之冰冷製備型緩衝液（137 mM

NaC卜 10.7 mM KC卜 5.8 mM KH2P〇4，8 mM Na2HP04，20 mM HEPES (自由酸），5 mM 碘乙醯胺，i 6 mM EDTA， pH 7.4)中；添加溶解於甲醇中之最終濃度為100" M的 PMSF，且藉由P〇lytr〇n使組織懸浮液均質化。均質物在4 C下在18,〇〇〇 x g下離心20分鐘，將所得離心塊再懸浮於 1〇趙積之冰冷水中。在冰上培育6〇分鐘，接著藉由在4°c 下在1 8,0〇〇 X g下離心2〇分鐘收集新離心塊。將最終離心 塊再懸浮於10體積緩衝液中且儲存M_2(rc下。在檢定當 天’使組織解凍，在18,〇〇〇 xg下離心2〇分鐘，接著再懸 浮於冰冷PBS (達爾伯克氏磷酸鹽缓衝之生理食鹽水，138

❹ mM NaCl、2.67 mM KC1、1.47 mM KH2P04、8.1 mM

Na2HP04 0.9 mM CaCl2、0.5 mM MgCl2，Invitrogen/Gibco， PH 7,4)中達約2 mg蛋白質/mL的最終濃度。藉由Lowry 等人，乂別0/_ 193: 265 (1951)之方法，使用牛血清白 蛋白作為標準物來測定蛋白質。 使用 Davies 等人，38: 679 (1999)(以 引用的方式併入本文中）之方法針對該方法所作的修正來 量測[H]MLA之結合。自Tocris獲得[3H]MLA (比活性= 25-3 5 Ci/mmol )。使用在21 °C下的2小時培育來測定 69 201024283 [3h]mla之結合。在48孔微量滴定盤中進行培育且在3〇〇 之最終培育鱧積中每孔含有約2〇〇 蛋白質。培育緩 衝液為PBS且[3H]MLA之最終濃度為5nM。藉由在周圍溫 度下使用Brandel組織採集器在玻璃纖維過濾器（（}F/B， Brandel )上過濾含結合配位體之蛋白質來終止結合反應。 將過濾器浸泡於含有〇.33%聚乙烯亞胺之去離子水中以減 少非特異性結合。各過濾器在周圍溫度下以PBs ( 3χ1 mL ) 洗滌。藉由在所選孔中納入50 " Μ非放射性MLA來測定非 特異性結合。 藉由在所選孔中納入7種不同濃度之測試化合物來測 定測試化合物對[3H]MLA結合之抑制作用。各濃度一式三 份重複。以抑制50%特異性[3H]MLA結合之化合物濃度估 算 ic50 值。使用 Cheng 等人，Biochem. Pharmacol. 22: 3099-3108 (1973)之方法’自IC5。值計算以nM形式報導之 抑制常數（Ki值）。

選擇性對比周邊nAChR 實施例19:人類肌肉nAChR亞型處之相互作用 在自胚胎橫紋肌肉瘤產生之人類無性繁殖系TE671 /RD 上建立肌肉型nAChR之活化（Stratton等人，Care i.wogew 10: 899 (1989))。此等細胞表現藥理學（Lukas, Λ P/mrwflc〇/ Exp. Ther. 251: 175 (1989))、電生理學（Oswald 等人， iVewrosd.Zeii. 96: 207 (1989))及分子生物學特徵（Luther 等人，·/. Λ/^Mrosci’. 9: 1082 (1989))與肌肉型 nAChR 類似之 受體。 201024283 根據常規方案，使TE671/RD細胞保持增殖性生長期 (Bencherif 等人，Mo/. CW/. 2: 52 (1991);及

Bencherif 等人，j. _p/jarmaco!. Exp. Ther. 257: 946 (1991))。在具有i〇%馬血清（Gibco/BRL) 、5%胎牛血清 (HyClone，Logan UT) 、1 mM 丙酮酸鈉、4 mM L-麩胺醯 胺及50,000單位青黴素-鍵黴素（streptomycin ) ( Irvine Scientific )之達爾伯克改良伊格爾培養基（Dulbecco， s modified Eagle’ s medium，Gibco/BRL )中培養細胞。當細 D 胞為80%匯合時，將其塗於12孔聚苯乙烯培養盤（Costar) 中。當細胞達到1〇〇〇/0匯合時，進行實驗。 根據 Lukas 等人，175: 212 (1988)所述

之方法，使用86Rb +流出來檢定煙鹼乙醯膽鹼受體（nAChR) 功能。在實驗當天，自孔中小心移除生長培養基，且向各 孔中添加含有氣化86铷（1〇6μ Ci/mL )之生長培養基。細 胞在37°C下培育至少3小時。在裝載期之後，移除過量86Rb+ 且以無標記達爾伯克氏磷酸鹽缓衝之生理食鹽水（mM

NaCl、2·67 mM KC1、1.47 mM KH2PO4、8.1 mM Na2HP04、 0.9 mM CaCl2、0.5 mM MgCh，Invitrogen/Gibco，pH. 7·4) 洗滌細胞2次’小心不要擾動細胞《隨後，使細胞暴露於 100〆Μ測試化合物、1〇〇从μ L-煙鹼（Acros 〇rganics)或 僅緩衝液歷時4分鐘。在暴露期之後，移出含有釋放之86Rb+ 的上清液且轉移至閃爍小瓶中。添加閃爍流體且藉由液體 閃爍計數量測所釋放之放射能。 在各檢定内’各點重複2次，對其取平均值。使86Rb + 71 201024283 之釋放量與陽性對照組（100 μ M L-菸鹼）及陰性對照組（僅 緩衝液）相比較’以測定相對於L-煙鹼之釋放百分比。 適當時，測定測試化合物之劑量反應曲線。將L-煙驗 誘發之最大活化百分比既定為個別化合物之最大活化 (Emax )。亦測定導致特定離子流之半最大活化（EC50 ) 的化合物浪度。 實施例20 ··人類神經節nAChR亞型處之相互作用 細胞系SH-SY5Y為依序次選殖親本細胞系SK-N-SH所 產生之連續細胞系，SK-N-SH最初係獲自人類周邊神經母 ❹ 細胞瘤。SH-SY5Y細胞表現神經節樣nAChR ( Lukas等人，

Mol. Cell. Neurosci. 4: 1 (1993))。 根據常規方案，使人類SH-SY5Y細胞保持增殖性生長 期（Bencherif 等人，Af〇/. Ce//. iVeMrosci. 2: 52 (1991);及 Bencherif 等人，·/. P/iarmaco/. 257: 946 (1991))。 在具有10%馬血清（Gibco/BRL)、5%胎牛血清（HyClone,

Logan UT ) 、1 mM丙酮酸納、4 mM L-麵胺醯胺及50,〇〇〇 ‘單位青黴素-鍵徽素（Irvine Scientific )之達爾伯克改良伊 © 格爾培養基（Gibco/BRL )中培養細胞。當細胞為80%匯合 時’將其塗於12孔聚苯乙烯培養盤（Costar)中。當細胞 達到1 00%匯合時，進行實驗。 根據 Lukas 等人，5/oc/iem· 175: 212 (1988)所述 之方法’使用86Rb+流出來檢定煙鹼乙醯膽鹼受體（nAChR) 功能。在實驗當天，自孔中小心移除生長培養基，且向各 孔中添加含有氣化86铷（1〇6μ ci/mL)之生長培養基。細 72 201024283 胞在37°C下培育至少3小時。在裝載期之後，移除過量“Rb+ 且以無標記達爾伯克氏磷酸鹽緩衝之生理食鹽水（138 mM NaCl ' 2.67 mM KC1 ' 1.47 mM KH2P04'8.1 mM Na2HP04 ' 0.9 mM CaCl2、0.5 mM MgC】2，Invitrogen/Gibco，pH. 7.4) 洗滌細胞2次’小心不要擾動細胞。隨後，使細胞暴露於 100# Μ測試化合物、100# Μ煙鹼或僅緩衝液歷時4分鐘。 在暴露期之後，移出含有釋放之86Rb +的上清液且轉移至閃 爍小瓶中。添加閃爍流體且藉由液體閃爍計數量測所釋放 〇 之放射能。 在各檢定内，各點重複2次，對其取平均值。使86Rb + 之釋放量與陽性對照組（100 y Μ煙鹼）及陰性對照組（僅 緩衝液）相比較，以測定相對於L-煙鹼之釋放百分比。 適當時，測定測試化合物之劑量反應曲線。將L-煙鹼 誘發之最大活化百分比既定為個別化合物之最大活化 (Emax )。亦定義導致特定離子流之半最大活化（ec50 ) 的化合物濃度。 V 實施例21 :新物體辨識 使用三次試驗之新物體辨識測試（Luine等人，

BeAav. 74，213-220 (2002))來評估記憶力。在第 一天（探索試驗），使大鼠探查開放式活動場地（44.5x44.5 x30.5 cm)歷時6分鐘。第二天（獲取試驗），在兩個相同 物體（皆為物體A)存在下使大鼠探查同一活動場地歷時3 分鐘。第三天（保持或回憶試驗），藉由使同一動物在兩 個不同物體存在下再探査活動場地歷時3分鐘來評定表 73 201024283 現：熟悉物體A及新物體B。在三個n〇r試驗之間安插Μ _ 小時之試驗間間隔。藉由比較回憶試驗期間探查新物體（物 趙B)對比熟悉物趙（物體A)所用的時間來評估辨識記情 力。評估各動物之辨識指數且表示為比帛（（時間b/時^ A+時間 Β)χ100) 。 β 實施例22:放射性迷宮空間 在放射性迷宮空間（RAM)任務中評估工作記憶力。 使用自動化八臂迷宮（Med Associates公司）進行ram任 務。迷宮位於地面上方約88 cmi圓形工作台上，具有專 用測試周圍中之頂部照明且壁上具有高對比度的大幾何形 狀。此外’其他視覺線索位於進入各臂中之轂處，在各食 物漏斗上方且在天花板上。中心平台之直徑經量測為3〇 5 cm ’ 自其發散出 8 個臂（9 cm Wx45_7 cm Lxl6.8 cm η)。 自動閘門定位於各跑道入口處，在各臂遠端具有丸粒容 器。在所有訓練及測試程序期間均應可聽到白雜訊。藉由 在電腦介面及監視屏上跟縱定量活動（紅外線光束中斷所 產生）來監測迷宮上之活動。 @ 根據基線評估且在再次達到測試階段標準之後，評估 動物對使用蕈毒鹼拮抗劑莨菪鹼（0.2-0.4 mg/kg ;皮下）以 化學方式誘發之認知障礙的敏感性。基於產生顯著且可靠 的認知障礙之最小劑量來確定莨菪驗之劑量。在獲取期試 驗之前0_5小時投予莨菪鹼，而在回憶（或測試）期試驗開 始之前 0.5小時投予（R)-3-((E)-2-(吡咯啶-3-基）乙婦 基）-5-(四氮哌喃-4-基氧基）《比啶半-半乳糖二酸鹽（〇.〇3 74 201024283 mg/kg ; p.o.)。在獲取試驗中’以恰在臂内且在轂門之後 的Plexiglas障壁阻斷一個隨機選擇之臂。將動物置於迷宮 之中心轂中，放下門。約10秒後，升起7個通向可用臂之 門。在各開口臂之第一入口處增強蔗糖食物丸粒。在所有7 個可用臂均獲得訪問或耗費5分鐘後結束各階段。記錄訪 問各臂之順序、接收之增強物（reinf〇rcer )、錯誤（再進 入）、完成任務之時間、進入7個可用臂所需之進入次數 及時間、及食物增強物消耗。在回憶試驗中，所有8個臂 均可用，然而僅增強對先前阻斷之臂（亦即，在獲取試驗 期間阻斷之臂）的第.一次訪問。一旦先前阻斷之臂獲得訪 問且消耗增強物或耗費5分鐘，則結束各階段。對於回憶 試驗，記錄再進入錯誤、在選擇獲取試驗期間所阻斷之臂 之前進入（錯誤）的臂的數目及完成試驗所用之時間。獲 取期試驗與測試期試驗之間的延遲為24小時》 實施例23 : CYP抑制研究 ❹ 使用螢光cyp檢定來評估（Κ)_3_((Ε)_2·(吡咯啶_3基） 乙烯基）-5-(四氫哌喃_4_基氧基）吡啶或其鹽對cYpiA2、 CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6 * CYp3A4 催化活性之抑制 作用。使用在CYP催化之氧化時發螢光之探針受質來評估 測試基質之抑制程度。對單一濃度之各探針受質（在約表 觀Km值下）及兩種不同濃度之（κ)·3 ((ε)_2 (吡咯啶基） 乙烯基）-5-(四氫哌喃·4_基氧基）β比啶半_半乳糖二酸鹽（2及 WM)進行雙重複測試。所選波長下之勞光強度用作酶活 性之量度。在（R)-3-((E)-2十比嘻咬_3_基）乙烯基）5(四氣娘 75 201024283 喃-4-基氧基）吡啶或其鹽存在下降低之螢光指示抑制作 用。同時進行陽性對照組（已知抑制劑）以證實方法控制 及CYP活性。與陽性對照組及陰性對照組一起運作雙重複 樣本。在37°C下培育測試樣本。表2中概述實驗參數。 表2 :螢光CYP抑制檢定之實驗條件 CYP1A2 CYP2C9 CYP2C19 CYP2D6 CYP3A4 錄的量（pmol/孔） 1 2 2 3 1 探針受質 20 μΜ 3 μΜΟΕΟ 75pMMFC 100 μΜ MFC MAMC 15 μΜ BFC KP〇4, pH 7.4 0.1 Μ 0.05M 0.05 Μ 0.1 Μ 0.1 Μ NADPH濃度 1 mM 1 mM 1 mM 0.06 mM 1 mM 培育時間 20分鐘 50分鐘 40分鐘 35分鐘 30分鐘 Εχ/Ειηλ (nm) 405/460 405/530 405/530 390/460 405/530 增益 20 40 30 10 50 參考抑制劑 呋拉茶鹼 磺胺苯唑 反苯環丙胺 奎尼丁 嗣康嗤 (Furafylline) (Sulfaphenazole) (Tranylcypromine) (Quinidine) (Ketoconazole) 預期信哚比 15 〜25 3~5 3〜5 3〜6 4-15 參今抑制舞丨之ICs〇 (μΜ) 〜1 〜1 〜6 -0.01 -0.06 CEC = 3-氰基-7 -乙氧基- 香豆素 〇

Q MFC = 7-甲氧基_4·三氟甲基·香豆素 MAMC = 7-甲氧基_4-(胺基甲基）-香豆素 BFC = 7-苯甲氧基_4_三氟曱基_香豆素 76 201024283 生物數據概述 試管内藥理學 表3中提出（R)-3-((E)-2-(»比咯啶-3-基）乙烯基）-5-(四氫 0辰喃-4-基氧基）吡啶或其鹽之試管内主要藥理學數據的概 述.且在下文中詳細論述。 主##滢笋及逮淨迷·.使用SH-EP1細胞膜中表現之人 類重組α4卢2受體及大鼠皮質膜中之大鼠受 體，以受體結合抑制檢定測定（r)-3-((E)-2-(吡咯啶-3-基）乙 0¾ 烯基）-5-(四氫哌喃-4-基氧基）》比啶或其鹽與α 4/3 2受體結 合之能力。 (R)-3-((E)-2-(^b咯啶-3-基）乙烯基）_5-(四氫哌喃-4-基 氧基）°比咬或其鹽以2 nM的Ki抑制[3H]-煙鹼與人類重組α 4/5 2煙鹼受體之結合，且以4 ηΜ之Ki抑制[3Η]地棘蛙素 (epibatidine )與大鼠原生a4yS2受體之結合。 (R)-3-((E)-2-(吼咯啶-3-基）乙烯基）_5_(四氫哌喃_4_基 ⑬ 氧基）°比咬或其鹽在大鼠海馬膜中以>1〇〇〇〇 nM之Ki抑制 [H]甲基牛扁驗（MLA )與大鼠原生α7受體之結合。 (R)-3-((E)-2-(吼咯啶_3_基）乙烯基）·5_(四氩哌喃_4_基氧基） 吡啶或其鹽亦展現對人類原生神經節型煙鹼受體（如 4)之親和力降低，在SH-SY5Y膜中以3400 ηΜ之Ki抑制 [3H]地棘蛙素與受體之結合；及對人類原生肌肉型煙鹼受體 (如占）之親和力降低，在TE 671膜中以25〇〇〇 nM之Ki抑制[3h]地棘蛙素與受體之結合。 77 201024283 表3. (R)-3-(2-(吡咯啶-3-基）乙烯基）-5-((四氩-2H-哌喃 -4-基）氧基）吡啶或其鹽之試管内藥理學的概述 目標親和力及活化________— — ______________ 大鼠皮質結合Ki———_______________________________________________________________4nM_______________— 人類重組（SH-EP 1) 〇4/32 結合 iQ_______ — ________ 2 nM ________________

大鼠海馬體{〇〇) ' Kj — —— _______________________________________——— >10000 nM 人類神經節(S^SYSYJj Ki —— — ————_______________________3400 nM — 人類（TE671/RD )H ^__________—— — _ ____________— ———25 μΜ — ❹ (SH-EP 1 ) ^^_EC50 » Emax (Ca 毪量）—0.1 μΜ, 76% 人類神經節（SH-SY5Y) ’ EC50，Emax (Ca 通量） 11 μΜ, 13% 人類（TE671/RD) &肉」EC50，Emax ( Ca 通量） 13 μΜ, 37% 多受體篩選檢定 僅煙鹼 知虑衫放.*此等研究之目的在於測定（R)-3-((E)-2-(吡咯 啶-3-基）乙烯基）-5-(四氫哌喃-4-基氧基）°比啶或其鹽對人類 重組α 4卢2受體之功能活性。（R)-3-((E)-2-(吡咯啶-3-基） 乙烯基）-5-(四氫哌喃-4-基氧基）吼啶或其鹽為活化受體之 a4yS2煙驗促效劑，其在約通量檢定中相對於10//M煙驗 對在29°C下培育24小時後之SH-EP1/人類a4yS2細胞具有 0· 1 Μ 之 EC5G 及 76%之 Emax。 在神經節及肌肉型煙鹼受體離子流檢定中測試 (R)-3-((E)-2-(°比咯啶-3-基）乙烯基）-5-(四氫哌喃-4-基氧基） 11比咬或其鹽，由此檢驗功能選擇性。在Ca++流出檢定中， (R)-3-((E)-2-(n比咯啶-3-基）乙烯基）-5-(四氫哌喃-4-基氧基） 吡啶或其鹽在SH-SY5Y細胞中對人類原生神經節受體具有 11// Μ之EC50及13%之Emax，在TE-671細胞中對人類原 生肌肉受體具有13//M之EC50及37%之Emax。 78 201024283 « 試管内次要藥理學：多受髏篩選檢定 測試（R)-3-((E)-2-(吡咯啶_3_基）乙烯基）_5_(四氫哌喃 -4-基氧基）吡啶或其鹽針對一組65種受體之選擇性。在 之單一漠度下，（R)-3-((E)-2_(吡咯啶基）乙烯 基）-5-(四氫哌喃基氧基）吼啶或其鹽僅抑制經標記配位 體與神經元煙鹼受體（α _ΒηΤχ不敏感）之結合，達99%抑 制。 對hERG之抑制作用 ® 測得（R)-3-((E)-2·吡咯啶_3_基乙烯基）(四氫_211_哌 喃-4-基氧基）吡啶或其鹽對hERG (人類HEK 239細胞）之 抑制作用的IC50為84βΜ。 活艎内蕖理學 如正常大鼠中經口給藥後的新物體辨識（nor )任務 所評估，（R)-3-((E)-2-(n比咯啶·3_基）乙烯基）_5_(四氫哌喃_4_ 基氧基）》比咬或其鹽會改良長期視覺情景性/表述性記憶 ©力。此等研究之結果呈現於圖1中。媒劑處理組在獲取試 驗後24小時的辨識指數為50±0·5%，證實此組在此延遲後 不能辨識熟悉物體（左圖）。相反，以（r)_3_((e)_2-(i>比咯唆 -3-基）乙稀基）-5-(四氛略喘-4-基氧基）<»比咬或其鹽處理之動 物在0.04 μ mol/kg劑量下展現71±2%之辨識指數，且在υ M mol/kg劑量下展現61±3%之辨識指數（左圖）。在追蹤 NOR研究（實驗程序與第一 NOR研究中所用相同）中，測 得（R)-3-((E)-2-( °比洛咬-3-基）乙稀基）_5_(四氫β底喃_4-基氧 基）°比啶或其鹽之最小有效劑量（MED)為〇.〇〇4emol/kg 79 201024283 (右圖），表明大鼠在所有測試劑量下均能夠辨識熟悉物 體。在兩個「僅回憶」階段中，在第！天（亦即探索階段） 及第2天（亦即獲取階段）向動物子組經口給予水，接著 在第3天（亦即回憶階段）經口給予夏丨#则丨/“ (R)-3-(⑻-2十比略咬基）乙烯基）_5 (四氫哌喃·4基氧基） 吡啶或其鹽（左圖）或0.04 μ mol/kg (右圖）。甚至在單次 經口投予後’（r)_3-((e)-2十比咯咬_3_基）乙烯基）_5_(四氫〇辰 喃-4 -基氧基）吡啶或其鹽亦在此兩個劑量下顯示促認知作 用。在此兩個劑量下，（R)_3_((E)_2_(e比咯啶_3基）乙烯 基）-5-(四氫哌喃_4_基氧基比啶或其鹽展現顯著高於對照 組之辨識指數，表明在急性給藥後辨識熟悉物體。圖中， 65%處之虛線表明生物學認知增強活性之主觀標準。< 0.05 〇 評估（R)-3-((E)-2-(吼咯啶_3_基）乙烯基）_5_(四氫哌味 基氧基）》比啶或其鹽在正常大鼠中在n〇r任務中的作用 持續時間。此等研究之結果呈現於圖2中。回憶試驗時， 在給藥後0.5小時，媒劑處理組之辨識指數為52±〇 8%，表 明此組在此延遲後不能辨識熟悉物體。相反，以 (R)_3_((E)-2-(°比嘻01 -3-基）乙烯基）-5-(四氫娘$ _4_基氧基） 比咬或其鹽處理之動物（0.004 v mol/kg :經口）在〇.5小時 展現72±2%之辨識指數’在6小時展現70±3%之辨識指數 且在8小時展現7〇±4%之辨識指數，表明大鼠在給藥後至 多8小時能夠辨識熟悉物體。圖中，65%處之虛線表明生物 學認知増強活性之主觀標準（*P< 0.05)。 201024283 在此等研究之基礎上，當在包括相對較低劑量之廣泛 範圍内給予（R)-3-((E)_2_(,比咯啶_3基）乙烯基）5 (四氫哌 喃-4-基氧基）吡啶或其鹽時，合理藥理學作用為可能的。本 發明之一具體實例係關於以低至約〇 〇〇4 # m〇1/kg的經口劑 量給予（R)-3_((E)-2-(吡咯啶·3_基）乙烯基）·5_(四氫哌喃_4_ 基氧基）吡啶或其醫藥上可接受之鹽。本發明之一具體實例 係關於小於100 mg ’較佳小於50 mg，更佳小於1〇 mg，且 最佳小於1 mg之經口劑量。此等有效劑量典型地表示以單 ® 獨劑量投予之量，或作為一或多個投予劑量經24小時時段 投予之量。 放射性迷宮空間（RAM)研究 在第二認知檢定中，在工作記憶力之動物模型中， (R)-3-((E)-2-(»比略咬_3_基）乙烯基）_5_(四氫哌味_4•基氧基） 。比啶或其鹽會減弱由莨菪鹼誘發之認知缺乏。此等實驗之 結果說明於圖3中。在獲取試驗期間，使大鼠進入8個臂 ©中之7個’而在測試試驗中，所有8個臂均可用，然而， 僅增強先前阻斷之臂（亦即在獲取試驗期間阻斷之臂）的 第一次訪問。在獲取試驗之前〇 5小時投予莨菪鹼（O.hO.i mg/kg ;皮下）’且在測試試驗之前0.5小時投予 (R)-3-((E)-2-(°比咯啶·3-基）乙烯基）_5_(四氫哌喃_4_基氧基） 0比咬或其鹽（.0.03 mg/kg 或 0.1 # mol/kg ; ρ.ο.).。 (R)-3-((E)-2-(n比咯啶_3_基）乙烯基）_5_(四氫哌喃_4_基氧基） °比啶或其鹽能夠逆轉由莨菪鹼誘發之認知缺乏（*P < 0.05) » 81 201024283 人類細胞色素P450 ( CYP )抑制、誘發、輸送及藥物-藥物相互作用潛力 使用螢光受質及重組酶進行之CYP450抑制檢定顯 示，無跡象表明（R)-3-((E)-2-(«比咯啶-3-基）乙烯基）-5-(四氫 哌喃-4-基氡基）吡啶或其鹽會抑制5種主要的CYP( IC5〇 >20 μΜ，表4)。此外，亦無跡象表明CYP3A4、CYP2D6、 CYP2B6、CYP2C9或CYP1Α2之時間依賴性抑制作用。在 至多1〇// Μ下未觀測到（R)-3-((E)-2-(吡咯啶-3-基）乙烯 基）-5-(四氫哌喃-4-基氧基）吡啶的PXR (孕甾烧X受體）活 ❹ 化，因此，咸信可忽略與P450誘發有關之風險。 表4 CYP 抑制 ICS。（μΜ) CYP介導之代謝 1A2 >20 3A4 >20 2C9 >20 2C19 -------- >20 2D6 >20

(R)-3-((E)-2-(吡咯啶_3·基）乙烯基）_5•(四氳哌喃_4基 氧基h比啶或其鹽在人類肝臟微粒體或肝細胞中展現低的肝 轉換速率。初步表型數據表明，CYP2D6& FM〇3皆有助於 (R)-3_((E)-2-(吼咯啶-3-基）乙烯基）_5_(四氳哌喃_4基氧基） 対或其鹽之代謝。此外，預期腎清除為主要消除途徑， 分攤人體内超過50%之總清除。因此，因為存在顯著腎清 除及低肝清除，故預期（R)-3_((E)_2_(吡咯啶_3基）乙= 82 201024283 基)-5-(四氫哌K基氧基)吡啶或其鹽在人體内之代謝由 於CYP多形現象而造成的任何變化均小於2倍。 用於本文所述實驗之測試化合物以自由形式或鹽形式 使用，且若未另外說明，則測試化合物為（叫3侧_2十比嘻 咬·3_基）乙稀基）_5_(四氫娘嗔_4_基氧基）β比咬半-半乳 酸鹽。 一 ❹ 所觀測到之特定藥理學反應可根據且依賴於所選擇的 特定活性化合物或是否存在醫藥載劑，以及所用醫藥 物：：型及投予模式而發生改變，且結果中之該等預期變 化或差異涵蓋於本發明之實踐中。 儘g本文詳細說明且描述本發明之特定具體實例但 本發明不限於此。上文之【實施方式】以本發明之例示形 式提供且不應理解為構成任何限制。修正對熟習此項技術 者而言將為顯而易見的，且不悖離本發明精神之所有修正 均欲包括於隨附申請專利範圍之範疇中。 ^ 【圖式簡單說明】 圖1描繪（R)-3-((E)_2十比洛咬基）乙缔基）_5_(四氫哌 喃-4-基氧基)吡啶或其鹽（下文稱為化合物A)之 識（NOR )對劑量的圖。針對低至〇 〇〇4 " 之劑 到統計學有意義的作用。 ' 圖2描綠在〇.004从M/kg之劑量下，（r) 3 (⑻·2十比咯 咬-3-基）乙烯基）_5_(四氫㈣_4_基氧基）〇比咬或其鹽（化人 物A)之新物體辨識（N〇R)對時間的圖。給藥 ： 測到統计學有意義的作用。 83 201024283 圖3描繪放射性迷宮空間（RAM )研究之結果，其中 (R)-3-((E)-2-(°比咯啶-3-基）乙烯基）-5-(四氫哌喃-4-基氧基） °比啶或其鹽（化合物A)在放射性迷宮空間中克服莨菪鹼誘 發之不足。 【主要元件符號說明】 無

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Claims (1)

1. 201024283 ·< 七、申請專利範圍： 1·一種（R)-3-((E)-2-(吼洛咬义基）乙婦基）5_(四氫娘唉 -4-基氧基）"比啶單-L-蘋果酸鹽，或其水合物或溶劑合物。 2. -種（R)-3-(⑻-2十比②嘴_3_基）乙埽基）_5_(四氣娘嗔 •4-基氧基）》比唆半_半乳糖二酸鹽，或其水合物或溶劑合物。 3. -種（R)-3-((E)-2十比嘻嘴.:^基）乙婦基）_5_(四氫娘淹 -4-基氧基）吡啶乙二酸鹽，或其水合物或溶劑合物。 4. 一種（R)-3-((E)-2十比略咬_3_基）乙烯基）_5_(四氫哌喃 © _4·基氧基）啦咬二_對甲苯甲酿基_d_酒石酸鹽，或其水合物 或溶劑合物。 5. —種（R)-3-((E)-2-(ntt咯咬_3 —基）乙烯基）_5_(四氫哌喃 -4·基氧基”比咬或其醫藥上可接受之鹽其實質上不含 ()((E)2(比咯啶_3_基）乙烯基）_5_(四氫哌嗔_4基氧基） 6·-種醫藥组成物，其包含如申請專利範圍帛J項至第 〇 5項中任一項之化合物，及一或多種醫藥上可接受之佐 栽劑或賦形劑。 7.如申請專利範圍第6項之醫藥組成物，其進一步包含 一或多種額外治療劑。 …8.一種化合物（R)-3·(⑻_2十比㈣-3-基）乙烯基)_5•(四 聽K基氧基）㈣單·L•蘋果酸鹽或半.半乳糖二酸鹽或 或二-對甲苯甲…酒石酸鹽，其係用作治療 介導之病症的藥物。 9.如申請專利範圍第8項之化合物，其中該病症係選自 85 201024283 由CNS病症、發炎、與細.菌及/或病毒感染有關之發炎性反 應、疼痛、代謝症候群、自體免疫病症組成之群。 10·如申請專利範圍第9項之化合物，其中該CNS病症 係選自精神分裂症之認知功能障礙（CDS )、阿茲海默氏病 (AlZheimersDisease，AD)、注意力不足症（add)、初 老期癡呆（阿茲海默氏病早期發作）、阿茲海默型癡呆、 輕度認知障礙、年齡相關之記憶障礙及注意力不足過動症 (ADHD)。 11. 如申請專利範圍第8項至第1〇項中任一項之化合 0 物，其中該（R)-3-((E)-2-(»比咯啶_3_基）乙烯基）_5_(四氫哌喃 -4-基氧基）吡啶係以其單_L•蘋果酸鹽、半_半乳糖二酸鹽、 乙一酸鹽或二-對甲笨甲醯基_D•酒石酸鹽形式提供。 12. —種醫藥組成物，其係用於治療或預防NNR介導之 病症，其包含治療有效量之（R)_3_((E)_2_(a比咯啶_3_基）乙烯 基）-5-(四氫哌喃-4-基氧基）吡啶或其醫藥上可接受之鹽。 13_如申請專利範圍第12項之醫藥組成物，其中該病症 係選自由CNS病症、發炎、與細菌及/或病毒感染有關之發 ◎ 炎性反應、疼痛、代謝症候群、自體免疫病症組成之群。 14. 如申請專利範圍第13項之醫藥組成物，其中該cns 病症係選自精神分裂症之認知功能障礙（CDS )、阿茲海默 氏病（AD )、注意力不足症（ADD )、初老期癡呆（阿茲 海默氏病早期發作）、阿茲海默型癡呆、輕度認知障礙、 年齡相關之記憶障礙及注意力不足過動症（ADHD )。 15. 如申請專利範圍第12項之醫藥組成物，其包含 86 201024283 (R)-3-((E)-2-(»比咯啶-3-基）乙烯基）-5-(四氫哌喃-4-基氧基） °比咬或其醫藥上可接受之鹽，其量介於7至2200以g/kg之 間。 16. 如申請專利範園第12項之醫藥組成物，其提供量介 於7至2200以g/kg之間的（R)_3_((E)_2_(吡咯啶-3_基）乙烯 基）-5-(四氫哌喃·4_基氧基）n比啶或其醫藥上可接受之鹽以 供投予。 17. 如申請專利範圍第12項至第16項中任一項之醫藥 © 組成物’其中該（R)_3_((E)_2_(吼咯啶_3_基）乙烯基）5(四氫 0底味-4-基氧基）吡啶係以其單_L_蘋果酸鹽、半-半乳糖二酸 鹽、乙二酸鹽或二-對甲苯甲酿基_D-酒石酸鹽形式提供。 W· —種化合物〇比咯啶_3_基）乙稀 基）-5-(四氫哌喃-4-基氧基比啶或其醫藥上可接受之鹽的 用途，其係用於製備用以治療或預防NNR介導之病症的藥 物。 19. 如申請專利範圍第is項之用途，其中該病症係選自 由CNS病症、發炎、與細菌及/或病毒感染有關之發炎性反 應、疼痛、代謝症候群、自體免疫病症組成之群。 20. 如申請專利範圍第ip項之用途，其中該CNS病症 係選自精神分裂症之認知功能障礙（CDS )、阿茲海默氏病 (AD )、注意力不足症（add )、初老期癡呆（阿茲海默 氏病早期發作）、阿茲海默型癡呆、輕度認知障礙、年齡 相關之記憶障礙及注意力不足過動症（ADHD )。 21. 如申請專利範圍第 μ項之用途，其中（R)-3- 87 201024283 ((E)-2-(°比咯啶-3-基）乙烯基）_5-(四氫哌喃-4-基氧基）"比啶 或其醫藥上可接受之鹽的量介於7至2200 μ g/kg之間。 22. 如申請專利範圍第18項之用途，其中該藥物提供量 介於7至2200以g/kg之間的（r)-3-((E)-2-(吡咯啶-3-基）乙烯 基）-5-(四氫哌喃-4-基氧基）吼啶或其醫藥上可接受之鹽以 供投予。 23. 如申請專利範圍第18項至第22項中任一項之用 途’其中該（R)-3-((E)-2-(n比洛咬-3-基）乙稀基）-5-(四氫略味 -4-基氧基）吡啶係以其單_L-蘋果酸鹽、半•半乳糖二酸鹽、 ❹ 乙二酸鹽或二-對甲苯甲醯基酒石酸鹽形式提供。 24. —種相對於異構體（κ)_3·((ζ)·2_(吡咯啶-3基）乙締 基）-5-(四氫π辰喊_4_基氧基）η比唆及（R)_3_(l_(n比洛变_3_基）乙 烯基）-5-(四氫哌喃-4-基氧基）》比啶純化咯 啶-3-基）乙烯基）-5-(四氫哌喃_4_基氧基比啶之方法，其係 藉由使自由鹼轉化成乙二酸鹽且再生來進行。 25. —種化合物’其係選自： (R)-2-(l-(第三丁氧羰基）吡咯啶_3_基）丙二酸二乙酯·， ❹ (R)-2-(l-(第三丁氧羰基）吡咯啶_3_基）丙二酸； (R)-3-(2-羥基乙基）吡咯啶_丨·甲酸第三丁酯；及 (R)-3-(2-碘乙基）吡咯啶d-甲酸第三丁酯。 26. —種製備（R)-3-((E)-2-(吼咯啶-3_基）乙烯基）5 (四 氫哌喃-4-基氧基）》比啶之方法，其係經由（r)_2 (i_(第三丁氧 羰基）吡咯啶-3-基）丙二酸二乙酯、（R)2(1 (第三丁氧羰基） 吡咯啶-3·基）丙二酸、（R)_3_(2_羥基乙基）吡咯啶“甲酸第 88 201024283 « 三丁酯及（R)-3-(2-碘乙基）吡咯啶-1-甲酸第三丁醋中之一或 多者的中間性製備。 2 7·—種製備（R)-3-乙烯基吡咯啶-1-甲酸第三丁酿之方 法’其係經由（R)-2-(l-(第三丁氧羰基）吡咯啶-3-基）丙二酸 —乙醋、（R)-2_(l-(第三丁氧幾基比u各唆-3-基）丙二酸、 (R)-3-(2-羥基乙基）吡咯啶-1-曱酸第三丁酯及（r)_3_(2 •峨乙 基）吡咯啶-1-甲酸第三丁酯中之一或多者的中間性製備。 ❽八、圖式： (如次頁）

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