TW200948290A - American cranberry extract and its use - Google Patents

Description

200948290 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於一種衍生自越橘屬（Facc/wiwm )的萃取 物並關於用於獲得此萃取物的方法。此富含原花青素 (proanthocyanidin )的萃取物可用作為膳食或保健製劑。 【先前技術】 大果蔓越莓〔Facchz’wm wacrocarpow Aiton (大果蔓越 ® 橘）〕是一種或多或少不超過30 cm的小型爬行灌木，大 果蔓越莓僅在北美東邊的南北卡羅萊納州到加拿大間自發 性地生長。它在貧瘠潮濕的酸性土壌上，在泥炭沼澤、渥 原當中、或在針葉林裡茂盛地生長。果實是尺寸為直徑1〇 至20 mm的小型漿果。成熟時，其顏色為鮮紅色而味道略 為酸澀。 ❹ 在北美將大果蔓越橘普遍作為食品攝食已有數百年。 :果蔓越橘並不包含任何可疑數量之帶有習知毒性的成 ^而且攝食大果蔓越橘後也沒有意外事件被報導。在尋 *劑量時’不良影響是报少見的。消化道疾病係構成臨床 研究期間所提到有害影響的主要原因。該等疾病是在攝取 、量（4么升/日）果汁時發生且尤其導致腹瀉和胃腸疼痛 (Blumenthal Μ 笙 / Α ^ 4人，ABC草藥臨床指南（The ABC clinical herbs )，美國植物協會（八咖⑽ c〇職i〇奥斯丁，德州，咖，pp 73·83)。

橘的特徵是其富含類黃酮，最特別的是富含A 3 200948290 型原花青素募聚物—是在食用植物當中彼少遇到的一族化 合物。 縮合單寧酸或原花青素是黃烷醇單元一例如兒茶素、 表兒茶素及其衍生物—的聚合酚化合物。 對該漿果的治療用途所報導的第一項資訊被認為追溯 到Π世紀。美洲印地安人似乎已將其以糊藥形式塗在傷口 上。隨後，航海者與殖民者使用其預防壞血病並用於治療 各式各樣的症狀··循環障礙和肝病變、胃痛、發燒及類似 症狀（Blumenthal等人，2003 ) ^使用大果蔓越橘治療泌 尿道感染係於超過一百年前在美國出版的文章中被提及。 在1984年發現到將大果蔓越橘果汁以口服投予小鼠14 天會產生能夠強力抑制大腸桿菌的泌尿道致病株附著至泌 尿道上皮細胞的尿液（Sobota A.E.，以大果蔓越橘汁抑制細 菌附著：作為治療泌尿道感染之潛在用途（Inhibiti〇n 〇f bacterial adherence by cranberry juice ： potential use for the treatment of urinary tract infections. ) , J. Urol, 1984, 131, 5，1013-6)。 越橘屬的其他物種一尤其是歐洲越橘（藍每）—具有 尚濃度原花青素的部份被認為擁有類似活性（H〇weii a. B. 等人，藉由從大果蔓越橘萃取之原花青素抑制p —毛緣之大 腸桿菌附著於泌尿道上皮細胞表面（Inhibition of the adherence of P-fimbriated Escherichia coli to uroepithelial-cell surfaces by proanthocyanidin extracts from cranberries) , New Eng. J. Med., 1998, 339. 15, 1085 ; 200948290

Ofek L·等人，抗大腸桿菌附著活性之大果蔓越橘與藍莓汁 (Anti-Escherichia c〇H adhesion activity of cranberry and blueberry juices. ) , New Eng. J. Med, 1991, 324, 22, 1599)。 富含原花青素的大果蔓越莓漿果萃取物抑制泌尿道致 病性大腸桿菌菌株附著至泌尿道上皮細胞的能力係於介於 10與50 pg/ml之間的濃度已在試管内觀察到（H〇wel丨等 人，1998)。 ® 在加拿大進行的一項研究期間，含有大果蔓越橘脫水 果汁的錠片形式被認為比蔓越橘汁更受到偏好，因為遵循 治療到結束的情形較好’果汁有股某些個體不是很喜歡的 味道（Stothers L.，評估將自然療法的大果蔓越橘產品作為預 防女性泌尿道感染之有效性與成本效益之隨機試驗（A randomised trial to evaluate effectiveness and cost effectiveness of naturopathic cranberry products as Pr°Phylaxis against urinary tract infection in women.) Ca«· /. C/ro/, 2002,殳，3，1558-62)。 然而，該等錠片的低原花青素劑量迫使病患需每天攝 取數錠’使得此治療冗長繁靖。 在2004年4月6曰的2〇〇3-SA-0352意見書中，法國食 品衛生安全局（AFSSA)(法國食品安全局）核准了下列 主張：「大果蔓越莓果實的濃縮果汁或果汁粉末係有助於 減少特定大腸桿菌細菌附著至泌尿道内壁（"Le concentre du la p〇udre de jus de fruits de Vaccinium 5 200948290 macrocarpon contribue a diminuer la fixation de certaines bacteries Escherichia coli sur les parois des voies urinaires”）」（大果蔓越莓果實的濃縮果汁或果汁粉末係 有助於減少特定大腸桿菌細菌附著至泌尿道内壁）。AFSSA 於是認為「有助於減少特定大腸桿菌細菌附著至泌尿道内 壁("contribue a diminuer la fixation de certaines bacteries E. coli sur les parois des voies urinaires")」（有助於減少 特定大腸桿菌細菌附著至泌尿道内壁）的主張就新鮮/冷珠 蔓越橘與蔓越橘果泥而言是可接受的，前提是該產品有提 ❹ 供至少36 mg原花青素的每日攝取份量（AFSSA，2007)。 因此，對於一種以蔓越橘為基質、富含原花青素的組 成物仍有需求，人們容易在每日劑量中攝取該組成物，而 沒有關於欲攝食產品的味道或關於服食鍵片數量對此病患 而言太過繁重的治療限制，使得容易每日遵循該治療。 【發明内容】 本申請案已發展新穎的越橘屬萃取物，其構成本發明 ❹ 之主旨。 本發明之主旨亦為獲得此部份的方法。 另一主旨係在於此萃取物作為膳食或保健補充品之應 用。 … 其他主旨將在閱讀以下發明說明與實施例時浮現。 【實施方式】 6 200948290 根據本發明之萃取物得粉& 係订生自越橘屬植物，該萃取物 係包含相對於萃取物乾烤會暑夕= 錁菫量之以原矢車菊素C1 (procyanidin C1)當量表示的至少 町主/ 15重量％原花青素。 較佳地，該越橘屬植物為大果蔓 木愛鵝苺或大果蔓越橘。 此萃取物係較佳從此植物的漿果獲得。 較佳地，此萃取物係含有相對於萃取物乾燥重量之從 果實獲得的多於5%的糖。 較佳地，此萃取物係具有大於5夕；s#主* 人 八方八7、）之原花青素平均聚合 ❹度（也就是說單寧酸鏈的平均長度）。 更佳地’此聚合度係大於6。又更佳地’本發明之萃取 物内的原t青素平均聚合度係大於8。 —較佳地，此蔓越橘萃取物係保留和蔓越橘果汁所具之 花青素完全相同的一定量花青素。 由於用於製造根據本發明之富含原花青素的萃取物的 方法並未改變蔓越橘的花青素比例，所以該蔓越橘萃取物 ◎的此項特性於是仍和處理前的果汁所具者相近。 用於製造根據本發明之萃取物的方法之特徵係在於將 大果蔓越橘果實置於水溶液中、在於進行固體_液體分離作 用、在於添加有機溶劑且隨後在於將所獲得產物脫水，以 獲得根據本發明之萃取物。 較佳地’該水溶液的pH係介於2與6之間，溫度係低 於95 °C且壓力係介於1與3個大氣壓之間。 視情況而定’亞硫酸鹽或亞硫酸氫鹽係在水性萃取相 期間以介於水溶液的〇.〇1與1體積％之間的濃度添加且較 200948290 佳以0.3%的濃度添加。可使用亞硫酸鈉亞硫酸鈣、亞硫 酸鉀、亞硫酸氫鈉、或亞硫酸氫鉀。 藉由其抗氧化與防腐作用，亞硫酸鹽或亞硫酸氮鹽係 有助於在製造過程期間保留根據本發明之萃取物的活性。 車乂佳也固體-液體分離作用係於介於2與7之間的 PH、於介於15與7〇。。之間的溫度及於介於】肖15個大 氣壓之間的壓力下進行。 較佳地該有機溶劑係以相對於水溶液中蔓越橘體積 的0至15體積之比例添加。 較佳地，所使用的有機溶劑為醇、醛、或酯。 更佳地，所添加的有機溶劑為乙醇、乙醛'或乙酸乙 酯。 所獲得產物係較佳於減壓下，也就是說低於i個大氣 壓，於少於6〇 °C之溫度脫水。 視情況而定，最終脫水步驟係於介於8〇與〗之間 的溫度及於介於〇.5與2個大氣壓之間的壓力進行。 本發明之萃取物係藉由上文所說明的方法獲得。 具有所列示特徵、根據上述方法可獲得的此大果蔓越 橘萃取物可用作為膳食或保健補充品。 根據本發明之富含原花青素的萃取物係具有預防細菌 —更尤其是大腸桿菌細菌—黏附至泌尿道内壁表面的特 徵。 本發明之主旨亦為一種組成物，該組成物係尤其包含 上文所說明之富含原花青素的萃取物。 200948290 根據本發明 本發明之組成物 提供。 之組成物可以攝食。根據投予模式，根據 可以慣常用於保健方面之食品的所有形式 根據本發明之組成物尤其可以明膝 或飲品㈣錢供。 ^粉末 本發明之保健或辭組成物係根據彼等之預期應用而 以％用方式調配。 ❹ 下列實施例係例示本發明，但不以任何方式偈限本發 明0 實施例1 .用於製造根據本發明之AFCANN9030萃取 物的方法 以每5份體積的水對上一份體積的漿果的份量將大果 蔓越橘置於溶液的水相中。在於25 t之溫度研磨並藉由傾 析將固體液體分離之後，於2〇 t之溫度、4 5之pH值、丨atm 之壓力下、以水溶液中每一份體積的蔓越橘對上5份體積 Q的乙酸酯的份量加入乙酸乙酯，然後將所得兩相分開。隨 後在0.1至0.5 atm之減壓下、於30至40 〇c之溫度進行脫 水’然後在0.9至1.5 atm之壓力與145 °C之溫度進行第二 次脫水。 所獲得的AFCANN9030產物為紫色粉末。 實施例2 :化驗所獲得AFCANN9030萃取物的原花青 素 使用經由波特（Porter )修改過的用於化驗原花青素的 貝特-史密斯方法（Bate-Smith method ) ( Bate-Smith E. C. 200948290

Phytochemistry, 1973，12, pp907-912 以及 porter L j 等人， Phytochemistry, 1986, 25, 223-230)。 化驗反應係以兩階段進行。在第一個場合中，黃烧_ 3 _ 醇聚合物在丁醇-HC1介質中被水解。待水解完成，釋出兒 茶素與表兒茶素類型的單體。第二個化驗步驟係為在FeIIi 的作用下氧化該等單體。氧化產物為矢車菊素（cyanidin ) 並使用光譜儀於541 nm定量。 貝特-史密斯試劑係藉由混合35%濃度的500 mL HC1、 500 mL 正 丁醇與 150mgFe2(SO4)3 製備。 將100 mg大果蔓越橘萃取物溶於去離子水與乙醇重量 1/1的100 mL混合物中。在第一試管中將2 mL此溶液和6 mL貝特-史密斯試劑混合。將該溶液的一半轉至第二試管。 將第一試管置於暗處，同時使第二試管在溫度為1〇〇。〇的水 浴上加熱30分鐘且隨後置於暗處1〇分鐘。以去離子水作 為空白，在541 nm進行該兩試管的吸收值（〇D)測量。 結果係根據下列方程式以原花青素Ci當量表示。 %原花青素=

C『OD541 試管 541 試管 11-0 0183) xlOO 5.1407 X以g/L表示的萃取物濃度 AFCANN9030萃取物的原花青素濃度係測量為3〇% 土 2 ’其係以原花青素c 1當量表示。 值得注意的是原花青素的定量有考慮到一開始就存在 於介質中的花青素，由於該等花青素所造成的吸收係從波 特反應之後所讀到的吸收中減去。 200948290 ❹ 實施例3 :實施例1之萃取物（AFCANN9030)的定性 實施例1的萃取物 °/〇原花青素eq原矢車菊素C 1 30.5% % TPP eci 兒茶素（UV 280 nm ) 17.3% %黃烷醇eq芸香素（UV 354 nm) 2.4% %黃烷醇eq槲皮素（UV 354 nm) 1.4% 果糖（批次3808001 ) 24.4 mg/g 葡萄糖（批次3808001 ) 110.8 mg/g 蔗糖（批次3808001 ) ND 總乾燥殘渣 97.5% 蛋白質（Ν*6·25 ) 2.7% 杜馬斯法（Dumas ) 藉由水解之脂肪物質 <1% 無機物質 2.4% 總膳食纖維 13.5% ❹ eq :當量 TPP :多酚總和 實施例4 :實施例1所獲得萃取物（aFCAnN9030 )的 組成 硫基酸解法（Thioacidolysis)是使得有可能測定原花 青素含量與原花青素平均聚合度的另一技術（Guy〇t等人， J.Agric.Food Chem., 1998, 1698-1705)。 此技術亦以在酸性介質（HC1)中將原花青素聚合物水 解為基礎。存在於反應介質中的仏甲苯硫醇係和水解期間 200948290 釋放的單體反應，所形成的化合物係以液相層析法（HPLC ) 定量。 硫基酸解法後的分析結果 實施例1的萃取物 mDP 8.5 單寧酸含量 191.5 mg/g粉末 %epi 71.5 % cat 0.9 %dimA 27.6 mDP平均聚合度（單寧酸鏈的平均長度）： %epi = %表兒茶素 %cat = %兒茶素 %dimA = % A型二聚物 實施例5 :根據本發明之萃取物黏附至生物膜的測試 不具纖毛的DH5a細菌株係用於此測試作為黏附性的 負向對照組。第5株與第6株細菌株為從臨床分離物得到 © 的泌尿道致病性大腸桿菌菌株。 該等菌株係於37 t、於CFA培養基中培養。此培養基 的組成為下列：將克酪蛋白酸解物（Difco) 、1.5 g酵 母萃取物、0.05 g MgS〇4與〇 〇〇5 g MnCl2加至1升去離子 水。 對於各株細菌株，測試了僅菌株本身、或者在得自根 據本發明之批次AfcanN9030( Diana Naturals )之含有3〇% 12 200948290 原花青素的蔓越橘之存在下、或在得自批次A4i24A (市購 樣本）之含有3%原花青素的蔓越橘之存在下的黏附性。製 備蔓越橘樣本以獲得500 #g/mL的原花青素濃度，亦即將 16.71^的批次9030或1671^的批次八4124人以1〇1^水 稀釋。該等溶液隨後在水中稀釋十倍，以進行測試。 • 使用欲研究細菌的過夜培養菌，並將0.2 mL的此培養 菌置於有或無欲測試蔓越橘樣本的96井微盤（Greine〇中， 再次以水稀釋5倍。各測試係進行三回。將未和彼等欲測 〇試蔓越橘樣本-同培育的CFA置入，以作為培養菌的負向 對照組。 將此微盤置於35 °C培育器中 歷時24 h 隔天，在移除培養基並以蒸餾水沖洗該等井後，將 π甲醇加至各井’歷時15 min。待移除甲醇後，將該盤置 於培育器中乾燥30tnin。接著，將2〇〇/iL結晶紫（sigma) 加入，歷時10 min。在移除著色劑並以蒸顧水沖洗該等井 後，將200 乙酸/乙醇溶液（v〇1/v〇1)加入，以使產生的 生物膜脫色。以光譜儀在57Gnm之波長進行讀取。光學密 度值越高，則細菌附著至盤的數目越大。 第1圖的結果顯示根據本發明之受測萃取物係具有小 於萃取物A4124A之光學S度的光學密度，於是細菌對於盤 井的黏附性係低於批次A4124A所具者，與所測細菌無關。 現在，培養基中的原花青素濃度在以根據本發明之萃取物 ，行的測試和以A4124A萃取物進行的測試相同。歸因於存 於培養基中里等效濃度的原花青素之抑制細菌黏附至微 13 200948290 盤的效用於疋就根據本發明之萃取物而言係高於就A41 24 A 萃取物而言’即便原花青素濃度是等量的。因此，存在於 根據本發明之萃取物中的原花青素在相同質量濃度之下對 於抑制細菌黏附性比起A4124A萃取物的效用更好。 習知此市購萃取物（批次A4124A)係具有3至4等級 之原彳b青素平均聚合度（也就是說單寧酸鏈的平均長度）。 再者，根據本發明之萃取物係具有81之原花青素平均聚合

於是有可能從該等結果推論根據本發明之蔓越橘萃耳 物中的原花青素平均聚合度在泌尿道致病性細菌附著至子 表面時發揮了作用。是以，根據本發明之萃取物相較於1 購產品A4124A係具有增多之抗黏附效力。 實施例6 :明膠膠囊調配物的實施例 ’將下列混合： 濃度為相對於萃取 的15%原花青素，

為製造一個總計250 mg的明膠膠囊 ' 240 mg根據本發明之萃取物，滴定 物乾燥重量之以原矢車菊素（:丨當量表示 ' 1 〇 mg微晶纖維素。 各個明膠勝囊含有36 mg原花青素。 實施例7 :明膠膠囊調配物的實施例 為製造一個總計300 mg的明膠膠囊，將下列混人. ' 200 mg AFCANN9030 萃取物 物乾燥重量之以原矢車菊素C1 素）， (滴定濃度為相對於萃取 當量表示的30.5%原花青 100 mg微晶纖維素。 14 200948290 各個明膠膠囊含有6 1 mg原花青素。 實施例8 :根據本發明之飲品的實施例 製備了 100克下列組成物： 以克計之數量 AFCANN9030 萃取物 0.68 澄清覆盆子果汁粉末（Diana Naturals 以AFFRAM0013為名販售） 56.3 澄清草莓果汁粉末（Diana Naturals以 AFFRAI0013為名販售） 29.3 黑醋栗果汁粉末（Diana Naturals以 AFCASS9003為名販售） 11.3 蔗糖素 0.23 擰檬酸 2.25 為製備飲品，隨後將22克此粉末化組成物在最終體積 為500 ml的水中混合。攪拌之後，帶有明顯覆盆子味道的 飲品即可飲用。 〇 每曰定量的500 mL此飲品係提供45毫克原花青素。 【圖式簡單說明】 第1圖係顯示和受測蔓越橘萃取物（0 =無萃取物，批 次 9030 =得自 Diana Naturals 的 AFCANN 9030 萃取物， 批次A4124A =可在市面上購得的萃取物）與所使用細菌 (DH5o;株=參考株，第5與6株=泌尿道致病株）呈函 數關係、以光學密度表示之附著至盤的細菌數量。 15 200948290 【主要元件符號說明】 無

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Claims (1)

1. 200948290 七、申請專利範圍： 1. 種衍生自越橘屬（)的植物之萃取物， 其包含相對於萃取物乾燥重量之以原矢車菊素C1 (procyanidin Cl )當量表示的至少μ重量％原花青素 (proanthocyanidin )。 2. 根據申請專利範圍第1項之萃取物，其中該越橘屬 植物為大果蔓越莓（Fizcc/nkm 或大果蔓越 橘。 〇 3.根據申請專利範圍第1與2項中任一項之萃取物， 其中係使用大果蔓越橘的漿果。 4. 根據申請專利範圍第i或2項之萃取物，其中原花 青素的平均聚合度係大於5。 5. 根據申請專利範圍第3項之萃取物，其中原花青素 的平均聚合度係大於5。 6. 根據申請專利範圍第4項之萃取物，其中原花青素 的平均聚合度係大於6。 7. 根據申請專利範圍第5項之萃取物，其中原花青素 的平均聚合度係大於6。 8. 根據申請專利範圍第6項之萃取物，其中原花青素 的平均聚合度係大於8。 9·根據申請專利範圍第7項之萃取物’其中原花音音 的平均聚合度係大於8。 、 1〇. —種用於製備根據申請專利範圍第【至9項中任一 項之萃取物的方法，其中將大果蔓越橘置於水溶液中、進 17 200948290 行固體-液體分離作用、 脫水，以獲得該萃取物f、機/合劑且隨後將所獲得產物 11 根據申請專利範圍帛 法，其中係進行第二欠脫尺 於製備萃取物的方 12.根據申請專利範圍第 備萃取物的M，其中該有機㈣為=任-項之用於製 法二範圍第12項之用，萃取物的方 ❹ 15. 根據申請專利範圍第14 法’其中該醛為乙醛。 ；製備萃取物的方 16. 根據中請專利範圍第_η項中任_項之用 備萃取物的方法，其中該有機溶劑為醋。 法L7·二據申請專利範圍第16項之用於製備萃取物的方 法，其中該酯為乙酸乙酯。 〇 18. 根據申請專利範圍第1〇或u項之 =系以相對於水溶液中蔓越橘體積的〇至15份體積之比例 19. 根據申請專利範圍第12項之方法其中該溶劑係 以相對於水溶液中蔓越橘體積的〇至15份體積之比例添 加。 20. 根據申請專利範圍第13項之方法，其中該溶劑係 以相對於水溶液中蔓越橘體積的〇至15份體積之比例添 18 200948290 加。 21·根據申請專利範圍第14項之方法，其中該溶劑係 以相對於水溶液中蔓越橘體積的〇至15份體積之比例添 加。 22.根據申請專利範圍第15項之方法，其令該溶劑係 .以相對於水溶液中蔓越橘體積的0至15份體積之比例添 加。 23·根據申請專利範圍第16項之方法，其中該溶劑係 Ο以相對於水溶液中蔓越橘體積的〇至15份體積之比例添 加。 24.根據申請專利範圍第17項之方法，其中該溶劑係 以相對於水溶液中蔓越橘體積的〇至15份體積之比例添 加0 25·根據申請專利範圍第丨或2項之萃取物，該萃取物 係藉由申請專利範圍帛1〇至17項中任一項所定 ❹ 獲得。 26. 根據申請專利範圍第3項之萃取物，該萃取物係藉 由申請專利範圍第10至17項中任一項所定義之方法獲得。 27. 根據申請專利範圍帛4項之萃取物，言亥萃取物係藉 由申請專利範@第1()至17項中任—項所定義之方法獲得。 28. 根據申請專利範圍第5項之萃取物，該萃取物 由申請專利範圍第1()至17項中任—項所定義之方法獲得。 29·根據中請專利範圍第6項之萃取物，該萃取 ^ 由申請專利範圍第1G至17射任—項所定義之方法獲^ 19 200948290 30·根據申請專利範圍第7項之萃取物，該萃取物係藉 由申凊專利範圍第1〇至丨7項中任一項所定義之方法獲得。 31_根據申請專利範圍第8項之萃取物，該萃取物係藉 由申凊專利範圍第1〇至17項中任一項所定義之方法獲得。 32·根據申請專利範圍第9項之萃取物該萃取物係藉 由申請專㈣圍第Ui 17項中任-項所定義之方法獲得曰。 © 33. —種膳食或保健組成物，該組成物係包含申請專利 範圍第…項與第25至32項中任一項所定義之萃：物。 34·—種申請專利範圍第m項與第25至32項中任 項所定義之萃取物的用途，該用途係有 腸桿菌細菌附著至泌尿道内壁。 J特疋大 八、圖式： (如次頁）

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