TW200918020A - Infectious disease testing of menstrual fluid, endometrial/menstrual cells, amniotic fluid, umbilical cord blood or other samples - Google Patents

Description

200918020 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 概言之’本發明係關於傳染性疾病測試，且具體而言， 本發明係關於自（例如）月瘦液样〇 ^ ^ ^左孜樣口口、子宮内膜月經細胞樣 品、臍帶血樣品或羊水樣品之任—種獲得或獲取之體液樣 本、組織樣本及/或細胞或細胞組份樣本的傳染性疾病測 試。

本申請案主張優先於在2007年9月14日提出申請且標題 為"Infectious Disease Testing 〇f μ_γι^ Fluid，㈣賺心^

Menstrual Cells, Amniotic Fluid, Umbilical Cord Blood or Other Samples，”之美國臨時專利申請案第6〇/993,748號及 在2008年9月9日提出申請且標題為"Ιη — 5 Testing of Menstrual Fluid, Endometrial/Menstrual Cells, Amniotic Fluid, Umbilical Cord Blood or Other Samples 之美國臨時專利申請案第______號的權利。 【先前技術】 有許多種人類傳染性疾病係由病毒、細菌及其他致病因 子造成的。作為非限制性實例，傳染性疾病包括但不限於 A型肝炎、B型肝炎、c型肝炎、巨細胞病毒、）型人類嗜丁 淋巴細胞病毒、Π型人類嗜τ淋巴細胞病毒、丨型人類免疫 缺陷病毒、II型人類免疫缺陷病毒、西尼羅河病毒、克氏 錐蟲（Trypansoma cruzi)、梅毒及蒼白密螺旋體。已經研發 出若干試驗以測定人是否具有傳染性疾病。 134529.doc 200918020 傳染性疾病測試涉及諸多用於評估在自人類收集之樣。 中是否存在傳染因子的試驗方法。若干形式之酵素免疫測 定依賴於若干用於靜脈及/或動脈血樣之傳染性疾病測試 的方法。舉例而言，測試方法可納入酵素免疫測定⑺认) 及酶聯免疫吸附測定（ELISΑ)。該耵八及ELISA試驗用於檢 測及定量存於靜脈及/或動脈血樣中之抗原及抗體。由於 大多數酵素免疫測定之敏感性較高’因此其通常用於篩選 存在傳染性疾病之樣本。 許多採用酵素免疫測定方法之傳染性疾病試驗使用塗覆 於微孔上之滅活傳㈣子固相及檢測平臺。該固相試驗系 統知用基於紅細胞抗體在滅活因子之抗原上之黏附的檢測

陰性。對於多相試驗而言， :以堆積、清晰可辨的細胞紐扣 抗體橋接時，試驗結果被視為 該等相代表逐步進行的樣本培 134529.doc 200918020 育、《及最終評定。另外’許多試驗（無論是病毒 :抑或其他傳染因子)可使用比色指示劑來指明試驗: 疾病測試所賴驗無關，規定測試用樣 本類型°由食品及藥物f理局（FDA)許可的傳染性= 選試驗規定可用於許可試驗套組之特定樣品類型。此甲 :係自靜脈或動脈穿刺獲得的血清、血漿或屍體血清樣

品。某些套組插頁明確排除使用供測試唾液/口腔液=p 樣本之套組。 腔液或尿 幹細胞工業之發展已自體液及組織來源識別出新穎幹細 胞來源。舉例而言，幹細胞可自月經液、羊水及臍帶血： 集。傳染性疾病試驗及分析不能用於自月經液、羊水樣本 及/或臍帶血獲得的月，經液及子宮内臈/月i細胞之傳染性 疾病測試。 月經液、子宮内臈/月經細胞及臍帶血係可用於傳染性 疾病測試之易於獲得的樣品來源。羊水樣品可為預先收集 用於評定另-參數之另-主要試驗的羊水樣本之副產物了 臍帶血係經證實可容易&獲取錢供適宜量之測試用樣本 的另一樣品。實際上，在月經週期期間獲取子宮内膜/月 經液及/或細胞、自預先收集的樣本獲取羊水、及獲取濟 帶血之過程對供體產生的與收集技術相關之風險極 風險。 月經液、子宮内臈/月經細胞、羊水樣本及/或臍帶血樣 品係有利的’ Λ乃因每-種樣本均可用作傳染性疾病測試 J34529.doc 200918020 之單-來源。單—來源樣本不需要分析任—其他對比樣本 且其不需要分析間接樣本。作為此間接測試之實例且遵循 臍帶血卫業之現行協議時，在臍帶血中是否存在傳染性疾 病可自母體靜脈血樣測試之結果來間接地測定。自與腾帶 血有關之母體Μ可獲得各傳染性疾病試驗結果之、關聯 性。從未直接地測試臍帶血。 細胞懸浮液、羊水、及直他 、 、月經 夂次/、他體液、組織或細胞以確定 f否存在傳染性疾病或與傳染性疾病相關之標記物（例 认… 幻又糸、统響應傳染性疾/病而形成 的人類抗體抗體）的方法、過稆 风 尥程及糸統。使用臍帶血、月 經液、子宮内膜/月經細胞、羊水及/或其他體液、 I:本之Γ來源樣品可實施此直接傳染性疾病測試： 因此’ “需要用於測試月經液樣品、子宫内 打 細胞懸浮液樣品、羊水樣品 、^ .^ ^ 乂腳帶血樣品以確定早尤 子在傳染性疾病之方法及過程。因此 類型味物媒太夕神、九1门$要· $於此等 r物樣本之傳綠疾病測試的方法及過程。

【發明内容】 T 个货奶提供用於月 千水 M ^ 丁占門膜/月經細胞 及/或臍帶企之傳染性疾病測試的方法及過程。 本發明包括用於獲取及處理在月經期 體、細胞及組織之方法及過程且包 f液、液 子宮内膜/月經細胞懸浮液中B / °、在月經液及/或 因子。舉例而言，本發明包子在傳染性疾病及傳染 月包括用於獲取及處理在月經期間 I34529.doc 200918020 所獲得血液、液體及組織並測試或分析該血 或組織以载在月經液及/或子宮月^Μ ^ 在任一傳染性疾病及傳染因子的方法及過程。 子

本發明包㈣於處理羊水（作為出於其他臨床或研 定之主要目的而收集的羊水取樣之副產物)之方法及過程 且包括測試在料水樣本巾Μ存在傳染性疾病及傳毕因 子。舉例而言，本發明包括用於處理羊水樣本(作為出於 其他臨床或研究評定之主要目的而收集的羊水樣本之副產 物）並測試或分析血液、液體及/或組織以測定在該羊水中 是否存在任一傳染性疾病及傳染因子的方法及過程。 本發明包括用於處理在生產時所獲得臍帶血之方法及過 程且包括測試在臍帶血中是否存在傳染因子/疾病。舉例 而言，本發明包括用於獲取及處理在生產時所獲得臍^血 並測試或分析血液、液體及/或組織以測定在該臍帶血中 是否存在任一傳染性疾病及傳染因子的方法及過程。 在一實施例中，本發明提供一種用於分析非靜脈及非動 脈穿刺人類液體或細胞樣本以檢測至少一種傳染性疾病存 在之方法。该方法包括首先獲得足夠量之非靜脈及非動脈 穿刺人類液體或細胞樣本的步驟。該非靜脈及非動脈穿刺 人類液體或細胞樣本可自月經液樣品、子宮内膜月經細胞 樣品、臍帶血樣品或羊水樣品中之任一種獲取。該方法包 括測試該足夠量之非靜脈及非動脈人類液體或細胞樣本以 確定是否存在至少一種傳染性疾病之下列步驟。 本發明提供如下額外步驟：對自人類獲得動脈或靜脈血 134529.doc -10- 200918020 樣實施確證測試並對比確證測試結果與該非靜脈及非動脈 穿刺人類液體或細胞樣本之試驗結果。 本發明提供：在非靜脈及非動脈人類液體或細胞樣本中 測"式的傳染性疾病包括A型肝炎、B型肝炎、（:型肝炎、巨 細胞病毒、1型人類嗜τ淋巴細胞病毒、II型人類嗜Τ淋巴 :胞病毒、i型人類免疫缺陷病毒、„型人類免疫缺陷病 母西尼羅/可病母、克氏雖蟲、梅毒及蒼白密螺旋體中之

任一種。可測試生物#本以確定是否存在其他傳染性疾 病。 、 七明提供可包含分析生物樣本以確定是否存在與至少 :種傳染性疾病在人類中存在相關之至少一種形式抗原或 抗體的測試。 在另一實施例中， 經液樣本以測定至少 包括自預收集的樣品 括分析該月經液樣本 性疾病。 本發明提供一種用於直接測試人類月 種傳染性疾病存在之方法。該方法 分離足夠量之月經液樣本。該方法包 以測定疋否存在至少一種或多種傳染 本發明提供：可在月經液樣本中直接測試 包括A型肝炎、B型肝炎 寻卞杜疾病 C型肝炎、巨細胞病毒、1型人 類嗜T淋巴細胞病毒、„型人類嗜τ淋巴細胞病毒 類免疫缺陷病毒、Η型人類免疫缺陷病毒、西二 毒、克氏錐蟲、梅毒及蒼白密螺旋體中之任—種。'、，病 本發明提供：分析該月猄、为拔^ 月紅液樣本之步驟包括測定是否亡 在與傳染性疾病相關之至少_ 否存 種形式抗原或因人類免疫系 134529.doc 200918020 統響應傳染性疾病於人體中之存在而產生的抗體。 在又-實施例中’本發明提供一種用於直接測試人類體 液或細胞樣纟以測定至少一種傳染性疾病存在之方法。該 彳法可製備足夠量之分析用人類體液或細胞樣本。該方法 φ可分析人類體液或細胞樣本以確定;I：否存在與傳染性疾 病相關之抗原或抗體。 ^ 本發明提供可自月經液樣品、子宮内膜月經細胞樣品、 厂 冑帶血樣品或羊水樣品之任-種獲取的人類體液或細胞樣 本。 本發明提供··在人類體液或細胞樣本中測試的傳染性疾 病包括A型肝炎、8型肝炎、C型肝炎、巨細胞病毒、1型 • 人類嗜T淋巴細胞病毒、„型人類嗜丁淋巴細胞病毒、！型 . 2類免疫缺陷病毒、Η型人類免疫缺陷病毒、西尼羅河病 毋、克氏錐蟲、梅毒及蒼白密螺旋體中之任一種。可測試 該人類體液或細胞樣本以確定是否存在其他傳染性疾病。 G 本發明提供：該測試可包含_選試驗或確證試驗。 、本發明提供：該測試可包含分析該人類體液或細胞樣本 以測定因傳染性疾病而產生的抗原之存在及/或數量或者 與傳染性疾病於人類中之存在相關之人類抗體的存在及/ - 或數量。 本發明提供在篩選試驗結果與確證試驗結果之間建立關 聯之額外步驟。該等筛選試驗結果可包含藉由本發明實施 例獲付的非靜脈及非動脈穿刺人類液體或細胞樣本、月經 液樣本及人類體液或細胞樣本之試驗結果。該等確證試驗 134529.doc 12 200918020 結果可自非靜脈及非動脈人類液體或細胞樣本、月經液樣 本及人類體液或細胞樣本或者相應的靜脈或動脈血樣之額 外測試獲得。 孓月可測疋疋否存在傳染性疾病抗原或因免疫系統響 應傳染性疾病抗原而產生的人類抗體。 【實施方式】 參照圖1至圖5,本發明提供用於月經液、子宮内臈/月 經細胞、羊水、及/或臍帶血之傳染性疾病測試方法及過 程。 本發明提供用於獲得月經液、子宮内膜/月經細胞、羊 水樣本、臍帶灰或其他體液或組織樣本之方法。該方法包 括使用傳染性疾病測試方法測試適宜量之樣本的另-步 驟。可選擇用於測試相關傳毕奸 、仲脚n寻木性疾病之傳染性疾病測試方 法。該傳染性疾病測m方法可為商用試驗。 本發明提供一種用於分析非靜服 、 升静脈及非動脈穿刺人類液體 或細胞樣本以檢測至少一種傳毕 、 但吁永性疾病存在之方法。該方 法包括首先獲得足夠量之&趋_ & 里之非靜脈及非動脈穿刺人類液體或 細胞樣本。可自任一月經液槐σ 之樣口〇、子宮内膜月經細胞樣 品、臍帶血樣品、或羊水樣品獲 设取°亥非靜脈及非動脈人類 液體或細胞樣本。 5亥方法包括測試足夠量之非靜 靜脈及非動脈人類液體或細 胞樣本以確定是否存在傳染性 、届之額外步驟。該測試可 著重於分析生物樣本以確定是否在 ^ ^ , , 0Β 疋否存在與傳染性疾病在人類 中存在相關之抗原或抗體。該傳 1寻杀性疾病測試可具有篩選 134529.doc 200918020 試驗或確證試驗之性質。 該方法可包括如下額外步驟：對自人類所獲得動脈或靜 脈血樣實施確證測試並對比確證測試結果與非靜脈及非動 脈人類液體或細胞樣本之試驗結果。對患者、樣本供體、 醫療保健提供者及/或幹細胞銀行業務提供者報告試驗结 果。 ° 本發明提供用於直接測試人類月經液樣本以測定至少一 種傳染性疾病存在之方法。該方法包括自預收集的樣品分 離足夠S之月經液樣本。該方法包括分析該月經液樣本以 測定是否存在傳染性疾病。月經液樣本之分析可包含薛選 試驗或確證試驗。分析該月經液樣本以測定是否存在與傳 染性疾病相關之抗原式1^1 A采5 A / 眾次因人類免疫系統響應傳染性疾病之 存在而產生的抗體。 本發明提供用於直接測試人類體液或細胞樣本以測定至 少-種傳染性疾病存在之方法。該方法可製備足夠量之分 析用人類體液或細胞樣本。該人類體液或細胞樣本可自月 經液樣品、子宮内膜月經細胞樣品、臍帶血樣品、或羊水 樣品令之任-種獲取m亦提供分析人類體液或細胞 樣本以確定是否存在與傳染性疾病相關之抗原或抗體。該 分析可包含篩選試驗或確證試驗。該職著重於分析該人 類體液或細胞樣本以測定因傳染性疾病而產生的抗原之存 在及或數里或者與傳染性疾病在人類中存在相關之人類 抗體的存在及/或數量。 本fx明之方法提供傳染性疾病測試。可藉由本發明加以 134529.doc 200918020 測5式之傳染性疾病包括但不限於a型肝炎、b型肝炎、匸型 肝炎、巨細胞病毒、1型人類嗜T淋巴細胞病毒、π型人類 嗜丁淋巴細胞病毒、1型人類免疫缺陷病毒、π型人類免疫 缺陷病毒、西尼羅河病毒、克氏錐蟲、梅毒及蒼白密螺旋 體。本發明可測試其他傳染性疾病^ 用於傳染性疾病測試之體液或細胞樣本的來源 本發明提供用於傳染性疾病測試之人類液體或細胞樣本 的若干來源。該樣本來源可表徵為非靜脈及非動脈穿刺人 類液體或細胞樣品。該樣本來源亦可表徵為人類體液或細 胞樣本。特定言之，該樣本來源包含可為在月經期間收集 的月經之月經液、在羊膜腔穿刺術期間收集的羊水、或在 生產期間收集的臍帶血。可測試最初收集的每_ 來源之樣品以確定是否存在傳染 ’ 吁木丨王疾病。或者，可處理該 等樣本來源以獲得可測試$ ,普& 』j忒之，辰縮量之血漿、血清、及/或 浮液。倘若需要傳染性疾病測試，則細胞懸浮液之 、，田匕可經裂解以獲得傳染性疾病測試之細胞组份。 月經液 現在參照圖1至圖3,本發明包括用於獲取月經液樣品之 方:。月經液樣品包括在月經期間所獲得月經灰 樣品可自月經液收集且隨後分二 疾广m疋 與㈣性疾病相關之至少—種傳华性 疾病抗原或者是否存在因免疫系統響專r 的存於該月經液中之人類抗體β Ί疾病而產生 可以各種不同的方式收集用於傳 厌届測忒之月經液 I34529.doc 15 200918020 樣本。在一實施例中，可按照在2008年3月2日提出申請且 標題為"Procurement，Isolation, and Cry〇preservaU〇n 〇f

Endometrial/Menstrual Cells"之美國專利申靖案第 12/074,423號中所述過程及方法來收集月經，該案件以引 用方式全部併入本文中。可使用用於收集月經液樣本之其 他過程及方法，只要可收集足夠量之月經樣本來實施測試 月經液樣本以測定傳染性疾病存在之步驟。 在-實施例中’供體可使用獲取套組來收集樣本，該獲 取套組包含在由石蠟膜覆蓋之擱架中含有收集介質之介質 試管、至少-個收集裝置及說明書(即，如在圖2中所述 INSTEAD或如在圖3中所述_八杯）、防腐擦拭墊、小塑 料袋、小生物危害品袋(以在其中盛放返回實驗室之樣 品）、石㈣、納米冷卻劑及收集表格。該收集套組在使 用…保持在室溫下。或者，該收集套組在使用之前可 保持在約l°c至約1(TC之冷藏溫度下。 可將月經樣本收集於設計用於月經收集之收集杯中。可 在：體月經期之一個月經量最多曰(可為第一曰或第二曰) 明Γ吏用之前對該收集杯實施滅菌且供體應按照 生產商說明書來將收集杯插入陰道中。 菌： = 插入陰道中。在插入收集杯之前，可使用無 道周圍之整個區域。該收集杯可保持在陰 月經液樣本戶短時間或任何其他適合收Μ夠體積 病測試。在間以分配—些月經液樣本用於傳染性疾 收集杯置於陰道内經過適宜時間後，供體隨後 134529.doc 200918020 可移出杯子，並將包含月經液内容物之内容物倒入含有收 集介質之50毫升收集杯中。該收集介質包含約⑺毫升等張 溶液及抗凝劑。舉例而言，但不作為限制’漢克平衡鹽溶 液（HankisBalancedSaltsS〇lmi〇n)可用作等張溶液肝素 (每毫升1〇單位）可用作抗凝劑。可使用其他收集介質，包 括（但不限於）闡述於美國專利申請案第12/074,423號中之 收集介質。該收集試管應封閉並密封。 每次可使用新收集杯收集多個月經液樣本。若收集多個 月經液樣本，則應將單一收集杯中之全部月經液樣本置於 -個含有收集介質之50毫升收集試管中。每一月經液樣本 應使用-個收集試管。無論收集單一樣本或多個樣本，該 。(等）樣本在運輸至實驗室之前應保持在室溫（約饥至約 °c)—，只要該（等）樣本在收集約24小時至約72小時内到達實 驗室。或者’且當收集多個樣本時，在運輸之前，含有樣 本之收集試g可在約i c至約10。。下冷藏直至已收集到所 有樣本。在美國專利巾請案第12/G74,423號中提供月經液 之替代運輸及拿放方法及過程且其可用於本發明。含有月 經樣本之包裝在整個運輸期間可保持在室溫或環境溫度 (約15 C至約25。〔〕）下且應在收集後約24小時内到達實驗室 且在到達實驗室後可冷藏。或者，含有月經樣本之包裝在 整個運輸期間可保持在約1°C至約i (TC溫度下。 出於篩選或對比傳染性疾病測試目的，亦可自該供體收 集卜周血樣。可按照標準靜脈切開術技術將外周血樣收集 於厶抽真空血液收集系統持器及具有EDTA(乙二胺四乙酸 134529.doc 200918020 起：：)之抽真空試管中。該外周血樣亦可與月經樣本 -起運輸至實驗室，如先前所述。 本發明包括分析並挪定在月經樣本尹是否存在任一傳染 後疾=及傳染因子的步驟。在該（等）月經樣本到達實驗室 =右收集多個月經樣本，則可使用（例如鄉或 6對5亥（等）收集試管實施消毒並將每—收集試管轉 :多”於無菌條件下之生物安全擴中。在整個處理過程 ±準備將樣本等分至傳染性疾病測試用轉移試管中 ::可將每一收集試管置於冰上或保持在約丨 之溫度下。 :藉由自該樣本取出約5微升等份並將該樣本置於轉移 祥:歹’如’6微升轉移試管或其他可容納足夠量之測試用 方:適宜大小的試管）中來處理該月經樣本。作為替代 ::且如在圖3中所述，可在約2〇〇〇職，約代下離心 Μ:經樣本。亦可在室溫下實施離心。在完成離心後，自 上π液收集1 〇微升樣本並置於轉移試管中。 、對具有未經離心月經樣本或來自經離心月經樣本之上产 液的轉移試管貼標籤並準備用於傳染性疾病測試。倘心 n =天時間内進订傳染性疾病測試，則可將該轉移 持在室溫下。或者’該轉移試管可在傳染性疾 ^在㈣至膚下冷藏至多約7天。該轉移試管在 運輸至其他地點的傳染性疾病測試服務提供商期間 結於約rC至約⑽之溫度下。或者，該轉移可I 至溫下運輸。 在 134529.doc -18- 200918020 在又-實施例中’可獲得用於傳染性疾病測試之預處理 上清液樣本’該上清液樣本係自結合月經幹細胞收集方法 及過程獲取並處理之月經樣本樣品獲得’例如，彼等通常 概述及闡述於圖i及圖2中或如在美國專利申請案第 12/074,423號中所述者。 ” 在另-實施例中，可獲得用於傳染性疾病測試之適宜量 之處理後月經樣本，其係按照美國專利申請案第 1 2/074,423號之方法及過程獲得。 '可測試含有一等份月經、經離心月經、來自預處理樣本 或處理後樣本之上清液的轉移試管以確定是否存在相關傳 染性疾病標記物。舉例而言，倘若測試由實施傳染性疾病 測試服務之服務提供商或實驗室在其他地點進行，則可填 寫傳木性疾病測試之訂購表格以訂購相關傳染性疾病之傳 染性標記物測試。或者’可在月經樣本接收實驗室中測試 含^經樣本之轉移試管以確定是否存在傳染性疾病。轉 移试管在傳染性疾病測試之前可在約11：至約i 01下冷藏 至多7天。轉移試管在運輸至其他地點的傳染性疾病測試 服務提供商期間可保持在介於約1〇C至約丨〇t間之溫度 下或者，該轉移試管可在室溫下運輸。 在美國專利申請案第12/〇74,423號中提供收集、轉運、 裝備並測4月經樣本之替代形式且其可用 明之㈣Wm的諸縣。 於本發 臍帶灰樣本 參照圖4，太；^ 本I明k供用於在生產期間獲得臍帶血樣本 134529.doc -19- 200918020 且隨後分析或測試該臍帶血樣本以測定在該臍帶血樣本中 是否存在任一傳染性疾病抗原或免疫系統響應傳染性疾病 抗原而產生之人類抗體的方法及過程。 可使用任一方式之臍帶血收集方法在生產時獲得臍帶 血。在一實施例中，可按照生產商說明來使用臍帶血收集 套組（U-Cord收集套組包括：具有光面之藍盆（Biue ΒΜη with Clear Top)、母體血液提取套組、D〇n〇rCareTM針套、 酒精拭子、碘酊棉簽、具有CPD抗凝劑之Baxter血液收集 袋（250 mL)及16號針頭、剖宮產適配套組（c_Secti〇n Adapter Kit)(無菌）、具有黏性背襯之塑料拉鏈袋及吸水性 毛巾）。舉例而言，可藉由雙鉗夾臍帶並切割該臍帶來實 現陰道分娩之臍帶血收集。可在收集管道附近鉗夾該藍色 塑料D〇norCare針套。在分娩出嬰兒後且在排出胎盤前， 可相繼使用酒精拭子及碘酊棉簽來清潔約‘6"臍帶。為了 獲得最大量，可在保留於臍帶上之夹子的正上方插入位點 處插入針。藉助重力，將盡可能多的樣本收集於袋中。處 理可能需要至少約8GmL (包括35mL抗凝劑）收集物。在完 成收，時，該袋可為至少1/3滿載。在完成收集時，企液 可自管道抽取至袋内。可將該袋輕輕地翻轉幾次以混合臍 帶血與CPD抗凝劑。對於多胞胎生產而言’每個嬰兒應使 用單獨的臍帶血套組。 倘若在剖腹產生產後進行臍帶血樣本收集，則在生產後 可使用剖宮產適配套組來独㈣帶並將針插人臍靜脈中 以收集臍帶灰。可將盡可能多的血液收集於袋中。處理可 134529.doc -20- 200918020 月t而要至少約8〇 mL (包括3 5 mL抗凝劑）收集物。輕輕地翻 轉袋幾次以混合臍帶血與CPD抗凝劑。對於多胞胎生產而 言’每個嬰兒應使用單獨的臍帶血套組。 倘若拆除胎盤，則應清潔臍帶。可將針插入連接胎盤之 腾靜脈内。可升向所拆除胎盤以便於腾帶金收集。處理可 旎需要至少約80 mL (包括35 mL抗凝劑）收集物。對於多胞 胎生產而言’每個嬰兒應使用單獨的臍帶血套組。 可藉由使用吸水性毛巾包裹經標記臍帶血袋來製備用於 運輸之收集膪帶血樣本。可將該臍帶血袋置於封閉之較大 塑料拉鏈袋中。可自該較大塑料拉鏈袋去除黏性襯底，隨 後可將該袋壓至容器底部以確保收集血樣在運輸中的安 全。可在該容器上放置蓋並用膠帶固定之。可在生產後約 2小時内聯繫AirNet或另一適宜信使來安排運輸。臍帶血 運輸應在收集後至少約48小時内到達實驗室。 應將該臍帶血袋轉移至實驗室中、滅菌並準備在生物安 全櫃内處理。抽取用於傳染性疾病測試之臍帶血樣本。或 者，可在自臍帶血樣本去除紅細胞後獲得臍帶血樣本。傳 染性疾病測試所用臍帶血樣可為約丨微升臍帶血（對於紅細 胞樣本而言）及至多約3微升臍帶血（對於血漿樣本而言）。 該臍帶血樣本可轉移至經EDTA塗覆之無菌收集試管 中。可將該膪帶血樣本或臍帶血血漿樣本轉移至兩個或更 多個6微升測試用試管中。該等試管可含有或可 纯 肝素等抗凝劑^ 3 = ° 羊水 134529.doc 200918020 /照圖5,本發明包含用於獲得羊水樣本（作為出於其他 ^或研究評定之主要目的而收集的羊水樣本之副產物） "分析或測試該羊水樣本以測定在該羊水樣本中是否存在 任傳染性疾病抗原或因免疫系統響應傳染性疾病抗原而 形成之人類抗體的方法及過程。

…本發明可處理羊水樣本，其作為出於其他臨床或研究評 2之主要目的而收集的羊水樣本之副產物。根據用於出生 厨診斷之醫學程序來收集羊水’纟中自正在發育胎兒周邊 羊膜提取少畺羊水。當在胎兒周圍有足夠液體時可實 施平膜腔穿刺術。可藉由注射器取出該樣本並藉由超聲波 進行處理。可在早至懷孕約13周時實施羊膜腔穿刺術但亦 可在懷孕約15周至約20週期間收集羊水。在藉由羊膜腔穿 刺術收集用於基因測s式之羊水樣本時，可將約1 〇微升羊水 等分至2-6微升經EDTA或其他傳染性疾病測試用適宜抗凝 劑塗覆之收集試管中。 其他液體、组織及細胞 作為又一實例，本發明包含用於獲取及處理任一其他人 類體液、細胞或組織並分析及測定在該人類體液、細胞或 組織中是否存在任一傳染性疾病及傳染因子的方法及過 程。舉例而言，可測試胎兒胎盤細胞及母體胎盤細胞之細 胞懸浮液以測試傳染性疾病。可藉由揭示於在2〇〇8年3月 13 日公開且標題為”procurement，Is〇iati〇n and Cry〇preservati〇n of Maternal Placental Cells,"之美國專利公開申請案第 20080064098號及在2008年2月28日公開且標題為 134529.doc -22· 200918020 "Procurement, Isolation and Cryopreservation of Maternal

Placental Cells，”之美國專利公開申請案第20080050814號 中的方法來獲得胎盤樣本。如在先前公開美國專利申請案 中所述’可測试預處理或處理後母體胎盤幹細胞樣本或胎 兒胎盤幹細胞樣本以確定是否存在傳染性疾病抗原或因免 疫系統響應存於任一胎盤型幹細胞樣本中之傳染性疾病抗 原而產生的人類抗體。

傳染性疾病測試方法 本發明之方法及過程亦提供如下步驟：分析或測試非靜 脈及非動脈穿刺人類液體或細胞樣本及人類體液或細胞樣 本以測定是否存在任一傳染性疾病抗原或因免疫系統響應 傳染性疾病抗原而產生的人類抗體。非靜脈及非動脈穿刺 人類液體或細胞樣本及人類體液或細胞樣本之來源可包括 可在月經期間收集的月經液、在羊膜腔穿刺術期間收集的 羊水、或在生產期間收集的濟帶血。 本發明提供：測試或分析非靜脈及非動脈穿刺人類液體 細胞樣本或在轉移試f中之人類體液或細胞樣本以確定 是否存在傳染性疾病。按照本發明，分析或測試含有月 經、經離心月、經、來自預處理樣本或來自處理後樣本之上 清液、臍帶血、臍帶血4、羊水樣本、預處理或處理後 母體胎盤幹細胞樣本、或胎兒胎盤幹細胞樣本中之任一種 的轉移試管以確定是否存在相關傳染性疾病。 本發明提供：月經、經離心月經、來自預處理樣本或來 自處理後樣本之上清液、臍帶血、臍帶血血漿、羊水樣 134529.doc -23- 200918020 本、預處理或處理後母體胎盤幹細胞樣本、或胎兒胎盤幹 ，本中之任一種的傳染性疾病測試可使用市售測試方 法其他FDA獲准、許可或商業上可接受傳染性疾病測試 或其他傳染性疾病測試方法。傳染性疾病測試之樣品 I可基於市售試驗所需量或根據其他需要。 *由任傳^性疾病測s式實驗室來實施該測試。舉例 十於由實驗室或服務提供商在其他地點進行的測 式，可填寫訂購表格以訂購相關傳染性疾病之傳染性標記 物❸式。或者，可在其中運輸處理用體液或細胞樣本之實 驗室中測試含有月經樣本之轉移試管以確定是否存在傳染 性疾病。具有樣品之轉移試管在傳染性疾病測試之前可在 :1 C至約1(TC下冷藏至多約7天。在運輸至其他地點的傳 木。性疾病測試服務提供商期間，轉移試管可保持在介於約 1 C至約1 〇 c間之溫度下。或者，該轉移試管可在室溫下 運輸。 作為非限制性實例，可在該樣品中測試之傳染性疾病包 括但不限於C型肝炎病毒、B型肝炎病毒核心抗原、B型肝 炎表，抗原、ΗΙν_Ι/π、巨細胞病毒、htlv ι/π、西尼羅 Μ毒 '梅毒及蒼㈣螺旋體及任—其他傳染性疾病。 藉由傳染性疾病測試方法分析月經、經離心月經、來自 預處理樣本或來自處理後樣本之上清液、臍帶血、臍帶血 血漿、羊水樣本、預處理或處理後母體胎盤幹細胞樣本、 或月台兒胎盤幹細胞樣本中之任―種以檢測是否存在至少一 種或多種傳染性疾病抗原及/或互補人類抗體。 134529.doc •24- 200918020 c型肝炎 ==之傳染性疾病測試可用於測試°型肝炎病 毋（V)之存在。檢測HCV所用試驗方法可為用於檢測人 類血清或血漿中之人類C型肝炎病毒抗體（抗-HCV)的 EUSA測試。該測試利用經重組c型肝炎病毒編碼抗原塗 覆之微孔作為固相。在施用酵素基質時，可藉由呈色欲產 物之顯色來檢測抗原或抗體之存在。市售測試係⑽。 EUSA試驗系統。此試驗可用於測試傳染性疾病樣本。立 他HCV診斷試驗可用於測樣本本之hcv。 Ο 該分析程序係在經重組體_肝炎病料卿）抗原（抗 原J22-3、c200及廳）之組合塗覆之微孔中實施的三階 段試驗。在第-階段，將約1〇微升稀釋試驗樣品在試驗孔 中培育約6〇分鐘。倘若存在對三種抗原之任-種具反應性 之抗體’則不會形成複合物。在後續洗務步驟中，會去除 未結合血清或血漿蛋白。在第二階段，向該微孔中添加約 200微升與辣根過氧化物酶偶聯之鼠科單株抗體。該偶聯 物特異性地結合至人類抗原_抗體複合物之賊蛋白。倘若 不存在抗原-抗體複合物，則可藉由後續洗務來去除未結 口偶聯物。在第二階段，向試驗孔中添加由〇·苯二胺 (D)及過氧化氫組成之約2〇〇微升酵素檢測系統。倘若存 在結合偶聯物’則可氧化〇pD，產生呈色終產物。在此反 α中藉由過氧化氫一價氧化過氧化物酶以形成中間體化 合物’而其藉由與釋放氫離子之〇pD後續相互作用被還原 成其初始狀態。所得氧化形式之〇PD具有撥色。隨後添加 134529.doc -25· 200918020 約5 0微升4N硫酸以終止反應。顏色強度取決於孔中結合偶 聯物之量且因此，顏色強度係存於該樣品中之抗-HCV之 濃度的函數。使用設計用以量測微孔令光吸收之微孔讀取 器（光度計）來量測顏色強度。基於測定吸收界限（cutoff) 值，藉由顏色變化吸收值來解釋試驗結果。具有小於界限 之吸收值的樣品被視為非反應性或C型肝炎病毒陰性，具 有大於界限之吸收值者被視為具反應性或C型肝炎病毒陽 性。

B型肝炎病毒核心抗原 B型肝炎病毒核心抗原（重組體）係用於檢測人類血清或 血聚中之B型肝炎病毒核心抗原之抗體（抗_Hbc)的酶聯免 疫吸附測定。在經B型肝炎病毒（HBV)感染後，出現各種 血清學標記物。出現的第一標記物通常為B型肝炎表面抗 原（HBsAg)。接下來出現b型肝炎核心抗原之抗體（抗_HBc) 且在清除HBsAg及進入恢復期後仍為可檢測的。抗#^在 血清及血衆中之測定可用於幫助監測HBV感染進展。抗_ HBc實際上出現於所有受HBV感染之個體中且對於當前及 以往感染均係精確的血清學標記物。市售試驗係〇rth〇 ELISA試驗系統。此試驗可用於測試傳染性疾病樣品。其 他適宜試驗可用於測試B型肝炎。 用於檢測B型肝炎病毒核心抗原之酶聯免疫吸附測定可 為在經重組體衍生之8型肝炎核心抗原（HBe)塗覆之微孔中 實施的三階段試驗。在第—階段’將約1G微升試驗樣品直 接置於含有樣品稀釋物之試驗孔中並培育約6G分鐘。倘若 134529.doc -26- 200918020 抗-HBc存於該樣品中，則會在微孔表面上形成抗原-抗體 複合物。倘若不存在抗-HBc，則不會形成複合物並將在洗 務步驟中去除未結合血清或血漿蛋白。在第二階段，向試 驗孔中添加約200微升抗體偶聯物並培育約6〇分鐘。該抗 體偶聯物係對人類IgG及IgM具有特異性之鼠科單株抗體的 混合物。該偶聯物會特異性地結合抗原_抗體複合物之抗 體部分。倘若不存在抗原·•抗體複合物，則可藉由洗滌去 除未結合偶聯物。在第三階段，向試驗孔中添加由約2〇〇 微升〇-苯二胺（OPD)及過氧化氫組成之酵素檢測系統並培 育約60分鐘。倘若存在結合偶聯物，則〇pD會受到氧化， 產生有色終產物。隨後添加5〇微升4N硫酸以終止該反應。 顏色強度取決於結合偶聯物之量且因此，係存於該樣品中 之抗-HBc之濃度的函數。使用微孔讀取器來量測顏色強 度。基於測定吸收界限值，藉由顏色變化吸收值來解釋試 驗結果。具有小於界限之吸收值之樣品被視為非反應性或 B型肝炎病毒核心抗原陰性。具有大於界限之吸收值者被 視為具反應性或B型肝炎病毒核心抗原陽性。 另一可能的試驗係B型肝炎表面抗原之抗體（鼠科單株） 的減驗用以HBsAg ELISA (酶聯免疫吸附測定）之過氧化 物酶偶聯物抗體用於檢測人類血清或血漿中之B型肝炎表 面抗原（HBsAg)。此試驗可用作篩選試驗並幫助診斷潛在 B型肝炎感染。該試驗利用經HBsAg之抗體塗覆之微孔作 為固相。在應用酵素基質時，可藉由有色終產物之顯色來 檢測抗原或抗體之存在。市售試驗係Ortho之HBsAg抗體 134529.doc -27- 200918020 ELISA。其他適宜試驗可用於測試_肝炎。 此試驗係在經HBsAg抗體塗覆之微孔中實施的兩階段分 析。在第一階段，向試驗孔中添加由ηβ_抗體組成且在 _ M色偶聯物稀釋劑中稀釋之卫作偶聯物。隨後向試驗孔中 . 添加試驗樣品並實施S0M (樣本遺漏監測)讀數。將該平板 培育特定時間長度。倘若HBsAg存於樣品中，則其會結合 塗覆於孔上之抗體並同時結合偶聯物以形成固定抗體_ HBsAg·偶聯物複合物。倘若*存在HBsAg，則不會形成此 等複合物。將在後續洗滌步驟中去除未結合血清或血漿蛋 白。在第一階段，向樣本孔中添加由〇_笨二胺（〇pD)及過 氧化氫組成的酵素檢測系統。倘若存在結合偶聯物，則 OPD會欠到氧化’產生有色終產物。在此反應中，藉由過 氧化氫二價氧化過氧化物酶以形成中間體化合物，而其藉 由與釋放氫離子之OPD後續相互作用被還原成其初始狀 態。所得氧化形式之OPD具有撥色。隨後添加硫酸以終止 j 反應。顏色強度取決於孔中結合偶聯物之量。因此，顏色 強度係存於s亥樣品中之HB sAg之濃度的函數。可使用微孔 s賣取益在490或492 nm下量測顏色強度。基於測定吸收界 限值’藉由顏色變化吸收值來解釋試驗結果。具有小於界 限之吸收值之樣品被視為非反應性或B型肝炎表面抗原陰 I"生。具有大於界限之吸收值者被視為具反應性或B型肝炎 表面抗原陽性。 人類免疫缺陷病毒-1/2 人類免疫缺陷病毒（HIV)之試驗係一種用於檢測1型及/ 134529.doc -28- 200918020 或2型人類免疫缺陷病毒（hw]及HIV_2)之抗體的合成肽 酵素免疫測疋（EIA)。該試驗使用經該病毒之四種肽之混 〇物塗覆的微孔。市售試驗係Bi〇_Rad HIV1/HIV_2 eia試 驗套組。此試驗可用於測試傳染性疾病樣本。可使用其他 適宜試驗測試HI V-1/2。

藉由與孔中吸附肽相互作用來評估樣品中HI v_丨及hIV_2 抗體之存在。欲測樣本在樣品稀釋劑中稀釋，添加至每一 孔中，培月含有該等孔之板，且洗滌之。若HIV_丨或Ηιν_2 之抗體存在’則彼等會結合於吸附抗原且不會由洗務去 除。隨後向該等孔中添加工作偶聯物溶液，過氧化酶標記 之山羊抗人類免疫球蛋白，其會結合於抗體_抗原複合物 (若存在）。藉由洗滌步驟去除未結合之偶聯物。接下來， 向該板中添加工作色原體溶液，並進行培f。顯現藍色或 藍綠色，與抗體結合於抗原塗覆板之量成比例。藉由添加 酸來終止酵素反應，導致顏色變為黃色。使用波長設定於 450 nm之分光光度計來測定對照及樣品之吸光率。基於一 個測定之吸收界限值，藉由顏色變化之吸收值來解㈣驗 結果。具有小於該界限之吸收值之樣品被視為無反應性或 人類免疫缺陷病毒陰性。具有大於該界限之吸收值者被視 為具反應性或人類免疫缺陷病毒陽性。 巨細胞病毒 巨細胞病毒（CMV)係屬於皰療病毒家族之常見人類病主 性病原體。CMV抗體在個體中之存在表明先前受該病毒： 染。CMV試驗係用於檢測人類血清或血漿中巨細胞病毒 134529.doc •29- 200918020 (CMV)之抗體（IgG加IgM)的定性固相紅細胞黏附試驗系 統。市售試驗係來自Immuocor之Capture CMV。其他適宜 試驗可用於測試CMV。 分析程序係在經滅活CMV病毒塗覆之微量滴定孔中實施 的兩步固相紅細胞黏附試驗。向該等經病毒塗覆之孔中添 加血清或血漿樣本。將樣品培育五分鐘；在此期間CMV蛋 白特異性抗體與固定病毒性蛋白結合。自該等孔洗出未結 合免疫球蛋白並用抗_IgG_加抗-IgM-塗覆之指示紅細胞的 懸浮液代替。離心使該等指示紅細胞與結合固定病毒性蛋 白之抗體接觸。在陽性試驗中，指示紅細胞在遷移至孔底 部時會受到阻礙，此乃因在該等指示紅細胞與病毒結合抗 體之間形成抗-IgG及抗-IgM橋接之故。結果，該等指示紅 細胞黏附於微量滴定孔之表面上。相反，當不存在病毒性 抗原-抗體相互作用（即，陰性試驗）時，該等指示紅細胞在 其遷移期間不會受到阻礙並以堆積、清晰可辨的細胞紐扣 形式沈積於孔底部。 人類嗜T淋巴細胞病毒（HTLV I/II) 人類嗜T淋巴細胞病毒（HTLV I/II)試驗可檢測HTLV-I及 HTLV-II病毒之抗體。HTLV-Ι與成人T-細胞白血病/淋巴瘤 (ATL)相關且HTLV-Ι與脊髓病/熱帶痙攣性下肢無力 (HAM/TSP)相關。HTLV I/II試驗係用於定性檢測人類血清 或血漿中I型及II型人類T-淋巴細胞病毒抗體之活體外酵素 免疫測定（EIA)。市售試驗係Inno-Lia HTLV I/II。其他適 宜試驗可用於測試人類嗜T淋巴細胞病毒（HTLV I/II)。 134529.doc -30- 200918020 該刀析使用塗覆有經清潔劑溶解並經 HTLV蛋白之珠體作為固相以使抗體與來=處主理之 数之HTLV社人 人類血清或血 〜°隨後將針對與辣根過氧化㈣偶聯之人 類免疫球蛋白的山羊抗體與該珠體一起培育線 等:t體與含有過氧化氯之。-苯二_)基質一起培； 码右存於該樣本中之抗體與該珠體結合，則顯現撥黃色。 在樣品稀釋劑中稀釋該試驗樣品並與經 r ΗΤΙ^-Ι& ΗΤίΛΜι 蛋白 解之 承本乙烯珠體一起庐 育。存於該樣本中之特異性抗體可與該珠體上之肪 HTLV-Π抗原結合。藉由洗務該等珠體來去除未結合材 料。隨後將針對與辣根過氧化物酶偶聯之人類⑽的山羊 抗體（抗-人類IgG : HRPO)與該等珠體一起培育且該山羊抗 體可與固相上之人類IgG結合。藉由洗條該等珠體去除未 結合偶聯物。隨後將該等珠體與含有過氧化氫之〇_苯二胺 (OPD)基質溶液-起培育。〇1>]〇基質溶液與HRp〇之反應產 生橙黃色。所形成顏色強度與存於該樣本中之ητιλλι&/ 或HTLV-II抗體的量成比例。藉由添加硫酸來終止該酵素 反應且使用分光光度計讀取所顯現顏色之強度。基於測定 吸收界限值，藉由顏色變化吸收值來解釋試驗結果。具有 小於界限之吸收值之樣品被視為非反應性或人類τ_淋巴細 胞病毒陰性。具有大於界限之吸收值者被視為具反應性或 人類Τ-淋巴細胞病毒陽性。 西尼羅河病毒 西尼羅河病毒（WNV)係與在中等流感樣症狀至嚴重神經 134529.doc 31 200918020 變性範圍内之人類痂症> > 、届相關的蚊傳播黃病毒。WNV之試驗 :為市售Procleix WNV分析，其涉及發生於單—試管中之 三個主要步驟：樣本製備；#由轉錄介導之擴增(tma)實 施WNV RNA乾擴增；及藉由雜交保護分析來檢測擴增產 物。其他適宜試驗可用於測試西尼羅河病毒。 在樣本製備期間’藉由使用靶捕獲自樣品分離RNA。使 用清潔劑處理該樣品以溶解病毒包膜、使蛋白變性及釋放 病毒性基因組RNA。與WNV之高度保守區同源之寡核㈣ 與RNA或DNA祀（倘若存於樣品中）雜交並被捕獲到在磁場 中自樣品分離的磁性微粒上。使用洗❹驟來自反應試管 去除外加組份。使用靶捕獲系統來實施磁性分離及洗滌步 驟。 靶擴增藉由TMA發生，TMA係利用兩種酵素之基於轉錄 之核酸擴增方法。逆轉錄酶用於產生DNA拷貝。隨後聚合 酶自DNA拷貝模板產生多個RNA拷貝。pr〇cleix wnv分析 使用該TMA方法以擴增WNV RNA區域。 藉由ΗΡΑ，使用與擴增子互補之具有化學螢光標籤之單 鏈核探針來實現檢測。該經標記核酸探針可與擴增子特 異性地雜交。選擇試劑可藉由滅活未雜交探針上之標籤而 區分雜交探針與未雜交探針。在檢測步驟期間，量測由雜 父探針產生的化學螢光信號。藉由工作靶捕獲試劑向每一 试驗樣品、對照及分析校準儀中添加内標對照。倘若該作 號小於界限，則樣品係非反應性或WNV陰性。倘若該作號 大於界限，則樣品具反應性或係WNV陽性。 134529.doc -32- 200918020 梅毒 梅毒病原體係微生物蒼白密螺旋體。梅毒之試驗可檢測 由人類形成的抵抗蒼白密螺旋體之抗體。該試驗與非密螺 旋體脂質抗原反應。市售試驗係螢光密螺旋體抗體吸附 (FTA-ABS)試驗。其他適宜試驗可用於測試梅毒。 i 該FTA-AB S試驗反應可檢測抵抗梅毒病原體之循環抗 體。主要反應涉及沿該微生物之表面及内部結構與抗原連 接之抗體。此反應在該試驗培育步驟期間發生同時在吸附 劑中以1:5稀釋血清或樣品並使用該血清或樣品覆蓋微生物 塗片。自腐生Reiter密螺旋體培養物製備該吸附劑，該腐 生Reiter密螺旋體培養物含有可去除發現於正常個體中"密 螺旋體群抗原，，之非特異性抗體的物f，&不會明顯Μ 附抵抗患病群體之毒力密螺旋體屬的抗體。沖洗期係在初 次培育之後，其可去除所有未結合血m隨後係二次 反應及培育期。在二次反應中所用試劑係螢光標記之抗人 類偶聯物，其覆蓋該塗片。隨後充分地沖洗該抗原表面以 徹广^除未結合偶聯物並在適當營光顯微鏡下觀察。相對 :::該：驗程序之特異性及靈敏性的對照標樣，記錄患 螢光=度。根據4+至陰性（無螢光）之等級來分級 初步研究 對藉由用於月經幹細胞收集及 兩個月經# σIβ 呆存之月經液供體收集的 月、，二樣叩實施初步傳染性 認傳染性隹、广、日,u 两研九。使用已形成的公 a疾病進行測試，且其 134529.doc •33- 200918020 由第三方傳染性疾病測試設備應用。藉由該供體按照在美 國專利申請案第22/074,423號中所揭示收集方法來收集包 含月經血、流體、細胞及組織之月經。該供體亦提供對比 • 靜脈血液樣品，按照用於測試傳染性疾病之標準靜脈切開 術技術。 . 使用個體獲取套組自該供體收集月經樣本，該個體獲取 . 套組包含在覆蓋於石蠟膜中之擱架中的介質試管、至少_ 個收集裝置及使用說明書（即，DWaCup)、防腐擦栻塾、 % 、塑料袋、用於將樣品運輸至實驗室之小生物危害品袋、 石蠛膜、納米冷卻劑、及收集表格。該收集套組在使用前 -持在約1C至約i〇c之冷藏溫度下。可在供體月經期之 月_經量最多日中的任一日（通常為第-日及/或或第二日）進 订收集。供體使用DIVA收集杯。在使用之前對該收集杯 實施消毒且該供體按照生產商說明使用。在收集之前，供 體洗手並在月經收集期間盡可能地使用無菌技術。 〇 將忒收集杯保持在陰道内小於約3小時以收集傳染性疾 :測°式用月經樣本。供體取出收集杯並將所收集月經液樣 倒入在&菌50微升錐形管中之具有抗凝劑（肝素1〇個單 ’ ^微升）的約W微升等；參溶液（漢克平衡鹽溶液）中。將該 H樣本倒人錐形管中同時避免與該管之邊緣接觸。在該 2形s上旋緊錐形管之帽蓋且隨後用塑料石蠟膜包裹以防 月4樣本洩露。將該錐形管翻轉若干次以混合該月經樣 本與該等滲溶液及抗凝劑。 對第一樣本重複該等收集步驟。將第一樣本在約2。匚至 134529.doc •34· 200918020 約8°C之溫度下冷藏直至收集到第二樣本。將含有月經樣 本及靜脈樣本之錐形管置於小塑料袋中並放在含有冰之保 溫盒（thermal box)中。在運輸期間將月經樣本及靜脈樣本 . 保持在約1°C至約1 〇°C之溫度下。在收集後至少約48小時 内將含有月經樣本及靜脈樣本之包裹轉運至實驗室。 當該樣品到達實驗室時，將每一月經樣本分至兩個經 EDTA塗覆之試管中。對具有兩個試管之各組的每一組加 標籤並填寫訂購表格以訂購對來自該供體之月經樣本與靜 脈樣本之傳染性標記物測試。所訂購試驗包括用於B型肝 炎表面抗原、B型肝炎核心抗體、C型肝炎病毒、1型及2 型人類免疫缺陷病毒、Ι/Π型人類T-淋巴細胞病毒、巨細 - 胞病毒及梅毒之市售傳染性疾病試驗。 對初步試驗數據顯示對比關係之月經樣品的測試結果係 如下。 表1 :傳染性疾病試驗結果：靜脈樣本對月經樣本-定性 及定量結果 樣品1 試驗 樣品1 — 瞢脈血 樣品1 -月經 HBsAg 陰性 非反應性 陰性 非反應性 HIV 1/2 陰性 非反應性 陰性 非反應性 HBc 陰性 非反應性 陰性 非反應性 HTLV I/II 陰性 非反應性 陰性 非反應性 HCV 陰性 非反應性 陰性 非反應性 樣品2 靜脈血 HBsAg HBc HCV HIV 1/2 HTLV I/II 陰性對照 0.031 0.083 0.048 0.061 0.039 134529.doc -35- 200918020 樣品ID74 0.018 0.047 0.009 0.056 0.061 陽性對照 1.378 1.365 1.696 1.575 0.693 界限值 0.096 0.494 0.644 0.302 0.37 月經A HBsAg HBc HCV HIV 1/2 HTLVI/II 陰性對照 0.023 0.083 0.047 0.041 0.039 樣品ID75 0.029 0.052 0.014 0.028 0.042 陽性對照 1.378 1.365 1.71 1.265 0.727 界限值 0.096 0.494 0.663 0.304 0.366 月經B HBsAg HBc HCV HIY 1/2 HTLV I/II 陰性對照 0.042 0.057 0.044 0.027 0.026 樣品ID618 0.055 0.076 0.006 0.042 0.034 陽性對照 1.38 1.09 1.749 1.494 0.856 界限值 0.103 0.46 0.645 0.283 0.356 定性結果， 樣品2: 試驗 結果 HBsAg 陰性 非反應性 HIV 1/2 陰性 非反應性 HBc 陰性 非反應性 HTLY I/II 陰性 非反應性 HCV 陰性 非反應性 外周血樣與月經血樣之對比研究 使用本發明方法實施研究以分析外周血液（PB)樣本之傳 染性疾病標記物測試，與亦稱作”M2"樣本之月經血（MB) 樣本對比。測試成對PB及MB樣本之34個樣本。按照本發 明收集月經樣品及相應的外周血樣。使用商業傳染性疾病 試驗測試或分析適宜罝之月經樣品及外周血液樣品以測定 134529.doc -36- 200918020 傳染性疾病之存在。 對比研究之傳染性疾病試驗 藉助 Ortho ELIS A 試驗系統（Ortho (2006). 5

Virus Core Antigen (Recombinant). ELISA Test System. Raritan, N.J.)測試或分析成對月經樣品及外周血液樣品以 確定是否存在B型肝炎病毒核心抗原（抗-HBc)。該測試包 含酶聯免疫吸附測定（ELISA)，其以在經重組體衍生之B型 肝炎核心抗原（rHBcAg)塗覆之微孔中實施的三階段試驗方 式進行。在第一階段，將每一足夠量之試驗月經樣品及外 周血液樣品分別在添加有稀釋劑之試驗孔中培育。在第二 階段期間，向孔中添加對人類IgG及IgM具有特異性之抗體 偶聯物。在第三階段添加酵素檢測系統。檢測系統係由過 氧化氫及〇-苯二胺組成。按照測試協議，所測試兩個成對 外周血液及月經液樣本係HBc抗原陽性且所測試其他成對 外周血液及月經液樣本係HBc抗原陰性。實例性數據示於 表2中。 表2 : B型肝炎病毒核心抗原之成對PB/MB測試的陽性及 陰性結果

A本 HBc M2-028IDT 1.074反應性 PB-028IDT 9.907反應性 M2-024IDT 0.042 NR M2-024IDT 0.131 NR 使用 ABBOTT PRISM試驗（Abbott Laboratories (2007). Abbott Prism HTLV-I/HTLV-II Abbott Park, 134529.doc -37- 200918020 成對月經樣品及外周血液樣品以確定是否存在i型及π型人 2 τ-淋巴細胞病毒。ΑβΒ〇丁丁 pRisM s帅⑺係用於實施化 學螢光免疫測定（ChLIA)之自動化免疫測定分析儀。每一 成對月經及外周血液樣品分別與經超聲波處理及清潔劑_ 滅活之HTLV-Ι及HTLV_„抗原塗覆的微粒一起培育。隨後 /此&物過濾出該等微粒並與由生物素化及

蛋白構成之探針一起培育。向該等微粒中添加經 吖啶鏽標記之抗-生物素偶聯物以結合任一存在探針。在 培月後，洗出未結合偶聯物。添加鹼性過氧化氫溶液以產 生任-化學榮光信號。計數所得光子。所發出任—光之量 與樣本中抗-HTUM及/或抗ATLVJ之量成比例。沒有所 測試成對外周血液及月經液樣本係抗-HTLV-i及/或抗_ HTLV-II陽性。實例性數據示於表3中。 表3 . I型及II型人類丁_淋巴細胞病毒之成對则測試 的陽性及陰性結果

使用ABBOTT PRISM彡統測試或分析成對雜樣品及外 周血液樣品以確定是否存在B型肝炎表面抗原之抗體（小鼠 單株1gM)。每―成對月經及外周A液樣品分別與經小鼠單 株抗-HBc塗覆的微粒一起培育。隨後自該混合物過濾出該 等微粒並與經十线標記之山羊多株抗_ΗΒ。偶聯物一起培 月。在此培月後，洗出未結合偶聯物。添加鹼性過氧化氫 134529.doc -38- 200918020 溶液以產生化學螢光信號。計數所得光子。所發出光之量 與樣本中HBsAg之量成比例。所測試一個月經樣本係 HbsAg陽性且所測試其成對外周血樣係HBsAg陰性。所有 其他測試樣本係HbsAg陰性。實例性數據示於表4中。 表4 : B型肝炎表面抗原之成對PB/MB測試的陽性及陰性 結果

樣本 HbsAg M2-030IDT 重複反應性 PB-030IDT 0.069 NR M2-039IDT 0.057 NR PB-039IDT 0.030 NR

使用 ORTHO ELISA試驗系統（Ortho (2006). C

Virus Encoded Antigen (Recombinant c22-2, c200, and A^5)· ELISA Test System· Raritan，N.J)測試或分析成對月 經樣品及外周血液樣品以確定是否存在C型肝炎病毒（抗-HCV)。在經三種重組C型肝炎病毒（rHCV)抗原：C22-2、 c200及NS5之組合塗覆之微孔中實施三階段試驗。在第一 階段，在試驗孔中培育每一成對月經及外周血液樣品之稀 釋樣品。在第二階段期間，向該等孔中添加與辣根過氧化 物酶偶聯之鼠科單株抗體。在第三階段中添加酵素檢測系 統且該酵素檢測系統包含過氧化氫及〇-苯二胺（OPD)。使 用微孔讀取器量測終產物。結合偶聯物之量與顏色強度成 比例且因此係存於該樣品中之抗-HCV之濃度的函數。所 測試一個成對月經樣品及外周血液樣品係HCV陽性。所有 其他測試成對樣本係陰性。實例性數據示於表5中。 134529.doc -39- 200918020 表5: C型肝炎病毒之成^y PB/MB測試的陽性及陰性結果

樣本 i_J.·應聲f HCV M2-017IDT 9.714反應性 PB-017IDT 9.718反應性 M2-016IDT 0.004 NR PB-016IDT 0.016 NR 使用 BIO-RAD HIV-1/HIV-2試驗（Bio-Rad (2007). //請

Immunodeficiency Virus Types 1 and 2 (Recombinant 办尸叩^㈣，Redmond，WA)測試或分析成對月經樣 品及外周血液樣品以確定是否存在1型及2型人類免疫缺陷 病毒。該Bio-Rad試驗係基於直接抗體夾心式技術之原理 的酵素免疫測定。使用如下經純化抗原塗覆固相微孔條形 板：衍生自HIV-1之gP160及P24重組蛋白；代表HIV_2跨膜 糖蛋白gp36之免疫顯性區的肽；及模擬人工111¥_1群〇特異 性抗原決定部位之合成多肽。向該等微孔中添加成對月經 與外周企樣本及對照樣本以及含有染劑之樣品稀釋物，該 染劑在此組合期間可由紫色變為藍色。培育並洗滌該等 孔。添加綠色偶聯物溶液並培育該等孔。該偶聯物含有過 氧化物酶-偶聯之抗原（模擬膜糖蛋白之各 免疫顯性抗原決定部位之肽及p24重組蛋白）。隨後添加工 作TMB溶液並進行培育。顯現藍綠色，與存於樣本中之 HIV抗體的量成比例。沒有測試成對樣本係贈山·… 陽性。實例性數據展示於表6中。 表6. 1型及2型人類免疫缺陷病毒之成對ρΒ/ΜΒ測試的 陽性及陰性結果 134529.doc -40· 200918020

HIV-1/II M2-016IDT 0.024 NR PB-016IDT 0.028 NR 使用 OLYMPUS ΡΚ TP 系統（01ympus· 汴

System Microhemagglutination Test for Detection of Treponema pallidum Antibodies using the Olympus PK /似㈣价.Center Valley，PA)測試或分析成對月經樣品及 外周血液樣品以確定是否存在蒼白密螺旋體。此系統係基 於凝集反應及模式識別之原理。在稀釋劑中稀釋每一成對 月經及外周血_液樣品，該稀釋劑係由含有正常兔子睾丸提 取物之磷酸緩衝鹽及經超聲處理萊特爾密螺旋體（Reher τ. phagedenis)之細胞組份組成。隨後向由對病原性蒼白密螺 旋體（T. pallidum)組份敏感之固定雞紅細胞組成之試驗混 合物中添加敏感細胞。使該等反應物在梯田狀微孔中沈 積。當樣品中存在蒼白密螺旋體抗體時，出現血凝反應。 使用OLYMPUS PK設備來讀取該等孔之凝結及未凝結圖 案。反應性試驗係細胞之同質層；非反應性試驗可形成由 清亮區包圍之緻密紐扣體。沒有測試成對月經及外周金液 樣品係蒼白密螺旋體陽性。實例性數據展示於表7中。 表7 :蒼白密螺旋體（梅毒）之成對試的陽性及陰 性結果 ""

使用BIO-RAD系統（Bio_Rad (2007)·細如办,〇 "啊的万 134529.doc 200918020

Surface Antigen (Mouse Monoclonal). Redmond, 分析成對月經樣品及外周企液樣品以確定是否存在B型肝 炎表面抗原之抗體（小鼠單株）。此系統係用於檢測人類血 清或血漿中B型肝炎表面抗原（HBsAG)之定性酵素免疫測 定。微孔條形板之孔經小鼠HBsAg之單株抗體（抗-HBs)塗 覆。隨後向該等孔中添加成對月經及外周血液樣品以及適 當對照樣本並培育。洗滌，繼而添加偶聯物溶液（針對 HBsAg之過氧化物酶偶聯小鼠單株抗體）。向該板中添加 工作TMB溶液並培育。顯現藍色或藍綠色，與存於該樣本 中之HBsAG之量成比例。 使用 HIV-1 Discriminatory Assay 及 PROCLEIX ULTRIO 系統來測試或分析成對月經樣品及外周血液樣品。該 PROCLEIX ULTRIO Assay 係用於檢測 HIV-1 RNA、HCV RNA及HBV DNA之定性活體外核酸分析系統。該分析含 有可用於同時檢測所有三種病毒或個別病毒：HIV- 1、 HCV及HBV之試劑。該分析之第一步係製備成對月經及外 周血液樣品；其中藉由使用靶捕獲來分離病毒性RNA及 DNA。使用清潔劑處理該等樣品以溶解病毒包膜、使蛋白 變性並釋放病毒性基因組RNA及/或DNA。於該等試驗樣 品中，使與HIV-1、HCV及HBV之高度保守區同源之寡核 苷酸與HiV-1 RNA、HCV RNA或HBV DNA靶（倘若存在）雜 交。雜交靶隨後被捕獲至在磁場中自樣品分離的磁性微粒 上且隨後洗滌之。靶擴增藉由TMA發生，TMA係利用兩種 酵素，MMLV逆轉錄酶及T7 RNA聚合酶之基於轉錄之核酸 134529.doc -42- 200918020

擴增方法。逆轉錄酶用於產生靶序列之DNA拷貝。該分析 利用ΤΜΑ方法來擴增HIV-1 RNA、HCV RNA及/或HBV DNA之區域。藉由ΗΡΑ，使用與擴增子互補之具有化學螢 光標籤之單鏈核酸探針來實現檢測。該經標記核酸探針與 擴增子特異性地雜交。選擇試劑可藉由滅活未雜交探針上 之標籤而區分雜交探針與未雜交探針。在檢測步驟期間， 在光度計中量測由雜交探針產生的化學螢光信號並報告為 相對光單位（RLU)。藉由含有内標對照之工作靶捕獲試劑 向每一試驗樣品、對照（倘若使用）及分析校準儀試管中添 加内標對照。此試劑中之内標對照可控制樣品處理、擴增 及檢測步驟。藉由具有不同標籤之探針所發出光之示差動 力學來區別每一試管或分析反應之内標對照信號與HIV_ 1/HCV/HBV信號。使用可迅速發光（閃爍信號）之探針來檢 測内標對照特異性擴增子。使用具有相對較慢發光動力學 (發光信號）之探針來檢測HIV-1 /HCV/HB V特異性擴增子β 雙重動力學分析（DKA)係一種用於區分閃光及發光標籤之 信號的方法。當用於同時檢測出乂-丨、HCV及HBV時，該 分析可區分内標對照與組合HIV-1/HCV/HBV之信號但不能 辨別個別HIV-1、HCV與HBV信號。沒有測試成對月經或 外周血樣係任一傳染性疾病陽性。 儘管已展示及闌述本發明之較佳實施例，然而彼等熟習 此項技術者應理解在不背離其更廣泛態樣的情況下，可實 施許多改動及修改。因此，隨附申請專利範圍意欲涵蓋所 有此等屬於本發明之真正精神及範疇内的改動及修改。 134529.doc -43- 組織及 組織及 200918020 【圖式簡單說明】 圖1展示繪示用以獲取及處理月經血、液體 胞之方法實施例之概況的流程圖； 圖2展示繪示用以獲取及處理月經血、液體 胞之方法實施例之概況的流程圖； 圖3展示繪示用於獲取及處理月經血、液體、組織及 胞並測試傳染性疾病之另一實施例的流程圖； 圖4展示繪示用於獲取及處理臍帶血並測試傳染性疾 之本發明方法之概況的流程圖；及 圖5展示繪示用於獲取及處理羊水並測試傳染性疾病 本發明方法之概況的流程圖。 細 細 細 病 之 134529.doc 44-

Claims (1)

1. 200918020 十、申請專利範圍： 1. 一種用於分析非靜脈及非動 本以檢測至少—種傳 《人類液體或細胞樣 如下步驟：傳^生疾病存在之方法，該方法包括 自供體獲得足夠體積之非靜 胞樣本；& 靜脈及非動脈穿刺液體或細 測試該足夠體積之非靜脈及 細胞樣本之傳染性疾病。 脈穿刺之人類液體或 f 2. 如請求項1之方法，苴中哕方、土 兮徂躲 ’、^ 法匕括如下其他步驟：對 忒供體之動脈或靜脈血樣實 4社罢伽# , 她埤也，則減，及比較確證測 δ式、、，口果與該非靜脈及非動脈穿 之試驗結果。 動脈穿刺之人類液體或細胞樣本 3·如請求们之方法，其中該方法包括報告試 一步驟》 4. 如請求们之方法，其中自月經液、子宮内膜月經細 胞、骑'帶血、或革匕媒σ /半Jc樣σσ之任一種獲取該非靜脈及非動 脈穿刺之人類液體或細胞樣本。 5, 如請求項1之方法，其中該傳染性疾病包含Α型肝炎、Β 里I炎c型肝炎、巨細胞病毒、丨型人類唁τ淋巴細胞 病毋（T cell Lymph〇tr〇pic Virus)、Η型人類嗜丁淋巴細胞 7丙骨1型人類免疫缺陷病毒、II型人類免疫缺陷病毒、 西尼羅呵病毒、克氏錐蟲（Trypans〇rna cruzi)、梅毒及蒼 白选螺旋體（Treponema pallidum)中之任一種。 6·如請求項丨之方法，其中該測試包含篩選試驗或確證試 134529.doc 200918020 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 如凊求項1之方法’其中該測試包含 存在於人類中相關之抗原或抗體。 ，、傳木性疾病 一種用於直接測試人類之月經液樣本以測 種傳染性疾病之方法’該方法包括如下步驟·· 一 自預收集的樣品分離足夠體積之月經液樣本；及 分析該月經液樣本以測定存在傳染性疾病。 如請求項8之方法，其中該方法包括如下其他步 该供體之動脈或靜脈血樣實施確 試結果與該月經液樣本之試驗結果/及比k確證測 =項8之方法’其中該傳染性疾病包含A型肝炎、B 病二？型肝炎、巨細胞病毒、1型人類嗜T淋巴細胞 I:型人類嗜T淋巴細胞病毒、丨型人類免疫缺陷病 I 2人類免疫缺陷病毒、西尼羅河病毒、克氏錐 蟲梅母及蒼白密螺旋體中之任一種。 2請求項8之方法，其中該測試包含_選試驗或確證試 驗。 Π求項8之方法，其中該分析包含測定與傳染性疾病 =在於月經液樣本中相關之抗原或抗體之存在。 種用於直接測試人類體液或細胞樣本以測定存在至少 -種傳染性疾病之方法，該方法包括如下步驟： =備足夠體積之人類體液或細胞樣本用於分析；及 分析人類體液或細胞樣本與傳染性疾病之抗原或 抗體。 134529.doc 200918020 1 4.如明求項i 3之方法，其中該方法包括如下其他步驟：封 °亥仏體之動脈或靜脈血樣實施確證測試，及比較確證測 試結果與該人類體液或細胞樣本之試驗結果。 1 5.如吻求項13之方法，其中自月經液、+宮内臈月經細 胞臍帶血、或羊水樣品之任一種獲取該人類體液或細 胞樣本。 如明求項13之方法，其中該傳染性疾病包含A型肝炎、B 里：炎、c型肝炎、巨細胞病毒、丨型人類嗜τ淋巴細胞 骨、II型人類嗜T淋巴細胞病毒、i型人類免疫缺陷病 m型人類免疫缺陷病毒、西尼羅河病毒、克 蟲、梅毒及蒼白密螺旋體中之任—種。 、 17. 如請求項13之方法，其中該 驗。 匕3師選試驗或確證試 18. 如請求項13之方法，其中該測試 產生之抗原或傳染性疾病存在於人=傳染性疾病所 的存在及數量。 ㈣相關之人類抗體 134529.doc