JP2010530214A - 子宮内膜細胞/月経血細胞の獲得、単離および凍結保存 - Google Patents
子宮内膜細胞/月経血細胞の獲得、単離および凍結保存 Download PDFInfo
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Abstract
【選択図】 図1
Description
本出願は、各々「子宮内膜細胞/月経血細胞の獲得、単離および凍結保存」と題する、2007年3月1日に出願された米国仮特許出願第60/904,836号、2007年3月20日に出願された第60/918,961号、2007年9月17日に出願された第60/994,166号、2007年10月9日に出願された第60/998,255号、2008年1月22日に出願された第61/011,881号、および2008年2月29日に出願された第61/067,849号についての優先権を主張するものであり、その全体を参照することによって本明細書に組み入れる。
月経流出物サンプルは処理施設によって受け取られ、処理施設システムへと記録される。一旦月経流出物サンプルが処理施設で受け取られたならば、それは、処理の全体にわたって約1℃〜約25℃の温度で維持できる。各月経流出物サンプルはBSC中で処理し、無菌技術を使用して遠心分離できる。BSCで作業するときに70%のIPAによりグローブを頻繁に拭く。レッドトップチューブ、針、シリンジ、レッドトップチューブのためのラック、BacTボトル、アルコールパッド、50mlのコニカル、50mlのコニカルのためのラック、および月経流出物サンプルの処理の前のピペッターを含むが、これらに限定されていない、BSC中で処理するために必要な他のすべての資材を無菌的に置く。BSCを消毒した後に、すべての滅菌済み供給品を置く。このプロセスのために使用される滅菌済み供給品はすべて、パンまたは滅菌済みドレープ中に置くことができる。滅菌済み供給品は、針、シリンジ、ならびにレッドトップチューブ、レッドトップチューブのためのラック、血液培養ボトル、アルコールパッド、50mlの収集用のコニカルチューブ、50mlの収集用のコニカルチューブのためのラック、ピペットおよびアイスパンを含むBSC中に置かれた他の資材を含みうる。培地および試薬はすべて、好ましくは氷上に置かれ、約1℃〜約15℃の間で保存されるが、製造者の使用説明書に基づいて約2℃〜約8℃でもまたありうる。
1つの実施形態において、月経流出物サンプルの遠心分離は約4℃で約7分間約2000rpmで行なうことができる。遠心分離後に、次に月経流出物サンプルの各標本を遠心分離機から取り出すことができる。上清を吸引するために収集チューブをBSCへ移す前に、収集容器の外部を消毒することができる。沈殿を約10mlのDPBS(または同等の置換物)中に再懸濁し、次にステージ2処理を行なうことができる。沈殿は本明細書において記述されるような任意の汚染除去工程に従って処理することもまたできる。
他の実施形態において、月経流出物サンプルの遠心分離は密度勾配を使用して行なうことができる。例えば、密度勾配は、リンパ球分離培地(約20℃で密度1.077〜1.083g/ml−セルグロー(Cellgro))、またはより高密度もしくはより低密度を有する他の適切な勾配でありえる。月経流出物サンプル、収集培地および密度勾配を含む収集用のコニカルチューブを、遠心分離にかける。例えば、収集用のコニカルチューブは、約15℃〜約30℃の間で(好ましくは約20℃で)、および遠心分離機を減速させるために適用されるブレーキなしで、約30分間約14,000rpmで遠心分離できる。
なおさらなる実施形態において、月経流出物サンプルを滅菌済みフィルターで濾過することができる。滅菌済みフィルターは、約40ミクロン、約70ミクロン、または約100ミクロンでありえる。濾過は、月経血幹細胞を含む月経流出物サンプルを約1℃〜約30℃の間で約7分間約2000rpmで遠心分離することを含むことができる。
さらなる実施形態において、月経流出物サンプルはデンプン沈降によって処理できる。1つの実施形態において、ヒドロキシエチルデンプンは1対5の比率、すなわち、約1mlのデンプン対約5mlの月経流出物サンプルで使用できる。各月経流出物サンプルは前述の比率に従って混合できる。混合物は、沈降を補助するために約6分間約50gで遠心分離できる。前述の遠心分離工程ありまたはなしで、混合物を約30分間または最大約2時間沈降できる。沈降後、月経血幹細胞を含むバフィーコートを取り出し、月経血幹細胞を遠心分離して凝縮した。遠心分離は、DPBS中に懸濁した月経血幹細胞を、約1℃〜約30℃の間で約7分間約2000rpmで遠心分離することを含む。
遠心分離、密度勾配遠心分離、濾過またはデンプン沈降の前述の工程の任意の1つに従って収集されるような、収集された月経血幹細胞のサンプルは、任意の汚染除去プロセスを行なうことができる。沈殿についての過剰の液体は、サンプルの全体積を最初に計算した後に除去できる。沈殿は約5mlの汚染除去培地中で再懸濁できる。
凍結保存のために、DPBS中で懸濁した残りの細胞は、凍結保存のための調製において少なくとも約15分間氷上に置くことができる。調製は、月経血幹細胞に凍結保存培地を追加すること、および速度制御フリーザーまたは他の適切なフリーザーシステム(モニタリングダンプフリーズまたはフリーズコンテナー(ナルゲン(Nalgene)社))を利用して、約−90℃の最終温度まで月経血幹細胞の温度を低下させるいくつかの温度低下工程を混合物に対して行うことを含むことができる。適切な速度制御フリーザーは、クリオメド・サーモ・フォーマ・コントロールド・レート・フリーザー(Cryomed Thermo Forma Controlled Rate Freezer)7454(サーモ・エレクトロン(Thermo Electron)社)、プラナー・コントロールド・レート・フリーザー・クリオ(Planar Controlled Rate Freezer Kryo)10/16(TSサイエンティフィック(TS Scientific)社)、ゴーディナー(Gordinier)、バイオ−クール−FTSシステムズ(Bio−Cool−FTS Systems)、およびアシンプトート(Asymptote)EF600、バイオストア(BIOSTOR)CBS 2100シリーズを含むが、これらに限定されない。
月経血幹細胞の任意の収集されたサンプルは、全細胞カウントおよび色素排除を介するトリパンブルーによる細胞生存率について試験できる。月経血幹細胞のサンプルは、細胞マーカーを発現する細胞の存在についてもまた解析できる。
細胞は、本明細書において記述されるような月経血幹細胞のための細胞マーカーの少なくとも1つについて選択できる。細胞は、所望されない細胞を除去するネガティブ選択工程もまた行なうことができる。細胞選択プロセスの全体にわたって、無菌技術を使用できる。細胞選択は、新鮮な細胞、処理後の細胞、あらかじめ凍結保存した解凍した細胞、および培養中の細胞について使用できる。細胞選択は、250万細胞〜1000万細胞で実行できる。細胞は、250万未満の細胞を含むサンプルまたは1000万以上の細胞を含むサンプルからもまた選択できる。
CD117幹細胞は、CD117幹細胞を分離するためにMSカラムを使用して、ワーキングバッファー中の細胞懸濁から分離できる。例えば、MSカラム(ミルテニー・バイオテク社)または他の適切なカラムを使用できる。あるいは、分離細胞に対して他の適切な方法を使用できる。ユニット、マルチスタンド、MSカラムおよびマイクロビーズを含む、ミルテニー・バイオテク社を介して入手可能なミニマックス(MiniMACS)キットは、CD117細胞選択のために使用できる。MSカラムは、ワーキングバッファーによるリンスによって調製できる。例えば、カラムをリンスするために使用するワーキングバッファーの体積は約500ulでありえる。カラムを、ミルテニー・バイオテク社を介して入手可能なマックスセパレーターの磁石体または磁石体を提供する適切なセパレーター中に置く。
本発明の方法論に従って収集された月経血幹細胞を含む細胞懸濁は、さらなる選択工程、凍結保存、または治療用もしくは薬用化粧品用の使用のための調製においてさらに培養できる。月経血幹細胞を含む細胞懸濁は、本発明に従う凝縮後に、または凍結保存および解凍後に、細胞培養のために調製できる。適用可能な場合、解凍工程は、解凍する予定の約5mlの凍結保存した細胞を含む各バイアルのために、ヒストパック(Histopaque)(シグマ−アルドリッチ(Sigma−Aldrich)社)として入手可能な約15mlの密度勾配培地または他の適切な培地の小分けをおよそ室温で調製すること、および次に解凍する予定の約5mlの凍結保存した細胞を含む各バイアルのために、チャン(Chang)完全培地、DMEM完全培地もしくはIMDM完全培地または他の適切な培地の約25mlの小分けを調製することを含む。本明細書において記述されたように、処理後、密度勾配、および細胞選択からの新鮮な細胞サンプルもまた培養において播種することができる。
細胞は、約48時間の継代期間で、1cm2あたり約2000細胞でプレーティングできる。細胞がより高い濃度で使用される場合、継代は約24時間の間隔で行なうことができる。組織培養用の処理をしていないT75フラスコを、約15mlの完全培地中で約150,000細胞をプレーティングするのに使用できる。約80%でサブコンフルエントになるまで、プレーティングした細胞を5%CO2インキュベーター中でインキュベートできる。
細胞を液体窒素の蒸気から取り出した後に、細胞を完全に解凍させずに、クリオバイアルを37℃水浴中で撹拌する。部分的に解凍した細胞をDNAse含有冷却したチャン培地に移し、転倒によって穏やかに混合できる。各5mlの細胞懸濁のために、約25mlの冷却したチャンの培地を使用できる。100mlの冷却したチャンの培地に対して約10滴のDNAseをチャン培地に追加できる。細胞懸濁は約5分間約120gで遠心分離できる。上清は吸引でき、細胞を以前に説明した抗生物質培地中に置くことができる。約37℃での少なくとも約12時間のインキュベーション後に、チャン完全培地を使用して細胞を洗浄できる。
懸濁中の細胞は、チャン完全培地、DMEM完全培地(高グルコースまたは低グルコース含有)または他の適切な培地中に、無処理の培養フラスコの中へ1cm2あたり約40,000細胞で播種できる。フラスコは、約37℃の温度で、CO2インキュベーター(サーモ・エレクトロン社またはバイオサイエンス・テクノロジーズ(Bioscience Technologies)社)、または他の適切なインキュベーターシステム中で約5%CO2でインキュベートできる。細胞培養は濁度およびpH変化についてモニタリングされる。pHが高い場合、培地の約50%を交換すべきである。
実施例において、本発明の実行に従って、月経血幹細胞を収集した。特に、M2−01として本明細書において呼ばれて参照される約0.4mlの月経流出物サンプルは、月経周期の間にドナーによって収集された。滅菌された収集器具を、月経流出物のサンプルを収集するのに十分な時間の間ドナーの膣内に置いた。約0.4mlの月経流出物サンプルを、収集器具から収集チューブ中の約10mlの収集培地へと注いだ。収集培地は、カルシウム、マグネシウムまたはフェノールレッド不含有DPBS(メディアテック社)、DPBS1ミリリットルあたり約100単位のペニシリン、DPBS1ミリリットルあたり約100マイクログラムのストレプトマイシン、およびDPBS1ミリリットルあたり約10単位〜約20単位の範囲の防腐剤不含有ヘパリンを含んでいた。月経流出物サンプルおよび収集培地を、収集チューブ中にシールし、収集容器中で氷の上にパックし、発送して処理施設へ輸送した。
他の実施例において、本発明の実行に従って、月経血幹細胞を収集した。特に、M2−02Cとして本明細書において呼ばれて参照される約1.0ml未満の月経流出物サンプルは、月経周期の間にドナーによって収集された。滅菌された収集器具を、月経流出物のサンプルを収集するのに十分な時間の間ドナーの膣内に置いた。月経流出物サンプルを、収集器具から収集チューブ中の約10mlの収集培地へと注いだ。収集培地は、カルシウム、マグネシウムまたはフェノールレッド不含有DPBS(メディアテック社)、DPBS培地1ミリリットルあたり約100単位のペニシリン、DPBS培地1ミリリットルあたり約100マイクログラムのストレプトマイシン、およびDPBS培地1ミリリットルあたり約10単位〜約20単位の範囲の防腐剤不含有ヘパリンを含んでいた。月経流出物サンプルおよび収集培地を、収集チューブ中にシールし、収集容器中で氷の上にパックし、発送して処理施設に輸送した。
なお他の実施例において、本発明の実行に従って、月経血幹細胞を収集した。特に、M2−03Eとして本明細書において呼ばれて参照される月経流出物のサンプルは、月経周期の間にドナーによって収集された。滅菌された収集器具を、月経流出物のサンプルを収集するのに十分な時間の間ドナーの膣内に置いた。月経流出物サンプルを、収集器具から収集チューブ中の約10mlの収集培地へと注いだ。収集培地は、カルシウム、マグネシウムまたはフェノールレッド不含有DPBS(メディアテック社)、DPBS培地1ミリリットルあたり約100単位のペニシリン、DPBS培地1ミリリットルあたり約100マイクログラムのストレプトマイシン、およびDPBS培地1ミリリットルあたり約10単位〜約20単位の範囲の防腐剤不含有ヘパリンを含んでいた。月経流出物サンプルおよび収集培地を、収集チューブ中にシールし、収集容器中で氷の上にパックし、発送して処理施設に輸送した。
月経流出物サンプルの収集の代替方法の結果を解析する研究を実行した。この研究は、収集カップおよび抗生物質含有およびあるいは不含有の収集培地を使用する月経流出物収集方法に従って収集された月経血幹細胞の全有核細胞カウントおよび細胞生存率の決定に注目した。この研究は、月経流出物サンプルが氷上でまたはあるいは室温で輸送された場合、収集後約4時間〜約112時間の間の処理施設の到着後の月経流出物サンプルの温度にもまた注目した。収集され、研究に従って解析された全月経流出物サンプルは161あった。以下のように、全月経流出物サンプルを処理した。(a)46の月経流出物サンプルは、すべて本発明に従って、収集器具を使用して収集し、抗生物質を含む収集培地中に置き、氷上で輸送した、(b)34の月経流出物サンプルは、すべて本発明に従って、収集器具を使用して収集し、抗生物質不含有収集培地中に置き、室温で発送した、および(c)81の月経流出物サンプルは、すべて本発明に従って、収集器具を使用して収集し、抗生物質不含有収集培地中に置き、氷上で輸送した。
月経流出物サンプルは本発明の収集方法に従って4人の異なるドナーから収集し、MSCクローンを月経流出物サンプルから生じさせた。
本発明の実行に従って、いくつかの異なる月経血幹細胞クローンを得た。特に、M2−014−02として本明細書において呼ばれて参照される約30mlの月経流出物サンプルを収集した。月経流出物および収集培地を含んだ月経流出物サンプルは月経周期の間にドナーによって収集された。滅菌された収集器具を石鹸および水により洗浄し、月経流出物のサンプルを収集するのに十分な時間の間ドナーの膣内に置いた。収集培地は、カルシウム、マグネシウムまたはフェノールレッド不含有DPBS(メディアテック社)、DPBS培地1ミリリットルあたり約100単位のペニシリン、DPBS培地1ミリリットルあたり約100マイクログラムのストレプトマイシン、およびDPBS培地1ミリリットルあたり約10単位〜約20単位の範囲の防腐剤不含有ヘパリンを含んでいた。月経流出物サンプルおよび収集培地を、収集チューブ中にシールし、収集容器中で氷の上にパックし、発送して処理施設に輸送した。
本発明の実行に従って、いくつかの異なる月経血幹細胞クローンを得た。特に、M2−015−03として本明細書において呼ばれて参照される約30mlの月経流出物サンプルを収集した。月経流出物および収集培地を含んだ月経流出物サンプルは月経周期の間にドナーによって収集された。滅菌された収集器具を石鹸および水により洗浄し、月経流出物のサンプルを収集するのに十分な時間の間ドナーの膣内に置いた。収集培地は、カルシウム、マグネシウムまたはフェノールレッド不含有ダルベッコリン酸緩衝液生理食塩水(DPBS)(メディアテック社)、DPBS培地1ミリリットルあたり約100単位のペニシリン、DPBS培地1ミリリットルあたり約100マイクログラムのストレプトマイシン、およびDPBS培地1ミリリットルあたり約10単位〜約20単位の範囲の防腐剤不含有ヘパリンを含んでいた。月経流出物サンプルおよび収集培地を、収集チューブ中にシールし、収集容器中で氷の上にパックし、発送して処理施設に輸送した。
本発明の実行に従って、いくつかの異なる月経血幹細胞クローンを得た。特に、M2−015−03として本明細書において呼ばれて参照される約30ml月経流出物サンプルを収集した。月経流出物および収集培地を含んだ月経流出物サンプルは月経周期の間にドナーによって収集された。滅菌された収集器具を石鹸および水により洗浄し、月経流出物のサンプルを収集するのに十分な時間の間ドナーの膣内に置いた。収集培地は、カルシウム、マグネシウムまたはフェノールレッド不含有DPBS(メディアテック社)、およびDPBS培地1ミリリットルあたり約10単位〜約20単位の範囲の防腐剤不含有ヘパリンを含んでいた。月経流出物サンプルおよび収集培地を、収集チューブ中にシールし、氷なしで発送して処理施設に輸送した。
本発明の実行に従って、いくつかの異なる月経血幹細胞クローンを得た。特に、M2−54−02として本明細書において呼ばれて参照される約12mlの月経流出物サンプルを収集した。月経流出物および収集培地を含んだ月経流出物サンプルは月経周期の間にドナーによって収集された。滅菌された収集器具を石鹸および水により洗浄し、月経流出物のサンプルを収集するのに十分な時間の間ドナーの膣内に置いた。収集培地は、カルシウム、マグネシウムまたはフェノールレッド不含有DPBS(メディアテック社)、およびDPBS培地1ミリリットルあたり約10単位〜約20単位の範囲の防腐剤不含有ヘパリンを含んでいた。月経流出物サンプルおよび収集培地を、収集チューブ中にシールし、収集容器中で氷の上にパックし、発送して処理施設に輸送した。
本発明の月経血幹細胞は、適切な細胞培地または薬学的に許容される賦形剤と共に細胞を組み合わせることによって調製されていてもよい。例えば、本発明の月経血幹細胞は、GMP(医薬品最適製造基準)に従う注入または移植のために調製できる。適切な培地または希釈剤は、月経血幹細胞の保持に適切なpHを維持するヘペスバッファーを必要とするHBSS、IMDM、RPMI、アルファMEM、M199およびDMEMのような組織培養培地(分析証明書で立証される適切な試験および結果を含む)を含みうる。タンパク質を最小約0.2%で追加できるが、最高で約30%追加できる。使用されるタンパク質は、ヒト血清アルブミン、ヒト血漿タンパク質画分、ウシ胎仔血清(畜産物を使用する場合、米国食品医薬品局によって必要に応じて適切な安全性試験を含まなくてはならない)、またはウシ血清アルブミンもまた含むことができる。細胞が、凝固、クランピングまたは血餅のリスクがある場合、培地は抗凝血剤を必要としうる。ヘパリン(防腐剤が幹細胞増殖および細胞の増殖能力に影響する可能性があるので、防腐剤不含有が好ましい)、酸性クエン酸デキストロースまたはクエン酸リン酸デキストロース、または生存細胞と組み合わせるのに安全な任意の適切な抗凝血剤を含む、抗凝血剤を使用できる。細胞は、細胞を増やす細胞培地が注入または移植のために安全である限り、その培地中で送ることができる。
用語の薬用化粧品は、(a)少なくとも1つの製品の使用者に対する効果を有する生物学的活性成分と、(b)少なくとも1つの薬用化粧品用に許容される担体とを含む製剤形態または組成に関して使用される。生物学的活性成分は、例えば、本発明の実行に従って収集されたMSC、または本発明のMSC、遺伝子操作したMSCもしくは分化したMSCによって産生された、増殖因子もしくは他の組成物、化学物質もしくはタンパク質でありえる。さらなる実施例によって、例えば、増殖因子、または薬用化粧品として使用可能な他の生物学的活性成分のような、所望される細胞生産物を産生するように、MSC、分化したMSC、または遺伝子操作したMSCを培養において増殖させることができる。増殖因子または他の生物学的活性成分は、MSC、分化したMSC、または遺伝子操作したMSCが増殖される細胞培養培地または他の培地から収集できる。上清(それは後に精製するために処理するか、または成分を凝縮する)中の所望される成分を収集するために、増殖因子または他の生物学的活性成分を、遠心分離工程によって細胞培養培地または他の培地から収集できる。
Claims (36)
- 月経血幹細胞を得る方法であって、
a)月経流出物から月経血幹細胞を単離する工程と;
b)月経流出物から単離された月経血幹細胞を処理する工程と
を含む方法。 - 月経流出物から月経血幹細胞を単離する前記工程が、遠心分離、密度勾配遠心分離、濾過または沈降の少なくとも1つにより月経流出物を処理することを含む、請求項1に記載の方法。
- 月経流出物から単離された月経血幹細胞を処理する前記工程が、CD9、CD10、CD13、CD29、CD44、CD49e、CD49f、CD59、CD81、CD105、CD166およびHLAクラスIを含む、少なくとも1つの細胞マーカーについて月経血幹細胞を選択することを含む、請求項1に記載の方法。
- 月経血幹細胞を処理する前記工程が、月経血幹細胞を培養するさらなる工程を含む、請求項3に記載の方法。
- 月経血幹細胞を処理する前記工程が、CD9、CD10、CD13、CD29、CD44、CD49e、CD49f、CD59、CD81、CD105、CD166、HLAクラスIを含む、少なくとも1つの細胞マーカーについて月経血幹細胞を選択するさらなる工程を含む、請求項4に記載の方法。
- 月経血幹細胞を処理する前記工程が、月経血幹細胞を培養するさらなる工程を含む、請求項5に記載の方法。
- 月経流出物から単離された月経血幹細胞を処理する前記工程が、月経血幹細胞を培養することを含む、請求項1に記載の方法。
- 月経血幹細胞を処理する前記工程が、月経血幹細胞を選択するさらなる工程を含む、請求項7に記載の方法。
- 月経血幹細胞を処理する前記工程が、月経血幹細胞を培養するさらなる工程を含む、請求項8に記載の方法。
- 月経血幹細胞を処理する前記工程が、細胞マーカーについて月経血幹細胞を選択するさらなる工程を含む、請求項9に記載の方法。
- 前記方法が月経血幹細胞を凍結保存するさらなる工程を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記方法が、凍結保存した月経血幹細胞を解凍し、解凍された月経血幹細胞を処理するさらなる工程を含む、請求項11に記載の方法。
- 前記方法が、月経血幹細胞および月経血幹細胞の生存率を維持する細胞培地を含む治療用組成物を調製するさらなる工程を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記方法が、月経血幹細胞および薬用化粧品用調製物を含む薬用化粧品用組成物を調製するさらなる工程を含む、請求項1に記載の方法。
- 月経流出物から月経血幹細胞を収集するプロセスであって、
a)月経周期の間に月経流出物を獲得することと;
b)処理施設に月経流出物を輸送することと;
c)細胞調製物へと月経流出物から月経血幹細胞を単離することと;
d)月経血幹細胞の細胞調製物を処理することと
を含むプロセス。 - 月経流出物から月経血幹細胞を収集するためのシステムであって、
a)月経血幹細胞単離装置が月経流出物から月経血幹細胞を分離する、月経血幹細胞単離装置と;
b)月経血幹細胞収集装置が月経血幹細胞を収集する、月経血幹細胞収集装置と;
c)月経血幹細胞処理装置が治療用使用または凍結保存のために月経血幹細胞を調製する、月経血幹細胞処理装置と
を含むシステム。 - 月経血幹細胞を凍結保存する方法であって、
a)月経の間に収集された月経流出物から月経血幹細胞を単離する工程と;
b)月経流出物から単離された月経血幹細胞を収集する工程と;
c)月経流出物から単離された月経血幹細胞を凍結保存する工程と
を含む方法。 - 月経流出物から月経血幹細胞を単離する前記工程が、遠心分離、密度勾配遠心分離、濾過または沈降の少なくとも1つによって月経流出物を処理することを含む、請求項17に記載の方法。
- 月経流出物から単離された月経血幹細胞を収集する前記工程が、細胞マーカーについて月経血幹細胞を選択する少なくとも1つの工程を含む、請求項17に記載の方法。
- 月経流出物から単離された月経血幹細胞を収集する前記工程が、選択された月経血幹細胞を培養する少なくとも1つの工程を含む、請求項19に記載の方法。
- 月経流出物から単離された月経血幹細胞を収集する前記工程が、月経血幹細胞を培養する少なくとも1つの工程を含む、請求項17に記載の方法。
- 月経流出物から単離された月経血幹細胞を収集する前記工程が、細胞培養から月経血幹細胞を選択する少なくとも1つの工程を含む、請求項21に記載の方法。
- 月経血幹細胞の集団であって、
a)月経の間に収集された月経流出物から月経血幹細胞を単離することと;
b)月経流出物から単離された月経血幹細胞を収集することと
を含むプロセスによって得られる月経血幹細胞の集団。 - 月経流出物から収集された月経血幹細胞の集団を濃縮するプロセスであって、
a)月経の間に収集された月経流出物から月経血幹細胞を単離する工程と;
b)月経流出物から単離された月経血幹細胞を収集すること工程と
を含むプロセス。 - 前記プロセスが、細胞マーカーのCD9、CD10、CD13、CD29、CD44、CD49e、CD49f、CD59、CD81、CD105、CD166およびHLAクラスIの少なくとも1つについて月経血幹細胞を選択する少なくとも1つの工程を含む、請求項24に記載のプロセス。
- 前記プロセスが、月経血幹細胞を培養する少なくとも1つの工程を含む、請求項24に記載のプロセス。
- 前記プロセスが、月経血幹細胞を選択する少なくとも1つの工程、および選択された月経血幹細胞を培養する少なくとも1つの工程を含む、請求項24に記載のプロセス。
- 前記プロセスが、月経血幹細胞を培養する少なくとも1つの工程、および細胞培養から月経血幹細胞を選択する少なくとも1つの工程を含む、請求項24に記載のプロセス。
- CD117を発現する月経血幹細胞の集団を濃縮するプロセスであって、
a)月経流出物から月経血幹細胞を単離する工程と、
b)月経流出物から単離された月経血幹細胞を収集する工程と;
c)CD117を発現する月経血幹細胞を選択する工程と
を含むプロセス。 - CD9、CD10、CD13、CD29、CD44、CD49e、CD49f、CD59、CD81、CD105、CD166およびHLAクラスIを含む細胞マーカーの少なくとも1つを含む、月経血幹細胞の集団。
- 月経血幹細胞を含む細胞が濃縮された集団であって、
a)CD9、CD10、CD13、CD29、CD44、CD49e、CD49f、CD59、CD81、CD105、CD166およびHLAクラスIを含む細胞マーカーの少なくとも1つを発現し;
b)CD3およびHLAクラスIIを含む細胞マーカーの少なくとも1つを低く発現するかまたは発現しない、
集団。 - 少なくとも1つの月経血幹細胞および凍結保存剤を含む組成物。
- 少なくとも1つの月経血幹細胞および細胞培地を含む組成物。
- 少なくとも1つの月経血幹細胞および薬用化粧品用薬剤を含む組成物。
- 少なくとも1つの月経血幹細胞および細胞生存率を維持する保存剤を含む組成物。
- 少なくとも1つの月経血幹細胞、および少なくとも1つの月経血幹細胞の治療用使用のための調製物における容器中の細胞培地を含む、組成物。
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