TW200906842A - Salts of isophosphoramide mustard and analogs thereof - Google Patents

Description

200906842 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於晶態式（ϊ )化合物： 〇

A+.O-P-NHCH2CH2X nhch2ch2y (I) 其中A +表示羥基化脂族銨物種；且χ及γ獨立地表 示脫離基。 【先前技術】 發明背景 在第一次世界大戰中由芥子氣殺死之士兵的屍檢表明 疏芥（sulfur mustard )對快速分裂中的細胞具有不成比例 的政應’且暗示硫芬化合物可能具有抗腫瘤效應。實際上， 早期研究者_武藉由將硫介直接注射於腫瘤中來治療癌 症。此研究因硫介化合物之極端毒性而受到限制，且研究 出作為較低毒性替代物之氮芥類似物，諸如二氯甲基二乙 胺(mechlorethamine )。

硫芥

CI 二氣甲基二乙胺 由於大多數二氯甲基二乙胺類似物缺之選擇性，因此 巳研究諸如磷醯胺化合物之前藥’其可經贅生性細胞中所 200906842 存在的尚》辰度之填醯胺酶，（ph〇Sph〇ramidase )活化。已證 明兩種磷醯胺烷基化劑環磷醯胺（CPA )及異構化合物異 環構醯胺（Ifos )尤其有效。 /~NH 〇 Γ ；pf '~~〇 Ν(ΟΗ2〇Η2〇Ι)2 環磷醯胺（CPA ) pH2CH2CI /~~N 〇 Γκ ^―〇 nhch2ch2ci 異環磷醯胺（（Ifos ) 參考圖1，異磷醯胺芥（IPM)為CPA及Ifos之常見 代謝物。咸認為IPM引起至少一部分的由CpA及If〇s所 展現的抗腫瘤活性。直接使用該化合物作為抗癌劑之嘗試 尚不成功，其部分歸因於IPM之不穩定性。已合成IpM且 已進行該化合物之初步生物學評估’但令人遺憾的是㈣ 無法穩定分離及用於人類治療。 【發明内容】 發明概要 本文揭示晶態式（I )化合物： 0

A+»O-P-NHCH2CH2X nhch2ch2y 基 其中A+表示腸族錢物種；且x及γ獨立地表示脫離 在某些具體實例中’本發明係關於醫藥組合物，其包 6 200906842 含式（i) π合物及醫藥學上可接受之稀釋劑或载劑。亦描 述製備該等化合物及組合物之方法。 田 本文亦揭示包含異磷醢胺芥（ΪΡΜ)及/或抒撾類似物、 1或大於1當量之鹼及賦形劑的凍乾粉劑及製備該凍乾於 劑之方法。在某些具體實例中，該方法包含使ιρΜ之晶= 鹽或其類似物及諸如參（羥甲基）胺基甲烷（Tris)之脂族 或IPM或其類似物與一或多種脂族胺之混合物（較佳以 厂《其類似物與該或該等胺之約1:1 t匕率）與水接觸，且來 乾所得混合物。在某些具體實例中，混合物及所得康乾粉 劑包含賦形劑，諸如甘露糖醇、無水乳糖、蔗糖、d(+)_ = 藻糖、葡聚糖40或聚乙烯吡咯酮（pvp K24 )，較俨為甘 露糖醇。 該等調配物包括凍乾粉劑，其較佳包含諸如甘露糖醇、 無水乳糖、嚴糖、D(+)-海藻糖、葡聚糖4〇或聚乙稀吼洛 酮（PVP K24 )、較佳為甘露糖醇之職形劑及下式化合物： \ - 0

A+*'〇-P-NHCH2CH2X nhch2ch2y 其中A +表示選自質子化（共輛酸）或四級形式之脂族 胺及芳族胺之銨物種，該等脂族胺及芳族胺包括鹼性胺基 酸、雜環胺、經取代及未經取代之吡啶、胍及脎；且x及 Y獨立地表示脫離基。 本文亦揭示適合於經口投予之醫藥組合物，其包含醫 7 200906842 樂學上可接受之稀釋劑或賦形劑及如本文所揭示之化合 物。 在某些具體實例中，本發明係關於以例如本文所論述 之化合物或調配物治療過度增生性病症之方法。在某些該 等具體貫例中，本發明係關於選自以下疾病之過度增生性 病症之治療：白血病，包括急性白血病（諸如急性淋巴細 胞性白血病、急性髓細胞性白血病、急性骨髓性白血病及 骨髓母細胞性白血病、前髓細胞性白血病、骨髓單核細胞 性白血病、單核細胞性白血病及紅白血病）、慢性白血病 (諸如慢性髓細胞性（顆粒球性）白血病、慢性骨髓性白 血病及慢性淋巴球性白血病）；真性紅細胞增多症；淋巴 瘤’霍奇金病（Hodgkin's disease):非霍奇金淋巴瘤（進 展緩k及高等級形式）；多發性骨髓瘤；華氏巨球蛋白血 症（Waldenstrom's macrog丨obulinemia);重鏈病；骨髓發 育不良症候群；毛細胞白血病；及脊髓發育不良。 可使用所揭示化合物及組合物治療的病狀之其他實例 包括R體腫瘤，諸如肉瘤及癌瘤，包括（但不限於）纖維 肉瘤、黏液肉瘤、脂肪肉瘤、軟骨肉瘤、骨原肉瘤、耐環 磷醯胺肉瘤及其他肉瘤 '滑膜瘤、間皮瘤、尤因氏瘤（Ewing、 tumor )、平滑肌肉瘤、橫紋肌肉瘤、結腸癌、淋巴惡性疾 病、胰腺癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、前列腺癌、肝細胞癌、 鱗狀細胞癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳 頭狀癌、乳頭狀腺癌、醚性癌、支氣管癌、腎細胞癌、肝 癌、膽管癌、絨膜癌、韋爾姆斯氏瘤（WUms, tum〇 、 200906842 子宮頸癌、睾丸腫瘤、膀胱癌及⑽腫瘤（諸如神經膠質 瘤、星形細胞瘤、神經管母細胞瘤、顧咽管瘤、室管膜: 权果體瘤、血管母細胞，廇、聽神經瘤、少枝膠質瘤、 menangi_a、黑色素瘤、神經母細胞瘤及視網膜母細胞 瘤）。 ， 【實施方式】 發明詳細敘述 1.1PM鹽及其類似物 本文中揭示之組合物包括晶態IPM鹽或其類似物。在 某些具體實例中，所揭示鹽包括一或多種陽離子。在某些 具體實例巾，陽離子可為胺鹼之共軛酸或可為四級銨陽離 子0 在某些具體實例中，所揭示晶態化合物包含IPM之鹽 或其類似物。該等化合物包括晶態式（J)化合物： 0

A+.O-P-NHCH2CH2X nhch2ch2y '(I) 其中A +表示選自質子化（共軛酸）或四級形式之羥基 化脂族胺之銨物種；且X及γ獨立地表示脫離基。在某2 具體實例中’ X及Y獨立地為_素。X與γ較佳相同。在 某些該等具體實例中，X與γ皆為C1。 胺鹼之適當共軛酸之特定實例包括（但不限於）單_(2 羥乙基）胺、雙-(2-羥乙基）胺或參_(2_羥乙基）胺、羥基 200906842 第二丁胺、N，N_二甲基-N-(2-羥乙基）胺及參（羥甲基）胺基 曱烷（Tns )之共軛酸。在某些該等具體實例中，A +為丁士 之共軛酸。 在某些具體實例中，本發明係關於包含IPM之晶態鹽 或其類似物之化合物，其中IpM或其類似物與抗衡離子 (C〇Unteri〇n)(較佳為 Tris)以 2:1 至 1:2、較佳 1:1 之 比率存在。在某些具體實例中，晶態組合物包含晶體之一 種以上多晶型形式，諸如晶體之兩種、三種、四種或甚至 五種多晶型形式。在某些替代性該等具體實例十，晶態組 合物包含晶體之單一多晶型形式。在某些具體實例中，續 等鹽比游離酸形式之IPM及IpM類似物穩定。 在某些3亥等具體實例中，化合物為ιρΜ與his之工· ^ :率晶態鹽。在某些該等具體實例中，晶態固體之炼點介 與約UG°C之間，肖1阶至約⑽。C之間，約 至約1G6t:之間或甚至1Grc至iG6t之間。 具體實例中，例如IPM與他之1:1比率晶態 血·的化合物至少的Μ G/°純、至少約85%純、至少90%純、 至夕95%純 '至少97%純、至 力 98/〇純或甚至至少99%純。 在某些該專具體實例中，盔里 此…，…早—雜質超過1重量％。在某 而在发他”音/…⑬之所有其他組份量測純度， 凍乾f、、θ人& /、中化合物為醫藥組合物或 I耗•辛刀劑混合物之部分） 如，化-物之〜二i 化合物之降解產物（例 如，化人物之人說政… 1化。物製造之副產物（例 D物之3忪降解產物）量 j純度，從而排除其他有 10 200906842 意添加至組合物中之組份。 在某些具體實例中，化a版去 中該_在室.、θ f '、IPM鹽或其類似物，其 丫邊息在至恤下（例如約23它 水存在下在相同條件下在水存在下具有大於在 笋邯的主吝& . M〔亦即，以游離酸形式）之半 、，的半哀期。在某些該等具 下且有耸於卞士认 、體實例中’㈣冑在水存在 r并有寺於或大於IPM太I A u 士 “ I身在水存在下之半衰期2倍、更 佳荨於或大於5倍的半衰期。 在某些具體實例中/卜人& 中节草… “物為IPM鹽及其類似物，其 中^亥專鹽在室溫下在水存在下可穩定至少1天、2天、3 天、4天、5天、6天或甚至一週。 如本文中所用，術扭「 °。穩疋（stable)」意謂經過一段 曰可間以後（例如1個月徊 劁月、2個月、3個月、6個月、i年等）

IpM鹽或其類似物之屯 J〜州度馮初始純度之至少9〇〇/β、至少 95。/。、至少97%或甚至至少99〇/，甘π # ^ 主乂 99/。’其可鞛由例如hplc使 用蒸發光散射偵測（ELSrn央制…

LbD )來測疋。例如可使用具有包含 於水中之0.005 Μ七翁丁醅艿ηι〇/ 一斤 \ 齓丁駛及0.1/〇二氟乙酸之移動相的 C18管柱及等度系統進行該檢定。 在某些具體實例中，本發明係關於包含下式化合物之 康乾粉劑： Α ·Ό-Ρ-ΝΗΟΗ2ΟΗ2Χ nhch2ch2y 其中A表示選自質子化（共軛酸）或四級形式之脂族 胺及芳族胺的銨物種，該等脂族胺及芳族胺包括鹼性胺基 11 200906842 酸、雜環胺、經取代及未經取代之吡啶、胍及脒；且x及 Y獨立地表示脫離基。 用於本發明化合物之適當胺鹼（及其相應銨離子）之 特定實例包括（但不限於）吡啶、n，n-二曱基胺基吡啶、 二氮雜二環壬烷、二氮雜二環十一烯、N-曱基-N-乙胺、二 乙胺、三乙胺、二異丙基乙胺、單^2-羥乙基）胺、雙-(2-羥乙基）胺或參-(2-羥乙基）胺、2-羥基-第三丁胺、參_(羥甲 基）胺基曱烷、N，N-二甲基-Ν-(2·羥乙基）胺、三-(2-羥乙基） 胺及Ν-曱基-D-葡糖胺。 在某些具體實例中’本發明係關於包含下式化合物之 凍乾粉劑： Ο

~β\ · HO-P-NHCH2CH2X n nhch2ch2y 參考該式，對於各η而言，B可為經獨立選擇之驗性 分子。在該式之一具體實例中，B可選自鹼性胺基酸、非 環狀脂族胺、二烧基胺及三烧基胺、雜環脂族胺、芳族胺、 經取代及未經取代之吼啶、環狀及非環狀胍以及環狀及非 環狀脉。典型地’ η為1至約3使得該式可包括不同驗性 分子。繼續參考該式，X及Υ為脫離基。熟習此項技術者 將瞭解’所說明之異磷醯胺芥結構包括酸性質子，且因而 在生理學pH下且在諸如Β之驗存在下主要以其共軛鹼形 式存在。同樣地，在生理學pH下且在異磷醯胺芥及異磷 酿胺芥類似物存在下’鹼性基團B主要以其共軛酸形式存 12 200906842 在。表1中描述所揭示化合物之例示性具體實例。 表1 0 Γβ] · ho-p-nhch2ch2x n nhch2ch2y B η X Y 離胺酸 2 Cl Cl NH, 2 Cl Cl 環己胺 2 Cl Cl TV-甲基-D-葡糖胺 2 Cl Cl 二曱基胺基吡啶 1 Cl Cl 精胺酸 2 Cl Cl 離胺酸 2 Cl -so2ch3 離胺酸 2 Br -so2ch3 參(羥甲基)胺基曱烷 1 Cl Cl f U.組合物及方法 在某些具體實例中，本發明係關於包含IPM鹽或其類 似物及醫藥稀釋劑或賦形劑之醫藥組合物。在某些該等具 體實例中，醫藥組合物為溶液，較佳為包含IPM或IPM類 似物之食鹽溶液。在某些該等具體實例中，IPM鹽或IPM 類似物鹽在溶液中之濃度為約3 mg/mL至約30 mg/mL或 甚至更大。例如可藉由例如在於室溫下攪拌的同時將如本 文所揭示的晶態式（I )化合物或IPM或IPM類似物之凍 乾粉劑溶解於食鹽溶液中來製備該等食鹽溶液。在某些該 等具體實例中，食鹽溶液經製備使得氯化鈉濃度為約 0.5%、0.9%、2.5%、2.7%、3.0%、4.0%或甚至 5.0%。 在某些具體實例中，可由如本文所揭示的晶態式I化 13 200906842 合物或IPM或IPM類似物之凍乾粉劑製備水溶液。該水溶 液（例如於水中或於等滲壓食鹽溶液中）纟室溫下可穩定 至少約6〇分鐘、80分鐘、100分鐘、120分鐘、140分鐘， 或甚至在室溫下可穩定約160分鐘。 在某些具體實例中’諸如IPM及之鹽的晶態式⑴ 化合物在水中具有至少約3〇 mg/mL、4〇 mg/mL、5〇呵/机、 60 mg/mL 70 mg/mL或甚至80 mg/mL之溶解性。在某些 具體實例中’諸如IPM & TdS之鹽的晶態式⑴化合物 在水中具有至少約200 mg/mL、至少約5〇〇 mg/mL、至少 約800 mg/mL、至少約1〇〇〇 mg/mL、至少約12〇〇叫就 或甚至至少1400 mg/mL之溶解性。在某些具體實例中， 晶態化合物之水溶液的pH值介於約4 5與約丨〇之間，諸 如介於約5.0與8.5之間，較佳地介於約5 〇與約7 〇之間。 在某些具體實例中，該溶液之pH值為約5 〇。 在某些具體實例中，本發明係關於包含晶態式I化合 物及食鹽溶液的套組。

本文中所揭示之凍乾粉劑包括與1或大於丨當量之驗 起6周配的ip]y[及IPM類似物。由於ipm及其類似物對 酸不穩定且具有酸性’因此本發明所揭示之束乾粉劑提供 較大穩定性以及其他優勢。就合成、穩定性及生物可用性 而言’當考慮本揭示案時所揭示調配物之優勢將為一般熟 習此項技術者顯而易見。與1或大於1當量之鹼一起調配 的IPM及IPM類似物之其他優勢可包括在水或體液中之溶 解性增加。 14 200906842 在某些具體實例中，所揭示凍乾粉劑為包括一或多種 陽離子之異磷醯胺芥之鹽或異磷醯胺芬類似物。在某些具 體實例中，陽離子可為胺鹼之共軛酸或可為四級銨陽離 子。異磷醯胺芥及其類似物之適當抗衡離子包括鹼之共耗 酸（如本文中所用，除非上下文清楚地指示預期游離胺， 否則應理解k及胺之術έ吾包括其共概酸），該等驗包括驗 性胺基酸、脂族胺、雜環胺、芳族胺、。比咬、脈及肺。在 脂族胺中，非環狀脂族胺及環狀及非環狀二烷基胺及三烷 基胺尤其適用於所揭示化合物。另外，四級錢抗衡離子為 可使用之適當抗衡離子之實例。在某些具體實例中，該凍 乾粉劑可進一步包含賦形劑。適當賦形劑包#(但不限於） 甘露糖醇、無水乳糖、嚴糖、D(+)_海藻糖、葡聚糖4〇及 聚乙烯吡咯酮（PVpK24)。 在某些具體實例中，諸如本文中所揭示之康乾粉劑之 =合物及組合物在室溫下可穩定至少2週、至少3週、至 :二：、至少2個月、至少3個月或甚至至少6個月。 在某些具體實射，録較低溫度 6C等）下可穩定至少2週、 C 2C 4C、 2個月、至少至少1個月、至少 實例中，諸如^ _ I6個月。在某些該等具體 如，介於約。。c?:劑之化合物及組合物在較低溫度（例 或甚至介於約=2〇°C。之間，介於約〇°C與約阶之間， 少2個月、至小4、約8 C之間）下可穩定至少1個月、至 例中，凍乾粉劑包二固月或甚至至少6個月。在某些具體實 劑包含㈣鹽或其類似物。在某些具體實例 15 200906842 中’ /東乾粉劑包含IPM . 、 ls 或 IPM(LYS)2，較佳為 ipm .

Tris，且在尤其較佳之i/ ,丄 <具體實例中，該等組合物進一步包 含增積劑，諸如甘露糖醇。 在另-具體實例中，如上所述之鹽可包括第二胺或按 基在-具體實例中，對於每一當量之異鱗酿胺芬或異構 醯胺芬類似物，本文中所揭示之純㈣包括大於1當量 之胺。該等具體實例包括彼等具有非整數比率之胺與異填 fe胺介或異鱗㈣芥類似物者。在某些具體實例中，床乾 粉劑具有2:1或3:1比率之胺與異磷醢胺芥或異磷醯胺芥 類似物。在工作具體實例中’製備每當量之異磷醯胺芥含 有2當量之胺鹼的鹽。在某些具體實例中，用以形成異磷 &胺芥及異磷醯胺芥類似物鹽之胺鹼包括一個以上胺基； 該等鹼可稱為「多鹼性」。更具體言之，可使用之多鹼性 驗之某些實例具有兩個胺基；該等化合物可稱為「二鹼 性」。例如，—個適當二鹼性分子為N，N_二甲基胺基吡啶， 其包括兩個鹼性胺基。本文中所揭示之凍乾粉劑之某些具 體只例包括異鱗醯胺芬或異麟醢胺芥類似物及1當量之二 鹼性胺。 本文中所揭示的某些異鱗醯胺芥及異璘酿胺芥類似物 凍乾粉劑包括兩個脫離基。在不受理論約束的情況下，咸 h兩個脫離基經諸如核酸及蛋白質之生物分子親核試劑活 體内置換’從而交聯生物分子。術語「脫離基（leaving group )」係指可經親核試劑置換之基團.參考本發明所揭 示之化合物’脫離基係指可經置換以形成吖丙啶鏽中間物 16 200906842 或可經諸如核酸親核試劑之生物分子親核試劑直接置換以 形成例如7-烧基化胍鹽物種的基團。適當脫離基之實例包 括i素及石黃酸醋基（_s〇2R)。在所揭示異碟酿胺類似物 鹽之一具體實例中，化合物為「混合」脫離基化合物，盆 包括兩種不同類型之脫離基，例如齒素及確酸醋基或兩個 不同函素，諸如演離子及氯離子。struck之美國專利第 6’197,76G號教不製備該等混合脫離基化合物之方法。 在某些具體實例中，與異鱗酿胺芬本身之滚乾製劑相 比^所揭示鹽之凍乾粉劑提高重構穩定性。在某些該等具 體只例中，已在食鹽溶液（較佳為5%氯化納）巾重構之 由所揭不IPM鹽或其類似物及賦形劑製備（諸如由蠢或 其類似物及視情況包括例如增積劑（諸如甘露糖醇）之賦 形劑之Tris製備）之凍乾粉劑經至少約3〇分鐘、分鐘、 9〇分鐘、120分鐘、140分鐘或甚至至少約160分鐘保持>90% 效力。 ： 在某些該等具體實例中，將諸如IPM · Tris之IPM鹽 ‘或其類似物或由諸如ΙΡΜ·心之IpM鹽或其類似物及； 選賦形劑（例如增積劑，諸如甘露糖醇）製備的象乾粉劑 溶解於食鹽溶液中可在室溫下經至少約3〇分鐘、6〇分鐘、 0 I刀鐘、3小日夺或甚至4 5小時或更長時間保持至少％%、 至v 97% '至少98%或甚至至少99%純度。在某些具體實 J中在相同條件下該等重構溶液比重構· (ΕΥ%溶 t定在某些該等具體實例中，已重構之IPM · (LYS)2 的降解速度是IPM鹽或其類似物的至少⑺倍、至少Μ 17 200906842 倍、至少2倍或甚至至少3倍或4倍。 在束乾粉劑包含IPM鹽或其類似物及賦 含㈣或其類似物、Tris及甘露糖醇之;東乾粉劑的二 體實例中，混合物在水中具有至少約3 Q 、Μ =咖L、60 mg/mL、70 mg/mL或甚至8〇 〇㈣之溶解 在某些具體實例中，所揭示IPM鹽或其類似 粉劑比異磷酿胺齐本身（亦即以游離酸形式 穩定。在某些較佳該等具體實例中，與異磷酿胺芬本= ㈣製劑相比，所揭示鹽之柬乾粉劑具有較長存放期，較 佳至少2倍長’更佳至少5倍長。在某些具體實例中，床 乾粉劑由在溶解前可能為晶態或可能不為晶態的刪之 Tris鹽形成。 如上所述，在某些具體實例中，該等束乾粉劑進一步 2含賦形劑，例如增積劑，較佳為甘露糖醇。在某些具體 貫例中，凍乾粉劑包合凓έ斗— d匕3選自甘露糖醇、無水乳糖、蔗糖、 D( + )_海藻糖、葡聚糖4()及聚乙稀㈣_ (pvp mb

增積劑，較佳為甘霞輔_ @ _ iL 路糖知。在某些具體實例中，相對於不 存在增積劑之凍乾粉査丨 祀物劑凋配物，添加該增積劑可提高凍乾 粉劑之穩定性。在某些該等具體實射，料乾 _ 7代、約销或甚至代下在例如！個月、2個月、3個月、 6個月、9個月、1奋斗、# ^ 1年或甚至2年或2年以上時期内穩定。 一在凍乾叙劑包含諸如甘露糖醇之增積劑之某些該等具 體貫例中，4乾粉劍包含約1%至約10%或約1%至約5% 18 200906842 (w/v )增積劑，例如甘露糖 .^ ^ ^ 糖醇。在冷凍乾燥之前或重構 之後，該等組合物可包含約，< ^ 3、、0 H mg/mL 至約 25 mg/mL 之 IPM，及/或濃度為約0.5至約

^ 1 · 5 Μ、較佳地相對於ipm 大致等莫耳量之諸如Tris之胗 ,_ L 爻胺。在某些具體實例中，當在 冷;東乾燥前製備溶液時，代巷你&他 代暂作為獨立組份添加IPM及諸 如Tris之胺，如本文中所捃_ 个又甲所揭不將其以晶態IPM .丁士鹽之 形式一起添加。 在某些具體實例中，本發明 I月係關於包含如本文所揭示 之凍乾粉劑及食鹽溶液的套組。 可丄 $邛、經皮、非經腸、經由吸入或喷霧投予 且可以含有習知無毒醫藥學上可接受之載劑、佐劑及媒劑 的劑量單位調配物形式投予本文中所揭示之化合物。 在某些具體實例中，經由注射非經腸投予所揭示ΙΡΜ 鹽及其類似物較佳。在某些具體實例中，經口投予所揭示 ㈣鹽及其類似物較佳。在某些具體實例中，經口（ρ〇) 奴予之ΙΡΜ鹽及其類似物展示類似於靜脈内（IV)投予所 觀測到之藥物動力聲f 助力WPK)參數。取決於患者之特定疾病、 病狀、化合物之毒性及盆他如一 '、 般爿、、I此項技術者將認識 素’可以單-劑量形式或長期地提供該等藥劑。 所投予化合物之治療有效量可視所需效果及上文所述 之因素而改變。 除所選分子之外，投予個體之醫藥組合物亦可包括載 ^、調化劑、稀釋劑、緩衝劑、防腐劑、表面活性劑及其 類似物。醫藥組合物亦可包括一或多種其他活性成份，諸 19 200906842 如抗菌劑、消炎劑、麻醉劑及其類似物。醫藥調配物可包 括其他組份，諸如載劑。習知適用於此等調配物之醫藥學 上可接受之載劑。E. W· Martin之Remingt〇n，s

Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, PA, 第21版（2006)描述適用於本文中所揭示之化合物之醫藥 輸送的組合物及調配物。 一般而言，載劑之性質將取決於所採用的特定投予模 式。例如，非經腸調配物通常含有可注射流體作為媒劑， 其包括醫藥學上及生理上可接受之流體，諸如水、生理食 鹽水、平衡鹽溶液、右旋糖水溶液、甘油或其類似物。對 於固體組合物（例如，粉末、丸劑、錠劑或膠囊形式）， 習知無毒固體載劑可包括例如醫藥等級之甘露糖醇、乳 糖、殿粉或硬脂酸鎂。除生物學上中性載劑之外，待投予 之醫藥組合物亦可含有微量無毒助劑物質，諸如潤濕或乳 化劑、防腐劑及pH值緩衝劑及其類似物，例如乙酸納或 脫水山梨糖醇單月桂酸酯。 ί Κ ' 在某些具體實例中，所揭示化合物經調配成口服劑型， 諸如丸劑、錠劑或膠囊。在某些具體實例中，口服劑型為 膠囊。 在某些具體實例中，該等口服劑型包含至少一種賦形 劑、助流劑、稀釋劑、潤滑劑及/或崩解劑。在某些該等具 體實例中，適當賦形劑、助流劑、稀釋劑、潤滑劑及/或崩 解劑包括（但不限於）滑石、煙霧狀二氧化矽、澱粉、石夕 酸鈣、碳酸鎂、氧化鎂、月桂基硫酸鎂、月桂基硫酸鈉、 20 200906842 乳糖、微晶纖維素、羥丙基甲基纖維素、右旋糖、葡萄糖、 庶糖、澱粉、澱粉衍生物、碳酸鈣、磷酸氫二鈣、碳酸鎂、 硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、硬脂醢反丁烯二酸鈉、聚乙二醇 4000、來乙二醇6〇〇〇、苯甲酸鈉、輕質礦物油、氫化植物 油、硬脂酸、蓊樹酸甘油酯、不溶性離子交換樹脂、羥基 乙酸澱粉鈉、羧甲基纖維素鈉（交聯羧甲基纖維素鈉）、 膠（例如，瓊脂、瓜爾膠、三仙膠）、海藻酸、海藻酸鈉 及交聯聚乙烯吡咯酮。

在某些該等具體實例中，口服劑型包含如本所揭示之 化合物及至少一種賦形劑、助流劑、稀釋劑、潤滑劑及/或 朋解劑，較佳地至少一種適於與吸濕性活性劑一起調配之 賦形劑、助流劑、稀釋劑、潤滑劑及/或崩解劑。在某些該 等具體實例中，口服劑型包含至少—種選自微晶纖維素、 礼糖、羧甲基纖維素鈉、硬脂酸鎂、磷酸氫二鈣、羥基乙 I氣粕鈉、羥丙基曱基纖維素及甘露糖醇之賦形劑、助流 劑、稀釋劑、潤滑劑及/或崩解劑。 L 在某些具體實例中，所揭示化合物經調配以投予人類 個體。在此具體實例之態樣中，醫藥組合物包括約0」

g/mL 至約 250 mg/mL、諸如約 20 mg/mL 至約 i〇〇 mg/mL 之IPM鹽或其類似物之化合物。 在一態樣中，醫藥組合物之某些具體實例經調配成單 位劑型。例士σ，該等單位劑型每個劑量單位可含有約1 % 至約lOOmg* 100mg至約15〇〇mg，諸如約5mg至約 mg或200 mg至約15〇〇 mg所揭示ιρΜ鹽或其類似物。在 21 200906842

某些具體實例中，劑量單位可包含約15 mg、約3 0 mg、 約45 mg、約60 mg、約75 mg或甚至約77 mg所揭示IPM 鹽或其類似物。 在某些具體實例中尤其預期經由在（諸如）DepoFoam (SkyePharma，Inc, San Diego，CA)中（例如）包含多囊 脂質體之注射及/或植入式藥物儲槽輸送本發明化合物（參 見例如 Chamberlain 等人· Arch. Neuro· 1993, 50, 261-264 ; Katri 等人.J· Pharm· Sci. 1998, 87, 1341-1346 ; Ye 等人，J. Control Release 2000，64，155-166 ;及 Howell, Cancer J. 2001，7, 219-227 )。 本文中揭示藉由將一或多種所揭示化合物及組合物投 予個體來治療特徵在於異常或病態增生活性或瘤形成之病 狀的方法。 可根據所揭示方法治療之病狀包括彼等特徵在於異常 細胞生長及/或分化之病狀，諸如癌症及其他贅生性病狀。

下文列舉了使用所揭示化合物及組合物治療之增生病症之 典型實例。 可使用本文中所揭示之化合物及組合物治療的血液腫 瘤的實例包括白血病’包括急性白血㉟（諸如急性淋巴細 胞性白血病、急性髓細胞性白血病、急性骨髓性白血病及 月髓母細胞性白血病、前髓細胞性白血病、骨髓單核細胞 性白血病、單核細胞性白血病及紅白血病）、慢性白血病 (諸如k |·生骑細胞性（顆粒球性）白血病、， ^ 血病及慢性淋巴球性白血病）；真性紅細胞增多症= 22 200906842 瘤’霍奇金病；非霍奇金淋巴瘤（進展緩慢及高等級形式）； 多發性骨髓瘤；華氏巨球蛋白血症；重鏈病；骨髓發育不 良症候群；毛細胞白血病；及脊髓發育不良。 可使用所揭示化合物及組合物治療的病狀的其他實例 包括實體腫瘤，諸如肉瘤及癌瘤，包括纖維肉瘤、黏液肉 瘤、脂肪肉瘤、軟骨肉瘤、骨原肉瘤、耐環磷醯胺（CPA) 肉瘤及其他肉瘤、滑膜瘤、間皮瘤、尤因氏瘤、平滑肌肉 瘤、橫紋肌肉瘤、結腸癌、淋巴惡性疾病、胰腺癌、乳癌、 肺癌、卵巢癌、前列腺癌、肝細胞癌、鱗狀細胞癌、基底 細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭狀癌、乳頭狀腺 癌、鈿性癌、支氣管癌、腎細胞癌、肝癌、膽管癌、絨膜

癌、韋爾姆斯氏瘤、子宮頸癌、睾丸腫瘤、膀胱癌及cNS 腫瘤（諸如神經膠質瘤、星形細胞瘤、神經管母細胞瘤、 顧咽管瘤、室管膜瘤、松果體瘤、血管母細胞瘤、聽神經 瘤、少枝膠質瘤、menangioma、黑色素瘤、神經母細胞瘤 及視網膜母細胞瘤）。 在某些具體貫例中，本文中所揭示之化合物在對抗耐 CPA及/或If〇s腫瘤生長時優於單獨的㈣或此。因此， 本文中所揭示方法之-g樣包括以本文中所揭示之IpM鹽 或其類似物治療患有耐CPA及，或If〇s贅生性病狀之個體。 在某些具體實例中，與CPA及/或If0s相比，本文中 所揭示之化合物展現降低之毒性。例如，歸因於諸如氣乙 酸及丙稀搭之某些代謝物之存知高劑量之cpA及/或_ 可導致增加之賴、膀胱及/或中樞神經线毒性。在某些 23 200906842 具體貫例中，本發明化合物降低或避免該等或其他毒性代 謝物之產生，同時保持功效。因此，本發明化合物能夠提 供治療性治療，同時降低可能與CPA及/或IfOS之代謝物 有關的有害副作用，諸如正常腎臟、膀胱或中樞神經系統 細胞死亡。因此，本發明化合物適用作CPA及/或ifos之 替代物。 例如’本發明化合物適用於血細胞及骨髓移植物之預 備患者中。CPA及If〇s通常用於血細胞及骨髓移植物中， 本發明化合物代表有利替代物，其例如歸因於本發明化合 物之降低之^性分布及/或增加之功效。另外，本發明化合 物亦可用於CPA及lfos不適當之血細胞及骨髓移植物中， 例如其中證明高劑量之CPA及If0s毒性過高。可在移植 則數分鐘、數小時、數天、數週或數月，尤其在移植前數 天或數週投予本發明化合物。此外，可以單一、多個及/或 重複劑型及/或組合血細胞或骨髓移植物之製劑中的其他藥 劑投予本發明化合物。 在某些具體實例中，本發明化合物適用於血細胞及骨 骨4移植物之調理攝生法（c〇nditi〇ning regimens )中，例如， 作為CPA及/或ifos之替代物。此外，可在不使用保護措 施（諸如通常聯合CPA及If〇s使用之美司鈉（mesna)及/ 或靜脈内水合作用）的情況下投予本發明化合物。 在另一具體實例中，例如可在血細胞及骨髓移植物之 預備患者中以及在血細胞及骨髓移植物之調理攝生法中組 合使用本發明化合物以及CPA及/或If〇s。包含一或多種 24 200906842 本發明化合物以及CPA及/或Ifos之組合物提供其他優於 單獨CPA及/或Ifos的優點，諸如降低之毒性及/或增加之 效力。 在該方法之某些具體實例中’向個體投予約0.2 mg/kg/ 天至約20 mg/kg/天之所揭示IPM鹽或其類似物。例如， 可將約0·5至約10 mg/kg/天、諸如約！至約7 5 mg/kg/天 之所揭示化合物投予個體。

在某些具體實例中，將IPM、其類似物或鹽以大於約 !_〇 g、大於約1_5 g、大於約2.〇 g或甚至大於約2 5 g之 劑量（例如曰劑量）投予個體。在某些具體實例中，ιρΜ 鹽為例如至多約2.0g、2.5g或甚至3〇§之ιρΜ. 丁士。 在某些具體實例中 叫丹頰似物以鹽形式投予 :體，使得㈣或其類似物（亦即，僅考慮鹽之ιρΜ陰離 子且不考慮抗衡離子或組合物之其他組份的重量）之 (例如曰劑量）大於約〇.4 大 里 或甚至大於約…。在某些具體約。 ::8g或甚至大於一，例二二：Si 甚至3 · 〇 g之劑量投予。 · g或 總量大於約o.8g、㈣之療程可以 約…之㈣如 g、大於約七或甚至大力 g之IPM或其類似物（亦即，僅 子且慮抗衡離子或組合物之其他組份的：:)IPM陰’ 在某些具體實例中’可每週一次、每週三次)、每週i 25 200906842 天人或甚至每天兩次，較佳地一天一次投予ipM 鹽或其類似物之劑量。在某些該等具體實例中，可投予⑽ 鹽或其類似物之療程，其中一個療程為兩個或兩個以上連 續劑里。在某些具體實例中，治療療程可包含一天一次投 予IPM鹽或其類似物之劑量，持續2天、3天、4天或甚 至5天’較佳3天。該等劑量可在連續或非連續日投予。 在某些具體貫例中’單一劑量（例如日劑量）可包含 -種以上劑型’例如單一劑量可包含兩種或兩種以上膠 囊、錠劑或丸劑。在某些具體實例中，可一次性投予包含 多個劑型之曰劑量，或可在全天每隔一段時間投予劑型之 子集。 在該方法之另一具體實例中，將約j至約丨5〇〇 mg/m2、 諸如約1至約700 mg/m2、约5至約1〇〇〇 mg/m2、約$至 約 700 mg/m2、約 5 至約 500 mg/m2、約 6〇〇 至約 12〇〇 mg/m2、 約 1〇〇 至約 1500 mg/m2、約 3〇 至約 6〇〇 mg/m2、約 ι〇 至 約60〇mg/m2或約10至約1〇〇mg/m2劑量（例如，日劑量） ‘ 之如本文所揭示的IPM鹽或其類似物投予個體。例如約1〇 mg/m2、約 12 mg/m2 或甚至 14 mg/m2。 在治療本文所揭示之過度增生病症之方法的某些具體 實例中，在多天給藥時程中將所揭示化合物投予個體。在 該等具體實例中，經至少2天及多達不同5天投予化合物。 在多天給藥時程之一態樣中’在連續日、諸如2至5個連 續曰將化合物投予個體。或者，在非連續日、諸如每隔一 天將化合物投予個體。 26 200906842 在该方法之某些具體實例中，除本發明所揭示之化合 物及組合物外’亦將一或多種其他治療劑投予個體。例如， 可使用之其他治療劑包括微管結合劑、DNA嵌入劑或交聯 劑、DNA合成抑制劑、DNA及/或RNA轉錄抑制劑、抗體、 酶、酶抑制劑、基因調節劑及/或血管生成抑制劑。 微官結合劑係指與微管蛋白相互作用以使微管形成穩 疋或不疋，從而抑制細胞分裂的藥劑。可與IPM、其類 ， 似物或鹽組合使用之微管結合劑之實例包括（但不限於） 1 太平洋紫杉醇（paclitaxel)、多西他賽（d〇cetaxel)、長 春花鹼（vinblastine)、長春地辛（vindesin〇 、長春瑞 賓（vinorelbine )(溫諾平（navelbine ))、埃坡黴素 (epothilone )、秋水仙鹼（c〇lchicine )、海兔毒素 (dolastatin ) 15、諾考達唾（n〇c〇(jaz〇ie )、鬼臼毒素 (podophyllotoxin)及根瘤菌素（rhiz〇xin)。亦可使用該 等化合物之類似物及衍生物且其為一般熟習此項技術者已 知。例如，國際公開案第WO 2004/018478號中描述用於 併入本發明化合物中之適當埃坡黴素及埃坡黴素類似物， 該案以引用的方式併入本文中。目前咸信諸如太平洋紫杉 醇及多西他赛之紫杉烷尤其適用於作為本發明所揭示之化 合物中的治療劑。Holton之美國專利第6,61〇,86〇號、 荨人之美國專利弟5,53〇,〇2〇號及wittman等人之美國專 利第5,912,264號教示其他適用之紫杉烷（包括太平洋紫 杉醇類似物）的實例，該等專利各自以引用的方式全部併 入本文中。 27 200906842 包括（但不限於）放線菌素D( actinomycin D)、道 4 Μ 素（daunorubicin )、阿徽素（doxorubicin )及其衍生 物及類似物之適當DNA及/或RNA轉錄調節劑亦適合於與 本發明所揭示之化合物組合使用。 可併入所揭示化合物中之DNA嵌入劑及交聯劑包括 (但不限於）順勒（ciSplatin)、卡波始（carb〇piatjn)、 奥賽力鈾（oxaliplatin )、絲裂徽素（mitomycin )(諸如 絲裂黴素C )、博來黴素（bleomycin )、苯丁酸氮芬 (chlorambucil )、環磷醯胺及其衍生物及類似物。 適用作治療劑之DNA合成抑制劑包括（但不限於） 甲胺喋呤（methotrexate) 、5-氟-5，-脫氧尿苷、5-氣尿嘴 啶及其類似物。 與本發明所揭示之化合物組合使用之適當酶抑制劑的 κ例包括（但不限於）喜樹驗（cainpt〇thecin )、依託泊 苦（etoposide )、福美司坦（f〇rmestane )、曲古抑菌素 (trichostatin)及其衍生物及類似物。 與本發明所揭示化合物一起使用的影響基因調節之適 當治療劑包括導致一或多種基因之表現增加或降低的藥 劑，諸如（但不限於）雷諾昔酚（ral〇xifene) 、5_氮雜胞 苷、5-氮雜-2，-脫氧胞苷、他莫昔芬（tam〇xifen)、扣羥基 他莫昔芬（4-hydr〇xytam〇Xifen )、米非司酮（mifeprist〇ne ) 及其衍生物及類似物。 在此項技術中已知血管生成抑制劑，且適當血管生成 抑制劑之實例包括（但不限於）血管抑制素K1_3、星孢菌 28 200906842 素（sta⑽sp〇rine)、染料木素（genistein)、煙麯黴素 (fumagiUin)、曱羥孕酮（medr〇xypr〇gester〇ne)、蘇拉 明（suramin)、干擾素_α、金屬蛋白酶抑制劑、血小板 因子4、生長抑素（s〇mat〇statin )、凝血栓蛋白 (thromobospondin )、内皮生長抑素、沙力度胺 (thalidomide)及其衍生物及類似物。 可能屬於或可能不屬於以上分類之一或多者的其他治 療劑（尤其抗腫瘤藥劑）亦適合於與本發明所揭示的化合 物組合投予。舉例而言，該等藥劑包括阿德力黴素 (adriamycin )、芹菜素（apigenin )、雷帕黴素（）、 澤布拉辛（zebularine)、西咪替丁（cimetidine)及其衍 生物及類似物。 在某些具體實例中，將IPM鹽或其類似物與諸如阿黴 素之DNA及/或RNA轉錄調節劑組合投予。在某些替代性 具體實例中，將IPM鹽或其類似物與諸如多西他賽或太平 t 洋紫杉醇之微管結合劑組合投予。 在某些具體實例中，如本文所述之組合在性質上可為 協同性，意謂IPM鹽或其類似物與其他治療劑之組合的治 療效應大於當以相同量分別投予該兩種或兩種以上藥劑時 個別效應之總和。 在某些該等具體實例中’該協同效應可允許投予亞治 療劑量之IPM鹽或其類似物。在某些該等具體實例中，亞 治療劑量之投予可降低或避免與較高劑量之IPM鹽或其類 似物相關的副作用，例如本發明之方法可由於允許習知抗 29 200906842 笳某背]在較低劑量發揮較大效應而優於現有組合療法。 在某些具體實例中，當與IPM鹽或其類似物組合投予 時其他藥劑之功效得到提高。在某些該等具體實例中，該 其他藥劑為化學治療劑，包括（但不限於）微管結合劑、 DNA嵌入劑或交聯劑、DNA合成抑制劑、DNA及/或RNA 轉錄抑制劑、抗體、酶、酶抑制劑、基因調節劑及/或企管 生成抑制劑。在某些該等具體實例中，當與IPM鹽或其類 似物組合投予時諸如多西他赛或太平洋紫杉醇之微管結合 刈之功效得到提高。在某些替代性該等具體實例中，當與 IPM鹽或其類似物組合投予時諸如阿黴素之DNA及/或 RNA轉錄抑制劑之功效得到提高。在某些具體實例中，IpM 鹽或其類似物為· Tris。 本文中所用’術6吾「亞治療劑量（sub-therapeutic dose )」包括可穩定或降低腫瘤體積，但在彼劑量下將不 視為有效治療之劑量，或甚至單獨不提供可量測之治療效 應的劑量。 在某些具體實例中，以約1 〇〇 mg至約500 mg、約150 mg至約400 mg或甚至約175 mg至約300 mg之劑量投予 IPM鹽或其類似物。在某些具體實例中，以約丨5〇 mg、約 175 mg、約 185 mg、約 190 mg、約 200 mg、約 225 mg、 約 250 mg、約 275 mg、約 285 mg、約 290 mg 或甚至約 300 mg之劑里投予IPM鹽或其類似物。在某些該等具體實例 中’經口投予以該等劑量投予之IPM鹽或其類似物。 在某些該等具體實例中’以約100 mg至約200 mg、 30 200906842 約110 mg至約1 80 mg或甚至約115 mg至約1 50 mg之劑 量將IPM鹽或其類似物與阿黴素組合投予。在某些該等具 體實例中，以約100 mg、約110 mg、約115 mg、約125 mg、 約 1 35 mg、約 140 mg、約 145 mg、約 1 55 mg、約 1 65 mg、 約175 mg、約185 mg或甚至約200 mg之劑量將IPM鹽 或其類似物與阿黴素組合投予。 在某些該等具體實例中，以約50 mg至約200 mg、約 75 mg至約195 mg或甚至約80 mg至約190 mg之劑量將 IPM鹽或其類似物與多西他賽組合投予。在某些該等具體 實例中，以約50 mg、約70 mg、約80 mg、約90 mg、約 95 mg、約 1〇〇 mg、約 110 mg、約 12〇 mg、約 13〇 爪笆、 約 140mg、約 150mg、約 16〇mg、約 17〇mg、約 18〇叫、 約190 mg或甚至約200 mg之劑量將IpM鹽或其類似物與 多西他赛組合投予。 m、定義 恍1六Μ 卜孤丁

〜~❿伸地|發明化合 物、組合物及方法且指導—般熟習此項技術者實施本揭示 案。亦應瞭解本揭示案中所使用之術語僅用於描 體實例及實例之目的且不意欲構成限制。 /、 本文中範圍可表示為自「約」一個特定值及 另-個特定值。當表示該範圍時，另—具體約」 一個料值及/或至該另—個特定值。相似地，^自該 先行♦司「约I將福矣-A $裔·由使用 先H ’力」將值表不為近似值時 另-具體實例。將進一步睁解各/ H亥特定值形成 瞭解每—個範圍之終點關於另一 31 200906842 終點及獨立於另一終點而言均报重要。 術語「非環狀脂族胺（acyclic aliphatic amine)」係 指如上所述之脂族胺，其中至少一個脂族基團為非環狀 的。 如本文中所用，「脂族胺（aliphatic amine )」係指式 NWR3之化合物，其中Rl-3中之至少一者為脂族基團。 / 本文中使用術語「血管生成抑制劑（angi〇genesis inhibitor )」來意謂用於抑制血管生長之分子，包括（但 不限於）生物分子，諸如肽、蛋白質、酶、多膽、寡核皆 西夂DNA RNA、重組載體及小分子。也管生成牵涉於某 一；丙過程中，諸如彼等與諸如糖尿病性視網膜病、慢性 ，炎疾'病、類風濕性關節炎、皮膚炎、牛皮癬、胃潰瘍及 多數類型之人類實體腫瘤的病症有關的病理過程。 術浯「雜環胺（heter〇cylic amine)」係指式nr1r2r3 之化口物’其中Rl-3中之至少一者為雜環基團或y、Μ及 /或R與其共有氮原子一起形成環。 表術浯「脫離基」係指可經親核試劑置換之基團。參考 月所揭不之化合物’脫離基係指可經置換以形成吖丙 ::中間物或可經諸如核酸親核試劑之生物分子親核試劑 妾：換以形成例* 7·烧基化脈鹽物種之基團。適當脫離 1 Λ <列包括鹵素及 酿胺類似物（2 Μ。在所揭示異碟 美化入极^某-具體實例中，化合物為「混合」脫離 酸…“括兩種不同類型之脫離基，例如幽素及磺 敗§日|或兩個石π上+ 冋鹵素，諸如溴離子及氯離子。Struck之 32 200906842 美國專利第6，197,760號教示用於製備該等混合脫離基化 合物之方法。 「瘤形成（neoplasia )」係指異常及失控細胞生長過 程。瘤形成為增生病症之一個實例。瘤形成之產物為費瘤 (腊瘤），其為起因於過度細胞分裂的組織異常生+ 轉移之腫瘤稱為「良性」。侵入周目组織及/或可轉移= 瘤稱為「惡性」。 ^ 「可選」或「視情況」意謂隨後所述事件或情形可 4纟但不是必需發生，且該描述包括該事件或情形發生 況及其不發生之情況。 ^ 如本文中所用，術語穩定意謂化合物經至少5天 間&降解不超過5%、較佳不超過2%或甚至^可 猎由HNMR、HPLC或其他適當方式監測該降解。 本文中所用且如在此項技術中所充分理解，「治 (treatment)」為用於獲得有 ’、 匀W 一飞所而結果（包括臨床結 )的方法。有利或所需臨床結果可包括f π m π、 ‘,或:善-或多種症狀或病狀、降不::： :不ϋ:，、防止疾病傳播、延遲或減慢疾病進

Λ 疾病病況及緩解（無論部分或全部），I 論該等結果可偵測或 …、 活air ° 「治療」亦可意謂延長存 / (/、右不接文治療之預期存活相比）。 IV.實施例 藉由以下非限制性膏 實施例i 月施例進-步解釋上述揭示内容。 33 200906842

將 Tris ( i〇3_3 mg)及 MeCN ( 3 mL)饋入反應器， 接著添加於MeCN ( 3 mL)中之IPM ( 200.5 mg)。將反 應混合物攪拌隔夜。接著藉由過濾收集固體且以MeCN洗 務濾餅。在真空下將濾餅乾燥至恆重以提供最終產物（296 mg )。使最終產物經受X射線粉末繞射以證實結晶性（圖 2) °藉由尖峰出現在105_77之；〇8(：進一步證明結晶性（圖 3 )。另外，藉由TGA測得IPM · Tris鹽在約125。〇附近 展示0.7692。/。之重量損失（圖4)。最終，SEM展示ιρΜ· Tris具有板狀晶體形狀。 藉由1H NMR監測晶態ΙΡΜ· Tris之穩定性，且發現 其在室溫下保持穩定至多6天。藉由DSC監測晶體結構之 穩定性，其指示在室溫下經1〇天時期IpM· Tds晶體並未 吸收水或改變結構。 實施例2 將Tris ( 8.563 g)及DMF (4〇虹）饋入反應器且加 熱以形成澄清溶液。將溶液冷卻至室溫後，添#舰。授 拌混合物以形成澄清溶液。接著將乙腈（4〇 mL)及少量 晶種添加至該溶液中，接著緩慢添加mtbe (24〇 mL)以 提供裝料。將漿料再㈣1小時，此時藉由過濾收集沈殿 物且以MTBE ( 80 mL )洗務遽餅。在室溫下，將遽餅在 真空下乾燥至恆重以提供最終產物（232g)。 實施例3 將30至40 之片段皮下植入 叫來自活體内繼代之MX-Ι人類乳房腫瘤 nu/nu小鼠之乳房脂墊中，且在起始治療 34 200906842 前使其達到75-200 mg重。在腫瘤植入後第1 〇天啟動治療， 每曰腹膜内投予一次’持續5天。當將劑量正規化為ΙΡΜ 時，ΙΡΜ · (LYS)2 ( 43°/。ΙΡΜ 及 57% Lys)及 ΙΡΜ · Tris 展 示相似的抗MX-1腫瘤活性（參見圖6 )。 實施例4 將30至40 mg來自活體内繼代之MX-1人類乳房腫瘤 之片段皮下植入rui/nu小鼠之乳房脂墊中，且在起始治療 月il使其達到75-200 mg重。在踵瘤植入後第} 〇天啟動治療， * ,s 每日腹膜内或經口投予一次，持續5天。當經口或全身投 予時，可如實施例1中所述製備之對於每次投予均在最大 耐丈劑Ϊ下之IPM . Tris具有相同的抗Μχ_丨腫瘤活性（參 見圖7)。 實施例5 細胞增生檢定 藉由微量培養四唑鏽法測定生長抑制。簡言之，以5〇〇 丨 個、、、田胞7孔之孩、度，在96孔平底微量滴定盤中將細胞接種 於100 μί培養基中。培育隔夜後，添加1〇〇 0含有IPM · (lys)2之培養基以獲得指定最終濃度及2〇〇 孔之最終 體積。數據點表示平均存活力及誤差槓（以三個重複進行 的各實驗之標準差）。在12〇小時，藉由3_[4,5_二甲基嘆 酮-2-基]-2,5-二苯基四峻鑌漠化物（Μττ，化则，％ [。仏， M〇)至福爾馬肼（fGrmazine)之線粒體轉化率來量測經 處理及未經處理細胞之相對代謝活性。藥物處理完成後， 將250 MTT添加至各孔且在37。〇、下培育6小 35 200906842 時。將福爾馬肼晶體溶解於DMSO中且在VERSAmax分 光光度計（Molecular Devices, Sunnyvale, CA)上量測 595 nm下之光學密度。存活力經定義為所處理樣品在595 nm 下之吸光率除以對照樣品在570 nm下之吸光率。IC5〇經定 義為所處理細胞之存活力為對照的50% (處理/對照=0.5 ) 時之濃度。 鼠類異種移植物模型 將腫瘤皮下側腹腫瘤植入CB17雌性 scid*/*小鼠 (Taconic Farms, Germantown, NY) 。OS31 腫瘤細胞株係 由聖猶大兒童癌症研究醫院（St· Judes Children's Cancer Research Hospital )所建立且其先前已經描述（20 )。對 於OS 1腫瘤移植，以4%異氟炫> (isoflurane )將小鼠麻醉。 在小鼠側腹作一小切口後，皮下植入4 mmx4 mm腫瘤切 在2個週期之每2 1天的第1天開始，經由尾部靜脈注 射用IPM· (LYS)2每日治療CB17雌性scid */*小鼠（Taconic I ..

Farms, Germantown, NY)，持續1或3天。將5隻未帶有 腫瘤之小鼠分.配給各治療組。以75 mg/kg/天、100 mg/kg/ 天、150 mg/kg/天或 200 mg/kg/天之 IPM · (LYS)2 處理小 鼠。毒性事件經定義為大於或等於隨機化時動物體重之20% 的重量損失或死亡。MTD經定義為無毒性存在時之最高劑 量。 當腫瘤為約0·20至0.7 cm直徑時，將帶有腫瘤之小 鼠隨機化為5至8隻小鼠之組，分為1個治療組及1個對 36 200906842 照組。在第1天及第21天開始，經治療小鼠接成> 膜内注射形式之劑量為90 mg/kg/夭、又母日腹 s八之他司多亭 (tasidotin )，持續5天。假定球狀腫瘤， 由下' # g 體積：mm3 = */6(D)d2，其中D為最大直徑 “ __ 二此（1為垂直於 D之直徑。將體積表示為相對腫瘤體積（) 、 任意給定時間點之腫瘤體積除以起始腫 、 /田祖償。至少备调 一次量測治療及對照小鼠之rTV。 小鼠之腫瘤反應及統計考慮事項之評估 使用Houghton等人先前定義之標 ^ ^ 壤^订性疾病經定 義為在1個研究期中自初始腫瘤體積消退小於5〇%(灯 〇·5)且在研究期結束時腫瘤體積増加大於25%°(RTV : 1·25)。在整個研究期中穩定疾病腫 > 瘤體積之5〇%(爪>〇5)且."疋不超過初始腫 :::25%(RT〜）。部分反應經定義為腫Si 消退大於观⑽V<G.5)，但具有大於㈣^之^ 測腫瘤塊。在治療期（6 ) 重

消失（<〇.1〇Cm3)經定義可里測腫瘤塊之 經定…、，定義“全反應（⑻。持續CR ^)，同時在6 ί二 測腫瘤塊之消失 沉—週研究期中無再生長。排除第9週之前 死亡或«達勒_積4倍之前死亡的小鼠。 統计分析是基於無事件存活率（event f . 聊）。事件經定❹4倍相對 /:"111™， 尺寸之四倍）或死亡。胸叙定積（亦即起始遁瘤 時間。對於^疋義為自研究起始至事件之 戴至6週研究期結束時未達到 37 200906842 在彼時排除EFS時間。使用精確對數等級檢定（log-rank test )來比較治療組與對照組之間的無事件存活率分布。 另外，使用Wilcoxian-Mann-Whitney檢定來比較對照及治 療小鼠之第22天RTV。此允許比較未經治療.之小鼠在一 個週期之他司多亭後與事件發生時或大致此時間時的腫瘤 體積。 生物學資料 所用腫瘤細胞株包括RD及RH3 0橫紋肌肉瘤細胞株 (美國典型菌種保藏中心 （American Type Culture Collection ) , Manassas, VA ) 、Saos-2 骨肉瘤細胞株、 SKPNDW及SKES1尤因氏肉瘤細胞株以及HSSYII及SYOI 滑膜肉瘤細胞株。使細胞在37°C、5% C02下於補充有10% 胎牛血清（Invitrogen, Carlsbad, CA) 、0.5% 青黴素/鏈黴 素（Invitrogen, Carlsbad，CA)及 1%麵胺醯胺（Invitrogen, Carlsbad，CA)的 MEM ( Saos-2、SYO-1、HSSY-II )、DME (SK-PN-DW、RD )或RPMI ( RH30 )培養基中單層生長。 結果展示如下（圖8及9)。

細胞株 組織學 .：’ 每曰 x3 每-.曰 χ] ie5ij SK-PN-DW 尤因氏肉瘤 <0.5 \x%/mL <5.0 \x^JmL SK-ES-1 尤因氏肉瘤 $0.5 pg/mL <5.0 RH30 腺泡狀橫紋肌肉瘤 <1.0 <1.0 RD 胚胎型橫紋肌肉瘤 <5.0 <1.0 μ^/mL SYO-1 滑膜肉瘤 <1.0 Sl.O pg/mL HSSY-II 滑膜肉瘤 <0.5 \x^/vcL· <0.5 SaOS 骨肉瘤 $5.0 pg/mL <5.0 μ^/mL OS222 骨肉瘤 <5.0 $10.0 pg/mL 38 200906842

OS229 ------- S〇_5 pg/mL <0.5 US230 骨肉瘤 <5.0 S5.0 pg/mL 對環磷醯胺（CPA)及異環磷醯胺（IF〇s)之抗性為 癌症治療中欲克服之主要障礙。當以IpM · (LYS)2治療時， 具有耐CPA人類肉瘤細胞異種移植物之小鼠的肉瘤生長具 有超過5倍降低；CP A治療無效（圖i 〇至丨2 )。 人類臨床試驗 安全性及劑量範圍第I階段研究使用各4週（丨個週 期）在3個連續日内每日投予之IpM · (LYS)2。結果展示 在肉瘤（2/11個個體，包括至少一個IF〇s治療失敗的個 體）及間皮瘤（1個個體患有延長的穩定疾病）中之臨床 活性的證據。在此時程中IPM · (lys)2之最大耐受劑量 (MTD )為4〇〇 mg/m2/d。存在少許骨髓毒性且無出血性 膀胱炎（膀胱毒性）或CNS毒性。劑量限制毒性由電解質 不平衡（electrolyte imbalance )表徵。此 MTD 與大於 25 g/m2 之IF0S劑量相當，且此劑量獲得比殺死5〇%之人類肉瘤 細胞株的劑量高25倍之血清含量。 實施例6 材料及方法 動物護理：自弗雷德裏克癌症研究發展中心（Frederick Cancer Research and Development Center) ( Frederick, MD ) 購得5至6週齡雄性CD2F1小鼠。 腫瘤模型：使用23號針將一百萬個p388鼠類白血病 細胞腹膜内植入小鼠。將P388腫瘤細胞株維持為活體内 39 200906842 繼代。腫瘤植入之日定為第〇天，腫瘤植入後第1天著手 治療。植入足夠數目之小鼠以便選擇體重範圍儘可能窄之 動物用於試驗。 藥物調配：在第一天治療（第1天）時以70 mg/mL 之濃度在食鹽溶液中調配1 〇〇 mg之預先稱量小瓶中所提 供的IPM· (LYS)2。接著，將此溶液之一部分稀釋至46.65、 23·35、14、9.35、4.65及2.8 mg/mL·之較低給藥濃度。在 後續治療曰’將IPM · (LYSh調配為14 mg/mL且接著將 彼溶液之一部分稀釋至較低給藥濃度。以〇.2 mL/1 0 g體 重之注射體積基於確切體重投予所有注射。 藥物治療：研究由每組8隻小鼠之8個治療組及每組 10隻小鼠之2個媒劑處理對照組組成，在第一天治療時總 共84隻小鼠。在第1天以單一注射形式（q丨dx丨）以經口 給予之1400、933及467 mg/kg劑量及腹膜内給予之280 mg/kg劑ϊ投予IPM · (LYS)2。亦以經口給予之28〇、

及93 mg/kg/劑之劑量及腹膜内給予之56 mg/kg/劑之劑量 歷牯5個連續日（qldx5 )每日投予IPM · (LYS)2。在第i 天用，盈口投予之食鹽溶液以單一注射形式處理一個對照 組。在qldx5治療時程中用經口投予之食鹽溶液處理第二 對照組。 研究持續時間 止前使任何變得垂 .腫瘤植入後61天終止研究。在研究終 死之動物安樂死。 所。平估之參數：非特異性死亡數目、中位數死亡日及 基於中位數死亡曰且表示為百分數（江s%)之壽命增加； 40 200906842 中位數存活時間及基於中位數存活時間計算之請。。 、先。十刀析.個別動物之存活時間用作生命表分析（分 級 Kaplan-Meier 評估，拉盆 X/r , 1古接者Mantel-Haenszel對數等級檢 疋）之終點以在統計學上比較各組之間的存活數據。生命 表分析允許使用並未達到終點的動物藉由排除該等動物來 比較各組之間的存活數據。 結果 f 兩個媒劑處理對照組之中位數死亡日均為n.o,其中 死亡發生在第10天與第14天之間。腹水存在於所有動物 中。 以在第1天給予之單一治療形式經口投予的· (LYS)2在1400及933 mg/kg之劑量下對小鼠有毒。在接受 14〇〇 mg/kg之劑量治療的組中，一隻動物死亡且在第5天 歸因於垂死使4隻動物安樂死，在第6天使2隻動物安樂 死，且在第ίο天最後一隻動物死亡。在接受933 mg/kg之 , 劑量治療的組中，在第5天歸因於垂死使6隻動物安樂死， 且該組中之剩餘2隻動物在第9天死亡。屍體剖檢表明在 該兩個治療組中不存在腫瘤。在動物死亡或安樂死之前， 在分別接受1400及933 mg/kg劑量之ipm · (LYS)2的組中 觀測到2 4 %及2 2 %之顯著重量損失。以單一經口治療形式 以467 mg/kg之劑量投予的IPM · (LYS)2耐受較好；然而， 歸因於垂死在第8天使兩隻動物安樂死。此組之平均體重 之最大損失為8%。該組中之刺餘6隻動物在第11天與第 1 5天之間死亡’且在屍體剖檢後經測定有腹水存在。無論 41 200906842 計算是基於中位數i 数死亡日遇疋中位數存活時間，此治療組 之ILS均為9%。此組之存活數據與媒剖處理對照組（組卜 處理qldxl)之存活數據的統計比較表明差異並不顯著。 耐受以280 mg/kg之劑量以單一注射形式腹膜内投予 的IPM. (LYS)2，無死亡且具有最小平均體重損失（4%， 1 g)。此組之中位數死亡日為34 5,旧為214%。中位 數存活時間為3 8 〇夭，π S A。/1 c 〇/ ^ 天1LS為245%。另外，2隻動物存活 直至第61天研究終止。屍體剖檢表明無腫瘤存在。此治 療組與媒劑處理對照組（組！ ’處理qidxi)之存活數據 之統計分析表明差異顯著。 耐文在qldx5治療時程中以28〇、187及93叫㈣劑 之劑量經口投予的IPM.(LYS)2，無治療相關死亡。在接 受劑量為280 mg/kg/劑之IPM · (LYS)2的組中觀測到最小 平均體重相失（4% ’ 1 g )。對於兩個較低劑量組未觀測 到重#損失。對於28〇、187及93 mg/kg/劑之劑量而言， 中位數死亡日及中位數存活時間分別為17 〇、17 〇及15 〇 天，ILS值為55¼、55¼及36。/。。該三個組之每一組的存 活數據與媒劑處理對照組（組6，處理qldx5 )之存活數 據的統計比較表明各組之壽命增加在統計學上顯著。 在qldx5注射時程中以56 mg/kg/劑之劑量腹膜内給予 的IPM. (LYS)2對P388/0白血病相當有效，中位數死亡日 為28.5。第一例死亡發生在第24天且最後一例死亡發生 在第33天’該組中8隻動物中的4隻存活直至第61天研 究終止時。基於中位數死亡曰計算之ILS值為ι59%。此 42 200906842

治療組之中位赵左、.尤A 子活時間大於47.0天，所計算ILS彳 327%。此m ± 异ILS值為 、生去耐受良好，無治療相關死亡且具有4% (ig)平均體重招生 、失。s在統計學上比較此組之存活數 與媒劑處理對昭电h + *居數據 發現差異顯著。 琢f 統計分析總結 爸對 p值 1與4 -------- 0.192 1與5 ------ 0.000 4與5 0.000 6與7 0.000 6與8 — 0.000 6與9 0.000 6與10 Γο.οοο 7與10 0.000 結論

當以1400及933 mg/kg之劑量以單一治療形式經口投 予時’ IPM · (LYS)2對小鼠有毒。财受使用經口投予之467 mg/kg之劑量的單一治療，但僅引發統計學上不顯著的最 小壽命增加。以280 mg/kg之劑量以單一腹膜内注射形式 投予的IPM.(LYS)2相當有效且導致兩名61天存活者及 顯著壽命增加。 在qldx5時程中以280、187及93之劑量經口投予的 IPM · (LYS)2比使用較高劑量之單一治療耐受好得多且對 P3 88/0白血病更有效。使用po qldx5給予之所有三個劑量 的治療產生統計學上顯著的壽命增加。當在qidxs治療時 程中以56 mg/kg/劑之劑量腹膜内投予時，IPM · (LYS)2引 43 200906842 發顯著壽命增加，該組中的8隻動物中的4隻存活直至第 6 1天研究終止。 實施例7 材料及方法 動物 s蒦理：自 Taconic Farms (Germantown, NY)購得 5週齡雌性無胸腺NCr-nu/nu小鼠。 腫瘤模型：使用12號套管針將活體内繼代中維持之 f MX-1人類乳房腫瘤之3〇至4〇 mg片段皮下植入小鼠乳房 脂墊中且使其生長。腫瘤植入之曰指定為第〇天。起始治 療前’使腫瘤達到138·245 mg重（尺寸為138_245 mni3)。 植入足夠數目之小鼠以便在治療啟動當天（腫瘤植入後第 1 0天）選擇重量範圍儘可能窄的腫瘤用於試驗。將經選擇 具有適當尺寸範圍之腫瘤的動物分配成各個治療組，以便 第一天治療時中位數腫瘤重量儘可能彼此接近（172_197 mg)。 ( 藥物調配：在第一天治療（第10天）時在食鹽溶液中 以6.0 mg/mL之濃度調配IPM · Tris ( 2〇5邮ιρΜ/小瓶） (可如實施例1中所述製備）及IPM，且隨後以食鹽溶液 稀釋至4.05、1.8及1.2 mg/mL·之較低給藥濃度。在第一 天治療時在食鹽溶液中以14 mg/mL之濃度調配IpM · (LYS)2 ( 1〇0 mg IPM_離胺酸/小瓶），且隨後以食鹽溶液 稀釋至9.35、4.2及2.8 mg/mL·之較低給藥濃度。接著， 將各濃度等分以供每日使用，冷凍，儲存在_2(rc下且解凍 以供每日使用。以0.2 mL/10 g體重之注射體積基於確切 44 200906842 體重投予所有注射。 隹' θ療.實驗由每組8隻小鼠之12個治療組及每組 1〇隻小鼠之2個媒劑處理對照組組成，在第一天治療時總 共116隻小畠。a ' 母日投予所有藥劑（及媒劑），持續5個 連續日、 。以36及24 mg/kg/劑之劑量腹膜内以及 mg/kg/劑之劑量經口投予IPM · 丁ris及IPM。以 84及56 mg/kg/劑之劑量腹膜内以及280及187 mg/kg/劑 之劑量經口投予Ip vc. Μ · (LYS)2。以媒劑（食鹽溶液）腹膜 内或經口處理對照組。 腫瘤罝測及體重：量測sc腫瘤且在第一天治療起始每 週兩次稱量動物。藉由測徑規測量法（麵）且使用用於擴 圓形球體之下式測定腫瘤體積：

LxW2 / 2 = mma , 其中L及W係指在各量測時收集的較大及較小正交尺 寸。假定單位密声f T 3 又（1 mm = 1 mg)，亦使用此式計算腫 瘤重量。 研究持續時間：腫瘤植人後5G天終止研究。在研究終 止之前使變得垂死或腫瘤變得潰爛或制4，_ 動物安樂死。 e 所評估之參數：測定非特異性死亡數目、部分及完入 腫瘤消退之數目、無腫瘤存活者數目及個別動 = 腫瘤質量加倍之時間。使用、、…… 逆〗兩個 J便用治療組（T )及對照組（c )中 達到兩個腫瘤質量加倍之中 Τ位數梓間來计异中位數腫瘤 I Γ-C j生長之總延遲。 45 200906842 統計分析··使用個別動物達到兩個腫瘤質量加倍之 間作為學生t檢驗（student, s “Μ) /施时秩 和檢驗（⑽k sum test)或生命表分析之終點以便在統外 學上比較各組之間的生長數據。生命表分析（分級 KaPlan-Meier評估，接著心則七繼㈣對數等級檢定） 允許使用腫瘤纟達到t平估點之動_由排除 較各組之間的生長數據。 來比 結果 所有10隻小鼠中兩個媒劑處理對照組之腫瘤均生長良 好。對於腹膜内處理及經口處理組，中位數腫瘤分別在7.4 天及7.2天内達到兩個腫瘤質量加倍。在研究期間，該兩 個組不存在平均體重損失。 以36及24 mg/kg/劑之劑量腹膜内投予IpM · THs分 別引發10_2及7.7天之腫瘤生長延遲（T_c)。較高劑量 具有一個無腫瘤存活者。對於36及24 mg/kg/劑之劑量， 該兩個劑量得到耐受，最大平均體重損失分別為1〇%(2g) 及0%。以36及24 mg/kg/劑之劑量腹膜内投予IPM分別 引發5·2及2.6天之腫瘤生長延遲。對於％及24 mg/kg/ 劑之劑ϊ，該兩個劑量得到财受，最大平均體重損失分別 為〇%及5% ( 1 g )。對於IPM，達到兩個腫瘤質量加倍之 時間在統計學上小於對應劑量之IPM · Tris (對於36 mg/kg/ 劑之劑量，p = 0.000;對於24 mg/kg/劑之劑量，p = 〇 〇21 )。 以對應於36及24 mg/kg/劑之IPM劑量的84及56 mg/kg/ 劑之劑量腹膜内投予IPM · (LYSh分別引發24.3及9.0天 46 200906842 之腫瘤生長延遲。較高劑量之IPM · (LYS)2有毒一在第20 天兩隻小鼠死亡，且2隻由於垂死或過大體重損失安樂死。 耐受較低劑量之IPM · (LYS)2，最大平均體重損失為1 5% (3 g)。所耐受IPM · (LYS)2劑量展現與24 mg/kg/劑之 對應劑量之IPM · Tris相當的活性（p = 0.766 )以及優於 24 mg/kg/劑之對應劑量之IPM的活性（p = 0.0047 )。 以120及81 mg/kg/劑之劑量經口投予ipm · Tris分別 引發8.7及9.0天之腫瘤生長延遲。較高劑量之jpm · Tris r .. ‘引發1 5% ( 3 g )之最大平均體重損失，一隻小鼠由於體重 小於14 g而安樂死。耐受較低劑量，最大平均體重損失為 10% ( 2 g)。以120及81 mg/kg/劑之劑量經口投予ipm 分別引發4.6及4.0天之腫瘤生長延遲。耐受該兩個劑量， 农大平均體重損失為5 % ( 1 g )。達到兩個腫瘤質量加倍 之時間並不在統計學上不同於對應劑量之IPM · Tris之時 間（對於 120 mg/kg/劑之劑量，p = 〇·! 174 ;對於 81 mg/kg/ ( 劑之劑量’ P = 0.1152)。以對應於120及81 mg/kg/劑之 IPM劑量的280及187 mg/kg/劑之劑量經口投予ipm . (LYS)2分別引發5.0及3.5天之腫瘤生長延遲。耐受該兩 個劑量，最大平均體重損失為5% ( 1 g )及〇%。較高劑量 之IPM · (LYS)2展現與120 mg/kg/劑之對應劑量之IPM . Tris及ipm相當的活性（分別為p = 〇 1〇〇〇及p = 〇 9143 )。 較低齊]里之IPM · (LY.S)2展現低於81 mg/kg/劑之對應劑量 之IPM· Tris的活性（p = 〇.〇29〇)以及與81 mg/kg/劑之 對應劑量之IPM相當的活性（p = 〇 3〇73 )。 47 200906842 '统計分析表總結 2 $Γά

5與7 ΖξΊϊ il^n i〇^_l2 10 與 14 P值 o.ooo1 0.0211 '0.7661 "0.00472 0.11743 "5.10003 0.91433 "〇. 11523 "0.02903 0.30733 1生命表分析 2Mann-Whitney 秩和檢驗 3學生t檢驗 圖13、14及15中分別展示MX-1人類乳房腫瘤異種 移植物對以（1 ) ip及p〇媒劑（2 ) ip IpM · Tris、IpM及 IPM · (LYS)2 及（3) p〇 ipm · Tris、IPM 及 IPM · (LYS)2 治療之反應。 、结論 對於腹膜内投予相等IPM劑量，IPM · Tris之抗腫瘤 活性優於IPM之抗腫瘤活性（兩個劑量）且與ipm · (LYS)2 之抗腫瘤活性相當（兩個劑量）。對於經口投予相等IPM 劑量’ IPM · Tris之抗腫瘤活性與IPM之抗腫瘤活性相當 (兩個劑量），與較高劑量之IPM . (LYS)2的抗腫瘤活性 相當且優於較低劑量之IPM . (LYS)2的抗腫瘤活性。 實施例Η 48 200906842 材料及方法 動物護理：自Harlan (Prattville, AL)購得5週齡雄 性無胸腺NCr-nu/nu小鼠。 腫瘤模型：使用12號套管針將活體内繼代中維持之 MX-1人類乳房腫瘤之30至40 mg片段皮下植入小鼠乳房 脂塾中且使其生長。腫瘤植入之日指定為第〇天。起始治 療前，使腫瘤達到1 13-245 mg重（尺寸為113_245 mm3)。 植入足夠數目之小鼠以便在治療啟動當天（腫瘤植入後第 6天）選擇重量範圍儘可能窄的腫瘤用於試驗。將經選擇 具有適當尺寸範圍之踵瘤的動物分配成各個治療組，以便 第一天治療時中位數腫瘤重量儘可能彼此接近（144_162 mg)。 藥物調配：在食鹽溶液中在治療之每一天以丨3 5 mg/mL 之濃度調配 IPM · Tris ( 2〇5 mg IpM/小瓶，

Health)(可如實施例！中所述製備），且隨後以食鹽溶 液稀釋成9、6、4.05、2_7、1.8及1>2 mg/mL之較低給藥 濃度。在治療之每一天在食鹽溶液中以6 〇 mg/mL之濃度 調配 IPM ( Eagle-Picher Pharmaceutical Service)且隨後以

食鹽溶液稀釋成4_05、1_8及l.2mg/mL之較低給藥濃度。 在治療之每一天在食鹽溶液中以14 mg/mL之濃度調配 IPM · (LYS)2 ( 1〇〇 mg IPM-離胺酸 / 小瓶，University 〇f Iowa)，且隨後以食鹽溶液稀釋成9 35、4 2及2·8 mg/mL 之較低給藥濃度。調配後將所有給藥溶液保持在冰上且在 30分鐘内投予。以〇.2 mL/l〇 g體重之注射體積基於確切 49 200906842 體重投予所有注射。 藥物治療：實驗由每組8隻小鼠之1 6個治療組及每組 1〇隻小鼠之2個媒劑處理對照組組成，在第一天治療時總 丘 148 隹/丨、& λ- ’、 又咏。母曰投予所有藥劑（及媒劑），持續5個 、續曰 Γ )。以81、54、36及24 111旦/1^/劑之劑量腹 膜内且乂 270、180、120及81 mg/kg/劑之劑量經口投予 IPM· Tris〇 以 τι 〜 •^及24 mg/kg/劑之劑量腹膜内且以12〇及

Η mg/kg/劑之劑量經口投予ιρΜ。以84及％ 劑之 背J畺旻膜内且以280及187 mg/kg/劑之劑量經口投予ipM · (ly—s)2。以媒劑（食鹽溶液）腹膜内（第1號組）或經口 (第10號組）處理對照組。 腫瘤量測及體重：量測sc腫瘤且在第一天治療起始每 週兩-人稱量動物。藉由測徑規測量法（随）且使用用於擴 圓形球體之下式測定腫瘤體積：

其中L及W係指在各量 寸。假定單位密度（1 mm3 瘤重量。 測時收集的較大及較小正交尺 =1 mg) ’亦使用此式計算腫 在研究終 mg之任何 研究持續時間：腫瘤植入後52天終止研究。 止之刖使變得垂死或腫瘤變得潰爛且達到4,〇〇〇 動物安樂死。 腫估之參數：測定非特異性死亡數目、部分及完全 腊:暫^之數目、無腫瘤存活者數目及個別動物達到兩個 腫瘤負置加倍之時間。使用治療組⑴及對照組（c)中 50 200906842 達到兩個腫瘤質量加倍之中位數時間來計算中位數腫瘤 (τ-c)生長之總延遲。 統計分析：使用個別動物達到兩個腫瘤質量加倍之時 間作為學生t檢驗/Mann Whitney秩和檢驗之終點以在統計 學上比較各組之間的生長數據。 結果 所有10隻小鼠中兩個媒劑處理對照組之腫瘤均生長良 好。對於腹膜内處理及經口處理組，中位數腫瘤分別在9 2 天及8·9天内達到兩個腫瘤質量加倍。在研究期間，該兩 個組不存在平均體重損失。 以81 mg/kg/劑之劑量腹膜内投予IpM· Tds對小鼠有 毒，引發3例死亡及一例歸因於垂死之安樂死及2〇% ( 4 5 g)之最大平均體重損失。耐受54、36及24 mg/kg/劑之較 低劑量，最大平均體重損失分別為5% ( i 2 g )、6〇/❶（i 3 g ) 及1%( 0.2 g)。54、35及24 mg/kg/劑之劑量分別引發4.4、 3.3及0_9天之腫瘤生長延遲（t_c)。以36及24 mg/kg/ " 劑之劑量腹膜内投予IPM分別引發1.1及0.3天之腫瘤生 長延遲。對於36及24 mg/kg/劑之劑量，該兩個劑量得到 耐文，最大平均體重損失分別為8%( 18 g)及2%( 〇 4邑）。 對於IPM，達到兩個腫瘤質量加倍之時間在統計學上小於 最高耐受劑量之IPM. Tris的時間，但在統計學上與對應 劑置之IPM · Tris相同（對於54 mg/kg/劑之劑量，p = 0.0148 ;對於36 mg/kg/劑之劑量，p = 〇 1879)。以對應 於36及24 mg/kg/劑之IPM劑量的84及％ mg/kg/劑之劑 51 200906842 量腹膜内投予ΙΡΜ· (LYS)2分別引發〇·5及〇3天之腫瘤 生長延遲。對於36及24 rag/kg/劑之劑量，該兩個劑量得 到耐受，最大平均體重損失分別為1%(〇3 g)及〇%。對 於IPM. (LYS)2,達到兩個腫瘤質量加倍之時間在統計學 上小於最高耐受劑量之IPM· Tris的時間，但在統計學上 與對應劑量之IPM. THs相同（對於54 mg/kg/劑之劑量， P = 0_0104 ;對於 36 mg/kg/劑之劑量，p = 〇 1578)。 以270、180及12〇 mg/kg/劑之劑量經口投予ιρΜ. η。 對小鼠有毒，分別引發8例死亡/歸因於垂死之安樂死、7 例死亡及3例死亡。180及i2〇 mg/kg/劑之劑量分別引發 2^%( 5.3 g )及20%( 4.7 g )之最大平均體重損失。81 劑之取低劑量得到耐受，最大平均體重損失為丨〇%( 2 2吕）。 81 mg/kg/劑之劑量引發2.6天之腫瘤生長延遲。以12〇 mg/kg/劑之劑量經口投予IpM對小鼠有毒，引發2例死亡 及18/) (3.8 g)之最大平均體重損失。81 mg/kg/劑之較低 劑量得到耐受（最大平均體重損失為9% ( 2 g ))且引發 2.3天之腫瘤生長延遲。達到兩個腫瘤質量加倍之時間並 不在統計學上不同於對應劑量之IpM · Tris的時間（對於 81 mg/kg/劑之劑量，p = 0 2932)。以對應於 12〇 及 81 mg/kg/ Μ之IPM劑里的280及187 mg/kg/劑之劑量經口投予ipM · (LYS)2分別引發3.9及4 7天之腫瘤生長延遲。該兩個劑 量得到耐受’最大平均體重損失為1 4%( 3 g )及7%( 1.6 g )。 較低劑量之IPM · (LYS)2展現與8 1 mg/kg/劑之對應劑量之 IPM . Tris 相似的活性（ρ = 〇·8785 )。 52 200906842 統計分析總結表 _ p值 1與3 —-- 0.00101 1與6 ------ 0.02302 0.14562 _3^6 0.01481 3與8 -_ 0.01041 0.18792 4與8 〜 一. L〇Tl5782 14 ^00532 16 0.02341 ί0 與 17 0.00391 16 0.29322 17 ------ 0.72091 18 0.87851 iMann-Whitney 秩和檢驗 2學生t檢驗

圖1 6、1 7及1 8中分別展示MX-1人類乳房腫瘤異種 移植物對以（1 ) lp 及 p〇 媒劑、（2 ) ip IpM · Tris、IpM 及1PM · (LYS)2 及（3 ) P〇 IPM · Tris、IPM 及 IPM · (LYS)2 治療之反應。 結論 對於腹膜内投予相等IPM劑量，IpM · THs之抗腫瘤 活性與IPM及IPM · (lys)2 (較高劑量）之抗腫瘤活性相 虽。在此研究中較低劑量不具有抗Μχ_ i腫瘤活性。最高 耐文劑量之IPM · Tris優於最高測試劑量之IPM或IpM · (LYS)2。對於經口投予相等IpM劑量，ιρΜ · 丁出之抗腫 瘤活性與較低劑量之IPM及IpM . (lys)2的抗踵瘤活性相 53 200906842 當。對於IPM. Tris與IPM，120 mg/kg/劑之劑量對小鼠 有毒。 在先前研究（實施例7)中，對於腹膜内投予 相等IPM劑量，腹· Tris之抗腫瘤活性優於龍（兩個 劑量）之抗腫瘤活性且與IPM· (LYS)2 (兩個劑量）之抗 腫瘤活性相當。對於經口投予相等IPM劑量，ιρΜ · THs 之抗腫瘤活性與IPM (兩個劑量）之抗腫瘤活性相當，與 ，高劑量< ㈣.(LYS)2的抗腫瘤活性相當且優於：低劑 里之IPM · (LYS)2的抗腫瘤活性。 在比較兩個研究中，當腹膜内投予時三種藥劑之活性 在此研究中較低（例如，對於36 mg/kg/劑之劑量的ιρΜ·

Tris 10.2天與3.3天之Τ-C值；對於36 mg/kg/劑之劑量 的㈣，5/2天與U天之T_c值；且對於56mg/kg/劑之 劑量的IPM · (LYS)2，9.〇天與〇·3天之T_c值）。當經口 投予時IPM · Tris之活性在此研究中亦較低（im與_ · (L YS)2之相當值）（例如，對於8丨mg/kg/劑之劑量的舰· Tris，9.〇天與2.6天之T_c值；對於81叫心/劑之劑量 的㈣，4.0天與2.3天之T_c值；且對於28〇劑之 劑量的觀.（；^)2,5_〇天與39天之T_c值）。考慮到 該等生物系統在研究之間的變化，活性降低之原因並不明 顯。關於研究之腫瘤組份，媒劑處理對照腫瘤在兩個研究 中以相當速率生長。第一天治療時之中位數腫瘤重量在實 施例7中（172_197mg範圍）略大於此實施例中〇仏⑹ 叫範圍然而，此小差異對抗腫瘤活性應不具有顯著影 54 200906842 實施例9 材料及方法

以可如實施例1中所述製備的IPM · Tris處理3個每 組8隻小鼠之組’以阿黴素處理3個每組8隻小鼠之組， 以媒劑處理1個每組10隻小鼠之組且以IPM · Tris/阿黴 素組合處理18個每組8隻小鼠之組。將MX-1腫瘤片段 (30 40 rng ,來自活體内繼代）皮下植入雌性無胸腺裸鼠 之乳房脂墊中。以三種劑量（12、24及54 mg/kg/劑）持 續5個連續曰（Qldx5 )每曰腹膜内給予IPM · Tris (或其 媒Μ )，其中IPM · Tris調配物包含258.9 mg IPM ( MW 221.02) 、141.9 mg Tris 鹼（MW 121.14，IPM:Tris 鹼莫 耳比1.1)及3 %甘露糖醇。每4天以8 mg/kg/劑靜脈内給 予三個注射（Q4dx3 )之阿黴素（或其媒劑）。治療當天 製備給藥溶液，且在製備後將IPM . Tris給藥溶液保持在 冰上。 當腫瘤為約175 mg大小（100至25〇 mg範圍）時開 2治療。用測徑規在兩個維度上量測各腫瘤，且假定單位 密度（1 mm3 = i mg)，使用用於長橢球體之式（axb2/2) 將其轉化成腫瘤質量，其中a為較長尺寸且b為較小尺寸。 每週兩-人§己錄腫瘤量測且藉由治療組之腫瘤生長延遲與媒 d處理對照組之比較 '部分及完全消退及無腫瘤存活者來 評估抗腫瘤活性。應注意當组合投予54mg/kg/天之ΐρΜ· ls與8 mg/kg/天之阿黴素時，組合組中之兩隻動物歸因 55 200906842 於毒性較早死亡。結果可見於圖19_25。 IPM· Tris與阿黴素之組合產生顯著抗腫瘤活性，其 h 口之腫瘤生長抑制超過對單一藥劑投予所觀測到之 卩制’且該組合與單-藥劑投予相比顯著增加存活。實際 t ’該組合之效應展示協同功效，亦即與以相似劑量個別 投予^藥劑相比大於加和功效，甚至其中單獨IPM· Tris hJ里過低以致备與媒劑處理對照動物相比時提高極少或 ‘，’、改善。儘管治療期間組合組中之動物體重降低（第Μ 天給藥結束時平均動物體重降低2〇%)，給藥結束後其迅 速恢復（截至第38天觀測到完全恢復），表明毒性可逆。 此數據表明以IPM· Tris與阿黴素組合治療可適用於治療 任何對單一藥劑形式或組合形式之阿黴素或ipM· 作 出反應的癌症，包括（但不限於）乳癌、印巢癌及肉瘤。 貫施例10 將來自活體内繼代之MX-i人類乳房腫瘤之片段（各 # 30至4〇 mg)皮下植入裸鼠之乳房脂墊中，且在啟動治療 耵使其達到75至198 mg重。在腫瘤植入後1〇天起始， 刀別QlDx5 IP及Q6Dx3 IV投予可如實施例1中所述製備 的 IPM · Tris ( 54 mg/kg)及多西他赛（10 mg/kg)。如圖 26所見，兩種藥劑之組合展示與以單一藥劑形式投予的任 一藥劑相比增加之抗腫瘤效應。 實施例11 將來自活體内繼代之MX-1人類乳房腫瘤之片段（各 30至40 mg)皮下植入裸鼠之乳房脂墊中，且在起始治療 56 200906842 W使其達到75至198 mg重。如圖27所見，發現腹膜内 投予之可如實施例i中所述製備的IPM · THs ( 36 抑制腫瘤生長至大致與經口投予的ΙΡΜ· Tris (8i mg/kg) 相同之程度。另外，口服或全身性投予ΙρΜ·τ^產生 異種移植物攜帶小鼠之存活的相似增加。如圖28所見，ιρ 組之中位數存活為39天，p〇組之中位數存活為37.5天且 ，劑對照組之中位數存活為3〇天。此等經口及腹膜内劑 「 量之相等抗腫瘤活性在自經口及全身性投予之ιρΜ·仙 之PK預期的範圍内。 實施例12 —經由強飼法（ΡΟ)或團式靜脈内注射每日一次將可如 =施例1中所述製備的ΙΡΜ · Tris投予Sprague_Dawiey大

=。以20、30或4〇 mg/kg之劑量投予IPM . Tris且在給 藥前及給藥後0.5、u'm 12及24小時自後眶 竇（retro orbital sinus)獲得用於Ρκ評估之血樣。在各時 間點對每組3隻動物取樣。圖29中展示給藥前、〇·5、}、 2及4小時之PK結果，其中丁_似乎約為ο」小時。最終 之估算值在0.25至〇64小時範圍内。對於各劑量，使 用AUC值估算經口投予之IpM· THs的絕對生物等效性， 其為比率（經口給藥後之AUC)/(靜脈内給藥後之AUC)e圖 3〇中展示各劑量之AUC值且圖31中展示各劑量之匚 值。4了了/^也〇 max 旦 "Cmax值隨經口或靜脈内投予之IPM. Tris的劑 量之增加而線性增加。 20、30及40 mg/kg經口劑量之ΙρΜ · Tris的生物可 57 200906842 用性分別為480/〇、65%及73%。總體平均生物可用性在雌 性中為62%。在大鼠中觀測到相似ρκ ;然而，雄性中之 平均生物可用性據估算為41〇/〇。 實施例]^ IPM · Tris/甘露糖醇及ipm · (LYS)2之溶液穩定性 在注射用5。/。氯化鈉溶液中評估IPM · Tris調配物之重 構穩定性。發現IPM之濃度在至多2·〇小時内保持>9〇0/〇效 力。 在注射用0.9%氣化鈉溶液中評估IPM · (LYS)2調配 物。發現IPM之濃度在至多1 .〇小時内保持>9〇%效力。 IPM · Tris/甘露糖酵之溶液穩定性 表1提供在25 mL注射用5°/。氯化鈉溶液存在下· Tris/甘露糖醇之重構穩定性數據。在約1小時、1 ·5小時、 2.5小時、3_5小時、4.0小時及5_〇小時之目標時間取等分 試樣。分析樣品之ΙΡΜ效力。 表1 . 5%氯化納浴液存在下ΐρμ · Tris/甘露糖醇之重 ί k ' 構穩定性 重構時間（小時） 基於初始IPM小瓶内含物之效力％ — 0 100 ~-- 1 94 — 2 90 ~ 3 86 ~~~ ~- 4 81 —~ ~~ 6 74 ~' - IPM · (LYS)2之溶液穩定性 58 200906842 表2提供在25 mL注射用〇_9%氯化鈉溶液存在下 IPM . (LYS)2之重構穩定性數據。在約1小時、2小時、2 f 小時、3 · 5小時、4 _ 0小時及5 _ 0小時之目標時間取等分試 樣。分析樣品之IPM · (lys)2效力。 表2:0.9%氯化鈉溶液存在下1卩]^.(1^8)2之重構穩 定性 重構時間（小時） 基於初始IPM · (LYS)2小瓶内含物之效力％ 0 100 ~~~~ 1 90 — 2 79 2.5 ΎΪ ~ ' 3.5 64 —~ 4 "57 5 \51 結論 當經受 5%氣化鈉溶液時，IPM/緩血酸胺 (tromethamine) /甘露糖醇調配物在2.0小時内保持90% 效力。在0.9%^化納存在下，I p M . (LYS)2調配物在1.0 小時内保持90%效力。兩種調配物之間的重構穩定性（>9〇〇/〇 效力）差異為1 · 〇小時，因子為2。在製備及投予藥品期 間穩定性時間之增加可輔助臨床醫師。 實施例1 4 IPM之溶液穩定性 如下表3及圖32所示，在pH 7緩衝液中在約25°C下 經3.5小時評估IPM調配物之重構穩定性。 59 200906842 IPM · Tris/甘露糖醇之溶液穩定性 表4提供在25 mL注射用5%氯化鈉溶液存在下ipm · Tns/甘露糖醇之重構穩定性數據。在i _5、3 ·〇及4.5小時 之目標時間取等分試樣。 重構時卩^了^^ 純度（％) 0 ^ 99.80 1.5 …一~~ 99.72 3.U 99.49 — 4.5 ——~- 99.50 ~~~

重構時間（小時） 純度％ 0 ~~~ 100.00% 0.5 89.5% 1.0 ^ 80.3% 1.5 ~~~ " 72.2% 2.0 一 ~ 64.8% Ύδ ^- 57.4% To " 52.1% T5 —- 47.0% IPM . (LYS)2之溶液穩定性 用0.9%氯化鈉溶液存在下IpM. 。在1.5、3.0及4 5小時之目標 表5提供25 mL注射 (LYS)2之重構穩定性數據 時間取等分試樣。 重構時間（小時1 純度（^ΓΡ] 0 97.48 - 1.5 96.97 ~~ 3.0 92.54 4.53 95.37 ---- 60 200906842 實施例15 固體IPM · Tris之穩定性 1個月 2個月 3個月 純度（面積％) -20°C 100.0% 100.0% 100.0% 5°C 99.9% 100.0 100.0% 25〇C 100.0% 99.8% 99.9% 效力（IPM含 3： w/w%) -20°C 100.5% 100.4% 102.4% 5°C 101.3% 99.6% 102.3% 25〇C 97.8% 90.9% 80.8% 固體IPM · Tris/甘露糖醇凍乾粉劑之穩定性 0時間 1個月 3個月 6個月 9個月 純度（面 積％) -70。。 98.5% 98.7% 98.7% 99.7% 99.8% -20°C 98.5% 98.6% 99.1% 99.3% 99.8% 5°C 98.5% 99.1% 98.9% 99.2% 99.8% 固體IPM · (LYS)2凍乾粉劑之穩定性 0時間 1個月 3個月 6個月 9個月 12 個 月 18個月 24個月 純度 (面積 %) -70°C 99.8% 98.8% 98.8% 99.5% 99.8% 99.6% 100.0% 100.0% -20°C 99.8% 98.4% 98.5% 96.0% 96.9% 97.1% 5°C 99.8% 93.1% 54.8% 49.2% 實施例16 61 200906842 條件 IPM游離酸 (API) IPM-Tris 鹽 (API) IPM-離胺酸可 注射物 IPM-Tris-甘 露糖醇可注 射物 當前穩定性數據 總結 在-70°C下2 年純度無變化 在5°C下3個 月純度無變化 在-70°C下2 年純度無變化 在5°C下1年 純度無變化 長期儲存溫度 -70。。 5°C -70°C 5°C 25°C下之溶解性 〔食鹽溶液） 14 mg/ml 約 1400 mg/ml 20 mg/ml 80 mg/ml 重構穩定性時間 ΝΑ ΝΑ < 40秒 < 30秒 25°C下之重構穩 定性 ΝΑ ΝΑ 45分鐘 2_5小時 250 ml 0.9%食鹽 溶液中之穩定性 ΝΑ ΝΑ >90%效力， 在15分鐘内 >90%效力， 在45分鐘内 pH 3.02 ΝΑ 8.5 5.0 等效物 熟習此項技術者僅使用常規實驗將認識到或能夠確定 本文所述之化合物及其使用方法的許多等效物。認為該等 等效物處於本發明之範疇内且由以下申請專利範圍所涵 蓋。 上文引用之所有參考文獻及公開案均以引用的方式併 入本文中。 【圖式簡單說明】 圖1為說明包括丙烯醛及異磷醯胺芥產生之異環磷醯 胺新陳代謝之流程。 圖2展示IPM · Tris之X射線粉末繞射。 圖3展示IPM · Tris之差示掃描熱量測定（DSC)。 圖4展示IPM · Tris之熱解重量分析（丁0八）。 圖5展示晶態IPM . Tris之掃描電子顯微鏡（SEM ) 62 200906842 影像。 圖6展示IPM · (LYS)2與IPM . Tris在人類ΜΧ-l乳 癌異種移植物中之比較。 圖7展示腹膜内與經口投予IPM · Tris在人類MX-1 乳癌異種移植物中之抗腫瘤活性之比較。 圖8a展示當以各種濃度之IPM . (LYSh處理時，RD 及RH3 0橫紋肌肉瘤細胞之存活力。 圖8b展示當以各種濃度之IPM· (LYS)2處理時，SKES1 及SKPNDW尤因氏肉瘤細胞之存活力。 圖8c展示當以各種濃度之IPM . (LYSh處理時， OS230、OS229、OS222及SaOS骨肉瘤細胞之存活力。 圖8d展示當以各種濃度之IPM . (LYS)2處理時，SY01 及HSSYII滑膜肉瘤細胞之存活力。 圖9a展示當以各種濃度之IPM · (LYSh每天處理一次 或每天處理三次時，RH3 0橫紋肌肉瘤細胞之存活力。 圖9b展示當以各種濃度之IPM . (LYSh每天處理一 / I 次或每天處理三次時，OS229骨肉瘤細胞之存活力。 圖10展示對於三個劑量時程（對照，每曰175 mg/kg xl或每曰100 mg/kgx3)中之每一者，在植入於CB17雌 性scid */*小鼠之财環構醯胺OS3 1骨肉瘤細胞株中以最大 耐受劑量（MTD )投予IPM · (LYS)2導致顯著的腫瘤生長 延遲。 圖11a展示依據相對腫瘤體積，植入於CB17雌性scid */*小鼠中之OS3 1骨肉瘤細胞之環磷醢胺抗性，其中治療 63 200906842 包含與對照相比投予環磷醯胺。 圖1 1 b展示依據相對腫瘤體積，植入於CB 1 7雌性scid */*小鼠中之OS33骨肉瘤細胞之環磷醯胺抗性，其中治療 包含與對照相比投予IPM · (LYS)2。 圖12展示依據相對腫瘤體積，IPM · (LYS)2在治療植 入於CB17雌性scid */*小鼠中之耐環磷醯胺OS31骨肉瘤 細胞中之活性（與對照相比每天1 00 mg/kgx3 )。 圖13展示SC MX-1乳房腫瘤對以劑量為qldx5之食 鹽溶液腹膜内及經口治療之反應。 圖14展示SC MX-1乳房腫瘤對以劑量為qldx5之 IPM · Tris、IPM及PM · (LYS)2腹膜内治療之反應。 圖15展示SC MX-1乳房腫瘤對以劑量為qldx5之 IPM · Tris、IPM 及 IPM · (LYS)2 經口 治療之反應。 圖16展示SC MX-1乳房腫瘤對以劑量為qldx5之食 鹽溶液腹膜内及經口治療之反應。 圖17展示SC MX-1乳房腫瘤對以劑量為qldx5之 I IPM · Tris、IPM及IPM · (LYS)2腹膜内治療之反應。 圖18展示SC MX-1乳房腫瘤對以劑量為qldx5之 IPM · Tris、IPM 及 IPM · (LYS)2 經口 治療之反應。 圖19展示以IPM · Tris與阿黴素（doxorubicin )之組 合以 12 mg/kg/天 IPM · Tris QlDx5 及 8 mg/kg 阿黴素 Q4D x3之劑量治療對MX-1乳癌腫瘤的效應。 圖 20 展示使用 12 mg/kg/天 IPM* Tris QlDx5·及 8 mg/kg 阿黴素Q4Dx3之劑量的IPM · Tris與阿黴素之組合對存活 64 200906842 之效應。 圖21展示以IPM · Tris與阿黴素之組合以24 mg/kg/ 天IPM · Tris QlDx5及8 mg/kg阿黴素Q4Dx3之劑量治療 對N1X-1乳癌腫瘤的效應。 圖 22 展示使用 24 mg/kg/天 IPM· Tris QlDx5 及 8 mg/kg 阿黴素Q4Dx3之劑量的IPM · Tris與阿黴素之組合對存活 之效應。 圖23展示以IPM · Tris與阿黴素之組合以54 mg/kg/ 天IPM · Tris QlDx5及8 mg/kg阿黴素Q4Dx3之劑量治療 對MX-1乳癌腫瘤的效應。 圖 24 展示使用 54 mg/kg/天 IPM· Tris QlDx5 及 8 mg/kg 阿黴素Q4Dx3之劑量的IPM · Tris與阿黴素之組合對存活 之效應。 圖25展示IPM . Tris/阿黴素組合攝生法之毒性。 圖26展不以IPM · Tris與多西他賽（docetaxel )之級 合以 54 mg/kg IPM · Tris QlDx5 IP 及 1〇 mg/kg 多西他賽 I Q6Dx3 IV之劑量治療對MX-ι乳癌腫瘤之效應。 圖27展示以30 mg/kg IP之劑量或81 mg/kg PO之劑 量投予的IPM · Tris治療對MX-1乳癌腫瘤之效應。 圖28展示以36 mg/kg IP之劑量或81 mg/kg p〇之劑 量投予的IPM · Tris對存活之效應。 圖29展示經口及靜脈内投予之IpM · THs在雌性 Sprague-Dawley大鼠中的藥物代謝動力學。 圖30展示增加劑量之經口或靜脈内投予之IpM · THs 65 200906842 的 AUC。 圖3 1展示增加劑量之經口或靜脈内投予之IPM · Tris 的 C m a x。 圖32展示25°C下IPM在pH 7.0緩衝液中之溶液穩定 性。 【主要元件符號說明】 f 66

Claims (1)

1. 200906842 十、申請專利範固： 1·一種晶態化合物，其包含具有式⑴結構之聰或 其類似物： 〇 Α+.Ό-Ρ-ΝΗ〇Η2ΟΗ2Χ nhch2ch2y 其中A為备基化脂族胺；且 X及Y獨立地表示脫離基。 2. 如申請專利範圍第丨項之晶態化合物，其中A+係選 自單分經乙基）胺、雙_(2.經乙基）胺或參_(2·經乙基）胺4 經基-第三丁胺、N，N_二曱基_N_(2_M乙基）胺及參（經甲 胺基甲烷（Tris) 。 & 3. 如申請專利範圍第2項之晶態化合物，其中該等銨 物種為Tris之共輛酸。 4_如申請專利範圍第丨至3項中任一項之晶態化合物， 其中X及Y獨立地為鹵素。 5.如申叫專利範圍第4項之晶態化合物，其中X與γ 相同。 6. 如申睛專利範圍第5項之晶態化合物，其中X與Y 皆為C1。 7. 如申請專利範圍第1至3項中任一項之晶態化合物， -、中該IPM或其類似物與該等銨物種以2:丨至1:2之比率 存在。 8,如申請專利範圍第7項之晶態化合物，其中該IPM 或其類似物與該等銨物種以丨：丨之比率存在。 67 200906842 9. 如申請專利範圍第8項之晶態化合物，其中該晶態 化合物之熔點為約1 〇 3 至約1 〇 6 °C。 10. 如申請專利範圍第9項之晶態化合物，其中該晶態 化合物之熔點為105。(：至1〇fC。 物 π.如申請專利範圍第丨至3項中任一項之晶態化合 其中該晶態化合物包含單一多晶型形式之晶體。 物 12.如申請專利範圍第i至3項中任—項之晶態化合 其中該化合物在室溫下在水存在下可穩定至少一天。 人^3如申請專利範圍第12項之晶態化合物，其中該化 5物在室溫下在水存在下可穩定至少三天。 14.如申請專利範圚笛 』軏圍第U項之晶態化合物，豆中該化 合物在室溫下在水存在 '、 仔在下可穩定至少六天。 15·一種製備醫藥組合物 範圍第1 i U項中任 、、包含將如申請專利 中。 任—項之晶態化合物溶解於食鹽溶液 16. 如申請專利範圍第 /皿下可穩定至少約120分鐘。 隹至 17. 如申請專利範圍第丨7 ^ 物之溶解性為至少約5〇mg/mL。、 / 、中L晶態化合 18. 如申請專利範圍第^至^項 中該醫藥組合物經調配 項之方法’其 投予。 於丄局。卩、經皮或非經腸 19. 如申請專利範圍第 物經調配用於非經腸投予。 / ，〃中該醫藥組合 68 200906842 20_如申請專利範圍第18項之方法，其中該醫藥組合 物經調配適合於經口投予。 2 1 _ —種治療過度增生性病症之方法，其包含投予如申 請專利範圍第1項之晶態化合物。 22.如申請專利範圍第21項之方法，其中該過度增生 性病症係選自急性白血病、慢性白血病、真性紅細胞增多 症（polycythemia vera)、淋巴瘤、霍奇金病（H〇dgkin，s disease )、非霍奇金淋巴瘤、多發性骨髓瘤、華氏巨球蛋 白血症（Waldenstrom's macroglobulinemia)、重鏈病、骨 髓發育不良症候群、毛細胞白血病、脊髓發育不良、肉瘤 及癌瘤、滑膜瘤（c〇l〇n Syn〇vi〇ma)、間皮瘤、尤因氏瘤 (Ewing's tumor )、平滑肌肉瘤、橫紋肌肉瘤、結腸癌、 淋巴惡性疾病、胰腺癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、前列腺癌、 肝細胞癌、鱗狀細胞癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮 脂腺癌、乳頭狀癌、乳頭狀腺癌、髓性癌、支氣管癌、腎 細胞癌、肝癌、膽管癌、絨膜癌、韋爾姆斯氏瘤（Wilms， tumor )、子宮頸癌、睾丸腫瘤、膀胱癌及CNS腫瘤。 23 ·—種如申請專利範圍第1項之化合物的用途，其用 於製造用以治療過度增生性病症之藥劑。 24·如申請專利範圍第21項之用途，其中該過度增生 性病症係選自急性白血病、慢性白血病、真性紅細胞增多 广淋巴瘤霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、多發性骨髓瘤、 華氏巨球蛋白血症、重鏈病、骨髓發育不良症候群、毛細 胞白血病脊趙發育不良、肉瘤及癌瘤、滑膜瘤、間皮瘤、 69 200906842 尤因氏瘤、平滑肌肉瘤、橫紋肌肉瘤、結腸癌、淋巴惡性 疾病〃胰腺癌、乳癌、肺癌、卵巢癌、前列腺癌、肝細胞 癌、鱗狀細胞癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、 乳頭狀癌、乳頭狀腺癌、髓性癌、支氣管癌、腎細胞癌、 肝癌膽友癌、絨膜癌、韋爾姆斯氏瘤、子宮頸癌、睾丸 腫瘤、膀胱癌及CNS腫瘤。

   25. —種如申請專利範圍第1項之化合物的用途，其用 於製造用以治療耐CPA病狀之藥劑。 26·—種凍乾粉劑，其包含具有式（1)結構之ιρΜ或 其類似物： Ο A+.-〇-P-NHCH2CH2X nhch2ch2y (I) 其中A+為羥基化脂族銨抗衡離子（c〇unteri〇n);且 X及γ獨立地表示脫離基。 27·如申請專利範圍第26項之凍乾粉劑，其中a+表示 選自單-(2-經乙基）胺'雙·(2_經乙基）胺或參_(2_經乙基）胺、 2-羥基-第二丁胺、Ν，Ν_二甲基_Ν·(2_羥乙基）胺及參（羥甲 基）胺基甲院（Tris)之質子化胺。 ,28·如申請專利範圍第27項之束乾粉劑，其中該按抗 衡離子為Tris之共輛酸。 29. 如申請專利範圍第26項之凍乾粉劑，其中X及γ 獨立地為齒素。 30. 如申請專利範圍第29項之凍乾粉劑，其中χ與γ 200906842 其中X與Y 3 1 ·如申請專利範圍第3〇項之凍乾粉 皆為C1。 ~ 26項之凍乾粉劑，其中該凍乾 3 2 _如申請專利範圍第 粉劑進一步包含甘露糖醇 33.—種凍乾粉劑，其包含下式之化合物. Ο Α+·Ό-Ρ-νη〇Η2〇Η2Χ nhch2ch2y 其中A+表示選自質子化（共輛酸）或四級形式之脂族 胺及芳族胺的録物種，料脂族胺及芳族胺包括驗性胺基 酸、雜環胺、經取代及未經取代之口比咬、胍及脉；且x及 γ獨立地表示脫離基；且 當在食鹽溶液中重構時，該;東乾粉劑在室溫下經至少 約30分鐘保持>9〇%效力。 /4.如中請專利範圍f 33項之象乾粉劑，其中當在食 風’奋液中重構時，該凍乾粉劑在室溫下經至少約^的分鐘 保持>90%效力。 35.如申請專利範圍第33項之凍乾粉劑，其進一步包 含賦形劑。 36. 如申請專利範圍第35項之凍乾粉劑，其中該賦形 劑為甘露糖醇。 37. 種適合於經口投予之醫藥組合物，其包含醫藥學 71 200906842 上可接又之稀釋劑或賦形劑及下式之化合物： 〇 α+·Ό'Ρ-ΝΗ0Η20Η2Χ nhch2ch2y 其中A+表示選自質子化（共軛酸）或四級形式之脂族 =及方族胺的銨物種，該等脂族胺及芳族胺包括鹼性胺基 夂雜缞胺、經取代及未經取代之吡啶、胍及胨；且x及 γ獨立地表示脫離基。 其中該 38. —種凍乾粉劑，其包含IPM或其類似物 /東乾粉劑在室溫下可穩定至少1個月。 39. 如申請專利範圍第38項之;東乾粉劑，其中該來乾 心劑在室溫下可穩定至少2個月。 40·如申請專利範圍第38項之凍乾 志 乾粉劑，其中該IPM 4其類似物具有式（I )結構： Ο a+-o-p-nhch2ch2x nhch2ch2y 其中A+為羥基化脂族銨抗衡離子· ，且 X及Y獨立地表示脫離基。 2~經基-第三丁胺、N，N-二甲基-N-(2- 仏如申請專利範圍第40項之來乾粉劑，其中A +表示 '自單-(2-經乙基）胺、雙-(2_經乙基）胺或參_(2_經乙基）胺、 趣乙基）胺及參（經甲 72 200906842 基）胺基甲烧（Tris)之質子化胺。 42.如申請專利範圍第4i項之來 衡離子為Tris之共軛酸。 l卷劑，其中該銨抗 43_如申請專利範圍第40項之凍 獨立地為鹵素。 匕卷劑，其中X及Y 44.如申請專利範圍第43項之凍 相同。 死為劑，其中X與Y f \ 4 5 ·如申s青專利範圍第4 4項之潘私 皆為C1。 ，東乾粉劑，其中XH 46. 如申請專利範圍第4〇項 粉劑進-步包含甘露糖醇。 錢粉劑，其中該束乾 47. 如申請專利範圍第4〇項之 下】個月後以肌C使用蒸發光散射^粉劑，其中在室溫 其類似物之純度至少為初始純度之^^所測㈣刪或 48. —種提高化學治療劑之功 ^ . 、方法，其包含結合投 卞忒化學治療劑與如申請專利範 乐1項之化合物。 49. 如申請專利範圍第48項 劑為微管結合劑。 …其中該化學治療 其中該化學治療 50_如申請專利範圍第49項之方、去 則為多西他賽（docetaxel)。 其中該化學治療 其中該化學治療 51.如申請專利範圍第48項之方法 劑為DNA及/或RNA轉錄抑制劑。 52·如申請專利範圍第51項之方法 劑為阿黴素（doxorubicin )。 73 200906842 5 3 . —種如申請專利範圍第1項之化合物的用途，其用 於製造用以與化學治療劑聯合投予之藥劑。 十一、圖式： 如次頁 74