ES2565069T3 - Sales de mostaza de isofosforamida y análogos de las mismas - Google Patents
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Abstract
Un liofilizado que comprende un análogo de IPM que tiene una estructura de fórmula (I)**Fórmula** y de 1% a 10% (p/v) de manitol, en la que A+ es un contraión de amonio alifático hidroxilado; y X e Y representan independientemente grupos salientes seleccionados entre halógenos.
Description
DESCRIPCION
Sales de mostaza de isofosforamida y analogos de las mismas 5 Antecedentes de la invencion
Las autopsias de soldados muertos por gas mostaza en la Primera Guerra Mundial indicaban que la mostaza de azufre tiene un efecto desproporcionado en las celulas que se dividen rapidamente y sugiere que los compuestos de mostaza de azufre pueden tener efectos antitumorales. De hecho, los primeros investigadores intentaron tratar el 10 cancer mediante inyeccion directa de mostaza de azufre en los tumores. Esta investigacion estaba limitada por la extrema toxicidad de los compuestos de mostaza de azufre y se investigaron algunos analogos de mostaza de nitrogeno, tales como mecloretamina, como alternativas menos toxicas.
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mostaza de azufre mecloretamina
Debido a la falta de selectividad de la mayona de los analogos de mecloretamina, se han investigado algunos profarmacos, tales como compuestos de fosforamida, que se pueden activar por la alta concentracion de fosforamidasas presentes en celulas neoplasicas. Se ha demostrado que dos agentes de alquilacion de fosforamida, ciclofosfamida (CPA) y el compuesto isomerico Ifosfamida (Ifos), son particularmente eficaces.
c
A
-o N(CH2CH2CI)2 Ciclofosfamida (CPA)
t
,CH2CHjCI
N ,p
o nhch2ch2ci
Ifosfamida (Ifos)
Con referencia a la Figura 1, la mostaza de isofosforamida (IPM) es un metabolito comun de CPA e Ifos. Se cree que la IPM es responsable de al menos una parte de la actividad antitumoral presentada por CPA e Ifos. Los documentos 25 de EE.UU. 2006/0089333 y WO 00/71l34 describen sales de IPM y analogos de las mismas para el tratamiento del cancer. Sin embargo, los esfuerzos para usar IPM como un agente anticancer directamente han sido en gran medida insatisfactorios debido en parte a la inestabilidad del compuesto. La IPM se ha sintetizado y se han realizado evaluaciones biologicas preliminares del compuesto, pero desafortunadamente la IPM es demasiado inestable para su aislamiento y para su uso para tratamiento en seres humanos.
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Sumario de la invencion
La invencion se refiere a liofilizados que comprenden un analogo de IPM que tiene una estructura de formula (I)
o
A** -0-P-NHCH2CH2X nhch2ch2y
(I)
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y de 1% a 10% (p/v) de manitol,
en la que A+ es un contraion de amonio alifatico hidroxilado; y X e Y representan independientemente grupos salientes, seleccionados entre halogenos.
En ciertas realizaciones, la invencion se refiere a composiciones farmaceuticas, que comprenden un liofilizado del
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compuesto de formula (I) segun la invencion y un diluyente o vetnculo farmaceuticamente aceptable. Tambien se describen algunos metodos para preparar tales compuestos y composiciones.
En el presente documento tambien se desvelan un liofilizado y un metodo para producir un liofilizado que comprende una mostaza de isofosforamida (IPM) y/o un analogo de IPM, uno o mas equivalentes de una base, y un excipiente. En ciertas realizaciones, el metodo comprende poner en contacto una sal cristalina de IPM o un analogo de la misma y una amina alifatica, tal como tris(hidroximetil)aminometano (Tris), o una mezcla de IPM o un analogo del mismo y una o mas aminas alifaticas (preferentemente en una proporcion de aproximadamente 1:1 de IPM o analogo de la misma con respecto a la amina o aminas) con agua y liofilizar la mezcla resultante. En ciertas realizaciones, la mezcla y el liofilizado resultante comprenden un excipiente, tal como manitol, lactosa anhidra, sacarosa, D(+)- trehalosa, dextrano 40 o povidona (PVP K24), preferentemente manitol.
Tales formulaciones incluyen liofilizados, que comprenden preferentemente un excipiente, tal como manitol, lactosa anhidra, sacarosa, D(+)-trehalosa, dextrano 40 o povidona (PVP K24), preferentemente manitol, y un compuesto de formula
P
A+ • O- P - NHCH2CH2X
nhch2ch2y
en la que A+ representa una especie de amonio seleccionada entre las formas protonadas (acido conjugado) o formas cuaternarias de aminas alifaticas y aminas aromaticas, que incluyen aminoacidos basicos, aminas heterodclicas, piridinas, guanidinas y amidinas sustituidas y sin sustituir; y X e Y representan independientemente grupos salientes.
En el presente documento tambien se desvelan composiciones farmaceuticas adaptadas para administracion oral, que comprenden un diluyente o excipiente farmaceuticamente aceptable y un compuesto tal como se desvela en el presente documento.
Tambien se describen en la presente memoria metodos para el tratamiento de trastornos hiperproliferativos, p. ej. con los compuestos o formulaciones que se discuten en la presente memoria. Se describe el tratamiento de un trastorno hiperproliferativo seleccionado entre leucemias, incluyendo leucemias agudas (tales como leucemia linfocftica aguda, leucemia mielodtica aguda, leucemia mielogena aguda y leucemia mieloblastica, promielodtica, mielomonodtica, monoctica y eritrodtica), leucemias cronicas (tales como leucemia mielocftica cronica (granulodtica), leucemia mielogena cronica, y leucemia linfodtica cronica), policitemia vera, linfoma, enfermedad de Hodgkin, linfoma no Hodgkin (indolente y formas de alto grado), mieloma multiple, macroglobulinemia de Waldenstrom, enfermedad de cadena pesada, smdrome mielodisplasico, leucemia de celulas pilosas y mielodisplasia.
Algunos ejemplos adicionales de afecciones que se pueden tratar usando los compuestos y composiciones que se desvelan incluyen tumores solidos, tales como sarcomas y carcinomas, que incluyen, pero no se limitan a, fibrosarcoma, mixosarcoma, liposarcoma, condrosarcoma, sarcoma osteogenico, sarcomas resistentes a ciclofosfamida, y otros sarcomas, sinovioma, mesotelioma, tumor de Ewing, leiomiosarcoma, rabdomiosarcoma, carcinoma de colon, neoplasia linfoide, cancer pancreatico, cancer de mama, canceres de pulmon, cancer de ovario, cancer de prostata, carcinoma hepatocelular, carcinoma de celulas escamosas, carcinoma de celulas basales, adenocarcinoma, carcinoma de glandulas sudonparas, carcinoma de glandulas sebaceas, carcinoma papilar, adenocarcinomas papilares, carcinoma medular, carcinoma broncogenico, carcinoma de celulas renales, hepatoma, carcinoma de conductos biliares, coriocarcinoma, tumor de Wilms, cancer del cuello uterino, tumor testicular, carcinoma de vejiga, y tumores del SNC (tales como glioma, astrocitoma, meduloblastoma, craneofaringioma, ependimoma, pinealoma, hemangioblastoma, neuroma del nervio acustico, oligodendroglioma, menangioma, melanoma, neuroblastoma y retinoblastoma).
Breve descripcion de las figuras
La Figura 1 es un esquema que ilustra el metabolismo de la ifosfamida incluyendo la produccion de acrolema y
mostaza de isofosforamida.
La Figura 2 muestra la difraccion de rayos X con el metodo de polvo de IPM^Tris.
La Figura 3 muestra la calorimetna de barrido diferencial (DSC) de IPM Tris.
La Figura 4 muestra el analisis termogravimetrico (TGA) de IPM^Tris.
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La Figura 5 muestra imagenes de barrido con microscopio electronico (SEM) de IPM^Tris cristalina.
La Figura 6 muestra una comparacion de IPM(LYS)2 con IPMTris en xenoinjertos de cancer de mama MX-1 humano.
La Figura 7 muestra una comparacion de la actividad antitumoral de IP y la administracion oral de IPM Tris en xenoinjertos de cancer de mama MX-1 humano.
La Figura 8a muestra la viabilidad de celulas de rabdomiosarcoma RD y RH30 cuando se tratan con IPM(LYS)2 a diversas concentraciones.
La Figura 8b muestra la viabilidad de celulas de sarcoma de Ewing SKES1 y SKPNDW cuando se tratan con IPM^(LYS)2 a diversas concentraciones.
La Figura 8c muestra la viabilidad de celulas de osteosarcoma OS230, OS229, OS222, y SaOS cuando se tratan con IPM^(LYS)2 a diversas concentraciones.
La Figura 8d muestra la viabilidad de celulas de sarcoma sinovial SYO1 y HSSYII cuando se tratan con IPM (LYS)2 a diversas concentraciones.
La Figura 9a muestra la viabilidad de celulas de rabdomiosarcoma RH30 cuando se tratan con IPM(LYS)2 a diversas concentraciones ya sea una vez al dfa o tres veces al dfa.
La Figura 9b muestra la viabilidad de celulas de osteosarcoma OS229 cuando se tratan con IPM^(LYS)2 a diversas concentraciones ya sea una vez al dfa o tres veces al dfa.
La Figura 10 muestra que la administracion a la dosis maxima tolerada (MTD) en la lmea de celulas de osteosarcoma OS31 resistentes a ciclofosfamida implantadas en ratones scid*/* hembra CB17 para cada una de las tres programaciones de dosis (control, 175 mg/kg diariamente x1, o 100 mg/kg diariamente x3), IPM(LYS)2 da como resultado un retraso significativo del crecimiento del tumor.
La Figura 11 a muestra resistencia a ciclofosfamida en celulas de osteosarcoma OS31 implantadas en ratones scid*/* hembra CB17 en terminos de volumen tumoral relativo, en el que el tratamiento comprende la administracion de ciclofosfamida en comparacion con el control.
La Figura 11b muestra resistencia a ciclofosfamida en celulas de osteosarcoma OS33 implantadas en ratones scid*/* hembra CB17 en terminos de volumen tumoral relativo, en el que el tratamiento comprende la administracion de IPM^(LYS)2 en comparacion con el control.
La Figura 12 muestra la actividad de IPM^(LYS)2 en terminos de volumen tumoral relativo en el tratamiento de celulas de osteosarcoma OS31 resistentes a ciclofosfosfamida implantadas en ratones scid*/* hembra CB17 (100 mg/kg diariamente x 3 en comparacion con el control).
La Figura 13 muestra la respuesta de tumores de mama SC MX-1 a IP y tratamiento oral con solucion salina con una dosis de q1d x 5.
La Figura 14 muestra la respuesta de tumores de mama SC MX-1 al tratamiento con IP con IPM^Tris, IPM e IPM^(LYS)2 con una dosis de q1d x 5.
La Figura 15 muestra la respuesta de tumores de mama SC MX-1 al tratamiento oral con IPM^Tris, IPM e IPM^(LYS)2 con una dosis de q1d x 5.
La Figura 16 muestra la respuesta de tumores de mama SC MX-1 al tratamiento con IP y oral con solucion salina con una dosis de qld x 5.
La Figura 17 muestra la respuesta de tumores de mama SC MX-1 al tratamiento con IP con IPM^Tris, IPM e IPM (LYS)2 con una dosis de qld x 5.
La Figura 18 muestra la respuesta de tumores de mama SC MX-1 al tratamiento oral con IPM Tris, IPM e IPM^(LYS)2con una dosis de qld x 5.
La Figura 19 muestra el efecto de tumores de cancer de mama MX-1 del tratamiento con IPM Tris en combinacion con doxorrubicina con una dosis de 12 mg/kg/dfa de IPM^Tris Q1Dx5 y 8 mg/kg de doxorrubicina Q4Dx3.
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La Figura 20 muestra el efecto en la supervivencia de IPMTris en combinacion con doxorrubicina con una dosis de 12 mg/kgMa de IPMTris Q1Dx5 y 8 mg/kg de doxorrubicina Q4Dx3.
La Figura 21 muestra el efecto en tumores de cancer de mama MX-1 del tratamiento con IPM^Tris en combinacion con doxorrubicina con una dosis de 24 mg/kgMa de IPM^Tris Q1Dx5 y 8 mg/kg de doxorrubicina Q4Dx3.
La Figura 22 muestra el efecto en la supervivencia de IPM Tris en combinacion con doxorrubicina con una dosis de 24 mg/kgMa de IPMTris Q1Dx5 y 8 mg/kg de doxorrubicina Q4Dx3.
La Figura 23 muestra el efecto en tumores de cancer de mama MX-1 del tratamiento con IPM Tris en combinacion con doxorrubicina con una dosis de 54 mg/kgMa de IPM^Tris Q1Dx5 y 8 mg/kg de doxorrubicina Q4Dx3.
La Figura 24 muestra el efecto en la supervivencia de IPM^Tris en combinacion con doxorrubicina con una dosis de 54 mg/kgMa de IPM Tris Q1Dx5 y 8 mg/kg de doxorrubicina Q4Dx3.
La Figura 25 muestra la toxicidad del regimen de combinacion de IPM^Tris/doxorrubicina.
La Figura 26 muestra el efecto en tumores de cancer de mama MX-1 del tratamiento con IPM Tris en combinacion con docetaxel con una dosis de 54 mg/kg de IPM Tris Q1Dx5 IP y 10 mg/kg de docetaxel Q6Dx3 IV.
La Figura 27 muestra el efecto en tumores de cancer de mama MX-1 del tratamiento con IPM^Tris administrado ya sea a una dosis de 36 mg/kg de IP o a una dosis de 81 mg/kg de PO.
La Figura 28 muestra el efecto en la supervivencia de IPM Tris administrada ya sea a una dosis de 36 mg/kg de IP o a una dosis de 81 mg/kg de PO.
La Figura 29 muestra la farmacocinetica de IPM^Tris administrada por via oral e IV en ratas Sprague-Dawley hembra.
La Figura 30 muestra el AUC con aumento de dosis de IPM^Tris administrada PO o por IV.
La Figura 31 muestra la Cmax con aumento de dosis de IPM^Tris administrada PO o por IV.
La Figura 32 muestra la estabilidad de la solucion de IPM en tampon a pH 7,0 a 25°C.
Descripcion detallada de la invencion I. Sales de IPM y Analogos de las mismas
Las composiciones que se desvelan en el presente documento incluyen sales cristalinas de IPM o analogos de las mismas. En ciertas realizaciones descritas en la presente memoria, las sales desveladas incluyen uno o mas cationes. En ciertas realizaciones descritas en la presente memoria, los cationes pueden ser un acido conjugado de una base de amina o pueden ser un cation de amonio cuaternario.
En ciertas realizaciones descritas en la presente memoria, los compuestos cristalinos desvelados comprenden sales de IPM o un analogo de las mismas. Tales compuestos incluyen compuestos cristalinos de formula (I)
o
II
A+. *0-P-NHCH2CH2X
nhch2ch2y
(1)
en la que A+ representa una especie de amonio seleccionada entre las formas protonadas (acido conjugado) o cuaternarias de aminas alifaticas hidroxiladas; y X e Y representan independientemente grupos salientes. En ciertas realizaciones X e Y son independientemente entre sf, halogeno. Preferiblemente, X e Y son iguales. En algunas de tales realizaciones, X e Y son ambos Cl.
Algunos ejemplos en particular de acidos conjugados adecuados de bases de amina incluyen, pero no se limitan a, el acido conjugado de mono-, bis- o tris-(2-hidroxietil)amina, 2-hidroxi-terc-butilamina, N,N-dimetil-N-(2- hidroxietil)amina, y tris(hidroximetil)aminometano (Tris). En algunas de tales realizaciones, A+ es el acido conjugado
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de Tris.
En la presente memoria se describen compuestos que comprenden una sal cristalina de IPM o analogo de la misma en la que la IPM o analogo de la misma, y el contraion, preferentemente Tris, estan presentes en una proporcion de 2:1 a 1:2, preferiblemente 1:1. En ciertas realizaciones descritas en la presente memoria, la composicion cristalina comprende mas de una forma polimorfica de cristales, tal como dos, tres, cuatro, o incluso cinco formas polimorficas de cristales. En algunas de tales realizaciones alternativas descritas en la presente memoria, la composicion cristalina comprende una sola forma polimorfica de cristales. En ciertas realizaciones descritas en la presente memoria, tales sales son mas estables que IPM y los analogos de IPM en forma de acidos libres.
En algunas de tales realizaciones descritas en la presente memoria, el compuesto es una sal cristalina de una proporcion 1:1 de IPM y Tris. En algunas de tales realizaciones descritas en la presente memoria, el punto de fusion del solido cristalino esta entre aproximadamente 100 y aproximadamente 110°C, aproximadamente 102 y aproximadamente 108°C, aproximadamente 103 y aproximadamente 106°C, o incluso de 105°C a 106°C.
En ciertas realizaciones descritas en la presente memoria, el compuesto, por ejemplo, una sal cristalina de una proporcion 1:1 de IPM y Tris, es puro en al menos aproximadamente un 80%, puro en al menos aproximadamente un 85%, puro en al menos un 90%, puro en al menos un 95%, puro en al menos un 97%, puro en al menos un 98%, o incluso puro en al menos un 99%. En algunas de tales realizaciones, ninguna impureza individual supera un 1% en peso. En ciertas realizaciones, la pureza se mide con respecto a los demas componentes de la composicion, aunque en otras realizaciones descritas en la presente memoria (por ejemplo, en las que el compuesto forma parte de una composicion farmaceutica o mezcla liofilizada), la pureza se puede medir con respecto a los productos de degradacion del compuesto (por ejemplo, productos de degradacion del compuesto que contienen fosforo) o productos secundarios de la preparacion del compuesto (por ejemplo, productos de degradacion del compuesto que contienen fosforo), excluyendo de este modo otros componentes que se anaden de forma intencionada a la composicion.
En ciertas realizaciones, los compuestos son sales de IPM o analogos de las mismas, en los que la sal tiene una semivida a temperatura ambiente (por ejemplo, a aproximadamente 23°C) en presencia de agua que es mayor que la semivida de IPM (es decir, en forma el acido libre) en presencia de agua en las mismas condiciones. En algunas de tales realizaciones, una sal de IPM tiene una semivida en presencia de agua que es igual a o superior a dos veces siempre y cuando la IPM por sf misma en presencia de agua, mas preferentemente, igual a o superior a cinco veces.
En ciertas realizaciones, los compuestos son sales de IPM y analogos de las mismas, en los que la sales son estables a temperatura ambiente en presencia de agua durante al menos un dfa, dos dfas, tres dfas, cuatro dfas, cinco dfas, seis dfas, o incluso una semana.
Como se usa en el presente documento, el termino "estable" se refiere a que la pureza de la sal de IPM o analogo de misma despues de un periodo de tiempo (por ejemplo, un mes, dos meses, tres meses, seis meses, un ano, etc.) es al menos un 90%, al menos un 95%, al menos un 97%, o incluso al menos un 99% de la pureza inicial, que se puede determinar, por ejemplo, mediante HPLC usando deteccion por dispersion de luz evaporativa (ELSD). Tal ensayo se puede realizar, por ejemplo, usando una columna C18 y un sistema isocratico con una fase movil que comprende acido heptafluorobutrnco 0,005 M y acido trifluoroacetico al 0,1% en agua.
La invencion se refiere a liofilizados que comprenden un compuesto de formula
°
a+* *o-p-nhch2ch2x
NHCH2CH2Y
y de 1% a 10% (p/v) de manitol,
en la que A+ es un contraion de amonio alifatico hidroxilado; y X e Y representan independientemente grupos salientes, seleccionados entre halogenos.
Algunos ejemplos en particular de bases de amina adecuadas (y sus iones amonio correspondientes) para usar en los presentes compuestos incluyen, pero no se limitan a, piridina, N,N-dimetilaminopiridina, diazabiciclononano, diazabicicloundeceno, N-metil-N-etilamina, dietilamina, trietilamina, diisopropiletilamina, mono-, bis- o tris- (2- hidroxietil)amina, 2-hidroxi-terc-butilamina, tris(hidroximetil)aminometano, N,N-dimetil-N-(2-hidroxietil)amina, tri-(2- hidroxietil)amina y N-metil-D-glucamina.
En el presente documento tambien se describen liofilizados que comprenden un compuesto de formula
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o
£b] * ho-p-nhch2ch2x n nhch2ch2y
Con referencia a la formula, B puede ser, para cada n, una molecula basica seleccionada de forma independiente. En una realizacion de la formula, B se puede seleccionar entre los aminoacidos basicos, aminas alifaticas adclicas, di- y tri- alquil aminas, aminas alifaticas heterodclicas, aminas aromaticas, piridinas sustituidas y sin sustituir, guanidinas dclicas y adclicas, y amidinas dclicas y adclicas. Por lo general, n es de 1 a aproximadamente 3 de modo que la formula puede incluir diferentes moleculas basicas. Haciendo referencia continua a la formula, X e Y son grupos salientes. Una persona con una experiencia habitual en la materia entendera que la estructura de mostaza de isofosforamida ilustrada incluye un proton acido, y como tal existe predominantemente como su base conjugada al pH fisiologico y en presencia de una base tal como B. De forma analoga, B, siendo un grupo basico, existe predominantemente como su acido conjugado al pH fisiologico y en presencia de mostaza de isofosforamida y analogos de mostaza de isofosforamida. Realizaciones ejemplares de los compuestos desvelados se representan en la Tabla 1.
Tabla 1
- p [jj] . HO-P“NHCH2CH2X n NHCH2CH2Y
- B
- n X Y
- lisina
- 2 Cl Cl
- NH3
- 2 Cl Cl
- ciclohexilamina
- 2 Cl Cl
- W-metil-D-glucamina
- 2 Cl Cl
- W,W-dimetilaminopiridina
- 1 Cl Cl
- arginina
- 2 Cl Cl
- lisina
- 2 Cl -SO2CH3
- lisina
- 2 Br -SO2CH3
- tris(hidroximetil)aminometano
- 1 Cl Cl
II. Composiciones y Metodos
En ciertas realizaciones, la invencion se refiere a una composicion farmaceutica que comprende una sal de IPM o analogo de la misma y un diluyente o excipiente farmaceutico. En algunas de tales realizaciones, la composicion farmaceutica es una solucion, preferentemente una solucion salina que comprende IPM o un analogo de IPM. En algunas de tales realizaciones, la concentracion de la sal de IPM o sal del analogo de IPM en solucion es de aproximadamente 3 mg/ml a aproximadamente 30 mg/ml o incluso superior. Tales soluciones salinas se pueden preparar, por ejemplo, por disolucion de un compuesto cristalino de formula (I) o un liofilizado de IPM o un analogo de IPM tal como se desvela en el presente documento en una solucion salina, por ejemplo, a la vez que se agita a temperatura ambiente. En algunas de tales realizaciones, la solucion salina se prepara de modo que la concentracion del cloruro sodico sea de aproximadamente 0,5%, 0,9%, 2,5%, 2,7%, 3,0%, 4,0%, o incluso 5,0%.
En ciertas realizaciones descritas en la presente memoria, una solucion acuosa se puede preparar a partir de un compuesto cristalino de formula I o un liofilizado de IPM o un analogo de IPM tal como se desvela en el presente documento. Tal solucion acuosa (por ejemplo, en agua o en una solucion salina isotonica) es estable a temperatura ambiente durante al menos aproximadamente 60 minutos, 80 minutos, 100 minutos, 120 minutos, 140 minutos, o incluso aproximadamente 160 minutos a temperatura ambiente.
En ciertas realizaciones descritas en la presente memoria, un compuesto cristalino de formula (I), tal como una sal de IPM y Tris, tiene una solubilidad en agua de al menos aproximadamente 30 mg/ml, 40 mg/ml, 50 mg/ml, 60
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mg/ml, 70 mg/ml, o incluso de 80 mg/ml. En ciertas realizaciones descritas en la presente memoria, un compuesto cristalino de formula (I), tal como una sal de IPM y Tris, tiene una solubilidad en agua de al menos aproximadamente 200 mg/ml, al menos aproximadamente 500 mg/ml, al menos aproximadamente 800 mg/ml, al menos aproximadamente 1000 mg/ml, al menos aproximadamente 1200 mg/ml, o incluso al menos 1400 mg/ml. En ciertas realizaciones descritas en la presente memoria, el pH de una solucion del compuesto cristalino en agua esta entre aproximadamente 4,5 y aproximadamente 10, tal como entre aproximadamente 5,0 y 8,5, preferentemente entre aproximadamente 5,0 y aproximadamente 7,0. En ciertas realizaciones descritas en la presente memoria, el pH de tal solucion es aproximadamente 5,0.
En la presente memoria tambien se describe un kit, que comprende un compuesto cristalino de formula I y una solucion salina.
Los liofilizados que se desvelan en el presente documento incluyen IPM y analogos de IPM que se formulan con uno o mas equivalentes de una base. Dado que IPM y sus analogos son inestables en acidos y son acidos, los liofilizados que ahora se desvelan ofrecen una mayor estabilidad asf como otras ventajas. Las ventajas de las formulaciones desveladas en terminos de smtesis, estabilidad y biodisponibilidad seran evidentes para los expertos habituales en la materia despues de la consideracion de la presente divulgacion. Algunas ventajas adicionales de la IPM y los analogos de IPM que se formulan con uno o mas equivalentes de una base pueden incluir aumento de la solubilidad en agua o fluidos corporales.
En ciertas realizaciones, los liofilizados que se desvelan son sales de mostaza de isofosforamida o analogos de mostaza de isofosforamida que incluyen uno o mas cationes. En ciertas realizaciones, los cationes pueden ser un acido conjugado de una base de amina o puede ser un cation de amonio cuaternario. Algunos contraiones adecuados para la mostaza de isofosforamida y sus analogos incluyen los acidos conjugados (tal como se usa en el presente documento, se entendera que los terminos que se refieren a aminas incluyen sus acidos conjugados a menos que el contexto indique claramente que se pretende la amina libre) de bases que incluyen aminoacidos basicos, aminas alifaticas, aminas heterodclicas, aminas aromaticas, piridinas, guanidinas y amidinas. De las aminas alifaticas, las aminas alifaticas adclicas, y las di- and tri-alquil aminas dclicas y adclicas son particularmente adecuadas para usar en los compuestos que se desvelan. Ademas, los contraiones de amonio cuaternario son ejemplos de contraiones adecuados que se pueden usar. En ciertas realizaciones, tal liofilizado puede comprender adicionalmente un excipiente. Algunos excipientes adecuados incluyen, pero no se limitan a, manitol, lactosa anhidra, sacarosa, D(+)-trehalosa, dextrano 40 y povidona (PVP K24).
En ciertas realizaciones, los compuestos y composiciones, tales como los liofilizados que se desvelan en el presente documento, son estables a temperatura ambiente durante al menos dos semanas, al menos tres semanas, al menos un mes, al menos dos meses, al menos tres meses, o incluso al menos seis meses. En ciertas realizaciones, las sales son estables a temperaturas inferiores (por ejemplo, 0°C, 2°C, 4°C, 6°C, etc.) durante al menos dos semanas, al menos tres semanas, al menos un mes, al menos dos meses, al menos tres meses, o incluso al menos seis meses. En algunas de tales realizaciones, los compuestos y composiciones, tales como los liofilizados, son estables durante al menos un mes, al menos dos meses, al menos cuatro meses, o incluso al menos seis meses a una temperatura inferior(por ejemplo, entre aproximadamente 0°C y aproximadamente 20°C, entre aproximadamente 0°C y aproximadamente 10°C, o incluso entre aproximadamente 2°C y aproximadamente 8°C). En ciertas realizaciones, el liofilizado comprende una sal de IPM o un analogo de la misma. En ciertas realizaciones, el liofilizado comprende IPMTris o IPM(LYS)2, preferentemente IPMTris, y en realizaciones particularmente preferentes, tales composiciones comprenden adicionalmente un agente para el aumento del volumen, tal como manitol.
En una realizacion mas, las sales que se han descrito anteriormente pueden incluir un segundo grupo amina o amonio. En una realizacion, los liofilizados que se desvelan en el presente documento incluyen mas de un equivalente de una amina para cada equivalente de mostaza de isofosforamida o analogo de mostaza de isofosforamida. Tales realizaciones incluyen las que tienen proporciones no enteras de amina con respecto a mostaza de isofosforamida o analogos de mostaza de isofosforamida. En ciertas realizaciones, los liofilizados tienen una proporcion de dos a uno o de tres a uno de amina con respecto a mostaza de isofosforamida o un analogo de mostaza de isofosforamida. En realizaciones de trabajo, se produjeron sales que conteman dos equivalentes de base de amina por equivalente de mostaza de isofosforamida. En ciertas realizaciones, una base de amina usada para formar mostaza de isofosforamida y sales de analogo de mostaza de isofosforamida incluye mas de un grupo amino; tales bases se pueden denominar "multibasicas". Mas espedficamente, ciertos ejemplos de bases multibasicas que se pueden usar tienen dos grupos amino; tales compuestos se pueden denominar "dibasicos". Por ejemplo, una molecula dibasica adecuada es la W,W-dimetilaminopiridina, que incluye dos grupos amino basicos. Ciertas realizaciones de un liofilizado que se desvelan en el presente documento incluyen mostaza de isofosforamida o un analogo de mostaza de isofosforamida y un equivalente de una amina dibasica.
Cierta mostaza de isofosforamida y liofilizados de analogo de mostaza de isofosforamida que se desvelan en el presente documento incluyen dos grupos salientes. Sin limitarse a la teona, se cree que los dos grupos salientes se desplazan in vivo con nucleofilos biomoleculares, tales como acidos nucleicos y protemas, reticulando de este modo las biomoleculas. La expresion "grupo saliente" se refiere a un grupo que se puede desplazar con un nucleofilo. Con referencia a los compuestos que ahora se desvelan, grupo saliente se refiere a un grupo que se puede desplazar
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para formar un compuesto intermedio de aziridinio, o se puede desplazar directamente con un nucleofilo biomolecular, tal como un nucleofilo de acido nucleico, para formar, por ejemplo, una especie de guanidinio 7- alquilada. Algunos ejemplos de grupos salientes adecuados incluyen los halogenos y los sulfonatos (-SO2R). En una realizacion de las sales de analogo de isofosforamida que se desvelan, el compuesto es un compuesto "mixto" de grupo saliente, que incluye dos tipos diferentes de grupos salientes, por ejemplo un halogeno y un sulfonato o dos halogenos diferentes, tales como un bromuro y un cloruro. El documento de Patente de Estados Unidos N° 6.197.760 de Struck ensena metodos para preparar tales compuestos mixtos de grupo saliente.
En ciertas realizaciones, los liofilizados de sales que se desvelan aumentan la estabilidad de la reconstitucion en comparacion con una preparacion de mostaza de isofosforamida liofilizada por sf misma. En algunas de tales realizaciones, un liofilizado preparado a partir de las sales de IPM o un analogo de las mismas que se desvelan y un excipiente, tal como de IPM o un analogo de la misma y Tris, que incluye opcionalmente un excipiente, por ejemplo, un agente para el aumento del volumen, tal como manitol, que se ha reconstituido en una solucion salina (preferentemente cloruro sodico al 5%) mantiene > 90% de la potencia durante al menos aproximadamente 30 minutos, 60 minutos, 90 minutos, 120 minutos, 140 minutos, o incluso al menos aproximadamente 160 minutos.
En algunas de tales realizaciones, la disolucion de una sal de IPM o un analogo de la misma, tal como IPMTris, o un liofilizado preparado a partir de una sal de IPM o un analogo de la misma, tal como IPM Tris, y un excipiente opcional, por ejemplo, un agente para el aumento del volumen, tal como manitol, en una solucion salina mantiene una pureza de al menos un 96%, al menos un 97%, al menos un 98%, o incluso al menos un 99% durante al menos aproximadamente 30 minutos, 60 minutos, 90 minutos, 3 horas, o incluso 4,5 horas o mas a temperatura ambiente. En ciertas realizaciones, tales soluciones reconstituidas son mas estables que las soluciones de IPM^(LYS)2 reconstituidas en condiciones identicas. En algunas de tales realizaciones, el IPM(LYS)2 que se ha reconstituido se degrada al menos 1,25 veces mas rapido, al menos 1,5 veces mas rapido, al menos dos veces mas rapido, o incluso al menos tres o cuatro veces mas rapido que la sal de IPM o analogo de la misma.
En ciertas realizaciones en las que el liofilizado comprende una sal de IPM o un analogo de la misma y un excipiente, tal como un liofilizado que comprende IPM o analogo de la misma, Tris, and manitol, la mezcla tiene una solubilidad en agua de al menos aproximadamente 30 mg/ml, 40 mg/ml, 50 mg/ml, 60 mg/ml, 70 mg/ml, o incluso 80 mg/ml.
En ciertas realizaciones, los liofilizados de las sales desveladas de IPM o analogo de la misma son mas estables que una preparacion liofilizada de mostaza de isofosforamida por sf misma, es decir, en forma del acido libre. En algunas de tales realizaciones preferidas, el liofilizado de las sales desveladas tiene una vida en almacenamiento mas larga que una preparacion liofilizada de mostaza de isofosforamida por sf misma, preferentemente al menos dos veces mas larga, mas preferentemente al menos cinco veces mas larga. En ciertas realizaciones, el liofilizado se forma a partir de la sal Tris de IPM, que puede ser cristalina o no antes de su disolucion.
Como se ha descrito anteriormente, en ciertas realizaciones, tales liofilizados comprenden adicionalmente un excipiente, por ejemplo, un agente para el aumento del volumen, preferentemente manitol. En ciertas realizaciones, el liofilizado comprende un agente para el aumento del volumen seleccionado entre manitol, lactosa anhidra, sacarosa, D(+)-trehalosa, dextrano 40 y povidona (PVP K24), preferentemente manitol. En ciertas realizaciones, la adicion de tal agente para el aumento del volumen puede aumentar la estabilidad del liofilizado con respecto a la formulacion liofilizada en ausencia del agente para el aumento del volumen. En algunas de tales realizaciones, tal liofilizado es estable a aproximadamente -70°C, aproximadamente -20°C, o incluso 5°C, por ejemplo, durante un periodo de un mes, dos meses, tres meses, seis meses, nueve meses, un ano, o incluso dos anos o mas.
En algunas de tales realizaciones en las que el liofilizado comprende un agente para el aumento del volumen, tal como manitol, el liofilizado comprende de 1% a 10%, o de 1% a 5% (p/v) de agente para el aumento del volumen, por ejemplo, manitol. Antes de la liofilizacion o despues de la reconstitucion, tales composiciones pueden comprender de aproximadamente 15 mg/ml a aproximadamente 25 mg/ml de IPM, y/o una amina tal como Tris en una concentracion de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 1,5 M, preferentemente en una cantidad aproximadamente equimolar con respecto a la IPM. En ciertas realizaciones, cuando se prepara la solucion antes de la liofilizacion, en lugar de anadir IPM y amina, tal como Tris, como componentes separados, se anaden en conjunto en forma de una sal cristalina de IPM Tris tal como se desvela en el presente documento.
En ciertas realizaciones, la invencion se refiere a un kit, que comprende un liofilizado tal como se desvela en el presente documento y una solucion salina.
Los compuestos que se desvelan en el presente documento se pueden administrar por via oral, por via topica, por via transdermica, por via parenteral, mediante inhalacion o pulverizacion y se pueden administrar en formulaciones de dosificacion unitaria que contienen medios de soporte, adyuvantes y vehnculos farmaceuticamente aceptables no toxicos convencionales.
En ciertas realizaciones, es preferente la administracion parenteral de las sales de IPM y analogos de las mismas que se desvelan mediante inyeccion. En ciertas realizaciones, es preferente la administracion oral de las sales de
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IPM y analogos de las mismas que se desvelan. En ciertas realizaciones, las sales de IPM y analogos de las mismas administrados por via oral (PO) muestran parametros farmacocineticos (PK) similares a los observados con la administracion intravenosa (IV). Los agentes se pueden administrar en una sola dosificacion o de forma cronica, dependiendo de la enfermedad en particular, afeccion del paciente, toxicidad del compuesto y otros factores tal como lo reconocera una persona con una experiencia habitual en la materia.
La cantidad terapeuticamente eficaz del compuesto o compuestos administrados puede variar dependiendo de los efectos deseados y de los factores que se han indicado anteriormente.
Las composiciones farmaceuticas para administracion a un sujeto pueden incluir vehfculos, agentes espesantes, diluyentes, agentes tampon, conservantes, agentes tensioactivos y similares ademas de la molecula elegida. Las composiciones farmaceuticas tambien pueden incluir uno o mas principios activos adicionales tales como agentes antimicrobianos, agentes antiinflamatorios, anestesicos, y similares. Las formulaciones farmaceuticas pueden incluir componentes adicionales, tales como vetnculos. Los vetnculos farmaceuticamente aceptables utiles para estas combinaciones son convencionales. Remington's Pharmaceutical Sciences, de E. W. Martin, Mack Publishing Co., Easton, PA, 21a Edicion (2006), describe composiciones y formulaciones adecuadas para la administracion farmaceutica de los compuestos que se desvelan en el presente documento.
En general, la naturaleza del vehnculo dependera del modo de administracion en particular que se esta usando. Por ejemplo, las formulaciones parenterales normalmente contienen fluidos inyectables que incluyen fluidos farmaceutica y fisiologicamente aceptables tales como agua, solucion salina fisiologica, soluciones salinas equilibradas, dextrosa acuosa, glicerol o similares como vehnculo. Para las composiciones solidas (por ejemplo, formas de polvo, pfldora, comprimido, o capsula), algunos vehnculos solidos no toxicos convencionales pueden incluir, por ejemplo, calidades farmaceuticas de manitol, lactosa, almidon, o estearato de magnesio. Ademas de los vehnculos biologicamente neutros, las composiciones farmaceuticas que se van a administrar pueden contener cantidades menores de sustancias auxiliares no toxicas, tales como agentes humectantes o emulgentes, conservantes, y agentes del tamponamiento del pH y similares, por ejemplo acetato sodico o monolaurato de sorbitan.
En ciertas realizaciones, un compuesto desvelado se formula como una forma de dosificacion oral, tal como una pfldora, comprimido, o capsula. En ciertas realizaciones, la forma de dosificacion oral es una capsula.
En ciertas realizaciones, tales formas de dosificacion oral comprenden al menos un excipiente, sustancia de deslizamiento, diluyente, lubricante, y/o agente disgregante. En algunas de tales realizaciones, algunos excipientes, sustancias de deslizamiento, diluyentes, lubricantes, y/o agentes disgregantes adecuados incluyen, pero no se limitan a, talco, dioxido de silicio pirogeno, almidon, silicato calcico, carbonato de magnesio, oxido de magnesio, lauril sulfato de magnesio, lauril sulfato sodico, lactosa, celulosa microcristalina, hidroxipropilmetil celulosa, dextrosa, glucosa, sacarosa, almidon, derivados de almidon, carbonato de calcio, fosfato calcico dibasico, carbonato de magnesio, estearato de magnesio, estearato calcico, estearil fumarato sodico, polietilenglicol 4000, polietilenglicol 6000, benzoato sodico, aceite mineral ligero, aceites vegetales hidrogenados, acido estearico, behenato de glicerilo, resinas de intercambio ionico insolubles, glicolato sodico de almidon, carboximetilcelulosa sodica (croscarmelosa sodica), gomas (por ejemplo, goma de agar, guar, xantano), acido algmico, alginato sodico, y crospovidona.
En algunas de tales realizaciones, la forma de dosificacion oral comprende un compuesto tal como se desvela en el presente documento y al menos un excipiente, sustancia de deslizamiento, diluyente, lubricante, y/o agente disgregante; preferentemente al menos un excipiente, sustancia de deslizamiento, diluyente, lubricante, y/o agente disgregante que es adecuado para formulacion con un principio activo higroscopico. En algunas de tales realizaciones, la forma de dosificacion oral comprende al menos un excipiente, sustancia de deslizamiento, diluyente, lubricante, y/o agente disgregante seleccionado entre celulosa microcristalina, lactosa, carboximetilcelulosa sodica, estearato de magnesio, fosfato calcico dibasico, glicolato sodico de almidon, hidroxipropilmetil celulosa y manitol.
En ciertas realizaciones, se formula un compuesto desvelado para administracion a un sujeto humano. En un aspecto de esta realizacion, la composicion farmaceutica incluye de aproximadamente 0,1 mg/ml a aproximadamente 250 mg/ml, tal como de aproximadamente 20 a aproximadamente 100 mg/ml del compuesto de una sal de IPM o analogo del mismo.
En un aspecto, ciertas realizaciones de las composiciones farmaceuticas se formulan en formas de dosificacion unitaria. Por ejemplo tales formas de dosificacion unitaria pueden contener de aproximadamente 1 mg a aproximadamente 100 mg o de 100 mg a aproximadamente 1500 mg, tal como de aproximadamente 5 mg a aproximadamente 200 mg o de 200 mg a aproximadamente 1500 mg de una sal de IPM o analogo de la misma que se desvelan por unidad de dosificacion. En ciertas realizaciones, una unidad de dosificacion puede comprender aproximadamente 15 mg, aproximadamente 30 mg, aproximadamente 45 mg, aproximadamente 60 mg, aproximadamente 75 mg, o incluso aproximadamente 77 mg de una sal de IPM o analogo de la misma que se desvelan.
En algunas realizaciones, se contempla de forma espedfica que los presentes compuestos se administran mediante
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un deposito de farmaco inyectado y/o implantado, por ejemplo que comprende liposomas multivesiculares tal como en DepoFoam (SkyePharma, Inc, San Diego, CA) (vease, por ejemplo, Chamberlain et al. Arch. Neuro. 1993, 50, 261-264; Katri et al. J. Pharm. Sci. 1998, 87, 1341-1346; Ye et al., J. Control Release 2000, 64, 155-166; y Howell, Cancer J. 2001, 7, 219-227).
En el presente documento se desvelan metodos para tratar afecciones caracterizadas por una actividad o neoplasia proliferativa anomala o patologica mediante la administracion de uno o mas de los compuestos y composiciones desvelados a un sujeto.
Algunas de las afecciones que se pueden tratar de acuerdo con el metodo desvelado incluyen las que se caracterizan por un crecimiento y/o diferenciacion celular anomalos, tal como canceres y otras afecciones neoplasicas. Algunos ejemplos habituales de trastornos proliferativos que se pueden tratar usando los compuestos y composiciones desvelados se enumeran a continuacion.
Algunos ejemplos de tumores hematologicos que se pueden tratar usando los compuestos y composiciones que se desvelan en el presente documento incluyen leucemias, incluyendo leucemias agudas (tales como leucemia linfocftica aguda, leucemia mielodtica aguda, leucemia mielogena aguda y leucemia mieloblastica, promielocftica, mielomonocftica, monoctica y eritrodtica), leucemias cronicas (tales como leucemia mielodtica cronica (granulodtica), leucemia mielogena cronica, y leucemia linfodtica cronica), policitemia vera, linfoma, enfermedad de Hodgkin, linfoma no Hodgkin (indolente y formas de alto grado), mieloma multiple, macroglobulinemia de Waldenstrom, enfermedad de cadena pesada, smdrome mielodisplasico, leucemia de celulas pilosas y mielodisplasia,
Algunos ejemplos adicionales de afecciones que se pueden tratar usando los compuestos y composiciones desvelados incluyen tumores solidos, tales como sarcomas y carcinomas, incluyen fibrosarcoma, mixosarcoma, liposarcoma, condrosarcoma, sarcoma osteogenico, sarcomas resistentes a ciclofosfamida (CPA), y otros sarcomas, sinovioma, mesotelioma, tumor de Ewing, leiomiosarcoma, rabdomiosarcoma, carcinoma de colon, neoplasia linfoide, cancer pancreatico, cancer de mama, canceres de pulmon, cancer de ovario, cancer de prostata, carcinoma hepatocelular, carcinoma de celulas escamosas, carcinoma de celulas basales, adenocarcinoma, carcinoma de glandulas sudonparas, carcinoma de glandulas sebaceas, carcinoma papilar, adenocarcinomas papilares, carcinoma medular, carcinoma broncogenico, carcinoma de celulas renales, hepatoma, carcinoma de conductos biliares, coriocarcinoma, tumor de Wilms, cancer del cuello uterino, tumor testicular, carcinoma de vejiga, y tumores del SNC (tales como un glioma, astrocitoma, meduloblastoma, craneofaringioma, ependimoma, pinealoma, hemangioblastoma, neuroma del nervio acustico, oligodendroglioma, menangioma, melanoma, neuroblastoma y retinoblastoma).
En ciertas realizaciones los compuestos que se describen en el presente documento son superiores para CPA o Ifos solos frente al crecimiento tumoral resistente a CPA y/o Ifos. Por lo tanto, un aspecto de un metodo que se desvela en el presente documento incluye el tratamiento de un sujeto que tiene una afeccion neoplasica resistente a CPA y/o Ifos con una sal de IPM o analogo de la misma que se desvela en el presente documento.
En algunas realizaciones, los compuestos desvelados en el presente documento presentan una toxicidad reducida en comparacion con CPA y/o Ifos. Por ejemplo, dosis elevadas de CPA y/o Ifos pueden dar como resultado un aumento de toxicidad en el rinon, vejiga, y/o sistema nervioso central debido a la presencia de ciertos metabolitos, tales como cloroacetaldeddo y acrolema. En algunas realizaciones, los presentes compuestos reducen o evitan la produccion de estos u otros metabolitos toxicos a la vez que mantienen la eficacia. Por lo tanto, los presentes compuestos son capaces de proporcionar tratamiento terapeutico a la vez que se reducen los efectos secundarios perjudiciales, tales como muerte de celulas renales, de vejiga, o del sistema nervioso central, que se pueden unir a metabolitos de CPA y/o Ifos. Por consiguiente, los presentes compuestos son utiles como sustitutos para CPA y/o Ifos.
Por ejemplo, los presentes compuestos son utiles para la preparacion de los pacientes para trasplantes de celulas sangumeas y medula osea. A menudo, CPA e Ifos se usan en trasplantes de celulas sangumeas y medula osea, y los presentes compuestos representan una alternativa ventajosa, por ejemplo, debido a la disminucion del perfil de toxicidad y/o aumento de la potencia de los presentes compuestos. Ademas, los presentes compuestos tambien se pueden usar en trasplantes de celulas sangumeas y medula osea en los que CPA e Ifos son inapropiados, por ejemplo, en los que se demuestra que dosis elevadas de CPA e Ifos son toxicas. Los presentes compuestos se pueden administrar minutos, horas, dfas, semanas, o meses antes del trasplante, en particular dfas o semanas antes del trasplante. Ademas, los presentes compuestos se pueden administrar en formas de dosificacion individuales, multiples, y/o de repeticion y/o en asociacion con otros agentes en la preparacion del trasplante de celulas sangumeas o medula osea.
En ciertas realizaciones, los presentes compuestos son utiles en regfmenes de acondicionamiento para trasplantes de celulas sangumeas y medula osea, por ejemplo, como sustitutos para CPA y/o Ifos. Ademas, los presentes compuestos se pueden administrar sin usar medidas de proteccion, tales como mesna y/o hidratacion intravenosa que a menudo se usan en asociacion con CPA e Ifos.
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En otra realizacion, los presentes compuestos se pueden usar en combinacion con CPA y/o Ifos, por ejemplo, en la preparacion de pacientes para trasplantes de celulas sangumeas y medula osea y en reg^enes de acondicionamiento para trasplantes de celulas sangumeas y medula osea. Las composiciones que comprenden uno
0 mas de los presentes compuestos en combinacion con CPA y/o Ifos ofrecen beneficios adicionales, tales como disminucion de la toxicidad y/o aumento de la potencia, con respecto a CPA y/o Ifos solos.
En ciertas realizaciones del metodo, a un sujeto se le administran de aproximadamente 0,2 mg/kg/dfa a aproximadamente 20 mg/kg/dfa de una sal de IPM o analogo de la misma que se desvelan. Por ejemplo, a un sujeto se le pueden administrar de aproximadamente 0,5 mg/kg/dfa a aproximadamente 10 mg/kg/dfa, tal como de aproximadamente 1 mg/kgMa a aproximadamente 7,5 mg/kg/dfa de un compuesto desvelado.
En ciertas realizaciones, IPM, un analogo o una sal de la misma se administra a un sujeto a una dosis (por ejemplo, una dosis diaria) superior a aproximadamente 1,0 g, superior a aproximadamente 1,5 g, superior a aproximadamente 2,0 g, o incluso superior a aproximadamente 2,5 g. En ciertas realizaciones, la sal de IPM es IPMTris, por ejemplo, hasta aproximadamente 2,0 g, 2,5 g, o incluso 3,0 g.
En ciertas realizaciones, la IPM o analogo de la misma se administra a un sujeto en forma de una sal de modo que la dosis (por ejemplo, dosis diaria) de IPM o el analogo de la misma (es decir, teniendo en cuenta solamente el anion IPM de la sal y descontando el peso del contraion u otros componentes de la composicion) es superior a aproximadamente 0,4 g, superior a aproximadamente 0,6 g, superior a aproximadamente 0,8 g, o incluso superior a aproximadamente 1,0 g. En ciertas realizaciones, la IPM se administra en una composicion tal como se desvela en el presente documento a una dosis superior a aproximadamente 0,4 g, superior a aproximadamente 0,6 g, superior a aproximadamente 0,8 g, o incluso superior a aproximadamente 1,0 g, por ejemplo, hasta aproximadamente 2,0 g, 2,5 g, o incluso 3,0 g.
En ciertas realizaciones, un tratamiento con una sal de IPM o analogo de la misma puede comprender una cantidad total de IPM o analogo de la misma (es decir, teniendo en cuenta solamente el anion IPM de la sal y descontando el peso del contraion u otros componentes de la composicion) que es superior a aproximadamente 0,8 g, superior a aproximadamente 1,0 g, superior a aproximadamente 1,5 g, o incluso superior a aproximadamente 2,0 g.
En ciertas realizaciones, una dosis de sal de IPM o analogo de la misma se puede administrar desde una vez a la semana, tres veces a la semana, cinco times a la semana, una vez al a dfa, o incluso dos veces al dfa, preferentemente una vez al dfa. En algunas de tales realizaciones, se puede administrar un tratamiento con una sal de IPM o analogo de la misma, en el que un tratamiento es de dos o mas dosis consecutivas. En ciertas realizaciones el transcurso del tratamiento puede comprender la administracion de una dosis de una sal de IPM o analogo de la misma una vez al dfa durante dos, tres, cuatro o incluso cinco dfas, preferentemente tres dfas. Tales dosis pueden ser en dfas consecutivos o no consecutivos.
En ciertas realizaciones, una sola dosis (por ejemplo, una dosis diaria) puede comprender mas de una forma de dosificacion, por ejemplo, una sola dosis puede comprender dos o mas capsulas, comprimidos, o pfldoras. En ciertas realizaciones, una dosis diaria que comprende multiples formas de dosificacion se puede administrar de una vez, o subconjuntos de las formas de dosificacion se pueden administrar en intervalos durante todo el dfa.
En otra realizacion del metodo, se administra al sujeto una dosis (por ejemplo, una dosis diaria) de aproximadamente
1 mg/m2 a aproximadamente 1500 mg/m2, tal como de aproximadamente 1 mg/m2 a aproximadamente 700 mg/m2, de aproximadamente 5 mg/m2 a aproximadamente 1000 mg/m2, de aproximadamente 5 mg/m2 a aproximadamente 700 mg/m2, de aproximadamente 5 mg/m2 a aproximadamente 500 mg/m2, de aproximadamente 600 mg/m2 a aproximadamente 1200 mg/m2; de aproximadamente 100 mg/m2 a aproximadamente 1500 mg/m2, de aproximadamente 30 mg/m2 a aproximadamente 600 mg/m2, de aproximadamente 10 mg/m2 a aproximadamente 600 mg/m2, o de aproximadamente 10 mg/m2 a aproximadamente 100 mg/m2 de una sal de IPM o analogo de la misma tal como se desvela en el presente documento. Por ejemplo, de aproximadamente 10 mg/m2, aproximadamente 12 mg/m2, o incluso 14 mg/m2.
En ciertas realizaciones del metodo para el tratamiento de los trastornos hiperproliferativos que se desvelan en el presente documento, un compuesto desvelado se administra a un sujeto en un programa de dosificacion multiple diariamente. En tales realizaciones, el compuesto se administra en al menos dos dfas y en como mucho cinco dfas diferentes. En un aspecto de programas de dosificacion multiple diariamente, el compuesto se administra al sujeto en dfas consecutivos, tal como de dos a cinco dfas consecutivos. Como alternativa, el compuesto se administra al sujeto en dfas no consecutivos, tal como cada dos dfas.
En ciertas realizaciones del metodo, uno o mas agentes terapeuticos adicionales se administran a un sujeto ademas de los compuestos y composiciones que ahora se desvelan. Por ejemplo, algunos agentes terapeuticos adicionales que se pueden usar incluyen agentes de union a microtubulos, intercaladores o reticuladores de ADN, inhibidores de la smtesis de ADN, inhibidores de la transcripcion de ADN y/o ARN, anticuerpos, enzimas, inhibidores enzimaticos, reguladores geneticos, y/o inhibidores de la angiogenesis.
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Agente de union a microtubulos se refiere a un agente que interactua con la tubulina para estabilizar o desestabilizar la formacion de microtubulos inhibiendo de este modo la division celular. Algunos ejemplos de agentes de union a microtubulos que se pueden usar en conjunto con IPM, un analogo, o una sal de la misma incluyen, pero no se limitan a, paclitaxel, docetaxel, vinblastina, vindesina, vinorelbina (navelbina), las epotilonas, colchicina, dolastatina 15, nocodazol, podofilotoxina y rizoxina. Tambien se pueden usar analogos y derivados de tales compuestos y seran conocidos por las personas con experiencia habitual en la materia. Por ejemplo, algunas epotilonas y analogos de epotilona adecuados para incorporacion en los presentes compuestos se describen en la Publicacion Internacional N° WO 2004/018478. En la actualidad se cree que algunos taxoides, tales como paclitaxel y docetaxel son particularmente utiles como agentes terapeuticos en los compuestos que ahora se desvelan. Algunos ejemplos de taxoides utiles adicionales, que incluyen analogos de paclitaxel se ensenan en los documentos de Patente de Estados Unidos N°s 6.610.860 de Holton, 5.530.020 de Gurram et al. y 5.912.264 de Wittman et al.
Algunos reguladores de la transcripcion de ADN y/o ARN adecuados, que incluyen, pero no se limitan a, actinomicina D, daunorrubicina, doxorrubicina y derivados y analogos de los mismos tambien son adecuados para usar en combinacion con los compuestos que ahora se desvelan.
Algunos agentes intercaladores y de reticulacion de ADN que se pueden incorporar en los compuestos que se desvelan incluyen, pero no se limitan a, cisplatino, carboplatino, oxaliplatino, mitomicinas, tales como mitomicina C, bleomicina, clorambucilo, ciclofosfamida y derivados y analogos de los mismos.
Algunos inhibidores de la smtesis de ADN adecuados para su uso como agentes terapeuticos incluyen, pero no se limitan a, metotrexato, 5-fluoro-5'-desoxiuridina, 5-fluorouracilo y analogos de los mismos.
Algunos ejemplos de inhibidores enzimaticos adecuados para usar en combinacion con los compuestos que ahora se desvelan incluyen, pero no se limitan a, camptotecina, etoposido, formestano, tricostatina y derivados y analogos de los mismos.
Algunos agentes terapeuticos adecuados para usar con los compuestos que ahora se desvelan influyen en la regulacion genetica incluyen agentes que dan como resultado un aumento o una disminucion de la expresion de uno o mas genes, tales como, pero no se limitan a, raloxifeno, 5-azacitidina, 5-aza-2'-desoxicitidina, tamoxifeno, 4- hidroxitamoxifeno, mifepristona y derivados y analogos de los mismos.
En la tecnica se conocen inhibidores de la angiogenesis y algunos ejemplos de inhibidores de la angiogenesisis adecuados incluyen, pero no se limitan a, angiostatina K1-3, estaurosporina, genistema, fumagilina, medroxiprogesterona, suramina, interferon-alfa, inhibidores de metaloproteinasa, factor 4 plaquetario, somatostatina, tromoboespondina, endostatina, talidomida, y derivados y analogos de los mismos.
Otros agentes terapeuticos, en particular agentes anti tumorales, que pueden entrar o no en una o mas de las clasificaciones mencionadas anteriormente, tambien son adecuados para administracion en combinacion con los compuestos que ahora se desvelan. A modo de ejemplo, tales agentes incluyen adriamicina, apigenina, rapamicina, zebularina, cimetidina, y derivados y analogos de los mismos.
En ciertas realizaciones, la sal de IPM o de analogo de misma se administra en combinacion con un regulador de la transcripcion de ADN y/o ARN tal como doxorrubicina. En ciertas realizaciones alternativas, la sal de IPM o analogo de misma se administra en combinacion con un agente de union a microtubulos tal como docetaxel o paclitaxel.
En ciertas realizaciones, las combinaciones que se describen en el presente documento pueden tener una naturaleza sinergica, lo que significa que el efecto terapeutico de la combinacion de la sal de IPM o analogo de misma y el otro agente o agentes terapeuticos es mayor que la suma de los efectos individuales cuando los dos o mas agentes se administran por separado en la misma cantidad.
En algunas de tales realizaciones, tal efecto sinergico puede permitir la administracion de dosis subterapeuticas de la sal de IPM o analogo de misma. En algunas de tales realizaciones, la administracion de una dosis subterapeutica puede reducir o evitar un efecto secundario asociado con dosis mas elevadas de la sal de IPM o analogo de misma, por ejemplo, los metodos de la presente invencion pueden ser ventajosos sobre terapias de combinacion existentes al permitir que los agentes anticancer convencionales ejerzan un efecto mayor a una cosificacion menor.
En ciertas realizaciones, la eficacia del agente adicional aumenta cuando se administra en combinacion con una sal de IPM o analogo de la misma. En algunas de tales realizaciones, el agente adicional es un agente quimioterapeutico, que incluye, pero no se limita a, agentes de union a microtubulos, intercaladores o reticuladores de ADN, inhibidores de la smtesis de ADN, inhibidores de la transcripcion de ADN y/o ARN, anticuerpos, enzimas, inhibidores enzimaticos, reguladores geneticos, y/o inhibidores de la angiogenesis. En algunas de tales realizaciones, la eficacia de un agente de union a microtubulos, tal como docetaxel o paclitaxel, aumenta cuando se administra en combinacion con una sal de IPM o analogo de la misma. En algunas de tales realizaciones alternativas, la eficacia de un inhibidor de la transcripcion de ADN y/o ARN, tal como doxorrubicina, aumenta cuando
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se administra en combinacion con una sal de IPM o analogo de la misma. En ciertas realizaciones, la sal de IPM o analogo de misma es IPM^Tris.
Como se usa en el presente documento, la expresion "dosis subterapeutica" incluye una dosis que puede estabilizar o reducir el volumen tumoral, pero que no se considerana un tratamiento eficaz a esa dosis, o incluso una dosis que sola no proporciona un efecto terapeutico mensurable.
En ciertas realizaciones, la sal de IPM o analogo de misma se administra a una dosis de aproximadamente 100 mg a aproximadamente 500 mg, de aproximadamente 150 mg a aproximadamente 400 mg, o incluso de aproximadamente 175 mg a aproximadamente 300 mg. En ciertas realizaciones, la sal de IPM o analogo de misma se administra a una dosis de aproximadamente 150 mg, aproximadamente 175 mg, aproximadamente 185 mg, aproximadamente 190 mg, aproximadamente 200 mg, aproximadamente 225 mg, aproximadamente 250 mg, aproximadamente 275 mg, aproximadamente 285 mg, aproximadamente 290, o incluso aproximadamente 300 mg. En algunas de tales realizaciones la sal de IPM o analogo de misma que se administra a tales dosis se administra por via oral.
En algunas de tales realizaciones la sal de IPM o analogo de misma se administra en combinacion con doxorrubicina a una dosis de aproximadamente 100 mg a aproximadamente 200 mg, de aproximadamente 110 mg a aproximadamente 180 mg, o incluso de aproximadamente 115 a aproximadamente 150 mg. En algunas de tales realizaciones la sal de IPM o analogo de misma se administra en combinacion con doxorrubicina a una dosis de aproximadamente 100 mg, aproximadamente 110 mg, aproximadamente 115 mg, aproximadamente 125 mg,
aproximadamente 135 mg, aproximadamente 140 mg, aproximadamente 145 mg, aproximadamente 155 mg,
aproximadamente 165 mg, aproximadamente 175 mg, aproximadamente 185 mg, o incluso aproximadamente 200 mg.
En algunas de tales realizaciones la sal de IPM o analogo de misma se administra en combinacion con docetaxel a una dosis de aproximadamente 50 mg a aproximadamente 200 g, de aproximadamente 75 mg a aproximadamente 195 mg, o incluso de aproximadamente 80 a aproximadamente 190 mg. En algunas de tales realizaciones la sal de IPM o analogo de misma se administra en combinacion con docetaxel a una dosis de aproximadamente 50 mg,
aproximadamente 70 mg, aproximadamente 80 mg, aproximadamente 90 mg, aproximadamente 95 mg,
aproximadamente 100 mg, aproximadamente 110 mg, aproximadamente 120 mg, aproximadamente 130 mg,
aproximadamente 140 mg, aproximadamente 150 mg, aproximadamente 160 mg, aproximadamente 170 mg,
aproximadamente 180 mg, aproximadamente 190 mg, o incluso aproximadamente 200 mg.
III. Definiciones
Las siguientes explicaciones de expresiones y ejemplos se proporcionan para describir mejor los presentes compuestos, composiciones y metodos, y para guiar a los expertos habituales en la materia en la practica de la presente divulgacion. Tambien se entiende que la terminologfa usada en la divulgacion es solamente con el fin de describir realizaciones y ejemplos en particular y no pretende ser limitante.
En el presente documento, los intervalos se pueden expresar como de "aproximadamente" un valor en particular, y/o a "aproximadamente" otro valor en particular. Cuando se expresa tal intervalo, otra realizacion incluye de un valor en particular y/o al otro valor en particular. De forma analoga, cuando los valores se expresan como aproximaciones, mediante el uso del antecedente "aproximadamente", se entendera que el valor en particular forma parte de otra realizacion. Tambien se entendera que los puntos finales de cada uno de los intervalos son significativos tanto en relacion con respecto al otro punto final, como independientemente del otro punto final.
La expresion "amina alifatica adclica" se refiere a una amina alifatica como se ha mencionado anteriormente, en la que al menos uno de los grupos alifaticos es adclico.
Como se usa en el presente documento, "amina alifatica" se refiere a un compuesto de formula NR1R2R3, en la que al menos uno de R1-3 es un grupo alifatico.
En el presente documento, la expresion "inhibidor de la angiogenesis" se usa para hacer referencia a una molecula que incluye, pero no se limita a, biomoleculas tales como peptidos, protemas, enzimas, polisacaridos, oligonucleotidos, ADN, ARN, vectores recombinantes, y moleculas pequenas que funcionan para inhibir el crecimiento de los vasos sangumeos. La angiogenesis esta implicada en ciertos procesos patologicos, tales como los implicados en trastornos tales como retinopatfa diabetica, enfermedades inflamatorias cronicas, artritis reumatoide, dermatitis, psoriasis, ulceras estomacales, y la mayona de los tipos de tumores solidos humanos.
La expresion "amina heterodclica" se refiere a un compuesto de formula NR1R2R3, en la que al menos uno de R1-3 es un grupo heterodclico o R1, R2 y/o R3 tomados en combinacion con su atomo de nitrogeno en comun forman un anillo.
La expresion "grupo saliente" se refiere a un grupo que se puede desplazar con un nucleofilo. Con referencia a los
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compuestos que ahora se desvelan, grupo saliente se refiere a un grupo que se puede desplazar para formar un compuesto intermedio de aziridinio, o se puede desplazar directamente mediante un nucleofilo biomolecular, tal como un nucleofilo de acido nucleico, para formar, por ejemplo, una especie de guanidinio 7-alquilada. Algunos ejemplos de grupos salientes adecuados incluyen los halogenos y los sulfonatos (-SO2R). En ciertas realizaciones de las sales de analogos de isofosforamida que se desvelan, el compuesto es un compuesto de grupo saliente "mixto", que incluye dos tipos diferentes de grupos salientes, por ejemplo un halogeno y un sulfonato o dos halogenos diferentes, tales como un bromuro y un cloruro. El documento de Patente de Estados Unidos N° 6.197.760 de Struck ensena metodos para preparar tales compuestos de grupo saliente.
"Neoplasia" se refiere al proceso de un crecimiento celular anomalo y descontrolado. La neoplasia es un ejemplo de un trastorno proliferativo. El producto de la neoplasia es una neoplasia (un tumor), que es un crecimiento anomalo de tejido que resulta de una division celular excesiva. Un tumor que no forma metastasis se denomina "benigno". Un tumor que invade el tejido circundante y/o puede hacer metastasis se denomina "maligno".
"Opcional" u "opcionalmente" se refiere a que el suceso o circunstancia que se describe posteriormente se puede producir, pero no es necesario que se produzca, y que la descripcion incluye casos en los que dicho suceso o circunstancia se produce y casos en los que no se produce.
Como se usa en el presente documento, el termino estable se refiere a que el compuesto no se degrada mas de un 5%, preferentemente no mas de un 2% o incluso un 1% durante al menos cinco dfas, o el periodo de tiempo especificado. Tal degradacion se puede controlar mediante RMN1H, HPLC, u otros medios adecuados.
Como se usa en el presente documento, y tal como se entiende bien en la tecnica, el "tratamiento" es un enfoque para obtener resultados beneficiosos o deseados, que incluyen resultados clmicos. Algunos resultados clmicos beneficiosos o deseados pueden incluir, pero no se limitan a, alivio o mejora de uno o mas smtomas o afecciones, disminucion del alcance de la enfermedad, patologfa estabilizada (es decir, que no empeora), prevencion de la propagacion de la enfermedad, retraso o disminucion de la evolucion de la enfermedad, mejora o alivio de la patologfa, y remision (ya sea parcial o total), ya sea detectable o no detectable. "Tratamiento" tambien puede hacer referencia a prolongar la supervivencia en comparacion con la supervivencia esperada sino se recibe tratamiento.
IV. Ejemplos
La divulgacion mencionada anteriormente se explica adicionalmente con los siguientes ejemplos no limitantes. Ejemplo 1
Un reactor se cargo con Tris (103,3 mg) y MeCN (3 ml) seguido de la adicion de IPM (200,5 mg) en MeCN (3 ml). La mezcla de reaccion se agito durante una noche. El solido se recogio a continuacion por filtracion y la torta se lavo con MeCN. La torta se seco al vacfo hasta peso constante para proporcionar el producto final (296 mg). El producto final se sometio a difraccion de rayos X con el metodo de polvo para confirmar la cristalinidad (Figura 2). La cristalinidad estaba apoyada adicionalmente por DSC cuando aparecio un pico pronunciado al 105,77 (Figura 3). Ademas, la sal de IPMTris presentaba una perdida de peso de un 0,7692% aproximadamente a 125°C por TGA (Figura 4). Por ultimo, SEM mostro que IPM^Tris presentan una forma cristalina similar a la de una placa.
La estabilidad de la IPM Tris cristalina se controlo por RMN 1H y se encontro que permaneda estable a temperatura ambiente hasta seis dfas. La estabilidad de la estructura cristalina se controlo por DSC que indicaba que los cristales de IPM Tris no habfan absorbido agua ni cambiado en su estructura durante el transcurso de diez dfas a temperatura ambiente.
Ejemplo 2
Un reactor se cargo con Tris (8,563 g) y DMF (40 ml) y se calento para formar una solucion transparente. Despues de haber enfriado la solucion a temperatura ambiente, se anadio IPM. La mezcla se agito para formar una solucion transparente. A continuacion se anadieron a la solucion acetonitrilo (40 ml) y una pequena cantidad de semillas, seguido de la adicion lenta de MTBE (240 ml) para dar una suspension. La suspension se agito durante otra hora momento en el que el precipitado se recogio por filtracion, y la torta de filtro se lavo con MTBE (80 ml). La torta de filtro se seco al vacm hasta peso constante a temperatura ambiente para proporcionar el producto final (23,2 g).
Ejemplo 3
Se implantaron fragmentos de 30 a 40 mg de tumores de mama humanos MX-1 a partir de un pasaje in vivo por via subcutanea en ratones nu/nu en el pamculo adiposo mamario y se permitio que alcanzaran un peso de 75-200 mg antes del comienzo del tratamiento. El tratamiento comenzo el Dfa 10 despues del implante del tumor; la administracion se realizo por via intraperitoneal una vez diariamente durante 5 dfas. IPM(LYS)2 (IPM al 43% y Lys al 57%) y IPM Tris presentaban una actividad similar con respecto tumores de MX-1 cuando las dosis se normalizaban con respecto a IPM (vease la Figura 6).
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Ejemplo 4
Se implantaron fragmentos de 30 a 40 mg de tumores de mama humanos MX-1 a partir de un pasaje in vivo sc en ratones nu/nu en el pamculo adiposo mamario y se permitio que alcanzaran un peso de 75-200 mg antes del comienzo del tratamiento. El tratamiento comenzo el Dfa 10 despues del implante del tumor; la administracion se realizo por via intraperitoneal o por via oral una vez diariamente durante 5 dfas. IPMTris, que se puede preparar como se ha descrito en el Ejemplo 1, a las dosis maximas toleradas para cada administracion, era igualmente activa con respecto a los tumores de MX-1 cuando se administraba por via oral o por via sistemica (vease la Figura 7).
Ejemplo 5
Ensayo de Proliferacion Celular
La inhibicion del crecimiento se determino mediante el metodo de tetrazolio en microcultivo. En resumen, se sembraron semillas en placas de microtitulacion con fondo plano de 96 pocillos a una densidad de 500 celulas/pocillo en 100 pl de medios. Despues de un periodo de incubacion de una noche, se anadieron 100 pl de medios que conteman IPM(LYS)2 para conseguir concentraciones finales espedficas y un volumen final de 200 pl/pocillo. Los puntos de datos representan la viabilidad media y las barras de error (desviacion estandar de cada experimento realizada por triplicado). A las 120 horas, las actividades metabolicas relativas de las celulas tratadas y sin tratar se midieron mediante conversion mitocondrial de bromuro de 3-[4,5-dimetiltiazon-2-il]-2,5-difenil tetrazolio (MTT, Sigma, St. Louis, MO) en formazina. Al finalizar el tratamiento farmacologico, se anadieron 250 pg de MTT a cada pocillo y se incubaron a 37°C, CO2 a 5% durante 6 horas. Los cristales de formazina se disolvieron en DMSO y la densidad optica a 595 nm se midio en un espectrofotometro VERSAmax (Molecular Devices, Sunnyvale, CA). La viabilidad se definio como la absorbancia a 595 nm en las muestras tratadas dividido entre la absorbancia a 570 nm en las muestras de control. La CI50 se definio como la concentracion a la que la viabilidad de las celulas tratadas era un 50% de la de los controles (tratado/control = 0,5).
Modelos de Xenoinjerto Murino
Ratones scid*/* hembra CB17 (Taconic Farms, Germantown, NY) se implantaron con tumor subcutaneo en el costado. La lmea tumoral OS31 se establecio en el Hospital de Investigacion del Cancer Infantil de St. Judes y se ha descrito anteriormente (20). Para el transplante con tumor OS1, los ratones se anestesiaron con isoflurano al 4%. Despues de realizar una pequena incision en el costado del raton, se implanto una seccion de tumor de 4 mm por 4 mm por via subcutanea.
Ratones scid*/* hembra CB17 (Taconic Farms, Germantown, NY) se trataron con IPM^(LYS)2 diariamente durante 1 o 3 dfas a traves de inyeccion en la vena de la cola comenzando el dfa 1 cada 21 dfas durante 2 ciclos. Cinco ratones que no portaban tumor se asignaron a cada grupo de tratamiento. Los ratones se trataron con cualquiera de 75 mg/kg/dfa, 100 mg/kg/dfa, 150 mg/kg/dfa, o 200 mg/kg/dfa de IPM(LYS)2. Un suceso toxico se definio como una perdida de peso superior o igual a un 20% del peso del animal en el momento de la clasificacion al azar, o muerte. La MTD se define como la dosis mas elevadas a la que no se produce toxicidad.
Cuando los tumores teman un diametro de aproximadamente 0,20 cm a 0,7 cm, los ratones que portaban tumor se clasificaron a lanzar en grupos de 5 a 8 ratones con 1 grupo de tratamiento y 1 grupo de control. Los ratones tratados recibieron tasidotina a una dosis de 90 mg/kg/dfa en forma de una inyeccion intraperitoneal diariamente durante 5 dfas comenzando en los dfas 1 y 21. Suponiendo un tumor esferico, el volumen se determinaba con la formula: mm3 = */6(D)d2, en la que D es el diametro maximo yd es el diametro perpendicular a D. Los volumenes se expresan como volumenes tumorales relativos (RTV) en los que el volumen tumoral en cualquier punto temporal dado se divide entre el volumen tumoral de partida. El RTV para los ratones tratados y de control se midio un mmimo de una vez a la semana.
Evaluacion de la Respuesta Tumoral y Consideraciones Estad^sticas en Ratones
Usando los criterios que se han definido anteriormente por Houghton, et al., la enfermedad progresiva se define como menos de un 50% de regresion a partir del volumen del tumor original durante todo el penodo del estudio (RTV > 0,5) y superior a un 25% de aumento en el volumen del tumor al final del periodo de estudio (RTV > 1,25). La regresion del tumor en la enfermedad estable que no supera un 50% del volumen tumoral original durante todo el periodo de estudio (RTV > 0,5) y menos de un 25% de aumento en el volumen del tumor al final del periodo de estudio (RTV < 1,25). Una respuesta parcial se define como mas de un 50% de regresion en el volumen tumoral (RTV < 0,5) pero con una masa tumoral que se puede medir superior a 0,10 cm3. La perdida de masa tumoral que se puede medir (<0,10 cm3) en cualquier momento durante el periodo de tratamiento (6 semanas) se defima como una respuesta completa (CR). Una CR sostenida se defima como una perdida de masa tumoral que se puede medir (< 0,10 cm3) en cualquier momento despues del comienzo de la terapia sin recrecimiento durante el periodo de estudio de 6 semanas. Los ratones que monan antes de la semana 9 o antes de que el tumor alcanzara 4 veces el volumen inicial se excluyeron.
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El analisis estad^stico se baso en la supervivencia libre de sucesos (EFS). Un suceso se define como un volumen tumoral relativo de 4x (es decir, cuadruple del tamano del tumor de partida), o muerte. La EFS se define como el tiempo desde el comienzo del estudio hasta un suceso. Para los tumores que no alcanzan un suceso hacia las 6 semanas, el final del periodo de estudio, el tiempo de EFS se exclrna en ese momento. El ensayo de clasificacion logantmica exacta se uso para comparar distribuciones de supervivencia libres de sucesos entre grupos de tratamiento y de control. Ademas, el dfa 22, los RTV para los ratones de control y tratados se compararon usando el ensayo de Wilcoxian-Mann-Whitney. Esto permite la comparacion del volumen tumoral despues de un ciclo de tasidotina y en el momento o cerca del momento del suceso para los ratones sin tratar.
Datos Biologicos
Las lmeas celulares tumorales usadas inclrnan lmeas de rabdomiosarcoma RD y RH30 (Coleccion Americana de Cultivos Tipo, Manassas, VA), lmea de osteosarcoma Saos-2, lmeas de sarcoma de Ewing SKPNDW y SKES1, y lmeas de sarcoma sinovial HSSYII y SYOI. Las celulas se cultivaron en monocapa a 37°C, CO2 al 5% en medios de MEM (Saos-2, SYO-1, HSSY-II), DME (SK-PN-DW, RD), o RPMI (RH30) complementados con suero bovino fetal al 10% (Invitrogen, Carlsbad, CA), 0,5% de penicilina/estreptomicina (Invitrogen, Carlsbad, CA), y glutamina al 1% (Invitrogen, Carlsbad, CA). Los resultados muestran a continuacion (Figuras 8 y 9).
- Lmea Celular
- Histologia Diariamente x 3 CI50 Diariamente x 1 CI50
- SK-PN-DW
- Sarcoma de Ewing < 0,5 |jg/ml < 5,0 jg/ml
- SK-ES-1
- Sarcoma de Ewing < 0,5 jg/ml < 5,0 jg/ml
- RH30
- Rabdomiosarcoma Alveolar < 1,0 jg/ml < 1,0 jg/ml
- RD
- Rabdomiosarcoma Embrionario < 5,0 jg/ml < 1,0 jg/ml
- SYO-1
- Sarcoma Sinovial < 1,0 jg/ml < 1,0 jg/ml
- HSSY-II
- Sarcoma Sinovial < 0,5 jg/ml < 0,5 jg/ml
- SaOS
- Osteosarcoma < 5,0 jg/ml < 5,0 jg/ml
- OS222
- Osteosarcoma < 5,0 jg/ml < 10,0 jg/ml
- OS229
- Osteosarcoma < 0,5 jg/ml < 0,5 jg/ml
- OS230
- Osteosarcoma < 5,0 jg/ml < 5,0 jg/ml
La resistencia a ciclofosfamida (CPA) e ifosfamida (IFOS) es un obstaculo principal para superar el tratamiento para el cancer. Los ratones con xenoinjertos de celulas de sarcoma humano resistentes a CPA presentaban una reduccion de mas de 5 veces en el crecimiento del sarcoma cuando se trataban con IPM(LYS)2; la terapia con CPA no tema efecto (Figuras 10 a 12).
Ensayos Clnicos en Seres Humanos
Los estudios en fase I de seguridad y de clasificacion de dosis usaron IPM-(LYS)2 administrada diariamente durante tres dfas consecutivos cada cuatro semanas (1 ciclo). Los resultados demostraron la evidencia de la actividad clmica en el sarcoma (2/11 sujetos incluyendo al menos uno que habfa fracasado en la terapia con IFOS) y mesotelioma (1 sujeto con enfermedad estable prolongada). La dosis maxima tolerada (MTD) de IPM(LYS)2 en este programa era de 400 mg/m2/d. Se produda una pequena toxicidad en la medula osea y ninguna cistitis hemorragica (toxicidad en la vejiga) o toxicidad en el SNC. La toxicidad limitante de la dosis se caracterizaba por desequilibrios en los electrolitos. Esta MTD es comparable con las dosis de IFOS superiores a 25 g/m2 y esta dosis consigue niveles en suero que son 25 veces superiores a las dosis que eliminan un 50% de las lmeas celulares de sarcoma humano.
Ejemplo 6
Materiales y Metodos
Cuidado Animal: Se adquirieron ratones CD2F1 macho de cinco a seis semanas de edad en el Frederick Cancer Research and Development Center (Frederick, MD).
Modelo Tumoral: Los ratones se implantaron ip con un millon de celulas de leucemia murina P388 usando una aguja de calibre 23. La lmea tumoral P388 se mantuvo como un pasaje in vivo. El dfa del implante del tumor se designo
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como el d^a 0, con el tratamiento comenzando el dfa 1 despues del implante del tumor. Se implanto un numero suficiente de ratones de modo que para el ensayo se seleccionaron los animales con pesos corporales en un intervalo lo mas estrecho posible.
Formulacion del Farmaco: IPM(LYS)2, proporcionado en viales pesados previamente de 100 mg, se formulo en solucion salina en el primer dfa de tratamiento (dfa 1) a una concentracion de 70 mg/ml. A continuacion, una parte de esta solucion se diluyo hasta las concentraciones de dosificacion mas bajas de 46,65 mg/ml, 23,35 mg/ml, l4 mg/ml, 9,35 mg/ml, 4,65 mg/ml, y 2,8 mg/ml. En los dfas de tratamiento posteriores, IPM(LYS)2 se formulo a 14 mg/ml y a continuacion una parte de esa solucion se diluyo hasta las concentraciones de dosificacion mas bajas. Todas las inyecciones se administraron sobre la base del peso corporal exacto con el volumen de inyeccion siendo 0,2 ml/10 g de peso corporal.
Tratamiento con el Farmaco: El estudio consistfa en ocho grupos de tratamiento de ocho ratones por grupo y dos grupos de control tratados con vehnculo con diez ratones para un total de 84 ratones en el primer dfa de tratamiento. IPM (LYS)2 se administro como una sola inyeccion el dfa 1 (q1d x 1) a dosificaciones de 1400 mg/kg, 933 mg/kg, y 467 mg/kg administradas po y a una dosificacion de 280 mg/kg administrada ip. IPM(LYS)2 tambien se administro diariamente durante cinco dfas consecutivos (q1d x 5) a dosificaciones de 280 mg/kg/dosis, 187 mg/kg/dosis, y 93 mg/kg/dosis administradas po y a una dosificacion de 56 mg/kg/dosis administrada ip. Un grupo de control se trato con solucion salina administrada po como una sola inyeccion en el dfa 1. El segundo grupo de control se trato con solucion salina administrada po en un programa de tratamiento de qld x 5.
Duracion del Estudio: El estudio se termino a los 61 dfas despues del implante del tumor. Cualquier animal que llegaba estar moribundo se sacrificaba antes de la finalizacion del estudio.
Parametros Evaluados: Numero de muertes no espedficas, media de dfas de muerte, y el aumento de la esperanza de vida basandose en el dfa medio de la muerte y expresado como porcentaje (% de ILS); tiempo medio de supervivencia y el % de ILS calculado basandose en el tiempo medio de supervivencia.
Analisis Estadfstico: El tiempo de supervivencia de los animales individuales se uso como el punto final en un analisis de tablas de vida (estimacion de Kaplan-Meier estratificada seguido del ensayo de clasificacion logantmica de Mantel-Haenszel) con el fin de comparar estadfsticamente los datos de supervivencia entre grupos. Un analisis de las tablas de vida permite comparar los datos de supervivencia entre los grupos usando los animales que no alcanzaron el punto final excluyendolos.
Resultados
El dfa medio de la muerte en ambos de los grupos de control tratados con vehnculo fue 11,0, con las muertes produciendose entre los dfas 10 y 14. La ascitis estaba presente en todos los animales.
La IPM (LYS)2, administrada po como un solo tratamiento proporcionado el dfa 1, era toxica para los ratones en dosificaciones de 1400 mg/kg y 933 mg/kg. En el grupo que recibe tratamiento con la dosificacion de 1400 mg/kg, un animal murio y cuatro animales se sacrificaron. Debido a su estado moribundo en el dfa 5, dos animales se sacrificaron en el dfa 6, y el ultimo animal murio el dfa 10. En el grupo que recibe tratamiento con la dosificacion de 933 mg/kg, seis animales se sacrificaron en el dfa 5 debido a su estado moribundo y los dos animales restantes en el grupo murieron en el dfa 9. La necropsia no indicaba presencia de tumor en estos dos grupos de tratamiento. antes de la muerte o eutanasia de los animales, se observaron perdidas de peso significativas de un 24% y un 22% en los grupos que recibfan IPM(LYS)2 en las dosificaciones de 1400 mg/kg y 933 mg/kg, respectivamente. La IPM (LYS)2 administrada a una dosificacion de 467 mg/kg como un solo tratamiento po se toleraba mejor; sin embargo, dos animales se sacrificaron en el dfa 8 debido a su estado moribundo. La perdida maxima en peso corporal medio para este grupo era de un 8%. Los seis animales restantes en el grupo murieron entre los dfas 11 y 15 y se determino que teman ascitis presente despues de la necropsia. El ILS para este grupo de tratamiento era de un 9% ya fuera si el calculo se basaba en el dfa en medio de la muerte o tiempo medio de supervivencia. La comparacion estadfstica de los datos de supervivencia para este grupo con la del grupo de control tratado con vehnculo (grupo 1, tratado con q1d x 1) indicaba que la diferencia no era significativa.
La IPM (LYS)2, administrada ip a una dosificacion de 280 mg/kg como una sola inyeccion se tolero sin muertes y con una perdida minima de peso corporal medio (4%, 1 g). El dfa medio de la muerte para este grupo era 34,5 con un ILS de un 214%. El tiempo medio de supervivencia fue de 38,0 dfas con un ILS de un 245%. Ademas, dos animales sobrevivieron hasta la finalizacion del estudio en el dfa 61. La necropsia no indicaba tumor presente. El analisis estadfstico de los datos de supervivencia para este grupo de tratamiento y el grupo de control tratado con vehnculo (grupo 1, tratado con q1d x 1) indicaba que la indiferencia era significativa.
La IPM (LYS)2, administrada po a dosificaciones de 280 mg/kg/dosis, 187 mg/kg/dosis, y 93 mg/kg/dosis en un programa de tratamiento con qld x 5, se tolero sin muertes relacionadas con el tratamiento. Se observo una perdida minima en el peso corporal medio (4%, 1 g) en el grupo que recibio IPM(LYS)2 a una dosificacion de 280 mg/kg/dosis. No se observo perdida de peso para los dos grupos de dosificacion mas baja. Los dfas medios de la
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muerte y el tiempo medio de supervivencias fueron de 17,0 d^as, 17,0 d^as, y 15,0 dfas con valores de ILS de un 55%, un 55%, y un 36% para las dosificaciones de 280 mg/kg/dosis, 187 mg/kg/dosis, y 93 mg/kg/dosis, respectivamente. La comparacion estad^stica de los datos de supervivencia para cada uno de estos tres grupos con datos de supervivencia para el control tratado con vehnculo (grupo 6, tratado con q1d x 5) indicaba que el aumento de la esperanza de vida para cada grupo era estadfsticamente significativo.
La IPM (LYS)2, administrada ip a una dosificacion de 56 mg/kg/dosis en un programa de inyeccion de q1d x 5, era bastante eficaz frente a la leucemia P388/0 con un dfa medio de muerte de 28,5. La primera muerte se produjo en el dfa 24 y la ultima muerte en el dfa 33, con cuatro de los ocho animales en el grupo sobreviviendo hasta el momento de la finalizacion del estudio en el dfa 61. El valor de ILS calculado basandose en el dfa medio de la muerte era de un 159%. El tiempo medio de supervivencia para este grupo de tratamiento fue > 47,0 dfas con un valor de ILS calculado de un 327%. Este regimen de tratamiento se tolero bien con ninguna muerte relacionada con el tratamiento y una perdida de un 4% (1 g) en el peso corporal medio. Cuando los datos de supervivencia para este grupo se compararon estadfsticamente con los del grupo de control tratado con vehnculo (grupo 6, tratado con q1d x 5) se encontro que la diferencia era significativa.
Sumario del Analisis Estad^stico
- Pares del Grupo valor de p
- 1 con respecto a 4
- 0,192
- 1 con respecto a 5
- 0,000
- 4 con respecto a 5
- 0,000
- 6 con respecto a 7
- 0,000
- 6 con respecto a 8
- 0,000
- 6 con respecto a 9
- 0,000
- 6 con respecto a 10
- 0,000
- 7 con respecto a 10
- 0,000
Conclusiones
La IPM (LYS)2 era toxica para los ratones tanto cuando se administraba po como un solo tratamiento en las dosificaciones de 1400 mg/kg y 933 mg/kg. Un solo tratamiento con la dosificacion de 467 mg/kg administrada po se toleraba pero obtema solamente un aumento mmimo de la esperanza de vida que no era estadfsticamente significativo. La IPM(LYS)2, administrada como una sola inyeccion ip en una dosificacion de 280 mg/kg, era bastante eficaz y daba como resultado dos supervivientes a los 61 dfas y un aumento significativo de la esperanza de vida.
La IPM (LYS)2, administrada po en un programa de q1d x 5 en las dosificaciones de 280, 187, y 93, se toleraba mucho mejor y era mucho mas eficaz frente a la leucemia P388/0 que los tratamientos individuales con dosis mas elevadas. El tratamiento con las tres dosificaciones administradas po q1d x 5 produda aumentos estadfsticamente significativos en la en esperanza de vida. Cuando se administraba ip en un programa de tratamiento con q1d x 5 en una dosificacion de 56 mg/kg/dosis, la IPM(LYS)2 lograba aumentos significativos en la esperanza de vida con cuatro de ocho animales en el grupo sobreviviendo hasta la finalizacion del estudio en el dfa 61.
Ejemplo 7
Materiales y Metodos
Cuidado Animal: Se adquirieron ratones NCr-nu/nu atfmicos hembra de cinco semanas de edad en Taconic Farms (Germantown, NY).
Modelo Tumoral: Se implantaron fragmentos de 30 mg a 40 mg de tumores de mama humanos MX-1 mantenidos en un pasaje in vivo sc en ratones en el pamculo adiposo mamario usando una aguja trocar del calibre 12 y se permitio que crecieran. El dfa del implante del tumor se denomino dfa 0. Se permitio que los tumores alcanzaran 138-245 mg de peso (138-245 mm3 de tamano) antes del comienzo del tratamiento. Un numero suficiente de ratones fueron implantados de modo que los tumores en un intervalo de peso lo mas estrecho posible se seleccionaron para el ensayo en el dfa del comienzo del tratamiento (dfa 10 despues del implante del tumor). Esos animales seleccionados con tumores en el intervalo de tamano apropiado se asignaron a los diversos grupos de tratamiento de modo que los pesos medios del tumor en el primer dfa de tratamiento estaban tan proximos entre sf como era posible (172-197 mg).
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Formulacion del Farmaco: Tanto IPMTris (205 mg de IPM/vial) que se puede preparar como se ha descrito en el Ejemplo 1, como IPM se formularon en solucion salina en el primer dfa de tratamiento ^a 10) a una concentracion de 6,0 mg/ml y despues se diluyo con solucion salina hasta las concentraciones de dosificacion mas bajas de 4,05 mg/ml, 1,8 mg/ml, y 1,2 mg/ml. La IPM(LYS)2 (100 mg de IPM-Lisina/vial) se formulo en solucion salina en el primer dfa de tratamiento a una concentracion de 14 mg/ml y despues se diluyo con solucion salina hasta las concentraciones de dosificacion mas bajas de 9,35 mg/ml, 4,2 mg/ml y 2,8 mg/ml. A continuacion se tomaron alfcuotas de cada concentracion para uso diario, se congelaron, se almacenaron a -20°C, y se descongelaron para uso diario. Todas las inyecciones se administraron sobre la base del peso corporal exacto con el volumen de inyeccion siendo 0,2 ml/10 g de peso corporal.
Tratamiento con el Farmaco: El experimento consistfa en 12 grupos de tratamiento de ocho ratones por grupo y dos grupos de control tratados con vehfculo con diez ratones cada uno con un total de 116 ratones en el primer dfa de tratamiento. Todos los agentes (y veldculo) se administraron diariamente durante cinco dfas consecutivos (q1d x 5). Tanto IPM Tris como IPM se administraron ip a dosificaciones de 36 mg/kg/dosis y 24 mg/kg/dosis y po a dosificaciones de 120 mg/kg/dosis y 81 mg/kg/dosis. IPM(LYS)2 se administro ip a dosificaciones de 84 mg/kg/dosis y 56 mg/kg/dosis y po a dosificaciones de 280 mg/kg/dosis y 187 mg/kg/dosis. Los grupos de control se trataron ya sea ip o po con el veldculo (solucion salina).
Medidas del Tumor y Pesos Corporales: Los tumores sc se midieron y los animales se pesaron dos veces a la semana comenzando con el primer dfa de tratamiento. El volumen tumoral se determino mediante medidas con calibre (mm) y usando la formula para una esfera elipsoide:
en la que L y W se refieren a las dimensiones perpendiculares mayor y menor tomadas en cada medida. Esta formula tambien se usa para calcular el peso del tumor, suponiendo una densidad unitaria (1 mm3 = 1 mg).
Duracion del Estudio: El estudio se termino a los 50 dfas despues del implante del tumor. Cualquier animal que llegaba a estar moribundo o cuyos tumores se habfan ulcerado o alcanzado 4.000 mg se sacrificaron antes de la finalizacion del estudio.
Parametros Evaluados: Se determino el numero de muertes no espedficas, numero de regresiones tumorales parciales y completas, numero de supervivientes libres de tumor, y los tiempos para alcanzar dos duplicaciones de la masa tumoral de los animales individuales. El tiempo medio para alcanzar dos duplicaciones de la masa tumoral en los grupos de tratamiento (T) y grupo de control (C) se uso en el calculo del retardo global en el crecimiento del tumor medio (T-C).
Analisis Estadfstico: El tiempo para alcanzar dos duplicaciones de la masa tumoral del animal individual se uso como el punto final en un ensayo de t de Student/suma de clasificacion de Mann Whitney o analisis de tablas de vida con el fin de comparar estadfsticamente los datos de crecimiento entre grupos. Un analisis de tablas de vida (estimacion de Kaplan-Meier estratificada seguido del ensayo de clasificacion logantmica de Mantel-Haenszel) permite la comparacion de los datos de crecimiento entre grupos usando los animales cuyos tumores no alcanzaron el punto de evaluacion excluyendolos.
Resultados
Los tumores en ambos grupos de control tratados con vehfculo crecieron bien en los 10 ratones. El tumor medio alcanzo dos duplicaciones de la masa tumoral en 7,4 y 7,2 dfas, respectivamente, para los grupos tratados ip y tratados po. No se produjo perdida en el peso corporal medio para estos dos grupos durante el estudio.
La administracion intraperitoneal de IPM Tris a dosificaciones de 36 mg/kg/dosis y 24 mg/kg/dosis provocaron retrasos en el crecimiento del tumor (T-C) de 10,2 y 7,7 dfas, respectivamente. La dosificacion mas elevada presento un superviviente libre de tumor. Ambas dosificaciones se toleraban bien con perdidas maximas en el peso corporal medio de un 10% (2 g) y de un 0% para dosificaciones de 36 mg/kg/dosis y 24 mg/kg/dosis, respectivamente. La administracion intraperitoneal de IPM a dosificaciones de 36 mg/kg/dosis y 24 mg/kg/dosis provocaron retrasos en el crecimiento del tumor de 5,2 y 2,6 dfas, respectivamente. Ambas dosificaciones se toleraban bien con perdidas maximas en el peso corporal medio de un 0% y un 5% (1 g) para dosificaciones de 36 mg/kg/dosis y 24 mg/kg/dosis, respectivamente. Los tiempos para alcanzar dos duplicaciones de la masa tumoral para IPM eran estadfsticamente menores que aquellos para la dosificacion correspondiente de IPM Tris (p = 0,000 para la dosificacion de 36 mg/kg/dosis; p = 0,021 para la dosificacion de 24 mg/kg/dosis). La administracion intraperitoneal de IPM (LYS)2 a dosificaciones de 84 mg/kg/dosis y 56 mg/kg/dosis, que corresponden a dosificaciones de IPM de 36 mg/kg/dosis y 24 mg/kg/dosis, provocaron retrasos en el crecimiento del tumor de 24,3 y 9.0 dfas, respectivamente. La dosificacion mas elevada de IPM (LYS)2 era toxica - dos ratones murieron en el dfa 20 y dos se sacrificaron debido a su estado
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moribundo o perdida excesiva del peso corporal. La dosificacion mas baja de IPM(LYS)2 se toleraba con una perdida maxima del peso corporal medio de un 15% (3 g). La dosificacion de IPM(LYS)2 tolerada presentaba una actividad comparable con la de IPMTris a una dosificacion correspondiente de 24 mg/kg/dosis (p = 0,766) y una actividad superior que la de IPM a una dosificacion correspondiente de 24 mg/kg/dosis (p = 0,0047).
La administracion oral de IPMTris a dosificaciones de 120 mg/kg/dosis y 81 mg/kg/dosis provocaron retrasos en el crecimiento del tumor de 8,7 y 9,0 dfas, respectivamente. La dosificacion mas elevada de IPM Tris provoco una perdida maxima en el peso corporal medio de un 15% (3 g) con un raton siendo sacrificado debido a un peso corporal inferior a 14 g. La dosificacion mas baja se toleraba con una perdida maxima del peso corporal medio de un 10% (2 g). La administracion oral de IPM a dosificaciones de 120 mg/kg/dosis y 81 mg/kg/dosis provocaron retrasos en el crecimiento del tumor de 4,6 y 4,0 dfas, respectivamente. Ambas dosificaciones se toleraban bien con una perdida maxima del peso corporal medio de un 5% (1 g). Los tiempos para alcanzar dos duplicaciones de la masa tumoral no eran estadfsticamente diferentes de los tiempos para la dosificacion correspondiente de IPM Tris (p = 0,1174 para la dosificacion de 120 mg/kg/dosis; p = 0,1152 para la dosificacion de 81 mg/kg/dosis). La administracion oral de IPM(LYS)2 a dosificaciones de 280 mg/kg/dosis y 187 mg/kg/dosis, que corresponden a dosificaciones de IPM de 120 mg/kg/dosis y 81 mg/kg/dosis, provocaron retrasos en el crecimiento del tumor de 5,0 y 3,5 dfas, respectivamente. Ambas dosificaciones se toleraban bien con perdidas maximas en el peso corporal medio de un 5% (1 g) y un 0%. La dosificacion mas elevada de IPM(LYS)2 presentaba actividad comparable tanto con la de IPM Tris como con la de IPM a una dosificacion correspondiente de 120 mg/kg/dosis (p = 0,1000 y p = 0.9143, respectivamente). La dosificacion mas baja de IPM(LYS)2 presentaba una actividad inferior a la de IPM Tris a una dosificacion correspondiente de 81 mg/kg/dosis (p = 0,0290) y una actividad comparable con la de IPM a una dosificacion correspondiente de 81 mg/kg/dosis (p = 0,3073).
Sumario de la Tabla de Analisis Estadfstico
- Pares del Grupo
- Valor de p
- 2 con respecto a 4
- o o o o
- 3 con respecto a 5
- CM O cT
- 3 con respecto a 7
- 0,7661
- 5 con respecto a 7
- 0,00472
- 9 con respecto a 11
- 0,11743
- 9 con respecto a 13
- 0,10003
- 11 con respecto a 13
- 0,91433
- 10 con respecto a 12
- 0,11523
- 10 con respecto a 14
- 0,02903
- 12 con respecto a 14
- 0,30733
- 1 Analisis de tablas de vida 2 Ensayo de suma de clasificacion de Mann-Whitney 3 Ensayo de t de Student
La respuesta de los xenoinjertos de tumor de mama humano MX-1 al tratamiento con (1) vehnculo - ip y po, (2) IPM Tris, IPM, e IPM(LYs)2 ip, y (3) IPM Tris, IPM, e IPM(LYS)2 po se muestra en las Figuras 13, 14, y 15, respectivamente.
Conclusion
Para la administracion ip de dosificaciones de IPM equivalentes la actividad antitumoral de IPM Tris era superior a la de IPM (ambas dosificaciones) y comparable con la de IPM (LYS)2 (ambas dosificaciones). Para la administracion po de dosificaciones equivalentes de IPM, la actividad antitumoral de IPM Tris era comparable con la de IPM (ambas dosificaciones), comparable con la de IPM (LYS)2 a la dosificacion mas elevada, y superior a la de IPM (LYS)2 a la dosificacion mas baja.
Ejemplo 8
Materiales y Metodos
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Cuidado Animal: Se adquirieron ratones NCr-nu/nu atfmicos hembra de cinco semanas de edad en Harlan (Prattville, AL).
Modelo Tumoral: Se implantaron fragmentos de treinta a cuarenta mg de tumor de mama humano MX-1 mantenidos en un pasaje in vivo sc en ratones en el pamculo adiposo mamario usando una aguja trocar del calibre 12 y se permitio que crecieran. El dfa del implante del tumor se denomino dfa 0. Se permitio que los tumores alcanzaran un peso de 113-245 mg (tamano de 113-245 mm3) antes del comienzo del tratamiento. Un numero suficiente de ratones fueron implantados de modo que los tumores en un intervalo de peso lo mas estrecho posible se seleccionaron para el ensayo en el dfa del comienzo del tratamiento (dfa 6 despues del implante del tumor). Esos animales seleccionados con tumores en el intervalo de tamano apropiado se asignaron a los diversos grupos de tratamiento de modo que los pesos medios del tumor en el primer dfa de tratamiento estaban tan proximos entre sf como era posible (144-162 mg).
Formulacion del Farmaco: IPMTris (205 mg de IPM/vial, Cardinal Health) que se puede preparar como se ha descrito en el Ejemplo 1, se formulo en solucion salina cada dfa de tratamiento a una concentracion de 13,5 mg/ml y despues se diluyo con solucion salina hasta las concentraciones de dosificacion mas bajas de 9 mg/ml, 6 mg/ml, 4,05 mg/ml, 2,7 mg/ml, 1,8 mg/ml, y 1,2 mg/ml. La IPM (Eagle-Picher Pharmaceutical Service) se formulo en solucion salina cada dfa de tratamiento a una concentracion de 6,0 mg/ml y despues se diluyo con solucion salina hasta las concentraciones de dosificacion mas bajas de 4,05 mg/ml, 1,8 mg/ml, y 1,2 mg/ml. La IPM(LYS)2 (100 mg de IPM-Lisina/vial, Universidad de Iowa) se formulo en solucion salina cada dfa de tratamiento a una concentracion de 14 mg/ml y despues se diluyo con solucion salina hasta las concentraciones de dosificacion mas bajas de 9,35 mg/ml, 4,2 mg/ml, y 2,8 mg/ml. Todas las soluciones de dosificacion se mantuvieron en hielo despues de la formulacion y se administraron en 30 min. Todas las inyecciones se administraron sobre la base del peso corporal exacto con el volumen de inyeccion siendo 0,2 ml/10 g de peso corporal.
Tratamiento con el Farmaco: El experimento consistfa en 16 grupos de tratamiento de ocho ratones por grupo y dos grupos de control tratados con vehfculo con diez ratones para un total de 148 ratones en el primer dfa de tratamiento. Todos los agentes (y vehfculo) se administraron diariamente durante cinco dfas consecutivos (q1d x 5). IPM Tris ip a dosificaciones de 81 mg/kg/dosis, 54 mg/kg/dosis, 36 mg/kg/dosis, y 24 mg/kg/dosis y po a dosificaciones de 270 mg/kg/dosis, 180 mg/kg/dosis, 120 mg/kg/dosis y 81 mg/kg/dosis. La IPM se administro ip a dosificaciones de 36 mg/kg/dosis y 24 mg/kg/dosis y po a dosificaciones de 120 mg/kg/dosis y 81 mg/kg/dosis. La IPM (LYS)2 se administro ip a dosificaciones de 84 mg/kg/dosis y 56 mg/kg/dosis y po a dosificaciones de 280 mg/kg/dosis y 187 mg/kg/dosis. Los grupos de control se trataron ya sea ip (grupo n° 1) o po (grupo n° 10) con el vehfculo (solucion salina).
Medidas del Tumor y Pesos Corporales: Los tumores sc se midieron y los animales se pesaron dos veces a la semana comenzando con el primer dfa de tratamiento. El volumen tumoral se determino mediante medidas con calibre (mm) y usando la formula para una esfera elipsoide:
en la que L y W se refieren a las dimensiones perpendiculares mayor y menor tomadas en cada medida. Esta formula tambien se usa para calcular el peso del tumor, suponiendo una densidad unitaria (1 mm3 = 1 mg).
Duracion del Estudio: El estudio se termino a los 52 dfas despues del implante del tumor. Cualquier animal que llegaba a estar moribundo o cuyos tumores se habfan ulcerado o alcanzado 4.000 mg se sacrificaron antes de la finalizacion del estudio.
Parametros Evaluados: Se determino el numero de muertes no espedficas, numero de regresiones tumorales parciales y completas, numero de supervivientes libres de tumor, y los tiempos para alcanzar dos duplicaciones de la masa tumoral de los animales individuales. El tiempo medio para alcanzar dos duplicaciones de la masa tumoral en los grupos de tratamiento (T) y grupo de control (C) se uso en el calculo del retardo global en el crecimiento del tumor medio (T-C).
Analisis Estadfstico: El tiempo para alcanzar dos duplicaciones de la masa tumoral del animal individual se uso como el punto final en un ensayo de t de Student/suma de clasificacion de Mann Whitney con el fin de comparar estadfsticamente los datos de crecimiento entre grupos.
Resultados
Los tumores en ambos grupos de control tratados con vehfculo crecieron bien en los 10 ratones. El tumor medio alcanzo dos duplicaciones de la masa tumoral en 9,2 y 8,9 dfas, respectivamente, para los grupos tratados ip y tratados po. No se produjo perdida en el peso corporal medio para estos dos grupos durante el estudio.
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La administracion intraperitoneal de IPMTris a una dosificacion de 81 mg/kg/dosis era toxica para los ratones, provocando tres muertes y una eutanasia debido al estado moribundo y una perdida maxima en el peso corporal medio de un 20% (4,5 g). Las dosificaciones mas bajas de 54 mg/kg/dosis, 36 mg/kg/dosis, y 24 mg/kg/dosis se
toleraban con perdidas maximas en el peso corporal medio de un 5% (1,2 g), un 6% (1,3 g), y un 1% (0,2 g),
respectivamente. Las dosificaciones de 54 mg/kg/dosis, 35 mg/kg/dosis, y 24 mg/kg/dosis provocaron retrasos en el crecimiento del tumor (T-C) de 4,4, 3,3, y 0,9 dfas, respectivamente. La administracion intraperitoneal de IPM a dosificaciones de 36 mg/kg/dosis y 24 mg/kg/dosis provoco retrasos en el crecimiento del tumor de 1,1 y 0,3 dfas, respectivamente. Ambas dosificaciones se toleraban bien con perdidas maximas en el peso corporal medio de un 8% (1,8 g) y un 2% (0,4 g) para dosificaciones de 36 mg/kg/dosis y 24 mg/kg/dosis, respectivamente. Los tiempos para alcanzar dos duplicaciones de la masa tumoral para IPM eran estadfsticamente menores que los de las dosificaciones toleradas mas elevadas de IPM Tris pero estadfsticamente los mismos que la dosificacion
correspondiente de IPM Tris (p = 0,0148 para la dosificacion de 54 mg/kg/dosis; p = 0,1879 para la dosificacion de
36 mg/kg/dosis). La administracion intraperitoneal de IPM*LYS)2 a dosificaciones de 84 mg/kg/dosis y 56 mg/kg/dosis, que corresponden a dosificaciones de IPM de 36 mg/kg/dosis y 24 mg/kg/dosis, provocaron retrasos en el crecimiento del tumor de 0,5 y 0,3 dfa, respectivamente. Ambas dosificaciones se toleraban bien con perdidas maximas en el peso corporal medio de un 1% (0,3 g) y un 0% para dosificaciones de 36 mg/kg/dosis y 24 mg/kg/dosis, respectivamente. Los tiempos para alcanzar dos duplicaciones de la masa tumoral para IPM(LYS)2 eran estadfsticamente menores que para la dosificacion tolerada mas elevada de IPM Tris el estadfsticamente la misma que la dosificacion correspondiente de IPM Tris (p = 0,0104 para la dosificacion de 54 mg/kg/dosis; p = 0,1578 para la dosificacion de 36 mg/kg/dosis).
La administracion oral de IPM Tris a dosificaciones de 270 mg/kg/dosis, 180 mg/kg/dosis, y 120 mg/kg/dosis era toxica para los ratones, provocando ocho muertes/eutanasia debido al estado moribundo, siete muertes, y tres muertes, respectivamente. Las dosificaciones de 180 mg/kg/dosis y 120 mg/kg/dosis provocaron perdidas maximas en el peso corporal medio de un 23% (5,3 g) y un 20% (4,7 g), respectivamente. La dosificacion mas baja de 81 mg/kg/dosis se toleraba con una perdida maxima del peso corporal medio de un 10% (2,2 g). La dosificacion de 81 mg/kg/dosis provoco un retraso del crecimiento tumoral de 2,6 dfas. La administracion oral de IPM a una dosificacion de 120 mg/kg/dosis era toxica para los ratones, provocando dos muertes y una perdida maxima del peso corporal medio de un 18% (3,8 g). La dosificacion mas baja de 81 mg/kg/dosis se toleraba con una perdida maxima del peso corporal medio de un 9% (2 g) y provoco un retraso del crecimiento tumoral de 2,3 dfas. Los tiempos para alcanzar dos duplicaciones de la masa tumoral no eran estadfsticamente diferentes de los tiempos para la dosificacion correspondiente de IPM Tris (p = 0,2932 para la dosificacion de 81 mg/kg/dosis). La administracion oral de IPM (LYS)2 a dosificaciones de 280 and 187 mg/kg/dosis, que corresponden a dosificaciones de IPM de 120 mg/kg/dosis y 81 mg/kg/dosis, provocaron retrasos en el crecimiento del tumor de 3,9 y 4,7 dfas, respectivamente. Ambas dosificaciones se toleraban bien con perdidas maximas en el peso corporal medio de un 14% (3 g) y un 7% (1,6 g). La dosificacion mas baja de IPM(LYS)2 presentaba una actividad similar a la de IPM Tris a una dosificacion correspondiente de 81 mg/kg/dosis (p = 0,8785).
Sumario de la Tabla de Analisis Estadfstico
- Pares del Grupo Valor de p
- 1 con respecto a 3
- 0,00101
- 1 con respecto a 6
- 0,02302
- 1 con respecto a 8
- 0,14562
- 3 con respecto a 6
- 0,0148'
- 3 con respecto a 8
- 0,0104'
- 4 con respecto a 6
- 0,18792
- 4 con respecto a 8
- 0,15782
- 10 con respecto a 14
- 0,00532
- 10 con respecto a 16
- 0,02341
- 10 con respecto a 17
- 0,00391
- 14 con respecto a 16
- 0,29322
- 14 con respecto a 17
- 0,72091
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25
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Pares del Grupo
Valor de p
14 con respecto a 18
0,8785'
1 Ensayo de suma de clasificacion de Mann-Whitney
2 Ensayo de t de Student
La respuesta de los xenoinjertos de tumor de mama humanos MX-1 al tratamiento con (1) vehnculo - ip y po, (2) IPMTris, IPM, e IPM(LYS)2 ip, y (3) IPMTris, IPM, e IPM(LYS)2 po se muestra en las Figuras 16, 17, y 18, respectivamente.
Conclusiones
Para la administracion ip de dosificaciones de IPM equivalentes la actividad antitumoral de IPM Tris era comparable tanto con la de IPM como con la de IPM(LYS)2 (dosificacion mas elevada). La dosificacion mas baja era inactiva frente al tumor MX-1 en este estudio. La dosificacion mas elevada tolerada de IPM Tris era superior a la dosificacion mas elevada sometida al ensayo de cualquiera de IPM o IPM(LYS)2. Para la administracion po de dosificaciones equivalentes de IPM, la actividad antitumoral de la IPM Tris era comparable tanto con la de IPM como con la de IPM (LYS)2 a la dosificacion mas baja. La dosificacion de 120 mg/kg/dosis era toxica para los ratones tanto para IPMTris como para IPM.
En el estudio de MX-1 mencionado anteriormente (Ejemplo 7) para administracion ip de dosificaciones de IPM equivalentes la actividad antitumoral de IPM Tris era superior a la de IPM (ambas dosificaciones) y comparable con la de IPM (LYS)2 (ambas dosificaciones). Para la administracion po de dosificaciones equivalentes de IPM, la actividad antitumoral de IPM Tris era comparable con la de IPM (ambas dosificaciones), comparable con la de IPM (LYS)2 a la dosificacion mas elevada, y superior a la de IPM(LYS)2 a la dosificacion mas baja.
Al comparar los dos estudios, la actividad de los tres agentes cuando se administran ip era inferior en este estudio (por ejemplo, para IPM Tris a una dosificacion de 36 mg/kg/dosis - valor de T-C de 10,2 dfas con respecto a 3,3 dfas; para IPM a una dosificacion de 36 mg/kg/dosis - valor de T-C de 5/2 dfas con respecto a 1,1 dfas; y para IPM (LYS)2 a una dosificacion de 56 mg/kg/dosis - valor de T-C de 9,0 dfas con respecto a 0,3 dfas). La actividad de IPM Tris cuando se administraba po tambien era menor ( valores comparables para IPM e IPM(LYS)2) en este estudio (por ejemplo, para IPM Tris a una dosificacion de 81 mg/kg/dosis - valor de T-C de 9,0 dfas con respecto a 2,6 dfas; para IPM a una dosificacion de 81 mg/kg/dosis - valor de T-C de 4,0 dfas con respecto a 2,3 dfas; y para IPM (LYS)2 a una dosificacion de 280 mg/kg/dosis - valor de T-C de 5,0 dfas con respecto a 3,9 dfas). La razon o razones para la disminucion de la actividad no son evidentes, dada la variacion de estudio a estudio con tales sistemas biologicos. Con respecto al componente tumoral del estudio, los tumores de control tratados con vehfculo crecieron a tasas comparables en los dos estudios. Los pesos medios del tumor en el primer dfa de tratamiento eran ligeramente mayores en el Ejemplo 7 (intervalo de 172-197 mg) que en este ejemplo (intervalo de 144-162 mg); sin embargo, esta pequena diferencia no tendna efecto significativo en la actividad antitumoral.
Ejemplo 9
Materiales y Metodos
Tres grupos de ocho ratones se trataron con IPM Tris, que se puede preparar como se ha descrito en el Ejemplo 1, tres grupos de ocho ratones se trataron con doxorrubicina, un grupo de diez ratones se trato con vehfculo, y dieciocho grupos de ocho razones se trataron con la combinacion de IPMTris/doxorrubicina. Se implantaron fragmentos de tumor MX-1 (30-40 mg, de un pasaje in vivo) por via subcutanea en el pamculo adiposo mamario de ratones desnudos atfmicos hembra. La IPM Tris (o su vehfculo) se administro por via intraperitoneal diariamente durante cinco dfas consecutivos (Q1dx5) a tres dosificaciones (12 mg/kg/dosis, 24 mg/kg/dosis, y 54 mg/kg/dosis), en las que la formulacion de IPM Tris esta formada por 258,9 mg de IPM (PM 221,02), 141,9 mg de base de Tris (PM 121,14, proporcion molar de IPM:base de Tris a 1:1), y Manitol al 3%. Se administro doxorrubicina (o su vehnculo) por via intravenosa cada cuatro dfas para tres inyecciones (Q4dx3) a 8 mg/kg/dosis). Las soluciones de dosificacion se prepararon en el dfa de tratamiento y las soluciones de dosificacion de IPM Tris se mantuvieron en hielo una vez preparadas.
El tratamiento comenzo cuando los tumores teman un tamano de aproximadamente 175 mg (intervalo de 100 mg a 250 mg). Cada tumor se midio con calibre en dos dimensiones y se convirtio en masa tumoral usando la formula para una elipsoide alargada (a x b2/2), en la que a es la dimension mayor y b es la dimension menor, suponiendo una densidad unitaria (1 mm3 = 1 mg). Las medidas del tumor se registraron dos veces a la semana y la actividad antitumoral se evaluo mediante el retardo del crecimiento tumoral en los grupos tratados en comparacion con el grupo de control tratado con vehfculo, regresiones parciales y completas, y supervivientes libres de tumor. Observese que cuando IPM Tris se administraba a 54 mg/kg/dfa en combinacion con doxorrubicina a 8 mg/kg/dfa, dos animales en el grupo de combinacion murieron pronto debido a la toxicidad. Los resultados se pueden observar
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65
en las figuras 19-25.
La combinacion de IPMTris con doxorrubicina dio como resultado una actividad antitumoral significativa, en la que la inhibicion del crecimiento tumoral por la combinacion superaba la observada con la administracion con un solo agente y la combinacion aumentaba de forma significativa la supervivencia en comparacion con la administracion con un solo agente. De hecho, el efecto de la combinacion muestra una eficacia sinergica, es decir, mayor que la eficacia aditiva en comparacion con los agentes administrados de forma individual en dosis similares, incluso cuando la dosificacion de IPM Tris sola es tan baja como para proporcionar poca o ninguna mejora cuando se compara con un animal de control tratado con vetnculo. Aunque los pesos de los animales en los grupos de combinacion se redujeron durante el tratamiento (los pesos medios del animal se redujeron en un 20% al final de la dosificacion en el dfa 22), se recuperaron rapidamente una vez que la dosificacion termino (se observo una recuperacion total hacia el dfa 38), lo que sugiere que la toxicidad era reversible. Estos datos sugieren que la terapia de combinacion con IPM Tris y doxorrubicina puede servir para el tratamiento de cualquier cancer que responde a cualquiera de doxorrubicina o IPM Tris como agentes individuales o en combinacion, que incluyen, pero no se limitan a, cancer de mama, cancer de ovario, y sarcoma.
Ejemplo 10
Se implantaron fragmentos (de 30 a 40 mg cada uno) de tumores de mama humanos MX-1 a partir de un pasaje in vivo por via subcutanea en ratones desnudos en el pamculo adiposo mamario y se permitio que alcanzaran un peso de 75 mg a 198 mg antes del comienzo del tratamiento. La IPM Tris (54 mg/kg), que se puede preparar como se ha descrito en el Ejemplo 1, y docetaxel (10 mg/kg) se administraron Q1Dx5 IP y Q6Dx3 IV, respectivamente, comenzando diez dfas despues del implante del tumor. La combinacion de los dos agentes demostro un aumento del efecto antitumoral en comparacion con cualquier agente administrado como un solo agente tal como se observa en la Figura 26.
Ejemplo 11
Se implantaron fragmentos (de 30 a 40 mg cada uno) de tumores de mama humanos MX-1 a partir de un pasaje in vivo por via subcutanea en ratones desnudos en el pamculo adiposo mamario y se permitio que alcanzaran un peso de 75 mg a 198 mg antes del comienzo del tratamiento. Se encontro que IPM Tris (36 mg/kg), que se puede preparar como se ha descrito en el Ejemplo 1, administrada IP supriirna el crecimiento del tumor hasta aproximadamente el mismo alcance que IPM Tris (81 mg/kg) administrada PO como se observa en la Figura 27. Ademas, la administracion oral o sistemica de IPM Tris dio como resultado aumentos similares en la supervivencia de ratones portadores de xenoinjerto de MX-1. La supervivencia media del grupo IP fue de 39 dfas, la supervivencia media del grupo PO fue de 37,5 dfas, y la supervivencia media del grupo de control de vetnculo fue de 30 dfas como se observa en la Figura 28. La actividad antitumoral equivalente de estas dosis PO e IP esta dentro del intervalo esperado para la PK de IPM Tris administrada por via oral y por via sistemica.
Ejemplo 12
Se administro IPM Tris a ratas Sprague-Dawley, que se puede preparar como se ha descrito en el Ejemplo 1, una vez al dfa mediante sonda (PO) o inyeccion IV en bolo. La IPM Tris se administro en dosis de 20 mg/kg, 30 mg/kg, o 40 mg/kg y se obtuvieron muestras de sangre para evaluacion PK antes de la dosis y a las 0,5, 1, 2, 4, 6, 8, 12, y 24 horas despues de la dosis desde el seno retro orbital. Se muestrearon tres animales por grupo en cada punto temporal. Los resultados PK para la dosis previa, 0,5, 1, 2, y 4 horas se muestran en la Figura 29 en la que parece que el Tmax es de aproximadamente 0,5 horas. Los calculos del t-i/2 terminal variaban de 0,25 a 0,64 horas. Para cada dosis, se usaron valores del AUC para calcular la bioequivalencia absoluta de IPM Tris administrada por via oral como la proporcion (AUC despues de la dosis PO)/(AUC despues de la dosis IV). Los valores del AUC para cada dosis se muestran en la Figura 30 y los valores de Cmax para cada dosis se muestran en la Figura 31. Los valores tanto de AUC como de Cmax aumentaron linealmente con el aumento de la dosis de IPM Tris administrada PO o IV.
La biodisponibilidad de las dosis PO de 20 mg/kg, 30 mg/kg, y 40 mg/kg de IPM Tris eran de un 48%, un 65%, y un 73%, respectivamente. La biodisponibilidad media global era de un 62% en hembras. Se observo una PK similar en ratas; sin embargo, se estimo que la biodisponibilidad media en machos era de un 41%.
Ejemplo 13
Estabilidad de la Solucion de IPM Tris/Manitol e IPM(LYS)2
La estabilidad reconstituida de la formulacion de IPM Tris se evaluo en solucion de cloruro sodico al 5% para inyeccion. Se encontro que la concentracion de IPM mantema una potencia > 90% hasta durante 2,0 horas.
La formulacion de IPM(LYS)2 se evaluo en solucion de cloruro sodico al 0,9% para inyeccion. Se encontro que la concentracion de IPM mantema una potencia > 90% hasta durante 1,0 hora.
5
10
15
20
25
30
Estabilidad de la Solucion de IPMTris/Manitol
La Tabla 1 presenta datos de estabilidad de reconstitucion para IPMTris/manitol en presencia de 25 ml de solucion de cloruro sodico al 5% para inyeccion. Se tomaron alfcuotas en los tiempos objetivo de ~1 h, 1,5 horas, 2,5 horas, 3,5 horas, 4,0 horas, y 5,0 horas. Las muestras se analizaron en cuanto a la potencia de IPM.
Tabla 1. Estabilidad de Reconstitucion de IPM Tris/Manitol en Presencia de Solucion de Cloruro Sodico al 5%
- Tiempo de Reconstitucion (horas)
- % de Potencia basada en el Contenido del Vial de IPM Original
- 0
- 100
- 1
- 94
- 2
- 90
- 3
- 86
- 4
- 81
- 6
- 74
Estabilidad de la Solucion de IPM(LYS)2
La Tabla 2 presenta datos de estabilidad de reconstitucion para IPM(LYS)2 en presencia de 25 ml de solucion de cloruro sodico al 0,9% para inyeccion. Se tomaron alfcuotas en los tiempos objetivo de ~1 h, 2 horas, 2,5 horas, 3,5 horas, 4,0 horas, y 5,0 horas. Las muestras se analizaron en cuanto a la potencia de IPM(LYS)2.
Tabla 2. Estabilidad de Reconstitucion de IPM(LYS)2 en Presencia de Solucion de Cloruro Sodico al 0,9%
- Tiempo de Reconstitucion (horas)
- % de Potencia basada en el Contenido del Vial de IPM(LYS)2 Original
- 0
- 100
- 1
- 90
- 2
- 79
- 2.5
- 71
- 3.5
- 64
- 4
- 57
- 5
- 51
Conclusion
La formulacion de IPM/trometamina/manitol mantiene una potencia de un 90% durante 2,0 horas cuando se somete a cloruro sodico al 5% en solucion. La formulacion de IPM(LYS)2 mantiene una potencia de un 90% durante 1,0 obra en presencia de cloruro sodico al 0,9%. La diferencia en la estabilidad de reconstitucion (potencia > 90%) entre las dos formulaciones es de 1,0 horas, un factor de dos. El aumento del tiempo de estabilidad puede ayudar a los trabajadores medicos durante la preparacion y administracion del producto farmacologico.
Ejemplo 14
Estabilidad de la Solucion de IPM
La estabilidad reconstituida de la formulacion de IPM se evaluo en tampon a pH 7 a aproximadamente 25°C durante 3,5 horas tal como se muestra a continuacion en la Tabla 3 y en la Figura 32.
Tiempo de Reconstitucion (horas)
% de Pureza
- Tiempo de Reconstitucion (horas)
- % de Pureza
- 0
- 100,00%
- 0,5
- 89,5%
- 1,0
- 80,3%
- 1,5
- 72,2%
- 2,0
- 64,8%
- 2,5
- 57,4%
- 3,0
- 52,1%
- 3,5
- 47,0%
Estabilidad de la Solucion de IPMTris/Manitol
La Tabla 4 presenta datos de estabilidad de la reconstitucion para IPM Tris/Manitol en presencia de 25 ml de 5 solucion de cloruro sodico al 5% para inyeccion. Se tomaron alfcuotas en los tiempos objetivo de 1,5 horas, 3,0 horas, y 4,5 horas.
- Tiempo de Reconstitucion (horas)
- Pureza (%)
- 0
- 99,80
- 1,5
- 99,72
- 3,0
- 99,49
- 4,5
- 99,50
Estabilidad de la Solucion de IPM(LYS)2
10
La Tabla 5 presenta datos de estabilidad de la reconstitucion para IPM(LYS)2 en presencia de 25 ml de solucion de cloruro sodico al 0,9% para inyeccion. Se tomaron alfcuotas en los tiempos objetivo de 1,5 horas, 3,0 horas, y 4,5 h.
- Tiempo de Reconstitucion (horas)
- Pureza (%)
- 0
- 97,48
- 1,5
- 96,97
- 3,0
- 92,54
- 4,53
- 95,37
15 Ejemplo 15
Estabilidad de IPMTris Solida
- Un mes Dos meses Tres meses
- Pureza (% de area)
- -20°C 100,0% 100,0% 100,0%
- 5°C
- 99,9% 100,0 100,0%
- 25°C
- 100,0% 99,8% 99,9%
- Potencia (% de contenido de IPM en p/p)
- -20°C 100,5% 100,4% 102,4%
- 5°C
- 101,3% 99,6% 102,3%
- Un mes Dos meses Tres meses
- 25°C 97,8% 90,9% 80,8%
Estabilidad del liofilizado de IPMTris/Manitol Solido
- Tiempo cero 1 mes 3 meses 6 meses 9 meses
- Pureza (%
- -70°C 98,5% 98,7% 98,7% 99,7% 99,8%
- de area)
- -20°C 98,5% 98,6% 99,1% 99,3% 99,8%
- 5°C
- 98,5% 99,1% 98,9% 99,2% 99,8%
5
Estabilidad del liofilizado de IPM(LYS)2 Solido
- Tiempo cero 1 mes 3 meses 6 meses 9 meses 12 meses 18 meses 24 meses
- Pureza (% de area)
- -70°C 99,8% 98,8% 98,8% 99,5% 99,8% 99,6% 100,0% 100,0%
- -20°C
- 99,8% 98,4% 98,5% 96,0% 96,9% 97,1%
- 5°C
- 99,8% 93,1% 54,8% 49,2%
Ejemplo 16
10
- Condicion
- Acido Libre de IPM (API) Sal de IPM-Tris (API) IPM-lisina Inyectable IPM-Tris- Manitol Inyectable
- Sumario de Datos de Estabilidad Actual
- Sin cambio en la pureza a -70°C, 2 anos Sin cambio en la pureza a 5°C, 3 meses Sin cambio en la pureza a -70°C, 2 anos Sin cambio en la pureza a 5°C, 1 ano
- Temperatura de Almacenamiento a Largo Plazo
- -70°C 5°C -70°C 5°C
- Solubilidad a 25°C (solucion salina)
- 14 mg/ml ~1400 mg/ml 20 mg/ml 80 mg/ml
- Tiempo de Solubilidad para Reconstitucion
- ND ND < 40 segundos < 30 segundos
- Estabilidad de Reconstitucion a 25°C
- ND ND 45 minutos 2,5 horas
- Estabilidad en 250 ml de solucion salina al 0,9%
- ND ND potencia > 90% durante 15 min potencia > 90% durante 45 min
- pH
- 3,02 ND 8,5 5,0
Claims (4)
- REIVINDICACIONES1. Un liofilizado que comprende un analogo de IPM que tiene una estructura de formula (I)oA+»'0-P-NHCH2CH2Xnhch2ch2y5 (I)1015y de 1% a 10% (p/v) de manitol,en la que A+ es un contraion de amonio alifatico hidroxilado; yX e Y representan independientemente grupos salientes seleccionados entre halogenos.
- 2. El liofilizado de la reivindicacion 1, en el que A+ representa una amina protonada seleccionada de mono-, bis- o tris-(2-hidroxietil)amina, 2-hidroxi-terc-butilamina, N,N-dimetil-N-(2-hidroxietil)amina, y tris(hidroximetil)aminometano (Tris), opcionalmente Tris, en la que el liofilizado opcionalmente es estable a temperatura ambiente durante al menos un mes, opcionalmente durante al menos dos meses.
- 3. El liofilizado de la reivindicacion 1 o 2, en el que el liofilizado comprende de 1% a 5% (p/v) de manitol.
- 4. El liofilizado de la reivindicacion 1 o 2, en el que X e Y son iguales.20 5. El liofilizado de la reivindicacion 4, en el que X e Y son ambos Cl.
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Family Applications (1)
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2008
- 2008-04-04 ES ES13150037.3T patent/ES2565069T3/es active Active
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