TW200902012A - Triazolyl aminopyrimidine compounds - Google Patents

Description

200902012 九、發明說明： 【先前技術】

Plk 1屬於特徵在於稱為polo盒結構域之磷酸絲胺酸/蘇胺 酸結合結構域的蛋白激酶小家族。Plk 1在細胞週期調節中 發揮重要作用。除其他功能外，據認為Plkl調節有絲分裂 (癌細胞分裂階段）之開始、進展及退出。因此，阻斷癌細 胞中之Plkl可防止癌細胞分裂或有絲分裂。 已鑑別出干擾有絲分裂之有效抗癌劑，例如長春花生物 鹼（NAVELBINE®)、紫杉烷（TAXOTERE®)及拓撲異構酶II 抑制劑（ADRIAMYCIN®)。VELCADE®係抑制26S蛋白體 之抗腫瘤劑。然而，該等藥物對正常非分裂細胞造成相當 大的副作用。Plk抑制劑特異性地靶向分裂細胞且能夠避 免不期望之毒性。

Plkl抑制劑已為熟習此項技術者所習知。參見例如， WO 06/066172。另外，WO 06/021548揭示某些作為 Plkl抑 制劑之二氫蝶啶酮類似物（例如，BI-2536)。當前，BI-2536正在II期臨床試驗中，但其具有較高之清除率（CL >1000 mL/min)且在人類中由於存在骨髓抑制作用而使劑 量受限。仍需要抑制Plk 1且具有改良之效力或藥物代謝動 力學特性之其他化合物。 【發明内容】 本發明提供據信藉由抑制Plkl對癌症治療具有臨床用途 之新穎三唑基胺基嘧啶化合物。據信某些該等化合物具有 優於揭示於WO 06/066 172中之化合物的改良效力。另外， 130204.doc 200902012 據信某些本發明化合物具有優於βι_2536< 謝動力學特性(例如，清除率)。此外，由於所測試= 明化合物的口服生物； 1 -V» ^ -Η- 矛J用度，口人^為某些該等化合 經口服用。 本發明提供式I化合物：

其中： 2係虱、甲基、環丙基、環丙基胺基（Ci_c2貌基）、氣、 乙氧基、羥基、H經基）乙基、2_(經基）((VC3烧氧基）、2_ (經基）乙氧基甲s、b(氣）乙基、邮-氟）乙基胺基）乙 基、2-(曱基胺基）乙氧基、（2經基乙基）胺基、經基乙 基）胺基（(VC2烷基）、胺基、胺基（CiC4烷基）、胺基（C2_C3 院氧基）、胺基幾基甲基、&甲基Mi-胺基幾基）乙基、 (C丨-C3烷基）胺基（Cl_C2烷基）、甲氧基乙基胺基尽（C1_C3 烷基）參甲基-胺基（C^_C2烷基）、吡咯咬小基-甲基、3_(二 甲基胺基）-対咬小基-甲基、3十比咬_3_基）♦各咬小基_ 甲基、3-(胺基）。比嘻咬小基·甲基' 3_(甲基胺基）吼洛咬+ 基-曱基、（4,4-二甲基噁唑啶_3_基）甲基、經基）乙 基甲基]-胺基甲基、（氮雜環丁 _丨基）甲基、六氫吡啶_ 1-基-甲基、4-(甲氧基）六氫。比啶小基_甲基、‘（經基）六氫 吡啶-1·基-甲基、4-(羥基甲基）六氫吡啶-丨-基-甲基、六氫 130204.doc 200902012 "比嗪-1-基-(Ci-C2院基）、4-(甲基）六氫。比嗪基-曱基、 3,5-(二甲基）六風0比°秦-1-基-甲基或嗎琳-4 -基-甲基； R2係氫； R3係氫、曱基、氟或氣，或R3係胺基且與R2 一起形成與 吡啶稠合之吡咯基環； R4係氫、甲基、氟或氣； R5係氫或羥基甲基；且 R6係氫或曱基；或 其醫藥上可接受之鹽。 本發明提供治療哺乳動物選自由下列組成之群之癌症的 方法：非小細胞肺癌、口咽癌、食管癌、胃癌、黑素瘤、 皮膚表皮樣癌、乳癌、卵巢癌、子宮内膜癌、結腸直腸 癌、神經膠質瘤、膠質母細胞瘤、甲狀腺癌、子宮頸癌、 胰腺癌、前列腺癌、肝母細胞瘤及非霍奇金淋巴瘤（n〇n_ Hodgkin lymphoma) ’該方法包含向需要該治療之哺乳動 物投與有效量之式I化合物或其醫藥上可接受之鹽。 本發明亦提供包含式I化合物或其醫藥上可接受之鹽與 醫藥上可接受之賦形劑、載劑或稀釋劑之醫藥組合物。 本發明亦提供可用作藥劑之式丨化合物或其醫藥上可接 义之鹽。另外，本發明提供式I化合物或其醫藥上可接受 之鹽用以製造用於治療癌症之藥劑的用途。具體而言，該 等癌症係選自由下列組成之群：非小細胞肺癌、口咽癌、 食官癌、胃癌、黑素瘤、皮膚表皮樣癌、乳癌、印巢癌、 子宮内膜癌、結腸直腸癌、神經膠質瘤、膠質母細胞瘤、 130204.doc 200902012 甲狀腺癌、子宮頸癌、胰腺癌、前列腺癌、肝母細胞瘤及 非霍奇金琳巴瘤。而且’本發明提供治療選自由下列組成 之群之癌症的醫藥組合物：非小細胞肺癌、口咽癌、食管 癌、胃癌、黑素瘤、皮膚表皮樣癌、乳癌、卵巢癌、子宮 内膜癌、結腸直腸癌、神經膠質瘤、膠質母細胞瘤、甲狀 Τ癌 '子宮頸癌、胰腺癌、前列腺癌、肝母細胞瘤及非霍 奇金淋巴瘤，該醫藥組合物包含式ϊ化合物或其醫藥上可 接受之鹽作為活性成份。 本發明亦提供下式化合物：

其中： R1係氫、甲基、環丙基、環丙基胺基曱基、鹵素、乙氧 基、經基、1-(羥基）乙基、2-(羥基）乙氧基、胺基、胺基 (CVC4烷基）、（Cl_c3烷基）胺基曱基、烷基）_#_曱 基-胺基曱基、胺基羰基曱基、吡咯啶基-甲基、3_(二甲 基胺基）吼咯啶-1-基-曱基、3-(吡啶-3-基）-吡咯啶_1_基-甲 基、3-(胺基）吼咯啶-卜基-曱基、2-(羥基）乙氧基曱基、 (4,4-二曱基噁唑啶_3-基）曱基、[#-(2-羥基）乙基-#-甲基]_ 胺基曱基、（氮雜環丁-1-基）甲基、六氫吡啶-i-基 —曱基、 4-(曱氧基）六氫吡啶-1-基·曱基、4-(羥基）六氫吡啶-1-基_ 曱基、4-(羥基甲基）六氫吡啶基-甲基、六氫吡嗪-丨_基_ 130204.doc -10- 200902012 曱基' 4-(曱基）六氫°比。秦-1-基-甲基、3,5-(二曱基）六氫0比 嗪-1-基-甲基或嗎啉-4-基-甲基； R2係氫； R3係氫或鹵素’或R3係胺基且與R2—起形成與„比咬稠合 之吡咯基環；且 R4係氫或_素；或 其醫藥上可接受之鹽。 【實施方式】

在上文式中所用之通用化學術語具有其一般含義。例 如，術語”（Cl-C3烷基），’意指曱基、乙基、丙基及異丙基。 術語"（Ci-C2烷基）"包括在術語"（Ci_C3烷基），，内且意指甲基 及乙基。術語”（C2-C3烷氧基）”意指乙氧基、丙氧基及異丙 氧基。 〃 術語••鹵素"意指氟、氣、溴及碘。 當取代基係藉助諸如乙基、正丙基、異丙基、正丁基 異丁基、第i丁基或第三丁基等絲連接日夺，例如，在術 語"胺基（Cl-C4院基）”或K燒基）胺基（Ci_c2貌基中， 與該取代基(例“胺基)之J接可藉助燒基或貌氧基之任

何碳。例如， 3 H ^ 〇 熟習此項技術之讀者應瞭解大多數或所有本發明化人物 皆能夠形成鹽。本發明化合物係胺，1因此可與多種：機 ==之任一種反應形成醫藥上可接受之酸加成鹽。 “ L、可接$之酸加成鹽及製備其之—般方法已為業 I30204.doc 200902012 内熟習此項技術者所熟知。參見，例如，P. Stahl,等人， HANDBOOK OF PHARMACEUTICAL SALTS: PROPERTIES, SELECTION AND USE, (VCHA/Wiley-VCH, 2002)，S.M. Berge,等人，"pharmaceutical Salts” > Journal 〇/ 尸，第 66 卷，第 1期，1977 年 1 月。 較佳者係式I化合物，其中： a)W係胺基（(Vq烷基）； WR1係1-(胺基）乙基； OR1係（CVC3烷基）胺基烷基）； (i)R1係1-(曱基胺基）乙基； e) I^係胺基（C,-C2烷基）或（CVC3烷基）胺基（CVQ烷基）； f) R2係氫； g) R3係氫； h) R3係氟； i) R3係氫或氟； j) R4係氟； k) R4係氫； l) R4係氫及氟； m) R5係氫； n) R6係氫； 〇)R係環丙基胺基（C,-C2烷基）、1_(經基）乙基、2_(經基） 乙氧基甲基、1-(氣）乙基、^((2-氟）乙基胺基）乙基、（2_羥 基乙基）胺基、（2-羥基乙基）胺基（Cl_C2烷基）、胺基（Ci_C4 130204.doc 200902012 烷基）、胺基羰基曱基、（1_曱基）_(1_胺基羰基）乙基、（Ci_ C3烷基）胺基（(VC2烷基）、烷基）-iV-甲基-胺基（Cl_ C2烷基）、吡咯啶_丨_基-甲基、3_(二甲基胺基）。比咯啶_丨_基· 曱基、3-(吡啶-3_基）_吡咯啶_丨_基-甲基、3_(胺基）吡咯啶_ 1-基-甲基、3-(甲基胺基）吡咯啶_丨_基_曱基、（4,4_二甲基 噁唑啶-3-基）甲基、羥基）乙基_，甲基]_胺基曱基、 (氮雜環丁-1-基）曱基、六氫吡啶_1_基_曱基、4_(曱氧基）六 氫。比啶-1-基-曱基、4-(羥基）六氫吡啶-1·基-甲基、4_(羥基 曱基）六氫°比啶-1-基-曱基、六氫吡嗪-1_基·（Crq烷基）、 4-(甲基）六氫吡嗪-1-基-甲基、3,5_(二曱基）六氫吡嗪_丨_基_ 曱基或嗎啉-4-基-甲基； Ρβ1係胺基（CVC4烷基）、（CVC3烷基）胺基（CVC2烷基）、 AKCrC3烷基）-iV-曱基-胺基（(^-(：2烷基）或嗎啉-4-基-甲 基； q)R係胺基（C1-C4烧基）或（C1-C3烧基）胺基（C1-C2烧基）； R3係氫或’氟； R4係氫或氟； R5係氫；且 R6係氫； OR1係1-(曱基胺基）乙基，R3係氟且R4係氫，R5係氫， 且R6係氫； 8)111係1-胺基乙基，R3係氟且R4係氟，R5係氫，且R6係 氫； t) R1係1-胺基乙基，R3係氟且R4係氫，R5係氫，且R6係 130204.doc -13· 200902012 氫；且 U)Rl係丨-(甲基胺基）乙基’ R3係氟且R4係氟，R5係氫， 且R6係氫。 反應圖與製備及實例一起闡釋本發明化合物之合成。 反應圖I中之化合物5係藉由起始材料丨與2間或起始材料 3與4間之鈀（〇)偶合反應製備。適宜鈀觸媒係（例如）四（三 苯基膦）鈀（0)或[1，Γ-雙（二苯基-膦基）二茂鐵]二氣鈀（11)與 DCM(1:1)之錯合物[Pd(dppf)Cl2]。Pd(dppf)cl2係在諸如碳 酸鈉或碳酸鉀等鹼存在下使用。該等反應係在諸如四氫呋 喃（THF)、二噁烧及水等溶劑中通常在約1 〇〇。〇至i 5〇。〇之 溫度下使用油浴或微波反應器來實施。 +

(^l，Br 或 I

Cl R4'

、CI 硼酸/酯 1 CI，Br，或 1 3

h9n

R6 在THF及棚酸三異丙酿中用二異丙基酿胺經將化合物 鋰化原位形成笨并[b]嚯吩硼酸酯物質，繼之與-二氯㈤ 咬（化合物6)把（〇)偶合反應得到化合物7。删酸醋通^係2 低溫下形成，例如-78。匚。偶合反應後立即採用上文對方 130204.doc •14. 200902012 製備化合物5所闡述之條件。 隨後經由親核取代反應製備本發明化合物，其中使化合 物7與化合物8反應。該等反應係在諸如正丁醇、二噁烷及 ^甲基吼洛咬-2-酮（NMP)等溶劑中實施。該等反應約 120°C至150°C之溫度下使用油浴或微波反應器實施。使用 約2當量之1H-1，2,3-三唑-1-乙胺（化合物8)。諸如三乙胺及 二異丙基乙基胺等胺驗用作酸清除劑。

反應圖II 或者，本發明化合物可藉由起始材料2與9間或4與1〇間 之铃木反手（Suzuki reaction}在上述條件下製備。

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V 因為在本發明化合物之合成中使用兩個偶合反應，所以 與反應圖I相比，反應圖„之起始材料9及職表相反之偶 合順序。 熟習此項技術者應瞭解，並非所有本發明化合物中之取 代基均可耐受合成該等化合物所用之某些反應條件。該等 基團可在合成之方便時刻引X，或可視需要或期望經保護 並隨後去保護。熟習此項技術者應瞭解’可在本發明化合 物合成之任何方便日㈣引人或移除保護基團。引人及移除 130204.doc -15- 200902012 氮及氧保護基團之方法已為熟習此項技術者所孰知參 見，例如，GreendWuts，Protective 以〇_ h 〇哪仏 Synthesis，第 3版，John Wiley 咖〜如，

Chapter 7 (i 999)。本發明之一些實例係自本發明之其他實 例製備。而且，熟習此項技術者應瞭解，在許多情形下，、 引入該等基團之順序並不重要。產生本發明化合物所需要 之步驟的特定順序可端視所合成之特^化合物、起始化合 物及經取代基團之相對不穩定性而定。 f %、 一些本發明化合物含有不對稱中心。在該等情形下，對 映異構體以及外消旋物涵蓋於本發明中。採用ChemDraw⑧ 10.0版產生實例名稱。 製備1 2-苯并[b]噻吩-7-基-4,4,5,5-四甲基_[1，3,2]二氧硼咮

將7-溴-苯并[b]噻吩（426 mg，2 mmol)、雙（四甲基乙二 酿）二删（756 mg，3 _〇1)、Pd(dPPf)Cl2 (81 mg，0.1 _〇1) 及乙酸鉀（294 mg，3 mmol)合併於燒瓶中之二甲基亞砜 (DMSO) (1〇 mL)中。向混合物中通入氮氣5 min。將燒瓶 密封並將其放置於油浴中並加熱至！ 〇(rc，保持4小時（h)。 用氣仿/異丙醇（IPA)(3/1)稀釋該混合物。用飽和氯化鈉水 溶液洗條溶液。經硫酸鈉乾燥。在真空中將溶液濃縮成黑 色殘留物。藉由管柱層析法（己烷+2〇%乙酸乙酯之己烷溶 液）純化’產生無色固體狀標題化合物（342 mg, 66%)。MS (ES) m/z 261 [M+l]+。 130204.doc 16 200902012 製備2 苯并[b]噻吩-7-二羥硼酸 將7-溴苯并[b]。塞吩（300 g，1.41 mmol)及删酸三異丙酉旨 (403.6 g，2.15 mmol)合併於裝備有機械攪拌器之12_L Morton燒瓶中之無水Thf(4 L)中，並在氮氣中於乾冰/丙 酮浴中冷卻至-70。(：。以使内部溫度保持低於_67yc之速 率逐滴添加正丁基鐘（1.6 Μ己烧溶液，714 g，1 6 8 mmol)。添加完成後，將反應混合物在該溫度下攪拌1 h。 移除冷卻浴並緩慢添加4 L水，此使得溫度升至約_5。匸。 然後’添加濃HC1 (75 mL)直至溶液之PH值為約ph=2。將 漿液攪拌1 h。添加足量5 N Na〇H水溶液，調整該混合物 之pH值至約PH=12並轉移至22-L底部滴落漏斗中。分離並 保留較低水性層。用4 L甲基-第三丁基醚稀釋上部有機 層，並用1 L 5 N NaOH水溶液萃取。分離水性層，與先前 水性萃取物合併，並放置回分液漏斗中。再用甲基-第三 丁基醚（4 L)洗滌水性層。再次分離水性層並轉移至裝備有 機械攪拌器之12-L 3-頸圓底燒瓶中。將溶液用冰_水浴冷 卻至+5 C。緩慢添加濃HC1直至溶液之pH值為約ρΗ=2。將 邊混合物攪拌3〇分鐘（min)，隨後過濾出所得固體。將固 在漏斗上用2L水沖洗兩次，並風乾3〇min。將該固體放 置於5(TC下之真空烘箱中並在真空中乾燥過夜。將乾燥固 體與2 L正庚烷製成漿狀物30 min以去除黃色。再次，過濾 固體，風乾30 min，隨後在4〇t下真空乾燥過夜產生白 色固體狀標題化合物（188.8 g，75 %)。iH NMR(4〇〇 MHz 130204.doc -17- 200902012 CD3OD) δ 7.86 (d, y=8 Hz, 1H), 7.49-7.57 (m, 2H), 7.30-7.39 (m，2H)。 製備3 5-溴甲基-2-氟-4-碘-吡啶 在燒瓶中，將2-氟-4-碘-甲基吡啶（10.0 g, 42.2 mmol)、 溴琥珀醯亞胺（9.76 g, 54.8 mmol)、2,2，-偶氮雙異丁腈 (3.46 g，21.1 mmol)及無水 CC14 (100 mL)合併。將混合物 在70°C下於氮氣中加熱16 h。冷卻至室溫（RT)。用二氣曱 烷（DCM)稀釋並用水及飽和氣化鈉水溶液洗滌。分離該等 層並經硫酸鎂乾燥有機層。在真空中濃縮以得到粗產物。 藉由管柱層析法（1 %至1 5°/。乙酸乙酯之己烷溶液）純化，產 生標題化合物（8_27 g，62%)。MS (ES) w/z 315 [M+l]+ 〇 製備4 (6 -氣-4 -埃-〇比。定-3 -基）-乙猜 在氮氣中將三甲基甲矽烷基氰化物（297 mg，3.0 mmol)及 四丁基氟化銨（785 mg, 3.0 mmol)合併於20 mL乙腈中。向 上述溶液中添加5 -溴甲基-2-氟-4-块-°比咬（0.63 g，2,0 mmol)。將混合物在RT下攪拌2 h。用氯仿/IPA (3/1)稀釋 該混合物。用水並隨後用飽和氯化鈉水溶液洗滌該溶液。 將其經硫酸鈉乾燥。在真空中濃縮該溶液。藉由管柱層析 法（存於DCM中之5%甲醇）純化，產生黃色蠟狀標題化合物 (500 mg，96%)。MS (ES) w/z 263 [M+l]+。 製備5 2-(6-氟-4-碘吡啶-3-基）-2-曱基丙腈 130204.doc -18- 200902012 在0C下，向（6_氟_4_碘_吡啶_3_基）_乙腈（55 g，M9 mmol)存於10 mL:曱基甲醯胺（DMF)中之溶液中添加氣化 鈉0.51 g，62.9 mmol)。將混合物在0°c至RT下攪拌3〇 min。添加碘曱烷（8 9 g，63 mm〇1)並將該混合物在下再 繼、.、ί授拌30 min。用水稀釋該混合物並提取至DCM中。將 有機相經硫酸鈉乾燥並在真空中濃縮以得到油狀殘留物。 藉由急驟管柱層析法（FCC)(2〇%乙酸乙酯之己烷溶液）純化 該殘留物以得到黃色固體狀標題化合物（5 g，82 %)。Ms (ES) m/z 291 [M+l]+。 製備6 2-(6-氟-4·蛾-吼咬-3-基）-乙醯胺 將（6-氟-4-峨比咬-3-基）-乙腈（360 mg，1.37 mmol)、過 氧化氫（10 g，30%，158 mmol)、18-冠醚（36 mg, 0.14 mmol)、碳酸钟（2 M，10 mL, 20 mmol)及l〇 mL乙醇合併在 一起以形成均質溶液。將混合物攪拌3 h。用水將其稀 釋。將產物萃取至DCM中。經FCC(存於DCM中之10%甲 醇）純化粗物質，產生白色固體狀標題化合物（25〇 mg， 64%)。MS (ES) m/z 281 [M+l]+。 使用與製備2-(6-氟-4-峨·。比。定-3-基乙醯胺類似之程序 製備以下中間體： 製備 化合物名稱 MS (ES) m/z ΓΜ+lf 7 厶(〇氟_4_碘吡啶-；3-基)-2-甲基丙醯胺 309 製備8 1 - ( 6 -既-π比σ定_ 3 _基）_乙醇 130204.doc -19- 200902012 在0°C下於氮氣中向6-氟“比咬_3—曱搭（3 g，24_〇i)存於 THF (20 mL)中之溶液中添加曱基溴化鎂（3 M存於醚中， 12 mL，36 mmol)。將混合物在尺丁下連續攪拌過夜。用i N HC1驟冷該混合物，繼之用經稀釋之氫氧化銨鹼化至口^值 約為9。用氣仿/IPA (3/1)萃取產物。經硫酸鈉乾燥。在真 空中濃縮該溶液。藉由管柱層析法（存於DCM中之ι〇%曱 醇）純化以得到無色油狀標題化合物（23 g，68%)。ms w/z 142 [M+l]+。 製備9 5-(1-疊氮基-乙基）_2_氟_。比啶 向在冰浴中保持冷卻之丨丄燒瓶中添加三苯基膦（27.9 1 06.3 mmol)、4,5-一氣-3,6-二氧環己 _ι，4_二稀 q，〗·二甲腈 (24·12 g，106.3 mmol)。邊攪拌邊緩慢添加 dcm (15〇 mL)。向該黑色溶液中緩慢添加四正丁基疊氮化銨（3〇 23 g，106.3 mmol)，繼之溶解kDCM (1〇 mL)中之氟-吡

啶-3-基）-乙醇（1〇 g，70.85 mm〇I)D將燒瓶自冰浴中移除並 在RT下攪拌1 h。在旋轉蒸發器上移除溶劑並藉由正相層 析法（5%至20%乙酸乙酯之己烷溶液）純化以獲得無色油狀 標題化合物（7.75 g)。GCMS w/z 166 [M]+。 製備10 1 -(6-氟-吼啶-3-基）-乙基胺 在60 psi壓力下於乙醇（2〇〇 mL)中在pt〇2 (6% w/w)存在 下氫化5-(1-疊氮基-乙基）_2_氟-吡啶〇9 g，24 59 _〇〇。 在4 h後過遽混合物’在旋轉蒸發器上移除溶劑，並在真 130204.doc -20- 200902012 空中乾燥所得油狀物以獲得標題化合物（3.15 g)。GeMS m/z 140 [M]+。 製備11 1-(6-氯吡啶-3-基）乙酵

向1-(6-氯-吡啶-3-基）-乙酮（10 g，64 27 mm〇1)存於甲醇 (100 mL)中之溶液中緩慢添加四氫硼化鈉〇 〇1 g，^ mmol)。在RT下攪拌15 min。將反應混合物傾倒入含有飽 和NaHC03 (40 mL)之燒杯中並隨後在水（1〇〇 〇^)與〇(：^ (400 mL)之間實施萃取。用飽和氯化鈉水溶液洗滌有機 層，經硫酸鈉乾燥並濃縮。藉由正相管柱層析法（2〇%乙酸 乙酯之己烷溶液+ 70%乙酸乙酯之己烷溶液）純化，產生標 題化合物（7 g，69%)。MS (ES) m/z 158 [M+l]+。 製備12 2 -氟-5-(1-甲氧基曱氧基-乙基）_〇比咬 在〇°C下向1-(6-氟-吡啶-3-基）-乙醇（3.0 g，21.3 mmol)存 於DCM中之溶液中添加二異丙基乙基胺及氯甲氧基曱燒。 將混合物在0 °C下連續擾拌3 0 min，隨後在RT下授拌過 夜。用氣仿/IPA (3/1)稀釋該混合物。用飽和氣化鈉水溶 液洗蘇溶液。將其經硫酸鈉乾燥。在真空中將溶液濃縮成 黑色殘留物。藉由管柱層析法（己烷20%乙酸乙酯之己院 溶液）純化，產生無色固體狀標題化合物（3 g，66%)。MS (ES) w/z 186 [M+l]+。 使用與製備2-氟-5-(1-曱氧基甲氧基-乙基）_吡啶類似之 程序製備以下中間體： 130204.doc -21 - 200902012 製備 13 化合物名稱 2-氯-5-(1-(甲氧基甲氧基)乙基)n比。定 製備14 MS (ES) m/z ΓΜ+11+ 202 5·環丙基氟-吡啶 將2-氟-5-埃-吼啶（1 12 g，5 mmol)、環丙基二羥硼酸 (645 mg，7.5 mmol)、乙酸鈀（56 mg，〇·25 mmol)及磷酸鉀

(3.2 g，15 mmol)合併於甲苯/水（20:1，2i mL)中。將混合物 在100 C下加熱4 h。用氣仿-IPA (3:1，1〇〇 mL)稀釋該混合 物。用飽和氯化納水溶液及水洗務有機相。經硫酸納乾燥 該混合物。在真空中將溶液濃縮成褐色油狀物。藉由管柱 層析法（20°/。乙酸乙酯之己烷溶液）純化，產生淡黃色油狀 標題化合物（430 mg，63%)。 製備15 5-環丙基-2-敗-3-峨- η比。定 在乾冰-丙酮浴中於氮氣中將5-環丙基-2-氟-吡啶（1.3 g, 9.5 mmol)存於THF (20 mL)中之溶液冷卻至_75°C。在30 min時間段期間添加二異丙基醯胺鋰（2 μ存於THF中，6 mL，12 mmol)。將混合物再攪拌3 h後添加峨（2.9 g，11.4 mmol，溶解於50 mL THF中）。再保持攪拌2小時後向該混 合物中添加水（100 mL)。隨後使其在1 h内於擾拌下升溫至 RT。用飽和硫代硫酸納溶液（50 mL)處理該混合物。用醚 萃取該溶液。在真空中濃縮該溶液。藉由管柱層析法（己 烷->20%乙酸乙酯之己烷溶液）純化，產生黃色油狀標題化 合物（1.7 g，68%)。NMR (400 MHz-CDC13) δ 7.99 (d, 130204.doc •22- 200902012 /=3 Hz, 1H), 7.39 (td, /=3, 5 Hz, 1H), 6.79 (dd, J=3, 8 Hz, 1H), 0.96-1.02 (m, 2H)，0.63-0.69 (m, 2H)。 使用與製備5 -環丙基_2_氟_3 _蛾-。比咬類似之程序製備以 下中間體： 製備 化合物名稱 MS (ES) m/z [Μ+ΐΓ 16 2-默τ3-蛾-5·(1-曱氧基甲氧基-乙基)-α比σ定 312 17 2-氣-3·峨-5-(1-(甲氧基甲氧基)乙基)』比啶 328 製備1 8 5-環丙基-2-氟-4-碘-吼啶 在乾冰-丙酮浴中於氮氣中將5-環丙基-2-氟-3-碘-吼啶 (1.7 g，6.5 mmol)存於 THF (20 mL)中之溶液冷卻至- 75°C。 在30 min時間段期間添加二異丙基醯胺鐘（2 μ存於THF 中，3.9 mL ’ 7·8 mmol)。將混合物再攪拌3 h後添加水 (100 mL)。隨後使溫度在i 於攪拌下升至RT。用醚萃 取該溶液。在真空中將溶液濃縮成褐色油狀物◊藉由管柱 層析法（己烷1 5%乙酸乙酯之己烷溶液）純化，產生黃色 油狀標題化合物（1.1 g, 65 %)。NMR (400 MHz-CDC13) δ 8.03 (dd，= 3，8 Hz，1H)，7.99 (s, 1H)，0.91-1.00 (m， 2H)，0.71-0.78 (m，2H)。 使用與製備5-環丙基-2-氟-4-块-D比。定類似之程序製備以 下中間體： 製備 化合物名稱 MS (ES) m/z ΓΜ+ιΓ 19 2-氟-4-峨-5-(1-曱氧基甲氧基-乙基)』比啶 312 20 2-氣-4-碘-5-(1 -(甲氧基曱氧基)乙基)-吡咬 328 製備21 130204.doc -23- 200902012 1-(6-氟·4_碘-吡啶_3_基）_乙醇 向2-氟-4-碘-5_(1_甲氧基甲氧基-乙基）吡啶（1 g，32 mmol)存於甲醇（1〇 mLh之溶液中添加i n hci (5 mL)。 將混合物攪拌過夜。用碳酸鈉（2 N)稀釋該反應混合物。將 產物萃取至氣仿中。經硫酸鈉乾燥有機相。在真空中濃縮 該〉谷液。藉由官柱層析法（存於DCM中之1〇%甲醇）純化粗 物夤，產生白色固體狀標題化合物（〇 75 g, 87 %)。 (ES) w/z 268 [M+l]+。 使用與製備1-(6-氟-4-碘-吡啶基）_乙醇類似之程序製 備以下中間體： 製備 化合物名稱 MS (ES) m/z ΓΜ+11+ 22 1-(6-氣-4-碘吡嗦a -其、7.結 284 —----—4 製備23 曱烷磺酸1-(6-氟-4-碘-吡啶_3_基乙基酯 在0C下向1-(6-氟-4-碘-吡啶_3_基）_乙醇（15 g，56 mmol)及二異丙基乙基胺（2,2 g，168 mm〇1)存於D(：M (5〇 mL)中之溶液中添加甲烷磺醯氯〇 93 g，16 8 mm〇1)。將混 合物在0C至RT下連續攪拌4 h。用經稀釋之碳酸鈉稀釋該 反應混合物。將產物萃取至氯仿中。經硫酸鈉乾燥有機 相。在真空中浪縮該溶液。藉由管柱層析法（2〇%乙酸乙酯 之己烷溶液）純化粗產物，產生白色固體狀標題化合物 (1,24 g, 64 %)。MS (ES) m/z 346 [M+l]+。 製備24 5-(1-疊氮基-乙基）_2-氟-4-碘-吡啶 130204.doc -24- 200902012 在〇°c下，向曱烷磺酸碘_π比啶_3_基）_乙基酯 (1_2 g，3.5 mm〇l)存於DMF (2〇 mL)中之溶液中添加疊氮化 鈉（0.45 g，7 _〇1)及四正丁基漠化銨（〇 12 §，〇4 _〇丨）。 將混合物在RT下攪拌42 h。用氯仿稀釋該反應混合物。用 水及飽和氣化鈉水溶液洗滌有機相。經硫酸鈉乾燥有機 相在真空中浪縮δ亥溶液。藉由管柱層析法（2〇。/。乙酸乙酯 之己烷溶液）純化，產生白色固體狀標題化合物（〇 77 g, 76 %) ° Ή NMR (400 MHz-CDC13) δ 1.56 (d, y = 6.8 Hz, 1H), 4.90 (m, 1H), 7.45 (d, */= 3.2 Hz, 1H), 8.17 (s, 3H)。 製備25 4-U-(6-氣-4-峨吡啶_3_基）乙基）六氫吡嗪_丨_甲酸第三丁酯 向6-氯-4-碘吡啶-3-基乙醇（3〇〇 mg，I% mm〇1)及三乙胺 (737 #，5.29 mmol)存於乙腈（1〇 mL)中之冰冷溶液中逐滴 添加甲烷磺酸酐（5 53 〇^，3.17〇1!11〇1)存於（^3(：^(3„11^中 之溶液。在相同溫度下攪拌4〇 min，並添加存於CH3CN卩 mL)中之，第三丁氧基羰基六氫吼嗪0.97 g，10.6 mmol)溶 液。將混合物加熱至6(rc，保持過夜。用飽和NaHC〇3 (1〇 mL)驟冷並用乙酸乙酯（5〇 mL χ 3)萃取。用飽和氣化鈉水 溶液洗滌有機物，經NhSO4乾燥，過濾，並藉由旋轉蒸發 移除溶劑。藉由正相管柱層析法（1〇%乙酸乙酯之己烷溶液 440%乙酸乙自旨之己烧溶液）純化，產生白色固體狀標題化 合物（226 mg, 47 %)。MS (ES) w/z 452 [M+l]+ 〇 製備26 1 " ( 6 -氣°比°定-3 -基）乙綱月亏 130204.doc -25- 200902012 將1-(6 -氣°比咬-3-基）乙酮（3.4 g，22.8 mmol)、存於水中 之經胺（50%) (5.77 g，87.4 mmol)及0.75 mL乙酸合併於壓 力容器中之15 mL二噁烷中。將容器密封並將混合物在油 浴中於1 5 0 °C下加熱3 h。將該混合物冷卻至rt。用氣仿/ IP A (3 /1)稀釋’用水及飽和氯化納水溶液洗條。分離該等 層並經硫酸鈉乾燥有機層。在真空中濃縮，產生標題化合 物（3.52 g, 94 %)。MS (ES) m/z 171 [M+l]+。 製備27 1-(6-氣吡啶-3-基）乙胺 在N2中將删氫化納（2.96 g，82.65 mmol)及四氯化欽（1 μ 存於甲本中’ 41.33 mL，41.33 mmol)存於50 mL無水1，2_ 二曱氧基乙烷中之溶液冷卻至0°C。向該溶液中逐滴添加 1-(6-氣。比啶_3_基）乙酮肟（3 52 g，2〇 66 mmol)。將混合物 在RT下攪拌過夜。用2〇〇 mL水終止反應。用氫氧化銨鹼 化該混合物。隨後，將粗產物萃取至曱苯及乙酸乙酯中。 分離該等層並經硫酸鈉乾燥有機層。在真空中濃縮以得到 粗產物（1.24 g, 38 %)。NMR (400 MHz，CDC13) δ 3.53 (s，3Η)，5.23 (s，2Η), 7·39 (d，《7=4.0 Ηζ，1Η)，7.96 (d，《/=1,6

Hz，1H)。 製備28 1-(6-甲基吡啶-3-基）乙胺 將1-(6 -曱基〇比咬基）-乙酮（1〇 g，74 mmol)存於四（異丙 醇）鈦（42.1 g，148 mmol)及氨（3 70 mmol，2 Μ存於甲醇中） 中之混合物在A中於RT下攪拌6 h。向該混合物中添加四 130204.doc -26· 200902012 氫硼化鈉（4·2 g，111 mmol)並攪拌過夜。用氫氧化銨驟冷 έ亥反應混合物並將該混合物過濾、。自遽液中移除溶劑並用 DCM萃取殘留物，用飽和氯化鈉水溶液洗滌並經Na2S〇4乾 燥’過濾’並移除溶劑以獲得暗黃色油狀標題化合物（8.16 g)。MS (ES) m/z 137 [M+l]+。 製備29 1-(6-曱基吡啶-3-基）乙基胺基曱酸第三丁酯 向1-(6-甲基。比咬-3-基）-乙基胺（8.16 g，59.9 mmol)存於 乙腈（50 mL)中之溶液中添加二異丙基乙基胺（11 6 g，89 9 mmol)及二碳酸二第三丁酯（15.7 g, 71 9 mm〇1)並將混合物 攪拌過夜。用飽和NaHC〇3 (200 mL)洗滌該混合物並萃取 至DCM中，用飽和氣化鈉水溶液洗滌並經Na2s〇4乾燥。藉 由管柱層析法（5%至50%乙酸乙酯之己烷溶液）純化以獲得 淡黃色油狀標題化合物（7.3 g)。MS (ES) m/z 237 [M+l]+。 製備30 1-(4-碘-6-曱基吡啶-3-基）乙基胺基曱酸第三丁酯 在-7 8°C下於Ns中使用雙端針向第三丁基鋰（51 1 mL, 87 mmol)存於THF (70 mL)中之溶液中添加ι_(6-曱基吼啶_3_ 基）乙基胺基甲酸第三丁酯（6.85 g, 29 mmol)存於THF (20 mL)中之溶液。30 min後，在-78。(：下於30 min内添加存於 THF (25 mL)中之碘（11.0 g，43.5 mmol)。攪拌 1 h並隨後升 溫至RT。用水驟冷，在乙酸乙酯中萃取，用飽和氣化鈉水 溶液洗滌’並經NazS〇4乾燥。藉由管柱層析法（5%至5〇〇/〇 乙酸乙酯之己烷溶液）純化以獲得標題化合物（62〇 mg)。 130204.doc -27- 200902012 MS (ES) m/z 363 [M+l]+ 〇 製備31 (6 -氟-4-峨-。比咬-3_基甲氧基）_乙醇 在0C下向2.5 mL乙二醇中添加氫化鈉（54 mg，2.25 mmol)並在RT下攪拌30 min。添加5-溴甲基-2-氟-4-埃-吡 啶（0.69 g，2.14 mmol)並將其加熱至 12〇。(：，保持 30 min。 冷卻至RT ’用70 mL水稀釋，並用醚（3 X 50 mL)萃取。合 併有機層，用飽和氯化鈉水溶液洗滌，經MgS04乾燥，並 移除溶劑。藉由層析法用二乙醚純化以獲得標題化合物 (240 mg，38%)。MS (ES) m/z 296 [M+l]+。 製備32 I, 4-(6-氟-4-碘-吡啶-3-基曱基）-嗎啉 在燒瓶中’於氮氣中將5-溴甲基-2-氟-4-碘比啶（6.13 g, 19.4 mmol)、嗎啉（3·38 g, 38.8 mmol)及無水 CH3CN (1〇〇 mL)合併。添加Tv，7V-二異丙基乙基胺（6·76 mL，38.80 mmol ’ 2 M THF溶液）。在81°C下加熱2 h並冷卻至RT。用 DCM稀釋並用水及飽和氣化鈉水溶液洗滌。將有機層與水 性層分離並經硫酸鎂乾燥。過濾後，在真空中濃縮以得到 6.23 g標題化合物（100%)。MS (ES) m/z 323 [M+l]+。 使用與製備4-(6-氟-4-破比。定_3-基甲基）-嗎淋類似之程 序製備以下中間體： 製備1Γ "34~ 化合物名稱 AK6-氟-4-碘-吡啶-3-基曱基)-二曱基石 免氟-4-碘-°比啶-3-基曱基)-甲基-胺基曱酸第三丁基醋 5-氣雜?哀丁-1-基曱基-2-氣-4-蛾-a比°定 MS (HST^T [M+li+ 280 367 292 130204.doc •28· 200902012 36 玉辰丙基-(6-氣-4-破-吼雙-3·基曱基)-胺 292 37 2-氟-4-碘-5-吡咯啶-：1 -基曱基比啶 306 38 乙基-(6-氟-4-碘-吡啶-3-基曱基)-甲基胺 294 39 (6-氟-4-碘-吡啶-3-基曱基)-曱基-丙基-胺 308 40 (6_氣-4-埃-°比。定-3-基甲基)-異丙基-曱基-胺 308 41 (6-氟-4-峨-。比°定_3-基甲基)_丙基·胺 294 42 (6-氣-4-峨-〇比〇定-3-基曱基)-異丙基·胺 294 43 乙基-(6-氟-4-碘比啶-3-基曱基)-胺 280 44 2-((6-氟-4-碘吡啶-3-基）甲基胺基)乙醇 m/z 296 [GCMS] 製備45 2-氟-5-曱氧基曱氧基-吡啶 向氫化納（1.49 g, 37.1 mmol)存於DMF (20 mL)中之懸浮 液中添加6-氟-πώσ定-3-醇（3.5 g, 30.95 mmol)。將混合物授 拌1 h。添加氯甲基甲基醚（2 g, 25.0 mmol)。將該混合物 在RT下攪拌過夜。用乙酸乙酯及水稀釋該混合物。用水及 飽和氯化鈉水溶液洗滌有機層。經硫酸鈉乾燥該混合物。 在真空中將溶液濃縮成褐色油狀物。藉由管柱層析法（10% 乙酸乙S旨之己烧溶液）純化，產生黃色油狀標題化合物 (4.30 g，88%)。NMR (400 MHz，CDC13) δ 3.48 (s，3H)， 5.15 (s, 2Η), 6.85 (dd, J=3.6 Hz, 7=8.8 Hz, 1H), 7.47 (m, 1 H)，7.96 (m, 1H)。 製備46 2-氟-4-碘-5-曱氧基甲氧基-吼啶 將2-氟-5-甲氧基曱氧基-吡啶（4.1 g，26.1 mmol)存於THF (60 mL)中之溶液冷卻至-75°C。在30 min時間段内添加第 三丁基鋰（1.7 Μ存於戊烧中，30.4 mL，51.7 mmol)。將混 合物另外攪拌半小時。添加填（9.8 g，3 8.6 mmol，溶解於 60 mL THF中）。添加完成後攪拌1 h。攪拌的同時使溫度 130204.doc -29- 200902012 在1 h内升至RT。用水處理該混合物。用乙酸乙酯將溶液 萃取三次。用飽和氣化鈉水溶液洗滌有機層。經硫酸鈉乾 燥該混合物。在真空中將溶液濃縮成褐色固體。用己烧研 磨該褐色固體。過濾，產生褐色固體狀標題化合物（3.9 53%) 〇 'H NMR (400 MHz, CDCI3) δ 3.53 (s, 3H), 5.23 (s, 2H), 7.39 (d, J=4.0 Hz, 1 H), 7.96 (d, /=1.6 Hz, 1H) 〇 製備47 6-氟-4-蛾-吼啶-3-醇 f ' 、 向2_氟碘-5·甲氧基曱氧基-吡啶（3.9 g，13.8 mmol)存 於THF (20 mL)中之溶液中添加HC1(3 Μ存於水中，31 mL，93.0 mmol)。將混合物在60°C下攪拌3 h並冷卻該混 合物。經緩慢添加飽和碳酸氫鈉水溶液將pH值調節至7。 用乙酸乙酯將溶液萃取三次。用飽和氣化納水溶液洗務有 機層。經硫酸鈉乾燥該混合物。在真空中濃縮溶液，產生 黃色固體狀標題化合物（3.2 g，97%)。MS (ES) m/z 240 , [M+l]+。 製備48 2-[2-(6 -氟-4-蛾-n比咬_3_基氧基）-乙基]-異。弓卜朵_1, 3_二嗣 在冰浴中於氮氣中將6-氟-4-碘-吡啶-3-醇（1.5 g, 6.28 mmol)及 K2C03 (4.38 g，31.4 mmol)存於 DMF (10 mL)中之 懸浮液冷卻至0 °C。添加2-(2-溴-乙基）_異吲哚_ 1,3_二酮 (3.19 g, 12.55 mmol)。將該混合物在RT下攪拌過夜。添加 水。用乙酸乙酯萃取。用飽和氯化鈉水溶液洗滌溶液。經 硫酸鈉乾燥。在真空中濃縮該溶液。藉由管柱層析法（己 130204.doc -30- 200902012 烷至30°/〇乙酸乙酯之己烷溶液）純化，產生黃色油狀標題化 合物（1.51 g，58 %)。MS (ES) m/z 413 [M+l]+。 製備49 2-(6-氟-4-碘-u比啶-3-基氧基）·乙基胺 向2-[2-(6-氟-4-碘-。比啶_3_基氧基）_乙基]_異吲哚_丨，3_二 酮（440 mg，1.06 mmol)存於乙醇（1〇 mL)中之溶液中添加肼 (70 mg，2.12 mmol)。將該溶液在RT下攪拌過夜。過濾以 移除固體並將濾液濃縮成淺黃色固體。藉由管柱層析法 (1 0% 2 Μ氨水，存於曱醇/二氣曱烷中）純化，產生淺黃色 油狀標題化合物（25 0 mg，83.8 %卜1 H NMR (400 MHz, CD3CN) δ 2.12 (s，2H)，3.03 (t，J=5.2 Hz, 2H)，4.10 (t, «/=5.2 Hz，2H)，7.47 (d，《7=4.0 Hz, 1H)，7,69 (d，J=2.0 Hz, 1H)。 製備50 1-(6 -氟-4-峨比。定-3-基氧基）_丙_2_酮 在冰浴中於氣氣中將6-氟-4-峨-D比咬_3_醇（1.6 g, 6.69 mm〇l)&K2C03 (2·8 g，20.1 mmol)存於 DMF (1〇 mL)中之懸 浮液冷卻至0°C。在30 min時間段期間添加氯丙酮（〇.78 g， 8·03 mmol)。將混合物在RT下攪拌丨5 h。添加水並用乙酸 乙酯萃取。用飽和氯化鈉水溶液洗滌溶液。經硫酸鈉乾 紅。在真空中浪細s亥溶液。藉由管柱層析法（己烷至丨〇%乙 酸乙酯之己烷溶液）純化，產生標題化合物（i.5 g，76%)。 MS (ES) m/z 296 [M+l]+。 130204.doc 31 200902012 製備51 1-(6-氟·4·碘-吡啶-3-基氧基）_丙_2_醇 向1-(6-氟-4-碘-吡啶_3_基氧基）丙_2_酮（24〇 mg, 〇81 mmo1)存於甲醇（4 mL)中之溶液中緩慢添加NaBH4 (35 mg， 〇·94 mmo1)。將混合物在RT下攪拌3 h。添加1 N HC1及 水。用一氣甲烷萃取。用飽和氯化鈉水溶液洗滌有機層。 經硫酸鈉乾燥。在真空中將溶液濃縮成黃色固體。藉由管 柱層析法（己院至1 〇%乙酸乙酯之己烷溶液）純化，產生淺 黃色固體狀標題化合物（240 mg, 99%)。MS (ES) w/z 298 [M+l]+。 製備52 2-[2-(6-氟-4-碘-吡啶-3-基氧基）-1-曱基-乙基]_異吲哚_ 1，3-二酮 將6-氟-4-块比咬-3-醇（150 mg，0·63 mmol)、曱苯-4-石黃 S夂 2-(1,3 - 一 氧-1,3 -二氫-異°引 D朵-2 -基）-丙基醋（226 mg，0.63 mmol)、碳酸絶（2〇6 mg，0.63 mmol)存於 DMF (2 mL)中之 混合物在1 0 〇 °C下加熱5 h。冷卻該混合物並添加水。用乙 酸乙酯萃取。用飽和氣化鈉水溶液洗蘇有機層。經硫酸鈉 乾燥。在真空中將溶液濃縮成淺黃色固體。藉由管柱層析 法（己烧至10%乙酸乙S旨之己烧溶液）純化，產生白色固體 狀標題化合物（115 mg，43%)。MS (ES) m/2 427 [M十 1]+ 〇 使用與製備2-[2-(6-氟-4-碘-吡啶-3-基氧基）_1_曱基_乙 基]-異吲哚-1,3-二酮類似之程序製備以下中間體： I30204.doc 32· 200902012 製備 化合物名稱 MS (ES) m/z [Μ+ΐΓ 53 S-2-[2-(6-氟-4-破比咬-3-基氧基)-1 -甲基_乙基]_異吲哚· 1，3_ \±νί 1 1 二嗣 427 54 /?-2-[2-(6-氟-4-蛾比咳-3-基氧基)-1-曱基.乙基]異巧卜朵」} 二酮 427 製備55 2-氟-4-碘-5-[2-(四氫吡喃_2-基氧基）_乙氧基吡啶 向氫化鈉（存於礦物油中之60%懸浮液，〇」g，2 51 mmol)存於DMF (6 mL)中之懸浮液中添加6_氟_4_碘_吡啶_ 3-醇（0.5 g，2.09 mmol)。將混合物攪拌i h。添加2_(2_溴_ 乙氧基）-四氫°比喃（0.51 g，2.34 mmol)。將該溶液在RT下 擾拌過夜。用乙酸乙酯及水稀釋該混合物。用飽和氯化鈉 水溶液及水洗滌有機層。經硫酸鈉乾燥該混合物。在真空 中浪縮該溶液。藉由管柱層析法（丨〇%乙酸乙酯之己烷溶 液）純化’產生淺黃色油狀標題化合物（〇 58 g，75 5ms (ES) m/z 368 [M+l]+ 〇 使用與製備2-氟-4-碘-5-[2-(四氫吡喃_2-基氧基）-乙氧 基]-π比啶類似之程序製備以下中間體： 製備 化合物名稱 MS (ES) m/z [M+l]+ 56 ----—- —. 2-氣_4_蛾-5-(2-(四氫-2化吼喃-2-基氧基)乙氧基)吡啶 384 製備57 3-甲氧基曱氧基^比啶 將3-經基n比啶（7 g，74 mm〇1)溶解於thf (20.6 mL)及 130204.doc •33- 200902012 DMF (34.4 mL)中並冷卻至_〗5。(：。添加第三丁醇鉀（8.3 g, 74 mmol)並在-15 C下擾拌30 min。在40 min内用逐滴氯甲 基甲基醚（5.81 mL，77 mmol)處理混合物。添加完成後， 將該混合物在-1 5 °C下再攪拌1 h。移除冰浴並使該混合物 緩慢升溫至1 5 C。將該混合物傾倒入飽和氯化納水溶液中 並劇烈授拌1 0 min。用三份乙酸乙酯萃取所得溶液。合併 有機萃取物並用飽和氣化鈉水溶液洗滌’經硫酸鈉乾燥， 過濾’並在真空中濃縮。1H NMR (400 MHz，CDC1J δ 8.42 (d, 7=3 Hz, 1H), 8.28 (d, J=5 Hz, 1H), 7.37-7.42 (m, 1H), 7.21-7.27 (m, 1H), 5.20 (s, 2H), 3.49 (s, 3H) ° 製備58 2-氣-5-甲氧基甲氧基-吡啶 將氫化鈉（3.7 g，93 mmol)懸浮於DMF (50 mL)中並在45 min内逐滴添加2-氣-5-羥基吡啶（10 g，77 mm〇1)存mDMF (20 mL)中之溶液。將所得溶液在下授拌1 5 h。在45 min内逐滴添加氯曱基曱基醚（6 6 mL，％ mm〇l)。將所得 混合物在RT下攪拌12 h。用乙酸乙酯、水及飽和氣化鈉水 溶液稀釋該混合物。分離有機溶液並用三份水、一份飽和 氯化鈉水溶液洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，並在真空中濃 縮。藉由官柱層析法在330 g矽膠上用己烷至3 〇%乙酸乙酯 之己烷溶液之梯度在20 min内溶析來純化粗產物並隨後在 3 0 /。乙馼乙之己统溶液中保持3 〇 以得到1 〇 8㊁澄清油 狀標題化合物（81〇/。）。MS (ES)所/z 174.0 [M+1疒。 130204.doc -34- 200902012 製備59 2-氣-4-碘-5-甲氧基曱氧基_吡咬 在-70 C下於1〇 min内向2-氯-5-曱氧基曱氧基_0比啶（1〇8 g, 62 mm〇l)存於THF (3〇〇 mL)中之溶液中逐滴添加第三丁 基鋰（1.7 Μ存於戊烷中，72 mL，123 mm〇i)。將所得溶液 在-70°C下攪拌30 min。在30 min内逐滴添加碘（23 g，92 mmol)存於THF (150 mL)中之溶液。將所得溶液在川它下 搜拌1 h °移除冰浴並使反應升溫至rt。用乙酸乙醋及水 稀釋該混合物並分離該等相。用兩份乙酸乙酯萃取水相。 3併有機卒取物並用兩份硫代硫酸鈉水溶液 '一份水及一 伤飽和氣化鈉水溶液洗務。經硫酸鈉乾燥，過據並蒸發。 用己院研磨所得固體。藉由真空過濾收集固體並用己烷洗 蘇該固體。在真空中乾燥該固體以得到褐色固體狀標題化 合物 10.8 g (58°/。）。4 NMR (400 MHz，DMSO-c/6) δ 8.08 0, 1Η)，7.98 (s，1Η)，5.43 (s，2Η)，3.40 (s, 3Η)。 使用與製備2-氯-4-埃-5-曱氧基曱氧基-吼啶類似之程序 製備以下中間體： 製備 化合物名稱 MS (ES) m/z [M+ir 383 60 1-(6-氣-4-議°比咬-3-基）乙基胳某甲醢笼=丁醢 —1 丨丨 一一 」 製備61 [2-(6-氟-4-碘-吡啶-3-基氧基）_乙基]甲基·胺基甲酸第三 丁基酿 向[2-(6-氟-4-埃比啶-3-基氧基）_乙基]-胺基曱酸第三丁 基酯（0.33 g，0_86 mmol)存於3 mL DMF中之溶液中添加氯 130204.doc -35. 200902012 化納（620 mg，26 mm〇i)。將混合物在RT下攪拌1 h並添加 峨甲烧（0.37 g，2.59 mmol)。將該反應混合物在RT下攪拌 過夜。添加水並用乙酸乙酯萃取。用飽和氯化鈉水溶液洗 錄有機層。經硫酸鈉乾燥該混合物。在真空中濃縮該溶 液。藉由管柱層析法（2〇0/。乙酸乙酯之己烷溶液）純化殘留 物’產生淺黃色固體狀標題化合物（〇13 g，38%)。iH NMR (400 MHz, CD3CN) δ 1.45 (s, 9H), 3.08 (s, 3H), 3.59 (t, /=5.6 Hz, 2H), 4.20 (t, /=5.6 Hz, 2H), 5.07 (s, 1H), 7.38 (d, /=3.2 Hz, 1H), 7.61 (d, J=1.2 Hz, 1H)= 製備62 6_亂-4 - °比咬-3 -醇 用3 N HCl (61 mL)處理2 -氣-4-破-5-甲氧基曱氧基_〇比0定 (8_1 g，27 mmol)存於THF (40 mL)中之溶液。將所得混合 物加熱至60 C，保持3 h。將該混合物冷卻至rt並藉由緩 慢添加飽和碳酸氫鈉水溶液將pH值調節至7。將該混合物 用二份乙酸乙酯萃取。合併有機萃取物並經硫酸鈉乾燥， 過濾，並在真空中濃縮以得到6·8 §褐色固體狀標題化合物 (98%) 〇 >Η NMR (400 MHz, DMSO-^6) δ n.〇4 (s, 1H), 7.81-7.87 (m，2H)。 製備63 2-^-5 -乙氧基-4-硬·。比σ定 用碘乙烷（4·7 mL，58 mmol)處理6-氯-4-碘-吡啶-3-醇（4·9 g，19 _〇1)及碳酸鉀（8·〇 g，58 _〇1)存於 dmf (5〇 机）中 之溶液。將混合物在60t下加熱3 h。將該混合物冷卻至 130204.doc -36- 200902012 RT並藉助濾紙過濾。用乙酸乙酯稀釋該混合物並用丨〇%檸 檬酸水溶液洗滌。合併水溶液並用另外兩份乙酸乙酯萃 取。合併有機萃取物並用三份水、一份飽和氣化鈉水溶液 洗務，經硫酸鈉乾燥，過渡，並在真空中濃縮以得到5 .丄g 褐色固體狀標題化合物（93%)。NMR (400 MHz，DMSO- d6) δ 8.00 (S, 1H), 7.93 (s, 1H), 4.18 (q, 7=7 Hz, 2H), 1.35 (t，Hz，3H)。 製備64 2,2-二甲基吡啶-3-基-丙醯胺 給250-mL圓底燒瓶配備冰浴、磁力攪拌器及乂氣氛。添 加 3-胺基吡啶（15 g，159 mm〇1)、THF (6〇 mL)、二乙醚（6〇 mL)—乙胺（17.7 g，24.4 mL, 175 mmol)。將混合物冷卻 至〇c並經由注射器緩慢添加三甲基乙醯氯（2i 〇 g, 14·9 mL，175 mm〇l)。混合過夜同時升溫至rt。添加水（ι〇〇 叫，轉移至分液漏斗中，並萃取並棄除較低水性層。經 他肌乾燥有機層，過渡，並藉由旋轉蒸發^農縮成冷卻 時凝固之無色油狀物。在高真空中乾燥25h以得到2i56g 黃褐色固體狀標題化合物（76%)。Ms㈣—179 [M+l]+。 #-(4-硬-吼口定_3_某、 _ 土）2,2- —甲基-丙醯胺 給250-mL圓底燒瓶配備 两磁力授拌益、熱電偶、乾冰/丙 酮浴、A氣氛及額外漏斗。 了 衮入2,2-二甲基^吡啶·3_基_ 丙醯胺（3.0 g，16.8 mmol)、—, )—乙喊（67 mL)及四亞甲基二胺 130204.doc -37. 200902012 (4·68 g，6·〇8 mL，40.3 mmol)。將反應冷卻至-78°C。在 10 min内經由玻璃注射器緩慢添加正丁基鋰（2 5 μ己烷溶 液’ 16.2 mL，40.3 mmol)。在2 h内將反應升溫至-13°C。

將反應冷卻至_78。(：。製備碘溶液（12 8.5 g，33.6 mmol，存 於THF (20 mL)中）。經由額外漏斗向反應中添加碘溶液並 在-68C下攪拌2.5 h。經添加飽和NH4C1溶液（40 mL)驟冷 該反應並轉移至分液漏斗中。添加乙酸乙酯（丨〇〇 mL)。萃 取並棄除較低水相。用飽和硫代硫酸鈉溶液（1〇〇 mL)洗滌 有機層並萃取。用飽和氣化鈉水溶液洗滌有機相並萃取。 經NajO4乾燥有機相並過濾。經由旋轉蒸發濃縮產物。在 二氧化矽（80 g)上用1〇〇% Dcm至70%乙酸乙酯/30% DCM 梯度溶析實施層析’產生丨.19 g標題化合物（23%)。MS (ES) m/z 306 [M+l]+ ° 製備66 [2-(6-氟-4-碘比啶-3-基氧基）_乙基胺基曱酸第三丁基酯 向2-(6-氟-4-蛾比唆-3-基氧基）_乙基胺（0 25 g，0.89 mmol)及二碳酸二第三丁酯（ο.” g，1 33 mm〇1)存於5 mL DCM中之溶液中添加二異丙基乙基胺（〇23 g,丨77 mmol)。將混合物在RT下攪拌過夜。用DCM稀釋該混合 物’用飽和氣化鈉水溶液洗滌有機層，經硫酸鈉乾燥，並 在真空中濃縮得到粗油狀物。藉由管柱層析法（3〇0/。乙酸乙 酉旨之己烧溶液）純化’產生標題化合物（0.33 g, 97。/。）。 NMR (400 MHz, CDC13) δ 1.41 (s> 9Η), 3.56 (t, J=5.2 Hz, 2H)，4.10 (t，J=5.2 Hz，2H)，5,07 (s, 1H)，7.34 (d，J=3.6 Hz， 130204.doc •38- 200902012 1H), 7.69 (d, /=1.6 Hz, 1H) 〇 使用與製備[2-(6-氟-4-碘· D比啶_3_基氧基乙基]_胺基甲 酸第三丁基酯類似之程序製備以下中間體： 製備 化合物名稱 MS (ES) m/z γμ+ιΓ 67 11-(6-氟-吡啶-3-基)-乙基1-胺基甲酸第=丁某酯 11V± 4 J -- 241 68 6-氟11比0定-3-基胺基曱酸第=：丁酯 213 69 1-(6-氣吡啶-3-基)乙基胺基甲酸第三丁酯 --- 257 製備70 1-(6-氯-4-碘吡啶-3-基）乙基胺基甲酸第三丁酯 將氯吡啶-3-基）乙基胺基曱酸第三丁酯（3.77 g, 14 7 mmol)溶解於THF (60 mL)中。在_78。〇下於n2中添加第三

丁基經（1.7 Μ庚烧溶液，25.9 mL，44.0 mmol)。在-78 °C 下將反應溶液擾拌0.5 h。在-78 °C下於N2中在30 min内逐 滴添加碘（5.59 g，22.0 mmol)存於THF (44 mL)中之溶液。 將所彳于溶液在-7 8 °C下擾拌1 h，隨後自_ 7 8 °C至RT攪拌1 h。用水終止反應。用乙酸乙酯萃取。用水及飽和氯化鈉 水溶液洗滌有機層。經MgSCU乾燥。過濾後，濃縮並藉由 FCC(0.1%至1% 2 Μ NH3甲醇溶液/CH2C12)純化粗物質，產 生98°/。HPLC純度之標題化合物（1 34 g，24%)。MS (ES) m/z 383 [M+1 ]+。 使用與製備1-(6-氯-4-碘吡啶-3-基）乙基胺基曱酸第三丁 酯類似之程序製備以下中間體： 130204.doc •39· 200902012 製備 化合物名稱 MS (ES) m/z [M+lf 71 _IMh氟-4-破-吡啶-3-基)-乙基]-胺基甲酸第二丁基酯 367 72 6-氟-4-碘吡啶-3-基胺基甲酸第=丁酯 339 製備73 6-氟-4-峨吡啶-3-胺 將6-氟-4-碘吡啶-3-基胺基甲酸第三丁酯（1.47 g, 4.35 mmol)溶解於DCM (20 mL)中。添加三氟乙酸（TFA) (20 mL)。在RT下於&中攪拌2 h。在減壓下移除溶劑。在真空 中乾燥，產生100% HPLC純度之呈TFA鹽形式之6-氟-4-峨 口比咬-3-胺（1 .〇2 g, 99%)。MS (ES) m/z 239 [M+l]+。 製備74 6-氟-4-碘-#-(2-(四氫-2H-吡喃-2-基氧基）乙基）吡啶_3_胺 將 6-氟-4-碘吡啶-3-胺 TFA 鹽（0.36 g，1.50 mmol)、2-[(2- /臭乙基）氧基]四氫-：2Η-β比喃（1 .；38 g，6.60 mmol)、氫氧化卸 (0.19 g，3.30 mmol)、氟化鉀（0.19 g，3.30 mmol)及四丁基 碘化銨（0.11 g，〇·3 mm〇l)混合於存於密封反應器中之丨，4_ 二噁烷（1.5 mL)中。將反應混合物在1 00°c下加熱過夜。將 反應此合物冷卻至RT。用水驟冷。用乙酸乙酯萃取，用水 及飽和氣化鈉水溶液洗滌有機層。經MgS〇4乾操。過滤 後’濃縮並藉由FCC(0.1%至l%2MNH3f醇溶液/CH2CJ) 純化以得到100% HPLC純度之標題化合物（ο% g, 66%)。 MS (ES) w/z 367 [M+l]+。 製備75 2-(6-氟-4-碘吼啶-3-基胺基）乙醇 130204.doc •40· 200902012 將6-氟-4-硪善（2-(四氫-2H-吡喃_2-基氧基）乙基”比啶_3_ 胺（0.20 g，0.55 mmol)溶解於乙醇（5.5 mL)t。添加吡啶鑌 對甲笨績酸鹽（0.0 14 g，0.05 5 mmol)。將反應混合物在50 C下加熱過仪。在減壓下移除溶劑。藉由fcc(0.1 %至1 % 2 Μ NH3甲醇溶液/CHWl2)純化以得到1 〇〇% HPLC純度之 標題化合物（44 mg, 28。/〇)。MS (ES) m/z 283 [M+1 ]+。 製備76 6-氟碘-7V-(2-甲氧基乙基）比啶_3_胺 將呈TFA鹽形式之6-氟-4 -蛾吼σ定_3_胺（0.36 g, 1.50 mmol)、2 -氯乙基甲基醚（0.31 g，3_30 mmol)、氫氧化鉀 (0.19 g，3.3 0 mmol)、氟化鉀（〇」9 g，3 _30 mmol)及四丁基 碘化銨（0.1 1 g, 0.3 0 mmol)混合於密封反應器中之丨，4_二噁 烷（1.5 mL)中。將反應混合物在1 〇〇它下加熱過夜。將反應 混合物冷卻至RT。用水驟冷。用乙酸乙酯萃取，用水及飽 和氣化鈉水溶液洗務有機層。經MgS〇4乾燥。過遽後，在 減壓下移除反應溶劑。藉由FCC(0.1 %至1 % 2 Μ NH3曱醇 溶液/CHsCh)純化以得到80% HPLC純度之標題化合物 (0.09 g，20%)。MS (ES) m/z 279 [M+l]+。 製備77 [2-(6-氟-4-峨-D比咬-3-基氧基）_乙基]甲基-胺基甲酸第三 丁基酯 向[2-(6-氟-4-碘-吡啶-3-基氧基）-乙基]-胺基曱酸第三丁 基酯（0.33 g，0.86 mmol)存於3 mL DMF中之溶液中添加氫 化鈉（620 mg，26 mmol)。將混合物在RT下攪拌1 h並添加 130204.doc •41 - 200902012 块甲院（0.37 g，2.59 mmol)。將該反應混合物在RT下攪拌 過夜。添加水並用乙酸乙酯萃取。用飽和氯化鈉水溶液洗 務有機層。經硫酸鈉乾燥該混合物。在真空中濃縮該溶 液。藉由管柱層析法（2 0 %乙酸乙酿之己烧溶液）純化殘留 物，產生淺黃色固體狀標題化合物（〇」3 g, 38%)。4 NMR (400 MHz, CD3CN) δ 1.45 (s, 9H), 3.08 (s, 3H), 3.59 (t, /=5.6 Hz, 2H), 4.20 (t, 7=5.6 Hz, 2H), 5.07 (s, 1H), 7.38 (d, /=3.2 Hz, 1H), 7.61 (d，J=1.2 Hz, 1H)。 使用與製備[2-(6-氟-4-碘-吡啶-3-基氧基）-乙基]甲基-胺 基曱酸第三丁基酯類似之程序製備以下中間體： 製備 化合物名稱 MS (ES) m/z [M+lf 備註 78 1-(6-氣-4-碘》比咬-3-基)乙基(甲基)胺基曱酸第 三丁酯 381 使用碘甲烷 79 乙基-[1 -(6-氟-4-碘比啶-3-基)-乙基]-胺基曱酸 第三丁基酯 395 使用碘乙烷 製備80 氟-4-碘吡啶-3-基）乙基（曱基）胺基甲酸第三丁酯 藉由對掌性HPLC (4.6 X 150 mm Chiralpak® AD-H， 5:95 3A/C7，0.6 mL/min 270 nm)分離 1-(6-氟-4-蛾 σ比。定-3- 基）乙基（甲基）胺基甲酸第三丁酯（3.11 g, 8.48 mmol)以得 到（Λ)· 1-(6-氟-4-碘"比啶_3_基）乙基（甲基）胺基甲酸第三丁 酯（1.09 g，3 5%, >99% ee)第一流份及（5)-1-(6-氟-4-碘吡啶-3-基）乙基（甲基）胺基曱酸丁酯（1.13 g, 36%，>99% ee)第二 流份。MS (ES) w/z 3 83 [M+l]+。藉由振動圓二色譜（VCD) 研究指定兩種對映異構體之絕對構型。 130204.doc -42· 200902012 使用與分離（5)-1-(6-氟-4-碘吡啶_3·基）乙基（甲基）胺基 甲酸第三丁酯類似之程序分離以下中間體： 製備 化合物名稱 MS (ES) m/z ΓΜ+lf 81 " ——--- (/?)-1 -(6·氣-4-蛾吡啶-3_基)乙基胺基曱酸第三丁酯 383 82 疊氮基乙基)-2-氟-4-碘吡啶 293 4-苯并[b]噻吩-7-基-2-氣-吡啶 製備83 在燒瓶中’將7-演-苯并[b]D塞吩（1.7 g, 12 mmol)、2-氣- 4-(4,4,5,5-四甲基-[1，3,2]二氧硼味 _2_ 基）-°比啶（1.6 g, 7 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (285 mg，0.3 mmol)、2-(二-第三丁基 膦基）聯苯（63 mg，0.2 mmol)、碳酸鈉（2 Μ, 8 mL，16 mmol)及THF (20 mL)合併。將混合物在1〇〇。(：下加熱3 h。 用氯仿/IPA (3 /1)稀釋該混合物。用飽和氯化納水溶液洗 滌溶液。經硫酸鈉乾燥。在真空中將溶液濃縮成黑色殘留 物。藉由管柱層析法（DCM至存於DCM中之20% THF)純 化，產生黃色固體狀標題化合物（1，14 g，66%)。MS (ES) w/z 246 [M+l]+。 製備84 4-苯并[b]噻吩-7-基-2-氟-5-曱基-吼啶 在燒瓶中，將2-氟-4-碘-5-曱基-吡啶（3 55 mg, 1.5 mmol)、2-苯并[b]°塞吩-7-基-4,4,5,5-四曱基_[1，3,2]二氧蝴 咮（282 mg，1.8 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (61 mg，0.07 mmol)、 2-(二-第三丁基膦基）聯苯（13 mg, 0.04 mmol)、碳酸鈉（2 130204.doc • 43 - 200902012 M，1.5 mL, 3 mmol)及 THF (10 mL)合併。將混合物在 100 °C下於油浴中加熱3 h。用氯仿/IPA (3/1)稀釋該混合物。 用飽和氣化鈉水溶液洗蘇溶液。經硫酸納乾燥。在真空中 濃縮成黑色殘留物。藉由管柱層析法（20%乙酸乙酯之己烧 溶液）純化，產生黃色油狀標題化合物（300 mg, 82%)。MS (ES) w/z 244 [M+l]+。 使用與製備4-苯并[办]噻吩-7-基-2-氟-5-曱基-吡啶類似之 程序製備以下中間體： 製備 化合物名稱 MS (ES) m/z [M+l]+ 備註 85 4-(苯并[b]噻吩-7-基)煙醛 240 86 2-(4-(苯并[b]噻吩-7-基)-6-氟吼啶-3-基)-2-甲基丙腈 297 87 4-苯弁[b]n塞吩-7-基-5-¾丙基-2-氣-吼咬 270 二噁烷， 油浴 88 4-(4-苯并[b]噻吩-7-基-6-氟比啶-3-基曱基)-嗎啉 329 89 (4-苯并问噻吩-7-基-6-氟-。比啶-3-基曱基)-二曱基-胺 287 90 Λ/·(4-苯并闹噻吩-7-基-6-氟-吼啶-3-基曱基)-曱基-胺 基甲酸第三丁基酯 372 91 ΑΚ4-苯并[b]噻吩-7-基-吡啶-3-基)-2,2-二甲基-丙醯 胺 311 92 4-苯并[b]噻吩-7-基-2-氣-5-曱氧基曱氧基-。比啶 306 93 4-苯并[b]噻吩-7-基-2-氣-5-乙氧基-。比啶 290 94 4-苯弁[b]a塞吩-7_基比σ定 212 在 100°C 下加熱 製備95 1-(4-(苯并[b]噻吩-7-基）吼啶-3-基）乙醇 將4-苯并[b]°塞吩-7-基-0比°定-3 -曱酸（1.5 g，6.27 mmol， 存於THF (50 mL)中）存於250-mL圓底燒瓶中之溶液冷卻至 0°C並向該溶液中逐漸添加曱基溴化鎂（2.38 g，6.90 mmol， 2.3 0 mL)。將混合物自0°C至RT下攪拌2 h。藉由與1 N HC1 (200 mL)混合使該混合物水解。用氫氧化銨將pH值調節至 130204.doc -44- 200902012 11。萃取至氯仿/ΙΡΑ (3/1 τ、士 200 mL)中。用水及飽和氣化鈉 水浴液洗務有機相。經石奇西參細ρ 4 ‘ 士 % w 、，'二〜I鈉乾燥並在真空中濃縮。藉由 FCC(己烧至I 〇 /〇乙酸乙g旨之己烧溶液，隨後存於d⑽中之 20% THF)純化以得到黃色油狀標題化合物。〇〇 g，咖)。 MS (ES) w/z 256 [M+l]+。 製備96 3-0-疊氮基乙基）_4_(苯并[b]噻吩_7_基）。比啶 使用與上文5-( 1 -豐氮基_乙基）_2_氟_吡啶所用類似之程 序自褐色油狀1-(4-(苯并[b]噻吩_7_基）吼啶_3_基）乙醇（〇 & g，93 Λ)裝備;^ 題中間體。ms (ES) w/z 280 [M+l]+。 製備97 2-(4-(笨并[b]噻吩_7-基）-6-氟吡啶-3-基）-2-甲基丙_ι_胺 將四氫硼化鈉（296 mg，7.83 mmol)及四氣化鍅（684 mg， 2.9 mmol)溶解於THF (1 mL)中以形成乳狀溶液。在乂中於 RT下添加2-(4-笨并[b]噻吩-7-基-6-氟-吼啶-3-基）-2-曱基_ 丙腈（5 80 mg，1.96 mmol)存於丁HF (20 mL)中之溶液。將該 混合物在RT下攪拌過夜。藉由將該混合物傾倒入冰水溶液 中終止反應。用氣仿/IPA (3/1)萃取該混合物。藉由添加 經稀釋之氫氧化銨鹼化水相並過濾。用氣仿萃取濾液，乾 燥合併之有機相’並濃縮以得到淡黃色固體（5〇〇 mg，84 %)。MS (ES) w/z 301 [M+l]+。 製備98 1-(4-(苯并[b]噻吩-7-基）吡啶-3-基）乙胺 向冰浴中之50 mL圓底燒瓶中之3-(1-疊氮基-乙基）_4_苯 130204.doc -45- 200902012 并[b]噻吩-7-基-吡啶（〇.66 g，2 35随❹丨）存於乙醇（ι〇 mL)、甲酸（1.08 g，23·54 mm〇1)及肼（754 4 叫，23 M mmol)中之溶液中添加拉尼鎳（Raney Nickei)(i % 23 5 mmol)。將混合物在rt下攪拌丨h並過濾拉尼鎳。用氫氧化 銨稀釋濾液。將產物萃取至氯仿中。將有機相用水洗滌， 經硫酸鈉乾燥，並濃縮以得到褐色油狀標題化合物（〇6 g， 100%)。MS (ES) w/z 255 [M+l]+。 使用與彼等對於1-(4-(苯并[b]噻吩_7_基”比啶_3_基）乙胺 所述類似之程序製備以下中間體： 製備 化合物名稱 MS (ES) m/z [M+n+ 99 —" ~~— 1 -(6-氟-4-攝吡啶-3-基)乙胺 267 100 (/?)-1-(4-(苯并[b]»塞吩_7_基)-6-氟》比咬_3-基)乙胺 273 製備1 01 1-(4-(苯并[b]噻吩-7-基）吡啶_3_基）乙基胺基甲酸第三丁酯 向1-(4-笨并[b]"塞吩-7-基比啶_3-基）-乙基胺（0.6 g，2.36 mmol)及二碳酸二第三丁酯（1 〇3 g , 4 72 mm〇i)存於 m-二 噁烷（10 mL)及水（5 mL)中之溶液中添加三乙胺（477 4 mg, 4·72 mmol)。將混合物在RT下攪拌丨h。將該混合物用氣 仿（100 mL)稀釋，用飽和氣化鈉水溶液洗滌，經硫酸鈉乾 燥’並濃縮。藉由FCC(20%乙酸乙酯之己烷溶液至存於 DCM中之1〇〇/0曱醇）純化殘留物以得到黃色固體狀標題化 合物（0.84 g，67%)。MS (ES) w/z 355 [M+l]+。 使用與彼等對於1-(4-(苯并[b]噻吩-7-基）"比啶-3-基）乙基 130204.doc -46- 200902012 胺基甲酸第三丁酯所述類似序製備以下中間體： 製備 化合物名稱 MS (ES) m/z [M+l]+ 102 1-(6-氟-4-碘吼啶-3-基)乙酸第=丁酯 367 103 2-(4-(苯并[b]噻吩-/-基)_6_氟》比啶_3_基)_2•曱基丙基胺|曱酸 第三丁酯 401 104 ⑻-1 -(4-(苯并[b]噻吩-7-基)-6-氟吡啶_3 _基)乙基胺基甲酸第 三丁酯 373 製備105 1-(6-氟-4-蛾。比啶-3-基）乙基（2-氟乙基）胺基甲酸第三丁酯 在〇°C下向[1-(6-氟-4-碘-吡啶_3_基）-乙基]•胺基甲酸第

二丁基 Ss (300 mg，819 μηιοί)溶液添加氫化鈉（58.9 mg， 2.46 mmol)。將混合物在〇°c至rt下攪拌1 h。添加1-氟-2-磁-乙烧（570 mg，3.28 mmol)。將該混合物在rt下攪拌4 h 並隨後在50°C下攪拌過夜。將該混合物用氣仿/IpA (3/1， 1 00 mL)稀釋並用水/飽和氯化鈉水溶液洗滌。將有機相經 硫酸納乾燥並在真空中濃縮以得到粗產物。藉由Fcc(20% 乙酸乙I旨之己烷溶液）純化粗產物以得到丨4〇 mg標題化合 物（410/〇)。MS (ES) m/z 413 [M+l]+。 製備106 4-苯并[b]噻吩-7-基-3-甲氧基曱氧基-吡啶 溶液A :在_7〇°c下於1〇 min内用逐滴第三丁基鋰（1.7 Μ 存於戊烷中’ 10 mL，18 mmol)處理3-曱氧基甲氧基_吡啶 (2·5 g，18 mmol)存於二乙醚（9〇 mL)中之溶液。將混合物 在-70 C下授拌40 min並在5 min内逐滴添加朋酸三異丙酯 (5 mL，22 mm〇l)存於THF (10 mL)中之溶液。將該混合物 在7 0 C下授拌1 h並隨後移除冰浴並使該混合物緩慢升溫 130204.doc •47- 200902012 至RT。 溶液B :用2 Μ碳酸鈉（72 mL，36 mmol)水溶液處理7_漠_ 苯并[b]噻吩（3·8 g，18 mmol)、2_(二_第三丁基膦基）聯苯 (268 mg, 0.90 mm〇l) > Pd(dppf)Cl2 (732 mg5 0.90 mmol)# 於1 一 °惡炫（3 0 mL)中之溶液。一旦溶液a達到即將該 溶液加熱至8〇。(：。 在10 min内用逐滴溶液A處理溶液B。將合併溶液加熱至 85°C，保持5 h。將混合物冷卻至RT並用乙酸乙酯及水稀 釋。將有機相用水及飽和氯化鈉水溶液洗滌，經硫酸鈉乾 燥，過濾’並在真空中濃縮。藉由管柱層析法在12〇 g矽 膠上用DCM至乙酸乙醋梯度溶析來純化以得到含有一些起

始3-甲氧基甲氧基-吡啶之標題化合物（3 8 g)。NMR (400 MHz, CDC13) δ 8.68 (s, 1Η), 8.42 (d, /=4 Hz, 1H), 7.88 (d, J=8 Hz, 1H), 7.33-7.50 (m, 5H), 5.12 (s, 2H), 3.36 (s, 3H) 〇 製備107 2-氣-4-[7-(2-氯-°比啶-4-基）-苯并[b]噻吩-2-基]-嘧啶 在500 mL圓底燒瓶中’於氮氣中，將4·苯并[b]噻吩_7-基-2-氯-吡啶（13 g，53.1 mmol)及硼酸三異丙酯（20 g，1〇6 mmol)存於THF (150 mL)中之溶液冷卻至_7(TC。在30 min 時間段向經冷卻之溶液中逐漸添加二異丙基醯胺鋰（2 μ存 於THF中’ 53 mL，106 mmol)。在冷卻浴中將該混合物再 連續攪拌1小時。在30 min時間段内將該混合物逐漸轉移 至 2,4-二氣-。密。定（12 g，106 mmol)、Pd(dppf)Cl2 (2.2 g，53 130204.doc -48- 200902012 mmol)及石厌酸鋼（35 mL，3 M，106 mmol)存於 THF (150 mL) 中之回流溶液中。再回流丨h。將該混合物冷卻至rt並用 500 mL氯仿/IPA (3/1)及2〇〇 mL水稀釋。藉由過濾收集所 得固體並保留氣仿/IPA/水混合物。用DCM洗滌固體並在 真空中將其乾燥。分離氣仿/IPA/水混合物層。將有機相用 水及飽和氣化鈉水溶液洗滌，經硫酸鈉乾燥並在真空中濃 縮以得到褐色殘留物。藉由FCC(存於DCM中之1〇%曱醇） 純化殘留物，產生額外產物。將兩份合併以得到標題化合 物（13 g，68。/〇)。MS (ES) m/z 358 [M+l]+。 基本上按照2-氣-4-[7-(2-氣-吼啶-4-基）-苯并[6]噻吩 基]-嘧啶之製備方法使用合適起始材料製備以下中間體： 製備 化合物名稱 MS (ES) m/z ΓΜ+lf 備註 108 2-氣-：)-氣-4-[7-(2-氟-5-甲基-。比啶_4-基)-笨并 [b]D塞吩-2-基]-喷1»定 374 ------— 109 2·氣-4-[7·(2_氟_5-甲基比啶冰基)_苯并[b]噻 吩-2-基]-嘧啶 356 ---—.— — 使用3莫耳。/。之2_ (二-第三丁基 膦基)聯苯 110 2-氣-4-[7-(5-環丙基-2-氟-。比啶-4-基)-苯并[b] 。塞吩-2-基]-5-氟-嘴。定 400 -----^ 111 4- {4-[2·(2-氣-5-氟-嘧啶-4-基)-苯并[b]噻吩·7_ 基]_6_氟-吡啶_3_基甲基卜嗎啉 459 --- - — 112 {4-[2-(2-氯-5-氟-嘯啶-4-基)_苯并[叫噻吩_7_ 基]·6_故-吡啶各基曱基}-二曱基-胺 417 ------ —~~—— 113 {4-[2-j2-氣-5-1-嘧啶 _4_ 基)-苯并[b]噻吩 _7_ 基]-6_氟-。比啶-3-基曱基}_曱基-胺基曱酸第三 丁基酯 502 -—--- 114 AM4-P-(2·氣_5_氟-嘧啶冰基)·苯并[b]噻吩· 7-基]-D比啶-3-基}-2,2-二曱基-丙醯胺 441 ----~~— ----- 130204.doc -49- 200902012 ( 製備 化合物名稱 MS (ES) m/z [M+lf 備註 115 2-氣-5-氟-4-[7-(3-甲氧基曱氧基比啶-4-基)- 苯并Μσ塞吩-2-基]-°密°定 420 116 2-氣-4-[7-(2-氯-5-乙氧基比啶-4-基)-苯并[b] 嗟吩-2-基]-5-氟-嘧咬 402 117 2-氯-4-[7-(2-氯-5-甲氧基曱氧基比啶-4-基)-苯并[b]噻吩-2-基]-5-氟-嘧啶 436 118 2-氣-5-氣-4-(7-σ比σ定-4-基-苯弁[b]π塞吩-2-基)- σ密σ定 342 119 4-(7->臭-苯并[b]a塞吩-2·基)-2-氣-5-氟-°密°定 476 120 4-(7-溴苯并[b]噻吩-2-基)-2,5-二氯嘧啶 359 121 4-(7->臭本并[b]°塞吩-2-基)-2-氣-5 -曱基。密。定 339 122 4-(7-溴苯并[b]噻吩-2-基)-2-氯嘧啶 325 123 1 -(4-(2-(2-氣-5-氟嘧啶-4-基)苯并[b]噻吩-7-基)吡啶-3-基)乙基胺基甲酸第三丁酯 485 124 2-(4-(2-(2-氣-5-氟嘧啶-4-基)苯并[b]噻吩-7-基定-3-基)-2-甲基丙基胺基甲酸第三 丁酯 531 125 ⑻-1-(4-(2-(2_氣-5-氟嘧啶-4-基)苯并[b]噻吩-7-基)-6-氣°比。定-3-基)乙基胺基曱酸苐三丁 S旨 503

製備126 4-[2-(2 -氣-5-氣-¾ σ定-4 -基）-未并[b]D塞吩-7-基]-σ比σ定-3-醉 用5 N HC1 (3 mL)處理2-氣-5-氟-4-[7-(3-曱氧基曱氧基-吡啶-4-基）-苯并[b]噻吩-2-基]-嘧啶（4 g, 10 mmol)存於THF (1 0 mL)中之溶液。將混合物在RT下攪拌6 h。將反應在真 空中濃縮並用飽和碳酸氫鈉水溶液及DCM稀釋。分離該等 相並過濾每一相。用DCM洗滌來自有機相之固體以得到黃 褐色固體狀標題化合物（3 00 mg)。用水洗滌來自水性層之 固體並乾燥以得到黃褐色固體狀標題化合物（300 mg)。合 130204.doc -50- 200902012 併該等固體以得到黃褐色固體狀標題化合物_哪明。 MS (ES) w/z 358 [M+l]+。 使用與製備4-[2-(2-氯-5-氟苯并⑻喧吩-7_ 基]-吼咬-3-醇類似之程序使用合適起始材料製備以下中間 體： 製備 化合物名稱 127 製備128 MS (ES) m/z ΓΜ+ιΓ 基]-吡。定-3-醇 392

2-(2-(5-(羥基甲基）-1Η-1，2,3-三 1，3-二酮 °坐-1-基）乙基）異吲哚啉_ 將2-(2-疊氣基乙基）異，n，3_二明（i2 g，55 5 _〇1) 及2-丙快小醇（3.88 mL，66.6 mm〇i)存於曱苯（5〇叫中之 混合物在90°C下於密封反應器中加熱3天。冷卻至尺丁並收 集固體。藉由管柱層析法（DCM至存於DCM中之2%曱醇） 純化’產生白色固體狀標題化合物（第一流份)(4.7 g，

31%)。MS (El) m/z 273 [M+l]+ 〇 製備129 2-(2-(4-(峨甲基）-1 Η-1,2,3-三。坐基）乙基）異0引哚啉- 1，3-二酉同 將二苯基膦（0.29 g，i.1〇 mm〇1)及碘（〇 28 L丨1〇爪爪〇1) 存於DCM (4 mL)中之混合物攪拌1〇 min。添加咪唑 (0’12 g，1_84 mmol)並攪拌 1〇 min。添加 2_(2-(心（經基曱 基）-1Η-1，2,3-二唑-1-基）乙基）異吲哚啉q，3_二酮（〇 2 g， 0_73 mmol)並在RT下攪拌過夜。用dcm稀釋並用水及飽和 130204.doc -51 · 200902012 氯化鈉水溶液洗滌。經硫酸鈉乾燥。在真空中濃縮該溶 液。藉由管柱層析法（DCM至存於DCM中之20%乙酸乙醋） 純化，產生黃色固體狀標題化合物（0.22 g，78%)。MS⑺I；) w/z 383 [M+l]+。 製備130 2-(2-(4_甲基-1H-1，2,3-三唑-1-基）乙基）異吲哚琳_1，3_二酮 將2-(2-(4-(碘曱基）-1Η-1，2,3-三。坐-1-基）乙基）異σ引哚啉_ 1,3-二酮（1 g，2.62 mmol)及0.2 g存於碳上之10〇/。鈀存於乙 醇（1 0 mL)中之混合物在充入氫氣之條件下攪拌過夜。過 濾以移除固體並濃縮。藉由管柱層析法（DCM至存於DCM 中之20〇/〇乙酸乙酯）純化’產生黃色固體狀標題化合物（〇 5 g，74%)。MS (El) m/z 257 [M+l]+。 製備131 2-(2-[1，2,3]三唾-1-基-乙基）-異叫丨D朵- i，3_二酉同 向裝備有磁力攪拌器、氮氣入口及溫度探針之5_L圓底 燒瓶中添加 1H-1，2,3 -三 σ坐（250 g，3.51 mol)、iV~(2 -演乙基） 鄰苯二曱醯亞胺（942 g，3.52 mol)及1500 mL DMF ;將混合 物冷卻至1 5°C。攪拌該混合物直至固體幾乎全部溶解並隨 後在冰浴中冷卻。在10 min内分份添加碳酸|色（1 1 45 g 3.5 1 mol)。反應混合物放熱至21 C。搜拌該混合物過夜並 達到RT。將該反應混合物傾倒入含有8 L冰水之12-L燒瓶 中。將懸浮液攪拌30 min並隨後過濾並用3 L水沖洗。風乾 2 h。自7 L無水乙醇中重結晶區域異構體之混合物。藉由 過濾分離固體並風乾。再次自1 6 L無水乙醇中重結晶。再 130204.doc -52- 200902012 次藉由過濾分離固體並用新鮮乙醇（1000 mL)沖洗。在4(TC 下真空乾燥固體以得到292.7 g白色固體狀標題化合物 (34%)。MS (El) m/z 243 [M+l]+。 製備132 2-[1，2,3]三唑-1-基-乙基胺 將 2-(2-[1，2,3]二嗤-1-基-乙基）_ 異。引 0朵 _ι，3_ 二酮（1〇6 g， 437.59 mmol)溶解於含有2 L無水乙醇之5-L圓底燒瓶中。 將經揽拌之混合物在氮氣中加熱至7 〇 ;在該溫度下於1 〇 min内逐滴添加單水合肼（23 mL，463.76 mmol)。該混合物 變均勻且顏色為黃色。在該溫度下約3〇 min後，反應中開 始形成固體且黃色顏色隨時間逐漸變得較淺。在7 h後移 除熱並在1 h内回到RT。經矽藻土過濾並用丨〇〇〇 mL乙醇沖 洗。蒸發成半固體。溶解於2 L CH2Cl2中，經矽藻土過濾 並再次蒸發。用曱苯（1500 mL)稀釋殘留物並經矽藻土過 濾以移除不溶性黃褐色固體。蒸發並在真空中放置過夜。 將油狀物溶解於100 mL C^C!2中並再次藉助矽藻土塾過 濾。蒸發以得到43.9 g (90%)渾濁油狀標題化合物。ms (ES) m/z 1 12 [M+l]+。 使用與彼等對於mu!备乙基胺所述類似之 程序製備以下中間體： 製備 ~----- 化合物名稱 MS (ES) m/z 133 (1-(2-胺基乙基)-出-1，2,3-三唑_5_基)甲醇 |M+11 143 ~. 134 2-(4-甲基·1Η-1，2,3-三唾·i•基)乙胺 127 130204.doc -53- 200902012 使用與製備下文{5-敦-4-[7-(2 -氟_5 -曱基-吼咬_4_基）_苯 并[13]噻吩-2-基]-嘧啶_2-基}-(2-[1，2,3]三唑-1-基_乙基）_胺 類似之程序製備以下中間體： 製備 · 化合物名稱 MS (ES) m/z fM+ΐΓ ----―"___1 備註 135 (〇 氟氣-2-(2-[1，2,3]三唑-1 -基-乙基胺 基)-嘧啶-4-基]-苯并[b]噻吩-7-基}-吡啶-3-基甲 基)-曱基-胺基甲酸第三丁基酯 578 136 [4-(/-邊-本并|>』嗟吩-2-基)-5-1-嘴。定-2-基]-(2-[1，2,3]三嗤-1-基-乙基)_胺 419、421 137 W-(2-( 1 Η-1，2，3 -二唑-1 -墓)乙基>4-(7-溴苯并[b] 噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 401 > 403 - 1 — 138 iV-(2-(lH-l，2,3-三嗤-1-基)乙基)-4-(7-漠苯并[b] 吩-2-基)_5_氣嘴〇定_2_胺 435、437 ----- 139 ΛΜ>(1Η-1，2,3-三唑-1-基)乙基)_冬(7-溴苯并[b] °塞吩-2-基)-5-甲基嘧咬-2-胺 415 、 417 140 ΛΚ2-(1 Η-1,2,3-三峻-1 -基亿基)-4-(7-(3-(1 -胺 基乙基比啶-4-基)苯并[b]噻吩-2-基)-5-氟嘧 °定-2-胺 461 原位TFA移除Boc (第三丁基-胺基 甲酸酯)保護基團 141 ⑻-1 -(6-1-4-(2-(5-氟-2-(2-(5-(羥基曱基)-11^- 1，2,3-三峻-1 -基)乙基胺基)嘧啶冰基)笨并[b] 噻吩-7-基户比啶-3-基)乙基胺基曱酸第三丁酯 609 來自對掌性中間 體 142 ⑻-1 -(6-1-4-(2-(5-氟-2-(2-(4-曱基-1 Η-1，2,3-三唑-1-基)乙基胺基)嘧啶_4_基)笨并[b]噻吩_7_ 基)°比啶-3-基)乙基胺基曱酸第三丁酯 593 來自對掌性中間 體 製備143 {5-氟-4-[7-(4,4,5,5-四曱基-[1，3,2]二氧硼咪-2-基）-苯并 [b]噻吩-2-基]-嘧啶-2-基}-(2-[1,2,3]三唑-1-基-乙基）-胺 將[4-(7-溴-苯并[b]噻吩-2-基）-5-氟-嘧啶-2-基]-(2-[1，2,3]三唑-1-基-乙基）胺（15 g，3.45 mmol)、雙（四曱基 乙一醢）一爛（1.05 g，4.14 mmol)、乙酸鉀（1.02 g，10.36 mmol)及 Pd(dppf)Cl2 (280 mg, 0.35 mmol)合併於 DMSO (30 mL)中。對所得混合物實施三次脫氣並將其加熱至8(rc， -54- 130204.doc 200902012 保持過夜。將該混合物冷卻至RT並將其傾倒入水中。過濾 以得到濕固體，溶解於氣仿/IPA (3:1，v/v)中，用飽和氯化 鈉水溶液洗條並隨後經硫酸納乾燥。在真空中濃縮該溶 液。藉由層析法（己烷至乙酸乙酯）純化，產生標題化合物 (1.3 g，81%)。 藉由使用基本上與彼等上述中間體所用程序類似之程序 製備以下中間體： 製備 化合物名稱 MS (ES) m/z 「M+11+ 144 W 二唾小基)乙基)_5_氣_4_(7_(4,4,5,5_四曱基_ --二氧蝴咮-2·基)笨并[b]噻吩-2-基)痛啶_2·胺 1AV1 1 1 1 483 145 八0(1H-1，2,3:二唾-1-基)乙基)_5_曱基冰(7_(4,4,5,5_四曱基_ ---基)苯并[b]噻吩-2-基)嘧喷-2-胺 463 146 (/-U Η-1，2,3-二。坐-1 -基)乙基)_4-(7-(4,4,5,5-四甲基-1，3,2-二氧 ----删味_2·基)苯并[bl噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 449 使用與製備下文Υ-(2-(1Η-1，2,3-三唑-1-基）乙基）-4-(7-(1H-吡咯并[2,3-b]吼啶-4-基）苯并[b]噻吩_2_基）-5_氟嘧啶_ 2 -胺類似之程序製備以下中間體： 製備 化合物名稱 MS (ES) m/z [M+l]+ 備註 147 (4 (>〇資氬基-乙基)_2_氟_吧啶_4_基]-苯 三唑-1-基-乙某 V 胺 505 148 (5二|y4-{7-[2-氣-5-(1-甲氧基甲氧基.乙基卜比啶斗 本弁[b]。塞吩-2-基}-嘧啶-2-基)-(2-[1，2,3]三嗤]备乙 基V胺 524 149 咬斗基}-本弁[b]噻吩-2-基)_嘧。定_2_基] ... 1-基-乙基V胺 580 150 (R)-N-(：Z-(1 Η-1，2,3-二口坐-1 基)乙基)冰(7_(5_( ▲ 基 487 151 2-μ-(6-齓-4-{2-|5-氟-2-(2-[1，2,3ΤΕϋΤ^7^Χ 胺美） 做冬基]-苯并[b]D塞吩_7_基}_。比咬I基氧基忍 異。弓卜朵-1，3·二酮 625 152 [2-(6-氟-4-{2-[5-氟-2-(2-[l ♦定.-4:基]-笨并肿 609 130204.doc -55- 200902012 製備 化合物名稱 MS (ES) m/z ΓΜ+ΐΓ 備註 -…- 甲基-胺基甲酸第=丁基酯 153 1 -(4-(2-(2-(2-(1 Η-1，2,3-三唑-1 -基）乙基胺基)-5-氟哺啶冰基)苯并[b]噻吩_7_基)-6-氟吡啶-3-基氧基） _ 丙-2-基)異吲哚啉_1，3--酮 639 154 問-2-(1-(4-(2-(2-(2-(识-1，2,3-三唑-1-基)乙基胺基)-5-氟♦定·4_基)苯并[b]噻吩_7_基)-6-氟吡啶-3-基氧基） 丙-2-基)異吲哚啉-1,3--酮 639 155 1-(4-(2-(2-(2-(1Η-1，2,3-三唑-1-基)乙基胺基)-5-甲基嘧 °定·4·基)苯并[b]噻吩-7-基)-6-氯吡啶-3-基)乙基胺基甲 酸第三丁酯 592 156 1 -(4_(2_(2-(2-(1 Η-1，2,3-三唑-1 -基)乙基胺基)嘧啶 _4·基） 苯并问噻吩_7_基)_6-氣。比啶-3-基)乙基(甲基)胺基甲酸 第三丁酯 592 157 1 -(4-(2-(2-(2-( 1 Η-1，2,3-三唑-1 -基)乙基胺基)-5-氟嘧咬-4_基)苯并[b]噻吩-7-基)-6-氟吡啶-3-基)乙基胺基甲酸 第三丁酯 579 158 N-(2-(1H-1，2,3-三。坐-卜基）乙基)-4-(7-(2-氣-5-(2-(四氫_ 2H•吼喃-2-基氧基)乙氧基户比啶_4_基)苯并[b]噻吩-2-基)-5-氟嘧啶-2-胺 596 條件與 實例17 159 4-(1-(4-(2-(2-(2-(111-1，2,3-三唑-1-基)乙基胺基)-5-氟嘧 B定_4·基)苯并[b]°塞吩_7·基)-6-氣°比咬-3-基)乙基)六氫 吡嗪-1-甲酸第三丁酯 —— 一 · 664 頸似 條件與 實例17 160 1-(4-(2-(2-(2-(1Η-1，2,3-三唑-1-基)乙基胺基 4-基)苯并[b]。塞吩-7-基)-6-甲基°比咬-3-基)乙基胺基甲 酸第三丁酯 ------ 575 條件與 實例17 '—----1 三口坐小基）乙基）_5_n(7_⑵氣_5_甲基 °比σ定-4-基）本并[b]0塞吩-2-基）喷σ定_2·胺

I <£> "PU u/^ 將 2 -氣-5-氟- 4- [7-(2. 迅尸丰开[b]噻吩· 2-基]•嘧啶（200 mg，0.54 mmol)及 2-[1，2,3]三唑·卜基_乙美 -56- 130204.doc 200902012 胺（120 mg，21.1 mmol)合併於壓力容器中之正丁醇（2 mL)、或者二。惡烧、一 °惡烧-NMP (7V-曱基d比u各咬酮）、單獨 NMP(作為溶劑）中。將混合物在油浴中於1 20-1 50°C下加熱 過夜（或在微波反應器中10-60 min)。用氯仿/IPa (3/1)稀釋 該混合物。將溶液用飽和氣化鈉水溶液洗滌，經硫酸鈉乾 燥’並在真空中濃縮成黑色殘留物。藉由管柱層析法 (DCM +存於DCM中之10%曱醇）純化，產生黃色固體狀榡 題化合物（140 mg，59%)。MS (ES) w/z 450 [M+l]+ 〇 使用與上文實例程序類似之程序製備以下實例： 實例 化合物結構 化合物名稱 MS (ES) m/z ΓΜ+11+ 備ί主 2 0 F j v — . jV-(2-(1H-1，2,3-三唾-i_基)乙基)_ 4-(7-(2-氟-5-曱基《•比咬_4_基)苯并 [b]°塞吩_2·基)嘴咬_2-胺 432 使用3 當量:r 3 p F F iV-(2-( 1 Η-1，2,3 -三唑-1 _ 基)乙基) 4-(7-(5·環丙基_2-氟。比α定斗基)苯 并[b]°S吩-2-基)-5-氟嘧。定_2_胺 476 4 0 F F 7\^(2-(111-1，2,3-三嗤小基)乙基)_ 5-氟_4-(7_(2·氟-5-(嗎琳基甲基)0比 啶冬基)苯并[b]噻吩·2_基)嘧咬_ 2-胺 534 5 0 F j如、 F — ΛΚ2-( 1 Η-1，2,3 -三唑-! •基)乙基 4-(7-(5-((二曱基胺基)甲基)_2_氟 °比啶-4·基)苯并[b]噻吩_2-基)_5_ 氟嘧啶-2-胺 492 一〜、 — - 130204.doc -57- 200902012

化合物名稱 jV-〇(1H-1，2,3-三唾-1.基)乙基)_ 4-(7-(2-氣吼啶·4_基)苯并[b]噻吩_ 2-基)嘧啶-2-胺 尽(2-(111-1，2,3-三。坐-1_基)乙基)· 4-〇(3-胺基°比啶+基)笨并[b] 0塞 吩-2-基)-5-氟嘴。定_2_胺 1，2，U坐_ 1 _ 基）乙 基胺基)-5-氟嘧啶-4-基)苯并[切。塞 吩-7·基)吡啶-3-醇 4-(2-(2-(2-(1Η-1，2,3-三。坐基)乙 基胺基)_5-氟°密咳-4_基)苯并[b]D塞 吩-7-基)-6-氣·»此啶-3 -醇 7^-(2-(1?!-1，2,3-三唑-1-基)乙基)_ 4-(7-(2-氣-5-乙氧基〇比。定_4_基)苯 并[b]°塞吩-2-基)-5-氟。密。定_2_胺 /^-(2-(1只-1，2,3-三唾-1_基）乙基)_ 5-氟-4-C7七比啶-4-基)苯并[b]噻 吩-2-基)奢定-2-胺 7V-(2-( 1 Η-1，2,3·Τ 三唾-1 _ 基)乙基)_ 4-(7-(5-(1-胺基-2-甲基丙_2-基)·：2- 氟o比咬-4-基)苯并[b]喧吩_2_基)-5-氟嘧咬-2-胺 MS (ES) m/z [M+l]+ 434 433 434 468 496 418 507 備註 原位 TFA移 除B〇e 基團 實例1 3 ^-(2-(1^1-1，2,3-三唑-1-基）乙基）_5_氟_4_(7 基胺基）甲基）吡啶-4-基）苯并[b]噻吩_2_基）嘧 夂2 _私* 130204.doc -58- 200902012 Η

,Ν

啶-4-基]-苯并[b]噻吩_7_基卜比啶·3_基曱基> 甲基-胺基； 酸第三丁基1旨（0.30 g，。.51 mm〇1)及無水TFA (2 〇叫及無 水DCM (2.2 mL)合併。在RT下攪拌} hD蒸發出溶劑。將 所得殘留物用DCM稀釋並用飽和碳酸氫鈉溶液、水及飽和 氯化納水溶液洗蘇。分離有機層並經硫酸鎮乾燥。過淚並 在真空中漢縮以付到粗產物。藉由管柱層析法[〇. 1 %至2 % 2 Μ氨水，存於甲醇/DCM中]純化，產生標題化合物（〇.2〇 g，83%)。MS (ES) w/z 479 [M+l]+。 實例14 TV-(2-(lH-l，2,3-三唑-1-基）乙基）-5-氟-4-(7-(5-氟-1Η-吡 咯并[2,3-b]吡啶-4-基）苯并[b]噻吩-2-基）嘧啶-2-胺

將{5 -氟-4-[7-(4,4,5,5 -四甲基_[ι，3,2]二氧硼味_2_ 基）_苯 并[b]°塞吩-2_基]_喊°定-2-基}-(2-[1，2,3]三唑-i_基-乙基）_胺 (0.105 g，0.23 mmol)、3-氟-4-溴-1H-吡咯并[2,3_b]吡啶（51 130204.doc -59- 200902012 mg，0.30 mmol)、八水合氫氧化鋇（0.21 g，〇 68 mm〇1，或 者石厌納、石厌酸钟、奴酸氣納）、Pd(dppf)ci2 (2〇 mg

0.025 mmol)合併於2 mL DMF(或者二。惡烧、thF、DMSO 及CHsCN)與水（4/1，v/v)之混合溶劑中。將反應混合物加 熱至8〇C ’保持2.5 h。（或微波加熱i〇_6〇 min)。冷卻至 RT。將其用50 mL氯仿/IPA (3 :1, v/v)稀釋。將其用水及飽 和氣化鈉水溶液洗滌並經硫酸鎂乾燥。移除有機溶劑以得 到粗產物。藉由管柱層析法（己烷至乙酸乙酯）純化，產生 才示化合物（0.05 g，47%)。MS (ES) w/z 475 [M+l]+。 實例1 5 #-(2-(11^-1，2,3-三<1坐-1-基）乙基）-4-(7-(11"1-11比略并[2,3-1)] °比。定-4-基）苯并[b]嘆吩-2-基）-5-氟嘧啶-2-胺

將 iV-(2-(lH-l，2,3 -三。坐-1-基）乙基）-5 -亂-4-(7-(4,4,5,5 -四 曱基_1，3,2-·一乳爛味_2_基）苯并[b]°塞吩-2-基）嘲。定_2_胺 (0.28 g，0.6 mmol)、4-溴-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶（1〇〇 mg， 0.51 mmol)、八水合氫氧化鋇（〇·48 g, 1.52 mmol)、 Pd(dppf)CI2 (40 mg，0.05 mmol)合併於 4 mL DMF 與水（4/1, v/v)之混合溶劑中。將反應混合物加熱至80 °C，保持45 min。將其冷卻至RT。用50 mL氯仿/IPA (3:1，v/v)稀釋。 I30204.doc -60- 200902012 用水及飽和氯化鈉水溶液洗滌並經硫酸鎂乾燥。移除有機 溶劑以得到粗產物。藉由管柱層析法（己烷至乙酸乙酯）純 化，產生標題化合物（0.17 g，75%)。MS (ES) w/z 457 [M+l]+。 使用與上文實例程序類似之程序製備以下實例： 實 例 化合物結構 化合物名稱 MS (ES) m/z [M+l]+ 備註 16 2-((4-(2-(2-(2-( 1 Η-1，2,3-三 唑-1-基)乙基胺基)-5-氟嘧 啶-4-基)苯并[b]噻吩-7-基)-6-氟吼啶-3-基)曱氧基)乙醇 510 17 ςτΗ^'心Ν N F #-(2-(1?1-1，2,3-三唑-1-基)乙 基)-4-(7-(5-(氮雜環丁-1-基 曱基)-2-氟'比啶-4-基)苯并[b] α塞吩-2-基)-5-氣°密°定-2-胺 505 在100°C下且 10 min。 Pd(dppf)Cl2 及2-(二-第三 丁基膦基)聯 苯用作觸媒 及配體。正 相繼之反相 以純化。 18 〇ntif f ΛΗ2-(1Η-1，2,3-三唑-1-基)乙 基)-5-氣-4-(7-(2-氟-5-(吼咯 0定_1~基曱基)°比°定_4-基)苯并 [b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 519 條件與實例 17類似 19 ςχπί'心N W-(2-(lH-l，2,3-三唑-1-基)乙 基)-4-(7-(5-((環丙基胺基） 甲基)-2-氟吼啶_4-基)苯并[b] D塞吩-2-基)-5-氣喷。定-2-胺 505 條件與實例 17類似 20 c\ Α/·-(2-( 1 Η-1，2,3 -三唑-1 -基）乙 基)-5-氣-4-(7-(2-氟-5-((甲基 (丙基)-胺基)曱基)0比0定-4·-基） 苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 521 21 一'、 ''Ν’、F iV-(2-(lH-l，2,3-三唑-1-基）乙 基)-5-氟-4-(7-(2-氟-5-((異丙 基(曱基）胺基)曱基)°比。定-4-基)苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2- 胺 521 130204.doc -61 - 200902012 實 例 化合物結構 化合物名稱 MS (ES) m/z [M+l]+ 備註 22 ，(2-(lH-l，2,3-三唑小基）乙 基)-5-氟-4-(7-(2-氣-5-((丙基 胺基)-曱基)-°比11 定-4-基)苯弁 [b]噻吩-2_基)嘧啶-2-胺 507 23 ΛΜ；2-(1Η-1，2,3-三唑-1·基）乙 基)-5-氟-4-(7-(2-氟-5-((異丙 基胺基)-曱基)吼0定-4-基)苯 弁[b]a塞吩-2-基)嘴。定-2-胺 507 24 ΛΜ；2-(1Η-1，2,3-三唑-1-基）乙 基)-4-(7-(5-((乙基胺基)甲 基)-2-氟。比啶斗基)苯并[b]噻 吩-2-基)-5-氣°^σ定-2-胺 491 25 iV-(2-(lH-l，2,3-三唑-1-基）乙 基)-4-(7-(5-((乙基(曱基)胺 基)甲基)-2-氟。比啶-4-基)苯 并[b]噻吩-2-基)-5-氟嘧啶-2- 胺 507 26 、 〇 <lx^ ) ΛΜ；2-(1Η-1，2,3-三唑-1-基）乙 基)-4-(7-(5-((4,4-二甲基噁唑 。定-3-基）曱基)-2-氣0比α定-4-基)苯并[b]噻吩-2-基)-5-氟嘧 啶-2-胺 549 27 〇 H碌l F 2-(4-(2-(2-(2-(1Η-1，2,3-三唑-1 -基)乙基胺基)-5- 1°密°定-4· 基)苯并[b]D塞吩-7-基)-6-氣ϋ比 °定-3-基)-2-甲基丙酿胺 521 28 NH CrHjN -喊F 2-(4-(2-(2-(2·(1Η·1，2,3-三唑-1 -基)乙基胺基)-5-說喷。定-4-基)苯并[b]°塞吩-7-基)-6-氣吼 啶-3-基）乙醯胺 493 29 ςτπί'Ν, Η0^ν-Ο^ f Si人f 2-((4-(2-(2-(2-(1Η-1，2,3-三 唑-1-基）乙基胺基)-5-氟嘧 啶-4-基)苯并[b]噻吩-7-基)-6-氟吼°定_3-基)曱基胺基)乙 醇 509 條件與實例 17類似 30 ςτΗί'ο F 2-(4-(2-(2-(2-(1Η-1，2,3-三唑-1 ·基)乙基胺基)-5-氣哺°定-4-基)苯弁[b]a塞吩-7-基)-6-氣°比 啶-3-基胺基)乙醇 495 130204.doc -62- 200902012 實 例 化合物結構 ~~ —_ 化合物名稱 MS (ES) m/z [M+l]+ 備註 31 7ν-(2-(1Η-1，2,3-三。坐-1-基)乙 基)-5-氟-4-(7-(2-氣-5-(2-曱 氧基乙基-胺基比咬-4-基)苯 并[b]噻吩·2·基)嘧啶-2-胺 509 32 F ΛΗ2-(1Η-1，2,3-三唑-1-基)乙 基)·5-1_4·(7-(2-氟-5-(1 -(2-氟乙基-胺基)己基)°比σ定-4-基)苯并[b]嗟吩基)喷咬-2-胺 525 33 ch3 jV-(2-(1H-1，2,3-三唾-1-基)乙 基)-4-(7-(5-( 1 -胺基乙基)-2-氟°比啶斗基)苯并[b]噻吩-2-基)-5-甲基嘧啶-2-胺 475 34 a F j知 Cl jV-(2-(1H-1，2,3-三。坐-1-基)乙 基)-4-(7-(5-( 1 -胺基乙基)-2-氟吡啶-4-基)笨并[b]噻吩-2-基)-5-氣嘧啶-2-胺 495 35 2-((4-(2-(2-(2-( 1H-1，2,3-三 唑-1-基)乙基胺基)-5-氟嘧 啶-4-基)苯并[b]噻吩·7-基)-6-氟咣啶_3_基)氧基)_丙_2·醇 510 實例36 ；V-(2-(lH-l，2,3-三唑 _1_基）乙基）_4_(7_(2_ 氣曱基胺 基）乙基比啶-4-基）苯并[b]噻吩_2•基）嘧啶_2-胺

將 1-(4-(2-(2-(2-(1Η-1，2,3-三唑-1-基）乙基胺基）嘧啶 _4_ 基）苯并[b]噻吩-7-基）-6-氣吡啶_3_基）乙基（曱基）胺基甲酸 第三丁 S旨（300 mg，〇.5 mm〇i)及無水tfa (2.0 mL)合併於無 130204.doc •63- 200902012 水DCM (6 mL)中。將溶液在RT下攪拌！ h。將所得殘留物 用DCM稀釋並用飽和碳酸氫鈉溶液、水及飽和氣化鈉水溶 液洗滌。分離有機層並經硫酸鎂乾燥。過濾並在真空中濃 縮以得到殘留物。藉由管柱層析法[〇」％至2% 2 Μ氨水， 存於甲醇/DCM中]純化該殘留物，產生標題化合物（丨75 mg，70%)。MS (ES) m/z 491 [M+l]+。 使用與彼等對於7V-(2-(lH-l，2,3-三唑-卜基）乙基）_4_(7_ (2-氣-5-(1-(甲基胺基）乙基）吼啶_4_基）苯并[b]噻吩_2_基）嘧 啶-2-胺所述類似之程序製備以下實例： 實例 化合物名稱 MS (ES) m/z ΓΜ+ΐΓ 37 η」 凡N 尽(2-( 1 Η-1,2,3 -三唑小基）乙基)-4· (7-(^-(1-胺基乙基)-2-氯吡。定-4-基)苯并[b]噻吩-2-基)-5-甲基嘧 啶-2-胺 492 38 -〇Xicl 从〇(1!1-1，2,3-三。坐-1_基）乙基)_4_ (7-(2-氣_5_(1-(六氫吼嗪·^基)乙 基)°比咬-4-基)苯并[b]〇塞吩_2_基)_ 5-氟嘧啶-2-胺 564 39 Η2Ν^^Γ Sj 人 ch3 W-(2-( 1 Η-1，2,3-三唑-1 ·基)乙基)_4· (7-0(1-胺基乙基)—2_曱基吼0定冰 基)苯并[b]噻吩-2-基)-5-氟嘧啶_2- 胺 475 實例40 1 (4 (2-(2-(2-(1Η-1，2,3-三唾-1-基）乙基胺基）_5_ 氟嘴咬 _ 4基）笨并[b]嗟吩_7_基）_6_氟吼„定_3_基）乙醇 130204.doc -64 - 200902012

向5-氟-4·{7-[2-氟-5-(1_曱氧基曱氧基_乙基）^比啶_4_基]_ 苯并[b]噻吩-2-基卜嘧啶_2_基）三唑_丨_基-乙基 (350 mg，0.67 mmol)存於甲醇（1〇 mL)t之溶液中添加5

1 N HC1。將混合物攪拌過夜。用碳酸鈉（2 N)稀釋該反應 混合物。將產物萃取至氣仿中。經硫酸鈉乾燥有機相。在 真空中將溶液濃縮以得到粗物質。藉由管柱層析法（存於 DCM中之10%甲醇）純化粗物質，產生黃色固體狀標題化 合物（150 mg，47%)。MS (ES) m/z 480 [M+l]+，5〇2 [M+Na]+。

三唑基）乙基）_4_(7_(5_(1_胺基乙基）_2_ 氟°比啶-4-基）苯并[b]噻吩_2-基）-5-氟嘧啶_2_胺 Η

在氮氣中將碲（1.27 g，10 mmol)及四氫硼化鈉（〇 9 §，2 * mm〇1)合併於乙醇（2〇 mL)中。將混合物加&至回流直至其 變成澄清紅色溶〉夜。向（4_{7·[5仆疊氡基-乙基m吼 啶-4-基]-苯并[b]噻吩_2_基}_5_氟_嘧啶基三 130204.doc -65- 200902012 0坐-1-基-乙基）_胺（400 mg, 0.8 mmol)存於乙醇（i〇 mL)中之 溶液中添加5 mL該溶液。將該混合物在rt下攪拌2〇 min。 過濾出黑色固體。用曱醇及DCM洗滌該固體。蒸發合併之 母液以得到粗產物。藉由FCC(氯仿/甲醇/氫氧化銨， 7/3/0.05)純化粗產物以得到黃色固體狀標題化合物（2〇〇 mg，520/。）。MS (ES) m/z 479 [M+l]+。 實例42 2-(4-(2-(2-(2-(1 H-l，2,3-三唑-1-基）乙基胺基氟嘧啶 _ 4 —基）苯并[b]噻吩-7-基）-6-氟°比啶-3-基氧基）乙醇

向[5-氟-4-(7-{2-氟_5-[2-(四氫吼喃_2_基氧基）·乙氧基]_ °比啶-4_基}-苯并[1)]噻吩-2-基）-嘧啶-2-基]-(2-[1，2,3]三唑_ 卜基乙基）-胺（190 mg，0.32随〇1)存於乙醇（4社）中之溶 液中添加吡啶鏽對甲苯磺酸鹽（8·23 mg，〇〇3 mm〇i)。將甲 合物在饥下搜拌過夜。冷卻該溶液。在真空中將溶液； 縮成黃色油狀物。藉由管柱層析法（二氣甲烷至存於二氣 曱烷中之10%曱醇)純化’ |生淺黃色固體狀標題化合物 (0.14 g，88%)。MS (ES) m/“96 [M+l]+。 使用與對於上文實例所述類似之程序自（5_氟 氟-5♦甲氧基甲氧基.乙基）^4_基]_苯并[b]。塞吩_2_ 基}-嘧啶-2-基三唑」备乙基)_胺製備以下實 130204.doc -66 - 200902012 例：

化合物名稱 2-(4-(2-(2-(2-( 1 Η-1，2,3 -三唑-1 -基）乙 基胺基)-5-氟嘧〇定-4-基)苯并[b]〇塞吩_ 7_基)-6-氣吡啶-3-基氧基)乙醇

W-(2-(lH-l，2,3-三唾-1-基）乙基）_4_(7-(3_(胺基甲基）吼 啶-4-基）笨并[b]噻吩_2_基）_5_氟嘧啶_2_胺

將 Η

mmol)、[4-(7-溴-苯并[b]噻吩 _2_基）_5_ 氟嘧啶 _2_基]_(2_ [1，2,3]三嗤小基-乙基）_胺（1〇〇叫，〇 24 mm〇1)、 Pd(dppf)Cl2 (9 mg，o.oi mmol)、2_(二-第三丁 基膦基）聯笨

(3 mg，0.01 mmol)及碳酸鈉（2 M，0.3 mL，0.6 mmol)合併於 10 mL二噁烷中。將混合物在1〇〇r下於油浴中加熱3丨匕。 用氣仿/IPA (3/1)稀釋該混合物。用飽和氯化納水溶液洗 滌溶液。經硫酸鈉乾燥。在真空中將溶液濃縮成黑色殘留 物。藉由官柱層析法（2〇%乙酸乙酯之己烷溶液）純化，產 生黃色固體狀經Boc保護之產物。溶解於TFA(；3〇%存於 DCM中）中並將其攪拌3〇 min。蒸發出TFA。將TFA鹽溶解 於5 mL存於甲醇中之氨（7 N)中。藉由FCC(DCM今氣仿/甲 I30204.doc -67· 200902012 醇/30%氫氧化銨，7/3/〇.〇5)純化最終產物，產生黃色固體 狀標題化合物（40 mg，39%)。MS (ES) m/z 467 [M+l]+。 使用與上文實例程序類似之程序製備以下實例： 實例 化合物結構 化合物名稱 MS (ES) m/z [Μ+ΐΓ 45 (Λ)-7ν-(2-( 1 Η-1，2,3-三口坐-1 -基） 乙基)-4-(7-(5-( 1 -胺基乙基)-2-氯。比°定_4·基)苯并[b]嗟吩·2_ 基)-5-氟嘧啶-2-胺 495 46 Άα (Λ)-ΛΚ2-(1Η-1，2,3-三唑小基） 乙基)-4-(7-(5-( 1 -胺基乙基)·2-乳°比β定-4-基)苯并[b]。塞吩-2-基)嘴°定-2-胺 477 47 -Vi F N 〇S)-M(2-(lH-l，2,3-三唑-1-基） 乙基)-5-氟-4-(7-(2-敦-5·( 1 -(甲 基胺基)乙基)吼啶-4-基)苯并 [b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 493 48 H ^ ViH,c N F (5)-ΑΚ2-(1Η-1，2,3-三唑小基） 乙基)-4-(7-(2-氟-5-(1 -(甲基胺 基)乙基)-。比〇定-4_基)苯并[b] °塞吩-2-基)-5-甲基-鳴啶-2-胺 489 49 (S)-AH2-(1H-1，2,3-三咬小基） 乙基)-5-氣-4-(7-(2-氟-5-( 1 -(甲 基胺基)乙基)》比啶_4·基)苯并 [b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 509 50 处F #-(2-(1}1-1，2,3-三唑-1-基）乙 基)-4-(7-(5-(1-(乙基胺基)乙 基)-2-氟吼啶-4-基)苯并[b]噻 吩-2-基)-5-氟嘧啶-2-胺 507 實例5 1 (*S)-AK2-(1H-1，2,3-三唑 基）乙基）_4_(7_(2_氤 _5 (1 (曱 基胺基）乙基比啶-4-基）苯并噻吩_2_基）嘧啶_2_胺 130204.doc •68, 200902012

將{5-氟-4-[7-(4,4,5,5-四甲基-[1，3,2]二氧硼咪_2-基）-笨 并[b]噻吩-2-基]-嘧啶·2_基卜(2412,3]三唑_丨_基-乙基）_胺 (0.32 g，0.71 mm〇i)及碘吡啶_3_基）乙基（甲 基）！*基甲酸弟三丁g旨（0.25 g，0_65 mmol)合併於乙腈（3 mL)及水（1.5 mL)中。用氮氣充氣吹掃1〇 min並添加 Pd(dppf)Cl2 (0.039 g，0.047 mmol)。將該混合物在微波反 應器中於1 20°C下加熱1 〇 min，冷卻至rt並在氮氣流中移 除溶劑。在矽膠上用1 % THF/乙酸乙酯至1 〇% THF/乙酸乙 酯梯度；隨後用1%(存於DCM中之含有〇·5 Μ氨水之1〇〇/0甲 醇）/DCM至20%(存於DCM中之含有〇.5 Μ氨水之1〇%甲 醇）/DCM之另一梯度對殘留物實施層析以得到經B〇c保護 之中間體（〇· 1 4 g，3 7%)。將存於DCM (2 mL)中之經B〇c保 護之中間體在RT下用TFA (2 mL)處理2 h。在真空中蒸發 TFA並將殘留物分配於DCM與飽和碳酸氫鈉水溶液之間。 將有機相用水、飽和鹽水洗滌’經硫酸鎂乾燥，過渡並在 真空中蒸發溶劑。藉由反相層析法純化以得到標題化合物 (0.1 g)。MS (ES) w/z 475 [M+l]+ 〇 實例52 1-((4-(2-(2-(2-(1Η-1，2,3-二嗤 _ι_基）乙基胺基）_5_氟。密咬 _ 4-基）苯并[b]噻吩-7-基）-6-氟吡啶_3_基）甲基）六氫吡啶_4_醇 130204.doc -69- 200902012 Η

將5-(漠曱基）-2-乱-4-硬。比咬（0.2 g，〇·63 mm ο 1)、六氫°比 啶-4-醇（0.192 mg，1.9 mmol)及二異丙基乙基胺（〇22 mL， 1.27 mmol)合併於乙腈（3.0 mL)*。將反應混合物在8〇°c 下加熱2 h並冷卻至RT。移除有機溶劑以得到粗丨_((6_氟_4_ 蛾。比啶-3-基）曱基）六氫吡啶_4_醇。將粗丨_((6_氟_4_碘吡 0疋-3-基）曱基）六風 〇比。定-4-醇（0.63 mmol)、7V-(2-(lH-l 2,3_ 二唑-1-基）乙基）-5-氟-4-(7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼 咪-2-基）苯并[b]噻吩-2-基）嘧啶-2-胺（0.15 g, 0.3 2 mmol)、 酸鈉（0.102 g，0.96 mmol)、2-(二-第三丁基膦基）聯苯 (0.006 g，〇.〇6 mmol)及 Pd(dPPf)Cl2 (0.026 g，0.1 mm〇i)合 併於THF (3 mL)及水（1 mL)中。將混合物在12〇t下於微 波反應裔中加熱1 0 min。將粗反應混合物傾倒至強陽離子 交換（SCX) (10 g)管柱上。將期望產物用2 n曱醇氨（4〇 mL) 溶析並濃縮。藉由反相層析法（28%等梯度，以85

mL/min，8 min，在 30 X 75 mm, 5 mm，C18 ODB MS XBndgeTM管柱上，溶劑A :水與〇.〇1 M碳酸氫銨，溶劑 B 乙腈）純化，產生標題化合物（91 mg, 52%)。MS (ES) w/z 549 [M+l]+。 使用與製備1-((4-(2-(2-(2-(1 H-l，2,3-三唑-1-基）乙基胺 基）-5-氟嘧啶-4-基）苯并[b]噻吩比啶_3_基）曱基） 130204.doc -70· 200902012 六氫吡啶-4-醇類似之程序製備以下實例： 實例 結構 化合物名稱 物理數據 MS (ES) m/z [M+l]+ 53 Η Ν~λ Ν^ν h>c ^cx N^F 2-(((4-(2-(2-(2-(lH-l，253-三唑-1-基)乙基胺基)-5-氣喊咬-4-基)苯 并[b]p塞吩-7-基)-6-氣吼。定-3-基） 甲基)(曱基)胺基)-乙醇 523 54 Ν'、 WN cni/ iV-(2-( 1 Η-1，2,3 -三唑-1 -基)乙基)-5-氟-4-(7-(2-氟-5-(六氫°比。定-1 -基曱基户比啶-4-基)苯并[b]噻吩-2-基)°密咬-2-胺 533 55 〇H> WN vd F #-(2-(111-1,2,3-三唑-1-基）乙基)-5-氟-4-(7-(2-氟-5-((4-甲基六氫 °比°秦-1-基)曱基)吼〇定-4-基)苯弁 [1)]嗟吩-2-基)喊°定-2-胺 548 56 d F jV-(2-(1H-1，2,3-三唑-1-基)乙基)-5-氟-4-(7-(2-氟-5-(六氫。比嗓-1-基-曱基)吼啶-4-基)苯并问噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 534 57 /v/^N-NNN cH, CC^I^N w #-(2-即-1，2,3-三唑-1-基)乙基)-4-(7-(5-((3-(二曱基胺基)。比咯。定-卜基)曱基)-2-氟吼啶-4-基)苯并 [b]噻吩-2-基)-5-氟嘧啶-2-胺 562 58 %(2-(1沁1，2,3-三唑-1-基)乙基)-5-氟-4-(7-(2-氟-5-((3-(° 比啶-3-基） 吼咯啶-1-基)曱基)吼啶-4-基)笨 并[b]°塞吩-2-基)。密11定-2-胺 596 59 M、、 H F CH, 从(2-(111-1，2,3-三唑-1-基)乙基)-4-(7-(5-((3,5-二甲基六氫吼嗪-1-基)甲基)-2-氟吼啶-4-基)苯并[b] π塞吩-2-基)-5-氣哺°定-2-胺 562 60 /^ΧγΛ、 〇Hi "〇χηά/ (1 -((4-(2-(2-(2-( 1 Η-1,2,3-三唑-1 -基)乙基胺基)_5_鼠定-4-基)苯 并[b]σ塞吩-7-基)-6-氣。比°定-3-基） 曱基)六氫。比啶-4-基)曱醇 563 130204.doc -71 - 200902012 實例 ----- 結構 化合物名稱 物理數據 MS (ES) 61 Ccv^" 'd F yV-(2-( 1 Η-1，2,3 -三。坐-1 -基）乙基)_ 5-氟-4-(7-(2-氟-5-((4-甲氧基六 氫°比。定-1-基)曱基)〇比咬_4_基)苯 并[b]°塞吩-2-基)β密咬_2_胺 ΠΊ/Ζ [1ν1·τ 1 1 563 62 CcH^^ A #-(2-( 1 Η· 1,2,3-三口坐小基)乙基)_ 4_(7-(5-((3-胺基吡咯咬-1-基)甲 基)-2-氟吡啶_4_基)苯并[b]噻吩_ 2_基)·5_氣嘴u定-2-胺 534 實例63 AM2-(1H-1，2,3-三唾小基）乙基）_5ϋ(7·(2_ι_5_((3_ (甲基胺基）吡咯啶-1-基）甲基比啶_4_基）苯并噻吩_2_基） 嘧啶-2-胺 Η

將 5-(漠甲基）-2 -氣-4-硬 π比 〇定（0.2 g，0,63 mmol)、3-(7V-第 二丁氧基幾基-iV-甲基胺）吼!^各。定（0.3 81 mg, 1.9 mmol)及二 異丙基-乙基胺（0_22 mL，1.27 mmol)合併於乙腈（3.0 mL) 中。將反應混合物在80°C下加熱2 h並冷卻至RT。移除有 機溶劑以得到粗1 - ((6 -氟-4 -峨。比。定-3 -基）曱基）°比洛。定-3 -基 (甲基）胺基曱酸第三丁酯。將粗1-((6-氟-4-蛾比咬-3-基）甲 基）吡咯啶-3-基（甲基）胺基甲酸第三丁酯（0.63 mmol)、， (2-(111-1，2,3-三唑-1-基）乙基）_5-氟-4-(7-(4,4,5,5-四甲基_ 1，3,2-二氧领咮-2-基）苯并[b]嘆吩-2-基）°密°定-2 -胺（0.15 g， 0.32 mmol)、石炭酸納（0.102 g，0.96 mmol)、2-(二-第三丁基 130204.doc -72- 200902012 膦基）聯苯（0.006 g，0.06 mmol)及 Pd(dppf)Cl2 (0.026 g, o.i mmol)合併於THF (3 mL)及水（1 mL)中。將混合物在12〇。〇 下於微波反應器中加熱1 〇 min。將粗反應混合物傾倒至強 陽離子交換（SCX)(l〇 g)管柱上。將期望產物用2 N曱醇氣 (40 mL)溶析並濃縮。藉由反相層析法（56%等梯度，以85

mL/min，8 min，在 30x75 mm，5 mm , Ci8 〇DB MS XBHdgeTM管柱上，溶劑a:水與o.oi m碳酸氫銨，溶劑 B :乙腈）純化’產生經B〇c保護之產物。 將 1-((4-(2-(2-(2-(111-1，2,3-三唑-1-基）乙基胺基）_5_氟嘧 啶-4-基）苯并[b]噻吩_7_基）_6_氟吡啶_3_基）曱基）。比咯啶 基（甲基）胺基甲酸第三丁酯（118 mg, 〇18 mm〇l)稀釋於 DCM (3 mL)中並用 4 M存於二噁烷（〇45 mL，i8 中 乙腈/水之濃縮材料，產生標題化合物（88 (ES) w/2 548 [M+l]+。 之鹽酸處理。將混合物在饥下加熱2 h。移除有機溶劑 以侍到粗去保護產物。稀釋於DCM(3 mL)及甲醇中。將兮 混合物傾倒至強陽離子交換（scx)(1〇 g)管柱上。將期望產 物用2 N甲醇| (4〇 mL)溶析並濃縮。藉纟；東乾乾燥來自1 1 實例64

1-基）乙基）-4-(7-(5-(1-(環丙基胺 -2-基）-5-氟嘧啶 130204.doc -73- 200902012

K 在-78°C下’向新合成三唑小 基）乙基胺基）-5_氟α密咬_4_基）苯并[b]嗔吩·7·基）_6m 3基）乙醇（240 mg，〇 5〇随〇1)及三乙胺（〇 i4 mL，1〇 mmol)存於一氯甲烷（5 mL)中之溶液中緩慢添加甲烷磺醯 氯（0.04 mL，0.55 mm〇l)。在將混合物在相同溫度下再攪拌 60 min後，添加環丙基胺（〇〇4〇 mL，〇55 丨）並將其在 RT下擱置過夜。將其加熱至45t，保持5 h，冷卻至rt , 並移除溶劑。藉由管柱層析法（存於DCM中之丨〇%甲醇）純 化，產生標題化合物（42 mg, 17%)。MS (ES) w/z 519 [M+l]+。 使用與彼等對於尽（2-(1Η-1，2,3-三唑_1_基）乙基）_4_(7_ (5-(1-(環丙基胺基）乙基）_2-氟吼啶-4-基）苯并[b]嗟吩_2. 基）-5-氟嘧啶-2-胺類似之程序但使用合適起始材料製備以 下實例： 實例 結構 化合物名稱 65 A F 尽(2_(111-1，2,3-三唑-1-基)乙 基)-4-(7-(5-(1-氣乙基)·2-氟π比 °定_4_基)苯并[b]°塞吩-2-基)-5-氟β密咬-2-胺 MS (ES) ϊη/ζ [Μ+ΐ]+ 494 130204.doc -74- 200902012 實例 結構 化合物名稱 W-2-(l-(4-(2-(2-(2-(lH-l,2,3- 65 〜^〇C / 二°坐-1 ·基)乙基胺基)-5-說嘲 h kX 啶斗基)苯并[b]噻吩-7-基)_6_ 氟吡啶-3-基)乙基胺基）乙醇 ~MS(Esr m/z iMiir 523 使用與彼等對於上文三唾小基）乙基W (7-(^氯_5_(1_(甲基胺基）乙基）吼咬_4_基）苯并阶塞吩 基）嘧啶-2-胺所述類似之程序製備以下實例： 67 化合物結構 化合物名稱 MS (ES) ΓΜ+ι 1+ ---—-___ jV-(2-(1H-1，2,3-三。圭-1-基)乙 基)-5-氣-4-(7-(2-氟-5-(2-(甲 基-胺基)乙氧基)"比°定-4-基） 苯并[b]噻吩-2-基)》密啶-2-胺 | IV1T1 | 509 N = N -N? 、OH (/0-(1-(2-(4-(7-(5-(1-胺基乙 基)-2-氟吡啶_4_基)苯并[b]噻 吩-2-基)-:5-氟嘧啶―2·基胺基） 乙基)-1Η-1，2,3-三。坐·5_基）甲 醇 509 N ^^ch3 __ ⑻-4-(7-(5-(1-胺基乙基)-2-氟吡啶-4-基)笨并[b]噻吩-2-基)-5-氟-尽(2-(4-甲基-1H-1,2,3-三。坐-1-基)乙基)啦咬-2-胺 493 實例 68 69 實例70 W 1-(4-(2-(2-(2-( 1Η-1，2,3-三唑-1-基）乙基胺基）_5-說嘧 °疋-4_基）笨并[b]噻吩-7-基）-6-氟吡啶-3-基）乙醇

130204.doc •75- 200902012 藉由對掌性層析法分離1 80 mg外消旋1 -(4-(2-(2-(2-(1 H-- —嗤基）乙基胺基）-5 -氟1嘴σ定-4-基）笨并[b]·1塞吩_7_ 基）-6-氟η比咬-3-基）乙醇以得到44 mg標題化合物（24%)。

MS (ES) m/2 480 [M+l]+。對掌性OJ-H管柱：20%甲醇， 0.2%異丙基胺’於c〇2中’流速：5 mL/min，在225 nm檢 測；或管柱 Chiralpak® AS-H: 100°/。MeOH/0.02% DMEA (一甲基-乙基胺）\C〇2，5 mL/min，225 nm ; 或管柱 Chiralpak® AD-H : 15:85 3A/C7 w/0.2% DMEA - 0.6 mL/min，225 nm。 實例71 (Z?)-iV-(2-(lH-l，2,3-三唑-1-基）乙基）-4-(7-(5-(1-胺基乙 基）-2-氟吼啶—4-基）苯并[b]噻吩_2_基）-5-氟嘧啶-2-胺

用使用0.2〇/〇存於甲醇中之dmEA以1 ml/min流速之管柱

Chiralpak® AD-H分離 190 mg外消旋 iV-(2-(lH-l，2,3-三唑-1-基）乙基）-4-(7-(5-(1-胺基乙基）-2-氟吼啶-4-基）苯并[b]噻 吩-2-基）-5-氟嘧啶_2_胺。在5_22 min溶析（R)對映異構體以 得到標題化合物（〇.4 mg，21%)。MS (ES) m/z 479 [M+l]+。 藉由使用與（及）3_三唑_丨·基）乙基 胺基）-5-氟嘧啶_4_基）苯并[b]噻吩_7_基）_6_氟吼啶·3_基）乙 醇或（i〇-7V-(2-(lH-1，2,3-三唑-1-基）乙基）-4-(7-(5-(1-胺基乙 130204.doc •76· 200902012 基）-2_氣°比11 定-4 -基）苯弁[b]°塞吩-2-基）-5-亂°密11定-2-胺所用 類似之層析方法自其外消旋物分離以下實例： 實例 化合物結構 化合物名稱 MS (ES) ΓΜ+lf 備註* 72 F〜《々F F (^}-^(2-(出-1,2,3-三唑-1-基)乙基)-5-氟-4-(7-(2-氟-5-(1 -(2-氟乙基-胺基） 乙基户比啶-4-基)苯并[b] 。塞吩-2-基)17密咬-2-胺 525 Chiralpak® AD-H 管柱 73 對掌 [/性 F (i?)-AH2-(lH-l，2,3-三唑-1-基）乙基)-4-(7-(3-(1-胺 基乙基)°比°定-4-基)苯弁 [b]a塞吩-2-基)-5-氟鳴。定-2-胺 461 Chiralpak® AD-H 74 {>對性掌 \ H,C (5>ΛΜ；2-(1Η-1，2,3-三唑-1·基）乙基)-4-(7-(5-(1-胺 基乙基)-2-氣°比°定-4-基） 笨并[b]嘴吩-2-基)-5-曱 基嘧啶-2-胺 475 對掌性OJ-H 75 〇對性掌 Cl (5>ΛΚ2-(1Η-1,2,3-三唑-1-基)乙基)-4-(7-(5-(1-胺 基乙基)·2-氣°比°定-4-基） 笨并[b]噻吩-2-基)_5-氣 嘧啶-2-胺 495 Chiralpak® AS-H 76 、掌性丨 ΛΚ2-(1Η-1，2,3-三唑-1-基)乙基)-4-(7-(5-(1-胺基 乙基)-2-甲基π比β定-4-基） 苯并[b]。塞吩-2-基)-5-氟 嘧啶-2-胺 475 Chiralpak⑧ AS-H，第二流份 77 H,c crv^:^° AK2-(1H-1,2,3-三唑-1-基)乙基)-4-(7-(2-氯-5-(1-(六氮π比。秦-1-基）乙基） 0比0定-4-基)苯并[b] °塞吩-2-基)-5-氟嘧啶-2-胺 564 Chiralpak® AS-H，第一流份 130204.doc 77- 200902012 r

化合物名稱 MS (ES)ΙΜ±1Τ 1-基)乙基)-5-氟-4-(7-(2-敗-5-(1-(甲基-胺基)乙 基)°比啶-4·基)苯并[b]噻 吩-2-基)嘧啶-2-胺 尽(2-( 1 Η-1，2,3-三》坐-1 -基)乙基)-4-(7-(2-氣-5-(1-(甲基胺基)-乙基比 啶-4-基)苯并[b]噻吩-2-基)嘧啶-2-胺 ~AK2-( 1H-1,2,3-三唑-fT 基)乙基)-4-(7-(5-(1-胺基 乙基)-2-氣0比咬-4-基)苯 并[b]嗟吩-2-基)-5-甲基 嘧啶-2-胺 507 491 492

對掌性OJ-H 對掌性OJ-H，第 一流份 對掌性OJ-H，第 一流份 上表中一些對映異構體之絕對構型 S ^ _ 禾確疋。例如，對映 吳構體實例76、77、7Q 3» 竑I# 丄 7 79及_由保留時間說明，例如，離 開管柱之第一或第二流份。 m離 實例8 1 (及）-7V-(2-(lH-l 2,3 -二唑-1-基）乙其、1 κ 萁、”，—坐基)乙基)-4·(7-(5-(1-胺基乙 土）既口比口定冰基）苯并[b] 口塞吩I基）。密口定_2•胺

XT P

r η \ L 基）·4-(7-(5-(1-疊氮基 乙土）-2-氟吡啶_4_基）苯并[b]噻吩_2_ 5n 84 )嘴疋-2-胺（250 mg, 513.84 μηιοί)存於乙醇〇〇社）中之 制V此 ，夜中添加ΝΗ2ΝΗ2- HCOOH(預製備，丨紅）。將混合物 並添加拉尼 130204.doc -78- 200902012 鎳（0.5 g，8.52 mmol，填充時用水潤濕）。將溶液在尺丁下 再攪拌1.5 h，過濾出拉尼鎳，並用曱醇洗滌。將濾液用氯 仿/IPA (3/1)稀釋並用飽和碳酸鈉洗滌。將有機相經硫酸 納乾燥並在真空中辰縮以得到褐色焦油。藉由通過ρ c匸（存 於DCM中之10%甲醇）純化固體以得到淡褐色固體狀標題 化合物（200 mg, 85%)。MS (ES) m/2 461 [M+l]+。 實例82

f κ -胺

F 胺基）乙基）-2-氟吼啶-4-基）苯并[b]噻吩-2-基）-5-氟嘧啶_2 將（/?)-；^-(2-(111-1，2,3-三唑-1_基）乙基）_4_(7_(5_(1_胺基乙 基）-2-氟吼啶-4-基）苯并[b]噻吩_2_基）_5-氟嘧啶_2_胺（120 mg，251 μιηοΐ)、低聚曱醛 〇 45 g，4」！ mm〇i)及乙酸（15 -mg，251 μηιοί)裝入存於5〇 mL圓底燒瓶中之丨，4_二噁烷 mL)中。將該混合物在RT下攪拌1〇 min並添加四氫硼化鈉 (37.95 mg，1 mmol)。將所得混合物在RT下攪拌3 h，用氣 仿稀釋，用經稀釋之氫氧化銨洗滌，並在真空中濃縮。藉 由FCC(存於DCM中之1 〇%甲醇）純化粗物質以得到黃色固 體狀標題化合物（34 mg, 27%)。（ES) m/z 507 [M+l]+。 實例83 #-(2-(1Η-1，2,3-三。坐 _1_基）乙基）_4_(7_(5_(2_胺基乙氧 130204.doc -79· 200902012 基）_2-氟。比啶_4_基）苯并[b]噻 η,ν

吩-2-基）_5_氟嘧啶·2-胺 ◎ 向 2-(2-(4-(2_(2_(2_(1η 痛哈且、-、， ，2,3·二唑_1_基）乙基胺基）-5-氟 土）本并[b]〇塞吩_7_其、6知 , 基）_6-軋。比啶-3-基氧基）乙基）異 引口木琳-1,3-二酮（〇.2s σ n/1 ^ , §， * mm〇1)存於乙醇（5 mL)中之溶 液中添加肼（0.03 mL 〇 s lx 5 mm〇1) °將該混合物在40°C下攪 枰過仪。移除溶劑並與 其 曰由s柱層析法（存於DCM中之10% 甲醇）純化殘留物，產在押

生心喊化合物（7〇 mg，35%)。MS (ES) m/z 495 [M+l]+。 使用與彼等對於ΑΛ·(2-(1Η_123 _ u , 、η ι，2,3-二唑基）乙基）4吖7_ (5-(2-胺基乙氧基）-2 -氟σ比σ定j£ Fkl # 队^疋4基）本开[b]噻吩_2_基）_5_氟 嘧啶-2-胺所述類似之程序製備以下實例·· 實例 化合物結構 化合物名稱 MS (ES) 84 F ⑻-Λ/·-(2-( 1 Η-1，2,3-三嗤_ 1.基)乙基)斗 (7-(5-(2-胺基丙氧基)·2-敦u比σ定基） _本并[b]°塞吩_2_基)-5-氧鳴咬_2-脸 ΓΜ+J1 509 85 H^0jy F (5>从〇( 1 Η· 1，2,3-三唑小基）乙基 (7-(5-(2-胺基丙氧基)·2-氟。比。定冰基） 苯并[b]噻吩_2·基)-5-氟嘧啶-2-脸 509 ---------- ^ -λ- yg〇 肺癌、口咽癌、食管癌、胃癌、黑素瘤、乳癌、卵巢癌、 子宮内膜癌、結腸直腸癌、膠質母細胞瘤、乳突痒姨腺 癌、前列腺癌、肝母細胞瘤及非霍奇金淋巴瘤。而且，荞 小細胞肺癌、口咽癌、食管癌、黑素瘤、結腸直腸声、肝 130204.doc -80- 200902012 母細胞瘤及非霍奇金淋巴瘤中之Plk 1表現具有預後意義 [Strebhardt，K.及 A. Ullrich. Nature Reviews Cancer 6(4): 321-30 (2006)]。經Plkl磷酸化之受質藉由調整中心體成 熟、進入有絲分裂、姊妹染色單體分離及胞質分裂來調節 有絲分裂進展[Eckerdt F. Strebhardt K. Cancer Research. 66(14):6895-8，2006 ; Strebhardt 及 Ullrich 2006 ; van de Weerdt, B. C.及 R. H. Medema. Cell Cycle 5(8): 853-64 (2006)]。使用抗體注射、表現顯性陰性Plkl及減少反義 mRNA來抑制Plk 1功能，可產生單極紡錘體及後期停滯， 此導致腫瘤細胞系中有絲分裂細胞死亡，但造成正常非轉 化原細胞系中可逆之G2停滯。 另外，已報導，Plk可用於治療桿狀腫瘤（Morozov A.,等 人 ’ Clinical Cancer Research. 13(16):4721-30，2007年 8 月 15 曰）° BI-2536已在使用HCT1 16、A549及NCIH460鼠科異種移 植物之臨床前模型中展示活性（Baum, A.，P. Garin-Chesa等 人 ’（2006). #C191 In vivo activity of BI 2536，a potent and selective inhibitor of the mitotic kinase PLK1, in a range of cancer xenografts.關於”Molecular Targets and Cancer Therapeutics"之 AACR-NCI-EORTC 國際討論會， Philidelphia, PA)。 以下分析之結果證實本發明化合物可用作抗癌劑。本文 所述某些實例化合物係外消旋混合物。該等化合物係以外 消旋混合物及/或單獨對映異構體來測試。至少一種對映 130204.doc •81 - 200902012 異構體或外消旋物符合下文分析標準。

Plkl之表現及純化 可直接將人類Plkl αΝΑ中一個末端與表現His6標藏（例 如C-末端FLAG-m%標籤）之聚核苷酸序列連接，並插入至 合適表現載體（例如pFastBacTM載體（Invitr〇gen))中並轉染 至合適系統中，如類似Yue_Wei Qian，等人，Science, 282, 1701 (1998)針對xPiki所提出之桿狀病毒。若使用病毒表 現系統，則將病毒（例如，帶有pikl_Flag_HiS6標籤聚核苷 酸構建體之桿狀病毒）感染至適宜宿主細胞（例如sf9細胞） 培養物中。當已表現足量卩仏丨彳丨叫-出〜標籤融合蛋白時 (例如在感染後約46小時）’應使用岡田酸（〇.丨μΜ)處理該 培養物一段足夠時間（例如，3小時）。該pikl-Flag-His6標 籤融合體係使用金屬親和樹脂（例如TALON™)利用熟習此 項技術者所熟知之方法自細胞顆粒純化。將純化之plkl _ Flag-Hiss標籤融合體以少量等分試樣儲存在於_8〇〇c下之 適宜培養基（例如 10 mM HEPES、150 mM NaCl、0.01% TRITON® X-1〇〇、1 mM二硫蘇糖醇(DTT)、10%甘油，pH 值為7.5)中直至使用。經藉由MALDI(基質輔助之雷射解吸/ 電離（Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization))來判別 純化Plkl-Flag-His6標籤融合蛋白。 GST-Cdc25C(l-206)之表現及純化。 可自任何合適來源獲得之人類Cdc25C cDNA可在任何適 宜表現系統中表現，其後藉由與Bin Ouyang等人， Oncogene，18，6029-6036 (1999)所述方法類似之熟知方 130204.doc •82- 200902012 法達成純化。一個適宜系統涉及經pgex_2T載體 (Amersham)轉化的大腸桿& (E.coli) BL21在18 C下過仪生 長’其中已使用ImM異丙基- β- D-硫代°比D南半乳糖音將人 類Cds25C之cDNA改造用於誘導表現。可將經表現之GST-Cdc25C(l-206)(Plkl之受質）純化（例如，藉由 GLUTATHIONE SEPHAROSE® 4B)並以少量等分試樣儲存 在於-80 °C下之合適溶液（例如1 0 mM HEPES、1 00 mM NaCl、pH值為 7.5)中。

Plkl抑制分析

Plkl激酶反應在含有50 mM HEPES，pH值為7.3、1 .〇 mM二硫蘇糖醇、5.0 μΜ ATP、10 mM MgCl2、0·01ο/〇 TRITON® X-100、0.4 pCi 33P-ATP 及 0.06 GST-

Cdc25c (1-206)肽之緩衝液中含有Plkl-Flag-His6標籤融合 酶（0.2 ng~L)。化合物係以存於DMSO中之10 mM原液提 供。將化合物1:3連續稀釋於20% DMSO中以產生10點濃度 反應曲線並隨後1:5稀釋（最終濃度為20 μΜ至0.001 μΜ， 存於最終濃度為4%之DMSO中）於反應混合物中以測定化 合物活性。使反應在RT下實施60 min並隨後藉由添加60 μί 10.0% H3P〇4終止。將反應混合物（85 μί)轉移至用30 pL 10.0% Η3Ρ〇4預潤濕之96孔磷酸纖維素濾膜上，在RT下 培育20-30 min並隨後用0.5% Η3Ρ〇4洗滌三次。乾燥該等孔 之後添加 40 pL MicroScintTM20 (Packard)並隨後在 Wallac MICROBETA® Jet上計數。隨後（例如）使用ACTIVITY BASE™軟體（IDBS)使用四參數對數方程對來自1〇點濃度 130204.doc -83· 200902012 反應數據之抑制百分比值實施分析。自所得曲線擬合計算 絕對IC50值。所有例示化合物皆具有小於100 nM之IC50 值，ICso值之最小顯著比（MSR)為3 6，需聲明的是外消旋 混合物及/或至少一種對映異構體之IC5Q值小於l〇〇 nM。例 如實例41外消旋物之ICso值為1 2 nM。此表明本發明化 合物係有效之Plkl抑制劑。 pHH3(S10)，有絲分裂細胞及dna含量分析 將HeLa細胞以200個細胞/孔鋪板於96孔Beckman Dickinson BIOCOAT™板中，並在 $1()〇/oFBS(胎牛血清）之 MEM(最低必需培養基（Minimum Essential Medium))中於 3 7 C 5% C〇2中培育24小時。藉由向培養基中添加化合物 (存於0.25% DMSO中）處理細胞，在〇·5 μΜ至0.0098 μΜ範 圍内之1 0點處定量加入。在暴露於化合物中23小時後，例 如’用PREFERtm固定劑將細胞固定％ min，隨後用存於 經填酸鹽緩衝之鹽水（PBS)溶液中之o.i。/。triton® XI〇〇 渗透1 5 min。將細胞用PBS洗滌三次，隨後用5〇 pg/mL RNAse消化。在4°C下’將以1:500存於含有1%牛血清白蛋 白（BSA)之PBS中之一級抗體（磷酸組蛋白H3)添加至細胞 中。在3次PBS洗滌後，將細胞在RT下與經AIexa488標記 之二級抗體一起培育1小時。再次用PBS將其洗滌3次，並 隨後在3 0 min内添加1 5 μΜ磁化丙錠以將細胞核染色。用 ACUMEN EXPLORER™ [雷射掃描螢光微量板細胞儀 (Laser-scanning fluorescence microplate cytometer)(由 488 nm氬離子雷射激發及多光電倍增管檢測構成），由ΤΤΡ I30204.doc • 84- 200902012 LABTECH LTD製造]掃描螢光板以量測抗磷酸組蛋白出絲 胺酸10、DNA含量及有絲分裂細胞，如藉由DNA縮合所量 測。圖像分析係基於用於在不同子群中鑑別細胞之細胞螢 光信號。PHH3(S10)陽性細胞係藉由在5〇〇_53〇 nm處閾值 上之平均強度來鑑別。在655-705 nm處來自埃化丙鍵/dna 之總強度用以鑑別單獨細胞（具有2 N至4 N DNA含量之細 胞）及細胞週期中之子群（2 N細胞' 4 N細胞p在575_64〇 nm處之峰強度用以鑑別用作鑑別4 n細胞中有絲分裂細胞 之標誌之DNA縮合。分析輸出值係每一經鑑別子群之百分 比，％ PHH3、％ 2 N、％ 4 N、％有絲分裂及總細胞數。 ECm值係藉由將每一輸出值曲線擬合至四參數對數方程使 用 ACTIVITY BASEtm來確定。所得pHH3(sl〇)、dna含量 及有絲分裂之丑(：5〇值之^^11分別為2.6、2.4及2.5。例如， 實例41外消旋物之pHH3(sl〇) ECso值為25 nM，DNA含量 EC5〇值為30 ηΜ且有絲分裂EC5〇值為23 ηΜ。 抗增殖分析。 化合物對細胞增殖之影響可使用熟習此項技術者所熟知 之細胞及細胞增殖方法予以測定（R〇ben C. Squatrito等 人，Gynecological Oncology，58，101-105 , (1995))。例 如，可將可自美國典型培養物保藏中心（American Type

Culture Collection)獲得之HCT116細胞以約2000個細胞/孔 接種於96-孔板中並容許在增濕c〇2培育箱中於37它下黏附 過夜。在20-24小時培育後，添加經半對數連續稀釋之化 合物並將該等板送回培育箱中。在合適長度暴露時間（例 130204.doc -85- 200902012 如，72小時）後，利用熟知方法估計細胞增殖。在一種方 法中，向該等細胞板中添加1 〇 諸如A1 amar Blue™等四 峻鹽。在暴露於染劑中合適時間後，測定螢光（530 nm激 發，580 nm發射）。所得IC5〇值之MSR為3.1。例如，實例 41外消旋物之平均IC5〇值為3 1 nM (n=2)。此表明本發明化 合物可用於治療包括癌症類型之增殖性病症。 (

本發明化合物較佳調配成可藉由多種途徑投與之醫藥組 合物。最佳地，該等組合物係經口或靜脈内投與。該等醫 藥組合物及製備其之方法已為熟習此項技術者所熟知。參

見，例如，REMINGTON: THE SCIENCE AND PRACTICE OF PHARMACY(A· Gennaro等人編輯，第 19版，Mack Publishing公司，1995)。 式I化合物通常在寬劑量範圍内有效。例如，每天劑量 正常在約!至約1。mg/kg體重、較佳2至6.5續§體重』 内。在-些情形下’低於上述範圍下限之劑量量可能係過 量的’而在其他情形下可使用更大劑量而不會弓丨起任何有 害副作用，且因此以上劑量範圍並 开思欲U任何方式限刹 本發明之範圍。應瞭解，該化合物之 乘1不仅與量將由盤細 根據包括以下之相關情況予以確定· ' .欲療之病狀、所设 投與途徑、實際投與之化合物、個體患 戶“ 反應及患者症狀之嚴重程度。 >、體重及 130204.doc -86·

Claims (1)

1. 200902012 十、申請專利範圍： 1. 一種下式化合物或其醫藥上可接受之鹽：

   其中：

   t R係氫、曱基、環丙基、環丙基胺基（Ci_C2烷基）、 氟、乙氧基、羥基、ι-(羥基）乙基、2_(羥基）(C2_C3烷氧 基）、2-(經基）乙氧基曱基、^(氯）乙基、^((2—氟）乙基胺 基）乙基、2-(曱基胺基）乙氧基、（2_羥基乙基）胺基、（2_ 經基乙基）胺基（C丨-C2烧基）、胺基、胺基（c丨_C4烧基）、 胺基（C2_C3烧氧基）、胺基幾基甲基、（丨_甲基）_(1_胺基羰 基）乙基、（C〗-C3烷基）胺基（C〗-C2烷基）、甲氧基乙基胺 基’ W(c丨-C3烷基）善甲基-胺基（Cl_C2烷基）、吡洛咬小 基-曱基、3-(二甲基胺基）_吡咯啶小基_曱基、 基）-吡咯啶-1-基-甲基、3_(胺基）吡咯啶基-甲基、3 (曱基胺基）吡咯啶-1-基-曱基、（4,4-二曱基噁唑啶_3美） 曱基、[’（2-羥基）乙基曱基]_胺基甲基、（氮雜環丁 ^基）甲基、六氫吡啶―丨―基·曱基、4_(甲氧基 ^ a 土 "、虱°比啶_ 1-基-曱基、4-(經基）六氫吡啶小基_曱基 二 > (搜基曱基） /、虱吡啶-1-基·甲基、六氫吡嗪_卜基_(Ci_C2烷基）4 (甲基）六氫°比嘻小基-甲基、3,5-(二甲基）六氫„比嗓小^ 130204.doc 200902012 曱基或嗎啉-4-基-甲基； R2係氫； R3係氫、甲基、氟式, 既次氧，或R3係胺基且與R2一起形 與吡啶稠合之吡咯基環； ’ I R4係氫、甲基、氟或氣； R5係氳或羥基甲基；且 R6係氫或甲基。 2. 3. 如請求項1之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中： "環丙基胺基（Cl_C2燒基）]_(經基）乙基、2_(經 乙氧基甲基、1-(氯）乙基、r⑹氟）乙基胺基）乙基、 ^•基乙基）胺基、（2-經基乙基）胺基（Ci_C2烧基）、胺基 (c】-c道基）、胺基幾基甲基、〇_甲基）_(1胺基幾基）乙 基、（CA烧基）胺基（Cl_C2烧基）基）n 基-胺基（Cl_C2烧基）、°比^定-1-基-曱基、3-(二曱基胺 基）吼咯咬小基-甲基、3十比咬_3•基）_吼㈣小基-甲 基、3-(胺基）吼洛咬_u_甲基、3_(曱基胺基）。比洛咬小 基-甲基、（4,4_二甲基嚼唑啶_3_基）甲基、㈣2_經基）乙 基I甲基]-胺基曱基、（兔雜環丁小基）曱基、六氫吼咬_ ^基-甲基、4-(甲氧基）六氫D比咬小基_甲基、4_(經基）六 气斤疋-1-基-曱基、4-(羥基曱基）六氫吡啶丨基-曱基、 ” m秦]-基_(Cl_c2烧基）、4_(曱基）六氫。比嗪小基-甲 土 3,5-(二曱基）六氫吡嗪_丨_基-曱基或嗎啉基_ 基。 冯求項1或2之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中： 130204.doc 200902012 R係胺基（C丨-C4烷基）、（CVC3烷基）胺基（C丨-c2烷基）、 # (Cl~c3烷基）_#_甲基-胺基（C|_C2烷基）或嗎啉_4_基-甲 基。 4·如請求項1或2之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中： R係胺基（cvc4烷基）或（cvq烷基）胺基（Cl_C2烷基）； r3係氫或氟； r4係氫或氟； r5係氫；且 R6係氫。 〇月求項1或2之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中Rj 係Μ甲基胺基）乙基，R3係氟且尺4係氫，R5係氫，且R6 係氮。 6.如請求項1或2之化合物或其醫藥上可接受之鹽’其中Rl 係1-胺基乙基，R3係氟且R4係氟’ R5係氫，且係氫。 7'如請求項1或2之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中R1 係卜胺基乙基’ R3係氟且R4係氫，r5係氫，且r6係氣。 8·如μ求項1或2之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其中r1 係1·(曱基胺基）乙基，r3錢且r4係敗，R5m\R6 係氫。 9·-種醫藥組合物，其包含如請求項⑴中任一項之化合 物或八醫藥上可接文之鹽與醫藥上可接受之載劑、稀釋 劑或賦形劑組合。 1〇· 一種如請求項1至8中任-項之化合物或其醫藥上可接受 之鹽的用途’其係製造用於治療哺乳動物選自由下列組 130204.doc 200902012 成之群之癌症的藥劑：非小細胞肺癌、口咽癌、食管 癌 '胃癌、黑素瘤、皮膚表皮樣癌、乳癌、卵巢癌、子 宮内膜癌、結腸直腸癌、神經膠質瘤、膠質毋細胞瘤、 甲狀腺癌、子宮頸癌、胰腺癌、前列腺癌、肝母細胞瘤 及非霍奇金淋巴瘤（non-Hodgkin lymphoma)。 11. 12. 如請求項1或2之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其係用 作藥劑。 如请求項1或2之化合物或其醫藥上可接受之鹽，其係用 I30204.doc 200902012 七、指定代表圖： (一) 本案指定代表圖為：（無） (二) 本代表圖之元件符號簡單說明： 八、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式：

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