KR20090130246A

KR20090130246A - 트리아졸릴 아미노피리미딘 화합물

Info

Publication number: KR20090130246A
Application number: KR1020097023738A
Authority: KR
Inventors: 해롤드 번즈 브룩스; 조이스 지. 크리치; 제임스 로버트 헨리; 홍 후; 델루 지앙; 홍-유 리; 사친 고빈들랄 마니아르; 윌리엄 토마스 맥밀렌; 제이슨 스캇 소이어; 멜리사 케이트 슬레이터; 얀 왕
Original assignee: 일라이 릴리 앤드 캄파니
Priority date: 2007-05-16
Filing date: 2008-05-07
Publication date: 2009-12-21
Also published as: CN101679396A; BRPI0811611A2; US8114872B2; US20100130466A1; CL2008001322A1; EA200971067A1; KR101131254B1; WO2008144222A3; AU2008254318A1; JP5204838B2; JP2010527364A; MX2009012233A; AR066472A1; TW200902012A; EA015574B1; CA2687474A1; WO2008144222A2; PE20090803A1; EP2155735A2; AU2008254318B2

Abstract

본 발명은 암 치료에 유용한 트리아졸릴 아미노피리미딘 화합물을 제공한다.

트리아졸릴 아미노피리미딘, Plk1, 유사분열, 암 치료, 약제

Description

트리아졸릴 아미노피리미딘 화합물 {TRIAZOLYL AMINOPYRIMIDINE COMPOUNDS}

Plk1은 폴로 박스(polo box) 도메인이라고 공지된 포스포세린/트레오닌 결합 도메인을 특징으로 하는 작은 부류의 단백질 키나제에 속한다. Plk1은 세포 주기의 조절에 있어서 중요한 역할을 수행한다. 특히, Plk1은 암 세포가 분열하는 단계인 유사분열의 개시, 진행 및 종료를 조절하는 기능을 한다고 여겨진다. 따라서, 암 세포에서의 Plk1 차단은 암 세포의 분열 또는 유사분열을 저해한다.

빈카 알칼로이드 (나벨빈(NAVELBINE)^®), 탁소이드 (탁소테레(TAXOTERE)^®) 및 토포이소머라제 II 억제제 (아드리아마이신(ADRIAMYCIN)^®)와 같이 유사분열을 저해하는 강력한 항암제가 동정된 바 있다. 벨케이드(VELCADE)^®는 26S 프로테오솜을 억제하는 항-신생물제이다. 그러나, 이러한 약물들은 분열하고 있지 않은 정상적인 세포에 상당한 부작용을 유발한다. Plk 억제제는 분열 중인 세포를 특이적으로 표적화하고, 바람직하지 못한 독성을 피할 수 있다.

Plk1의 억제제는 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어 WO 06/066172를 참조한다. 추가로, WO 06/021548은 특정 디히드로프테리디논 유사체 (예를 들어, BI-2536)를 Plk1의 억제제로서 개시한다. 현재, BI-2536은 임상 제II상 시험 중이지만 청소율(clearance)이 높고 (CL >1000 mL/분) 인간에서의 골수억제에 의해 투여 량이 제한된다. Plk1을 억제하고 역가 또는 약력학적 특성이 개선된 추가의 화합물이 여전히 요구된다.

본 발명은 Plk1의 억제를 통해 암 치료에 있어서 임상적 용도를 갖는다고 여겨지는 신규한 트리아졸릴 아미노피리미딘 화합물을 제공한다. 이들 화합물 중 일부는 WO 06/066172에 개시된 화합물들보다 역가가 개선된 것이라 여겨진다. 추가로, 본 발명의 특정 화합물은 BI-2536에 비해 약력학 특성, 예를 들어 청소율이 개선된 것이라 여겨진다. 추가로, 시험한 본 발명의 화합물의 경구 생체이용률로 인해서, 이들 화합물 중 일부는 경구 투여될 수 있다고 여겨진다.

본 발명은 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염을 제공한다:

상기 식에서,

R¹은 수소, 메틸, 시클로프로필, 시클로프로필아미노(C₁-C₂ 알킬), 플루오로, 에톡시, 히드록시, 1-(히드록시)에틸, 2-(히드록시)(C₂-C₃ 알콕시), 2-(히드록시)에톡시메틸, 1-(클로로)에틸, 1-((2-플루오로)에틸아미노)에틸, 2-(메틸아미노)에톡 시, (2-히드록시에틸)아미노, (2-히드록시에틸)아미노(C₁-C₂ 알킬), 아미노, 아미노(C₁-C₄ 알킬), 아미노(C₂-C₃ 알콕시), 아미노카르보닐메틸, (1-메틸)-(1-아미노카르보닐)에틸, (C₁-C₃ 알킬)아미노(C₁-C₂ 알킬), 메톡시에틸아미노, N-(C₁-C₃ 알킬)-N-메틸-아미노(C₁-C₂ 알킬), 피롤리딘-1-일-메틸, 3-(디메틸아미노)-피롤리딘-1-일-메틸, 3-(피리드-3-일)-피롤리딘-1-일-메틸, 3-(아미노)피롤리딘-1-일-메틸, 3-(메틸아미노)피롤리딘-1-일-메틸, (4,4-디메틸옥살리딘-3-일)메틸, [N-(2-히드록시)에틸-N-메틸]-아미노메틸, (아제티딘-1-일)메틸, 피페리딘-1-일-메틸, 4-(메톡시)피페리딘-1-일-메틸, 4-(히드록시)피페리딘-1-일-메틸, 4-(히드록시메틸)피페리딘-1-일-메틸, 피페라진-1-일-(C₁-C₂ 알킬), 4-(메틸)피페라진-1-일-메틸, 3,5-(디메틸)피페라진-1-일-메틸 또는 모르폴린-4-일-메틸이고,

R²는 수소이고,

R³은 수소, 메틸, 플루오로 또는 클로로이거나, 또는 R³은 아미노이고 R²와 함께 피리딘에 융합된 피롤릴 고리를 형성하고,

R⁴는 수소, 메틸, 플루오로 또는 클로로이고,

R⁵는 수소 또는 히드록시메틸이며,

R⁶은 수소 또는 메틸이다.

본 발명은 비-소세포(non-small cell) 폐, 구인두, 식도, 위, 흑색종, 피부의 유표피 암종, 유방, 난소, 자궁내막, 결장직장, 신경교종, 교아세포종, 갑상선 암종, 자궁경부, 췌장, 전립선, 간모세포종 및 비-호지킨 림프종의 암으로 구성된 군에서 선택된 암의 치료가 필요한 포유동물에게 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염을 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 상기 암을 치료하는 방법을 제공한다.

본 발명은 또한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염, 및 제약상 허용가능한 부형제, 담체 또는 희석제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.

본 발명은 또한 약제로 사용하기 위한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염을 제공한다. 추가로, 본 발명은 암 치료용 약제의 제조에 있어서 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염의 용도를 제공한다. 특히, 이들 암은 비-소세포 폐, 구인두, 식도, 위, 흑색종, 피부의 유표피 암종, 유방, 난소, 자궁내막, 결장직장, 신경교종, 교아세포종, 갑상선 암종, 자궁경부, 췌장, 전립선, 간모세포종 및 비-호지킨 림프종의 암으로 구성된 군에서 선택된다. 추가로, 본 발명은 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염을 활성 성분으로서 포함하는, 비-소세포 폐, 구인두, 식도, 위, 흑색종, 피부의 유표피 암종, 유방, 난소, 자궁내막, 결장직장, 신경교종, 교아세포종, 갑상선 암종, 자궁경부, 췌장, 전립선, 간모세포종 및 비-호지킨 림프종의 암으로 구성된 군에서 선택된 암을 치료하기 위한 제약 조성물을 제공한다.

본 발명은 또한 하기 화학식의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염을 제 공한다:

상기 식에서,

R¹은 수소, 메틸, 시클로프로필, 시클로프로필아미노메틸, 할로, 에톡시, 히드록시, 1-(히드록시)에틸, 2-(히드록시)에톡시, 아미노, 아미노(C₁-C₄ 알킬), (C₁-C₃ 알킬)아미노메틸, N-(C₁-C₃ 알킬)-N-메틸-아미노메틸, 아미노카르보닐메틸, 피롤리딘-1-일-메틸, 3-(디메틸아미노)피롤리딘-1-일-메틸, 3-(피리드-3-일)-피롤리딘-1-일-메틸, 3-(아미노)피롤리딘-1-일-메틸, 2-(히드록시)에톡시메틸, (4,4-디메틸옥살리딘-3-일)메틸, [N-(2-히드록시)에틸-N-메틸]-아미노메틸, (아제티딘-1-일)메틸, 피페리딘-1-일-메틸, 4-(메톡시)피페리딘-1-일-메틸, 4-(히드록시)피페리딘-1-일-메틸, 4-(히드록시메틸)피페리딘-1-일-메틸, 피페라진-1-일-메틸, 4-(메틸)피페라진-1-일-메틸, 3,5-(디메틸)피페라진-1-일-메틸 또는 모르폴린-4-일-메틸이고,

R²는 수소이고,

R³은 수소 또는 할로이거나, 또는 R³은 아미노이고 R²와 함께 피리딘에 융합된 피롤릴 고리를 형성하며,

R⁴는 수소 또는 할로이다.

상기 화학식에서 사용된 일반적인 화학적 용어들은 통상의 의미를 갖는다. 예를 들어, 용어 "(C₁-C₃ 알킬)"은 메틸, 에틸, 프로필 및 이소프로필을 의미한다. 용어 "(C₁-C₂ 알킬)"은 용어 "(C₁-C₃ 알킬)"에 포함되고, 메틸 및 에틸을 의미한다. 용어 "(C₂-C₃ 알콕시)"는 에톡시, 프로폭시 및 이소프로폭시를 의미한다.

용어 "할로"는 플루오로, 클로로, 브로모 및 요오도를 의미한다.

예를 들어 용어 "아미노(C₁-C₄ 알킬)" 또는 "(C₁-C₂ 알킬)아미노(C₁-C₂ 알킬)"에서 치환기가 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸 또는 tert-부틸과 같은 알킬기를 통해 부착된 경우, 이러한 치환기 (예를 들어, 아미노)의 부착은 상기 알킬 또는 알콕시의 임의의 탄소를 통해 이루어질 수 있다. 예를 들어,

이다.

당업자는 본 발명의 화합물의 대부분 또는 전부가 염을 형성할 수 있음을 이해할 것이다. 본 발명의 화합물은 아민이기 때문에 수많은 무기 산 및 유기 산 중 임의의 것과 반응하여 제약상 허용가능한 산 부가 염을 형성한다. 이러한 제약상 허용가능한 산 부가 염 및 이들을 제조하는 통상의 방법은 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌 [P. Stahl, et al., HANDBOOK OF PHARMACEUTICAL SALTS: PROPERTIES, SELECTION AND USE, (VCHA/Wiley-VCH, 2002)], [S.M. Berge, et al., "Pharmaceutical Salts," Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol 66, No. 1, January 1977]을 참조한다.

바람직한 것은

a) R¹이 아미노(C₁-C₂ 알킬)이거나,

b) R¹이 1-(아미노)에틸이거나,

c) R¹이 (C₁-C₃ 알킬)아미노(C₁-C₂ 알킬)이거나,

d) R¹이 1-(메틸아미노)에틸이거나,

e) R¹이 아미노(C₁-C₂ 알킬) 또는 (C₁-C₃ 알킬)아미노(C₁-C₂ 알킬)이거나,

f) R²가 수소이거나,

g) R³이 수소이거나,

h) R³이 플루오로이거나,

i) R³이 수소 또는 플루오로이거나,

j) R⁴가 플루오로이거나,

k) R⁴가 수소이거나,

l) R⁴가 수소 및 플루오로이거나,

m) R⁵가 수소이거나,

n) R⁶이 수소이거나,

o) R¹이 시클로프로필아미노(C₁-C₂ 알킬), 1-(히드록시)에틸, 2-(히드록시)에톡시메틸, 1-(클로로)에틸, 1-((2-플루오로)에틸아미노)에틸, (2-히드록시에틸)아미노, (2-히드록시에틸)아미노(C₁-C₂ 알킬), 아미노(C₁-C₄ 알킬), 아미노카르보닐메틸, (1-메틸)-(1-아미노카르보닐)에틸, (C₁-C₃ 알킬)아미노(C₁-C₂ 알킬), N-(C₁-C₃ 알킬)-N-메틸-아미노(C₁-C₂ 알킬), 피롤리딘-1-일-메틸, 3-(디메틸아미노)피롤리딘-1-일-메틸, 3-(피리드-3-일)-피롤리딘-1-일-메틸, 3-(아미노)피롤리딘-1-일-메틸, 3-(메틸아미노)피롤리딘-1-일-메틸, (4,4-디메틸옥살리딘-3-일)메틸, [N-(2-히드록시)에틸-N-메틸]-아미노메틸, (아제티딘-1-일)메틸, 피페리딘-1-일-메틸, 4-(메톡시)피페리딘-1-일-메틸, 4-(히드록시)피페리딘-1-일-메틸, 4-(히드록시메틸)피페리딘-1-일-메틸, 피페라진-1-일-(C₁-C₂ 알킬), 4-(메틸)피페라진-1-일-메틸, 3,5-(디메틸)피페라진-1-일-메틸 또는 모르폴린-4-일-메틸이거나,

p) R¹이 아미노(C₁-C₄ 알킬), (C₁-C₃ 알킬)아미노(C₁-C₂ 알킬), N-(C₁-C₃ 알킬)-N-메틸-아미노(C₁-C₂ 알킬) 또는 모르폴린-4-일-메틸이거나,

q) R¹이 아미노(C₁-C₄ 알킬) 또는 (C₁-C₃ 알킬)아미노(C₁-C₂ 알킬)이고,

R³이 수소 또는 플루오로이고,

R⁴가 수소 또는 플루오로이고,

R⁵가 수소이며,

R⁶이 수소이거나,

r) R¹이 1-(메틸아미노)에틸이고, R³이 플루오로이고, R⁴가 수소이고, R⁵가 수소이며, R⁶이 수소이거나,

s) R¹이 1-아미노에틸이고, R³이 플루오로이고, R⁴가 플루오로이고, R⁵가 수소이며, R⁶이 수소이거나,

t) R¹이 1-아미노에틸이고, R³이 플루오로이고, R⁴가 수소이고, R⁵가 수소이며, R⁶이 수소이거나, 또는

u) R¹이 1-(메틸아미노)에틸이고, R³이 플루오로이고, R⁴가 플루오로이고, R⁵가 수소이며, R⁶이 수소인,

화학식 I의 화합물이다.

하기하는 반응식은 제조예 및 실시예와 함께 본 발명에 따른 화합물의 합성법을 예시한다.

반응식 I

반응식 I의 화합물 5는 출발 물질 1과 2 사이, 또는 출발 물질 3과 4 사이의 팔라듐(O) 커플링 반응으로 제조된다. 적합한 팔라듐 촉매, 예컨대 테트라키스(트리페닐포스핀)-팔라듐(O) 또는 [1,1'-비스(디페닐-포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II)의 DCM과의 착물 (1:1) [Pd(dppf)Cl₂]이 사용될 수 있다. Pd(dppf)Cl₂는 염기, 예컨대 탄산나트륨 또는 탄산칼륨의 존재하에 사용된다. 상기 반응은 용매, 예컨대 테트라히드로푸란 (THF), 디옥산 및 물 중에서 일반적으로 약 100℃ 내지 150℃의 온도에서 오일조 또는 극초단파 반응기를 사용하여 수행된다.

화합물 5를 THF 및 트리이소프로필보레이트 중 리튬 디이소프로필아미드를 사용하여 계내 리튬화하여 벤조[b]티오펜 보로네이트 종을 형성한 후에 2,4-디클로로피리미딘 (화합물 6)과의 팔라듐(O) 커플링 반응을 수행하여 화합물 7을 생성한다. 상기 보로네이트는 일반적으로 저온, 예컨대 -78℃에서 형성된다. 상기 커플 링 반응은 화합물 5의 제조에 관해 상기한 바와 같은 조건을 이용하여 즉시 수행한다.

이어서, 화합물 7이 화합물 8과 반응하는 친핵성 치환 반응을 통해 본 발명의 화합물이 제조된다. 이러한 반응은 용매, 예컨대 n-부탄올, 디옥산 및 N-메틸피롤리딘-2-온 (NMP) 중에서 수행된다. 상기 반응은 약 120℃ 내지 150℃의 온도에서 오일조 또는 극초단파 반응기를 사용하여 수행된다. 약 2 당량의 1H-1,2,3-트리아졸-1-에탄아민 (화합물 8)이 사용된다. 아민 염기, 예컨대 트리에틸 아민 및 디이소프로필에틸 아민이 산 제거제로 사용된다.

반응식 II

별법으로, 본 발명의 화합물은 출발 물질 2와 9 사이 또는 출발 물질 4와 10 사이의 스즈끼(Suzuki) 반응으로 상기한 조건을 이용하여 제조될 수 있다.

본 발명의 화합물의 합성에 상기 2가지 커플링 반응이 이용되기 때문에 반응식 II의 출발 물질 9 및 10은 반응식 I과 비교할 때 커플링 순서가 반대가 된다.

당업자는 본 발명의 화합물의 모든 치환기가 상기 화합물의 합성에 이용된 특정 반응 조건을 허용하는 것은 아님을 알 것이다. 이러한 부분들은 합성 중의 편리한 시점에 도입될 수도 있고, 또는 필요하거나 원한다면 보호되었다가 탈보호될 수도 있다. 당업자는 보호기가 본 발명의 화합물 합성시의 임의의 편리한 시점에 도입되거나 제거될 수 있음을 알 것이다. 질소 및 산소 보호기를 도입하고 제거하는 방법은 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들어 문헌 [Greene and Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3^rd Ed., John Wiley and Sons, New York, Chapter 7 (1999)]을 참조한다. 본 발명의 일부 실시예 화합물은 본 발명의 다른 실시예 화합물로부터 제조된다. 추가로, 당업자는 많은 상황에서 상기 부분들이 도입되는 순서는 중요한 것이 아님을 알 것이다. 본 발명의 화합물을 생성하는데 필요한 단계들의 특정 순서는 합성할 특정 화합물, 출발 화합물, 및 치환된 부분의 상대적인 불안정성(lability)에 따라 달라질 수 있다.

본 발명의 일부 화합물은 비대칭 중심을 함유한다. 이러한 예에서, 본 발명에서는 거울상이성질체 뿐만이 아니라 라세미체까지도 고려된다. ChemDraw^® 버전 10.0을 사용하여 실시예 화합물의 명칭을 정하였다.

제조예 1

2- 벤조[b]티오펜 -7-일-4,4,5,5- 테트라메틸 -[1,3,2] 디옥사보롤란

플라스크에서 7-브로모-벤조[b]티오펜 (426 mg, 2 mmol), 비스(피나콜레이토)디보론 (756 mg, 3 mmol), Pd(dppf)Cl₂ (81 mg, 0.1 mmol) 및 아세트산칼륨 (294 mg, 3 mmol)을 디메틸술폭시드 (DMSO) (10 mL) 중에서 합하였다. 상기 혼합물에 질소를 5분 동안 버블링하였다. 상기 플라스크를 밀폐하고, 이것을 오일조에 넣어 100℃로 4시간 (h) 동안 가열하였다. 상기 혼합물을 클로로포름/이소프로필 알콜 (IPA) (3/1)로 희석하였다. 상기 용액을 포화 수성 염화나트륨으로 세척하였다. 황산나트륨에서 건조시켰다. 상기 용액을 진공하에 어두운 색의 잔류물로 농축시켰다. 컬럼 크로마토그래피 (헥산→헥산 중 20％ 에틸 아세테이트)로 정제하여 표제 화합물을 무색의 고체로서 수득하였다 (342 mg, 66％). MS (ES) m/z 261 [M+1]⁺.

제조예 2

벤조[b]티오펜 -7- 보론산

기계적 교반기가 장착된 12-L 모르톤(Morton) 플라스크에서 7-브로모벤조[b]티오펜 (300 g, 1.41 mmol) 및 트리-이소프로필보레이트 (403.6 g, 2.15 mmol)를 무수 THF (4 L) 중에서 합하고, 질소하에 드라이아이스/아세톤 조에서 -70℃로 냉각시켰다. n-부틸 리튬 (헥산 중 1.6 M, 714 g, 1.68 mmol)을 내부 온도가 -67.5℃ 미만으로 유지되는 속도로 적가하였다. 적가 완료 후에 상기 반응 혼합물이 이 온도에서 1시간 동안 교반되도록 하였다. 냉각조를 치우고 물 4 L를 서서히 첨가하였고, 이것은 온도를 약 -5℃로 상승시켰다. 다음으로, 상기 용액의 pH가 약 pH = 2가 될 때까지 진한 HCl (75 mL)을 첨가하였다. 상기 슬러리가 1시간 동안 교반되도록 하였다. 상기 혼합물의 pH가 약 pH = 12로 조정되도록 충분한 5 N 수성 NaOH를 첨가하고, 22-L 바닥-적하 깔때기로 옮겼다. 아래쪽의 수성 층을 분리하여 저장하였다. 위쪽의 유기 층을 메틸-tert-부틸 에테르 4 L로 희석하고 5 N 수성 NaOH 1 L로 추출하였다. 수성 층을 분리하고, 이전의 수성 추출물과 합하여 다시 분별 깔때기에 넣었다. 수성 층을 추가의 메틸-tert-부틸 에테르 (4 L)로 세척하였다. 다시, 수성 층을 분리하고, 기계적 교반기가 장착된 12-L의 3-구 둥근 바닥 플라스크로 옮겼다. 빙수조를 사용하여 상기 용액을 +5℃로 냉각시켰다. 상기 용액의 pH가 약 pH = 2가 될 때까지 진한 HCl을 서서히 첨가하였다. 상기 혼합물을 30분 (min) 동안 교반한 후에 생성된 고체를 여과해 냈다. 상기 고체를 깔때기에서 물 2 L로 2회 헹구고, 30분 동안 공기-건조되게 하였다. 상기 고체를 50℃의 진공 오븐에 넣고, 진공하에 밤새 건조시켰다. 건조된 고체를 n-헵탄 2 L로 30분 동안 슬러리화하여 황색 색상을 제거하였다. 상기 고체를 다시 여과해 내고 30분 동안 공기-건조시킨 후에 40℃에서 밤새 진공-건조시켜 표제 화합물 (188.8 g, 75％)을 백색 고체로서 수득하였다.

제조예 3

5- 브로모메틸 -2- 플루오로 -4- 요오도 -피리딘

플라스크에서 2-플루오로-4-요오도-피콜린 (10.0 g, 42.2 mmol), N-브로모숙신이미드 (9.76 g, 54.8 mmol), 2,2'-아조비스이소부티로니트릴 (3.46 g, 21.1 mmol) 및 무수 CCl₄ (100 mL)를 합하였다. 상기 혼합물을 70℃에서 질소하에 16시 간 동안 가열하였다. 실온 (RT)으로 냉각시켰다. 디클로로메탄 (DCM)으로 희석하고, 물 및 수성 포화 염화나트륨으로 세척하였다. 층들을 분리하고, 유기 층을 황산마그네슘에서 건조시켰다. 진공하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 컬럼 크로마토그래피 (헥산 중 1％→15％ 에틸 아세테이트)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다 (8.27 g, 62％). MS (ES) m/z 315 [M+1]⁺.

제조예 4

(6- 플루오로 -4- 요오도 -피리딘-3-일)- 아세토니트릴

아세토니트릴 20 mL 중에서 트리메틸실릴 시아나이드 (297 mg, 3.0 mmol) 및 테트라부틸암모늄 플루오라이드 (785 mg, 3.0 mmol)를 질소하에 합하였다. 5-브로모메틸-2-플루오로-4-요오도-피리딘 (0.63 g, 2.0 mmol)을 상기 용액에 첨가하였다. 상기 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 상기 혼합물을 클로로포름/IPA (3/1)로 희석하였다. 상기 용액을 물로 세척한 후에 포화 수성 염화나트륨으로 세척하였다. 이것을 황산나트륨에서 건조시켰다. 상기 용액을 진공하에 농축시켰다. 컬럼 크로마토그래피 (DCM 중 5％ 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 황색의 왁스상 고체로서 수득하였다 (500 mg, 96％). MS (ES) m/z 263 [M+1]⁺.

제조예 5

2-(6- 플루오로 -4- 요오도피리딘 -3-일)-2- 메틸프로판니트릴

수소화나트륨 (1.51 g, 62.9 mmol)을 디메틸 포름아미드 (DMF) 10 mL 중 (6-플루오로-4-요오도-피리딘-3-일)-아세토니트릴 (5.5 g, 20.9 mmol)의 용액에 0℃에 서 첨가하였다. 상기 혼합물을 0℃에서 실온이 될 때까지 30분 동안 교반하였다. 요오드화메틸 (8.9 g, 63 mmol)을 첨가하고, 상기 혼합물을 실온에서 30분 더 계속 교반하였다. 상기 혼합물을 물로 희석하고, DCM으로 추출하였다. 유기 상을 황산나트륨에서 건조시키고, 진공하에 농축시켜 오일성 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 플래시(flash) 컬럼 크로마토그래피 (FCC) (헥산 중 20％ 에틸 아세테이트)로 정제하여 표제 화합물을 황색 고체로서 수득하였다 (5 g, 82％). MS (ES) m/z 291 [M+1]⁺.

제조예 6

2-(6- 플루오로 -4- 요오도 -피리딘-3-일)- 아세트아미드

(6-플루오로-4-요오도-피리딘-3-일)-아세토니트릴 (360 mg, 1.37 mmol), 과산화수소 (10 g, 30％, 158 mmol), 18-크라운 에테르 (36 mg, 0.14 mmol), 탄산칼륨 (2 M, 10 mL, 20 mmol) 및 에탄올 10 mL를 함께 합하여 균질한 용액을 형성하였다. 상기 혼합물을 3시간 동안 교반하였다. 이것을 물로 희석하였다. 상기 생성물을 DCM으로 추출하였다. 조 물질을 FCC (DCM 중 10％ 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다 (250 mg, 64％). MS (ES) m/z 281 [M+1]⁺.

하기하는 중간체를 2-(6-플루오로-4-요오도-피리딘-3-일)-아세트아미드에 대한 것과 유사한 절차를 이용하여 제조하였다:

제조예	화합물 명칭	MS (ES) m/z [M+1]⁺
7	2-(6-플루오로-4-요오도피리딘-3-일)-2-메틸프로판아미드	309

제조예 8

1-(6- 플루오로 -피리딘-3-일)-에탄올

메틸마그네슘 브로마이드 (에테르 중 3 M, 12 mL, 36 mmol)를 THF (20 mL) 중 6-플루오로-피리딘-3-카르브알데히드 (3 g, 24 mmol)의 용액에 0℃에서 질소하에 첨가하였다. 상기 혼합물을 밤새 실온에서 계속 교반하였다. 상기 혼합물을 1 N HCl로 켄칭(quenching)시킨 후에 묽은 수산화암모늄을 사용하여 약 pH 9로 염기성화하였다. 생성물을 클로로포름/IPA (3/1)로 추출하였다. 황산나트륨에서 건조시켰다. 상기 용액을 진공하에 농축시켰다. 컬럼 크로마토그래피 (DCM 중 10％ 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 무색의 오일로서 수득하였다 (2.3 g, 68％). MS (ES) m/z 142 [M+1]⁺.

제조예 9

5-(1- 아지도 -에틸)-2- 플루오로 -피리딘

빙조에서 냉각 상태로 유지시킨 1-L 플라스크에 트리페닐포스핀 (27.9 g, 106.3 mmol) 및 4,5-디클로로-3,6-디옥소시클로헥사-1,4-디엔-1,2-디카르보니트릴 (24.12 g, 106.3 mmol)을 첨가하였다. 교반하면서 DCM (150 mL)을 서서히 첨가하였다. 상기 어두운 색의 용액에 테트라-N-부틸암모늄 아지드 (30.23 g, 106.3 mmol)를 서서히 첨가한 후에 DCM (10 mL) 중에 용해시킨 1-(6-플루오로-피리딘-3-일)-에탄올 (10 g, 70.85 mmol)을 첨가하였다. 상기 플라스크를 빙조에서 꺼내고 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 용매를 회전증발기에서 제거하고 정상(normal phase) 크로마토그래피 (헥산 중 5％→20％ 에틸 아세테이트)로 정제하여 표제 화합물을 무색의 오일로서 수득하였다 (7.75 g). GCMS m/z 166 [M]⁺.

제조예 10

1-(6- 플루오로 -피리딘-3-일)- 에틸아민

5-(1-아지도-에틸)-2-플루오로-피리딘 (4.09 g, 24.59 mmol)을 60 psi 압력하에 에탄올 (200 mL) 중에서 PtO₂ (6％ w/w)의 존재하에 수소화하였다. 4시간 후에 상기 혼합물을 여과하여 용매를 회전증발기에서 제거하고, 생성된 오일을 진공하에 건조시켜 표제 화합물을 수득하였다 (3.15 g). GCMS m/z 140 [M]⁺.

제조예 11

1-(6- 클로로피리딘 -3-일)에탄올

나트륨 테트라히드로보레이트 (1.01 g, 26.35 mmol)를 메탄올 (100 mL) 중 1-(6-클로로-피리딘-3-일)-에타논 (10 g, 64.27 mmol)의 용액에 서서히 첨가하였다. 실온에서 15분 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 포화 NaHCO₃ (40 mL)을 함유하는 비커에 부은 후에 물 (100 mL)과 DCM (400 mL) 사이에서 추출하였다. 유기 층들을 포화 수성 염화나트륨으로 세척하여 황산나트륨에서 건조시키고 농축시켰다. 정상 컬럼 크로마토그래피 (헥산 중 20％ 에틸 아세테이트→헥산 중 70％ 에틸 아세테이트)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다 (7 g, 69％). MS (ES) m/z 158 [M+1]⁺.

제조예 12

2- 플루오로 -5-(1- 메톡시메톡시 -에틸)-피리딘

디이소프로필에틸아민 및 클로로메톡시메탄을 DCM 중 1-(6-플루오로-피리딘-3-일)-에탄올 (3.0 g, 21.3 mmol)의 용액에 0℃에서 첨가하였다. 상기 혼합물을 30분 동안 0℃에서 계속 교반한 후에 밤새 실온에서 교반하였다. 상기 혼합물을 클로로포름/IPA (3/1)로 희석하였다. 상기 용액을 포화 수성 염화나트륨으로 세척하였다. 이것을 황산나트륨에서 건조시켰다. 상기 용액을 진공하에 어두운 색의 잔류물로 농축시켰다. 컬럼 크로마토그래피 (헥산→헥산 중 20％ 에틸 아세테이트)로 정제하여 표제 화합물을 무색의 고체로서 수득하였다 (3 g, 66％). MS (ES) m/z 186 [M+1]⁺.

하기하는 중간체를 2-플루오로-5-(1-메톡시메톡시-에틸)-피리딘에 대한 것과 유사한 절차를 이용하여 제조하였다:

제조예	화합물 명칭	MS (ES) m/z [M+1]⁺
13	2-클로로-5-(1-(메톡시메톡시)에틸)피리딘	202

제조예 14

5- 시클로프로필 -2- 플루오로 -피리딘

2-플루오로-5-요오도-피리딘 (1.12 g, 5 mmol), 시클로프로필보론산 (645 mg, 7.5 mmol), 아세트산팔라듐 (56 mg, 0.25 mmol) 및 인산칼륨 (3.2 g, 15 mmol)을 톨루엔/물 (20:1, 21 mL) 중에서 합하였다. 상기 혼합물을 100℃에서 4시간 동안 가열하였다. 상기 혼합물을 클로로포름-IPA (3:1, 100 mL)로 희석하였다. 유기 상을 포화 수성 염화나트륨 및 물로 세척하였다. 상기 혼합물을 황산나트륨에서 건조시켰다. 상기 용액을 진공하에 갈색 오일로 농축시켰다. 컬럼 크로마토그래피 (헥산 중 20％ 에틸 아세테이트)로 정제하여 표제 화합물을 옅은 황색 오일로서 수득하였다 (430 mg, 63％).

제조예 15

5- 시클로프로필 -2- 플루오로 -3- 요오도 -피리딘

드라이아이스-아세톤 조에서 질소하에 THF (20 mL) 중 5-시클로프로필-2-플루오로-피리딘 (1.3 g, 9.5 mmol)의 용액을 -75℃로 냉각시켰다. 리튬 디이소프로필아미드 (THF 중 2 M, 6 mL, 12 mmol)를 30분의 기간 동안 첨가하였다. 상기 혼합물을 3시간 더 교반한 후에 요오드 (2.9 g, 11.4 mmol, THF 50 mL 중에 용해함)를 첨가하였다. 2시간 더 계속 교반한 후에 상기 혼합물에 물 (100 mL)을 첨가하였다. 이어서, 1시간 동안 교반하에 실온으로 가온되도록 하였다. 상기 혼합물을 포화 티오황산나트륨 용액 (50 mL)으로 처리하였다. 상기 용액을 에테르로 추출하였다. 상기 용액을 진공하에 농축시켰다. 컬럼 크로마토그래피 (헥산→헥산 중 20％ 에틸 아세테이트)로 정제하여 표제 화합물을 황색 오일로서 수득하였다 (1.7 g, 68％).

하기하는 중간체를 5-시클로프로필-2-플루오로-3-요오도-피리딘에 대한 것과 유사한 절차를 이용하여 제조하였다:

제조예	화합물 명칭	MS (ES) m/z [M+1]⁺
16	2-플루오로-3-요오도-5-(1-메톡시메톡시-에틸)-피리딘	312
17	2-클로로-3-요오도-5-(1-(메톡시메톡시)에틸)-피리딘	328

제조예 18

5- 시클로프로필 -2- 플루오로 -4- 요오도 -피리딘

드라이아이스-아세톤 조에서 질소하에 THF (20 mL) 중 5-시클로프로필-2-플루오로-3-요오도-피리딘 (1.7 g, 6.5 mmol)의 용액을 -75℃로 냉각시켰다. 리튬 디이소프로필아미드 (THF 중 2 M, 3.9 mL, 7.8 mmol)를 30분의 기간 동안 첨가하였다. 상기 혼합물을 3시간 더 교반한 후에 물 (100 mL)을 첨가하였다. 이어서, 1시간 동안 교반하에 온도가 실온으로 상승하도록 하였다. 상기 용액을 에테르로 추출하였다. 상기 용액을 진공하에 갈색 오일로 농축시켰다. 컬럼 크로마토그래피 (헥산→헥산 중 15％ 에틸 아세테이트)로 정제하여 표제 화합물을 황색 오일로서 수득하였다 (1.1 g, 65％).

하기하는 중간체를 5-시클로프로필-2-플루오로-4-요오도-피리딘에 대한 것과 유사한 절차를 이용하여 제조하였다:

제조예	화합물 명칭	MS (ES) m/z [M+1]⁺
19	2-플루오로-4-요오도-5-(1-메톡시메톡시-에틸)-피리딘	312
20	2-클로로-4-요오도-5-(1-(메톡시메톡시)에틸)-피리딘	328

제조예 21

1-(6- 플루오로 -4- 요오도 -피리딘-3-일)-에탄올

1 N HCl (5 mL)을 메탄올 (10 mL) 중 2-플루오로-4-요오도-5-(1-메톡시메톡시-에틸)-피리딘 (1 g, 3.2 mmol)의 용액에 첨가하였다. 상기 혼합물을 밤새 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 탄산나트륨 (2 N)으로 희석하였다. 생성물을 클로로포름으로 추출하였다. 유기 상을 황산나트륨에서 건조시켰다. 상기 용액을 진공하에 농축시켰다. 조 물질을 컬럼 크로마토그래피 (DCM 중 10％ 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다 (0.75 g, 87％). MS (ES) m/z 268 [M+1]⁺.

하기하는 중간체를 1-(6-플루오로-4-요오도-피리딘-3-일)-에탄올에 대한 것과 유사한 절차를 이용하여 제조하였다:

제조예	화합물 명칭	MS (ES) m/z [M+1]⁺
22	1-(6-클로로-4-요오도피리딘-3-일)에탄올	284

제조예 23

메탄술폰산 1-(6- 플루오로 -4- 요오도 -피리딘-3-일)-에틸 에스테르

메탄술포닐 클로라이드 (1.93 g, 16.8 mmol)를 DCM (50 mL) 중 1-(6-플루오로-4-요오도-피리딘-3-일)-에탄올 (1.5 g, 5.6 mmol) 및 디이소프로필에틸아민 (2.2 g, 16.8 mmol)의 용액에 0℃에서 첨가하였다. 상기 혼합물을 0℃에서 실온이 될 때까지 4시간 동안 계속 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 묽은 탄산나트륨으로 희석하였다. 생성물을 클로로포름으로 추출하였다. 유기 상을 황산나트륨에서 건조시켰다. 상기 용액을 진공하에 농축시켰다. 조 물질을 컬럼 크로마토그래피 (헥산 중 20％ 에틸 아세테이트)로 정제하여 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다 (1.24 g, 64％). MS (ES) m/z 346 [M+1]⁺.

제조예 24

5-(1- 아지도 -에틸)-2- 플루오로 -4- 요오도 -피리딘

아지드화나트륨 (0.45 g, 7 mmol) 및 테트라-N-부틸암모늄 브로마이드 (0.12 g, 0.4 mmol)를 DMF (20 mL) 중 메탄술폰산 1-(6-플루오로-4-요오도-피리딘-3-일)-에틸 에스테르 (1.2 g, 3.5 mmol)의 용액에 0℃에서 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 42시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 클로로포름으로 희석하였다. 유기 상을 물 및 포화 수성 염화나트륨으로 세척하였다. 유기 상을 황산나트륨에서 건조시켰다. 상기 용액을 진공하에 농축시켰다. 컬럼 크로마토그래피 (헥산 중 20％ 에틸 아세테이트)로 정제하여 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다 (0.77 g, 76％).

제조예 25

tert -부틸 4-(1-(6- 클로로 -4- 요오도피리딘 -3-일)에틸)피페라진-1- 카르복실레이트

아세토니트릴 (10 mL) 중 6-클로로-4-요오도피리딘-3-일)에탄올 (300 mg, 1.06 mmol) 및 트리에틸아민 (737 ㎕, 5.29 mmol)의 빙냉 용액에 CH₃CN (3 mL) 중 메탄술폰산 무수물 (553 mg, 3.17 mmol)의 용액을 적가하였다. 40분 동안 동일한 온도에서 교반하고, CH₃CN (5 mL) 중 N-tert-부톡시카르보닐피페라진 (1.97 g, 10.6 mmol)의 용액을 첨가하였다. 상기 혼합물을 60℃로 밤새 가열하였다. 포화 NaHCO₃ (10 mL)으로 켄칭시켜 에틸 아세테이트 (50 mL×3)로 추출하였다. 유기물질을 포화 수성 염화나트륨으로 세척하여 Na₂SO₄에서 건조시켜 여과하고, 용매를 회전 증발로 제거하였다. 정상 컬럼 크로마토그래피 (헥산 중 10％ 에틸 아세테이트→헥산 중 40％ 에틸 아세테이트)로 정제하여 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다 (226 mg, 47％). MS (ES) m/z 452 [M+1]⁺.

제조예 26

1-(6- 클로로피리딘 -3-일) 에타논 옥심

압력 용기에서 1-(6-클로로피리딘-3-일)에타논 (3.4 g, 22.8 mmol), 물 중 히드록실아민 (50％) (5.77 g, 87.4 mmol) 및 아세트산 0.75 mL를 디옥산 15 mL 중 에서 합하였다. 상기 용기를 밀폐하고 상기 혼합물을 오일조에서 3시간 동안 150℃에서 가열하였다. 상기 혼합물을 실온으로 냉각시켰다. 클로로포름/IPA (3/1)으로 희석하여 물 및 수성 포화 염화나트륨으로 세척하였다. 층들을 분리하고, 유기 층을 황산나트륨에서 건조시켰다. 진공하에 농축시켜 표제 화합물을 수득하였다 (3.52 g, 94％). MS (ES) m/z 171 [M+1]⁺.

제조예 27

1-(6- 클로로피리딘 -3-일) 에탄아민

무수 1,2-디메톡시에탄 50 mL 중 수소화붕소나트륨 (2.96 g, 82.65 mmol) 및 사염화티탄 (톨루엔 중 1 M, 41.33 mL, 41.33 mmol)의 용액을 N₂하에 0℃로 냉각시켰다. 1-(6-클로로피리딘-3-일)에타논 옥심 (3.52 g, 20.66 mmol)을 상기 용액에 적가하였다. 상기 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 상기 반응물을 물 200 mL로 켄칭시켰다. 상기 혼합물을 수산화암모늄으로 염기성화하였다. 이어서, 조 생성물을 톨루엔 및 에틸 아세테이트로 추출하였다. 층들을 분리하고, 유기 층을 황산나트륨에서 건조시켰다. 진공하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다 (1.24 g, 38％).

제조예 28

1-(6- 메틸피리딘 -3-일) 에탄아민

티타늄 테트라(이소프로폭시드) (42.1 g, 148 mmol) 중 1-(6-메틸피리딘-3- 일)-에타논 (10 g, 74 mmol) 및 암모니아 (370 mmol, 메탄올 중 2 M)의 혼합물을 N₂하에 6시간 동안 실온에서 교반하였다. 상기 혼합물에 나트륨 테트라히드로보레이트 (4.2 g, 111 mmol)를 첨가하고, 밤새 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 수산화암모늄으로 켄칭시키고, 상기 혼합물을을 여과하였다. 여액으로부터 용매를 제거하고, 잔류물을 DCM으로 추출하고 포화 수성 염화나트륨으로 세척하여 Na₂SO₄에서 건조시켜 여과하고, 용매를 제거하여 표제 화합물을 짙은 황색 오일로서 수득하였다 (8.16 g). MS (ES) m/z 137 [M+1]⁺.

제조예 29

tert -부틸 1-(6- 메틸피리딘 -3-일) 에틸카르바메이트

디이소프로필에틸아민 (11.6 g, 89.9 mmol) 및 디-tert-부틸디카르보네이트 (15.7 g, 71.9 mmol)를 아세토니트릴 (50 mL) 중 1-(6-메틸피리딘-3-일)-에틸아민 (8.16 g, 59.9 mmol)의 용액에 첨가하고, 상기 혼합물을 밤새 교반하였다. 상기 혼합물을 포화 NaHCO₃ (200 mL)으로 세척하여 DCM으로 추출하고, 포화 수성 염화나트륨으로 세척하고 Na₂SO₄에서 건조시켰다. 컬럼 크로마토그래피 (헥산 중 5％→50％ 에틸 아세테이트)로 정제하여 표제 화합물을 옅은 황색 오일로서 수득하였다 (7.3 g). MS (ES) m/z 237 [M+1]⁺.

제조예 30

tert -부틸 1-(4- 요오도 -6- 메틸피리딘 -3-일) 에틸카르바메이트

THF (20 mL) 중 tert-부틸 1-(6-메틸피리딘-3-일)에틸카르바메이트 (6.85 g, 29 mmol)의 용액을 THF (70 mL) 중 tert-부틸리튬 (51.1 mL, 87 mmol)의 용액에 이중 팁의 바늘을 이용하여 -78℃에서 N₂하에 첨가하였다. 30분 후에 THF (25 mL) 중 요오드 (11.0 g, 43.5 mmol)를 30분에 걸쳐 -78℃에서 첨가하였다. 1시간 동안 교반한 후에 실온으로 가온하였다. 물로 켄칭시켜 에틸 아세테이트 중에 추출하고, 포화 수성 염화나트륨으로 세척하고 Na₂SO₄에서 건조시켰다. 컬럼 크로마토그래피 (헥산 중 5％→50％ 에틸 아세테이트)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다 (620 mg). MS (ES) m/z 363 [M+1]⁺.

제조예 31

(6- 플루오로 -4- 요오도 -피리딘-3- 일메톡시 )-에탄올

수소화나트륨 (54 mg, 2.25 mmol)을 에틸렌 글리콜 2.5 mL에 0℃에서 첨가하고, 30분 동안 실온에서 교반하였다. 5-브로모메틸-2-플루오로-4-요오도-피리딘 (0.69 g, 2.14 mmol)을 첨가하고, 이것을 120℃로 30분 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시켜 물 70 mL로 희석하고, 에테르 (3×50 mL)로 추출하였다. 유기 층들을 합하여 포화 수성 염화나트륨으로 세척하고, MgSO₄에서 건조시키고 용매를 제거하였다. 디에틸에테르를 사용한 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다 (240 mg, 38％). MS (ES) m/z 296 [M+1]⁺.

제조예 32

4-(6- 플루오로 -4- 요오도 -피리딘-3- 일메틸 )-모르폴린

플라스크에서 5-브로모메틸-2-플루오로-4-요오도-피리딘 (6.13 g, 19.4 mmol), 모르폴린 (3.38 g, 38.8 mmol) 및 무수 CH₃CN (100 mL)을 질소하에 합하였다. N,N-디이소프로필에틸아민 (6.76 mL, 38.80 mmol, 2 M THF 용액)을 첨가하였다. 81℃에서 2시간 동안 가열하고 실온으로 냉각시켰다. DCM으로 희석하고, 물 및 수성 포화 염화나트륨으로 세척하였다. 유기 층을 수성 층으로부터 분리하고, 황산마그네슘에서 건조시켰다. 여과 후에 진공하에 농축시켜 표제 화합물 6.23 g을 수득하였다 (100％). MS (ES) m/z 323 [M+1]⁺.

하기하는 중간체를 4-(6-플루오로-4-요오도-피리딘-3-일메틸)-모르폴린에 대한 것과 유사한 절차를 이용하여 제조하였다:

제조예	화합물 명칭	MS (ES) m/z [M+1]⁺
33	N-(6-플루오로-4-요오도-피리딘-3-일메틸)-디메틸-아민	280
34	(6-플루오로-4-요오도-피리딘-3-일메틸)-메틸-카르밤산 tert-부틸 에스테르	367
35	5-아제티딘-1-일메틸-2-플루오로-4-요오도-피리딘	292
36	시클로프로필-(6-플루오로-4-요오도-피리딘-3-일메틸)-아민	292
37	2-플루오로-4-요오도-5-피롤리딘-1-일메틸-피리딘	306
38	에틸-(6-플루오로-4-요오도-피리딘-3-일메틸)-메틸아민	294
39	(6-플루오로-4-요오도-피리딘-3-일메틸)-메틸-프로필-아민	308
40	(6-플루오로-4-요오도-피리딘-3-일메틸)-이소프로필-메틸- 아민	308
41	(6-플루오로-4-요오도-피리딘-3-일메틸)-프로필-아민	294
42	(6-플루오로-4-요오도-피리딘-3-일메틸)-이소프로필-아민	294
43	에틸-(6-플루오로-4-요오도-피리딘-3-일메틸)-아민	280
44	2-((6-플루오로-4-요오도피리딘-3-일)메틸아미노)에탄올	m/z 296 [GCMS]

제조예 45

2- 플루오로 -5- 메톡시메톡시 -피리딘

6-플루오로-피리딘-3-올 (3.5 g, 30.95 mmol)을 DMF (20 mL) 중 수소화나트륨 (1.49 g, 37.1 mmol)의 현탁액에 첨가하였다. 상기 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 클로로메틸 메틸 에테르 (2 g, 25.0 mmol)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 상기 혼합물을 에틸 아세테이트 및 물로 희석하였다. 유기 층을 물 및 수성 포화 염화나트륨으로 세척하였다. 상기 혼합물을 황산나트륨에서 건조시켰다. 상기 용액을 진공하에 갈색 오일로 농축시켰다. 컬럼 크로마토그래피 (헥산 중 10％ 에틸 아세테이트)로 정제하여 표제 화합물 (4.30 g, 88％)을 황색 오일로서 수득하였다.

제조예 46

2- 플루오로 -4- 요오도 -5- 메톡시메톡시 -피리딘

THF (60 mL) 중 2-플루오로-5-메톡시메톡시-피리딘 (4.1 g, 26.1 mmol)의 용액을 -75℃로 냉각시켰다. tert-부틸리튬 (펜탄 중 1.7 M, 30.4 mL, 51.7 mmol)을 30분의 기간에 걸쳐 첨가하였다. 상기 혼합물을 30분 더 교반하였다. 요오드 (9.8 g, 38.6 mmol, THF 60 mL 중에 용해함)를 첨가하였다. 첨가 완료 후에 1시간 동안 교반하였다. 교반하면서 온도가 1시간에 걸쳐 실온으로 상승되도록 하였다. 상기 혼합물을 물로 처리하였다. 상기 용액을 에틸 아세테이트로 3회 추출하였다. 유기 층을 수성 포화 염화나트륨으로 세척하였다. 상기 혼합물을 황산나트륨에서 건조시켰다. 상기 용액을 진공하에 갈색 고체로 농축시켰다. 상기 갈색 고체를 헥산으로 연화처리(trituration)하였다. 여과하여 표제 화합물 (3.9 g, 53％)을 갈색 고체로서 수득하였다.

제조예 47

6- 플루오로 -4- 요오도 -피리딘-3-올

THF (20 mL) 중 2-플루오로-4-요오도-5-메톡시메톡시-피리딘 (3.9 g, 13.8 mmol)의 용액에 HCl (물 중 3 M, 31 mL, 93.0 mmol)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 60℃에서 3시간 동안 교반하고, 상기 혼합물을 냉각시켰다. 포화 수성 중탄산나트륨 용액을 서서히 첨가하여 pH를 7로 조정하였다. 상기 용액을 에틸 아세테이트로 3회 추출하였다. 유기 층을 수성 포화 염화나트륨으로 세척하였다. 상기 혼합물을 황산나트륨에서 건조시켰다. 상기 용액을 진공하에 농축시켜 표제 화합물 (3.2 g, 97％)을 황색 고체로서 수득하였다. MS (ES) m/z 240 [M+1]⁺.

제조예 48

2-[2-(6- 플루오로 -4- 요오도 -피리딘-3- 일옥시 )-에틸]- 이소인돌 -1,3- 디온

DMF (10 mL) 중 6-플루오로-4-요오도-피리딘-3-올 (1.5 g, 6.28 mmol) 및 K₂CO₃ (4.38 g, 31.4 mmol)의 현탁액을 빙조에서 질소하에 0℃로 냉각시켰다. 2-(2-브로모-에틸)-이소인돌-1,3-디온 (3.19 g, 12.55 mmol)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 물을 첨가하였다. 에틸 아세테이트로 추출하 였다. 상기 용액을 수성 포화 염화나트륨으로 세척하였다. 황산나트륨에서 건조시켰다. 상기 용액을 진공하에 농축시켰다. 컬럼 크로마토그래피 (헥산→헥산 중 30％ 에틸 아세테이트)로 정제하여 표제 화합물을 황색 오일로서 수득하였다 (1.51 g, 58％). MS (ES) m/z 413 [M+1]⁺.

제조예 49

2-(6- 플루오로 -4- 요오도 -피리딘-3- 일옥시 )- 에틸아민

히드라진 (70 mg, 2.12 mmol)을 에탄올 (10 mL) 중 2-[2-(6-플루오로-4-요오도-피리딘-3-일옥시)-에틸]-이소인돌-1,3-디온 (440 mg, 1.06 mmol)의 용액에 첨가하였다. 상기 용액을 실온에서 밤새 교반하였다. 여과하여 고체를 제거하고, 여액을 밝은 황색 고체로 농축시켰다. 컬럼 크로마토그래피 (염화메틸렌 중 메탄올 중 10％ 2 M 암모니아)로 정제하여 표제 화합물을 밝은 황색 오일로서 수득하였다 (250 mg, 83.8％).

제조예 50

1-(6- 플루오로 -4- 요오도 -피리딘-3- 일옥시 )-프로판-2-온

DMF (10 mL) 중 6-플루오로-4-요오도-피리딘-3-올 (1.6 g, 6.69 mmol) 및 K₂CO₃ (2.8 g, 20.1 mmol)의 현탁액을 빙조에서 질소하에 0℃로 냉각시켰다. 30분의 기간 동안에 클로로아세톤 (0.78 g, 8.03 mmol)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 물을 첨가하고, 에틸 아세테이트로 추출하였 다. 상기 용액을 수성 포화 염화나트륨으로 세척하였다. 황산나트륨에서 건조시켰다. 상기 용액을 진공하에 농축시켰다. 컬럼 크로마토그래피 (헥산→헥산 중 10％ 에틸 아세테이트)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다 (1.5 g, 76％). MS (ES) m/z 296 [M+1]⁺.

제조예 51

1-(6- 플루오로 -4- 요오도 -피리딘-3- 일옥시 )-프로판-2-올

NaBH₄ (35 mg, 0.94 mmol)를 메탄올 (4 mL) 중 1-(6-플루오로-4-요오도-피리딘-3-일옥시)-프로판-2-온 (240 mg, 0.81 mmol)의 용액에 서서히 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 1 N HCl 및 물을 첨가하였다. 염화메틸렌으로 추출하였다. 유기 층을 수성 포화 염화나트륨으로 세척하였다. 황산나트륨에서 건조시켰다. 상기 용액을 진공하에 황색 고체로 농축시켰다. 컬럼 크로마토그래피 (헥산→헥산 중 10％ 에틸 아세테이트)로 정제하여 표제 화합물을 밝은 황색 고체로서 수득하였다 (240 mg, 99％). MS (ES) m/z 298 [M+1]⁺.

제조예 52

2-[2-(6- 플루오로 -4- 요오도 -피리딘-3- 일옥시 )-1- 메틸 -에틸]- 이소인돌 -1,3- 디온

DMF (2 mL) 중 6-플루오로-4-요오도-피리딘-3-올 (150 mg, 0.63 mmol), 톨루엔-4-술폰산 2-(1,3-디옥소-1,3-디히드로-이소인돌-2-일)-프로필 에스테르 (226 mg, 0.63 mmol), 탄산세슘 (206 mg, 0.63 mmol)의 혼합물을 100℃에서 5시간 동안 가열하였다. 상기 혼합물을 냉각시키고 물을 첨가하였다. 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 수성 포화 염화나트륨으로 세척하였다. 황산나트륨에서 건조시켰다. 상기 용액을 진공하에 밝은 황색 고체로 농축시켰다. 컬럼 크로마토그래피 (헥산→헥산 중 10％ 에틸 아세테이트)로 정제하여 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다 (115 mg, 43％). MS (ES) m/z 427 [M+1]⁺.

하기하는 중간체를 2-[2-(6-플루오로-4-요오도-피리딘-3-일옥시)-1-메틸-에틸]-이소인돌-1,3-디온에 대한 것과 유사한 절차를 이용하여 제조하였다:

제조예	화합물 명칭	MS (ES) m/z [M+1]⁺
53	S-2-[2-(6-플루오로-4-요오도-피리딘-3-일옥시)-1-메틸-에틸]- 이소인돌-1,3-디온	427
54	R-2-[2-(6-플루오로-4-요오도-피리딘-3-일옥시)-1-메틸-에틸]- 이소인돌-1,3-디온	427

제조예 55

2- 플루오로 -4- 요오도 -5-[2-( 테트라히드로 -피란-2- 일옥시 )- 에톡시 ]-피리딘

6-플루오로-4-요오도-피리딘-3-올 (0.5 g, 2.09 mmol)을 DMF (6 mL) 중 수소화나트륨 (광유 중 60％ 분산액, 0.1 g, 2.51 mmol)의 현탁액에 첨가하였다. 상기 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 2-(2-브로모-에톡시)-테트라히드로피란 (0.51 g, 2.34 mmol)을 첨가하였다. 상기 용액을 실온에서 밤새 교반하였다. 상기 혼합물을 에틸 아세테이트 및 물로 희석하였다. 유기 층을 수성 포화 염화나트륨 및 물로 세척하였다. 상기 혼합물을 황산나트륨에서 건조시켰다. 상기 용액을 진공하에 농축시켰다. 컬럼 크로마토그래피 (헥산 중 10％ 에틸 아세테이트)로 정제하 여 표제 화합물 (0.58 g, 75.5％)을 밝은 황색 오일로서 수득하였다. MS (ES) m/z 368 [M+1]⁺.

하기하는 중간체를 2-플루오로-4-요오도-5-[2-(테트라히드로-피란-2-일옥시)-에톡시]-피리딘에 대한 것과 유사한 절차를 이용하여 제조하였다:

제조예	화합물 명칭	MS (ES) m/z [M+1]⁺
56	2-클로로-4-요오도-5-(2-(테트라히드로-2H-피란-2- 일옥시)에톡시)피리딘	384

제조예 57

3- 메톡시메톡시 -피리딘

3-히드록시피리딘 (7 g, 74 mmol)을 THF (20.6 mL) 및 DMF (34.4 mL) 중에 용해하고 -15℃로 냉각시켰다. 칼륨 tert-부톡시드 (8.3 g, 74 mmol)를 첨가하고, -15℃에서 30분 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 클로로메틸메틸 에테르 (5.81 mL, 77 mmol)로 40분에 걸쳐 적가 처리하였다. 적가 완료 후에, 상기 혼합물을 -15℃에서 1시간 더 교반하였다. 빙조를 치우고, 상기 혼합물이 15℃로 서서히 가온되도록 하였다. 상기 혼합물을 포화 수성 염화나트륨에 붓고, 10분 동안 격렬하게 교반하였다. 생성된 용액을 에틸 아세테이트로 3회 추출하였다. 유기 추출물들을 합하여 포화 수성 염화나트륨으로 세척하고 황산나트륨에서 건조시켜 여과하고 진공하에 농축시켰다.

제조예 58

2- 클로로 -5- 메톡시메톡시 -피리딘

수소화나트륨 (3.7 g, 93 mmol)을 DMF (50 mL) 중에 현탁하고, DMF (20 mL) 중 2-클로로-5-히드록시피리딘 (10 g, 77 mmol)의 용액을 45분에 걸쳐 적가하였다. 생성된 용액을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 클로로메틸메틸 에테르 (6.6 mL, 86 mmol)를 45분에 걸쳐 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 에틸 아세테이트, 물 및 포화 수성 염화나트륨으로 희석하였다. 유기 용액을 단리하여 물로 3회, 포화 수성 염화나트륨으로 1회 세척하고, 황산나트륨에서 건조시켜 여과하고 진공하에 농축시켰다. 조 생성물을 헥산→헥산 중 30％ 에틸 아세테이트의 구배로 20분에 걸쳐 용출시킨 후에 헥산 중 30％ 에틸 아세테이트로 30분 동안 유지시키는 실리카겔 330 g에서의 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물 10.8 g (81％)을 투명한 오일로서 수득하였다. MS (ES) m/z 174.0 [M+1]⁺.

제조예 59

2- 클로로 -4- 요오도 -5- 메톡시메톡시 -피리딘

tert-부틸 리튬 (펜탄 중 1.7 M, 72 mL, 123 mmol)을 THF (300 mL) 중 2-클로로-5-메톡시메톡시-피리딘 (10.8 g, 62 mmol)의 용액에 -70℃에서 10분에 걸쳐 적가하였다. 생성된 용액을 -70℃에서 30분 동안 교반하였다. THF (150 mL) 중 요오드 (23 g, 92 mmol)의 용액을 30분에 걸쳐 적가하였다. 생성된 용액을 -70℃ 에서 1시간 동안 교반하였다. 빙조를 치우고, 상기 반응물이 실온으로 가온되도록 하였다. 상기 혼합물을 에틸 아세테이트 및 물로 희석하여 상들을 단리하였다. 수성 상을 에틸 아세테이트로 2회 추출하였다. 유기 추출물들을 합하고, 수성 티오황산나트륨으로 2회, 물로 1회, 및 포화 수성 염화나트륨으로 1회 세척하였다. 황산나트륨에서 건조시켜 여과하고 증발시켰다. 생성된 고체를 헥산으로 연화처리하였다. 상기 고체를 진공 여과로 수집하고, 상기 고체를 헥산으로 세척하였다. 상기 고체를 진공하에 건조시켜 표제 화합물 10.8 g (58％)을 갈색 고체로서 수득하였다.

하기하는 중간체를 2-클로로-4-요오도-5-메톡시메톡시-피리딘에 대한 것과 유사한 절차로 제조하였다:

제조예	화합물 명칭	MS (ES) m/z [M+1]⁺
60	tert-부틸 1-(6-클로로-4-요오도피리딘-3-일)에틸카르바메이트	383

제조예 61

[2-(6- 플루오로 -4- 요오도 -피리딘-3- 일옥시 )-에틸]- 메틸 - 카르밤산 tert -부틸 에스테르

수소화나트륨 (620 mg, 26 mmol)을 DMF 3 mL 중 [2-(6-플루오로-4-요오도-피리딘-3-일옥시)-에틸]-카르밤산 tert-부틸 에스테르 (0.33 g, 0.86 mmol)의 용액에 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 요오드화메틸 (0.37 g, 2.59 mmol)을 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 물을 첨가하고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 포화 수성 염화나트륨으로 세척하였다. 상기 혼합물을 황산나트륨에서 건조시켰다. 상기 용액을 진공하에 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피 (헥산 중 20％ 에틸 아세테이트)로 정제하여 표제 화합물을 밝은 황색 고체로서 수득하였다 (0.13 g, 38％).

제조예 62

6- 클로로 -4- 요오도 -피리딘-3-올

THF (40 mL) 중 2-클로로-4-요오도-5-메톡시메톡시-피리딘 (8.1 g, 27 mmol)의 용액을 3 N HCl (61 mL)로 처리하였다. 생성된 혼합물을 60℃로 3시간 동안 가열하였다. 상기 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 포화 수성 중탄산나트륨 용액을 서서히 첨가하여 pH를 7로 조정하였다. 상기 혼합물을 에틸 아세테이트로 3회 추출하였다. 유기 추출물들을 합하고 황산나트륨에서 건조시켜 여과하고 진공하에 농축시켜 표제 화합물 6.8 g (98％)을 갈색 고체로서 수득하였다.

제조예 63

2- 클로로 -5- 에톡시 -4- 요오도 -피리딘

DMF (50 mL) 중 6-클로로-4-요오도-피리딘-3-올 (4.9 g, 19 mmol) 및 탄산칼 륨 (8.0 g, 58 mmol)의 용액을 에틸 요오다이드 (4.7 mL, 58 mmol)로 처리하였다. 상기 혼합물을 60℃에서 3시간 동안 가열하였다. 상기 혼합물을 실온으로 냉각시켜 여과지로 여과하였다. 상기 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 10％ 수성 시트르산 용액으로 세척하였다. 수용액을 합하고 에틸 아세테이트로 2회 더 추출하였다. 유기 추출물들을 합하여 물로 3회, 포화 수성 염화나트륨으로 1회 세척하고, 황산나트륨에서 건조시켜 여과하고 진공하에 농축시켜 표제 화합물 5.1 g (93％)을 갈색 고체로서 수득하였다.

제조예 64

2,2-디메틸-N-피리딘-3-일- 프로피온아미드

250-mL 둥근 바닥 플라스크에 빙조, 자성 교반기 및 N₂ 대기를 장착하였다. 3-아미노피리딘 (15 g, 159 mmol), THF (60 mL), 디에틸에테르 (60 mL) 및 트리에틸아민 (17.7 g, 24.4 mL, 175 mmol)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 트리메틸아세틸 클로라이드 (21.0 g, 14.9 mL, 175 mmol)를 시린지를 통해 서서히 첨가하였다. 실온으로 가온하면서 밤새 혼합하였다. 물 (100 mL)을 첨가하여 분별 깔때기로 옮기고, 추출하여 아래쪽의 수성 층은 버렸다. 유기 층을 Na₂SO₄에서 건조시켜 여과하고, 회전증발을 통해 무색의 오일로 농축시켰고, 이것은 냉각 후에 고화되었다. 고진공하에 2.5시간 동안 건조시켜 표제 화합물을 황갈색 고체로서 21.56 g 수득하였다 (76％). MS (ES) m/z 179 [M+1]⁺.

제조예 65

N-(4- 요오도 -피리딘-3-일)-2,2-디메틸- 프로피온아미드

250-mL 둥근 바닥 플라스크에 자성 교반기, 열전지, 드라이아이스/아세톤 조, N₂ 대기 및 첨가 깔때기를 장착하였다. 2,2-디메틸-N-피리딘-3-일-프로피온아미드 (3.0 g, 16.8 mmol), 디에틸에테르 (67 mL) 및 테트라메틸렌 디아민 (4.68 g, 6.08 mL, 40.3 mmol)을 충전하였다. 상기 반응물을 -78℃로 냉각시켰다. 유리 시린지를 통해 n-부틸리튬 (헥산 중 2.5 M 용액, 16.2 mL, 40.3 mmol)을 10분에 걸쳐 서서히 첨가하였다. 상기 반응물을 2시간에 걸쳐 -13℃로 가온시켰다. 상기 반응물을 -78℃로 냉각시켰다. 요오드 용액 (I₂ 8.5 g, THF (20 mL) 중 33.6 mmol)을 제조하였다. 요오드 용액을 상기 반응물에 첨가 깔때기를 통해 첨가하고, 2.5시간 동안 -68℃에서 교반하였다. 상기 반응물을 포화 NH₄Cl 용액 (40 mL) 첨가로 켄칭시키고, 분별 깔때기로 옮겼다. 에틸 아세테이트 (100 mL)를 첨가하였다. 추출하고, 아래쪽의 수성 상은 버렸다. 유기 층을 포화 티오황산나트륨 용액 (100 mL)으로 세척하고 추출하였다. 유기 상을 포화 수성 염화나트륨으로 세척하고 추출하였다. 유기 상을 Na₂SO₄에서 건조시키고 여과하였다. 생성물을 회전 증발을 통해 농축시켰다. 100％ DCM→70％ 에틸 아세테이트/30％ DCM의 구배로 용출시키는 실리카 (80 g)에서의 크로마토그래피로 표제 화합물 1.19 g (23％)을 수득하였다. MS (ES) m/z 306 [M+1]⁺.

제조예 66

[2-(6- 플루오로 -4- 요오도 -피리딘-3- 일옥시 )-에틸]- 카르밤산 tert -부틸 에스테르

디이소프로필에틸아민 (0.23 g, 1.77 mmol)을 DCM 5 mL 중 2-(6-플루오로-4-요오도-피리딘-3-일옥시)-에틸아민 (0.25 g, 0.89 mmol) 및 디-tert-부틸디카르보네이트 (0.29 g, 1.33 mmol)의 용액에 첨가하였다. 상기 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 상기 혼합물을 DCM으로 희석하였다. 유기 층을 포화 수성 염화나트륨으로 세척하여 황산나트륨에서 건조시키고, 진공하에 농축시켜 조 오일을 수득하였다. 컬럼 크로마토그래피 (헥산 중 30％ 에틸 아세테이트)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다 (0.33 g, 97％).

하기하는 중간체를 [2-(6-플루오로-4-요오도-피리딘-3-일옥시)-에틸]-카르밤산 tert-부틸 에스테르에 대한 것과 유사한 절차로 제조하였다:

제조예	화합물 명칭	MS (ES) m/z [M+1]⁺
67	[1-(6-플루오로-피리딘-3-일)-에틸]-카르밤산 tert-부틸 에스테르	241
68	tert-부틸 6-플루오로피리딘-3-일카르바메이트	213
69	tert-부틸 1-(6-클로로피리딘-3-일)에틸카르바메이트	257

제조예 70

tert -부틸 1-(6- 클로로 -4- 요오도피리딘 -3-일) 에틸카르바메이트

tert-부틸 1-(6-클로로피리딘-3-일)에틸카르바메이트 (3.77 g, 14.7 mmol)를 THF (60 mL) 중에 용해하였다. tert-부틸리튬 (1.7 M 헵탄 용액, 25.9 mL, 44.0 mmol)을 -78℃에서 N₂하에 첨가하였다. 상기 반응 용액을 0.5시간 동안 -78℃에서 교반하였다. THF (44 mL) 중 요오드 (5.59 g, 22.0 mmol)의 용액을 30분에 걸쳐 N₂하에 -78℃에서 적가하였다. 생성된 용액을 -78℃에서 1시간 동안 교반한 후에 -78℃에서 실온이 될 때까지 1시간 동안 교반하였다. 상기 반응물을 물로 켄칭시켰다. 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 물 및 포화 수성 염화나트륨으로 세척하였다. MgSO₄에서 건조시켰다. 여과 후에 농축하고, 조 물질을 FCC (CH₂Cl₂ 중 0.1％→1％ 2 M NH₃ 메탄올 용액)로 정제하여 98％ HPLC 순도의 화합물을 수득하였다 (1.34 g, 24％). MS (ES) m/z 383 [M+1]⁺.

하기하는 중간체를 tert-부틸 1-(6-클로로-4-요오도피리딘-3-일)에틸카르바메이트에 대한 것과 유사한 절차로 제조하였다:

제조예	화합물 명칭	MS (ES) m/z [M+1]⁺
71	[1-(6-플루오로-4-요오도-피리딘-3-일)-에틸]-카르밤산 tert-부틸 에스테르	367
72	tert-부틸 6-플루오로-4-요오도피리딘-3-일카르바메이트	339

제조예 73

6- 플루오로 -4- 요오도피리딘 -3-아민

tert-부틸 6-플루오로-4-요오도피리딘-3-일카르바메이트 (1.47 g, 4.35 mmol)를 DCM (20 mL) 중에 용해하였다. 트리플루오로아세트산 (TFA) (20 mL)을 첨가하였다. 실온에서 N₂하에 2시간 동안 교반하였다. 용매를 감압하에 제거하였다. 진공하에 건조시켜 100％ HPLC 순도의 6-플루오로-4-요오도피리딘-3-아민을 TFA 염 (1.02 g, 99％)으로 수득하였다. MS (ES) m/z 239 [M+1]⁺.

제조예 74

6- 플루오로 -4- 요오도 -N-(2-( 테트라히드로 -2H-피란-2- 일옥시 )에틸)피리딘-3-아민

밀폐 반응기에서 TFA 염으로서의 6-플루오로-4-요오도피리딘-3-아민 (0.36 g, 1.50 mmol), 2-[(2-브로모에틸)옥시]테트라히드로-2H-피란 (1.38 g, 6.60 mmol), 수산화칼륨 (0.19 g, 3.30 mmol), 불화칼륨 (0.19 g, 3.30 mmol) 및 요오드화테트라부틸암모늄 (0.11 g, 0.3 mmol)을 1,4-디옥산 (1.5 mL) 중에서 혼합하였다. 상기 반응 혼합물을 100℃에서 밤새 가열하였다. 상기 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켰다. 물로 켄칭시켰다. 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기 층을 물 및 포화 수성 염화나트륨으로 세척하였다. MgSO₄에서 건조시켰다. 여과한 후에 농축시키고 FCC (CH₂Cl₂ 중 0.1％→1％ 2 M NH₃ 메탄올 용액)로 정제하여 100％ HPLC 순도의 표제 화합물 (0.36 g, 66％)을 수득하였다. MS (ES) m/z 367 [M+1]⁺.

제조예 75

2-(6- 플루오로 -4- 요오도피리딘 -3- 일아미노 )에탄올

6-플루오로-4-요오도-N-(2-(테트라히드로-2H-피란-2-일옥시)에틸)피리딘-3-아민 (0.20 g, 0.55 mmol)을 에탄올 (5.5 mL) 중에 용해하였다. 피리디늄 p-톨루엔술포네이트 (0.014 g, 0.055 mmol)를 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 50℃에서 밤새 가열하였다. 용매를 감압하에 제거하였다. FCC (CH₂Cl₂ 중 0.1％→1％ 2 M NH₃ 메탄올 용액)로 정제하여 100％ HPLC 순도의 표제 화합물 (44 mg, 28％)을 수득하였다. MS (ES) m/z 283 [M+1]⁺.

제조예 76

6- 플루오로 -4- 요오도 -N-(2- 메톡시에틸 )피리딘-3-아민

밀폐 반응기에서 TFA 염으로서의 6-플루오로-4-요오도피리딘-3-아민 (0.36 g, 1.50 mmol), 2-클로로에틸 메틸 에테르 (0.31 g, 3.30 mmol), 수산화칼륨 (0.19 g, 3.30 mmol), 불화칼륨 (0.19 g, 3.30 mmol) 및 요오드화테트라부틸암모늄 (0.11 g, 0.30 mmol)을 1,4-디옥산 (1.5 mL) 중에서 혼합하였다. 상기 반응 혼합물을 100℃에서 밤새 가열하였다. 상기 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켰다. 물로 켄칭시켰다. 에틸 아세테이트로 추출하고, 유기 층을 물 및 포화 수성 염화나트륨으로 세척하였다. MgSO₄에서 건조시켰다. 여과한 후에 반응 용매를 감압하에 제거하였다. FCC (CH₂Cl₂ 중 0.1％→1％ 2 M NH₃ 메탄올 용액)로 정제하여 80％ HPLC 순도의 표제 화합물 (0.09 g, 20％)을 수득하였다. MS (ES) m/z 279 [M+1]⁺.

제조예 77

하기하는 중간체를 [2-(6-플루오로-4-요오도-피리딘-3-일옥시)-에틸]-메틸-카르밤산 tert-부틸 에스테르에 대한 것과 유사한 절차로 제조하였다:

제조예	화합물 명칭	MS (ES) m/z [M+1]⁺	코멘트
78	tert-부틸 1-(6-플루오로-4-요오도피리딘-3- 일)에틸(메틸)카르바메이트	381	요오도메탄을 사용함
79	에틸-[1-(6-플루오로-4-요오도-피리딘-3-일)- 에틸]-카르밤산 tert-부틸 에스테르	395	요오도메탄을 사용함

제조예 80

(S)- tert -부틸 1-(6- 플루오로 -4- 요오도피리딘 -3-일)에틸( 메틸 ) 카르바메이트

tert-부틸 1-(6-플루오로-4-요오도피리딘-3-일)에틸(메틸)카르바메이트 (3.11 g, 8.48 mmol)를 키랄 HPLC (4.6×150 mm 키랄팍(Chiralpak)^® AD-H, 5:95 3A/C7, 0.6 mL/분, 270 nm)로 분리하여 (R)-tert-부틸 1-(6-플루오로-4-요오도피리딘-3-일)에틸(메틸)카르바메이트 (1.09 g, 35％, >99％ ee)로서의 제1 분획물 및 (S)-부틸 1-(6-플루오로-4-요오도피리딘-3-일)에틸(메틸)카르바메이트 (1.13 g, 36％, >99％ ee)로서의 제2 분획물을 수득하였다. MS (ES) m/z 383 [M+1]⁺. 2종 모두의 거울상이성질체의 절대 배위를 진동 원편광 이색성 (Vibration Circular Dichroic, VCD) 분광법 연구로 정하였다.

하기하는 중간체를 (S)-tert-부틸 1-(6-플루오로-4-요오도피리딘-3-일)에틸(메틸)카르바메이트에 대한 것과 유사한 절차로 분리하였다:

제조예	화합물 명칭	MS (ES) m/z [M+1]⁺
81	(R)-tert-부틸 1-(6-클로로-4-요오도피리딘-3-일)에틸카르바메이트	383
82	(R)-5-(1-아지도에틸)-2-플루오로-4-요오도피리딘	293

제조예 83

4- 벤조[b]티오펜 -7-일-2- 클로로 -피리딘

플라스크에서 7-브로모-벤조[b]티오펜 (1.7 g, 12 mmol), 2-클로로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]디옥사보롤란-2-일)-피리딘 (1.6 g, 7 mmol), Pd(dppf)Cl₂ (285 mg, 0.3 mmol), 2-(디-tert-부틸포스피노)바이페닐 (63 mg, 0.2 mmol), 탄산나트륨 (2 M, 8 mL, 16 mmol) 및 THF (20 mL)를 합하였다. 상기 혼합물을 100℃에서 3시간 동안 가열하였다. 상기 혼합물을 클로로포름/IPA (3/1)로 희석하였다. 상기 용액을 수성 포화 염화나트륨으로 세척하였다. 황산나트륨에서 건조시켰다. 상기 용액을 진공하에 어두운 색의 잔류물로 농축시켰다. 컬럼 크로마토그래피 (DCM→DCM 중 20％ THF)로 정제하여 표제 화합물 (1.14 g, 66％)을 황색 고체로서 수득하였다. MS (ES) m/z 246 [M+1]⁺.

제조예 84

4- 벤조[b]티오펜 -7-일-2- 플루오로 -5- 메틸 -피리딘

플라스크에서 2-플루오로-4-요오도-5-메틸-피리딘 (355 mg, 1.5 mmol), 2-벤조[b]티오펜-7-일-4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]디옥사보롤란 (282 mg, 1.8 mmol), Pd(dppf)Cl₂ (61 mg, 0.07 mmol), 2-(디-tert-부틸포스피노)바이페닐 (13 mg, 0.04 mmol), 탄산나트륨 (2 M, 1.5 mL, 3 mmol) 및 THF (10 mL)를 합하였다. 상기 혼합물을 100℃에서 3시간 동안 오일조에서 가열하였다. 상기 혼합물을 클로로포름/IPA (3/1)로 희석하였다. 상기 용액을 수성 포화 염화나트륨으로 세척하였다. 황산나트륨에서 건조시켰다. 진공하에 어두운 색의 잔류물로 농축시켰다. 컬럼 크로마토그래피 (헥산 중 20％ 에틸 아세테이트)로 정제하여 표제 화합물 (300 mg, 82％)을 황색 오일로서 수득하였다. MS (ES) m/z 244 [M+1]⁺.

하기하는 중간체를 4-벤조[b]티오펜-7-일-2-플루오로-5-메틸-피리딘에 대한 것과 유사한 절차로 제조하였다:

제조예	화합물 명칭	MS (ES) m/z [M+1]⁺	코멘트
85	4-(벤조[b]티오펜-7-일)니코틴알데히드	240
86	2-(4-(벤조[b]티오펜-7-일)-6- 플루오로피리딘-3-일)-2-메틸프로판니트릴	297
87	4-벤조[b]티오펜-7-일-5-시클로프로필- 2-플루오로-피리딘	270	디옥산, 오일 조
88	4-(4-벤조[b]티오펜-7-일-6-플루오로- 피리딘-3-일메틸)-모르폴린	329
89	(4-벤조[b]티오펜-7-일-6-플루오로- 피리딘-3-일메틸)-디메틸-아민	287
90	N-(4-벤조[b]티오펜-7-일-6-플루오로- 피리딘-3-일메틸)-메틸-카르밤산 tert-부틸 에스테르	372
91	N-(4-벤조[b]티오펜-7-일-피리딘-3- 일)-2,2-디메틸-프로피온아미드	311
92	4-벤조[b]티오펜-7-일-2-클로로-5-메톡시메톡시-피리딘	306
93	4-벤조[b]티오펜-7-일-2-클로로-5-에톡시-피리딘	290
94	4-벤조[b]티오펜-7-일-피리딘	212	100℃에서 가열함

제조예 95

1-(4-( 벤조[b]티오펜 -7-일)-피리딘-3-일)에탄올

250-mL 둥근 바닥 플라스크에서 THF (50 mL) 중 4-벤조[b]티오펜-7-일-피리딘-3-카르브알데히드 (1.5 g, 6.27 mmol)의 용액을 0℃로 냉각하고, 메틸마그네슘 브로마이드 (2.38 g, 6.90 mmol, 2.30 mL)를 상기 용액에 점진적으로 첨가하였다. 상기 혼합물을 0℃에서 실온이 될 때까지 2시간 동안 교반하였다. 1 N HCl (200 mL)과 혼합하여 상기 혼합물을 가수분해하였다. 수산화암모늄을 사용하여 pH를 11로 조정하였다. 클로로포름/IPA (3/1, 200 mL)로 추출하였다. 유기 상을 물 및 포화 수성 염화나트륨으로 세척하였다. 황산나트륨에서 건조시키고, 진공하에 농축시켰다. FCC (헥산→헥산 중 10％ 에틸 아세테이트, 이후 DCM 중 20％ THF)로 정제하여 표제 화합물을 황색 오일로서 수득하였다 (1.00 g, 62％). MS (ES) m/z 256 [M+1]⁺.

제조예 96

3-(1- 아지도에틸 )-4-( 벤조[b]티오펜 -7-일)-피리딘

상기 5-(1-아지도-에틸)-2-플루오로-피리딘에 대해 사용한 것과 유사한 절차를 이용하여, 1-(4-(벤조[b]티오펜-7-일)피리딘-3-일)에탄올로부터 표제 중간체를 갈색 오일로서 제조하였다 (0.66 g, 93％). MS (ES) m/z 280 [M+1]⁺.

제조예 97

2-(4-( 벤조[b]티오펜 -7-일)-6- 플루오로피리딘 -3-일)-2- 메틸프로판 -1-아민

나트륨 테트라히드로보레이트 (296 mg, 7.83 mmol) 및 사염화지르코늄 (684 mg, 2.9 mmol)을 THF (1 mL) 중에 용해하여 우유빛 용액을 형성하였다. THF (20 mL) 중 2-(4-벤조[b]티오펜-7-일-6-플루오로-피리딘-3-일)-2-메틸-프로피오니트릴 (580 mg, 1.96 mmol)의 용액을 N₂하에 실온에서 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 상기 혼합물을 빙수 용액에 부어 상기 반응물을 켄칭시켰다. 상기 혼합물을 클로로포름/IPA (3/1)로 추출하였다. 묽은 수산화암모늄을 첨가하여 수성 상을 염기성화하고 여과하였다. 여액을 클로로포름으로 추출하고, 합한 유기 상을 건조시키고 농축시켜 옅은 황색 고체를 수득하였다 (500 mg, 84％). MS (ES) m/z 301 [M+1]⁺.

제조예 98

1-(4-( 벤조[b]티오펜 -7-일)피리딘-3-일) 에탄아민

빙조 중 50-mL 둥근 바닥 플라스크에서 라니(Raney) 니켈 (1.38 g, 23.5 mmol)을 에탄올 (10 mL) 중 3-(1-아지도-에틸)-4-벤조[b]티오펜-7-일-피리딘 (0.66 g, 2.35 mmol), 포름산 (1.08 g, 23.54 mmol) 및 히드라진 (754.4 mg, 23.54 mmol)의 용액에 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 상기 라니 니켈을 여과하였다. 여액을 수산화암모늄으로 희석하였다. 생성물을 클로로포름으로 추출하였다. 유기 상을 물로 세척하여 황산나트륨에서 건조시키고 농축시켜 표제 화합물을 갈색 오일로서 수득하였다 (0.6 g, 100％). MS (ES) m/z 255 [M+1]⁺.

하기하는 중간체를 1-(4-(벤조[b]티오펜-7-일)피리딘-3-일)에탄아민에 대해 기재한 것과 유사한 절차로 제조하였다:

제조예	화합물 명칭	MS (ES) m/z [M+1]⁺
99	1-(6-플루오로-4-요오도피리딘-3-일)에탄아민	267
100	(R)-1-(4-(벤조[b]티오펜-7-일)-6-플루오로피리딘-3- 일)에탄아민	273

제조예 101

tert -부틸 1-(4-( 벤조[b]티오펜 -7-일)피리딘-3-일) 에틸카르바메이트

트리에틸아민 (477.4 mg, 4.72 mmol)을 1,4-디옥산 (10 mL) 및 물 (5 mL) 중 1-(4-벤조[b]티오펜-7-일-피리딘-3-일)-에틸아민 (0.6 g, 2.36 mmol) 및 디-tert-부틸디카르보네이트 (1.03 g, 4.72 mmol)의 용액에 첨가하였다. 상기 혼합물을 실 온에서 1시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 클로로포름 (100 mL)으로 희석하여 포화 수성 염화나트륨으로 세척하고, 황산나트륨에서 건조시키고 농축시켰다. 잔류물을 FCC (헥산 중 20％ 에틸 아세테이트→DCM 중 10％ 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 황색 고체로서 수득하였다 (0.84 g, 67％). MS (ES) m/z 355 [M+1]⁺.

하기하는 중간체를 tert-부틸 1-(4-(벤조[b]티오펜-7-일)피리딘-3-일)에틸카르바메이트에 대해 기재한 것과 유사한 절차로 제조하였다:

제조예	화합물 명칭	MS (ES) m/z [M+1]⁺
102	tert-부틸 1-(6-플루오로-4-요오도피리딘-3-일)에틸카르바메이트	367
103	tert-부틸 2-(4-(벤조[b]티오펜-7-일)-6-플루오로피리딘-3- 일)-2-메틸프로필카르바메이트	401
104	(R)-tert-부틸 1-(4-(벤조[b]티오펜-7-일)-6- 플루오로피리딘-3-일)에틸카르바메이트	373

제조예 105

tert -부틸 1-(6- 플루오로 -4- 요오도피리딘 -3-일)에틸(2- 플루오로에틸 ) 카르바메이트

수소화나트륨 (58.9 mg, 2.46 mmol)을 [1-(6-플루오로-4-요오도-피리딘-3-일)-에틸]-카르밤산 tert-부틸 에스테르 (300 mg, 819 μmol)의 용액에 0℃에서 첨가하였다. 상기 혼합물을 0℃ 내지 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 1-플루오로-2-요오도-에탄 (570 mg, 3.28 mmol)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반한 후에 50℃에서 밤새 교반하였다. 상기 혼합물을 클로로포름/IPA (3/1, 100 mL)로 희석하고, 물/수성 포화 염화나트륨으로 세척하였다. 유기 상을 황산나트륨에서 건조시키고, 진공하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 FCC (헥산 중 20％ 에틸 아세테이트)로 정제하여 표제 화합물 140 mg을 수득하였다 (41％). MS (ES) m/z 413 [M+1]⁺.

제조예 106

4- 벤조[b]티오펜 -7-일-3- 메톡시메톡시 -피리딘

용액 A: 디에틸 에테르 (90 mL) 중 3-메톡시메톡시-피리딘 (2.5 g, 18 mmol)의 용액을 -70℃에서 tert-부틸 리튬 (펜탄 중 1.7 M, 10 mL, 18 mmol)으로 10분에 걸쳐 적가 처리하였다. 상기 혼합물을 -70℃에서 40분 동안 교반하고, THF (10 mL) 중 트리이소프로필 보레이트 (5 mL, 22 mmol)의 용액을 5분에 걸쳐 적가하였다. 상기 혼합물을 -70℃에서 1시간 동안 교반한 후에 빙조를 치우고, 상기 혼합물이 서서히 실온으로 가온되도록 하였다.

용액 B: 1,4-디옥산 (30 mL) 중 7-브로모-벤조[b]티오펜 (3.8 g, 18 mmol), 2-(디-tert-부틸포스피노)바이페닐 (268 mg, 0.90 mmol), Pd(dppf)Cl₂ (732 mg, 0.90 mmol)의 용액을 2 M 수성 탄산나트륨 (72 mL, 36 mmol)으로 처리하였다. 용액 A가 일단 실온에 도달하면 상기 용액을 80℃로 가열하였다.

용액 B를 용액 A로 10분에 걸쳐 적가 처리하였다. 합한 용액을 85℃로 5시간 동안 가열하였다. 상기 혼합물을 실온으로 냉각시켜 에틸 아세테이트 및 물로 희석하였다. 유기 상을 물 및 수성 포화 염화나트륨으로 세척하여 황산나트륨에서 건조시켜 여과하고 진공하에 농축시켰다. 잔류물을 DCM→에틸 아세테이트의 구배 로 용출시키는 실리카겔 120 g에서의 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 출발 3-메톡시메톡시-피리딘을 일부 함유하는 표제 화합물을 수득하였다 (3.8 g).

제조예 107

2- 클로로 -4-[7-(2- 클로로 -피리딘-4-일)- 벤조[b]티오펜 -2-일]-피리미딘

500 mL 둥근 바닥 플라스크에서 THF (150 mL) 중 4-벤조[b]티오펜-7-일-2-클로로-피리딘 (13 g, 53.1 mmol) 및 트리이소프로필보레이트 (20 g, 106 mmol)의 용액을 질소하에 -70℃로 냉각시켰다. 상기 냉각된 용액에 리튬 디이소프로필아미드 (THF 중 2 M, 53 mL, 106 mmol)를 30분의 기간에 걸쳐 점진적으로 첨가하였다. 상기 혼합물을 냉각조에서 1시간 더 계속 교반하였다. 상기 혼합물을 THF (150 mL) 중 2,4-디클로로-피리미딘 (12 g, 106 mmol), Pd(dppf)Cl₂ (2.2 g, 53 mmol) 및 탄산나트륨 (35 mL, 3 M, 106 mmol)의 환류 중인 용액으로 30분의 기간에 걸쳐 점진적으로 옮겼다. 1시간 더 환류시켰다. 상기 혼합물을 실온으로 냉각시켜 클로로포름/IPA (3/1) 500 mL 및 물 200 mL로 희석하였다. 생성된 고체를 여과로 수집하여 클로로포름/IPA/물 혼합물을 보관하였다. 상기 고체를 DCM으로 세척하고, 이것을 진공하에 건조시켰다. 클로로포름/IPA/물 혼합물의 층들을 분리하였다. 유기 상을 물 및 수성 포화 염화나트륨으로 세척하여 황산나트륨에서 건조시키고, 진공하에 농축시켜 갈색 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 FCC (DCM 중 10％ 메탄올)로 정제하여 추가의 생성물을 수득하였다. 2개 부분들을 합하여 표제 화합물을 수득 하였다 (13 g, 68％). MS (ES) m/z 358 [M+1]⁺.

하기하는 중간체를 본질적으로 2-클로로-4-[7-(2-클로로-피리딘-4-일)-벤조[b]티오펜-2-일]-피리미딘의 제조법에 따라 적절한 출발 물질을 사용하여 제조하였다:

제조예	화합물 명칭	MS (ES) m/z [M+1]⁺	코멘트
108	2-클로로-5-플루오로-4-[7-(2-플루오로-5-메틸- 피리딘-4-일)-벤조[b]티오펜-2-일]-피리미딘	374
109	2-클로로-4-[7-(2-플루오로-5-메틸-피리딘- 4-일)-벤조[b]티오펜-2-일]-피리미딘	356	3 mol％의 2-(디-tert-부틸 포스피노)바이페닐을 사용함
110	2-클로로-4-[7-(5-시클로프로필-2-플루오로- 피리딘-4-일)-벤조[b]티오펜-2-일]-5-플루오로- 피리미딘	400
111	4-{4-[2-(2-클로로-5-플루오로-피리미딘-4-일)- 벤조[b]티오펜-7-일]-6-플루오로-피리딘-3-일메틸}-모르폴린	459
112	{4-[2-(2-클로로-5-플루오로-피리미딘-4-일)- 벤조[b]티오펜-7-일]-6-플루오로-피리딘-3-일메틸}-디메틸-아민	417
113	{4-[2-(2-클로로-5-플루오로-피리미딘-4-일)- 벤조[b]티오펜-7-일]-6-플루오로-피리딘-3-일메틸}-메틸-카르밤산 tert-부틸 에스테르	502
114	N-{4-[2-(2-클로로-5-플루오로-피리미딘-4-일)- 벤조[b]티오펜-7-일]-피리딘-3-일}-2,2- 디메틸-프로피온아미드	441
115	2-클로로-5-플루오로-4-[7-(3-메톡시메톡시- 피리딘-4-일)-벤조[b]티오펜-2-일]-피리미딘	420
116	2-클로로-4-[7-(2-클로로-5-에톡시-피리딘-4- 일)-벤조[b]티오펜-2-일]-5-플루오로-피리미딘	402
117	2-클로로-4-[7-(2-클로로-5-메톡시메톡시- 피리딘-4-일)-벤조[b]티오펜-2-일]-5- 플루오로-피리미딘	436
118	2-클로로-5-플루오로-4-(7-피리딘-4-일- 벤조[b]티오펜-2-일)-피리미딘	342
119	4-(7-브로모-벤조[b]티오펜-2-일)-2-클로로- 5-플루오로-피리미딘	476

120	4-(7-브로모벤조[b]티오펜-2-일)-2,5- 디클로로피리미딘	359
121	4-(7-브로모벤조[b]티오펜-2-일)-2-클로로- 5-메틸피리미딘	339
122	4-(7-브로모벤조[b]티오펜-2-일)-2- 클로로피리미딘	325
123	tert-부틸 1-(4-(2-(2-클로로-5- 플루오로피리미딘-4-일)벤조[b]티오펜-7- 일)피리딘-3-일)에틸카르바메이트	485
124	tert-부틸 2-(4-(2-(2-클로로-5- 플루오로피리미딘-4-일)벤조[b]티오펜-7- 일)-6-플루오로피리딘-3-일)-2- 메틸프로필카르바메이트	531
125	(R)-tert-부틸 1-(4-(2-(2-클로로-5- 플루오로피리미딘-4-일)벤조[b]티오펜-7-일)- 6-플루오로피리딘-3-일)에틸카르바메이트	503

제조예 126

4-[2-(2- 클로로 -5- 플루오로 -피리미딘-4-일)- 벤조[b]티오펜 -7-일]-피리딘-3-올

THF (10 mL) 중 2-클로로-5-플루오로-4-[7-(3-메톡시메톡시-피리딘-4-일)-벤조[b]티오펜-2-일]-피리미딘 (4 g, 10 mmol)의 용액을 5 N HCl (3 mL)로 처리하였다. 상기 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반하였다. 상기 반응물을 진공하에 농축시키고, 포화 수성 중탄산나트륨 및 DCM으로 희석하였다. 상들을 분리하고, 각 상을 여과하였다. 유기 상으로부터의 고체를 DCM으로 세척하여 표제 화합물 (300 mg)을 황갈색 고체로서 수득하였다. 수성 층으로부터의 고체를 물로 세척하고 건조시켜 표제 화합물 (300 mg)을 황갈색 고체로서 수득하였다. 고체를 합하여 표제 화합물 (600 mg, 17％)을 황갈색 고체로서 수득하였다. MS (ES) m/z 358 [M+1]⁺.

하기하는 중간체를 4-[2-(2-클로로-5-플루오로-피리미딘-4-일)-벤조[b]티오 펜-7-일]-피리딘-3-올에 대한 것과 유사한 절차로 적절한 출발 물질을 사용하여 제조하였다:

제조예	화합물 명칭	MS (ES) m/z [M+1]⁺
127	6-클로로-4-[2-(2-클로로-5-플루오로-피리미딘-4-일)- 벤조[b]티오펜-7-일]-피리딘-3-올	392

제조예 128

2-(2-(5-( 히드록시메틸 )-1H-1,2,3- 트리아졸 -1-일)에틸) 이소인돌린 -1,3- 디온

톨루엔 (50 mL) 중 2-(2-아지도에틸)이소인돌린-1,3-디온 (12 g, 55.5 mmol) 및 2-프로핀-1-올 (3.88 mL, 66.6 mmol)의 혼합물을 90℃의 밀폐된 반응기에서 3일 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시키고 고체를 수집하였다. 컬럼 크로마토그래피 (DCM→DCM 중 2％ 메탄올)로 정제하여 표제 화합물 (제1 분획물)을 백색 고체로서 수득하였다 (4.7 g, 31％). MS (EI) m/z 273 [M+1]⁺.

제조예 129

2-(2-(4-( 요오도메틸 )-1H-1,2,3- 트리아졸 -1-일)에틸) 이소인돌린 -1,3- 디온

DCM (4 mL) 중 트리페닐포스핀 (0.29 g, 1.10 mmol) 및 요오드 (0.28 g, 1.10 mmol)의 혼합물을 10분 동안 교반하였다. 1H-이미다졸 (0.12 g, 1.84 mmol)을 첨가하고, 10분 동안 교반하였다. 2-(2-(4-(히드록시메틸)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)에틸)이소인돌린-1,3-디온 (0.2 g, 0.73 mmol)을 첨가하고, 밤새 실온에서 교반하였다. DCM으로 희석하고 물 및 포화 수성 염화나트륨으로 세척하였다. 황산 나트륨에서 건조시켰다. 상기 용액을 진공하에 농축시켰다. 컬럼 크로마토그래피 (DCM→DCM 중 20％ 에틸 아세테이트)로 정제하여 표제 화합물을 황색 고체로서 수득하였다 (0.22 g, 78％). MS (EI) m/z 383 [M+1]⁺.

제조예 130

2-(2-(4- 메틸 -1H-1,2,3- 트리아졸 -1-일)에틸) 이소인돌린 -1,3- 디온

에탄올 (10 mL) 중 2-(2-(4-(요오도메틸)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)에틸)이소인돌린-1,3-디온 (1 g, 2.62 mmol) 및 10％ 탄소상 팔라듐 0.2 g의 혼합물을 수소 벌룬하에 밤새 교반하였다. 여과하여 고체를 제거하고 농축시켰다. 컬럼 크로마토그래피 (DCM→DCM 중 20％ 에틸 아세테이트)로 정제하여 표제 화합물을 황색 고체로서 수득하였다 (0.5 g, 74％). MS (EI) m/z 257 [M+1]⁺.

제조예 131

2-(2-[1,2,3] 트리아졸 -1-일-에틸)- 이소인돌 -1,3- 디온

1H-1,2,3-트리아졸 (250 g, 3.51 mol), N-(2-브로모에틸)프탈이미드 (942 g, 3.52 mol) 및 DMF 1500 mL를 기계적 교반기, 질소 유입구 및 온도 프로브가 장착된 5-L 둥근 바닥 플라스크에 첨가하였다. 상기 혼합물을 15℃로 냉각시켰다. 상기 혼합물을 모든 고체가 거의 용해될 때까지 교반한 후에 빙수조에서 냉각시켰다. 탄산세슘 (1145 g, 3.51 mol)을 10분에 걸쳐 조금씩 첨가하였다. 상기 반응 혼합물은 21℃로 발열하였다. 상기 혼합물이 교반되도록 하고 밤새 실온이 되도록 하였다. 상기 반응 혼합물을 빙수 8 L를 함유하는 12-L 플라스크에 부었다. 상기 현탁액을 30분 동안 교반한 후에 여과하고 상기 고체를 물 3 L로 헹구었다. 2시간 동안 공기-건조시켰다. 무수 에탄올 7 L로부터 위치이성질체들의 혼합물을 재결정화하였다. 고체를 여과로 단리하고 공기-건조시켰다. 무수 에탄올 16 L로부터 다시 재결정화하였다. 고체를 다시 여과로 단리하고 신선한 에탄올 (1000 mL)로 헹구었다. 상기 고체를 40℃에서 진공-건조시켜서 표제 화합물 292.7 g (34％)을 백색 고체로서 수득하였다. MS (EI) m/z 243 [M+1]⁺.

제조예 132

2-[1,2,3] 트리아졸 -1-일- 에틸아민

무수 에탄올 2 L를 함유하는 5-L 둥근 바닥 플라스크에서 2-(2-[1,2,3]트리아졸-1-일-에틸)-이소인돌-1,3-디온 (106 g, 437.59 mmol)을 용해하였다. 상기 교반된 혼합물을 질소하에 70℃로 가열하고, 이 온도에서 히드라진 일수화물 (23 mL, 463.76 mmol)을 10분에 걸쳐 적가하였다. 상기 혼합물은 균질해졌고 황색 색상이었다. 이 온도에서 약 30분이 지난 후에 상기 반응물에서 고체가 형성되기 시작했고, 색상은 시간 경과에 따라 점차 훨씬 덜 황색이 되었다. 7시간 후에 가열을 중단하고 1시간에 걸쳐 실온으로 냉각시켰다. 규조토에서 여과하고 에탄올 1000 mL로 헹궜다. 반-고체로 증발시켰다. CH₂Cl₂ 2 L 중에 용해하고, 규조토에서 여과하고 다시 증발시켰다. 잔류물을 톨루엔 (1500 mL)으로 희석하고 규조토에서 여과하여 불용성 황갈색 고체를 제거하였다. 증발시키고, 밤새 진공하에 두었다. 상기 오일을 CH₂Cl₂ 100 mL 중에 용해하고, 규조토 패드를 통해 다시 여과하였다. 증발 시켜서 표제 화합물 43.9 g (90％)을 혼탁한 오일로서 수득하였다. MS (ES) m/z 112 [M+1]⁺.

하기하는 중간체를 2-[1,2,3]트리아졸-1-일-에틸아민에 대해 기재한 것과 유사한 절차로 제조하였다:

제조예	화합물 명칭	MS (ES) m/z [M+1]⁺
133	(1-(2-아미노에틸)-1H-1,2,3-트리아졸-5-일)메탄올	143
134	2-(4-메틸-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)에탄아민	127

하기하는 중간체를 {5-플루오로-4-[7-(2-플루오로-5-메틸-피리딘-4-일)-벤조[b]티오펜-2-일]-피리미딘-2-일}-(2-[1,2,3]트리아졸-1-일-에틸)-아민에 대한 것과 유사한 절차로 제조하였다:

제조예	화합물 명칭	MS (ES) m/z [M+1]⁺	코멘트
135	(6-플루오로-4-{2-[5-플루오로-2-(2-[1,2,3]트리아졸-1- 일-에틸아미노)-피리미딘-4-일]-벤조[b]티오펜-7-일}- 피리딘-3-일메틸)-메틸-카르밤산 tert-부틸 에스테르	578
136	[4-(7-브로모-벤조[b]티오펜-2-일)-5-플루오로- 피리미딘-2-일]-(2-[1,2,3]트리아졸-1-일-에틸)-아민	419, 421
137	N-(2-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)에틸)-4-(7- 브로모벤조[b]티오펜-2-일)피리미딘-2-아민	401, 403
138	N-(2-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)에틸)-4-(7- 브로모벤조[b]티오펜-2-일)-5-클로로피리미딘-2-아민	435, 437
139	N-(2-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)에틸)-4-(7- 브로모벤조[b]티오펜-2-일)-5-메틸피리미딘-2-아민	415, 417
140	N-(2-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)에틸)-4-(7-(3-(1- 아미노에틸)피리딘-4-일)벤조[b]티오펜-2-일)-5- 플루오로피리미딘-2-아민	461	Boc (t-부틸- 카르바메이트 보호)기의 계내 TFA 제거
141	(R)-tert-부틸 1-(6-플루오로-4-(2-(5-플루오로-2-(2 -(5-(히드록시메틸)-1H-1,2,3-트리아졸-1- 일)에틸아미노)피리미딘-4-일)벤조[b]티오펜-7-일) 피리딘-3-일)에틸카르바메이트	609	키랄 중간체로부터 제조함
142	(R)-tert-부틸 1-(6-플루오로-4-(2-(5-플루오로-2-(2- (4-메틸-1H-1,2,3-트리아졸-1- 일)에틸아미노)피리미딘-4-일)벤조[b]티오펜-7-일) 피리딘-3-일)에틸카르바메이트	593	키랄 중간체로부터 제조함

제조예 143

{5- 플루오로 -4-[7-(4,4,5,5- 테트라메틸 -[1,3,2] 디옥사보롤란 -2-일)- 벤조[b]티오펜 -2-일]-피리미딘-2-일}-(2-[1,2,3] 트리아졸 -1-일-에틸)-아민

[4-(7-브로모-벤조[b]티오펜-2-일)-5-플루오로-피리미딘-2-일]-(2-[1,2,3]트리아졸-1-일-에틸)-아민 (1.5 g, 3.45 mmol), 비스(피나콜레이토)디보론 (1.05 g, 4.14 mmol), 아세트산칼륨 (1.02 g, 10.36 mmol) 및 Pd(dppf)Cl₂ (280 mg, 0.35 mmol)를 DMSO (30 mL) 중에서 합하였다. 생성된 혼합물을 3회 탈기시키고, 이것을 밤새 80℃로 가열하였다. 상기 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 이것을 물에 부었 다. 여과하여 습윤 고체를 수득하였고, 이것을 클로로포름/IPA (3:1, v/v) 중에 용해하고 포화 수성 염화나트륨으로 세척한 후에 황산나트륨에서 건조시켰다. 상기 용액을 진공하에 농축시켰다. 크로마토그래피 (헥산→에틸 아세테이트)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다 (1.3 g, 81％).

하기하는 중간체를 본질적으로 상기 중간체에 대해 사용된 것과 유사한 절차를 이용하여 제조하였다:

제조예	화합물 명칭	MS (ES) m/z [M+1]⁺
144	N-(2-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)에틸)-5-클로로-4-(7- (4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2- 일)벤조[b]티오펜-2-일)피리미딘-2-아민	483
145	N-(2-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)에틸)-5-메틸-4-(7- (4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2- 일)벤조[b]티오펜-2-일)피리미딘-2-아민	463
146	N-(2-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)에틸)-4-(7-(4,4,5,5- 테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2- 일)벤조[b]티오펜-2-일)피리미딘-2-아민	449

하기하는 중간체를 하기 N-(2-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)에틸)-4-(7-(1H-피롤로[2,3-b]피리딘-4-일)벤조[b]티오펜-2-일)-5-플루오로피리미딘-2-아민에 대한 것과 유사한 절차로 제조하였다:

제조예	화합물 명칭	MS (ES) m/z [M+1]⁺	코멘트
147	(4-{7-[5-(1-아지도-에틸)-2-플루오로-피리딘-4- 일]-벤조[b]티오펜-2-일}-5-플루오로- 피리미딘-2-일)-(2-[1,2,3]트리아졸-1-일-에틸)-아민	505
148	(5-플루오로-4-{7-[2-플루오로-5-(1- 메톡시메톡시-에틸)-피리딘-4-일]- 벤조[b]티오펜-2-일}-피리미딘-2-일)-(2- [1,2,3]트리아졸-1-일-에틸)-아민	524
149	[5-플루오로-4-(7-{2-플루오로-5-[2-(테트라히드로- 피란-2-일옥시)-에톡시]-피리딘-4-일}- 벤조[b]티오펜-2-일)-피리미딘-2-일]-(2 -[1,2,3]트리아졸-1-일-에틸)-아민	580
150	(R)-N-(2-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)에틸)-4-(7- (5-(1-아지도에틸)-2-플루오로피리딘-4- 일)벤조[b]티오펜-2-일)피리미딘-2-아민	487
151	2-[2-(6-플루오로-4-{2-[5-플루오로-2-(2- [1,2,3]트리아졸-1-일-에틸아미노)-피리미딘-4- 일]-벤조[b]티오펜-7-일}-피리딘-3-일옥시)- 에틸]-이소인돌-1,3-디온	625
152	[2-(6-플루오로-4-{2-[5-플루오로-2-(2- [1,2,3]트리아졸-1-일-에틸아미노)-피리미딘-4- 일]-벤조[b]티오펜-7-일}-피리딘-3-일옥시)- 에틸]-메틸-카르밤산 tert-부틸 에스테르	609
153	(R)-2-(1-(4-(2-(2-(2-(1H-1,2,3-트리아졸-1- 일)에틸아미노)-5-플루오로피리미딘-4- 일)벤조[b]티오펜-7-일)-6-플루오로피리딘-3- 일옥시)프로판-2-일)이소인돌린-1,3-디온	639
154	(S)-2-(1-(4-(2-(2-(2-(1H-1,2,3-트리아졸-1- 일)에틸아미노)-5-플루오로피리미딘-4- 일)벤조[b]티오펜-7-일)-6-플루오로피리딘-3- 일옥시)프로판-2-일)이소인돌린-1,3-디온	639

155	tert-부틸 1-(4-(2-(2-(2-(1H-1,2,3-트리아졸-1- 일)에틸아미노)-5-메틸피리미딘-4- 일)벤조[b]티오펜-7-일)-6-클로로피리딘-3- 일)에틸카르바메이트	592
156	tert-부틸 1-(4-(2-(2-(2-(1H-1,2,3-트리아졸-1- 일)에틸아미노)피리미딘-4- 일)벤조[b]티오펜-7-일)-6-클로로피리딘-3- 일)에틸(메틸)카르바메이트	592
157	tert-부틸 1-(4-(2-(2-(2-(1H-1,2,3-트리아졸-1- 일)에틸아미노)-5-플루오로피리미딘-4- 일)벤조[b]티오펜-7-일)-6-플루오로피리딘-3- 일)에틸카르바메이트	579
158	N-(2-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)에틸)-4-(7-(2- 클로로-5-(2-(테트라히드로-2H-피란-2- 일옥시)에톡시)피리딘-4-일)벤조[b]티오펜- 2-일)-5-플루오로피리미딘-2-아민	596	실시예 17과 유사한 조건
159	tert-부틸 4-(1-(4-(2-(2-(2-(1H-1,2,3-트리아졸- 1-일)에틸아미노)-5-플루오로피리미딘-4- 일)벤조[b]티오펜-7-일)-6-클로로피리딘-3- 일)에틸)피페라진-1-카르복실레이트	664	실시예 17과 유사한 조건
160	tert-부틸 1-(4-(2-(2-(2-(1H-1,2,3-트리아졸-1- 일)에틸아미노)-5-플루오로피리미딘-4- 일)벤조[b]티오펜-7-일)-6-메틸피리딘-3- 일)에틸카르바메이트	575	실시예 17과 유사한 조건

실시예 1

N-(2-(1H-1,2,3- 트리아졸 -1-일)에틸)-5- 플루오로 -4-(7-(2- 플루오로 -5- 메틸피리딘 -4-일) 벤조 [b]티오펜-2-일)피리미딘-2-아민

압력 용기에서 2-클로로-5-플루오로-4-[7-(2-플루오로-5-메틸-피리딘-4-일)-벤조[b]티오펜-2-일]-피리미딘 (200 mg, 0.54 mmol) 및 2-[1,2,3]트리아졸-1-일-에틸아민 (120 mg, 21.1 mmol)을 n-부탄올 (2 mL) (별법으로는, 용매로서 디옥산, 디 옥산-NMP (N-메틸피롤리디논), NMP 단독을 사용함] 중에서 합하였다. 상기 혼합물을 120℃ 내지 150℃의 오일조에서 밤새 (또는 극초단파 반응기에서 10분 내지 60분) 가열하였다. 상기 혼합물을 클로로포름/IPA (3/1)로 희석하였다. 상기 용액을 포화 수성 염화나트륨으로 세척하여 황산나트륨에서 건조시키고, 상기 용액을 진공하에 어두운 색의 잔류물로 농축시켰다. 컬럼 크로마토그래피 (DCM→DCM 중 10％ 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 황색 고체로서 수득하였다 (140 mg, 59％). MS (ES) m/z 450 [M+1]⁺.

하기하는 실시예 화합물을 상기 실시예에 대한 것과 유사한 절차로 제조하였다:

실시예 13

N-(2-(1H-1,2,3- 트리아졸 -1-일)에틸)-5- 플루오로 -4-(7-(2- 플루오로 -5-(( 메틸아미노 ) 메틸 )피리딘-4-일) 벤조 [b]티오펜-2-일)피리미딘-2-아민

(6-플루오로-4-{2-[5-플루오로-2-(2-[1,2,3]트리아졸-1-일-에틸아미노)-피리미딘-4-일]-벤조[b]티오펜-7-일}-피리딘-3-일메틸)-메틸-카르밤산 tert-부틸 에스테르 (0.30 g, 0.51 mmol) 및 무수 TFA (2.0 mL) 및 무수 DCM (2.2 mL)을 합하였다. 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 용매를 증발시켰다. 생성된 잔류물을 DCM으로 희석하고, 포화 중탄산나트륨 용액, 물 및 포화 수성 염화나트륨으로 세척하였다. 유기 층을 분리하고, 황산마그네슘에서 건조시켰다. 여과하고 진공하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 컬럼 크로마토그래피 [메탄올/DCM 중 0.1％→2％ 2 M 암모니아]로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다 (0.20 g, 83％). MS (ES) m/z 479 [M+1]⁺.

실시예 14

N-(2-(1H-1,2,3- 트리아졸 -1-일)에틸)-5- 플루오로 -4-(7-(5- 플루오로 -1H- 피롤로[2,3-b]피리딘 -4-일) 벤조 [b]티오펜-2-일)피리미딘-2-아민

{5-플루오로-4-[7-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]디옥사보롤란-2-일)-벤조[b] 티오펜-2-일]-피리미딘-2-일}-(2-[1,2,3]트리아졸-1-일-에틸)-아민 (0.105 g, 0.23 mmol), 3-플루오로-4-브로모-1H-피롤로[2,3-b]피리딘 (51 mg, 0.30 mmol), 수산화바륨 팔수화물 (0.21 g, 0.68 mmol, 별법으로는 탄산나트륨, 탄산칼륨, 중탄산나트륨), Pd(dppf)Cl₂ (20 mg, 0.025 mmol)를 DMF (별법으로 디옥산, THF, DMSO 및 CH₃CN) 및 물의 혼합 용매 (4/1, v/v) 2 mL 중에서 합하였다. 상기 반응 혼합물을 2.5시간 (또는 극초단파 가열시에는 10분 내지 60분)동안 80℃로 가열하였다. 실온으로 냉각시켰다. 이것을 클로로포름/IPA (3:1, v/v) 50 mL로 희석하였다. 이것을 물 및 포화 수성 염화나트륨으로 세척하고 황산마그네슘에서 건조시켰다. 유기 용매를 제거하여 조 생성물을 수득하였다. 컬럼 크로마토그래피 (헥산→에틸 아세테이트)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다 (0.05 g, 47％). MS (ES) m/z 475 [M+1]⁺.

실시예 15

N-(2-(1H-1,2,3- 트리아졸 -1-일)에틸)-4-(7-(1H- 피롤로[2,3-b]피리딘 -4-일) 벤조 [ b]티오펜 -2-일)-5- 플루오로피리미딘 -2-아민

N-(2-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)에틸)-5-플루오로-4-(7-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)벤조[b]티오펜-2-일)피리미딘-2-아민 (0.28 g, 0.6 mmol), 4-브로모-1H-피롤로[2,3-b]피리딘 (100 mg, 0.51 mmol), 수산화바륨 팔수화물 (0.48 g, 1.52 mmol), Pd(dppf)Cl₂ (40 mg, 0.05 mmol)를 DMF 및 물의 혼합 용매 (4/1, v/v) 4 mL 중에서 합하였다. 상기 반응 혼합물을 45분 동안 80℃로 가열하였다. 이것을 실온으로 냉각시켰다. 클로로포름/IPA (3:1, v/v) 50 mL로 희석하였다. 물 및 포화 수성 염화나트륨으로 세척하고 황산마그네슘에서 건조시켰다. 유기 용매를 제거하여 조 생성물을 수득하였다. 컬럼 크로마토그래피 (헥산→에틸 아세테이트)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다 (0.17 g, 75％). MS (ES) m/z 457 [M+1]⁺.

실시예 36

N-(2-(1H-1,2,3- 트리아졸 -1-일)에틸)-4-(7-(2- 클로로 -5-(1-( 메틸아미노 )에틸)피리딘-4-일) 벤조 [b]티오펜-2-일)피리미딘-2-아민

tert-부틸 1-(4-(2-(2-(2-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)에틸아미노)피리미딘-4-일)벤조[b]티오펜-7-일)-6-클로로피리딘-3-일)에틸(메틸)카르바메이트 (300 mg, 0.5 mmol) 및 무수 TFA (2.0 mL)를 무수 DCM (6 mL) 중에서 합하였다. 상기 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 생성된 잔류물을 DCM으로 희석하여 포화 중탄산나트륨 용액, 물 및 포화 수성 염화나트륨으로 세척하였다. 유기 층을 분리하고, 황산마그네슘에서 건조시켰다. 여과하고 진공하에 농축시켜 잔류물을 수득하 였다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피 [메탄올/DCM 중 0.1％→2％ 2 M 암모니아]로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다 (175 mg, 70％). MS (ES) m/z 491 [M+1]⁺.

하기하는 실시예 화합물을 N-(2-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)에틸)-4-(7-(2-클로로-5-(1-(메틸아미노)에틸)피리딘-4-일)벤조[b]티오펜-2-일)피리미딘-2-아민에 대해 기재한 것과 유사한 절차로 제조하였다:

실시예 40

1-(4-(2-(2-(2-(1H-1,2,3- 트리아졸 -1-일) 에틸아미노 )-5- 플루오로피리미딘 -4-일) 벤조 [b]티오펜-7-일)-6- 플루오로피리딘 -3-일)에탄올

메탄올 (10 mL) 중 5-플루오로-4-{7-[2-플루오로-5-(1-메톡시메톡시-에틸)-피리딘-4-일]-벤조[b]티오펜-2-일}-피리미딘-2-일)-(2-[1,2,3]트리아졸-1-일-에틸 (350 mg, 0.67 mmol)의 용액에 1 N HCl 5 mL를 첨가하였다. 상기 혼합물을 밤새 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 탄산나트륨 (2 N)으로 희석하였다. 생성물을 클로로포름으로 추출하였다. 유기 상을 황산나트륨에서 건조시켰다. 상기 용액을 진공하에 농축시켜 조 물질을 수득하였다. 조 물질을 컬럼 크로마토그래피 (DCM 중 10％ 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 황색 고체로서 수득하였다 (150 mg, 47％). MS (ES) m/z 480 [M+1]⁺, 502 [M+Na]⁺.

실시예 41

N-(2-(1H-1,2,3- 트리아졸 -1-일)에틸)-4-(7-(5-(1- 아미노에틸 )-2- 플루오로피리딘 -4-일) 벤조 [b]티오펜-2-일)-5- 플루오로피리미딘 -2-아민

텔루르 (1.27 g, 10 mmol) 및 나트륨 테트라히드로보레이트 (0.9 g, 2.4 mmol)를 에탄올 (20 mL) 중에서 질소하에 합하였다. 상기 혼합물을 이것이 투명한 적색 용액이 될 때까지 환류시까지 가열하였다. 상기 용액 5 mL를 에탄올 (10 mL) 중 (4-{7-[5-(1-아지도-에틸)-2-플루오로-피리딘-4-일]-벤조[b]티오펜-2-일}-5-플루오로-피리미딘-2-일)-(2-[1,2,3]트리아졸-1-일-에틸)-아민 (400 mg, 0.8 mmol)의 용액에 첨가하였다. 상기 혼합물을 20분 동안 실온에서 교반하였다. 흑색 고체를 여과해 냈다. 상기 고체를 메탄올 및 DCM으로 세척하였다. 합한 모액을 증발시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 FCC (클로로포름/메탄올/수산화암모늄, 7/3/0.05)로 정제하여 표제 화합물을 황색 고체로서 수득하였다 (200 mg, 52％). MS (ES) m/z 479 [M+1]⁺.

실시예 42

2-(4-(2-(2-(2-(1H-1,2,3- 트리아졸 -1-일) 에틸아미노 )-5- 플루오로피리미딘 -4-일) 벤조 [b]티오펜-7-일)-6- 플루오로피리딘 -3- 일옥시 )에탄올

피리디늄 p-톨루엔술포네이트 (8.23 mg, 0.03 mmol)를 에탄올 (4 mL) 중 [5-플루오로-4-(7-{2-플루오로-5-[2-(테트라히드로-피란-2-일옥시)-에톡시]-피리딘-4-일}-벤조[b]티오펜-2-일)-피리미딘-2-일]-(2-[1,2,3]트리아졸-1-일-에틸)-아민 (190 mg, 0.32 mmol)의 용액에 첨가하였다. 상기 혼합물을 55℃에서 밤새 교반하였다. 상기 용액을 냉각시켰다. 상기 용액을 진공하에 황색 오일로 농축시켰다. 컬럼 크로마토그래피 (염화메틸렌→염화메틸렌 중 10％ 메탄올)로 정제하여 표제 화합물 (0.14 g, 88％)을 밝은 황색 고체로서 수득하였다. MS (ES) m/z 496 [M+1]⁺.

하기하는 실시예 화합물을 (5-플루오로-4-{7-[2-플루오로-5-(1-메톡시메톡시-에틸)-피리딘-4-일]-벤조[b]티오펜-2-일}-피리미딘-2-일)-(2-[1,2,3]트리아졸-1-일-에틸)-아민으로부터 상기 실시예 화합물에 대해 기재한 것과 유사한 절차로 제조하였다:

실시예 44

N-(2-(1H-1,2,3- 트리아졸 -1-일)에틸)-4-(7-(3-( 아미노메틸 )피리딘-4-일) 벤조 [ b]티오펜 -2-일)-5- 플루오로피리미딘 -2-아민

3-(Boc-아미노메틸)-피리딘-4-보론산 (100 mg, 0.4 mmol), [4-(7-브로모-벤조[b]티오펜-2-일)-5-플루오로-피리미딘-2-일]-(2-[1,2,3]트리아졸-1-일-에틸)-아민 (100 mg, 0.24 mmol), Pd(dppf)Cl₂ (9 mg, 0.01 mmol), 2-디-tert-부틸포스피노)바이페닐 (3 mg, 0.01 mmol) 및 탄산나트륨 (2 M, 0.3 mL, 0.6 mmol)을 디옥산 10 mL 중에서 합하였다. 상기 혼합물을 100℃에서 31시간 동안 오일조에서 가열하였 다. 상기 혼합물을 클로로포름/IPA (3/1)로 희석하였다. 상기 용액을 포화 수성 염화나트륨으로 세척하였다. 황산나트륨에서 건조시켰다. 상기 용액을 진공하에 어두운 색의 잔류물로 농축시켰다. 컬럼 크로마토그래피 (헥산 중 20％ 에틸 아세테이트)로 정제하여 Boc 보호된 생성물을 황색 고체로서 수득하였다. TFA (DCM 중 30％) 중에 용해하고, 이것을 30분 동안 교반하였다. TFA를 증발해 냈다. 상기 TFA 염을 메탄올 중의 암모니아 (7 N) 5 mL 중에 용해하였다. 최종 생성물을 FCC (DCM→클로로포름/메탄올/30％ 수산화암모늄, 7/3/0.05)로 정제하여 표제 화합물을 황색 고체로서 수득하였다 (40 mg, 39％). MS (ES) m/z 467 [M+1]⁺.

실시예 51

(S)-N-(2-(1H-1,2,3- 트리아졸 -1-일)에틸)-4-(7-(2- 플루오로 -5-(1-( 메틸아미노 )에틸)피리딘-4-일) 벤조 [b]티오펜-2-일)피리미딘-2-아민

{5-플루오로-4-[7-(4,4,5,5-테트라메틸-[1,3,2]디옥사보롤란-2-일)-벤조[b]티오펜-2-일]-피리미딘-2-일}-(2-[1,2,3]트리아졸-1-일-에틸)-아민 (0.32 g, 0.71 mmol) 및 (S)-tert-부틸 1-(6-플루오로-4-요오도피리딘-3-일)에틸(메틸)카르바메이트 (0.25 g, 0.65 mmol)를 아세토니트릴 (3 mL) 및 물 (1.5 mL) 중에서 합하였다. 10분 동안의 질소 버블링으로 퍼징(purging)하고, Pd(dppf)Cl₂ (0.039 g, 0.047 mmol)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 극초단파 반응기에서 10분 동안 120℃에서 가 열하여 실온으로 냉각시키고, 질소 스트림하에 용매를 제거하였다. 잔류물로 구배 1％ THF/에틸아세테이트→10％ THF/에틸아세테이트를 사용한 후에 또다른 구배 1％ (DCM 중 0.5 M 암모니아를 함유하는 10％ 메탄올)/DCM→20％ (DCM 중 0.5 M 암모니아를 함유하는 10％ 메탄올)/DCM을 사용하는 실리카겔에서의 크로마토그래피를 실시하여 Boc 보호된 중간체 (0.14 g, 37％)를 수득하였다. 상기 Boc 보호된 중간체를 DCM (2 mL) 중에서 TFA (2 mL)로 실온에서 2시간 동안 처리하였다. TFA를 진공하에 증발시키고 잔류물을 DCM과 수성 포화 중탄산나트륨 사이에 분배하였다. 유기 상을 물 및 포화 염수로 세척하여 황산마그네슘에서 건조시켜 여과하고 용매를 진공하에 증발시켰다. 역상 크로마토그래피로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다 (0.1 g). MS (ES) m/z 475 [M+1]⁺.

실시예 52

1-((4-(2-(2-(2-(1H-1,2,3- 트리아졸 -1-일) 에틸아미노 )-5- 플루오로피리미딘 -4-일) 벤조 [b]티오펜-7-일)-6- 플루오로피리딘 -3-일) 메틸 )피페리딘-4-올

5-(브로모메틸)-2-플루오로-4-요오도피리딘 (0.2 g, 0.63 mmol), 피페리딘-4-올 (0.192 mg, 1.9 mmol) 및 디이소프로필에틸아민 (0.22 mL, 1.27 mmol)을 아세토니트릴 (3.0 mL) 중에서 합하였다. 상기 반응 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 가 열하고 실온으로 냉각시켰다. 유기 용매를 제거하여 조 물질 1-((6-플루오로-4-요오도피리딘-3-일)메틸)피페리딘-4-올을 수득하였다. 조 물질 1-((6-플루오로-4-요오도피리딘-3-일)메틸)피페리딘-4-올 (0.63 mmol), N-(2-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)에틸)-5-플루오로-4-(7-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)벤조[b]티오펜-2-일)피리미딘-2-아민 (0.15 g, 0.32 mmol), 탄산나트륨 (0.102 g, 0.96 mmol), 2-(디-tert-부틸포스포)바이페닐 (0.006 g, 0.06 mmol) 및 Pd(dppf)Cl₂ (0.026 g, 0.1 mmol)를 THF (3 mL) 및 물 (1 mL) 중에서 합하였다. 상기 혼합물을 120℃에서 10분 동안 극초단파 반응기에서 가열하였다. 조 반응 혼합물을 강력한 양이온 교환 (SCX) (10 g) 컬럼에 부었다. 원하는 생성물을 2 N 메탄올성 암모니아 (40 mL)로 용출시키고 농축시켰다. 역상 크로마토그래피 (28％ 등용매, 8분 동안 85 mL/분, 30×75 mm, 5 mm, C₁₈ ODB MS 엑스브릿지(XBridge)™ 컬럼, 용매 A: 0.01 M 중탄산암모늄을 함유하는 물, 용매 B: 아세토니트릴)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다 (91 mg, 52％). MS (ES) m/z 549 [M+1]⁺.

하기하는 실시예 화합물을 1-((4-(2-(2-(2-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)에틸아미노)-5-플루오로피리미딘-4-일)벤조[b]티오펜-7-일)-6-플루오로피리딘-3-일)메틸)피페리딘-4-올에 대한 것과 유사한 절차로 제조하였다:

실시예 63

N-(2-(1H-1,2,3- 트리아졸 -1-일)에틸)-5- 플루오로 -4-(7-(2- 플루오로 -5-((3-(메 틸아미노 ) 피롤리딘 -1-일) 메틸 )피리딘-4-일) 벤조 [b]티오펜-2-일)피리미딘-2-아민

5-(브로모메틸)-2-플루오로-4-요오도피리딘 (0.2 g, 0.63 mmol), 3-(N-tert-부톡시카르보닐-N-메틸아민)피롤리딘 (0.381 mg, 1.9 mmol) 및 디이소프로필-에틸아민 (0.22 mL, 1.27 mmol)을 아세토니트릴 (3.0 mL) 중에서 합하였다. 상기 반응 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 가열하고 실온으로 냉각시켰다. 유기 용매를 제거 하여 조 tert-부틸 1-((6-플루오로-4-요오도피리딘-3-일)메틸)피롤리딘-3-일(메틸)카르바메이트를 수득하였다. 조 tert-부틸 1-((6-플루오로-4-요오도피리딘-3-일)메틸)피롤리딘-3-일(메틸)카르바메이트 (0.63 mmol), N-(2-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)에틸)-5-플루오로-4-(7-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)벤조[b]티오펜-2-일)피리미딘-2-아민 (0.15 g, 0.32 mmol), 탄산나트륨 (0.102 g, 0.96 mmol), 2-(디-tert-부틸포스포)바이페닐 (0.006 g, 0.06 mmol) 및 Pd(dppf)Cl₂ (0.026 g, 0.1 mmol)를 THF (3 mL) 및 물 (1 mL) 중에서 합하였다. 상기 혼합물을 120℃에서 10분 동안 극초단파 반응기에서 가열하였다. 조 반응 혼합물을 강력한 양이온 교환 (SCX) (10 g) 컬럼에 부었다. 원하는 생성물을 2 N 메탄올성 암모니아 (40 mL)로 용출시키고 농축시켰다. 역상 크로마토그래피 (56％ 등용매, 8분 동안 85 mL/분, 30×75 mm, 5 mm, C₁₈ ODB MS 엑스브릿지™ 컬럼, 용매 A: 0.01 M 중탄산암모늄을 함유하는 물, 용매 B: 아세토니트릴)로 정제하여 Boc 보호된 생성물을 수득하였다.

tert-부틸 1-((4-(2-(2-(2-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)에틸아미노)-5-플루오로피리미딘-4-일)벤조[b]티오펜-7-일)-6-플루오로피리딘-3-일)메틸)피롤리딘-3-일(메틸)카르바메이트 (118 mg, 0.18 mmol)를 DCM (3 mL) 중에 희석하고, 디옥산 중 4 M 염산 (0.45 mL, 1.8 mmol)으로 처리하였다. 상기 혼합물을 35℃에서 2시간 동안 가열하였다. 유기 용매를 제거하여 조 물질로서 탈보호된 생성물을 수득하였다. DCM (3 mL) 및 메탄올 중에 희석하였다. 상기 혼합물을 강력한 양이온 교환 (SCX) (10 g) 컬럼에 부었다. 2 N 메탄올성 암모니아 (40 mL)로 용출시키고 농축시켰다. 상기 농축된 물질을 동결건조를 통해 1:1 아세토니트릴/물로부터 건조시켜서 표제 화합물을 수득하였다 (88 mg, 46％). MS (ES) m/z 548 [M+1]⁺.

실시예 64

N-(2-(1H-1,2,3- 트리아졸 -1-일)에틸)-4-(7-(5-(1-( 시클로프로필아미노 )에틸)-2-플 루오로피리 딘-4-일) 벤조 [b]티오펜-2-일)-5- 플루오로피리미딘 -2-아민

메탄술포닐 클로라이드 (0.04 mL, 0.55 mmol)를 염화메틸렌 (5 mL) 중 새로 합성된 1-(4-(2-(2-(2-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)에틸아미노)-5-플루오로피리미딘-4-일)벤조[b]티오펜-7-일)-6-플루오로피리딘-3-일)에탄올 (240 mg, 0.50 mmol) 및 트리에틸아민 (0.14 mL, 1.0 mmol)의 용액에 -78℃에서 서서히 첨가하였다. 상기 혼합물을 동일한 온도에서 60분 더 교반한 후에 시클로프로필아민 (0.040 mL, 0.55 mmol)을 첨가하고, 이것을 밤새 실온에 방치하였다. 이것을 45℃로 5시간 동안 가열하여 실온으로 냉각시키고 용매를 제거하였다. 컬럼 크로마토그래피 (DCM 중 10％ 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 수득하였다 (42 mg 17％). MS (ES) m/z 519 [M+1]⁺.

하기하는 실시예 화합물을 N-(2-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)에틸)-4-(7-(5-(1- (시클로프로필아미노)에틸)-2-플루오로피리딘-4-일)벤조[b]티오펜-2-일)-5-플루오로피리미딘-2-아민에 대한 것과 유사한 절차를 이용하되 적절한 출발 물질을 사용하여 제조하였다:

하기하는 실시예 화합물을 상기 N-(2-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)에틸)-4-(7-(2-클로로-5-(1-(메틸아미노)에틸)피리딘-4-일)벤조[b]티오펜-2-일)피리미딘-2-아민에 대해 기재한 것과 유사한 절차로 제조하였다:

실시예 70

(R)-1-(4-(2-(2-(2-(1H-1,2,3- 트리아졸 -1-일) 에틸아미노 )-5- 플루오로피리미딘 -4-일) 벤조 [b]티오펜-7-일)-6- 플루오로피리딘 -3-일)에탄올

라세미체 1-(4-(2-(2-(2-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)에틸아미노)-5-플루오로피리미딘-4-일)벤조[b]티오펜-7-일)-6-플루오로피리딘-3-일)에탄올 180 mg을 키랄 크로마토그래피로 분리하여 표제 화합물 44 mg을 수득하였다 (24％). MS (ES) m/z 480 [M+1]⁺. 키랄 OJ-H 컬럼: CO₂ 중 20％ 메탄올, 0.2％ 이소프로필 아민, 유속: 5 mL/분, 225 nm에서 검출, 또는 컬럼 키랄팍^® AS-H: 100％ MeOH/0.02％ DMEA (디메틸-에틸 아민)/CO₂, 5 mL/분, 225 nm, 또는 컬럼 키랄팍^® AD-H: 15:85 3A/C7 (0.2％ DMEA 함유), 0.6 mL/분, 225 nm.

실시예 71

(R)-N-(2-(1H-1,2,3- 트리아졸 -1-일)에틸)-4-(7-(5-(1- 아미노에틸 )-2- 플루오로피리딘 -4-일) 벤조 [b]티오펜-2-일)-5- 플루오로피리미딘 -2-아민

라세미체 N-(2-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)에틸)-4-(7-(5-(1-아미노에틸)-2-플루오로피리딘-4-일)벤조[b]티오펜-2-일)-5-플루오로피리미딘-2-아민 190 mg을 메탄올 중 0.2％ DMEA (1 mL/분)를 사용하는 컬럼 키랄팍^® AD-H로 분리하였다. (R) 거울상이성질체가 5.22분에 용출되어 표제 화합물을 수득하였다 (0.4 mg, 21％). MS (ES) m/z 479 [M+1]⁺.

(R)-1-(4-(2-(2-(2-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)에틸아미노)-5-플루오로피리미딘-4-일)벤조[b]티오펜-7-일)-6-플루오로피리딘-3-일)에탄올 또는 (R)-N-(2-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)에틸)-4-(7-(5-(1-아미노에틸)-2-플루오로피리딘-4-일)벤조[b]티오펜-2-일)-5-플루오로피리미딘-2-아민의 경우에 사용한 것과 유사한 크로마토 그래피 방법을 이용하여 하기하는 실시예 화합물을 이들의 라세미체로부터 분리하였다:

● 상기 표에서 일부 거울상이성질체의 절대 배위는 결정되지 않음. 예를 들어, 실시예 76, 77, 79 및 80의 거울상이성질체는 체류 시간, 예를 들어 컬럼으로부터의 제1 또는 제2 분획으로 명시됨.

실시예 81

(R)-N-(2-(1H-1,2,3- 트리아졸 -1-일)에틸)-4-(7-(5-(1- 아미노에틸 )-2- 플루오로피리딘 -4-일) 벤조 [b]티오펜-2-일)피리미딘-2-아민

NH₂NH₂-HCOOH (사전 제조, 1 mL)를 에탄올 (10 mL) 중 (R)-N-(2-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)에틸)-4-(7-(5-(1-아지도에틸)-2-플루오로피리딘-4-일)벤조[b]티오펜-2-일)피리미딘-2-아민 (250 mg, 513.84 μmol)의 용액에 첨가하였다. 상기 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 라니 니켈 (0.5 g, 8.52 mmol, 포장시에 물로 습윤됨)을 첨가하였다. 상기 용액을 실온에서 1.5시간 더 교반하여 라니 니켈을 여과해 내고 메탄올로 세척하였다. 여액을 클로로포름/IPA (3/1)로 희석하여 포화 탄산나트륨으로 세척하였다. 유기 상을 황산나트륨에서 건조시키고, 진공하에 농축시켜 갈색 타르를 수득하였다. 상기 고체를 FCC (DCM 중 10％ 메탄올)에 통과시켜 정제하여 표제 화합물을 옅은 갈색 고체로서 수득하였다 (200 mg, 85％). MS (ES) m/z 461 [M+1]⁺.

실시예 82

(R)-N-(2-(1H-1,2,3- 트리아졸 -1-일)에틸)-4-(7-(5-(1-(디메틸아미노)에틸)-2-플 루오로피리 딘-4-일) 벤조 [b]티오펜-2-일)-5- 플루오로피리미딘 -2-아민

50 mL 둥근 바닥 플라스크에 1,4-디옥산 (5 mL) 중 (R)-N-(2-(1H-1,2,3-트리 아졸-1-일)에틸)-4-(7-(5-(1-아미노에틸)-2-플루오로피리딘-4-일)벤조[b]티오펜-2-일)-5-플루오로피리미딘-2-아민 (120 mg, 251 μmol), 파라포름알데히드 (1.45 g, 4.11 mmol) 및 아세트산 (15 mg, 251 μmol)을 충전하였다. 상기 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반하고, 나트륨 테트라히드로보레이트 (37.95 mg, 1 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하여 클로로포름으로 희석하고, 묽은 수산화암모늄으로 세척하여 진공하에 농축시켰다. 조 물질을 FCC (DCM 중 10％ 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 황색 고체로서 수득하였다 (34 mg, 27％). (ES) m/z 507 [M+1]⁺.

실시예 83

N-(2-(1H-1,2,3- 트리아졸 -1-일)에틸)-4-(7-(5-(2- 아미노에톡시 )-2- 플루오로피리딘 -4-일) 벤조 [b]티오펜-2-일)-5- 플루오로피리미딘 -2-아민

히드라진 (0.03 mL, 0.8 mmol)을 에탄올 (5 mL) 중 2-(2-(4-(2-(2-(2-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)에틸아미노)-5-플루오로피리미딘-4-일)벤조[b]티오펜-7-일)-6-플루오로피리딘-3-일옥시)에틸)이소인돌린-1,3-디온 (0.25 g, 0.4 mmol)의 용액에 첨가하였다. 상기 혼합물을 40℃에서 밤새 교반하였다. 용매를 제거하고, 잔류물을 컬럼 크로마토그래피 (DCM 중 10％ 메탄올)로 정제하여 표제 화합물을 수득 하였다 (70 mg, 35％). MS (ES) m/z 495 [M+1]⁺.

하기하는 실시예 화합물을 N-(2-(1H-1,2,3-트리아졸-1-일)에틸)-4-(7-(5-(2-아미노에톡시)-2-플루오로피리딘-4-일)벤조[b]티오펜-2-일)-5-플루오로피리미딘-2-아민에 대해 기재한 것과 유사한 절차로 제조하였다:

Plk1은 많은 인간 종양, 예컨대 비-소세포 폐, 구인두, 식도, 위, 흑색종, 유방, 난소, 자궁내막, 결장직장, 교아세포종, 유두상, 췌장, 전립선, 간모세포종 및 비-호지킨 림프종의 암에서 과다발현되는 것으로 밝혀졌다. 추가로, 비-소세포 폐, 구인두, 식도, 흑색종, 결장직장, 간모세포종 및 비-호지킨 림프종의 암에서는 Plk1 발현이 예후 유의성을 갖는다 [Strebhardt, K. and A. Ullrich. Nature Reviews Cancer 6(4):321-30 (2006)]. Plk1에 의해 인산화된 기질은 중심체 성숙, 유사분열의 개시, 자매 염색분체 분리 및 세포질분열을 조화시켜 유사분열의 진행을 조절한다 [Eckerdt F. Strebhardt K. Cancer Research. 66(14):6895-8, 2006], [Strebhardt and Ullrich 2006], [van de Weerdt, B. C. and R. H. Medema. Cell Cycle 5(8):853-64 (2006)]. 항체 주입, 우성 음성 Plk1의 발현 및 안티센스 mRNA 감소를 이용하여 Plk1 기능을 억제하면, 단극 방추체(monopole spindle) 및 후기 정지가 일어나서 종양 세포주에서는 유사분열 중인 세포의 사멸이 야기되지만 형질전환되지 않은 정상적인 원발성 세포주에서는 가역적인 G2 정지가 일어난다.

추가로, Plk가 간상 종양의 치료에 유용할 수 있음이 보고된 바 있다 [Morozov A., et al., Clinical Cancer Research. 13(16):4721-30 (Aug 15, 2007)].

BI-2536은 HCT116, A549 및 NCIH460 뮤린(murine) 이종이식편을 사용한 전임상 모델에서 활성이 입증된 바 있다 [Baum, A., P. Garin-Chesa, et al. (2006). #C191 In vivo activity of BI 2536, a potent and selective inhibitor of the mitotic kinase PLK1, in a range of cancer xenografts] (미국 펜실바니아주 필라델피아에서 개최된 "분자 표적 및 암 치료제"에 관한 AACR-NCI-EORTC 국제 컨퍼런스).

하기하는 검정의 결과는 본 발명의 화합물이 항암제로서 유용하다는 것을 입증한다. 본원에 기재된 특정 실시예 화합물은 라세미체 혼합물이다. 이들 화합물은 라세미체 혼합물 및/또는 개개의 거울상이성질체로서 시험되었다. 1종 이상의 거울상이성질체 또는 라세미체는 하기하는 검정 기준을 충족시켰다.

Plk1 의 발현 및 정제

인간 Plk1 cDNA를 그의 말단 중 하나에서 His₆ 태그, 예컨대 C-말단 FLAG- His₆ 태그를 발현하는 폴리뉴클레오티드 서열과 직접 연결하여 적절한 발현 벡터, 예컨대 pFastBac™ 벡터 (인비트로젠(Invitrogen))에 삽입하고, 이것을 사용하여 적절한 시스템, 예컨대 xPlk1에 대하여 문헌 [Yue-Wei Qian, et al., Science, 282, 1701 (1998)]에서 보고된 바 있는 것과 유사한 바큘로바이러스를 형질감염시킬 수 있었다. 바이러스 발현 시스템이 사용된 경우에는 이후에 상기 바이러스 (예를 들어, Plk1-Flag-His₆ 태그 폴리뉴클레오티드 구조물을 보유하는 바큘로바이러스)를 적합한 숙주 세포, 예컨대 Sf9 세포의 배양물에 감염시켰다. 예를 들어 감염시키고 약 46시간이 지난 후에 충분량의 Plk1-Flag-His₆ 태그 융합 단백질이 발현되면, 상기 배양물에 오카다산 (0.1 μM)을 충분한 시간 (예를 들어, 3시간) 동안 처리했다. Plk1-Flag-His₆ 태그 융합체는 당업계 공지의 방법으로 금속 친화도 수지, 예컨대 탈론(TALON)™을 이용하여 세포 펠렛으로부터 정제하였다. 정제된 Plk1-Flag-His₆ 태그 융합체를 적합한 배지, 예컨대 10 mM HEPES, 150 mM NaCl, 0.01％ 트리톤(TRITON)^® X-100, 1 mM 디티오트레이톨 (DTT), 10％ 글리세롤, pH 7.5 중에 -80℃에서 소량의 분취액으로 사용시까지 저장하였다. 정제된 Plk1-Flag-His₆ 태그 융합 단백질의 정체성(identity)은 MALDI (매트릭스 보조 레이저 탈착/이온화법)로 확인하였다.

GST - Cdc25C (1-206)의 발현 및 정제

임의의 적절한 공급원으로부터 얻을 수 있는 인간 Cdc25C cDNA는 임의의 편 리한 발현 시스템에서 발현시킬 수 있었고, 이후 문헌 [Bin Ouyang et al, Oncogene, 18, 6029-6036 (1999)]에 기재된 것과 유사한 공지의 방법으로 정제하였다. 편리한 시스템의 일례는, 인간 Cds25C에 대한 cDNA가 1 mM 이소프로필-베타-D-티오갈락토피라노시드에 의해 발현 유도되도록 유전자 조작되어 있는 pGEX-2T 벡터 (아머샴(Amersham))로 형질전환시킨 이.콜라이(E. coli) BL21을 18℃에서 밤새 성장시키는 것을 포함하였다. Plk1의 기질인 발현된 GST-Cdc25C(1-206)를 정제 (예를 들어, 글루타티온 세파로스(GLUTATHIONE SEPHAROSE)^® 4B로 정제함)하여 적절한 용액, 예컨대 10 mM HEPES, 100 mM NaCl, pH 7.5 중에 -80℃에서 소량의 분취액으로 저장할 수 있었다.

Plk1 억제 검정

Plk1 키나제 반응물은 50 mM HEPES, pH 7.3, 1.0 mM 디티오트레이톨, 5.0 μM ATP, 10 mM MgCl₂, 0.01％ 트리톤^® X-100, 0.4 μCi ³³P-ATP 및 0.06 ㎍/㎕ GST-Cdc25c(1-206) 펩티드를 함유하는 완충제 중에 Plk1-Flag-His₆ 태그 융합 효소 (0.2 ng/㎕)를 함유하였다. 화합물은 DMSO 중 10 mM 원액(stock)으로 제공되었다. 화합물을 20％ DMSO 중에 1:3으로 계열 희석하여 10-점 농도-반응 곡선을 생성하였고, 이후에 상기 반응 혼합물 중에 1:5 (4％ 최종 DMSO 농도 중 20 μM 내지 0.001 μM (최종))로 희석하여 화합물 활성을 결정하였다. 상기 반응을 실온에서 60분 동안 수행한 후에 10.0％ H₃PO₄ 60 ㎕를 첨가하여 켄칭시켰다. 상기 반응 혼합물 (85 ㎕)을 10.0％ H₃PO₄ 30 ㎕로 미리 적셔 둔 96웰 포스포셀룰로스 여과 플레이트로 옮겨 실온에서 20분 내지 30분 동안 인큐베이션한 후에 0.5％ H₃PO₄로 3회 세척하였다. 웰들을 건조시키고, 이후에 마이크로신트(MicroScint)™ 20 (패커드(Packard)) 40 ㎕를 첨가한 후 월락(Wallac) 마이크로베타(MICROBETA)^® 제트에서 계수하였다. 이후, 10-점 농도-반응 데이타로부터의 억제율(％) 값을 예를 들어 액티비티 베이스(ACTIVITY BASE)™ 소프트웨어 (IDBS)로 4-파라미터 로지스트 식을 사용하여 분석하였다. 생성된 곡선 피트로부터 절대 IC₅₀ 값을 계산하였다. 모든 예시된 화합물은 3.6의 IC₅₀ 최소 유의 비율(Minimum Significant Ratio, MSR)로 IC₅₀이 100 nM 미만이었고, 라세미체 혼합물 및/또는 1종 이상의 거울상이성질체의 IC₅₀은 100 nM 미만이었다. 예를 들어, 실시예 41의 라세미체는 IC₅₀이 12 nM이었다. 이는, 본 발명의 화합물이 Plk1의 강력한 억제제임을 입증한다.

pHH3 ( S10 ), 유사분열 중인 세포 및 DNA 함량 검정

HeLa 세포를 96웰 벡크만 딕슨(Beckman Dickinson) 바이오코트(BIOCOAT)™ 플레이트에 200개 세포/웰로 플레이팅하고, 10％ FBS (태아 소 혈청)를 함유하는 MEM (최소 필수 배지(Minimum Essential Medium)) 중에서 37℃, 5％ CO₂하에 24시간 동안 인큐베이션시켰다. 상기 세포에, 화합물 (0.25％ DMSO 중)을 0.5 μM 내지 0.0098 μM 범위의 10개 점 용량으로 하여 상기 배지에 첨가하는 처리를 실시하였 다. 화합물에 23시간 동안 노출시킨 후, 세포를 예를 들어 프리페르(PREFER)™ 고정액의 30분 사용으로 고정시킨 후에 인산염 완충 염수 (PBS) 용액 중 0.1％ 트리톤^® X100을 15분 동안 사용하여 투과화하였다. 세포를 PBS로 3회 세척한 후에 50 ㎍/mL RNAse로 소화시켰다. 1차 항체로서 포스포히스톤 H3을 1％ 소 혈청 알부민 (BSA)을 함유하는 PBS 중에 1:500으로 하여 상기 세포에 첨가하고 4℃에서 밤새 두었다. PBS로 3회 세척한 후에 세포를 Alexa488 표지된 2차 항체와 함께 1시간 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 이것들을 다시 PBS로 3회 세척한 후에 15 μM 요오드화프로피듐을 첨가하고 30분 동안 두어 핵을 염색하였다. 형광 플레이트를 아큐멘 익스플로러(ACUMEN EXPLORER)™ [레이저-스캐닝 형광 마이크로플레이트 세포계측기 (488 nm 아르곤 이온 레이져 여기 및 다수의 광전자증배관 검출을 포함함), 티티피 랩테크 리미티드(TTP LABTECH LTD) 제품]로 스캐닝하여, 항-포스포히스톤 H3 세린 10, DNA 함량 및 유사분열 중인 세포를 DNA 축합에 따라 결정하였다. 화상 분석은 세포내 형광 신호를 기초로 하며, 이것으로 여러 아집단 중의 세포를 동정하였다. pHH3(S10) 양성 세포는 500 내지 530 nm에서의 평균 강도가 역치를 넘는 것으로 확인되었다. 655 내지 705 nm에서 요오드화프로피듐/DNA로부터의 전체 강도를 이용하여 개개의 세포 (DNA 함량이 2N 내지 4N인 세포) 및 세포 주기 중의 아집단 (2N 세포, 4N 세포)을 동정하였다. 575 내지 640 nm에서의 최고 강도를 이용하여 4N 세포로부터 유사분열 중인 세포를 확인하는 마커로 사용되는 DNA 축합을 동정하였다. 검정 결과는 각각의 동정된 아집단의 백분율(％), ％ pHH3, ％ 2N, ％ 4N, ％ 유사분열 중인 세포 및 세포의 총 수였다. EC₅₀은 액티비티 베이스™를 사용하여 각 결과마다 4-파라미터 로지스트에 대한 곡선 피팅을 이용하여 결정하였다. pHH3(s10), DNA 함량 및 유사분열 중인 세포에 대해 생성된 EC₅₀은 MSR이 각각 2.6, 2.4 및 2.5였다. 예를 들어, 실시예 41의 라세미체는 pHH3(s10) EC₅₀ = 25 nM, DNA 함량 EC₅₀ = 30 nM 및 유사분열 중인 세포 EC₅₀ = 23 nM이었다.

항-증식 검정

세포 증식에 대한 화합물의 효과는 당업계에 공지된 세포 및 세포 증식 방법을 이용하여 결정할 수 있다 [Robert C. Squatrito et al., Gynecological Oncology, 58, 101-105 (1995)]. 예를 들어, 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션(American Type Culture Collection)에서 구할 수 있는 HCT116 세포를 96웰 플레이트에 약 2000개 세포/웰로 접종하고 37℃의 가습 CO₂ 인큐베이터에서 밤새 부착되도록 할 수 있었다. 20시간 내지 24시간 동안 인큐베이션한 후, 절반 로그값으로 계열 희석된 화합물을 첨가하고, 상기 플레이트를 다시 인큐베이터에 넣었다. 적절한 기간 (예를 들어, 72시간) 동안 노출시킨 후, 공지의 방법을 이용하여 세포 증식을 추정하였다. 한 방법에서는, 테트라졸륨 염, 예컨대 알라마르 블루(Alamar Blue)™ 10 ㎕를 상기 세포 플레이트에 첨가하였다. 상기 염료에 적절한 기간 동안 노출시킨 후, 형광 (530 nm 여기, 580 nm 방출)을 측정하였다. 생성된 IC₅₀은 MSR이 3.1이었다. 예를 들어, 실시예 41의 라세미체는 평균 IC₅₀ = 31 nM (n = 2)이었다. 이는, 본 발명의 화합물이 여러 유형의 암을 비롯한 증식 장애의 치료에 유용함을 입증한다.

본 발명의 화합물은 다양한 경로로 투여되는 제약 조성물로 제제화되는 것이 바람직하다. 가장 바람직한 것은, 이러한 조성물이 경구 또는 정맥내 투여용인 경우이다. 이러한 제약 조성물 및 이의 제조 방법은 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어 문헌 [REMINGTON: THE SCIENCE AND PRACTICE OF PHARMACY (A. Gennaro, et al., eds., 19^th ed., Mack Publishing Co., 1995)]을 참조한다.

화학식 I의 화합물은 일반적으로 광범위한 투여량 범위에서 효과적이다. 예를 들어, 1일 투여량은 통상적으로 체중 1 kg 당 약 1 내지 약 10 mg, 바람직하게는 체중 1 kg 당 2 내지 6.5 mg의 범위 내에 속한다. 일부 예에서는 상기 범위의 하한 미만의 투여량 수준이 보다 적절할 수 있는 반면에 다른 예에서는 훨씬 더 많은 투여량이 임의의 해로운 부작용 초래 없이 사용될 수 있어서, 상기 투여량 범위는 어떠한 방식으로도 본 발명의 범위를 제한하지 않는다. 화합물의 실제 투여량은 치료할 상태, 선택된 투여 경로, 실제 투여되는 화합물(들), 개개의 환자의 연령, 체중 및 반응, 및 환자 증상의 중증도를 비롯한 관련 상황들에 비추어 의사가 결정한다는 것을 이해할 것이다.

Claims

하기 화학식의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염.

상기 식에서,

R¹은 수소, 메틸, 시클로프로필, 시클로프로필아미노(C₁-C₂ 알킬), 플루오로, 에톡시, 히드록시, 1-(히드록시)에틸, 2-(히드록시)(C₂-C₃ 알콕시), 2-(히드록시)에톡시메틸, 1-(클로로)에틸, 1-((2-플루오로)에틸아미노)에틸, 2-(메틸아미노)에톡시, (2-히드록시에틸)아미노, (2-히드록시에틸)아미노(C₁-C₂ 알킬), 아미노, 아미노(C₁-C₄ 알킬), 아미노(C₂-C₃ 알콕시), 아미노카르보닐메틸, (1-메틸)-(1-아미노카르보닐)에틸, (C₁-C₃ 알킬)아미노(C₁-C₂ 알킬), 메톡시에틸아미노, N-(C₁-C₃ 알킬)-N-메틸-아미노(C₁-C₂ 알킬), 피롤리딘-1-일-메틸, 3-(디메틸아미노)-피롤리딘-1-일-메틸, 3-(피리드-3-일)-피롤리딘-1-일-메틸, 3-(아미노)피롤리딘-1-일-메틸, 3-(메틸아미노)피롤리딘-1-일-메틸, (4,4-디메틸옥살리딘-3-일)메틸, [N-(2-히드록시)에틸-N-메틸]-아미노메틸, (아제티딘-1-일)메틸, 피페리딘-1-일-메틸, 4-(메톡시)피페 리딘-1-일-메틸, 4-(히드록시)피페리딘-1-일-메틸, 4-(히드록시메틸)피페리딘-1-일-메틸, 피페라진-1-일-(C₁-C₂ 알킬), 4-(메틸)피페라진-1-일-메틸, 3,5-(디메틸)피페라진-1-일-메틸 또는 모르폴린-4-일-메틸이고,

R²는 수소이고,

R³은 수소, 메틸, 플루오로 또는 클로로이거나, 또는 R³은 아미노이고 R²와 함께 피리딘에 융합된 피롤릴 고리를 형성하고,

R⁴는 수소, 메틸, 플루오로 또는 클로로이고,

R⁵는 수소 또는 히드록시메틸이며,

R⁶은 수소 또는 메틸이다.
제1항에 있어서, R¹이 시클로프로필아미노(C₁-C₂ 알킬), 1-(히드록시)에틸, 2-(히드록시)에톡시메틸, 1-(클로로)에틸, 1-((2-플루오로)에틸아미노)에틸, (2-히드록시에틸)아미노, (2-히드록시에틸)아미노(C₁-C₂ 알킬), 아미노(C₁-C₄ 알킬), 아미노카르보닐메틸, (1-메틸)-(1-아미노카르보닐)에틸, (C₁-C₃ 알킬)아미노(C₁-C₂ 알킬), N-(C₁-C₃ 알킬)-N-메틸-아미노(C₁-C₂ 알킬), 피롤리딘-1-일-메틸, 3-(디메틸아미노)피롤리딘-1-일-메틸, 3-(피리드-3-일)-피롤리딘-1-일-메틸, 3-(아미노)피롤리딘 -1-일-메틸, 3-(메틸아미노)피롤리딘-1-일-메틸, (4,4-디메틸옥살리딘-3-일)메틸, [N-(2-히드록시)에틸-N-메틸]-아미노메틸, (아제티딘-1-일)메틸, 피페리딘-1-일-메틸, 4-(메톡시)피페리딘-1-일-메틸, 4-(히드록시)피페리딘-1-일-메틸, 4-(히드록시메틸)피페리딘-1-일-메틸, 피페라진-1-일-(C₁-C₂ 알킬), 4-(메틸)피페라진-1-일-메틸, 3,5-(디메틸)피페라진-1-일-메틸 또는 모르폴린-4-일-메틸인 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염.
제1항 또는 제2항에 있어서, R¹이 아미노(C₁-C₄ 알킬), (C₁-C₃ 알킬)아미노(C₁-C₂ 알킬), N-(C₁-C₃ 알킬)-N-메틸-아미노(C₁-C₂ 알킬) 또는 모르폴린-4-일-메틸인 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,

R¹이 아미노(C₁-C₄ 알킬) 또는 (C₁-C₃ 알킬)아미노(C₁-C₂ 알킬)이고,

R³이 수소 또는 플루오로이고,

R⁴가 수소 또는 플루오로이고,

R⁵가 수소이며,

R⁶이 수소인 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, R¹이 1-(메틸아미노)에틸이고, R³이 플루오로이고, R⁴가 수소이고, R⁵가 수소이며, R⁶이 수소인 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, R¹이 1-아미노에틸이고, R³이 플루오로이고, R⁴가 플루오로이고, R⁵가 수소이며, R⁶이 수소인 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, R¹이 1-아미노에틸이고, R³이 플루오로이고, R⁴가 수소이고, R⁵가 수소이며, R⁶이 수소인 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, R¹이 1-(메틸아미노)에틸이고, R³이 플루오로이고, R⁴가 플루오로이고, R⁵가 수소이며, R⁶이 수소인 화합물 또는 그 의 제약상 허용가능한 염.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염을 제약상 허용가능한 담체, 희석제 또는 부형제와 함께 포함하는 제약 조성물.
비-소세포(non-small cell) 폐, 구인두, 식도, 위, 흑색종, 피부의 유표피 암종, 유방, 난소, 자궁내막, 결장직장, 신경교종, 교아세포종, 갑상선 암종, 자궁경부, 췌장, 전립선, 간모세포종 및 비-호지킨 림프종의 암으로 구성된 군에서 선택된 암의 치료가 필요한 포유동물에게 유효량의 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염을 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 상기 암을 치료하는 방법.
약제로서 사용하기 위한, 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염.
암 치료에 사용하기 위한, 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염.