TW200815029A - Anti-IGF-1R human monoclonal antibody formulation - Google Patents

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200815029 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於抗IGF-1R人類單株抗體調配物、其製備方 法及其用途。 【先前技術】 KJF-IR(I型類胰島素生長因子受體）涉及促進癌細胞之癌 基因轉化、生長及存活。已報導IGF-IR在多種人類惡性腫 瘤中大量表現。另外，已注意到腫瘤及相關基質細胞中 IGF-I及IGF-II之大量表現，且該等大量表現自分泌或旁分 泌方式刺激癌細胞生長。流行病學研究已將jfGFq之上部 五分之一血漿濃度與前列腺癌、結腸癌、肺癌及乳腺癌之 A加風險相關聯。除了在癌細胞增殖中之作用外， 保護細胞免受肇因於生長因子缺失、貼壁不依賴性或細胞 毒性藥物處理所致之細胞凋亡。 一種有希望之抑制癌細胞中IGF_IR功能之策略係施用可 結合IGF-IR細胞外結構域並抑制受體活化之人類抗igf_ir 抗體。已發展出一具拮抗性、全部人類之單株抗體（稱做 huMab IGF-1R)，其可專一性結合至人類胰島素樣生長因 子I受體（IGF-IR)並抑制癌細胞中受體之信號轉導與增殖功 能。 【發明内容】 本發明之一態樣係關於包含以下各物之IGF-1R調配物： -約1至約150毫克/毫升之huMab IGF-1R， -約0 · 0 01至約1 %之至少一表面活性劑，以及 119282.doc 200815029 -約1至約100 mM之緩衝液， -於約5.0至約7.0之pH值。 本發明調配物中所含之抗體已首先闡述於PCT專利申請 案第W02005/005635號中，該申請案之申請者係所有者且 其内容（尤其係其申請專利範圍）以引用的方式併入本文 中。如W02005/005635中所述，該抗體結合至IGF-IR並抑 制IGF-I及IGF-II與IGF-IR之結合，且其特徵在於： a)其係IgGl同型物，

• b)其顯示抑制IGF-I與IGF-IR結合之IC5G值與抑制IGF-II 與IGF-IR結合之IC5G值之比率係1:3至3:1， c) 在含0.5%熱滅活胎牛血清（FCS)之培養基中使用HT29 細胞之細胞磷酸化分析中，於5 nM IGF-IR之濃度下 與不含該抗體之此一分析相比，可抑制至少80%(較 佳至少90%)磷酸化，以及 d) 在含0.5 %熱滅活胎牛血清（FCS)之培養基中，使用可 提供400,000至600,000個分子IGF-IR/細胞之3T3細胞 φ 之細胞磷酸化分析，於1 0 μΜ之濃度下與不含該抗體

之此一分析相比，不顯示以pkB磷酸化量測之IGF-IR _ 刺激活性。 ~ 本發明調配物中所含之抗體可使需要抗腫瘤治療之患者 秦 - 受益，減少腫瘤生長及明顯延長之發展時間。本發明調配 物中所含之抗體具有新穎且進步性之特徵，可使遭受與 IGF失調相關疾病（尤其係腫瘤疾病）之患者受益。本發明 調配物中所含之抗體之特徵係在於上述性質。故，該等性 質尤其係專一性地結合至IGF-IR，抑制IGF-I及IGF-II與 119282.doc 200815029 IGF-IR以上述比率結·合，係IgGl同型物，且即使是在200 倍濃度之其IC5()值下在IGF-IR過度表現之細胞中也不激活 IGF-IR信號。不具有「IGF-I擬態活性」之抗體當用作治 療藥劑時，可提供有力優點。 術語「抗IGF-1R人類單株抗體」或「huMAb IGF-IR」 代表如W02005/005635中所述及所主張之抗體，該案之内 容（尤其係申請專利範圍）以引用的方式併入本文中。 術語「抗體」包含各種形式之抗體，其包括（但不限於） 完整抗體、抗體片段、人類抗體、人源化抗體及以遺傳工 程抗體，只要彼等抗體保留本發明之特性即可。 「抗體片段」包含全長抗體之一部分，一般言之，至少 包含其抗原結合部位或其可變區。抗體片段之實例包括雙 抗體、單鏈抗體分子、免疫毒素及由抗體片段形成之多專 一性抗體。另外，抗體片段包含單鏈多肽，彼等具有VH 鏈特徵，即能與一 VL鏈裝配在一起，或具有能與IGF-1R 結合之VL鏈特徵，即能與VH鏈一起裝配至功能性抗原結 合袋，且藉此能提供抑制IGF-I及IGF-II與IGF-IR結合之性 質。 「抗體片段」亦包含此等片段，其本身不能提供效應功 能（ADCC/CDC)，但在與適宜抗體恆定結構域組合後可以 本發明方式提供此功能。 本文所用術語「單株抗體」或「單株抗體組合物」意指 具單一胺基酸組成之抗體分子之製備物。因此，術語「人 類單株抗體」意指顯示單一結合專一性之抗體，其具有衍 119282.doc 200815029 ?類種系免疫球蛋白序列之可變區及恆定區。在—每 /中單株抗體可藉由雜交瘤產生，該雜交瘤包括 契水生細胞融入之自且古 轉自”有包含人類重鏈轉基因及人類輕鏈 土 土因組的轉基因非人類動物（例如轉基 得之B細胞。 鼠）獲 術叩甘欠合抗體」意指包括_來自來源或物種之可變區 ⑼’結合區）以及來自_不同來源或物種之恆定區的至= 邛分之早株抗體，其通常由重組〇1^八技術製備。含有气 科動物可變區及人類恆定區之嵌合抗體尤佳。此等鼠㈣ 物/人類嵌合抗體為經表現之免疫球蛋白基因(其包含編碼 鼠科動物免疫球蛋白可變區之DNA片段及編碼人類免疫球 蛋白恆定區之DNA片段）之產物。本發明所涵蓋之其它形 式之「嵌合抗體」係彼等已經修飾或變換而類別或亞類別 不同於原始抗體之彼等。此類「喪合」抗體亦被稱後「類 別轉換之抗體」。製備嵌合抗體之方法包括已為熟諳此= 技術者所熟知之常規重組DNA及基因轉染技術。參見，例 如，Morrison，S.L.等人，Proc· Natl· Aca(1 Sci USA 81 (1984) 6851-6855 ·’ 美國專利第 5,202,238號及第 5,2〇4,244 號。 術语「人源化抗體」思指其中架構或「互補決定區」 (CDR)已修飾成包含與親本免疫球蛋白相比具不同專一性 之免疫球蛋白之CDR之抗體。在一較佳實施例中，將鼠科 動物CDR移植入人類抗體之架構區以製備「人源化抗 體」。參見例如，Riechmann，L.等人，Nature 332 119282.doc 200815029 (測P23至327;及心如㈣，Ms等人，仙㈣3i4 (1985)268至27G。尤佳CDR對應於彼等可識㈣合及雙功 能抗體之上述抗原之代表序列。 本文所用術^人類抗體」意欲包括具有衍生自人類種 系免疫球蛋白序列之可變區及恆定區之抗體。可變重鍵較 佳何生自種系序列DP-5〇(GenBank L〇66i8)而可變輕鏈較 仏衍生自種系序列L6(GenBank X01668)。抗體之恆定區係 人類IgGl型之恆定區。此等區域係同種異型的並由（例 如)Johnson，G.及 Wu，τ·τ·，Nucleic a- ^ 28 (2〇〇〇) 2 14至2 18及其中所引用之數據庫闡述，且此等區域只要保 留本發明之ADCC及較佳CDC之誘導性質即可便有用。 本文所用術語「重組人類抗體」意欲包括所有藉由重組 方法製備、表現、產生或分離之人類抗體，諸如分離自例 如SP2-0、NS0或CHO細胞等宿主細胞的抗體或分離自一人 類免疫球蛋白基因轉基因之動物（例如，小鼠）的抗體、或 使用轉染入宿主細胞中之重組表現載體表現之抗體。此等 重組人類抗體具有呈重排形式衍生自人類種系免疫球蛋白 序列之可變區及恆定區。該等本發明重組人類抗體已經受 活體内體細胞超突變。因此，重組抗體VH及VL區之胺基 酸序列係彼等雖然衍生自人類種系VH及VL序列且與之相 關但並不於活體內自然地存在於人類抗體種系所有組成成 份中之序列。 本文所用「結合」意指抗體結合至IGIMRi，親和力約 為 1〇·13至 1(T8M(KD)，較佳約為 10-13至 1〇-9M。 I19282.doc -10- 200815029 本文所用術語「核酸分子」意欲包括DNA分子及RNA分 子。核酸分子為單鏈或雙鏈，但較佳係雙鏈DNA。 「恆定結構域」不直接參與抗體與抗原之結合，但參與 效應功能（ADCC、互補結合及€0(：)。本發明抗體之恆定 結構域係IgGl型的。具有該等特徵之人類恆定結構域詳細 闡述於 Kabat 等人之 Sequences of Proteins of Immunological Interest，第 5 版，Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，MD. (1991)及 Brtiggemann， M·等人之 J. Exp· Med. 166 (1987) 1351 至 1361 ; Love，T.W. 等人之 Methods Enzymol· 178 (1989) 515 至 527 中。實例.展 示於W02005/005635之SEQ ID NOS:5至8。其他有用且較 佳恆定結構域係本發明的自用DSMZ沈積之雜交瘤細胞系 獲得之抗體之恆定結構域。本發明中所用恆定結構域提供 互補結合。本發明中所用恆定結構域提供互補結合。 ADCC及視情況CDC由可變結構域及怪定結構域之組合提 供。 本文所用「可變區」（輕鏈之可變區（VL)、重鏈之可變 區（VH))代表每一對直接參與抗體及抗原結合之輕鏈及重 鏈。可變人類輕鏈及重鏈結構域有相同之通用結構，且每 一結構域包含四個其序列高度保守之架構（FR)區，該等FK 區經由三個「超變區」（或互補決定區，CDR)連接。架構 區採用β-片層構象’且CDR可形成能連接片層結構之 環。母一鏈中之CDR係藉由架構區保持其三維結構，並與 另一鏈中之CDR—起形成抗原結合部位。抗體重鏈及輕鏈 119282.doc -11 - 200815029 之CDR3區在本發明抗體之結合專一性/親和性方面發揮特 別重要之作用，且其藉此可提供本發明之另一目的。 本文所用術語「超變區」或「抗體之抗原結合部位」意 指抗體中負責與抗原結合之胺基酸殘基。超變區包含「互 補決定區」或「CDR」之胺基酸殘基。「架構」或「FR」 區係彼等除本文所定義超變區殘基之外的可變結構域區。 故，抗體之輕鏈及重鏈從N-端至C-端包含結構域FR1、 CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3 及 FR4。尤其地，重鏈 之CDR3是對抗原結合貢獻最大之區域。CDR及FR區係根 據 Kabat 等人之標準定義（Sequences of Proteins of Immunological Interest，第 5版，Public Health Service， National Institutes of Health，Bethesda，MD.(1991))及 /或 係彼等來自「超變環」之殘基。 本文所用術語「與IGF-IR結合」意指在體外分析中（較 佳在其中抗體與表面結合且藉由表面電漿共振（SPR)量測 IGF-IR結合的結合分析中）抗體與IGF-IR之結合。結合意 指結合親和力（KD)為1(Γ8Μ或更低，較佳10·13至10·9Μ。 可藉由 BIAcore 分析（Pharmacia Biosensor AB，Uppsala， Sweden)研究與IGF-IR之結合。結合親和力係藉由術語ka (與抗體/抗原複合物中之抗體締合之速率常數）、kd(解離 常數）及KD(kd/ka)界定。本發明之抗體顯示lO’M或更低 之Kd。 IGF-I及IGF-II與IGF-IR之結合亦可受到本發明之抗體之 抑制。抑制以於腫瘤細胞上IGF-I/IGF-II與IGF-IR結合之 119282.doc -12- 200815029 分析中之ICm值經量測。此一分析闡述於實例7中。在此一 刀析中，舆在所述腫瘤細胞（例如HT29)表面上提供之IGF-IR、、。。之放射性標記1(}1?_1或1(}]?-][1或其結合之月段 里在不具有及具有增加濃度之抗體下量測。用於IGF-工 及IGF-II與iGF-IR結合之本發明抗體之jqG值不超過2 且用於IGF-mGFj與IGF-IR結合之值之比率約為ι :3

至3·1 IC5G值係作為至少三個獨立量測之平均值或中值加 以量測。個別1〇50值可能會超出該範圍。 本文所用術語「抑制IGF-I及iGF_n與IGF …分析中一標記的咖二 HT29(ATCC HTB-38)腫瘤細胞表面上之IGF_IR之結合。抑 制意指2 nM或更低之ic5G值。 本文所用術語「表面活性劑」代表醫藥上可接受之表面 活性劑。在本發明之調配物中，表面活性劑之量闡述為以 重量/體積表示之百分數。最經常使用之重量/體積單位係 毫克/毫升。適宜醫藥上可接受之表面活性劑包括（但不限 於）聚乙烯-山梨糖醇-脂肪酸酯.、聚乙二醇_聚丙二醇、聚 氧乙烯-硬脂酸醋及十二烷基硫酸鈉。較佳聚乙烯_山梨糖 醇-係聚乙稀（20)-山梨糖醇醋（同義詞，聚山梨醇酯2〇，以 商品名口土溫（TWeen)2〇TM出售）及聚氧乙稀（2〇)山梨糖醇單 油酸醋（同義詞，聚山梨醇醋80,以商品名吐溫8〇以出 售）。較佳聚乙二醇-聚丙二醇係彼等以商品名piur〇ni_ F68或P〇loxamer 188™出售者。較佳聚氧乙稀-硬脂酸酉旨係 彼等以商品名My#出售者。較佳聚氧乙烯單月桂基鍵係 119282.doc -13- 200815029 彼等以商品名Brij™出售者。當使用聚乙烯_山梨糖醇-聚 乙烯（20V山梨糖醇酯（吐溫2〇tm)及聚氧乙烯（2〇)山梨糖醇 單油酸酯（吐溫80TM)時，其通常以介於約〇 〇〇1至約1%之 量使用，較佳以介於約0.005至約〇1%之量使用，尤佳以 介於約0.01%至約0/02%臂~之量使用。

本文所用術語「緩衝液」係醫藥上可接受之缓衝液。適 宜醫藥上可接受之緩衝液包括（但不限於）組胺酸緩衝液、 檸檬酸緩衝液、琥珀酸緩衝液、醋酸緩衝液及磷酸緩衝 液。較佳緩衝液包含L-組胺酸或^組胺酸與1•組胺酸鹽及 等滲性試劑之混合物，㈣習此項技術者已知之酸或驗調 節pH。上述組胺酸緩衝液通常以介於約丨mM至約1〇〇瓜％ 之量使用，較佳以介於約5 mM至約5〇㈤“之量使用，尤佳 以、、勺20 mM之里使用。不受所用緩衝液之限制，將調節 至一包含介於約5·〇至約7.0之值，較佳介於約5·5至約6·5之 值，尤佳約6 · 0之值。 本文所用術語「等渗性試劍 你主 寸〜丨王Α釗」代表醫藥上可接受之等》 性試劑。等滲性試劑用於提供㈣性調配物。料性調② 物係液體或自固體形式(例如’冷來乾燥形式)重構之$ 體，並代表具有與和其相比較之笨 、 仰权又杲些其他溶液（例如生ij 鹽溶液及血清）相同蓉炎夕、、六、六 月η目jj寺今I·生之浴液。適宜等滲性試劑包去 (但不限於）氯化鈉、氟化_、葡 f葡匈糖、甘油及任何來自患 基酸群之組份、糖類及其組合。笤 寺凑性試劑通常以介於髮 5 mM至約350 mM之總量使甩。 本文中與本發明調配物一起#用 灸便用之術語「液體」代表名 119282.doc -14- 200815029 介於至少約2至約8。(：之溫度下為液體之調配物。 本文中與本發明調配物-起使用之術語「冷純燥」代 表藉由任何熟習此項技術者已知之冷;東_乾燥方法（例如市 :冷凍-乾燥裝置)冷;東調配物並隨後自冷凍内容物中使冰 昇華而乾燥之調配物。

胺酸、丙胺酸、苯丙胺酸、酪胺酸、色胺酸、甲硫胺酸 絲胺酸、脯胺酸。 ▲本文所用術語「胺基酸」代表量介於約i至約1〇〇亳克/ 毫升之胺基酸’其包括(但不限於)精胺酸、甘胺酸、鳥胺 酸、離胺酸、組胺酸、穀胺酸、天冬胺酸、異白胺酸、白 本文所用術語「糖」代表以介於約25祕至約5〇〇福之 i使用之酉藥上可接文之糖。適宜糖包括（但不限於）海藻 糖、蔗糖、乳糖、葡萄糖、甘露糖、麥芽糖、半乳糖、果 糖、山梨糖、棉子糖、葡萄糖胺、甲基葡萄糖胺（所謂 的「葡曱胺（Meglumine)」）、半乳糖胺及神經胺酸。 術浯「穩定劑」意指醫藥上可接受之穩定劑，例如（但 不限於）上文所述之胺基酸及糖以及熟習此項技術者已知 之任何種類及分子量之市售環糊精及葡聚糖。 術語「抗氧化劑」代表醫藥上可接受之抗氧化劑。 如上文所提及，本發明之一態樣係關於包含以下各物之 IGF-1R調配物： -約1至約150毫克/毫升之huMabiGF-lR， -約0.001至約1%之至少一表面活性劑，以及 -約1至約1 00 mM之缓衝液， 119282.doc -15- 200815029 -於約5.0至約7·〇之pH下。 本發明調配物較佳包含約0.001至約1%之至少一表面活 性劑。 在某一實施例中，本發明調配物包含： -約1至約150毫克/毫升之huMabIGF-lR， -約0·005至約0.05%之至少一表面活性劑，以及 -約1至約100 mM之緩衝液， -於約5.0至約7.0之PH下。 本發明調配物可呈液體形式、冷凍乾燥形式或自冷凍乾 燥形式重構之液體形式。 在某一實施例中，本發明調配物係冷凍乾燥調配物。在 形成更高分子量之微粒及聚集體（其通常很難使用相同濃 度之所闡述抗IGF-1R人類單株抗體之液體調配物達成）方 面，本务明之冷/東乾燥調配物具有穩定性增強之優點。

等醫藥技術中已知之任何其他非經腸方式投與。 本發明調配物進一步包含一

組合組成之群。

胺、N-曱基葡萄糖胺、半乳糖胺、 、糖、乳糖、葡萄糖、甘露 山梨糖、棉子糖、葡萄糖 5、神經胺酸及其組合組成 119282.doc -16- 200815029 之群。 本發明調配物可進一步包含一或多種以下成份：抗氧化 劑，抗壞血酸、谷胱甘肽；防腐劑，例如間-曱苯齡、苯 酚、苯曱醇、對羥基苯曱酸曱酯、對羥基苯甲酸丙酯、氯 丁醇、&柳水、氣苄烧銨；環糊精，例如經丙基_ p _環糊 精、磺基丁基乙基-β-環糊精、β_環糊精；聚乙二醇，例如 PEG 3000、3350、4000、6000 ;白蛋白，人血清白蛋白 (HSA)、牛血清白蛋白（BSA);多元醇，甘油、乙醇、甘露 醇；鹽，醋酸鹽（例如醋酸鈉）、氯化鎂、氯化舞；胺丁三 醇；EDTA(例如 Na_EDTA)。 本發明調配物進一步包含一或多種如上文所界定之穩定 劑及在此項技術中亦稱作「凍乾保護劑」之成份，例如此 項技術中已知之糖類、糖醇類、胺基酸類及葡聚糖類。 在某一實施例中，本發明調配物包含以下調配物，或呈 液體、冷凍乾燥形式或自冷凍乾燥形式重構之液體： -約1至約150毫克/毫升之huMabIGF-lR， -0.01%吐溫20〜/乂， -20 mM L-組胺酸， -140 mM NaC卜 -於pH 6.0下。 本發明調配物亦包含以下特定調配物： -25¾ 克/ ¾ 升之 huMab IGF -1R， -0.01%聚山梨醇酯20， -20 mM L-組胺酸， 119282.doc -17- 200815029 -140 mM NaC卜 -於pH 6.0下。 或 -25 毫克/毫升之huMabIGF-lR， -0.03%聚山梨醇酯20， -20 mM L-組胺酸， -140mMNaC 卜 -於 pH 6 · 0 下。 或 -25 毫克 / 毫升之 huMabIGF-lR， -0.05%聚山梨醇酯20， -20 mM L-組胺酸， -140 mM NaC卜 -於 pH 6.0下。 或 - 10毫克/毫升之huMab IGF-1R， -0.01%聚山梨醇酯20， -20 mM L-組胺酸， -140 mM NaC卜 -於 pH 6.0下。 或 -10 毫克/ 毫升之 huMab IGF-1R， -0.03%聚山梨醇酯20， -20 mM L-組胺酸， -18 - 119282.doc 200815029 -140 mM NaCl > -於 pH 6.0下。 或 -10毫克/毫升之huMab IGF-1R， -0.05%聚山梨醇酯20， -20 mM L-組胺酸， -140 mM NaCH， -於 ρ Η 6 · 0 下。 或 -25 毫克/毫升之 huMabIGF-lR， -20 mM L-組胺酸， -140 mM NaCl ^ -於 pH 5 · 5 下。 或 -25 毫克 / 毫升之 huMabIGF-lR， -0.01%聚山梨醇酯20， -20 mM L-組胺酸， -250 mM二水合海藻糖， -於pH 5.5下。 或 -25 毫克/毫升之huMabIGF-lR， -20 mM L-組胺酸， -250 mM二水合海藻糖， -於pH 6.0下。 -19- 119282.doc 200815029 或 -25 毫克/毫升之 huMabIGF-lR， -0.01%聚山梨醇酯20， -20 mM L-組胺酸， -250 mM二水合海藻糖， -於 p Η 6 · 0 下。 或 -25 毫克/毫升之huMabIGF-lR， -20 mM L-組胺酸， -250 mM二水合海藻糖， -0.05%聚山梨醇酯20， -於pH 6.0下。 或 -25 毫克/毫升之 huMabIGF-lR， -20 mM L-組胺酸， -60 mM二水合海藻糖， -0.01%聚山梨醇酯20， -於 ρ Η 6.0 下。 或 -25 毫克 / 毫升之 huMabIGF-lR， -20 mM琥珀酸， -250 mM二水合海藻糖， -0.01%聚山梨醇酯20， -於 pH 5.5 下。 119282.doc -20- 200815029 或 -25 毫克/毫升之 huMabIGF-lR， -20 mM L-組胺酸， -60 mM二水合海藻糖， -0 · 01 %聚山梨醇酉旨2 0， -於 pH 6.0下。 在本發明調配物之較佳實施例中，該調配物係呈冷康^ 燥形式並在經適宜量注射用水重構後包含以下各物·· -25 毫克/毫升之 hUMabIGF-lR， - 0·01%聚山梨醇酯2〇， -20 mM L'組胺酸， -25 0 mM二水合海藻糖， -於 pH 5.5下。 /匕調配物於2至代及饥下儲存大約6個月後展示良好 敎性，#中高分子量物f不到15%，且不形成可見及顯 微鏡下可見之顆粒。向液體調配物施隸|及多次;東融步 驟以模擬製造期間可能發生之物理應力條件，例如由壓力 ㈣及填充、冷;東乾燥及修整操作導致。發現此調配物在 / C下振盪—周後保持穩定。不能檢測到可見及顯 ’下可見顆粒之形成且高分子量（HMW)物質之百分率無 明顯增加’表明可觀測到可溶性團聚體形成（見附。 【實施方式] ; 實例 用於本發明靜脈内投與之液體及冷綠燥藥物產品調配 119282.doc -21 - 200815029 物係如下產生： 大約10及25毫克/臺4 + u ^， uMab IGF-1R溶於生產緩衝液 (大約1〇 ^組胺酸緩衝液和大約1M)祕NaCl)中之溶液 用大量水及各自的最終調配物之緩衝鹽㈣透析（參見具 有調配物之準確成份之本、^ 攻伤之表）。若須要，透析前，藉由使用 市售離心過濾裝置過滹來辦知1 &、命& ^ λ 愿不立曰加蛋白濃度，隨後藉由用透析

緩衝液稀釋將蛋白濃声,$ 括 / /辰度凋即至期望蛋白濃度。按需要向透 析緩衝液中添加用於稳定蛋白及實施等滲性調節之糖類及 鹽。向呈2至40倍儲備原液形式之透析後調配物中添加表 面活性劑。或者，使用一市售切向流過濾裝置（例如，具 有—s Hydr〇Sart膜（3〇,〇〇〇Da分子量截止點）之Ακτα CF(GE Healthcare))達成緩衝液交換及濃縮。藉由使用適 宜量濃縮儲備原液交換緩衝液後，添加諸如糖類、鹽或表 面活性劑等成份。所有調配物經〇 22微米低蛋白結合濾膜 無囷過濾並在無菌條件下均分於用塗覆特氟隆之 橡膠塞及鋁箍夾帽封閉之無菌6毫升玻璃小瓶内。該等調 配物於不同溫度下儲存不同時間段並取出以藉由以下方法 在個別段落中所指出之時間點上實施分析：丨）uv分光光 度術、2)大小排除層析法（SEC)以及3)測定溶液混濁度之遮 光法。此外，對母一樣品使用geidenader V90-T儀器實施 可見顆粒之分析。可見顆粒之出現可藉由HIAC R〇yc〇裝置 評估。 / 查燥調配物之製備 119282.doc •22- 200815029 二液體調配物中所述製備25毫克/毫升h—b -、之:谷液"斤有調配物皆經〇22微米低蛋白結合渡膜 …、威過濾並在益菌條件下的八& & # 心、 1田兔 …祕件下均77於無_玻璃小瓶内。該等小 瓶用適於冷凍乾燥製程使用 夾帽邛八#„ 土设特虱隆之橡膠塞及鋁箍 封閉，並轉移至冷; 東乾燥機之乾操室中。任何熟 2員技術者已知之冷〉東乾燥方法意欲涵蓋於本發明之範 …例如’此研究中所用冷;東乾燥方法包括自室溫冷卻 義物至大約rc(預冷卻），隨後以約rc/分鐘至心分鐘 之變溫速率於-贼下冷;東仰㈣！）。可以0.3至0.5口分 鐘之變溫速率自書C至_3(rc實施第一次乾燥步驟，缺後 於大約75至80毫毛之室壓力下保持在鐵至少5〇小時。 可以（M至o.rcz分鐘之變溫速率自哉至抑實施第二 次乾燥步驟’並於大約5G謂毫€之室壓力下保持在饥 至夕5小4。發現用所述冷康乾操製程乾燥之A犯F_ 1R調配物具有約<5分鐘之合宜快速重構時間。冷來乾燥可 ^LyoStar II Freeze-dryer(FTS Systems > Stone Ridge, NY, USA and Usifroid 〇ri〇n，心咖㈣，f中達成。藉由 Kad-Fiseher法量測，此研究之所有冷綠燥濾餅具有大約 0.1至5.0%之殘餘水含量。冷;東乾燥小瓶於不同溫度下儲 存不同時間。藉由以下方法分析前，冷床乾燥調配物用相 應容積的注射用水（WFI)重構：D uv分光光度計、2)重構 %間測疋、3)大小排除層析法（SEC)以及例定溶液混濁度 之遮光法。此外，對每—樣品使mSeidenader ν9〇 τ儀器 (Seidenader，Marktschwaben，Gemany)實施可見顆粒之分 119282.doc 23- 200815029 析。可見顆粒之出現可藉由HIAC Royco裝置評估。 實施大小排除層析法（SEC)以檢测調配物中可溶性高分 子量物質（團聚體）及低分子量水解產物。該方法使用 Merck Hitachi 7000 HPLC 儀器或帶 UV 偵測器之 Waters Alliance 2795(檢測波長λ(280奈米））。二個儀器皆裝備有 TSK G3000 SWXL管柱；該方法使兩 〇·2Μ Κ2ΗΡ04/0.25Μ • KC15 pH 7.0作為流動相。流速為0.5毫升/分鐘（等梯度）， 於25°C管柱溫度下運行30分鐘。稀釋樣品至0.5毫克/毫升 抗體濃度後’分別地於 Uvikon 932(Kontron Instruments) (波長278奈米）及Varian Cary Bio UV分光光度計（波長280 奈米）上實施用於測定蛋白濃度之UV分光光度術。為測定 混濁度，於室溫下使用HACH 2100AN濁度計以FTU(混濁 度單位）量測不透光度。 本發明液體huMAb IGF-1R藥物產品調配物之成份及於2 至8°C下儲存3個月後之穩定性數據 _ 調配物A係具有以下成份之液體調配物：25毫克/毫升之 huMab IGF-1R、20 mM L_組胺酸、140 mM NaCl、0.01% . 聚山梨醇酯20，於pH 6.0下。 時間點 蛋白濃度 高分子量物質(％) 以FTU表示之混濁度(混濁度） 初始 24.47 0.82 9.94 4周 22.35 1.0 10.3 8周 23.02 1.31 9.83 12周 23.59 1.46 9.22 調配物B係具有以下成份之液體調配物：25毫克/毫升之 huMab IGF-1R、20 mM L-組胺酸、140 mM NaC卜 0.03% 119282.doc -24- 200815029 聚山梨醇酯20，於pH 6.0下。 時間點 蛋白濃度 高分子量物質(％) 以FTU表示之混濁度 初始 24.98 0.84 9.79 4周 23.58 1.01 9.97 8周 25.43 1.37 10.5 12周 23.68 1.49 10.3 調配物C係具有以下成份之液體調配物：25毫克/毫升之 huMab IGF-1R、20 mM L-組胺酸、140 mM NaC卜 0.05% 聚山梨醇醋20，於pH6.0下 時間點 蛋白濃度 高分子量物質(％) 以FTU表不之混濁度 初始 24.42 0.85 10.1 4周 21.57 1.02 10.5 8周 25.0 1.36 10.6 12周 23.97 1.51 10.2

調配物D係具有以下成份之液體調配物：10毫克/毫升之 tmMab IGF-1R、20 mM L-組胺酸、140 mM NaC卜 0.01% 聚山梨醇酯20，於pH 6·0下。 時間點 蛋白濃度 高分子量物質(％) 以FTU表示之混濁度 初始 9.87 0.63 4.42 4周 9.61 0.75 4.44 8周 9.72 0.97 4.53 12周 9.63 1.11 4.24 調配物Ε係具有以下成份之液體調配物：10毫克/毫升之 huMab IGF-1R、20 mM L-組胺酸、140 mM NaC卜 0.03% 聚山梨醇20，於pH 6.0下。 時間點 蛋白濃度 高分子量物質(％) 以FTU表示之混濁度 初始 9.98 0.69 4.26 4周 9.68 0.79 4.72 8周 9.68 1.05 4.54 12周 9.62 1.59 4.26 119282.doc -25- 200815029 調配物F係具有以下成份之液體調配物：1 0毫克/毫升之 huMab IGF-1R、20 mM L-組胺酸、140 mM NaC卜 0.05% 聚山梨醇酯20，於pH 6.0下。 時間點 蛋白濃度 高分子量物質(％) 以FTU表示之混濁度 初始 9.81 0.67 4.45 4周 9.69 0.83 4.36 8周 9.62 1.19 5.01 12周1 9.18 1.45 4.44

調配物G係具有以下成份之液體調配物：10毫克/毫升之 huMab IGF-1R、2〇 mM L-組胺酸、140 mM NaCl，於 pH 5.5 下。 時間點 蛋白濃度 高分子量物質(％) 以FTU表示之混濁度 初始 24.7 0.8 4.9 4周 24.6 1.0 3.9 8周 n.d. n.d. n.d. 12周 24.8 0.8 6.1 調配物Η係具有以下成份之液體調配物·· 25毫克/毫升之 huMab IGF-1R、20 mM L-組胺酸、250 mM二水合海藻 糖、0.01%聚山梨醇酯20，於pH 5.5下。 時間點 蛋白濃度 高分子量物質(％) 以FTU表示之混濁度 初始 27.1 1.29 3.58 4周 26.9 1.27 3.74 8周 29.33 1.43 5.03 12周 26.44 1.38 4.10 調配物I係具有以下成份之液體調配物：25毫克/毫升之 huMab IGF-1R、20 mM L-組胺酸、250 mM二水合海藻 糖，於pH 6.0下。 調配物J係具有以下成份之液體調配物：25毫克/毫升之 119282.doc -26 - 200815029 huMab IGF-1R、20 mM L-組胺酸、250 rnM二水合海藻 糖、0.01%聚山梨醇酯20，於pH 6.0下。 調配物K係具有以下成份之液體調配物：25毫克/毫升之 huMab IGF-1R、20 mM L-組胺酸、250 mM二水合海藻 糖、0.05%聚山梨醇酯20，於pH 6.0下。 調配物L係具有以下成份之液體調配物：25毫克/毫升之 huMab IGF-1R、20 mM L-組胺酸、60 mM二水合海藻糖、 0.01%聚山梨醇酯20，於pH 6.0下。 調配物Μ係具有以下成份之液體調配物：25毫克/毫升之 huMab IGF - 1R、20 mM號 J白酸、250 mM二水合海藻糖、 0.01 %聚山梨醇酯20，於pH 5.5下。 時間點 蛋白濃度 高分子量物質(％) 以FTU表示之混濁度 初始 26.13 1.49 7.06 4周 27.93 1.46 7.25 8周 26.59 1.62 8.20 12周 26.89 1.62 7.10 本發明冷康乾燥之huMAb IGF- 1R藥物產品調配物之成

份及於2至8°〇下儲存3個月後之穩定性數據 調配物N係具有25毫克/毫升之huMab IGF-1R、20 mM L-組胺酸、60 mM二水合海藻糖、0.01%聚山梨醇酯20， pH 6.0之重構溶液成份之冷凍乾燥調配物。 時間點 蛋白濃度 高分子量物質(％) 以FTU表示之混濁度 初始 27.40 1.37 3.99 4周 27.89 1.36 4.20 8周 27.93 1.43 5.04 12周 27.34 1.38 4.31 119282.doc -27- 200815029

調配物0係具有25毫克/毫升之huMab IGF-1R、20 mM L-組胺酸、60 rnM蔗糖、0.01%聚山梨醇酯20，pH 6.0之重 構溶液成份之冷凍乾燥調配物。 時間點 蛋白濃度 高分子量物質(％) 以FTU表示之混濁度 初始 24.77 0.93 5.77 4周 24.81 0.93 6.79 8周 24.11 0.88 5,38 12周 24.32 1.03 3.93 調配物P係具有25毫克/毫升之huMab IGF-1R、20 mM琥 珀酸、250 mM二水合海藻糖、0.01%聚山梨醇酯20，pH 5.5之重構溶液成份之冷凍乾燥調配物。 時間點 蛋白濃度 高分子量物質(％) 以FTU表示之混濁度 初始 26.9 1.45 7.17 4周 27.71 1.55 7.44 8周 26.59 1.43 7.13 12周 26.89 1.36 7.07

調配物Q係具有25毫克/毫升之huMab IGF-1R、20 mM

L-組胺酸、250 mM二水合海藻糖、0.01%聚山梨醇酯20， pH 5.5之重構溶液成份之冷凍乾燥調配物。 時間點 蛋白濃度 高分子量物質(％) 以FTU表示之混濁度 初始 27.11 1.33 3.59 4周 28.28 1.22 3.49 8周 27.81 1.30 4.65 12周 28.22 1.18 4.04 【圖式簡單說明】 附圖1闡述振盪及凍融步驟後本發明調配物中高分子量 物質之百分比。 119282.doc -28-

Claims (1)

1. 200815029 十、申請專利範圍： 1 · 一種調配物，其包含： ， 2. - 約1至約150毫克/毫升之huMab IGF-1R， - 約〇·〇〇1至約1%之至少一種表面活性劑，以及 - 約1至約10 0 mM之缓衝液， - 於約5.0至約7.0之pH值。 如請求項1之調配物，其包含約0.005至約〇1%之至少 種表面活性劑。 ⑩3. 如請求項1之調配物’其呈液體形式、呈冷凍乾燥形式 或呈自冷凍乾燥形式重構之液體形式。 4. 如請求項1至3中任一項之調配物’其可藉由靜脈内（iv) 或皮下（S.C.)或任何其他非經腸方式投與。 5. 如請求項1至3中任一項之調配物，其進一步包含一或多 種量介於約5 mM至約350 mM之等滲性試劑。 6. 如明求項5之調配物，其中該等滲性試劑係選自由氯化 7. 鈉（NaCl)、氟化鉀、包含葡萄糖之糖類、甘油、胺基酸 及其組合組成之群。 如請求項1至3中任一項之調配物，其進一步包含量介於 約25 mM至約5 00 mM之糖。 8. 如請求項7之調配物，其中該糖係選自由海藻糖、蔗 糖、乳糖、葡萄糖、甘露糖、麥芽糖、半乳糖、果糖、、 t梨糖、棉子糖、_萄糖胺、N_甲基葡萄糖胺（「葡甲 月女」）、半乳糖胺、神經胺酸組成之群。 9. 如凊求項1至3中任一項之調配物，其進一步包含一或多 119282.doc 200815029 種選自下列群組之各醫藥上可接受 m 1 抗虱化劑，抗 裘血酉义、谷胱甘肽；防腐劑， 士 ή d s之，間-甲苯酚、苯 敢、本甲醇、對經基苯甲酸甲酯、 ^ T义了啪對羥基苯甲酸丙酯、 虱丁醇、硫柳汞、氯节烷銨；環糊精，具體言之，羥丙 基β %糊精、磧基丁基乙基環糊精、卜環糊精；聚乙 二醇，具體言之，PEG 3000、335〇、4〇〇〇或6〇〇〇;白蛋 白’人血清白蛋白（HSA)、牛血清白蛋白（BSA);多元

   醇’甘油、乙醇、甘露醇；鹽，醋酸鹽具體言之醋酸 納、氯化鎂、氯化鈣；胺丁三醇；EDTA，具體言之， Na-EDTfA 〇 1 〇·如請求項1至3中任一項之調配物，其中該調配物包含： "約1至約150毫克/毫升之huMab IGF-1R， "〇·〇 1 % 吐溫（Tween)20 w/v， -20 mM L·組腔酸， -140 mM NaCl > -於 pH 6 · 0 〇 11.如請求項1至3中任一項之調配物，其中該調配物包含· -25 毫克 /毫升之 huMab IGF-1R， -0.01%聚山梨醇酯20， -20 mM L-組胺酸， -140 mM NaCl > -於pH 6.0 ; 或 -25 毫克 /毫升之 huMab IGF-1R， 119282.doc 200815029 -0.03%聚山梨醇酯20， -20 mM L-組胺酸， -140 mM NaCl， -於pH 6·0 ; 或 -25 毫克 /毫升之 huMab IGF-1R， -0.05%聚山梨醇酯20， -20 mM L-組胺酸， -140 mM NaC卜 -於 pH 6.0 ; 或 -10 毫克 / 毫升之 huMab IGF-1R， -0.01%聚山梨醇酯20， -20 mM L-組胺酸， -140 mM NaCn， -於pH 6.0 ; 或 -10 毫克/毫升之 huMab IGF-1R， -0.03%聚山梨醇酯20， -2 0 mM L-組胺酸， -140 mM NaC卜 -於 pH 6.0 ; 或 -10毫克/毫升之 huMab IGF-1R， 119282.doc 200815029 -0.05%聚山梨醇酯20， -20 mM L-組胺酸， -140 mM NaC卜 -於 pH 6.0 ; 或 -25 毫克 /毫升之 huMab IGF-1R， -20 mM L-組胺酸， -140 mM NaC卜

   -於 pH 5.5 ; 或 -25 毫克 /毫升之 huMab IGF-1R， -0.01%聚山梨醇酯20， -20 mM L-組胺酸， -250 mM二水合海藻糖， -於 p Η 5 · 5 ;

   -25 毫克/毫升之huMab IGF-1R， -20 mM L-組胺酸， -250 mM二水合海藻糖， -於 pH 6.0下； 或 -25 毫克 /毫升之 huMab IGF-1R， -0.01%聚山梨醇酯20， -20 mM L-組胺酸， 119282.doc 200815029 -2 5 0 mM二水合海藻糖， -於 pH 6·0 ; 或 -25 毫克 /毫升之 huMab IGF-1R， - 20 mM L-組胺酸， -25 0 mM海藻糖二水合物（trehalose dihydrate)， -0.05%聚山梨醇酯20， -於 pH 6·0 ; 或 -25 毫克 /毫升之 huMab IGF-1R， -20 mM L-組胺酸， -60 mM海藻糖二水合物， -0.01%聚山梨醇酯20， =於 pH 6·0 ; 或 -25 毫克/毫升之 huMab IGF-1R， -20 mM玻始酸， -250 mM海藻糖二水合物， -0.01%聚山梨醇酯20， -於 pH 5.5 ; 或 -25 毫克/毫升之 huMab IGF-1R， -20 mM L-組胺酸， -6 0 mM海藻糖二水合物， 119282.doc 200815029 -〇·〇1%聚山梨醇酯2〇， "於 pH 6·0。 12. 13. 至11中任項之調配物於製備用 由IGF-IR受辦綱r _ 用於治療 又體凋即之疾病之樂劑之用途。 如晴求項12之 腸癌、非小細 用途’其中該疾病係選自由乳腺癌、 胞肺癌（NSCLC)及前列腺癌組成之群。 結直

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