CN103505729B - 一种稳定的狂犬病毒人源抗体组合制剂 - Google Patents

一种稳定的狂犬病毒人源抗体组合制剂 Download PDF

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CN103505729B CN201310197288.1A CN201310197288A CN103505729B CN 103505729 B CN103505729 B CN 103505729B CN 201310197288 A CN201310197288 A CN 201310197288A CN 103505729 B CN103505729 B CN 103505729B
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Abstract

本发明公开了一种稳定的狂犬病毒人源抗体组合制剂。该抗体组合制剂由重组人源狂犬病毒抗体NC08及NM57、缓冲剂、表面活性剂、等渗调节剂和抗氧化剂组成，pH为5.5～6.5。本发明公开的制剂具有使两种抗体长时间保持稳定，溶解性好以及便于使用的优点，可以用于狂犬病的暴露后预防。

Description

一种稳定的狂犬病毒人源抗体组合制剂
技术领域
本发明属于生物技术领域，更具体地，本发明公开了一种生物制剂。
背景技术
狂犬病是一种由弹状病毒科(狂犬病毒属，lyssavirus) 的RNA 病毒感染引起的急性进行性脑炎。一般来说，狗是该病的主要宿主，但是其他哺乳动物如浣熊、臭鼬、蝙蝠和狐狸也是常见的宿主。该病毒从动物宿主向人的传播通常是通过咬伤或抓伤穿过皮肤而发生的。由于狂犬病在人类中几乎总是致命的，因此怀疑感染也必须用积极的接触后治疗方案来治疗。
对于严重暴露的人，世界卫生组织(World Health Organization，WHO) 建议采用狂犬病疫苗注射结合抗狂犬病毒免疫球蛋白(rabies immune globulin，RIG) 的方法。目前使用的两类RIG 为人抗狂犬病毒免疫球蛋白(human rabies immune globulin，HRIG) 和马抗狂犬病毒免疫球蛋白(Equine rabies immune globulin，ERIG)。ERIG 由于对人体是异源蛋白，有时副反应比较严重，而HRIG价格昂贵，供应量有限并且有潜在的病原威胁，因此急需制备高效、价廉、副反应小的被动免疫制剂。
人源狂犬病毒单克隆抗体的研制和噬菌体抗体库技术的产生为解决被动免疫制剂问题提供了新的思路，目前报道了多种特异性结合多种狂犬病毒分离株并且抑制病毒感染细胞的单克隆抗体。如WO 2005/118644中描述的抗狂犬病毒抗体、中国专利ZL200610012910.7中描述的狂犬病毒人源单抗NM57和中国专利ZL201010171543.1 中描述的RVFab8等。本文中的NC08即ZL201010171543.1所述RVFab8的全抗体。
对动物的保护性实验表明，利用针对同一靶点的单抗cocktail进行治疗具有可行性和优越性(Goudsmit J，et al.2006)。单抗NM57、NC08均为重组人源狂犬病毒中和性抗体，两株单抗分别中和狂犬病毒的不同表位，两种这样的抗体混合剂（cocktail）可更有效的用于狂犬病暴露后的预防。
与任何蛋白质一样，抗体的生物学活性例如其结合亲和性或者中和活性依赖于至少核心氨基酸序列的构象完整性，同时需要保护蛋白质的多个功能基团免于降解。化学和物理不稳定性均可导致抗体降解。因为抗体比传统的有机和无机药物更大且更复杂，因此这种抗体的制剂会出现特殊问题。抗体稳定性可以受到多种因素影响，包括离子强度、pH、温度、重复冷冻/解冻循环、抗体浓度和剪切力。抗体的活性可以由于物理不稳定性和化学不稳定性而丧失，物理不稳定性包括变性、聚集(可溶及不可溶聚集体形成)、沉淀与吸附；化学不稳定性包括外消旋化、β-消除或者二硫键交换、水解、脱酰胺作用和氧化等等。这些不稳定性均可能导致生物学活性的降低、毒性和/或免疫原性的增加，抗体副产物或者衍生物的形成。
虽然现有技术领域指出了可适用于生产特定抗体制剂的许多制剂辅料，但是不能预测为了克服特定抗体可能具有的特定的不稳定性问题而应该加入哪些辅料以及应该加入的量。此外，研究人员仍难以发现在特定制剂内保持特定抗体化学和生物学稳定性的最佳条件如抗体浓度、pH和贮存温度等。因此找寻用于配制单一的单克隆抗体制剂的合适辅料和最佳条件充满了挑战。显然，找寻同时使两种不同的单克隆抗体长期保持稳定的合适辅料和最佳条件更加困难。同时该制剂组成还应适于抗体产品预期的给药方式，便于使用。
对于由NM57及NC08组成的单抗cocktail来说，需要找寻一种制剂组成使NM57及NC08抗体在长期贮存情况下同时保持稳定，所述制剂还应适于特定的给药途径，使用方便。
发明内容：
为了解决上述问题，本发明的申请人进行了大量的实验，对可以用于NM57、NC08组合制剂的辅料的类型和用量进行了大量的筛选，得到了稳定的方便于临床使用的NM57、NC08抗体组合制剂，从而达到了本发明的目的。
本发明提供了一种狂犬病毒人源抗体组合制剂，其特征在于，所述组合制剂主要成分为：(i)0.1～10mg/ml 狂犬病毒人源抗体NM57，其重链序列示于SEQ ID NO：1，其轻链序列示于SEQ ID NO：2；及(ii) 0.1～10mg/ml狂犬病毒人源抗体NC08，其重链序列示于SEQ ID NO：3，其轻链序列示于SEQ ID NO：4；及缓冲剂、表面活性剂、等渗调节剂和抗氧化剂，pH为5.5～6.5。
本发明提供了一种狂犬病毒人源抗体组合制剂，其特征在于，所述组合制剂由(i)0.1～10mg/ml 狂犬病毒人源抗体NM57，其重链序列示于SEQ ID NO：1，其轻链序列示于SEQ ID NO：2；及(ii) 0.1～10mg/ml狂犬病毒全人源抗体NC08，其重链序列示于SEQ ID NO：3，其轻链序列示于SEQ ID NO：4；及缓冲剂、表面活性剂、等渗调节剂和抗氧化剂组成，pH为5.5～6.5。
本发明公开的上述制剂，使用的缓冲剂为甘氨酸组氨酸的组合溶剂，组分含量为甘氨酸0～10mmol/L，组氨酸40～60mmol/L。
本发明公开的上述制剂，使用的表面活性剂为吐温-80，组分含量为0.05mg/ml。
本发明公开的上述制剂，使用的等渗调节剂为甘露醇或氯化钠之一或其组合，组分含量为质量体积比5%。
本发明公开的上述制剂，使用的等渗调节剂为甘露醇。
本发明公开的上述制剂，使用的抗氧化剂为EDTA，组分含量为0.5～2mmol/L。
本发明公开的上述制剂，由0.1～10mg/ml 狂犬病毒人源抗体NM57、0.1～10mg /ml狂犬病毒人源抗体NC08、3mmol/L甘氨酸、47mmol/L 组氨酸、0.05mg/ml 吐温-80、质量体积比5%甘露醇、1 mmol/L EDTA组成，pH为6.0。
本发明公开的上述制剂，优选液体制剂。
本发明公开的制剂可以使NM57，NC08两种抗体在2～8℃条件下至少一年保持稳定。适于免疫球蛋白注射的给药途径，使用方便。
具体实施方式
以下结合实施例进一步说明本发明，但下述实施例不应理解为对本发明的限制。
重组人源狂犬病毒单抗NM57按照公开号为CN101100663A的中国专利《重组人抗狂犬病毒单克隆抗体的制备方法》中公开的方法制备。
重组人源抗狂犬病毒单抗NC08是公开号为CN1018512131的中国专利《人源抗狂犬病毒蛋白中和性抗体（RVFab8）》所述RVFab8的全抗体，其全抗体的构建方法参照发明专利CN101100663A，其制备方法与NM57制备方法相同。
除非特别说明，其它原辅料均为市售药用辅料级别。
体外活性检测方法参见中华人民共和国药典2010年版三部“狂犬病免疫球蛋白效价测定法”第二法 快速荧光灶抑制试验法（附录 Ⅺ J，86-87页）。
在本发明下述的实施例中，虽然仅使用了甘氨酸组氨酸缓冲液，但使用其它的pH合适的常规缓冲液组成，如Tris缓冲液等，也能达到本发明的目的，这对于本领域的技术人员而言是显而易见的，因此，也属于本发明的保护内容。
在本发明的下述实施例中，虽然仅使用了EDTA作为抗氧化剂，但使用其它的抗氧化剂也能达到本发明目的，这对于本领域的技术人员而言是显而易见的，因此，也属于本发明的保护内容。
在本发明的下述实施例中，虽然仅使用了吐温-80作为表面活性剂，但使用其它的常规表面活性剂，也能达到本发明的目的，这对于本领域的技术人员而言是显而易见的，因此，也属于本发明的保护内容。
在本发明的下述实施例中，虽然仅使用了甘露醇作为等渗调节剂，但使用其它的常规等渗调节剂如NaCl等，也能达到本发明的目的，这对于本领域的技术人员而言是显而易见的，因此，也属于本发明的保护内容。
实施例1  NM57及NC08抗体组合制剂的制备。
按表1的配方分别配制不同的抗体组合制剂的液体制剂，溶剂为注射用纯水，获得半成品产品。
表1、不同抗体组合制剂的配方
将半成品产品无菌分装至西林瓶中，加盖胶塞及铝塑盖，获得成品。
实施例2 按表2的保存条件将实施例1中制备的编号为1～10的10组样品进行保存，定期用快速荧光灶抑制实验（RFFIT）测定溶液制剂中抗狂犬病毒抗体的中和活性，将保存前的产品作为对照，将保存后的产品活性与保存前的产品的活性的百分比值定义为保存后产品的活性。
表2、不同条件下保存的样品活性
  保存条件 0周 1周 　 　 　 　
1 37℃ 100%　 105%　 　 　 　 　
2 37℃ 100%　 96%　 　 　 　 　
3 37℃ 100%　 110%　 　 　 　 　
4 37℃ 100%　 95% 　 　 　 　
5 37℃ 100%　 95%　 　 　 　 　
6 37℃ 100%　 93%　 　 　 　 　
7 37℃ 100%　 　98% 　 　 　 　
8 37℃ 100%　 　100% 　 　 　 　
9 37℃ 100%　 　103% 　 　 　 　
10 37℃ 100%　 　95% 　 　 　 　
  保存条件 0周 3周 6周 9周 12周 　
1 25℃ 100%　 106%　 97%　 　100% 　97% 　
2 25℃ 100%　 　106% 　96% 　102% 　110% 　
3 25℃ 100%　 105%　 107%　 96%　 103%　 　
4 25℃ 100%　 100%　 95%　 104%　 96%　 　
5 25℃ 100%　 　95% 98%　 93%　 95%　 　
6 25℃ 100%　 　98% 98%　 100%　 　80% 　
7 25℃ 100%　 97%　 97%　 106%　 93%　 　
8 25℃ 100%　 　106% 　103% 　100% 97%　 　
9 25℃ 100%　 　97% 　102% 102%　 97%　 　
10 25℃ 100%　 　110% 95%　 　95% 95%　 　
  保存条件 0月 1月 2月 3月 6月 12月
1 2-8℃ 100%　 　105% 107%　 97%　 　97% 110%　
2 2-8℃ 100%　 98%　 103%　 　100% 100%　 105%　
3 2-8℃ 100%　 102%　 95%　 97%　 100%　 96%　
4 2-8℃ 100%　 110%　 107%　 100%　 　93% 95%　
5 2-8℃ 100%　 95%　 97%　 　96% 　97% 105%　
6 2-8℃ 100%　 102%　 　97% 　93% 　89% 　85%
7 2-8℃ 100%　 　104% 　104% 96%　 95%　 100%　
8 2-8℃ 100%　 　107% 　95% 102%　 96%　 100%　
9 2-8℃ 100%　 96%　 100%　 　98% 95%　 　96%
10 2-8℃ 100%　 103%　 105%　 96%　 　96% 110%　
试验结果表明，除样品6以外，本发明提供的制剂在2-8℃保存一年，或37℃保存2周，或25℃保存3个月的情况下生物学活性仍能保持在90%以上。
实施例3 按表2的保存条件将实施例1中制备的编号为1～10的10组样品进行保存，定期用分子筛高压液相层析（SEC-HPLC，TSK G3000 SWXL 7.8mmI.D.x30cm）检测溶液制剂中抗体的纯度，考察制剂中抗体NM57、NC08的稳定性。
稳定性检测方法：
仪器：Waters HPLC系统（光电二极管阵列检测器）
色谱柱：TSK G3000 SWXL 7.8mmI.D.x30cm
流动相：200mmol/L PB，1%异丙醇，pH7.0
流速：0.5ml/min
上样量：100μg
检测波长：280nm
表3、不同条件下保存的样品稳定性
实施例 保存条件 0周 1周 　 　 　 　
1 37℃ 100%　 99.7% 　 　 　 　
2 37℃ 99.9%　 99.7% 　 　 　 　
3 37℃ 100%　 99.5% 　 　 　 　
4 37℃ 99.0%　 98.7% 　 　 　 　
5 37℃ 99.5%　 99.3% 　 　 　 　
6 37℃ 99.1%　 98.2% 　 　 　 　
7 37℃ 100%　 99.5% 　 　 　 　
8 37℃ 99.2%　 98.9% 　 　 　 　
9 37℃ 99.4%　 99.1% 　 　 　 　
10 37℃ 99.7%　 99.2% 　 　 　 　
实施例 保存条件 0周 3周 6周 9周 12周 　
1 25℃ 100%　 99.5% 99.7% 99.3% 99.3% 　
2 25℃ 99.9%　 99.9% 99.5 98.8% 99.2% 　
3 25℃ 100%　 99.7% 99.6% 99.5% 99.2% 　
4 25℃ 99.0%　 99.1% 99.3% 99.3% 99.0% 　
5 25℃ 99.5%　 99.4% 99.3% 99.1% 98.5% 　
6 25℃ 99.1%　 98.5% 98.7% 98.3% 97.8% 　
7 25℃ 100%　 99.5% 99.3% 99.4% 99.3% 　
8 25℃ 99.2%　 99.2% 98.9% 98.5% 98.7% 　
9 25℃ 99.4%　 99.5% 99.1% 98.7% 98.5% 　
10 25℃ 99.7%　 99.3% 99.5% 99.2% 98.9% 　
实施例 保存条件 0月 1月 2月 3月 6月 12月
1 2-8℃ 100%　 99.8% 99.5% 99.6% 99.3% 99.3%
2 2-8℃ 99.9%　 99.9% 99.7% 99.6% 99.4% 99.3%
3 2-8℃ 100%　 99.6% 99.6% 99.7% 99.5% 99.4%
4 2-8℃ 99.0%　 99.2% 98.9% 99.1% 98.7% 98.5%
5 2-8℃ 99.5%　 99.1% 98.9% 98.6% 98.8% 98.4%
6 2-8℃ 99.1%　 99.2% 98.8% 98.2% 97.8% 96.8%
7 2-8℃ 100%　 99.8% 99.5% 99.6% 99.3% 99.1%
8 2-8℃ 99.2%　 99.4% 99.1% 98.7% 98.7% 98.8%
9 2-8℃ 99.4%　 99.3% 98.9% 99.1% 98.8% 98.6%
10 2-8℃ 99.7%　 99.7% 99.5% 99.1% 99.3% 99.2%
试验结果表明，除样品6以外，本发明提供的制剂在2-8℃保存一年，或37℃保存2周，或25℃保存3个月的情况下SEC-HPLC纯度仍能保持在98%以上。
本发明提供的制剂组成能使两种抗体长期保持稳定性，适于免疫球蛋白注射的给药途径，使用简单方便，从而达到了本发明的目的。
  序列表
<110>  华北制药集团新药研究开发有限责任公司
<120>  一种稳定的狂犬病毒人源抗体组合制剂
<160>  4     
<170>  PatentIn version 3.3
<210>  1
<211>  457
<212>  PRT
<213>  人
<400>  1
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Asn Arg Tyr
            20                  25                  30          
Thr Val Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
        35                  40                  45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Arg Phe
    50                  55                  60
Gln Gly Arg Leu Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Glu Asn Leu Asp Asn Ser Gly Thr Tyr Tyr Tyr Phe Ser Gly
            100                 105                 110
Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
        115                 120                 125
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
    130                 135                 140
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
145                 150                 155                 160
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
                165                 170                 175
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
            180                 185                 190
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
        195                 200                 205
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg
    210                 215                 220
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
225                 230                 235                 240
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
                245                 250                 255
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
            260                 265                 270
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
        275                 280                 285
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
    290                 295                 300
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
305                 310                 315                 320
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
                325                 330                 335
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
            340                 345                 350
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
        355                 360                 365
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
    370                 375                 380
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
385                 390                 395                 400
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
                405                 410                 415
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
            420                 425                 430
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
        435                 440                 445
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
    450                 455
<210>  2
<211>  218
<212>  PRT
<213>  人
<400>  2
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Arg Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1               5                   10                  15
Ser Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Ile Gly Gly Tyr
            20                  25                  30
Asn Phe Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
        35                  40                  45
Met Ile Tyr Asp Ala Thr Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65                  70                  75                  80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Cys Ser Tyr Ala Gly Asp
                85                  90                  95      
Tyr Thr Pro Gly Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
            100                 105                 110
Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser
        115                 120                 125
Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp
    130                 135                 140
Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro
145                 150                 155                 160
Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn
                165                 170                 175
Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys
            180                 185                 190
Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val
        195                 200                 205
Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
    210                 215
<210>  3
<211>  450
<212>  PRT
<213>  人
<400>  3
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1               5                   10                  15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Val
            20                  25                  30
Asn Ser Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
        35                  40                  45
Trp Ile Gly Asn Phe Tyr Tyr Ser Gly Asn Thr His Tyr Asn Pro Ser
    50                  55                  60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Gly Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65                  70                  75                  80
Ser Leu Lys Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
                85                  90                  95
Cys Ala Arg Gln Ser Thr Ile Gly Gly Phe Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
            100                 105                 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
        115                 120                 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
    130                 135                 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145                 150                 155                 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
                165                 170                 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
            180                 185                 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
        195                 200                 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
    210                 215                 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225                 230                 235                 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
                245                 250                 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
            260                 265                 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
        275                 280                 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
    290                 295                 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305                 310                 315                 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
                325                 330                 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
            340                 345                 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
        355                 360                 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
    370                 375                 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385                 390                 395                 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
                405                 410                 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
            420                 425                 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
        435                 440                 445
Gly Lys
    450
<210>  4
<211>  217
<212>  PRT
<213>  人
<400>  4
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Leu Gly Gln
1               5                   10                  15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Ile Gly Asn Tyr
            20                  25                  30
Asn Leu Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
        35                  40                  45
Ile Ile Tyr Glu Val Thr Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65                  70                  75                  80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asn Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ala Thr
                85                  90                  95
Lys Asn Tyr Trp Ile Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Arg Gly
            100                 105                 110
Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu
        115                 120                 125
Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe
    130                 135                 140
Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val
145                 150                 155                 160
Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys
                165                 170                 175
Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser
            180                 185                 190
His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu
        195                 200                 205
Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
    210                 215

Claims (2)

1.一种狂犬病毒人源抗体组合制剂，其特征在于，所述组合制剂主要成分为：(i)0.1～10mg/ml 狂犬病毒人源抗体NM57，其重链序列示于SEQ ID NO：1，其轻链序列示于SEQ ID NO：2；及(ii) 0.1～10mg/ml狂犬病毒人源抗体NC08，其重链序列示于SEQ ID NO：3，其轻链序列示于SEQ ID NO：4；及缓冲剂、表面活性剂、等渗调节剂和抗氧化剂，pH为5.5～6.5；其缓冲剂为甘氨酸组氨酸的组合溶剂，组分含量为甘氨酸0～10mmol/L，组氨酸40～60mmol/L；其表面活性剂为吐温-80，组分含量为0.05mg/ml；其等渗调节剂为甘露醇或氯化钠之一或其组合，组分含量为质量体积比5%；其抗氧化剂为EDTA，组分含量为0.5～2mmol/L。
2.一种狂犬病毒人源抗体组合制剂，其特征在于，所述组合制剂由(i)0.1～10mg/ml 狂犬病毒人源抗体NM57，其重链序列示于SEQ ID NO：1，其轻链序列示于SEQ ID NO：2；及(ii) 0.1～10mg/ml狂犬病毒人源抗体NC08，其重链序列示于SEQ ID NO：3，其轻链序列示于SEQ ID NO：4；及缓冲剂、表面活性剂、等渗调节剂和抗氧化剂组成，pH为5.5～6.5；其缓冲剂为甘氨酸组氨酸的组合溶剂，组分含量为甘氨酸0～10mmol/L，组氨酸40～60mmol/L；其表面活性剂为吐温-80，组分含量为0.05mg/ml；其等渗调节剂为甘露醇或氯化钠之一或其组合，组分含量为质量体积比5%；其抗氧化剂为EDTA，组分含量为0.5～2mmol/L。
3. 权利要求1或2所述的制剂，由0.1～10mg/ml 狂犬病毒人源抗体NM57、0.1～10mg /ml狂犬病毒人源抗体NC08、3mmol/L甘氨酸、47mmol/L 组氨酸、0.05mg/ml 吐温-80、质量体积比5%甘露醇、1 mmol/L EDTA组成，pH为6.0。
4. 权利要求1或2所述的制剂，为液体制剂。
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