TW200521231A - Therapeutic binding molecules - Google Patents

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TW200521231A
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seq
peptide
binding molecule
amino acid
acid sequence
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TW093128255A
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Frank Kolbinger
Herrera Jose M Carballido
Andras Aszodi
Jose W Saldanha
Bruce M Hall
Silvia Gregori
Maria Grazia Roncarolo
Veronique Loux
Gregorio Aversa
Margit Jeschke
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Novartis Ag
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200521231 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於有機化合物，以致於結合分子對抗CD45抗 原同分異構物（isoform)，如例如單株抗體（mAbs， monoclonal antibodies)，及其用途。 【先前技術】 治療許多疾病的一個方式為達到消除或去活化病原性白 血球及引發對去活化病原性免疫反應的耐受性之可能。 吾人遇為器官、細胞及組織移植排斥及許多自體免疫疾 病主要為由能夠辨認特定抗原之輔助細胞引起的τ_細胞 媒介免疫反應的結果，由抗原呈現細胞（APC，antigen presenting cell)如巨噬細胞及樹枝狀細胞將抗原捕捉、處理 及以抗原-MHC複合物的形式呈現至輔助τ細胞，即當輔助 τ-細胞辨認特定抗原時，受刺激製造細胞激素如IL_2及表現 或向上調節一些細胞激素受體及其他活化分子及增殖。一 些此等活化的輔助丁-細胞可能直接或間接作用，即幫助作 用細胞細胞毒性T-細胞或B細胞，以摧毁表現選定抗原之細 胞或組織。免疫反應終止後，部分成熟無性繁殖特定的細 胞保留為記憶輔助及記憶細胞毒性τ·細胞，其於身體中循 環及若抗原再度出現時快速地辨認抗原。若引起此反應的 抗原為無毒的環境抗原，結果為過敏症，若抗原不是外來 抗原，而是自身抗原，其可造成自體免疫疾病；若抗原為 來自移植的器官之抗原，結果可為移植排斥。 免疫系統已發展至分辨自身與非自身。此性質使得一生 96146.doc 200521231 物體可存活於環境中暴露至每日病原體的挑戰。對非自身 的此專一性及對自身的耐受性形成於τ細胞庫於胸腺中的 發展期間經由正及負選擇之過程，其也包含辨識及消除自 體反應性T細胞。此類财受性係稱為中央财受性。然而，一 些此等自體反應性細胞逃過此選擇性機制及造成發展自體 免疫疾病之潛在危害。為了控制已逃至周邊的自體反應性T 細胞，免疫系統具有周邊調控機制提供對自體免疫性的保 護。此等機制為周邊耐受性的基礎。 由特定mAbs辨認的細胞表面抗原通常以連續世界白血 球分類研討會（International Leukocyte Typing workshops) 指定的分化群（CD，cluster of Differentiation)號碼稱呼，於 本文中運用的用詞CD45意指細胞表面白血球共同抗原 CD45 ;及對此抗原之mAb於本文中稱為「抗_CD45」。 對白血球共同抗原（LCA，leukocyte common antigen)或 CD45之抗體為抗-淋巴球球蛋白（ALG，anti- lymphocyte globulin)之主要成分。CD45屬於穿膜酿胺酸麟酸酶之家族 及同時為細胞活化之正及負調節體，視受體交互作用而 定。CD45的磷酸酶活性似乎為與B及T淋巴球之抗原受體結 合的Src-家族激酶之活化所必須（Trowbridge IS等人，Annu Rev Immunol. 1994; 12:85-116)。因此，於T細胞活化中， CD45為對訊號1為必要且CD45不足的細胞於TCR媒介的活 化情況有深切的缺陷。 CD45抗原以不同同分異構物存在，包含一個穿膜醣蛋白 家族。CD45之不同同分異構物差別於其細胞外區塊結構， 96146.doc 200521231 其起源自編碼部分CD45細胞外區域的3個可變外顯子（exon) 之選擇性剪接（alternative splicing)(Streuli MF.等人，J. Exp. Med· 1987; 166:1548-1566) cCD45之許多同分異構物具有 不同細胞外區塊，但具有相同穿膜及細胞質段落，具有大 約3 00個基團之兩個同源、高度保守的磷酸酶區塊。不同同 分異構物組合係差異地表現於T及B淋巴球之次族群上 (Thomas ML.等人，Immunol· Today 1988; 9:320-325) 〇 —些 單株抗體辨認所有不同同分異構物之共同抗原決定部位 (epitope)，而其他mAbs具有限制的（CD45R)專一性，視其 辨認何者選擇性剪接外顯子（A、B或C)。例如，辨認外顯子 A產物之單株抗體因此記為CD45RA，辨認含有外顯子B之 許多同分異構物之單株抗體記為CD45RB(Beverley PCL等 人，Immunol. Supp. 1988; 1:3-5)。抗體如 UCHL1 選擇性結 合至180 kDa同分異構物CD45RO(無任何可變外顯子A、B 或C)，其似乎限制於活化的T細胞、記憶細胞及皮質胸腺細 胞（cortical thymocyte)之亞群（subset)且未福測於B細胞上 (Terry LA等人，Immunol. 1988; 64:331-336) 〇 【發明内容】 吾人現已發現一種結合分子，其包含結合至CD45RO及 CD45RB之多胜肽序列，於下文中也稱為「CD45RO/RB結 合分子」。根據本發明此等結合分子可引發免疫抑制，抑制 初次T細胞反應及引發細胞耐受性。再者，本發明之結合分 子抑制原發性混合淋巴球反應（MLR，mixed lymphocyte responses)。衍生自以CD45RO/RB結合分子處理的培養細胞 200521231 較佳也有受損的增殖反應於繼發性MLR，即使於繼發性 MLR中無CD45RO/RB結合分子。此受損的增殖反應於繼發 性MLR為本發明結合分子能夠引發耐受性之徵兆。此外， 發現本發明CD45RO/RB結合分子於人類T淋巴球中可引發 經細胞凋亡之細胞死亡，可支持具有特徵T調控細胞（Treg， T regulatory cell)顯型之T細胞的分化；及/或可引發T調控 細胞能夠抑制初生T細胞（naive T cell)活化。 再者，發現於活體中給予CD45RO/RB結合分子至經歷 GVHD移植之後注射人類PBMC的嚴重性聯合免疫缺陷 (SCID，severe combined immunodeficiency)小鼠可延長小鼠 存活（相較於控制處理的小鼠），即使於CD45RO/RB結合分 子處理的小鼠中仍可偵測到循環的人類T細胞。 CD45RO/RB結合分子也可抑制媒介人類異體移植皮膚排斥 之發炎過程。此外，發現CD45RO/RB結合分子可抑制抑制 媒介人類異體移植皮膚排斥之發炎過程，特別是可於活體 内於以人類皮膚移植及以單核脾臟細胞移植的SCID小鼠中 抑制媒介人類異體移植皮膚排斥之發炎過程。且再者，發 現藉由避免移植滲透及藉由抑制活體内白血球媒介的排斥 反應，CD45RO/RB結合分子可導致延長的人類胰島異體移 植存活。 由「CD45RO/RB結合分子」意指任何分子能夠專一地結 合至CD45抗原之CD45RB及CD45RO同分異構物，無論是單 獨或與其他分子結合。結合反應可由標準方法（定量分析） 顯示，包括例如任何種類之結合分析如直接或間接免疫螢 96146.doc 200521231 光與螢光顯微鏡一起或細胞螢光（FACS)分析、酵素連結免 疫吸附分析（ELISA，enzyme-linked immunosorbent assay)或 放射免疫分析，其中可觀察分子結合至表現特定CD45同分 異構物之細胞。此外，此分子的結合可造成表現此等同分 異構物的細胞之功能改變。例如，可決定原發性或繼發性 混合淋巴球反應（MLR，mixed lymphocyte responses)之抑 制，如於試管中分析或生物分析以決定在存在及不存在 CD45RO/RB結合分子中原發性或繼發性MLR之抑制及決 定原發性MLR抑制之差異。 或者，藉由測量PBMC或T細胞或CD4+T細胞增殖、細胞 激素之製造、細胞表面分子表現之改變如於MLR中細胞活 化後，或以特定抗原如破傷風類毒素（tetanus toxoid )或其 他抗原，或以多株刺激劑如植物血凝素（PHA， phytohemagglutinin)或抗-CD3及抗-CD28抗體或巴豆醇 (phorbol)酯及Ca2+離子載體（ionophore)刺激後，也可決定試 管中功能調節效用。將培養以如MLR所述類似方式建立， 除了使用上面提到的可溶性抗原或多株刺激劑代替同種異 體細胞作為刺激劑。T細胞增殖較佳如上述藉3H-胸腺嘧啶 併入測量。 較佳藉三明治ELISA測量細胞激素製造，其中將細胞激 素捕捉抗體塗佈於96孔盤的表面上，將來自培養的上層清 液加入並於室溫培養1小時，而後將專一於特定細胞激素的 偵測抗體加入，之後將接上酵素如辣根過氧化物酶 (Horseradish peroxidase)的第二步抗體加入，之後加入相對 96146.doc -10- 200521231 應的受質，測量吸收度於平板讀數器（plate reader)。細胞表 面分子的改變較佳可藉於以專一於特定細胞表面分子之抗 體染目標細胞後直接或間接免疫螢光測量。可將抗體直接 以螢光物質標記或可使用螢光標記專一於第一個抗體之第 二步抗體，並將細胞以細胞螢光計分析。 本發明之結合分子具有對CD45RO及CD45RB兩者之結合 專一性（「CD45RO/RB結合分子」）。 較佳的是，結合分子以解離常數（Kd)<20 nM結合至 CD45RO同分異構物，較佳以Kd<15 nM或<10 nM，更佳以 Kd<5 nM。較佳的是，結合分子以解離常數（Kd)<50 nM結 合至CD45RB同分異構物，較佳以Kd<15 nM或<10 nM，更 佳以 Kd<5 nM。 於另一較佳具體實施例中，本發明之結合分子結合彼等 CD45同分異構物，其中 1) 包括CD45分子之A及B抗原決定部位但非C抗原決定部 位；及/或 2) 包括CD45分子之B抗原決定部位但非A及非C抗原決定部 位；及/或 3) 不包括CD45分子之任何A、B或C抗原決定部位。 於再另一較佳具體實施例中，本發明之結合分子不結合 CD45同分異構物，其中包括 1) 所有CD45分子之A、B及C抗原決定部位；及/或 2) CD45分子之B及C抗原決定部位但無A抗原決定部位。 於另一較佳具體實施例中，本發明之結合分子進一步 96146.doc -11 - 200521231 1) 辨識記憶及於活體内同種異質活化的T細胞；及/或 2) 結合至其目標於人類τ細胞上，如例如peer細胞，其中 该結合較佳以Kd<15 nM，更佳以Kd<10 nM，最佳以Kd<5 nM ;及/或 3) 抑制試管内異體反應性（all〇reactive)T細胞功能，較佳以 IC5〇約小於100 nM，較佳小於5〇 nM或3〇 nM，更佳以IC50 約10 nM或5 nM，最佳以IC5。約〇 5 nM或甚至0.1 nM ;及/ 或 4) 引發經由細胞凋亡之細胞死亡於人類τ淋巴球中；及/或 5) 於5式管中引發專一於同種異體抗原（aii〇antigen)之τ細胞 的耐受性；及/或 6) 當以有效量給予時避免sciD小鼠中由注射人類PBMC引 發的致命異種移植抗宿主疾病（GVHD，graft versus host disease);及/或 7) 結合至T淋巴球、單核球、幹細胞、自然殺手細胞（naturai killer cells)及/或顆粒球，但不結合至血小板或b淋巴球； 及/或 8) 支持具有特徵τ調控細胞（Treg，T regulatory cell)顯型之T 細胞的分化；及/或 9) 引發T調控細胞能夠抑制初生τ細胞活化；及/或 1 〇)抑制媒介人類異體移植皮膚排斥之發炎過程，特別是於 活體内於以人類皮膚移植及以單核脾臟細胞移植的SCID小 氣中抑制媒介人類異體移植皮膚排斥之發炎過程；及/或 11)於hu-PBL-NOD/SCID小鼠模型中延長人類胰島異體移 96146.doc -12- 200521231 植存活。 於再另一較佳具體實施例中，本發明之結合分子結合至 如 Aversa等人 Cellular Immunology 1 5 8，3 14-328( 1994)所述 之單株抗體「A6」相同的抗原決定部位。 由於上述結合性質及生物活性，本發明之此結合分子特 別有用於醫學，用於治療及/或預防。本發明結合分子特別 有用的疾病包括自體免疫疾病、移植排斥、皮膚炎、發炎 性腸道疾病及/或過敏症，將於下進一步說明。 吾人已發現包含SEQ ID NO]之多胜肽及SEQ ID NO:2之 多胜肽之分子為CD45RO/RB結合分子。吾人也已發現高度 可變區域 CDR1，、CDR2f 及 CDR3,於 SEQ ID ΝΟ:1 之 CD45RO/RB結合分子中，CDR1’具有胺基酸序列 Arg-Ala-Ser-Gln-Asn-Ile-Gly-Thr-Ser.Ile-Gln(RASQNIGTS IQ)(SEQ ID NO:19)，CDR2,具有胺基酸序列 Ser-Ser-Ser-Glu-Ser-Ile-Ser(SSSESIS)(SEQ ID NO:20)及 CDR3,具有胺 基酸序 列 Gln-Gln-Ser-Asn-Thr-Trp-Pro-Phe-Thr (QQSNTWPFT)(SEQ ID NO:21)。 吾人也已發現高度可變區域CDR1、CDR2及CDR3於SEQ ID NO:2之CD45RO/RB結合分子中，CDR1具有胺基酸序列 Asn-Tyr-Ile-Ile-His(NYIIH)(SEQ ID NO:22)，CDR2具有胺 基酸序列 Tyr-Phe-Asn-Pro-Tyr-Asn-His-Gly-Thr-Lys-Tyr-Asn-Glu-Lys-Phe-Lys-Gly(YFNPYN HGTKYNEKFKG)(SEQ ID NO:23)及 CDR3 具有胺基酸序列 Ser-Gly_Pro-Tyr-Ala-Trp-Phe-Asp-Thr(SGPYAWFDT)(SEQ ID NO:24)。 96146.doc -13- 200521231 CDRs為3個特定互補性決定區域，其也稱為高度可變區 域，其本質上決定抗原結合特性。此等CDR為如分別為SEQ ID ΝΟ:1或SEQ ID NCh2之可變區域的部分，其中此等CDR 與骨架區域（FR/s，framework regions)如固定區域交替。於 根據本發明之嵌合抗體中，SEQIDNChl為如SEQIDNO:3 之輕鏈的部分，及SEQIDNO··2為如SEQIDNO··4之重鏈的 部分。重鏈之CDR與結合的輕鏈之CDR基本上組成本發明 分子之抗原結合位置。已知由輕鏈可變區域貢獻至結合的 能量相較於由結合的重鏈可變區域之貢獻小及分離的重鏈 可變區域本身具有抗原結合活性。此分子通常稱為單區塊 抗體。 於一個觀點中，本發明提供一種包含至少一個抗原結合 位置之結合分子，如CD45RO/RB結合分子，於序列上包含 高度可變區域CDR1、CDR2及CDR3，該CDR1具有胺基酸 序列 Asn-Tyr-Ile-Ile-His(NYIIH)(SEQ ID NO:22)，該 CDR2 具有胺基酸序列 Tyr-Phe-Asn-Pro-Tyr-Asn-His-Gly-Thr-Lys-Tyr-Asn-Glu-Lys-Phe-Lys-Gly(YFNPYNHGTKYNEKFKG) (SEQ ID N023)及該 CDR3具有胺基酸序列 Sei*-Gly-Pro-Tyr-Ala-Trp-Phe-Asp-Thr(SGPYAWF DT)(SEQ ID NO:24); 如及其直接相當者。 於另一個觀點中，本發明提供一種包含至少一個抗原結 合位置之分子，如CD45RO/RB結合分子，包含 a)第一個區塊，於序列上包含高度可變區域cdRI、CDR2 及 CDR3 ’ 該 CDR1 具有胺基酸序列 Asn-Tyr-Ile-Ile-His 96146.doc 14 200521231 (NYIIH)(SEQ ID ΝΟ··22)，該 CDR2 具有胺基酸序列 Tyr-Phe-Asn-Pro-Tyr-Asn-His-Gly-Thr-Ly s-Tyr-Asn-Glu-Lys-Phe-Lys-Gly(YFNPYNHGTKYNEKFKG)(SEQ ID NO: 23)及該CDR3具有胺基酸序列Ser-Gly-Pro-Tyr -Ala-Trp-Phe-Asp-Thr(SGPYAWFDT)(SEQ ID NO:24);及 b)第二個區塊，於序列上包含高度可變區域CDR1’、CDR2’ 及 CDR3’，CDR1’具有胺基酸序列 Arg-Ala-Ser-Gln-Asn-Ile-Gly-Thr-Ser-Ile-Gln(RASQNIGTSIQ)(SEQ ID NO:19)， CDR2，具有胺基酸序列 Ser-Ser-Ser-Glu-Ser-Ile-Ser(SSSESIS)(SEQ ID NCh20)及 CDR3’具有胺基酸序列 Gln-Gln-Ser-Asn-Thr-Trp-Pro-Phe-Thr(QQSNTWPFT) (SEQ ID NO:21)， 如及其直接相當者。 於較佳具體實施例中，於序列上包含高度可變區域 CDR1、CDR2及CDR3之第一個區塊為免疫球蛋白重鏈，而 於序列上包含高度可變區域CDRT、CDR2’及CDR3’之第二 個區塊為免疫球蛋白輕鏈。 於另一觀點中，本發明提供一分子，如CD45RO/RB結合 分子，包含有SEQIDNO:l之多胜肽及/或SEQIDNO:2之多 胜肽之分子，較佳於一個區塊中含有SEQ ID NO: 1之多胜肽 及於另一區塊中含有SEQ ID NO:2之多胜肽，如嵌合單株抗 體，及於另一觀點中，一個分子，如CD45RO/RB結合分子， 包含有SEQ ID ΝΟ··3之多胜肽及/或SEQ ID NO:4之多胜肽 之分子，較佳於一個區塊中含有SEQ ID NO:3之多胜肽及於 96146.doc -15- 200521231 另一區塊中含有SEQ ID NO:4之多胜肽，如嵌合單株抗體。 當抗原結合位置包含第一及第二個區塊兩者或分別SEQ ID ΝΟ:1或SEQ ID ΝΟ··3之多胜肽，及分別SEQ ID ΝΟ··2或 SEQ ID ΝΟ:4之多胜肽，此等可位於相同多胜肽上，或較佳 的是各區塊可於不同鏈上，如第一個區塊為重鏈之部分， 如免疫球蛋白重鏈或其片段，及第二個區塊為輕鏈之部 分，如免疫球蛋白輕鏈或其片段。 吾人已發現根據本發明CD45RO/RB結合分子為於哺乳類 (如人類）身體環境中的CD45RO/RB結合分子。因此可將根 據本發明CD45RO/RB結合分子記為單株抗體（mAb)，其中 結合活性係主要由如上述CDR區域決定，如該CDR區域與 其他分子結合無結合專一性，如骨架，如固定區域，其為 實質上人類來源。 於另一觀點中，本發明提供一種CD45RO/RB結合分子， 其不是如 Aversa 等人 Cellular Immunology 158，314-328( 1994)所述之單株抗體「A6」，將其描繪A6特性之段落 以參考資料併入。 於另一觀點中，本發明提供一種根據本發明之 CD45RO/RB結合分子，其為嵌合、人化或完全人類單株抗 體。 CD45RO/RB結合分子之實例包括嵌合或人化抗體，如衍 生自B-細胞或融合瘤製造的抗體及/或其任何片段，如 F(ab，)2及Fab片段，以及單鏈或單區塊抗體。單鏈抗體由抗 體重及輕鏈之可變區域組成並由胜肽連結物（通常由10至 96146.doc -16- 200521231 30個胺基酸組成，較佳15至25個胺基酸）共價連結。所以， 此結構不包括重及輕鏈的固定部分且吾人相信小胜肽間距 應比整個固定部分較小抗原性。由嵌合抗體意指一種抗 體，其中重及輕鏈的固體區域或兩者為人類來源而重及輕 鏈兩者的可變區塊為非人類（如鼠）來源。由人化抗體意指一 種抗體，其中高度可變區域（CDR)為非人類（如鼠）來源而所 有或幾乎所有其他部分，如固定區域及可變區域的高度保 守部分為人類來源。然而人化抗體可保留一些鼠序列之胺 基酸於相鄰於高度可變區域之可變區域的部分。 根據本發明之高度可變區域（即CDR)可與人類來源之任 何種類骨架區域，如輕及重鏈之固定部分結合。適當的骨 架區域係說明於如「免疫學上研究之蛋白質序列」 Ε·Α·專人’國豕喊生研究院（Nati〇nai ⑻公 共術生服務部（Public health service)美國健康與人類服務 部。較佳的是，人類重鏈之固定部分可為IgG1類型，包括 亞型，較佳的是人類輕鏈之固定部分可為κ或又型，更佳 的是/c型。較佳的是，該重鏈包含不超過一個醣化位置， 最佳的是醣化位置為Ν-醣化位置，及最佳的是此一個醣化 位置位於重鏈之固定部份中。最佳的是無聽化位置存在於 可變區域中，較佳的是無醣化位置於骨架區域中。 重鏈的較佳固；t部分為SEQidn〇:4之多胜肽（無於上指 定的CDRi，、CDR2,及CDR3,序列部分）及輕鏈的較佳固定部 分為_ m體:3之多胜肽（無於上指定的cdri、〔聰及 CDR3序列部分）。 96146.doc •17- 200521231 吾人也已發現一種人化抗體，包含有胺基酸SEQ ID NO:7 或胺基酸SEQ IDNO:8之輕鏈可變區域，其包含根據本發明 之 CDR1，、CDR2’及 CDR3,及 / 或 SEQ ID NO:9 或 SEQ ID !^0:10之重鏈可變區域，其包含根據本發明之€011卜€0112 及CDR3。再者，提供另一人化抗體，包含胺基酸SEQ ID NCh7或胺基酸SEQ ID NO:8之輕鏈可變區域，其包含根據 本發明之 CDR1’、CDR21 及 CDR31 及 /或 SEQ ID NO:31 或 SEQ ID NO:32之重鏈可變區域，其包含根據本發明之CDR1、 CDR2及 CDR3。 於另一觀點中，本發明提供一種人化抗體，包含SEQ ID NO:9 或 SEQ ID NO:10 之多胜肽及 SEQ ID NO:7 或 SEQ ID NO:8之多胜肽。於再另一觀點中，本發明提供一種結合分 子，其為一種人化抗體，包含SEQ ID NO:31或SEQ ID ΝΟ··32 之多胜肽及SEQ ID ΝΟ:7或SEQ ID NO:8之多胜肽。 於另一觀點中，本發明提供一種人化抗體，包含 -SEQ ID NO:9之多胜肽及SEQ ID NO:7之多胜肽（如 VHE/humV2)， -SEQ ID NO:9之多胜肽及SEQ ID NO:8之多胜肽（如 VHE/humVl)， -SEQ ID NO: 10之多胜肽及SEQ ID NO:7之多胜肽（如 VHQ/humV2)， -SEQ ID NO:10之多胜肽及SEQ ID NO:8之多胜肽（如 VHQ/humVl)， -SEQ ID NO:31之多胜肽及SEQ ID ΝΟ··7之多胜肽（如 96146.doc -18- 200521231 VHEN73D/humV2)， -SEQ ID NO:31之多胜肽及SEQ ID NO:8之多胜肽（如 VHEN73D/humVl)， -SEQ ID NO:32之多胜肽及SEQ ID NO:7之多胜肽（如 VHQN73D/humV2)， -SEQ ID NO:32之多胜肽及SEQ ID NO:8之多胜肽（如 VHQN73D/humVl)。 根據本發明之多胜肽，如本文指定的序列，之CDR1 (SEQ ID NO:22)、CDR2(SEQ ID NO:23)、CDR3(SEQ ID NO:24)、 CDRlf(SEQ ID NO:19) > CDR2f(SEQ ID NO:20)- CDR3'(SEQ ID NO:21)、或 SEQ ID NO:l、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、 SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:7、SEQ ID ΝΟ·8、SEQ ID NO:9、 SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:31 或 SEQ ID NO:32 包括該（多） 胜肽（序列）之直接相當者；如包括該多胜肽之功能性衍生 物。該功能性衍生物可包括指定序列之共價修飾，及/或該 功能性衍生物可包括指定序列之胺基酸序列變體。 若於本文中未另外指明，"多胜肽π包括包含由胜肽鍵彼 此連接的胺基酸之任何胜肽或蛋白質，具有胺基酸序列起 於Ν-端盡頭及終了於C-端盡頭。較佳的是，本發明之多胜 肽為單株抗體，更佳的是嵌合（V移植）或人化（CDR-移植） 單株抗體。人化（CDR-移植）單株抗體可或可不包括導入接 受體抗體之骨架（FR，framework)序列的其他突變。較佳的是 人化或叙合抗體包含不超過一個醣化位置。最佳的是，該 一個醣化位置為N-醣化位置。最佳的是無醣化位置存在於 96146.doc -19- 200521231 可麦區域中，再更佳的是無醣化位置存在於重鏈之可變區 域中，最佳的是無醣化位置存在於骨架區域（FR)中。 如本文中使用的多胜肽之功能性衍生物包括具有與本發 明多胜肽一樣的定性生物活性之分子，即具有結合至 CD45RO及CD45RB之能力。功能性衍生物包括根據本發明 多胜肽之片段及胜肽類似物。片段包含於根據本發明多胜 肽序列内的區域，如指定序列。使用用詞，，衍生物，，來定義 胺基酸序列變體，及根據本發明多胜肽之共價修飾，如指 定序列。根據本發明多胜肽之功能性衍生物，如指定序列， 較佳與根據本發明多胜肽之胺基酸序列，如指定序列，具 有至少約65%，更佳至少約75%，再更佳至少約85%，最佳 至少約95%整體序列同源性，並大體保持結合至CD45R〇及 CD45RB之能力。較佳的是，功能性衍生物至少具有包含有 SEQ ID ΝΟ:1之多胜肽及/或SEQ ID NO:2之多胜肽之結合 分子、包含有SEQIDNO:9或SEQIDNO:10之多胜肽及/或 SEQIDN0:7或SEQIDNO』之多胜肽之人化抗體；或包含 有 SEQ ID >^0:31或犯(^ id NO:32 之多胜肽及 eSEQ m N〇:7或SEQ ID NO:8之多胜肽之人化抗體之結合親和力。 用詞’’共價修飾”包括根據本發明多胜肽，如指定序列； 或其片段以有機蛋白質或非蛋白質衍生化試劑之修飾、融 合至異源多胜肽序列及轉譯後修飾。如指定序列之共價修 飾的多胜肽藉交聯仍具有結合至CD45RO及CD45RB之能 力。共價修飾傳統上係由反應目標胺基酸基團與能夠與選 定側鏈或終端基團反應的有機衍生化試劑，或藉由於特定 96146.doc -20· 200521231 重組宿主細胞中作用的轉譯後修飾之控制機制而導入。某 些轉譯後修飾為重組宿主細胞作用於表現的多胜肽上之結 果。麩胺酿胺基及天門冬醯胺基基團為常見轉譯後脫醯胺 成相對應的麵胺醯基及天門冬醯基基團。或者，於微酸條 件下將此等基團脫醯胺。其他轉譯後修飾包括脯胺酸及離 胺酸之羥基化、絲基、酪胺酸或羥丁胺醯基團之羥基的磷 酸化、離胺酸、精胺酸及組胺酸側鏈之α -胺基的甲基化， 見如 Τ·Ε. Creighton, ProteinsrStructure and Molecular
Properties，W.H. Freeman & C。·，San Francisc。，79_86 頁籲 (1983)。共價修飾如包括包含根據本發明多胜肽之融合蛋白 質，如指定序列及其胺基酸序列變體，如免疫黏附素，及 N-端融合至異源訊號序列。 有關天然多胜肽及其功能性衍生物之”同源性"於本文中 係疋義為於候選序列中胺基酸基團與相對應天然多胜肽之 基團-致之比例，在比對序列及視需要導入空位以達到最 ，比例同源性，及不考慮任何保守性取代為序列一致性之 部分。N-或C-末端延長或插入皆不應視為降低一致性或㈤φ 源性。比對之方法及電腦程式為已熟知。 π胺基酸”意指所有自然發生的L D _月安基酸。胺基酸後由ρ孰左留 -α -胺基酸， ，如，及包括
有結合至CD45RO及CD45RB之能力。 胺基酸序列之分子。根 之胺基酸序列變體仍具 。取代的變體為具有至 96146.doc -21 · 200521231 少一個胺基酸基團取出及插入不同胺基酸於其位於根據本 發明多胜肽中，如指定的序列，之相同位置者。此等取代 可為單一（其中於分子中僅一個胺基酸已被取代）或其可為 多重（其中於相同分子中二或多個胺基酸已被取代）。插入的 變體為具有一或多個胺基酸插入於緊接相鄰於根據本發明 多胜肽中，如指定的序列，之特定位置處的胺基酸者。緊 接相鄰於一個胺基酸意指連接至胺基酸的α -羧基或α -胺 基官能基。刪除變體為具有一或多個胺基酸於根據本發明 多胜肽中，如指定的序列，被移除者。通常，刪除變體將 有一或二個胺基酸刪除於分子的特定區域中。 吾人已發現多核苷酸 -GGCCAGTCAGAACATTGGACAAGCATACAGTG(SEQ ID NO:25)，編碼CDR1之胺基酸序列； -TTCTTCTGAGTCTATCTCTGG(SEQ ID NO:26)，編碼 CDR2 之胺基酸序列； -ACAAAGTAATACCTGGCCATTCACGTT(SEQ ID NO:27)， 編碼CDR3之胺基酸序列； -TTATATTATCCACTG(SEQ ID NO:28)，編碼CDR1·之胺基 酸序列； -TTTTAATCCTTACAATCATGGTACTAAGTACAATGAGAA GTTCAAAGGCAG(SEQ ID NO:29)，編碼 CDR2,之胺基酸序 列； -AGGACCCTATGCCTGGTTTGACACCTG(SEQ ID NO:30)， 編碼CDR3’之胺基酸序列； 96146.doc •22- 200521231 -SEQ ID NO:5編碼SEQ ID ΝΟ:1之多胜肽，即根據本發明 mAb之輕鏈可變區域； -SEQ ID NO:6編碼SEQ ID NO:2之多胜肽，即根據本發明 mAb之重鍵可變區域； -SEQIDNO:ll編碼SEQIDNO:9之多胜肽，即根據本發明 包括CDR1、CDR2及CDR3之重鏈可變區域； -SEQIDNO:12編碼SEQIDNO:10之多胜肽，即根據本發明 包括CDR1、CDR2及CDR3之重鏈可變區域； -SEQIDNO:13編碼SEQIDNO:7之多胜肽，即根據本發明 包括CDR1’、CDR21及CDR3’之輕鏈可變區域； -SEQ ID NO: 14編碼SEQ ID NO:8之多胜肽，即根據本發明 包括CDR1’、CDR2’及CDR3·之輕鏈可變區域； -SEQ ID NO:33編碼SEQ ID NO:8之多胜肽，即根據本發明 包括CDR1’、CDR2’及CDR3’之輕鏈可變區域； -SEQ ID NO:34編碼SEQ ID NO:31之多胜肽，即根據本發明 包括CDR1、CDR2及CDR3之重鏈可變區域；及 -SEQ ID NO:35編碼SEQ ID NO:32之多胜肽，即根據本發明 包括CDR1、CDR2及CDR3之重鏈可變區域； 於另一觀點中，本發明提供包含有多核苷酸編碼 CD45RO/RB結合分子，如編碼根據本發明之CDR1、CDR2 及CDR3之胺基酸序列及/或（較佳的是及）多核苷酸編碼根 據本發明之CDR1’、CDR2’及CDR3’之胺基酸序列之分離的 多核苷酸；及 多核苷酸包含有SEQ ID NO:5之多核苷酸及/或（較佳的 96146.doc -23- 200521231 是及）SEQ ID NO:6之多核苷酸；及 多核苷酸包含有多核苷酸編碼SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8之多胜肽及/或（較佳的是及）SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:10之多胜肽；如編碼 -SEQIDNO:7之多胜肽及SEQIDNO:9之多胜肽， -SEQ ID NO:7之多胜肽及SEQ ID NO: 10之多胜肽， -8丑(^1〇1^0:8之多胜肽及8£(^1〇]^0:9之多胜肽，或 -SEQ ID NO:8之多胜肽及SEQ ID NO: 10之多胜肽；及 多核苷酸包含有SEQ ID NO: 11或SEQ ID NO: 12之多核苷 酸及/或（較佳的是及）SEQ ID NO:13之多核苷酸或SEQ ID NO:14之多核苦酸，較佳的是包含 -SEQ ID NO: 11之多核苷酸及SEQ ID NO: 13之多核苷酸， -SEQ ID NO: 11之多核苷酸及SEQ ID NO: 14之多核苷酸， -SEQ ID NO: 12之多核苷酸及SEQ ID NO: 13之多核苷酸，或 -SEQIDNO:12之多核苷酸及SEQIDNO:14之多核苷酸；及 多核苷酸包含有多核苷酸編碼SEQ ID NO:31或SEQ ID NO:32之多胜肽及/或（較佳的是及）SEQ ID NO:7或SEQ ID N 0:8之多胜肽；如編碼 -8£卩1〇>^0:31之多胜肽及8£(^1〇]^0:7之多胜肽， -SEQIDNO··31之多胜肽及SEQIDNO··8之多胜肽， -SEQIDNO:32之多胜肽及SEQIDNO:7之多胜肽，或 -SEQ ID NO:32之多胜肽及SEQ ID ΝΟ·_8之多胜肽；及 多核苷酸包含有SEQ ID ΝΟ:34或SEQ ID NOJ5之多核苷 酸及/或（較佳的是及）SEQIDNO:3 3;SEQIDNO:14或13之 96146.doc -24- 200521231 多核發酸。 -SEQ ID ΝΟ··34之多胜肽及SEQ ID ΝΟ··33之多胜肽， -SEQ ID ΝΟ:34之多胜肽及SEQ ID ΝΟ:14之多胜肽， -SEQ ID ΝΟ:34之多胜肽及SEQ ID ΝΟ:13之多胜肽， -SEQ ID ΝΟ:35之多胜肽及SEQ ID ΝΟ··33之多胜肽， -SEQ ID ΝΟ:35之多胜肽及SEQ ID ΝΟ:14之多胜肽，或 -SEQ ID ΝΟ:35之多胜肽及SEQ ID ΝΟ:13之多胜肽。 若於本文中未另外指明，’’多核苷酸’’包括任何多聚核糖 核苷酸或多聚去氧核糖核苷酸，其可為未修飾的RNA或 DNA，或經修飾的RNA或DNA，包括（不限於）單及雙股 RNA，及為單-及雙-股區域混合物之RNA。
根據本發明之多核苷酸，如分別編碼胺基酸序列CDR1、 CDR2、CDR3、CDR1，、CDR2,、CDR3,或 SEQ ID NOH、SEQ ID ΝΟ··2、SEQ ID ΝΟ:3、SEQ ID ΝΟ:4、SEQ ID ΝΟ:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:31 或 SEQ ID NO:3 2之多核苷酸，如分別為SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO: U、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34或 SEQ ID NO:35 之多核苷酸，包括其對偶變體及/或其補體；如包括分別與 SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:ll、SEQ ID NOH2、SEQ ID NO:13、SEQ ID NChl4、SEQ ID NO:33、 SEQ ID NO:34或SEQ ID ΝΟ··35之核苷酸序列雜交的多核苷 酸；如分別編碼具有至少80%—致於SEQ ID NO:l、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:7、SEQ ID 96146.doc -25- 200521231 NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NOrlO、SEQ ID NO:31 或 SEQ ID NO:32之多胜肽，如包括該多胜肽之功能性衍生物，如 該功能性衍生物分別與SEQ ID NO:l、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID ΝΟ··9、SEQIDNO:10、8£卩10 1^0:31或8£()10>^0:32具有 至少65%同源性，如該功能性衍生物分別包括SEQ ID NO:卜 SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:31或SEQ ID NO:32之共價修飾，如該功能性衍生物 分別包括 SEQ ID NO:l、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:31 或 SEQ ID NO:32之胺基酸序列變 體，如 SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID ΝΟ:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NChl4、SEQ ID NO:33、 SEQ ID NO:34或SEQ ID NO:35分別包括因為基因密碼重複 性（簡併性）的結果之序列，也分別編碼SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:31 或 SEQ ID NO:32之多胜肽，或編碼一多胜肽其胺基酸序列分 別與胺基酸序列 SEQ ID NO:l、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:31 或 SEQ ID NO:32具有 至少80% —致性。較佳的是，對偶變體或功能性衍生物至 少具有包含有SEQ ID ΝΟ:1之多胜肽及/或SEQ ID N0 2之 96146.doc -26- 200521231 多胜肽之結合分子，或包含有SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:10 之多胜肽及/或SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8之多胜肽之人 化抗體，或包含有SEQIDNO··31或SEQIDNO:32之多胜肽 及/或SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8之多胜肽之人化抗體之 結合親和力。 CD45RO/RB結合分子（如其為嵌合或人化抗體）可由重組 DNA技術製造。因此，可將一或多個編碼CD45RO/RB的 DNA分子建立、置於適當控制序列下及轉移入適當宿主（生 物體）以由適當載體表現。 於另一觀點中，本發明提供一種多核苷酸，其編碼根據 本發明CD45RO/RB結合分子之單一、重及/或輕鏈；及利用 根據本發明之多核苷酸以藉由重組方式製造根據本發明 CD45RO/RB結合分子。 根據（如類似）於如習見及與本文中提供的資訊（如高度可 變或可變區域的胺基酸序列及編碼此等區域之多核苷酸序 列之知識）一起的方法可得到CD45RO/RB結合分子。建立可 變區塊基因的方法係說明於如歐洲專利EP 239 400及可簡 短地摘要如下：可將編碼任何專一性之mAb可變區域之基 因選殖。將編碼骨架及高度可變區域的DNA段落決定並將 編碼高度可變區域的DNA段落取出。根據本文中指明的 CDR及CDR’序列藉DNA合成製備雙股合成CDR匣 (cassettes)。此等匣具有黏端所以可將其綁紮於人類來源之 理想骨架的接合點。編碼單鏈抗體之多核苷酸可根據（如類 似）於習見方法製備。可將如此製備之根據本發明多核苷酸 96146.doc -27- 200521231 方便地轉移入適當表現載體中。 根據（如類似）於習見方法可找出適當細胞株。如表現載 體，如包含適當啟動子及編碼重及輕鏈固體部分之基因為 已知且為市面上可購得。適當的宿主為已知或可根據（如類 似）於習見方法可找出及包括細胞培養或基因轉殖動物。 於另一觀點中，本發明提供一種表現載體，包含有編碼 根據本發明CD45RO/RB結合分子之多核苷酸，如序列SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、 SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:40或 SEQ ID NO:41。 於另一觀點中，本發明提供 -一種表現系統，包含有根據本發明之多核苷酸，其中當 該表現系統或其部分存在於可相容的宿主細胞裡時，該表 現系統或其部分能夠製造根據本發明CD45RO/RB結合分 子；及 -一種分離的宿主細胞，其包含有如上定義之表現載體。 吾人已進一步發現根據本發明CD45RO/RB結合分子以劑 量相關的方式抑制原發性異體免疫（alloimmune)反應，如由 試管中MLR決定。結果指出在根據本發明CD45RO/RB結合 分子中已受異體活化（alloactivated)的細胞於其對同種異體 抗原反應的能力受損。此證實根據本發明CD45RO/RB結合 分子可直接作用於作用細胞異體反應性T細胞上及調控其 功能的指示。此外，將衍生自原發性MLR之T細胞的功能性 質進一步於繼發性MLR中重新刺激實驗中研究，利用指定 96146.doc -28 - 200521231 的刺激細胞或第三者刺激劑以評估觀察的功能效果之專一 性。吾人已發現衍生自根據本發明CD45RO/RB結合分子存 在於其中的原發性MLR之細胞於其反應隨後以特定刺激細 胞之最佳刺激的能力受損，雖然未加入抗體於二次培養 中。抑制之專一性係由以根據本發明CD45RO/RB結合分子 處理的細胞正常反應來自不相關的第三者捐贈者之刺激細 胞的能力而證明。利用衍生自原發性MLR培養的T細胞重新 刺激實驗因而指出已受異體活化根據本發明CD45RO/RB結 合分子之細胞為低反應（即容許）原來的異體抗原。另外的生 物活性係說明於實例7、及9至13。 再者，吾人已發現於以細胞增殖根據本發明CD45RO/RB 結合分子預先處理的細胞中細胞增殖可由外生IL-2而挽 救。此指出以根據本發明CD45RO/RB結合分子處理異體反 應性T細胞引發容許的狀態。確實，於以根據本發明 CD45RO/RB結合分子處理的細胞中觀察到的降低增殖反應 係由於T細胞功能的損傷，及此等細胞能夠反應外生IL-2， 代表此等細胞為於無變應性（anergic)、真正未反應狀態。 此等反應的專一性係由以根據本發明CD45RO/RB結合分子 處理的細胞能夠對不相關捐贈者細胞正常增殖至控制組處 理細胞之量而證實。 此外，實驗指出根據本發明CD45RO/RB結合分子結合至 CD45RO及CD45RB可抑制來自免疫的捐贈者之周邊血液單 核細胞（PBMC，peripheral blood mononuclear cell)的記憶反 應至特定回憶抗原。根據本發明之CD45RO/RB結合分子結 96146.doc -29- 200521231 合至CD45RO及CD45RB因此也有效於抑制記憶反應至可溶 性抗原。根據本發明CD45RO/RB結合分子抑制回憶反應破 傷風於來自免疫的捐贈者之PBMC中的能力指出根據本發 明CD45RO/RB結合分子能夠對準及調控記憶T細胞的活 化。如此等資料指出除了辨識異體反應性及活化的T細胞， 根據本發明CD45RO/RB結合分子能夠調控其功能，造成引 發T細胞無變應性。此性質於治療如見於自體免疫疾病、過 敏症及慢性排斥之對自體抗原及過敏原及可能對異體抗原 進行的免疫反應，及疾病如牛皮癣、發炎性腸道疾病（其中 記憶反應扮演某角色於維持疾病狀態）可為重要。吾人相信 於疾病情況中，如自體免疫疾病，於此記憶反應對自體抗 原可扮演主要角色於疾病維持為重要特徵。 吾人已發現根據本發明CD45RO/RB結合分子於活體内於 混合淋巴球反應（MLR，mixed lymphocyte response)中可調 控T細胞增殖反應，即發現根據本發明CD45RO/RB結合分 子於活體内測試中具有相對應抑制性質，如例如，於SCID 小鼠模型中避免致命異種移植抗宿主疾病（GVHD，graft versus host disease)或抑制媒介人類異體移植皮膚排斥之發 炎過程，或於hu-PBL-NOD/SCID小鼠模型中延長人類胰島 異體移植存活。 根據本發明CD45RO/RB結合分子因此可具有免疫抑制及 致耐受性（tolerogenic)性質及可有用於活體内及活體外對 異體抗原、自體抗原、過敏原及細菌植物群抗原之容許引 發，如根據本發明CD45RO/RB結合分子可有用於治療及預 96146.doc -30- 200521231 防疾病，如包括自體免疫疾病，如（但不限於）風濕性關節 炎、乾癖性關節炎（psoriatic arthritis)、自體免疫甲狀腺炎、 葛瑞芙氏症（Graves disease)、第—類型及第二類型糖尿 病、多發性硬化症、克隆氏症（CD，Cr〇hn，s disease)、潰瘍 性大腸炎（UC，Ulcerative Colitis)、全身性紅斑狼瘡、修格 蘭症候群、硬皮病、白體免疫胃炎、腎小球腎炎 (gl〇merul〇nephritis)、移植排斥，如（但不限於）器官及組織 異體移植及異種皮移植排斥，如用於治療如心、臟、肺臟、 合併的心-肺、肝臟、腎臟、膦臟、皮膚或角膜移植的接受 者、異種移植抗宿主疾病（GVHD，graft versus h〇st disease)，如骨髓移植後，及/或胰島細胞移植排斥，及/或 牛皮癖、皮膚炎如異位性及接觸性皮膚炎包括過敏性接觸 皮膚炎、發炎性腸道疾病及/或過敏症，包括過敏性氣喘 (allergic asthma) 〇 於另一觀點中，本發明提供根據本發明CD45R〇/RB結合 分子作為醫藥的用途，如於治療及預防自體免疫疾病、移 植排斥，如胰島細胞移植排斥或異種移植抗宿主疾病 (GVHD，graft versus host disease)、牛皮癣、皮膚炎、發炎 性腸道疾病及/或過敏症。 於另一觀點中，本發明提供根據本發明之一種 CD45RO/RB結合分子於藥劑的製造以治療及預防與自體免 疫疾病、移植排斥，如胰島細胞移植排斥或異種移植抗宿 主疾病（GVHD，graft versus host disease)、牛皮癬、皮膚炎、 舍性腸道疾病及/或過敏症相關的疾病。 96146.doc 31 200521231 ； 觀』中’本發明提供一種治療及/或預防與自體免 疫疾病、移植排斤 & + + 斤牛皮癬、皮膚炎、發炎性腸道疾病及/ 或過敏症相關的疾病之方法，包含有給予需要此治療及/或 預防的對象有效！之根據本發明⑶^化⑴⑽結合分子，如 以根據本發明之醫藥組合物的形式。 本^月的個具體實施例提供一種治療及/或預防與胰 島、田胞移植排斥相關的疾病之方法，包含有給予需要此治 療及/或預防的對象有效量之根據本發明分子或人化抗體。 於較佳具體實施例中，用於作為醫藥、用於製造藥劑或 於治療/及預防與自體免疫疾病、移植排斥、牛皮癣、皮膚 炎、發炎性腸道疾病及/或過敏症相關的疾病之方法中之該 CD45RO/RB結合分子包含有SEQ m Ν〇:3ι或seq ι〇 NO:32之多胜肽及/或SEq ID N〇:7*SEQ m n〇 8之多胜 肽。較佳的是，CD45RO/RB結合分子包含有SEQidn〇:3i 之多胜肽及SEQ ID NO:8之多胜肽。 CD45RO/RB結合分子之”有效量，，為一量足以達到有益或 理想結果包括臨床結果如減少來自自體免疫疾病、移植排 斥、牛皮癣、皮膚炎、發炎性腸道疾病及/或過敏症的一或 多種症狀、增加患者的生活品質、減少治療此疾病所需其 他藥劑之劑量、增強其他藥劑的效果、延遲疾病的進展及/ 或延長患者的存活，無論直接或間接。 可將有效量以一或多次給予及可或可不與其他藥物、化 合物、或醫藥組合物同時達成。因此，可將本文中的，，有效 量π視為給予一或多種治療藥劑，及可將單一藥劑視為以有 96146.doc •32· 200521231 效量給予，若與其他藥劑一起，可將或將理想結果達成。 另外提供的是可將本發明CD45RO/RB結合分子以單獨有 效成分或與其他藥劑於免疫調控療法或其他抗發炎藥劑一 起給予，如用以治療或避免與自體免疫疾病、移植排斥、 牛皮癬、皮膚炎、發炎性腸道疾病及/或過敏症相關的疾 病。例如，可組合使用本發明CD45RO/RB結合分子與鈣調 填酸酶（calcineurin)抑制劑，如環孢靈素（cyclosporine)A、 環孢靈素 G、FK-506、ABT-281、ASM 981 ; mTOR抑制劑， 如納巴黴素（rapamycin)、40-0-(2-經）乙基-納巴黴素、 CC1779、ABT5 78、AP23 573、AP23464、AP23675、AP23 84卜 TAFA-93、biolimus_7 或 biolimus-9 ;皮質類固醇；環填醯胺； 硫 °坐 17票呤（azathioprine);甲氨蝶呤（methotrexate) ; S1P受體 促效劑，如FTY 720或其類似物；來氟米特（leflunomide)或 其類似物；坐立賓（mizoribine);麥考齡酸（mycophenolic acid);麥考齡酸嗎琳乙酉旨（mycophenolate mofetil); 15_deoxyspergualine或其類似物；免疫抑制單株抗體，如對 白血球受體如 MHC、CD2、CDS、CD4、CDlla/CD18、CD7、 CD25、CD27、B7、CD40、CD45、CD58、CD137、ICOS、 00150(81^]^)、0\40、4_^3或其配體如€0154之單株抗 體；或其他免疫調控化合物，如具有至少部分CTLA4之細 胞外區塊或其突變之重組結合分子，如至少CTLA4之細胞 外部分或其突變連結至非CTLA4蛋白質序列，如 CTLA4Ig(如記為ATCC 68629)或其突變，如LEA29Y，或其 他黏著分子抑制劑，如mAbs或低分子量抑制劑包括LFA-1 96146.doc -33- 200521231 拮抗劑、選擇素（Selectin)拮抗劑及VLA-4拮抗劑。 藉由任何習見途徑，包括注射或藉由隨時間逐漸灌流而 給予有效量之本發明CD45RO/RB結合分子，無論是單獨或 與其他藥物、化合物、或醫藥組合物一起。給予可為，例 如，口服、靜脈内、腹膜内、肌肉内、腔内、皮下、局部 或穿透皮膚。由"共同給予"意指—起或大致上同時給予本 發明組合物之成分，無論於相同媒介或於分開媒介中，所
以，例如，在口服時，兩種化合物同時存在於胃腸道中。 較佳的是，將化合物以固定組合給予。 於另一觀點中，本發明提供一種醫藥組合物，包含有根 據本發明CD45RO/RB結合分子與至少—種醫藥上可接受的 載體或稀釋劑結合。 如本文中使用的用詞"醫藥上可接受的載體或稀釋劑" 指一或多種可相容的固體或液體填料、稀釋劑或封裝 質’其適於給予進人哺乳類包括人類^詞，，載體"表示 種有機或無機成分（天然或合成），
助運用。 成）將活性成分與之合併以 質’其不干擾活性成 包含鹽、緩衝劑、防 劑’如化療劑之醫藥 用詞”醫藥上可接受，，意指無毒性物 分的生物活性效用。此製品慣常地可 腐劑、可相容的載體、補充免疫加強 上可接受的濃縮。 當用於醫藥，鹽應為醫藥上 非醫藥上可接受的鹽來製備其 發明範圍排除。 可接受的，但可方便地使用 醫藥上可接受的鹽並不自本 96l46.doc -34- 200521231 醫藥組合物可包含適當緩衝劑，包括：醋酸鹽；擰檬酸 鹽；删酸鹽；及填酸鹽。 視情況，醫藥組合物也可包含適當防腐劑，如：氯化苯 二甲烴銨（benzalkonium Chloride);氯丁醇；羥基苯甲酸酯 類（parabens)及硫柳采（thimerosal)。 給予至對象之多胜肽或編碼該多胜肽的核酸之劑量可根 據不同參數選擇，特別是根據使用的給予模式及對象的狀 況。其他因素包括治療的理想期間。當在給予起始劑量時 於對象中的反應不夠的情況中’可利用至患者忍耐力容許鲁 程度之較高劑量（或有效地以不同、更局部傳遞途徑之更高 劑量）。 ° #可方便地將醫藥組合物以單位劑量形式呈現，及可由製 藥技藝中已熟知的任何方法製備。所有方法包括使活性成 分與組成一或多種附屬成分之載體結合之步驟。一般而 言’藉由使活性成分與液體載體、細微分離的固體載體，
或兩者均勾及緊密地結合，及而後視需要使產品成形，可 將組合物製備。 可，適於口服給予之組合物以分離的單位呈現，如膠 囊、藥片、錠劑’各含有預定量活性化合物。其他組合物 包括於水溶液液體或非水溶液液體之懸浮液，如搪聚、藥 適於非口服給予之組合物方便地包含多胜肽或 胜肽的核酸之無菌水性或非水性製品，其較佳為與接受者 的血液等張。可將此製品根據已知方法制適當分散或濕 96146.doc -35- 200521231 潤劑及懸浮劑而配製。無菌可注射製品也可為無菌可注射 溶液或懸浮液於無毒非口服可接受的稀釋劑或溶劑中，例 如，如/谷液於1，3· 丁二醇中。於可使用的可接受的媒介及溶 劑之中為水、林格氏液（Ringer，s s〇luti〇n)及等張氣化鈉溶 液。此外，習見使用無菌、固定油為作為溶劑或懸浮媒介。 為此目的，可使用任何溫和固定油包括合成單-或雙_甘油 酯。此外，可使用脂肪酸如油酸於可注射的製品中。適於 口服皮下靜脈内、肌肉内等給予之載體配方可見於
Remington^ Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co.5 Easton，PA 〇 醫藥組合物可更包含如活性成分，如其他免疫調控抗楚 如（但不限於）抗-IC0S、抗_CD154、抗·CD134L或重組蛋白 質如（但不限於）rCTLA-4(CDl52)、rOX40(CD134)、或抗 發炎劑或免疫調控化合物如（但不限於）環孢靈素A、ft， ㈣、議、納巴黴素、FK506、15_d⑽ysperg滅η、類g 醇；如上述。此醫藥組合物可包含根據本發明cd45r咖
結合分子及免疫調控藥物及p 及/次抗-發炎劑於分開的單位齊 量形式，較佳的是其中單伤鑪& 糸Μ形式為適於以協同有效| 給予成分化合物，與使用說明_ ^ 起，視情況與幫助順從成 分化合物之給予的其他工呈， /、 如軚織或圖式。可將本發胡 之組合物以隨意組合給予，或 4 了配製成固疋組合。化合杉 之絕對劑量將視許多因辛 畜而改變，如個體、給予途徑、g 想期間、活性藥劑釋放速率及 千及破冶療症狀之本性及嚴重性 欲以本發明CD45R〇/rB結人八 口刀子早獨或與其他藥劑治療 96146.doc -36 - 200521231 的上述疾病包括（但不限於）自體免疫疾病，包括風濕性關節 炎、乾癬性關節炎、自體免疫甲狀腺炎、葛瑞芙氏症、第 一類型及第二類型糖尿病、多發性硬化症、克隆氏症（CD， Crohn’s disease)、潰瘍性大腸炎（UC，Ulcerative Colitis)、 全身性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus)、修格蘭症 候群（Sj6gren Syndrome)、硬皮病（Scleroderma)、自體免疫 胃炎及腎小球腎炎；移植排斥，包括（但不限於）器官及組織 異體移植及異種皮移植排斥，如用於治療如心臟、肺臟、 合併的心-肺、肝臟、腎臟、胰臟、皮膚或角膜移植的接受 者、異種移植抗宿主疾病（GVHD，graft versus host disease)，如骨髓移植後，及/或胰島細胞移植排斥；牛皮癬； 皮膚炎如異位性及接觸性皮膚炎包括過敏性接觸皮膚炎； 發炎性腸道疾病及/或過敏症，包括過敏性氣喘。 【實施方式】 參照下列實例將更完全了解本發明。然而，不應將其視 為限制本發明的範圍。於下列實例中所有溫度皆為攝氏度 數單位。 ”候選mAbn4 "嵌合抗體”為根據本發明之CD45RO/RB結 合分子，包含有SEQ ID NO:3之輕鏈及SEQ ID NO:4之重鏈。 ’’人化抗體’’為根據本發明之CD45RO/RB結合分子，包含 有SEQ ID N0:8之多胜肽及SEQ ID NO:9之多胜肽 (VHE/humV卜 VHE/VL1 或 VHE/VLh) ; SEQ ID NO:8之多胜 肽及 SEQ ID NO:10之多胜肽（VHQ/humVl，VHQ/VL1 或 VHQ/VLh) ; SEQ ID NO:7之多胜月太及SEQ ID NO:9之多胜 96146.doc -37- 200521231 肽（VHE/humV2，VHE/VL2 或 VHE/VLm) ; SEQ ID NO:7之 多胜肽及 SEQ ID NO:10 之多胜肽（VHQ/humV2，VHQ/VL2 或乂11(5/¥1^111);8£(5 1〇>^0:8之多胜肽及8£(5 1〇]^0:31之多 胜肽（VHEN73D/humVl ，VHEN73D/VL1 或 VHEN73D/ VLh) ; SEQ ID NO:8之多胜肽及SEQ ID NO:32之多胜肽 (VHQN73D/humVl，VHQN73D/VL1 或 VHQN73D/VLh); SEQ ID NO:7之多胜肽及SEQ ID NO:31之多胜肽 (VHEN73D/humV2，VHEN73D/VL2或 VHEN73D/VLm);或 SEQ ID NO:7之多胜肽及SEQ ID NO:32之多胜肽 (VHQN73D/humV2，VHQN73D/VL2 或 VHEN73D/VLm)。 使用下列縮寫： APC 抗原呈現細胞 CEX 陽離子交換層析 c.p.m. 每分鐘計數 dhfr 二氫葉酸還原酶 EDTA 乙二胺四乙酸 ELISA 酵素連結免疫吸附分析 ESI-Q-TOF 電灑離子化-四極-飛行時間 FACS 螢光激活細胞分類術 Fc 可結晶片段 F(ab，)2 抗原結合片段；雙價 FITC 異硫氰酸螢光素 FBS 胎牛血清 GVHD 移植抗宿主疾病 96146.doc -38- 200521231 HCMV 人類巨細胞病毒啟動子 HPLC 高效液體層析 IFN- r 干擾素7 IgE 免疫球蛋白同種型（isotype)E IgG 免疫球蛋白同種型（isotype)G IL-2 介白素-2(Interleukin-2) IU 世界單位 MALDI-TOF 基質辅助雷射解吸附離子化-飛行時間 MLR 混合淋巴球反應 MLC 混合淋巴球培養 MP1 來自流行感冒嗜血桿菌（hemophilus influenza)之基質蛋白1 MTX 曱氨蝶呤 PBS 磷酸緩衝的鹽水 PBL 周邊血液白血球 PBMC 周邊血液單核細胞 PCR 聚合酶鏈反應 RP 逆相層析 SEC 大小排阻層析 SCID 嚴重性聯合免疫缺陷 Treg T調控細胞 xGVHD 異種移植抗宿主疾病 實例1 :原發性混合淋巴球反應（MLR, mixed lymphocyte response) 96146.doc •39- 200521231 細胞 血液樣品係得自健康人類捐贈者。周邊血液單核細胞 (PBMC，peripheral blood mononuclear cells)係由經聚嚴糖-泛影葡胺（Ficoll-Hypaque)(Pharmacia LKB)離心自全周邊 血液、白細胞去除術（leukopheresis)或已知血型但不知HLA 型之白血球層（buffy coat)之白血球分離而得。於一些MLR 實驗中，在以40 Gy照射後直接使用PBMC作為刺激細胞。 於其他實驗中，藉由利用CD2或CD3免疫磁珠（Dynabeads) (Dynal，Oslo, Norway)將T細胞自PBMC消除。藉由磁場將珠 子及污染的細胞移除。使用消除T細胞的PBMC作為照射後 的刺激細胞。 使用PBMC，CD3+T細胞或CD4+T細胞作為MLR中的反應 細胞。細胞係由不同捐贈者對刺激細胞製備。CD3+T細胞 係由利用抗_CD16 mAb(Zymed，CA)、羊抗-小鼠IgG免疫磁 珠、抗-CD 14免疫磁珠、CD19免疫磁珠負選擇而純化。此 外，使用抗-CD8免疫磁珠來純化CD4+T細胞。將得到的細 胞由 FACScan或 FACSCalibur(Becton Dickinson & Co·，CA) 分析，得到的細胞之純度為>75%。將細胞懸浮於RPMI1640 培養基，補充10%加熱去活化的FBS、青黴素、鏈黴素及L-麩胺醯胺。 試劑 也將嵌合抗-CD45RO/RB mAb"候選mAb”及符合控制嵌 合抗體的同種型。小鼠（人類）控制IgGi抗體專一於貝類血藍 蛋白（KLH，keyhole limpet hemocyanin)或重組人類 IL-10係 96146.doc -40- 200521231 購自 BD Pharmingen(San Diego, CA)。抗-人類 CD154 mAb 5c8 係根據 Lederman等人，1992。 原發性混合淋巴球反應（MLR，mixed lymphocyte response) 將1父105個卩6^4(：或5><104個€03 +或€04+細胞與1\1〇5個照 射後PBMC或5xl04個T細胞消除的照射後（50Gy)PBMC在 指示的mAb存在下或無Ab存在下混合於96孔培養盤（Costar， Cambridge，ΜΑ)的各孔中。於一些實驗中，除了候選mAb 外，將羊-抗小鼠Ig的F(ab’）2片段或專一於Fc部分之羊-抗人 類 Ig(Jackson ImmunoResearch，West Grove，PA)以 10 微克 / 毫升加入以確保試管中最佳交聯目標CD45分子。將混合的 細胞於37°C及5Q/〇C02中培養4或5天並由以3H-胸腺嘧啶刺 激細胞於培養的最後16-20小時而決定增殖。其他實驗類似 於上述，但有下列例外：1)使用的培養基為EX-VIVO (Bio-Whittaker)含有10%FBS及1%人類血漿；2)使用抗小鼠 總IgG(5微克/毫升）作為二級交聯步驟；3)刺激細胞的照射 為 60 Gy 〇 原發性MLR係實施於”候選mAbn或控制嵌合IgGKlO微克 /毫升）存在中，二者皆與第二步試劑-羊抗-人類Ig專一於Fc 部分之F(abf)2片段（10微克/毫升）。由”候選mAb”之抑制百分 比係與控制IgG!存在中的細胞增殖比較而計算。將結果示 於下表1中： 96146.doc -41 - 200521231 表1 由10微克/毫升根據本發明候選mAb之原發性MLR抑制 反應細胞 刺激細胞（照射的PBMC) 抑制％ #211 CD4 #219 CD3 63.51 #220 CD4 #219 CD3 消除 63.07 #227 CD4 #220 CD3 消除 65.96 #229 CD4 #219 CD3 消除 50.76 平均士SD 60.83士6.83* *與控制值有顯著差異（P<〇.001) 根據本發明候選mAb抑制原發性MLR如表1中可見。於四 個不同捐贈者衍生的CD4+T細胞中平均抑制效果為 60.83士6·83 %及為統計上有意義。 如圖1中所示，於0.001及10微克/毫升範圍之”候選mAb’’ 中，由’’候選mAb”之原發性MLR抑制證實為劑量相關。 由”候選mAb”之原發性MLR抑制之IC5〇係由利用一個捐 贈者PBMC作為反應細胞之三次不同MLR實驗的結果而決 定。因此，將來自捐贈者#229及#219之CD4+T細胞反應細 胞及照射的PBMC消除T細胞作為刺激細胞混合於”候選 mAb”或控制嵌合Ab存在下與10微克/毫升羊抗-人類Ig之 F(ab’）2片段。將實驗重複3次並將”候選mAb”存在下之增殖 百分比與控制Ab存在下之T細胞增殖比較計算。利用 Origin(V.6.0®)決定IC5G值。細胞活性IC5〇值計算為 0.87士0·3 5 ηΜ(0·13士0.052微克 /毫升)。
實例2 :繼發性MLR 為了評估是否”候選mAb”引發CD4+T細胞對特定異體抗 原無反應，在原發性MLR後於不存在任何抗體中進行繼發 96146.doc -42- 200521231 性MLR。在存在指定抗體中將CD4+T細胞與照射後的異體 刺激細胞（T細胞消除的PBMC)培養於96孔培養盤1〇天（原 發性MLR)。而後，將細胞收集，於聚蔗糖-泛影葡胺梯度 上分層以去除死細胞，以RPMI清洗兩次，再以相同刺激細 胞、第三者刺激細胞或IL-2(50 U/ml)重新刺激。將細胞培 養3天並由以3H-胸腺嘧啶刺激細胞於培養的最後16·2〇小 時而決定增殖反應。 明確而言，在10微克/毫升π候選mAb，，、控制IgGl嵌合Ab 及羊抗-人類Ig之F(ab’）2片段存在中，將CD4+T細胞與照射 後的異體刺激細胞（取自其他捐贈者之T細胞消除的PBMC) 一起培養。於第5天決定原發性MLR增殖。對於繼發性 MLR，在”候選mAb”存在下將反應細胞及刺激細胞培養1〇 天，而後收集細胞，於RPMI1640中清洗兩次，在無任何Ab 存在中以特定刺激細胞、第三者刺激細胞或IL-2(50 U/ml) 重新刺激。於第3天決定細胞增殖。結果示於表2中： 表2 反應細胞CD4+T細胞捐贈 者# 繼發性MLR之抑制％ # 211 49.90 " # 220 59.331 " # 227 58.681 96146.doc -43 - 1 與控制值有顯著差異（由t-測試決定之p=<0.001，Sigmastat V.2.03) 〇 #ρ=<0.046 為了測試是否受損的增殖係由於以”候選mAbn處理的結 果造成的無反應，將衍生自原發性MLR的細胞培養於 IL-2(50 U/ml)存在中。加入IL-2造成挽回於原發性MLR中 200521231 已用π候選mAbn處理的T細胞之增殖反應，至類似於IgGjS 制Ab存在中觀察到的程度。此等資料指出以”候選mAb"處 理的T細胞中受損的繼發性反應係由於反應T細胞的功能改 變造成，其變成對特定刺激細胞無反應性。 根據下式計算抑制百分比： 以控制Ab的c.p.m··以”候選mAb’1的c.p.m.
-xlOO 以控制Ab的c.p.m. 統計分析係利用SigmaStat(2.03版）進行。 將資料藉二因子變異數分析（two-way ANOVA )隨後 Dunnett法分析。於所有測試程序中，將概率<0.05視為有意 義。於一些實驗辛，使用t-測試（SigmaStatV.2.03)。 實例3 :於SCID小鼠中之活體内存活研究 於SCID小鼠中hu-PBL之移植 將人類周邊血液單核細胞（PBMC，peripheral blood mononuclear cell)以足以於細胞轉移後四週内於>90%小鼠 引發致命異種移植抗宿主疾病（xGvHD，xenogeneic graft-versus-host disease)之量腹膜内注射入 SCID 小鼠 C.B 17/GbmsTac-PrkdcscldLystbg 小鼠（Taconic， Germantown， NY)。於下文中將此處理的SCID小鼠記為hu-PBL-SCID小 鼠。 hu-PBL-SCID小鼠之Mab處理 於第0天（PBMC注射後立即）、第3天、第7天及於其後之 每週間隔，將hu-PBL-SCID小鼠以π候選mAb"或小鼠或嵌合 96146.doc -44 - 200521231 同種尘符口 mAb控制組處理。將心喊ι〇〇微升咖中以$毫 克斤體重之最終濃度皮下傳遞。當所有控制組小鼠死亡 時停止處理。 評估處理結果 ;此研九中5平估”候選mAb，，功效之主要標準為 hu PBL-SCID小鼠之#活。結果之顯著性係由利用對數秩檢 g rank test)(Mantel 法）與Systat ν9·01軟體之助以存活 刀析之統，i*方法評估。存活分析之方法為非參數測試，其 :僅考慮是否特定小鼠仍存活，也考慮是否其因為無關於 治療/疾病而死亡，例如需要實施試管中分析其器官/細胞。 將肝、肺、腎及脾的切片由死鼠取出以作進一步評估。此 外，一開始（細胞轉移前）及實驗全程（每兩天）將 hu-PBL-SCID小鼠秤重作為其健康狀態的間接估計。利用來 自各鼠之得到的體重對PBMC轉移後天數值產生線性回歸 直線及隨後利用非參數曼惠二氏檢定法（Mann-Whitney test) 將其斜率（控制組對抗_CD45處理的小鼠）比較。 結果 所有以小鼠mAb控制組處理的hu_PBL_SCIEM、鼠於肺、肝 及脾中有滲入的人類白血球並於細胞轉移後約2至3週内死 亡（4/4)。死亡為xgvhd的可能結果。此外控制組mAb處理 的小鼠以直線方式體重降低，於3週内約1 〇%及以上。 所有以”候選mAb”處理的hu-PBL-SCID小鼠於超過4週皆 存活（4/4)而無任何明顯疾病徵兆，即使將”候選mAb”處理 停止3週後。”候選mAb”處理的小鼠以直線方式增加體重， 96146.doc -45- 200521231 於4週内高達至約5%。 實例4 :本發明抗體之表現 包含有 SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:31 或 SEQ ID NO:32 之人化抗體的 表現 建立根據示於圖2至11中質體圖之表現載體，包含有分別 編碼人化輕鏈可變區域humVl(SEQIDNO:8;圖4及6)、人化 輕鏈可變區域humV2(SEQ ID NO:7;圖5及7)、人化重鏈可變 區域VHE(SEQ ID NO:9;圖3及10)、或人化重鏈可變區域 VHQ(SEQ ID NO:10;圖2及11)、人化重鏈可變區域 VHE-N73D(SEQ ID NO:3 1;圖8)或人化重鏈可變區域 VHQ-N73D(SEQ ID NO:32;圖9)胺基酸序列之相對應核苷 酸。此等表現載體具有DNA(核苷酸）序列SEQ ID NO:15及 SEQ ID NO:41(VHQ) > SEQ ID NO:16 A SEQ ID NO:40(VHE)、SEQIDNO:17&SEQIDNO:36(humVl)、SEQ ID NO:18 及 SEQ ID NO:39(humV2)、或 SEQ ID NO:37(VHE-N73D)及 SEQ ID NO:38(VHQ-N73D)。 建造人化抗體重及輕鏈表現載體以表現於cos細胞中 為形式VLh及VLm之人類/C輕鏈表現載體 為了建立編碼人類/C同種型之完整人化輕鏈抗體的最終 表現載體，利用Hindlll及Bglll自VLh及VLm含PCR-Script 選殖載體（Stratagene)(VLm區域）將編碼完整輕鏈可變區域 的DNA片段割取。而後將凝膠純化的片段次選殖入 C21-HCMV /c表現載體的Hindlll及BamHI處，其係於建立 96146.doc -46- 200521231 人化抗-IgE抗體TESC-21(Kolbinger等人1993)期間產生及 其原始自 M. Bendig(MRC Collaborative Centre，London， UK)(Maeda等人，1991)取得。藉酚/氯仿萃取將接合的產物 純化，及電穿孔進入能夠電穿孔的Epicurian Coli®XLl-藍 種（目錄編號#200228，81^31&861^)。在植於1^/&111卩膠盤上於 37°C隔夜後，挑出各12個菌落以利用BioRobot 9600(Qiagen) 由3毫升培養製備質體DNA。此分別產生人化抗體形式VLh 及VLm之輕鏈表現載體，如圖中進一步說明。 VHQ之人類y -1重鏈表現載體 為了建立VHQ表現載體，採取逐步方式。首先，根據如 Kolbinger 等人 1993 年（Protein Eng· 1993 年 11 月； 6(8):971-80)所述的方法藉PCR將VHQ的完整可變區域組裝 並次選殖入C21-HCMV-r -1表現載體，由此已利用相同酵 素將C21插入體取出。而後將含有完整可變區域之PCR-Script選殖VHQ的Hindlll/BamHI片段次選殖入以相同酵素 切斷的表現載體C21-HCMV- 7 -1。如此而產生用於人化抗 體版VHQ之最終表現載體。 VHE之人類γ -1重鏈表現載體 編碼人類7 -1同種型之完整人化重鏈的最終VHE表現載 體之建造係藉由直接黏合編碼可變區域之Hindlll及BamHI 限制的PCR片段進入CShHCMV-r _1表現載體之Hindlll及 BamHI處而達成，其係於建立人化抗-IgE抗體TESC-21 (Kolbinger等人1993)期間產生及其原始也自M. Bendig (MRC Collaborative Centre，London，UK)(Maeda等人，1991) 96146.doc -47- 200521231 取得。 於COS細胞中的瞬間表現 採用下列轉染步驟於150 mm細胞培養JHI中的附著性COS 細胞，利用SuperFectTM轉染試劑（目錄編號301305， Qiagen)。使用上述四種不同表現載體於細胞的瞬間轉染。 對於人化抗體之表現，將含有重鏈插入體的兩個複製體（分 別為VHE或VHQ)各共同轉染入具有各編碼輕鏈（分別為 humV 1或humV2)之兩個複製體之細胞，以總共4個不同重及 輕鏈表現載體組合（VHE/humV卜 VHE/humV2、VHQ/humVl 及VHQ/humV2)。轉染前，將質體以切斷編碼安比西林 (ampicillin)耐受基因的區域之限制内切核酸酶ΡνιιΙ直線 化。轉染前一天，將4xl06個COS細胞於30毫升新鮮培養基 植入1 5 0 mm細胞培養皿。以此細胞密度植入通常於24小時 後產生80%緻密度（confluency)。轉染當天，將四個不同組 合之直線化重-及輕-鏈DNA表現載體（各1 5微克）稀釋於總 體積900微升無血清及抗生素之新鮮培養基中。而後將180 微升SuperFect轉染試劑與DNA溶液完全混合。於室溫將 DNA混合物培養10分鐘以允許複合物形成。當複合物形成 發生時，將生長培養基自COS細胞培養中取出，並將細胞 以PBS清洗一次。而後將9毫升新鮮培養基（含有10% FBS及 抗生素）加至含有轉染複合物之各反應試管並充分混合。立 即將最後製品轉移至4個欲轉染的培養皿並溫和混合。而後 將細胞培養與DNA複合物於37°C及5%C02培養3小時。培養 後，將含有轉染複合物的培養基取出，並換成30毫升新鮮 96146.doc •48- 200521231 培養基。於轉染後48小時，收集培養上層清液。 培養上層清液的濃縮 為了 ELIS A及FACS分析，自以重-及輕-鏈質體轉染的COS 細胞收集之培養上層清液如下述濃縮。將10毫升各上層清 液加至Centriprep YM_50離心過滤裝置（目錄標號4310, Millipore)，如製造商所述。將Centriprep過遽器以3000 rpm 於室溫離心1 0分鐘。而後剩餘20毫升上層清液將離心步驟 再次重複但僅用5分鐘離心及監督濃縮進展。回收中間500 微升濃縮的上層清液，轉移至新的Microcon離心過濾裝置 (目錄標號42412，]\4丨(^〇(：〇11)及遵照製造商的步驟進一步濃 縮。將濃縮的上層清液於室溫以3000 rpm離心24分鐘4次， 以6000 rpm離心10分鐘一次及而後，5分鐘三次，永遠監督 濃縮進展。達到的濃縮調節的培養基最終體積為1〇(Μ20微 升相對應於250至300倍濃縮原始培養基，將其儲存於4°C直 到使用。為了比較及控制組，將來自未轉染的培養基類似 地濃縮，利用上述相同離心步驟。 產生分泌人化抗-CD45RO/RB抗體之穩定Sp2/0骨髓瘤轉染 細胞 將小鼠骨髓瘤細胞株Sp2/0(ATCC，CRL-1581)以上述 CHO表現載體編碼CD45RO/RB人化抗體之重（VHE或VHQ) 及輕（humVl或humV2)鏈電穿孔。根據下列步驛使用四個不 同重及輕鏈表現載體組合（VHE/humVl、VHE/humV2、 VHQ/humVl及VHQ/humV2)作轉染：將各質體之20微克超 螺旋DNA與8xl06個活Sp2/0細胞懸浮於DMEM/10%FCS培 96146.doc -49- 200521231 養基混合於電穿孔小玻璃管（0.4公分缺口）。電穿孔設定為 15 00 V、25 pF，利用 BioRad GenePulser儀器。電穿孔後， 將細胞於培養基（DMEM補充1 0% FCS青徽素、鏈黴素及L-麩胺醯胺）培養20小時。第二天將選擇藥物G418(目錄編號 1013 1-019，Gibco)加至最終濃度為1毫克活性藥物/毫升並 將細胞分佈入一個96孔盤中，每孔200微升具有每孔大約 105個細胞。10至15天後，將G418存活的複製體放大於含 G418的培養基中。利用塗佈抗體羊-抗人類IgG/Fc r (目錄 號碼109-005-098，Jackson Labs)及過氧化酶_偶合的抗體抗 人類/C輕鏈（目錄編號A-7164, Sigma)，藉ELIS A評估來自此 等轉染細胞之人化mAb的分泌。同樣利用ELISA(見下）選擇 於此分析中正分的轉染細胞基於每天每細胞的產量作比 較。藉限數稀釋法（limiting dilution)，利用每孔1個細胞之 植入密度選擇各轉染細胞之最佳細胞株做立即次轉殖。如 上述再度決定G41 8存活的次株之產量。將次株放大於含 G41 8的培養基中，直到培養體積到達15〇毫升，於此階段繼 續培養而無G418於預定進料滾筒瓶之瓶中。 在第一次轉染及選擇後，穩定轉染細胞生長於96孔盤之 比例為20.8% 之 VHE/humVl、11.5% 之 VHQ/humVl、18.8% 之VHE/humV2及7.3%之VHQ/humV2。兩回合次選殖最佳兩 個製造者後為株1·33.25(3.87 pg/細胞/天）及株1.33.26(3.43 Pg/細胞/天）產生VHE/humVl及株12.1 ·4(1 · 19 pg/細胞/天）及 株12·1·20(1·05 pg/細胞/天）產生VHQ/humVl。隨後將此 VHE/humVl及VHQ/humVl之穩定Sp2/0轉染細胞放大做抗 96146.doc -50- 200521231 體製造及純化。 藉由利用固定的抗-人類IgGFc基質之親和力層析及大小 排阻層析之組合，將抗體由含有10%FCS之穩定轉染的 Sp2/0骨髓瘤細胞株上層清液純化。視需要，利用Acticlean Etox 管柱（Sterogene Bioseparations)將内毒素去除。 建造人化抗體重及輕鏈表現載體以表現於Sp2/0細胞中 為形式VLh及VLm之人類/c輕鏈表現載體： 利用弓| 子 HuCD45LC-Mlu(5，-AAAACGCGTTGTGA CATTCTGCTGACCCAGTCT-3，;SEQ ID NO:42)及 HuCD 45LC-Hind(5 丨-AAAAAAGCTTGGTCCCCTGGCCGAACG TGAA-3，;SEQ ID NO:43)，分另，J 自 CHO表現質體 SEQ ID NO:17 或 SEQ ID NO:18 藉 PCR 將 humVl(=VLl)或 himiV2(=VL2)放大。用 Mlul及 Hindlll將各 321 bp PCR片段 消化並直接接合入以相同酵素消化之輕鏈表現載體 chA6HCk.dhfr。將形成的質體分別稱為LCVL1 Sp20(SEQ ID NO:36 ;圖 6)及 LCVL2Sp20(SEQ ID NO:39 ;圖 7)。而後使 用LCVLlSp20於Sp2/0細胞中表現人化CD45RO/RB結合分 子 VHE/humVl、VHQ/humVl 或 VHE-N73D/humVl ;而後可 使用LCVL2Sp20於Sp2/0細胞中表現人化CD45RO/RB結合 分子 VHE/humV2、VHQ/humV2 或 VHE-N73D/humV2。 VHQ及VHE之人類r -1重鏈表現載體 利用 PCR 弓丨子 HuCD45HCEup(5’-CAGGCAGAGGTG CAGCTGGTGGAGTCA-3f;SEQ ID NO:44)或 HuCD45 HCQup(5，-CAGGCACAGGTGCAGCTGGTGGAGTCA-3，； 96146.doc 51 200521231 SEQ ID NO :45)及 HuCD45HClo(5，-AAATCCTTCTA GAACTCACCTGAGGAGAC-3’ ； SEQ ID NO:46)，分別自重 組質體 HCMV-G1 HuA6-VHE(SEQ ID NO:16 ;圖 3)及 HCMV-G1 HuA6-VHQ(SEQ ID NO:15 ;圖 2)藉 PCR將兩個人 化VHcDNA區域放大。將PCR片段的3’端用BstEII消化。而 後將各PCR片段選殖入以BstEII及鈍端切酶HincII切割的重 鏈匣載體HCcassREAL中。形成的質體為最終表現構體的中 間體，分別稱為HCcassHVESP20 及 HCcassHVQSP20。此次 選殖也導致領導序列的改變，其與兩者原始載體中的VH區 域結合。原先領導序列之胺基酸序列為 MDWTWRVFCLLAVVAPGAH S(SEQ ID NO:47)，而於次轉 殖期間已改變為 MAWVWTL PFLMAAAQSVQA(SEQ ID NO:48)。 將中間體 HCcassVHESP20 或 HCcassVHQSP20 以 Seal 消化 及隨後，將質體以BamHI及EcoRI消化。將含有Ig重鏈啟動 子及VH區域的2.9kb片段純化並與BamHI及EcoRI消化的重 鏈表現構體之8.7 kb片段接合。將形成的質體分別稱為 HCVHESp20(SEQ ID NO:40 ；圖 10)及 HCVHQSp20(SEQ ID NO:41 ;圖11);及使用於Sp2/0細胞中表現人化CD45RO/RB 結合分子 VHE/humVl、VHQ/humVl。 VHEN73D之人類τ -1重鏈表現載體 使用表現載體HCVHESp20(SEQ ID NO:40 ;圖10)及 HCVHQSp20(SEQ ID NO:41 ;圖11)作為定點突變的模板以 達到N73D突變（於CD45RO/RB結合分子重鏈之胺基酸位置 96146.doc -52- 200521231 73改變天門冬醯胺酸至天門冬胺酸）。此突變消除推定的N-醣化位置。突變係用QuikChange®多位置定點突變套組 (Stratagene)及引子 aCD45H-N73D(5’-磷 酸 GCCACACTAACTGCAGACAAATCCATCAGCACAGC-3，;SEQ ID NO:49)根據套組手冊進行。分別將形成構體 HCVHEN73DSp20及HCVHQN73DSp20之序列確認及揭示 為 SEQ ID NO:37 及 SEQ ID NO:38，及圖 8 及 9。使用 HCVHEN73DSp20(SEQ ID NO:37)與輕鏈表現構體 LCVLlSp20(SEQ ID NO:36)—起於Sp2/0細胞中表現人化 CD45RO/RB結合分子 VHE-N73D/humVl。 產生分泌人化抗-CD45RO/RB抗體VHE-N73D/humVl之 穩定Sp2/0骨髓瘤轉染細胞 將小鼠骨髓瘤細胞株Sp2/0 Agl4.10以編碼人化 CD45RO/RB 結 合分子 VHEN73D/humV 1 之 重 (HCVHEN73DSp20 ; SEQ ID NO:3 7)及輕（LCVLlSp20 ; SEQ IDNO:36)鏈載體電穿孔。為了轉染，使用具有發育力大於 95%之指數成長期細胞。用冷TF緩衝液（272 mM蔗糖，1 mM MgCl2，7 mM磷酸緩衝液pH7.4)清洗細胞兩次並將細胞濃 度調整至2xl07個細胞/毫升於TF緩衝液。將0.8毫升細胞懸 浮液與15微克各重及輕鏈質體構體混合並置於冰上10分 鐘。利用Biorad Gene Pulser(280 V及25 pF)藉電穿孔完成五 轉染。電穿孔後，將細胞置於冰上15分鐘，之後轉移入50 毫升冷培養基（RPMI基培養基無FCS)並於37°C及5%C02培 養2天。 96146.doc -53- 200521231 為了選擇轉染細胞，將細胞培養於1 · 1毫克/毫升 〇418(〇61^^(^11，〇113〇〇1(^ 3069464)存在中2至3週。位於輕 鏈構體上的二氫葉酸還原酶（dhfr，dihydro folate reductase) 放大標記允許dhfr基因以及轉基因（transgene)受葉酸類似 物曱氨蝶呤（MTX，methotrexate)的放大。為了基因放大， 將G418耐受細胞培養於200 nM MTX存在中2-3週期間，之 後進一步增加MTX濃度於1 μΜ造成放大的異種細胞庫。由 分析蛋白質A HPLC決定抗體濃度。藉限數稀釋法，利用每 孔0.3個細胞之植入密度選擇最佳製造庫做選殖以分離高 製造細胞株。 實例5 :藉ELISA決定重組人類IgG表現 VHE/humVl、VHE/humV2、VHQ/humVl 及 VHQ/humV2之 特徵 為了決定培養上層清液中表現的重組人類抗體之IgG濃 度，已發展三明治ELISA步驟及利用人類IgG作為標準最佳 化。將平底96孔微量定量盤（目錄編號4-39454，Nunc Immunoplate Maxisorp)於 4°C 以 100微升羊抗-人 IgG(全分 子，目錄編號II 011，SIGMA)最終濃度為0.5微克/毫升於PBS 塗佈隔夜。而後以清洗緩衝液（含0.05% Tween 20之PBS)將 孔清洗3次並以阻斷緩衝液（blocking buffer)(0.5%BSA於 PBS中）於37°C阻斷1.5小時。3次清洗循環後，將抗體樣品 及標準人類IgG(目錄編號14506，SIGMA)由連續1.5倍稀釋 於阻斷緩衝液中製備。以二重複將100微升稀釋的樣品或標 準品轉移至塗佈的盤並於室溫培養1小時。培養後，將盤以 96146.doc -54- 200521231 清洗緩衝液清洗3次及隨後用1 〇〇微升辣根過氧化物酶連結 的羊抗-人類IgG/c輕鏈（目錄編號Α·7164, SIGMA)以1M000 稀釋於阻斷緩衝液中培養1小時。控制組孔接受1 〇〇微升阻 斷緩衝液或濃縮的正常培養基。清洗後，進行樣品及標準 孔中結合的過氧化酶之比色法定量，利用TMB過氧化酶EIA 受質套組（目錄編號172-1067，Bio-Rad)根據製造者的說明 書。將過氧化酶混合物以每孔1 〇〇微升加入並於黑暗中於室 溫培養30分鐘。藉由加入1〇〇微升！ μ硫酸將比色反應停 止，利用ELISA盤讀取機（型號3350-UV，BioRad)於450 nm 讀取各孔中的吸收值。 以對IgG標準曲線的0.998相關係數，決定下列濃度於得 自轉染的COS細胞四個不同培養濃縮液（約250-300倍濃 縮）： VHE/humVl上層清液=8.26微克/毫升 VHE/humV2上層清液=6.27微克/毫升 VHQ/humVl上層清液=5·3微克/毫升 VHQ/humV2上層清液=5.56微克/毫升 大小排阻層析（SEC，Size Exclusion Chromatography) 將親和力純化的抗體VHE/humVl、VHE/humV2、 VHQ/humVl 及 VHQ/humV2 由大小排阻層析（SEC， Size Exclusion Chromatography)於 TSKgel Super SW3000SWXL 上分析以便決定蛋白質含量、小聚集物（募聚抗體）的比例以 及可能的副產物及分解產物。層析顯示對於VHE/humVl、 VHE/humV2、VHQ/humVl 及 VHQ/humV2 主要波峰分裂及對 96146.doc -55- 200521231 於具有重鏈E之集合，分離更為明確（圖12)。結果建議於各 樣品中至少有兩種分子具有IgG抗體典型滯留時間。
於還原條件下之SDS-PAGE 於還原條件下藉SDS-PAGE(梯度凝膠，4至20%Tr*is-甘胺 酸凝膠，Novex)分析人化CD45RO/RB結合分子 VHE/humVl、VHE/humV2、VHQ/humVl 及 VHQ/humV2 顯 示於各樣品中意外多餘帶的存在，移動稍高於相對應於重 鏈帶的帶。估計質量差異為2至4 kDa。西方點潰法分析顯 示上帶受抗人類（H+L)抗體辨識，暗示多餘帶為重鏈變體。 陽離子交換層析（CEX，Cation Exchange Chromatography) 電荷異質性係由陽離子交換層析（CEX，Cation Exchange Chromatography)利用 PolyCatA 管柱（PolyLC Inc·)評估。雖 然嵌合mAb除了 C-端離胺酸變體外，本質上無電荷異質 性，發現所有人化CD45RO/RB結合分子（即VHE/humVl、 VHE/humV2、VHQ/humVl 及 VHQ/humV2)於電荷上為非常 異質性。抗體中電荷異質性之共同原因為抗體重鏈C端處 Lys的存在/不存在造成CEX中的三個波峰。見於各層析的高 數量波峰（>1〇;圖13)代表於所有四種CD45RO/RB結合分子 中存在至少一種其他修飾。
SDS-PAGE 為 了評估 VHE/humVl、VHE/humV2、VHQ/humVl 及 VHQ/hum V之蛋白質庫中發現的兩抗體種類之間分子差 異，選擇VHE/humV2做進一步分析。將VHE/humV2的兩個 SEC波峰以半製備模式收集並以SEC重新分析以確認純 96146.doc -56- 200521231 度。而後將由SEC收集的部分（部分1及部分2)於還原條件下 以SDS-PAGE分析。於約49 kDa之意外多餘帶的比例於兩個 部分為不同。部分2幾乎沒有此多餘的較高帶。 ESI-Q-TOF質譜儀 而後將VHE/humV2的SEC部分FI、F2及蛋白質庫進一步 以ESI-Q-TOF質譜儀分析。於蛋白質庫及部分2之光譜圖 中’觀察到相同訊號團。第一個訊號團於約148,〇〇〇 Da，係 發現於蛋白質庫及部分2，但於部分丨中未偵測到。除了另 一訊號團於約152,500 Da外，於部分】中，偵測套第二個訊 號團（於約15〇,300 Da)。於約15〇,320 Da的第二個訊號團無 法關聯至任何常見抗體形式。此等發現建議於SEC中的兩 個波峰及於還原SDS-PAGE中的兩個較高帶相當於預期蛋 白質的各變體。 逆相層析 為了於質譜儀中得到較不複雜的模式，將抗體鏈進一步 分開分析。將部分還原及絲化。為了確認反應的完全， 將還原及烷基化的樣品由逆相（Rp，phsed)層析儀 (SORBAX，P(m)shell3()()SB{8)分析。還原及烧基化後波 峰形狀4乎與僅還原者相同。觀察到滯留時間的偏移。對 SEC 口p刀1及部分2還原及院基化樣品得到類似的模式。將 VHE/hmnV2蛋自f庫樣品、SEC部分丨及咖部分2(還原& 烧基化）以ESI-Q-TOF質譜儀分析。可將數個質量波峰指定 為預期的抗體形式。於所有三個樣品中（蛋白質庫、Μ及叫 發現相同主要波峰，但其強度於部分2中非常低（圖14)。 96146.doc -57- 200521231 重鏈變體之碳水化合物分析 將還原及烷基化的抗體注入 〜^^(RP，reverse phase)層 析管柱並將相當於重鏈變體的兩個波峰收集。而後決定此 等umi的抗體之寡醣概況。於發現於所有樣品中之預期 G0及G1寡醣基團之中，於部八 p刀1的層析圖中偵測到數個其 他波峰（此等波峰之痕跡亦可於 」於4分2及蛋白質庫的層析圖 中偵測到）。 合起來看，結果建議較大抗體種類含有多餘的醣化（非典 型見於S·表現的單株抗體）造成f量差異。因為由碳水 化。物刀析及質4儀發現的大而複雜的酿化為非常不可能 於抗體的固定區域中的保守地贼 幻俅寸性醣化位置，於人化抗體的胺 基酸序列中搜尋其他可能Μ ^ T仪吁八他』肊的位置。對N_醣化（N_x_s)之可能 位置（N73)確認於兩重鏈變體之可變區塊中。 由CEX之製備型分離 利用自VHE/hUmVU屯化的材料進行其他分析。為了降低 材料的異質性’以缓基胜肽酶B處理將c端離胺酸去除。藉 製備型陽離子交換層析法利㈣SepharQse(ph_cia)將 E/humVl抗體區分。將官柱以25 mM構酸納緩衝液，pH 6.〇(=緩衝液A)平衡並將結合的蛋白質以25〇爪河於缓 衝液A(=緩衝液B;梯度為〇_65% B)沖提。利用cex將部分 的純度$ # °將收集的部分重新注人SEC管柱以尋找以此 兩種技術得到的結果之間的關聯。層析圖指出於CEx中的 第群波峰與抗體的SEC分析中前波峰關聯，於CEX中的第 二群波峰一起導致蛋白質庫（或部分1)之SEC分析中的第一 96146.doc -58- 200521231 個波峰，及於CEX中最後的波峰於SEC(或部份2)中沖提為 最後的波峰。 結論為’上述結果（SEC部分1及2的寡概況、去緩基化 後得到的CEX模式、於CEX中收集的部分得到的SEC、質譜 儀）強烈晴示抗體種類具有複雜募醣之存在引起a)質量異質 性’導致於SEC中的雙波峰及b)於還原SDS-PAGE中觀察的 雙重鏈帶電荷異質性，導致CEX模式。 CEX部分之分析特性 因為較大抗體種類於CEX上較早沖出，顯示其為較少正 電荷’測量由製備型CEX得到的不同部分中唾液酸（sialic acid)(複雜醣化及負電荷的一種成分）之存在。唾液酸以不 同程度存在於所有4個樣品中。發現的唾液酸最可能為 N-glycolyl-神經胺糖酸形式（基於相較於乙醯基_神經胺 糖酸標準品較短滯留時間）。於一個CEX部份中唾液酸的極 低量存在相反於其在另一 CEX部分極高含量強烈建議負電 荷的糖成分促成質量/電荷異質性。將CEX部分由ESI_Q_ TOF質譜儀分析。
SDS-PAGE 也將相同部分以SDS-PAGE於還原條件下分析。可推論較 上重鍵帶相當於具有含唾液酸的複雜募醣概況之抗體部 刀。車乂下重鏈帶相當於顯示習見寡醣概況之預期抗體。 木瓜酵素消化的CEX部分於單·sf柱上之分離 $ 了確'忍重鏈可變區塊中可能醣化位置的使用，將約1 毫克各CEX部分以木瓜酵素處理以分開抗體的㈣及以部 96146.doc 200521231 分。於單-s管柱上進行製備型層析。將各收集的子部分重 新注入RP管柱以確認其就F ab及/或F c區塊而論之内容。而 後將各收集的子部分以ESI-Q-TOF質譜儀分析。得到的結果 顯示a)於重鏈之Fc部分中保守性醣化位置係由具有無 (G0)、一個（G1)或兩個末端（G2)半乳糖單元之雙觸（bi-antennary)募醣形式佔據；b)相反地，不規則醣化位置（N73) 攜帶含N-glycolyl-神經胺糖酸之複雜寡醣。 結論是，發現重鏈可變區塊中的天門冬醯胺基基團N73 為部分N-醣化。此等糖種類造成質量異質性以及電荷異質 性，由SDS-PAGE、大小排阻層析及陽離子交換層析偵測。 VHE-N73D/humVl 之定性 為了消除人化 VHE/humVl、VHE/humV2、VHQ/humVl 及VHQ/humV2抗體之異質性，將重鏈可變區塊中天門冬醯 胺基基團於位置N73以天門冬胺酸基團取代（見實例4)。而 後將VHE-N73D/humVl進一步分析： 大小排阻層析（SEC，Size Exclusion Chromatography) 如上述進行SEC。於SEC中觀察到VHE/humVl及 VHE-N73D/humVl之間明顯差異。相反於VHE/humVl中得 到的雙峰，於VHE-N73D/humVl僅得到一個波峰（圖12)。由 SEC定量大約0.2%聚集物。
於還原條件下之SDS-PAGE 於還原條件下藉SDS-PAGE進一步分析VHE/humV2及 VHE-N73D/humVl。對於 VHE-N73D/humVl 僅可見一帶於 預期重鏈（HC，heavy chain)位置（約50 kDa)。對 96146.doc -60- 200521231 VHE-N73D/humVl觀察到的HC-帶相當於VHE/humV2觀察 到的雙帶之較下帶。對於分析的蛋白質，輕鏈帶的位置為 相同。 陽離子交換層析（CEX，Cation Exchange Chromatography) 如上述進行陽離子交換層析（CEX，Cation Exchange Chromatography) 。 CEX分析得到的結果顯示將 VHE_N73D/humVl的電荷異質性降低至C·端離胺酸變體 (三個波峰）如相較於VHE/humV2之高電荷異質性（>10 ;圖 13)。 MALDI TOF分析（質譜儀） 由MALDI TOF分析（質譜儀）得到的重鏈及輕鏈之偵測的 質量與預期質量（自VHE-N73D/humVl的胺基酸序列推導） 準確符合。 逆相層析（RP，reverse phase chromatography) 以DDT還原後，將兩個人化抗體VHE/humV2及 VHE-N73D/humVl 以逆相（RP，reverse phased)層析儀分 析。由於在天門冬醢胺N73上部分醣化，於相對應於輕鏈（於 約17.3分鐘）之波峰之中，VHE/humV2觀察到兩個’’重鏈"（於 約18.5分鐘之雙峰）。對於VHE-N73D/hinnVl，重鏈僅觀察 到一個波峰（圖14)。 實例6 : FACS競爭分析（結合親和力） 選擇人類T-細胞株PEER作為FACS分析之目標細胞因為 其在細胞表面上表現CD45抗原。為了分析人化抗體上層清 液的結合親和力，利用FITC標記的嵌合抗體作為參考進行 96146.doc -61 - 200521231 競爭實驗並與純化的小鼠抗體及嵌合抗體之抑制比較。將 PEER細胞培養於3000 rpm離心10秒並將培養基去除。將細 胞重新懸浮於FACS緩衝液（含1%FBS及0.1%疊氮化鈉之 PBS)並以每孔lx 105個細胞之細胞密度植入96孔圓底微量 滴定盤内。將盤離心並將上層清液丟棄。對了阻斷研究， 將2 5微升濃縮的未轉染培養基或同種型符合的控制組抗體 (負控制組）、未標記的小鼠抗體或嵌合抗體（正控制組）以及 含有人化抗體不同組合之濃縮的上層清液（樣品）首先以文 中指定的濃度加入各孔中。於4°C培養1小時後，將PEER細 胞以200微升FACS緩衝液藉離心清洗。隨後將細胞於4°C和 與FITC連結的嵌合抗體於FACS緩衝液25微升中以最終濃 度20微克/毫升培養1小時。將細胞清洗並重新懸浮於3〇〇微 升含2微克/毫升埃化丙啶（propidium iodide)之FACS緩衝 液，其允許閘門（gating)存活細胞。將細胞製品分析於流式 細胞儀（FACSCalibur，Becton Dickinson)。 FACS分析指出螢光物質標記的喪合抗體受濃縮的人化 抗體培養上層清液劑量相關地阻斷。以同種型符合的控制 組抗體發現無劑量相關阻斷嵌合抗體結合，代表由不同人 化抗體組合之阻斷效果為抗原決定部位專一及抗原決定部 位專一性顯然於人化過程後仍然保留。 將來自上面所提SP2/0轉染細胞之未稀釋上層清液或嵌 合抗體（正控制組）或同種型符合的控制組抗體（負控制組） 以2微克/毫升於培養基與1 5><1〇5個PE]Er細胞於ι〇〇微升培 養於4°C30分鐘。而後，將1〇〇微升含？1丁(：標記嵌合抗體之 96146.doc 200521231 PBS加至各樣品並於4°C持續再培養30分鐘。清洗後，將細 胞重新懸浮於含1微克/毫升7-胺基-放線菌素D之FACS-PBS 中並利用 Becton Dickinson FACSCalibur儀器及 CellQuest Pro軟體以流式細胞儀分析。閘門（gating)於活細胞，即7-胺基-放線菌素D-負性事件（negative events)。 FACS分析顯示未標記的人化CD45RB/RO結合分子，如 VHE/humV 1及VHQ/humV 1但非同種型符合的控制組抗體 與FITC標記的嵌合抗體競爭結合至人類CD45-正T細胞株 PEER 〇 VHE-N73D/humVl 的專一性 為了評估人化CD45RO/RB結合分子VHE/humVl之修飾 (即於CD45RO/RB結合分子的重鏈胺基酸位置73交換天門 冬醯胺成為天門冬胺酸）是否改變與同源抗原決定部位之 反應性，將VHE-N73D/humVl與CD45-表現人類T細胞株 PEER之反應性於競爭結合實驗中分析。 將PEER細胞與VHE-N73D/humVl、與其嵌合前身或與不 結合同種型控制組IgGl抗體培養。將未結合的抗體洗掉並 使細胞接受與螢光物質異硫氰酸螢光素（FITC， isothiocyanate)標記的喪合抗-CD45RO/RB mAb 或 FITC標 記的同種型IgGl控制組抗體培養。清洗後，使細胞經過流 式細胞儀分析以定量FITC標記的抗體結合至預先培養的 PEER細胞之量：將PEER細胞培養於400倍標準重力（g)離心 1 0分鐘並將培養基去除。將細胞重新懸浮於FACS緩衝液（含 1% v/v FBS，0.1% w/v EDTA及0.1% w/v疊氮化鈉之PBS)並 96146.doc -63 - 200521231 以每孔lxio5個細胞之細胞密度植入96孔圓V形底微量滴定 盤内。將盤離心並將上層清液丟棄。將各細胞樣品於含2 0 微克/毫升嵌合抗-CD45RO/RB mAb、VHE-N73D/humVl 或 IgGl控制組抗體之50微升FACS緩衝液於4°C培養30分鐘。 接下來，將PEER細胞以150微升FACS緩衝液藉離心清洗。 隨後將細胞於4°C和與50微升含20微克/毫升FITC連結的嵌 合抗體或FITC連結的3G5控制組Ab之FACS緩衝液中培養 30分鐘。最後將細胞清洗並重新懸浮於200微升含1微克/毫 升 7-胺基-放線菌素 D(7-AAD，7-amino actinomycin D)之 FACS緩衝液，其允許於分析期間辨識存活細胞。將細胞製 品分析於 FACS Cal ibur流式細胞儀（Becton Dickinson)。 觀察到未標記的VHE-N73D/humVl及未標記的嵌合抗 -CD45R0/RB mAb但非IgGl控制組抗體避免FITC標記的嵌 合抗-CD45R0/RB mAb結合至CD45-表現PEER細胞，如由降 低的螢光訊號決定。結論是，發現修飾VHE/humVl成為 VHE-N73D/humVl不改變人化抗-CD45RO/RB結合分子的 抗原決定部位專一性。 VHE-N73D/humVl對人類或食蟹猴CD45之親和力 為了決定VHE-N73D/humVl對其抗原決定部位的親和 力，於競爭結合實驗中可定量VHE-N73D/humVl與人類 CD45-表現T細胞株PEER或食蟹猴CD45-表現T細胞株 HSC-F之反應性，類似於說明於Daley等人，1995 ; J. Mol. Biol· 253:243之程序。 簡而言之，使用PEER或HSC-F細胞與FITC標記的抗體在 96146.doc •64- 200521231 不同濃度之未標記競爭抗體的存在中之染色強度來計算未 標記的抗體之親和力。更明確而言，於第一步中，測量FITC 標記的小鼠衍生的抗-人類CD45RB/RO結合分子A6(mA6) 之濃度及螢光物質標記化學計量。接下來，藉由上述FITC 連結的mA6(小鼠衍生的抗-huCD45)之助及利用具有已知 分子標記程度之螢光珠決定PEER或HSC-F細胞株表面上目 標分子（CD45)之濃度。已知細胞CD45受體之濃度及其FITC 結合的配體，藉FACS基平衡滴定程序決定FITC結合的mA6 對細胞CD45受體之親和力。最後，由與PEER或HSC-F上 FITC連結的mA6之競爭染色反應測量FITC螢光增加為 VHE-N73D/humVl總濃度之函數決定未標記抗體 VHE-N73D/humVl之親和力。若將代表代數上明確說明結 合平衡於兩競爭配體結合至一個受體之混合物中的立方程 式實現入程式Origin 7.5，使用軟體程式在反覆曲線符合分 析計算VHE-N73D/humVl之解離常數（Kd)值。 於一個實驗中，VHE-N73D/humVl對人類PEER細胞目標 之解離常數計算為2.44士0.07 nM，對於食蟹猴HSC-F細胞目 標，計算為1.67士0.00 nM，假設雙價抗體結合至目標 CD45RO/RB分子。 實例7 : CD45RB/RO結合分子之生物活性 於此研究中，吾人已說明CD45RB/RO結合嵌合抗體當存 在於多株活化的初生人類T細胞的培養中⑴支持具有特徵 Treg顯型T細胞的分化，（ii)避免或增強T細胞活化後的細胞 凋亡，及（iii)重新刺激後影響子集專一性抗原即受體之表 96146.doc -65- 200521231 現。 〔0451^/110結合欲合抗體增加多株活化的1細胞中之細胞 死亡 藉由抗-CD3加抗- CD28 mAb(各200 ng/ml)在存在或不存 在（=控制組）CD45RB/RO結合嵌合抗體下使初生τ細胞 (CD4 +及CD8+T子集之混合物）經過活化。於第2天藉由清洗 將過多抗體去除。使用由細胞凋亡及壞死細胞攝入的胺 基-放線菌素 D(7-ADD，7-amino actinomycin D)作為 DNA 染 色染料以測ΐ活化後之細胞死亡。結果顯示在活化後2天 時，於CD45RB/RO結合嵌合抗體存在下Τ細胞的活化增加 7-ADD陽性細胞的部分2倍。於第7天，7-AAD陽性細胞的 部分再度類似於CD45RB/RO結合欲合抗體處理及控制組培 養中。 CD45RB/RO結合彼合抗艘但非控制組mAb處理的τ細胞呈 現T調控細胞（Treg)顯型 CD25及負控制蛋白質CTLA-4(CD152)增加的表現為Treg 細胞的標誌。由CD45RB/RO結合嵌合抗體功能上抑制原發 及繼發性T細胞反應可能是由於引發Treg細胞。為了說明此 問題，藉抗-CD3+CD28 mAb將T細胞活化及在CD45RB/RO 結合嵌合抗體或抗-LPS控制組mAb存在中培養。CTLA-4及 CD2 5表現的時程顯示於第二次刺激後第1及3天時控制組 及CD45RB/RO結合嵌合抗體處理的T細胞之間顯著差異， 代表Treg顯型。 在CD45RB/RO結合嵌合抗體存在中細胞内CTLA-4表現持 96146.doc •66- 200521231 續 曾有報導也可發現大量CTLA-4於細胞内。所以，與表面 CTLA-4染色同時，分析細胞内CTLA-4表現。於刺激後第4 天時見到T細胞培養間中等差異。然而，在延長培養後，高 量細胞内CTLA-4僅於CD45RB/RO結合嵌合抗體處理的T細 胞中持續而於控制組T細胞中無。 CD45RB/RO結合嵌合抗體處理的T細胞變成對CD4及CD8 雙重陽性 刺激後，T細胞引發及向上調節數種表面受體之表現，如 CD25、CD152(CTLA-4)、CD154(CD40-配體）及其他。相反 地，認為CD4或CD8之表現程度保持較固定。吾人可再現性 地觀察到於CD45RB/RO結合嵌合抗體處理的T細胞中活化 後CD4及CD8抗原兩者強烈增加，但控制組Ab處理的T細胞 則不會。CD4/CD8雙重陽性T細胞族群之出現似乎是由於 CD4的向上調節於CD8 +子集及相反地CD8於CD4 +子集。此 與控制組培養中雙重陽性T細胞之普通低比例相反。 由CD45RB/RO結合嵌合抗體處理的T細胞之高IL-2受體α 鏈但非常低/5鏈表現 已知Treg細胞對CD25(IL-2受體α鏈）為組成性陽性。於 Treg細胞上三聚體IL-2受體之其他子集的調控為未知。最 近，吾人已比較IL-2受體/5鏈如CD122之表現於 CD45RB/RO結合嵌合抗體存在或不存在中活化及增殖的T 細胞上。結果顯示CD45RB/RO結合嵌合抗體處理的T細胞 相較於控制組培養中的T細胞具有低約10倍之CD 122表 96146.doc -67- 200521231 現。此差異可指出Treg細胞需要除了 IL-2之因子以增殖。 實例8 ··本發明之序列（將本發明之CDR序列下標線） SEQ ID NO ： 1 嵌合輕鏈之部分胺基酸序列
D1LLTQSPAILSVSPGERVSFSCRASQN1GTSIQWYQQRTNGSPRLHRSSSES1SG1PSRFSG
SGSGTDFTLSINSVESEDIADYYCQQSNTWPFTFGSGTKLE1K SEQ ID NO ： 2 嵌合重鏈之部分胺基酸序列
EVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTNYHHWVKQEPGQGLEW1GYFNPVNHGTKY
NEKFKGRATLTADKSSNTAYMDLSSLTSEDSAIYYCARSGPYAWFDTWGQGTTVTVSS SEQ ID NO ： 3 嵌合輕鏈之胺基酸序列
DILLTQSPAILSVSPGERVSFSCRASQN1GTS1QWYQQRTNGSPRLLIRSSSES1SGIPSRFSG
SGSGTDFTLSINSVESED1ADYYCQQSNTWPFTFGSGTKLE1KRTVAAPSVF1FPPSDEQLKS
GTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYE
KHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC SEQ ID NO ： 4 嵌合重鏈之胺基酸序列
EVQLQQSGPELVKPGASVKMSCKASGYTFTNYHHWVKQEPGQGLEW1GYFNPYNHGTKY
NEKFKGRATLTADKSSNTAYMDLSSLTSEDSA1YYCARSGPYAWFDTWGQGTTVTVSSAS
TKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLY
SLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFL
FPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRW
SVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVS
LTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFS
CSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK SEQ ID NO ： 5 96146.doc -68- 200521231 編碼SEQ ID ΝΟ:1多胜肽之核苷酸序列
GACATTCTGCTGACCCAGTCTCCAGCCATCCTGTCTGTGAGTCCAGGAGAAAGAGTCA
GTTTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAACATTGGCACAAGCATACAGTGGTATCAACAAAGA
ACAMTGGTTCTCCMGGCTTCTCATMGGTCnCITTCTGAGTCTATCTCTGGGATCCCT
TCCAGGTTTAGTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTTACTCTTAGCATCAACAGTGTGGA
GTCTGAAGATATTGCAGATTATTACTGTCAACAAAGTAATACCTGGCCATTCACGTTCGG
CTCGGGGACCAAGCTTGAAATCAAA SEQ ID NO ： 6 編碼SEQ ID NO:2多胜肽之核苷酸序列
GAGGTGCAGCTGCAGCAGTCAGGACCTGAACTGGTAAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAG
ATGTCCTGCAAGGCCTCTGGATACACATTCACTAATTATATTATCCACTGGGTGAAGCA
GGAGCCTGGTCAGGGCCTTGAATGGATTGGATATTTTAATCCTTACAATCATGGTACTA
AGTACAATGAGAAGTTCAAAGGCAGGGCCACACTAACTGCAGACAAATCCTCCAACACA
GCCTACATGGACCTCAGCAGCCTGACCTCTGAGGACTCTGCGATCTACTACTGTGCAA
GATCAGGACCCTATGCCTGGTTTGACACCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTC
CTCA SEQ ID NO ： 7 記為humV2(humV2 = VLm)之人化輕鏈之部分胺基酸序列
DILLTQSPAT LSLSPGERAT FSCRASQN1G TSIQWYQQKT NGAPRLL1RS SSESISG1PS RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ SNTWPFTFGQ G丁KLEIK SEQ ID NO ： 8 記為humVI(humVl = VLh)之人化輕鏈之部分胺基酸序列
DILLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASQN1G TS1QWYQQKP GQAPRLL1RS SSESISG1PS RFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ SNTWPFTFGQ GTKLEIK SEQ ID NO ： 9 記為VHE之人化重鏈之部分胺基酸序列 96146.doc -69- 200521231
EVQLVESGAE VKKPGASVKV SCKASGYTF丁 NYI1HWVKQE PGQGLEWIGY FNPYNHGTKV NEKFKGRATL TANKSISTAY MELSSLRSED TAVYYCA嘿 PYAWFDTWGQ GTTVTVSS SEQ ID NO ： 10 記為VHQ之人化重鏈之部分胺基酸序列
QVQLVESGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT NY1IHWVKQE PGQGLEWIGY FNPVNHGTKY NEKFKGRATL TANKSISTAY MELSSLRSED TAVYYCAR延 PYAWFDTWGQ GTTVTVSS SEQ ID NO ： 11 編碼胺基酸序列SEQ ID NO:9之核苷酸序列
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCAGGAGCCGMGTGAAAAAGCCTGGGGCTTCAGTGMG
GTGTCCTGCAAGGCCTCTGGATACACATTCACTMTTATATTATCCACTGGGTGAAGCA
GGAGCCTGGTCAGGGCCTTGAATGGATTGGATATTTTAATCCTTACAATCATGGTACTA
AGTACAATGAGAAGTTCAAAGGCAGGGCCACACTAACTGCAAACAAATCCATCAGCACA
GCCTACATGGAGCTCAGCAGCCTGCGCTCTGAGGACACTGCGGTCTACTACTGTGCAA
GATCAGGACCCTATGCCTGGTTTGACACCTGGGGCCMGGGACCACGGTCACCGTCTC
CTCA SEQ ID NO ： 12
編碼胺基酸序列SEQ ID ΝΟ··10之核苷酸序列
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCAGGAGCCGAAGTGAAAAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAG
G 丁 (3TCCTC3CMGC3CCTC 丁 <3GATACACATTCACTAATTATATTATCCACTG<3GTGAA<3CA
GGAGCCTGGTCAGGGCCTTGAATGGATTGGATATTTTAATCCTTACAATCATGGTACTA
AGTACAATGAGAAGTTCAAAGGCAGGGCCACACTAACTGCAMCAAATCCATCAGCACA
GCCTACATGGAGCTCAGCAGCCTGCGCTCTGAGGACACTGCGGTC 丁ACTACTGTGCAA
GATCAGGACCCTATGCCTGGTTTGACACCTGGGGCCMGGGACCACGGTCACCGTCTC
CTCA SEQ ID NO ： 13 編碼胺基酸序列SEQ ID NO:7之核苷酸序列 96146.doc -70- 200521231
GACATTCTGCTGACCCAGTCTCCAGCCACCCTGTCTCTGAGTCCAGGAGAAAGAGCCA
CTTTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAACATTGGCACAAGCATACAGTGGTATCAACAAAAA
ACAAATGGTGCTCCAAGGCTTCTCATAAGGTCTTCTTCTGAGTCTATCTCTGGGATCCC
TTCCAGGTTTAGTGGCAGTGGATCAGGGACAGATnTACTCnACCATCAGCAGTCTGG
AGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAACAAAGTAATACCTGGCCATTCACGTTC
GGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAA SEQ ID NO ： 14 編碼胺基酸序列SEQ ID NO:8之核苷酸序列
GACATTCTGCTGACCCAGTCTCCAGCCACCCTGTCTCTGAGTCCAGGAGAAAGAGCCA
CTCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGAACATTGGCACAAGCATACAGTGGTATCAACAAAAA
CCAGGTCAGGCTCCMGGCTTCTCATMGGTCTTCTTCTGAGTCTATCTCTGGGATCCC
TTCCAGGTTTAGTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTTACTCTTACCATCAGCAGTCTGG
AGCCTGAAGATTTTGCAGTGTATTACTGTCAACAAAGTAATACCTGGCCATTCACGTTC
GGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAA SEQ ID NO ： 15 表現載體HCMV-G1 HuA6-VHQ之核苷酸序列 (包含有由3921_4274之SEQ ID NO:12(VHQ)之人化重鏈表 現載體的完整DNA序列）
96146.doc -71 - 200521231
1 AGCTTTTTGC AAAAGCCTAG GCCTCCAAAA AAGCCTCCTC ACTACTTCTG 51 GAATAGCTCA GAGGCCGAGG CGGCCTCGGC CTCTGCATAA ATAAAAAAAA 101 TTAGTCAGCC ATGGGGCGGA GAATGGGCGG AACTGGGCGG AGTTAGGGGC 151 GGGATGGGCG GAGTTAGGGG CGGGACTATG GTTGCTGACT AATTGAGATG 201 CATGCTTTGC ATACTTCTGC CTGCTGGGGA GCCTGGTTGC TGACTAATTG 251 AGATGCATGC TTTGCATACT TCTGCCTGCT GGGGAGCCTG GGGACTTTCC 301 ACACCCTAAC TGACACACAT TCCACAGCTG CCTCGCGCGT TTCGGTGATG 351 ACGGTGAAAA CCTCTGACAC ATGCAGCTCC CGGAGACGGT CACAGCTTGT 401 CTGTAAGCGG ATGCCGGGAG CAGACAAGCC CGTCAGGGCG CGTCAGCGGG 451 TGTTGGCGGG TGTCGGGGCG CAGCCATGAC CCAGTCACGT AGCGATAGCG 501 GAGTGTATAC TGGCTTAACT ATGCGGCATC AGAGCAGATT GTACTGAGAG 551 TGCACCATAT GCGGTGTGAA ATACCGCACA GATGCGTAAG GAGAAAATAC 601 CGCATCAGGC GCTCTTCCGC TTCCTCGCTC ACTGACTCGC TGCGCTCG6T 651 CGTTCGGCTG CGGCGAGCGG TATCAGCTCA CTCAAAGGCG GTAATACGGT 701 TATCCACAGA ATCAGGGGAT AACGCAGGAA AGAACATGTG AGCAAAAGGC 751 CAGCAAAAGG CCAGGAACCG TAAAAAGGCC GCGTTGCTGG CGTTTTTCCA 801 TAGGCTCCGC CCCCCTGACG AGCATCACAA AAATCGACGC TCAAGTCAGA 851 GGTGGCGAAA CCCGACAGGA CTATAAAGAT ACCAGGCGTT TCCCCCTGGA 901 AGCTCCCTCG TGCGCTCTCC TGTTCCGACC CTGCCGCTTA CCGGATACCT 951 GTCCGCCTTT CTCCCTTCGG GAAGCGTGGC GCTTTCTCAT AGCTCACGCT 1001 GTAGGTATCT CAGTTCGGTG TAGGTCGTTC GCTCCAAGCT GGGCTGTGTG 1051 CACGAACCCC CCGTTCAGCC CGACCGCTGC GCCTTATCCG GTAACTATCG 1101 TCTTGAGTCC AACCCGGTAA GACACGACTT ATCGCCACTG GCAGCAGCCA 1151 CTGGTAACAG GATTAGCAGA GCGAGGTATG TAGGCGGTGC TACAGAGTTC 1201 TTGAAGTGGT GGCCTAACTA CGGCTACACT AGAAGGACAG TATTTGGTAT 1251 CTGCGCTCTG CTGAAGCCAG TTACCTTCGG AAAAAGAGTT GGTAGCTCTT 1301 GATCCGGCAA ACAAACCACC GCTGGTAGCG GTGGTTTTTT TGTTTGCAAG
96146.doc -72- 200521231
1351 CAGCAGATTA CGGGCAGAAA AAAAGGATCT CAAGAAGATC CTTTGATCTT 1401 TTCTACGGGG TCTGACGCTC AGTGGAACGA AAACTCACGT TAAGGGATTT 1451 TGGTCATGAG ATTATCAAAA AGGATCTTCA CCTAGATCCT TTTAAATTAA 1501 AAATGAAGTT TTAAATCAAT CTAAAGTATA TATGAGTAAA CTTGGTCTGA 1551 CAGTTACCAA TGCTTAATCA GTGAGGCACC TATCTCAGCG ATCTGTCTAT 1601 TTCGTTCATC CATAGTTGCC TGACTCCCCG TCGTGTAGAT AACTACGATA 1651 CGGGAGGGCT TACCATCTGG CCCCAGTGCT GCAATGATAC CGCGAGACCC 1701 ACGCTCACCG GCTCCAGATT TATCAGCAAT AAACCAGCCA GCCGGAAGGG 1751 CCGAGCGCAG AAGTGGTCCT GCAACTTTAT CCGCCTCCAT CCAGTCTATT 1801 AATTGTTGCC GGGAAGCTAG AGTAAGTAGT TCGCCAGTTA ATAGTTTGCG 1851 CAACGTTGTT GCCATTGCTG CAGGCATCGT GGTGTCACGC TCGTCGTTTG 1901 GTATGGCTTC ATTCAGCTCC GGTTCCCAAC GATCAAGGCG AGTTACATGA 1951 TCCCCCATGT TGTGCAAAAA AGCGGTTAGC TCCTTCGGTC CTCCGATGGT 2001 TGTCAGAAGT AAGTTGGCCG CAGTGTTATC ACTCATGGTT ATGGCAGCAC 2051 TGCATAATTC TCTTACTGTC ATGGCATCCG TAAGATGCTT TTCTGTGACT 2101 GGTGAGTACT CAACCAAGTC ATTCTGAGAA TAGTGTATGC GGCGACCGAG 2151 TTGCTCTTGC CCGGCGTCAA CACGGGATAA TACCGCGCCA CATAGCAGAA 2201 CTTTAAAAGT GCTCATCATT GGAAAACGTT CTTCGGGGCG AAAACTCTCA 2251 AGGATCTTAC CGCTGTTGAG ATCCAGTTCG ATGTAACCCA CTCGTGCACC 2301 CAACTGATCT TCAGCATCTT TTACTTTCAC CAGCGTTTCT GGGTGAGCAA 2351 AAACAGG71AG GCAAAATGCC GCAAAAAAGG GAATAAGGGC GACACGGAAA 2401 TGTTGAATAC TCATACTCTT CCTTTTTCAA TATTATTGAA GCATTTATCA 2451 GGGTTATTGT CTCATGAGCG GATACATATT TGAATGTATT TAGAAAAATA 2501 AACAAATAGG GGTTCCGCGC ACATTTCCCC GAAAAGTGCC ACCTGACGTC 2551 TAAGAAACCA TTATTATCAT GACATTAACC TATAAAAATA GGCGTATCAC 2601 GAGGCCCTTT CGTCTTCAAG AATTCAGCTT GGCTGCAGTG ΑΑΤΑΑΤΑΑ7ϋ\ 2651 TGTGTGTTTG TCCGAAATAC GCGTTTTGAG ATTTCTGTCG CCGACTAAAT 2701 TCATGTCGCG CGATAGTGGT GTTTATCGCC GATAGAGATG GCGATATTGG 2751 AAAAATCGAT ATTTGAAAAT ATGGCATATT GAAAATGTCG CCGATGTGAG 2801 TTTCTGTGTA ACTGATATCG CCATTTTTCC AAAAGTGATT TTTGGGCATA 2851 CGCGATATCT GGCGATAGCG CTTATATCGT TTACGGGGGA TGGCGATAGA 2901 CGACTTTGGT GACTTGGGCG ATTCTGTGTG TCGCAAATAT CGCAGTTTCG 2951 ATATAGGTGA CAGACGATAT GAGGCTATAT CGCCGATAGA GGCGACATCA 3001 AGCTGGCACA TGGCCAATGC ATATCGATCT ATACATTGAA TCAATATTGG 3051 CCATTAGCCA TATTATTCAT TGGTTATATA GCATAAATCA ATATTGGCTA 3101 TTGGCCATTG CATACGTTGT ATCCATATCA TAATATGTAC ATTTATATTG 3151 GCTCATGTCC AACATTACCG CCATGTTGAC ATTGATTATT GACTAGTTAT -73-
96146.doc 200521231 3201 3251 3301 3351 3401 3451 3501 3551 3601 3651 3701 3751 3801 3851 3901 3951 4001 4051 4101 4151 4201 4251 4301 4351 4401 4451 4501 4551 4601 4651 4701 4 751 4801 4851 4901 4951 5001
TAATAGTAAT
CC&CGTTACA
ACCCCCGCCC
ATAGGGACTT
CCACTTGGCA
ACGTCAATGA
TTATGGGACT
TACCATGGTG
TTGACTCACG
TTGTTTTGGC
CGCCCCATTG
TAAGCAGAGC
CGCTGTTTTG
GCTTGCCGCC
TGGCCCCCGG
GTGAAAAAGC
CACATTCACT
GCCTTGAATG
AATGAGAAGT
CACAGCCTAC
ACTACTGTGC
GGGACCACGG
AGCTTTCTGG
GCTAAGGTGA
GCCCAGACAC
TCTGCGCCCT
CTCTCTTGCA
CCTCCAAGAG
GACTACTTCC
CAGCGGCGTG
CCCTCAGCAG
TACATCTGCA
AGTTGGTGAG
CTCAGCGCTC
CAGCAAGGCA
CACTCATGCT
AGGCACAGGC
CAATTACGGG
TAACTTACGG
ATTGACGTCA
TCCATTGACG
GTACATCAAG
CGGTAAATGG
TTCCTACTTG
ATGCGGTTTT
GGGATTTCCA
ACCAAAATCA
ACGGAAATGG
TCGTTTAGTG
ACCTCCATAG
ACCATGGACT
CGCCCACAGC
CTGGGGCTTC
AATTATATTA
GATTGGATAT
TCAAAGGCAG
ATGGAGCTCA
AAGATCAGGA
TCACCGTCTC
GGCAGGCCAG
GGCAGGTGGC
TGGACGCTGA
GGGCCCAGCT
GCCTCCACCA
CACCTCTGGG
CCGAACCGGT
CACACCTTCC
CGTGGTGACC
ACGTGAATCA
AGGCCAGCAC
CTGCCTGGAC
GGCCCCGTCT
CAGGGAGAGG
TAGGTGCCCC
GTCATTAGTT
TAAATGGCCC
ATAATGACGT
TCAATGGGTG
TGTATCATAT
CCCGCCTGGC
GCAGTACATC
GGCAGTACAT
AGTCTCCACC
ACGGGACTTT
GCGGTAGGCG
AACCGTCAGA
AAGACACCGG
GGACCTGGAG
CAGGTGCAGC
AGTGAAGGTG
TCCACTGGGT
TTTAATCCTT
GGCCACACTA
GCAGCCTGCG
CCCTATGCCT
CTCAGGTGAG
GCCTGACCTT
GCCAGCCAGG
ACCTCGCGGA
CTGTCCCACA
AGGGCCCATC
GGCACAGCGG
GACGGTGTCG
CGGCTGTCCT
GTGCCCTCCA
CAAGCCCAGC
AGGGAGGGAG
GCATCCCGGC
GCCTCTTCAC
GTCTTCTGGC
TAACCCAGGC
CATAGCCCAT
GCCTGGCTGA
ATGTTCCCAT
GAGTATTTAC
GCCAAGTACG
ATTATGCCCA
TACGTATTAG
CAATGGGCGT
CCATTGACGT
CCAAAATGTC
TGTACGGTGG
TCGCCTGGAG
GACCGATCCA
GGTGTTCTGC
TGGTGGAGTC
TCCTGCAAGG
GAAGCAGGAG
ACAATCATGG
ACTGCAAACA
CTCTGAGGAC
GGTTTGACAC
TTCTAGAAGG
GGCTTTGGGG
TGCACACCCA
CAGTTAAGAA
CCGCGGTCAC
GGTCTTCCCC
CCCTGGGCTG
TGGAACTCAG
ACAGTCCTCA
GCAGCTTGGG
AACACCAAGG
GGTGTCTGCT
TATGCAGCCC
CCGGAGGCCT
TTTTTCCCCA
CCTGCACACA
ATATGGAGTT
CC0CCCAACG
AGTAACGCCA
GGTAAACTGC
CCCCCTATTG
GTACATGACC
TCATCGCTAT
GGATAGCGGT
CAATGGGAGT
GTAACAACTC
GAGGTCTATA
ACGCCATCCA
GCCTCCGCAA
CTGCTGGCCG
AGGAGCCGAA
CCTCTGGATA
CCTGGTCAGG
TACTAAGTAC
AATCCATCAG
ACTGCGGTCT
CTGGGGCCAA
ATCCCAAGCT
CAGGGAGGGG
ATGCCCATGA
CCCAGGGGCC
ATGGCACCAC
CTGGCACCCT
CCTGGTCAAG
GCGCCCTGAC
GGACTCTACT
CACCCAGACC
TGGACAAGAA
GGAAGCCAGG
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CTGCCCGCCC
GGCTCTGGGC
AAGGGGCAGG
96146.doc -74- 200521231 5051 5101 5151 5201 5251 5301 53 51 S401 5451 5501 5551 5601 5651 5701 5751 5801 5851 5901 5951 6001 6051 6101 6151 6201 6251 6301 6351 6401 64S1 6501 6551 6601 6651 6701 6751 6801 6851
TGCTGGGCTC
ACCTAAGCCC
CTTCTCTCCT
CAAATCTTGT
CCCAGGCCTC
TGCATCCAGG
CTTCCTCAGC
CCAAAACCCA
CGTGGTGGTG
ACGTGGACGG
CAGTACAACA
GGACTGGCTG
TCCCAGCCCC
GGGGTGCGAG
TGAGAGTGAC
CCACAGGTGT
GGTCAGCCTG
TGGAGTGGGA
CCCGTGCTGG
GGACAAGAGC
ATGAGGCTCT
GGTAAATGAG
TCGCACGAGG
CAGCATGGAA
GATGGTTCTT
ATCTGATATC
CATGATAAGA
GAAAAAAATG
ACCATTATAA
TATGTTTCAG
ACCTCTACAA
ACATCAAATA
CACAATTTTT
AGTAAGAAAA
AGGTTACAGA
TCCTTTGTGG
AGCATGACTC
AGACCTGCCA
ACCCCAAAGG
CCCAGATTCC
GACAAAACTC
GCCCTCCAGC
GACAGGCCCC
ACCTGAACTC
AGGACACCCT
GACGTGAGCC
CGTGGAGGTG
GCACGTACCG
AATGGCAAGG
CATCGAGAAA
GGCCACATGG
CGCTGTACCA
ACACCCTGCC
ACCTGCCTGG
GAGCAATGGG
ACTCCGACGG
AGGTGGCAGC
GCACAACCAC
TGCGACGGCC
ATGCTTGGCA
ATAAAGCACC
TCCACGGGTC
ATCGATGAAT
TACATTGATG
CTTTATTTGT
GCTGCAATAA
GTTCAGGGGG
ATGTGGTATG
TTCCTTATTA
GAGCATAGTT
AACAGTATGT
ATATTTTTCC
TGTAAATAGC
AAAAAACTTA
AGAGCCATAT
CCAAACTCTC
AGTAACTCCC
ACACATGCCC
TCAAGGCGGG
AGCCGGGTGC
CTGGGGGGAC
CATGATCTCC
ACGAAGACCC
CATAATGCCA
TGTGGTCAGC
AGTACAAGTG
ACCATCTCCA
ACAGAGGCCG
ACCTCTGTCC
CCCATCCCGG
TCAAAGGCTT
CAGCCGGAGA
CTCCTTCTTC
AGGGGAACGT
TACACGCAGA
GGCAAGCCCC
CGTACCCCCT
CAGCGCTGCC
AGGCCGAGTC
TCGAGCTCGG
AGTTTGGACA
GAAATTTGTG
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AGGTGTGGGA
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ATTAATAGCA
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ATAATTTTCT
AAAGCAAGCA
GCAATTCTGA
CCGGGAGGAC
CACTCCCTCA
AATCTTCTCT
ACCGTGCCCA
ACAGGTGCCC
TGACACGTCC
CGTCAGTCTT
CGGACCCCTG
TGAGGTCAAG
AGACAAAGCC
GTCCTCACCG
CAAGGTCTCC
AAGCCAAAGG
GCTCGGCCCA
CTACAGGGCA
GATGAGCTGA
CTATCCCAGC
ACAACTACAA
CTCTACAGCA
CTTCTCATGC
AGAGCCTCTC
CGCTCCCCGG
GTACATACTT
CTGGGCCCCT
TGAGGCCTGA
TACCCGGGGA
AACCACAACT
ATGCTATTGC
AACAACAATT
GGTTTTTTAA
ATCTCTAGTC
AAATTAAAAA
GACACTCTAT
ACTGTTATGC
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AGAGTTCTAT
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CCTGCCCCTG
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CTGCAGAGCC
GGTAAGCCAG
TAGAGTAGCC
ACCTCCATCT
CCTCTTCCCC
AGGTCACATG
TTCAACTGGT
GCGGGAGGAG
TCCTGCACCA
AACAAAGCCC
TGGGACCCGT
CCCTCTGCCC
GCCCCGAGAA
CCAAGAACCA
GACATCGCCG
GACCACGCCT
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CCTGTCTCCG
GCTCTCGCGG
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TTTATTTGTA
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GCTAAAGGTA
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TACTAAACAC
TTGGGGTCTT
96146.doc -75- 200521231 6901 6951 7001 7051 7101 7151 7201 7251 7301 7351 7401 7451 7501 7551 7601 7651 7701 7751 7801 7851 7901 7951 8001 8051 8101 8151 8201 8251 8301 8351 8401 8451 B501 8551 8601 8651
CTACCTTTCT
GCCTCATCAT
ATTAAAGGCA
TCTAAAATAC
AAAAATTTTA
CAATTATGTC
AAAGCGGCCA
CGGATAGCCG
AGAACTCCGC
AGGGGATCGA
CTGGAGGATC
TTTCATAGAA
GTCGCTTGGT
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GTAAAGCACG
TATCACGGGT
CGGCCACAGT
CGGCAAGCAG
TGCGCGCCTT
TCTTCGTCCA
TGCTCGCTCG
GATCAAGCGT
TCGGCAGGAG
CAATAGCAGC
CGCAAGGAAC
TGCAGTTCAT
GCGCCCCTGC
TCTGTTGTGC
GAACCTGCGT
TGTCTCTTGA
AGAAAGCCAT
GCCCCAGCTG
TAGCTATCGC
TTGCGTTTTC
CAGCACCGTT
GCCCTTGCGC
CTTCTTTTTT
CACTAGATGG
TTCCACCACT
ACAAACAATT
TATTTACCTT
ACACCACAGA
TCGTGCCTCC
CTGCTGGTTT
GAGGTCGTCC
GCCCGGGGTG
ATCCAGCCGG
GGCGGCGGTG
CGGTCATTTC
GATAGAAGGC
AGGAAGCGGT
AGCCAACGCT
CGATGAATCC
GCATCGCCAT
GAGCCTGGCG
GATCATCCTG
ATGCGATGTT
ATGCAGCCGC
CAAGGTGAGA
CAGTCCCTTC
GCCCGTCGTG
TCAGGGCACC
GCTGACAGCC
CCAGTCATAG
GCAATCCATC
TCAGATCTTG
CCAGTTTACT
GCAATTCCGG
CATGTAAGCC
CCTTGTCCAG
TCTGCGGACT
CCTGAGTGCT
GGAGGAGTAG
CATTTCTTCT
GCTCCCATTC
AGAATCAGTA
AGAGCTTTAA
AGTAAGGTTC
CCACTCCTGC
CCTGGATGCC
AGCCTCAGGC
GGCGAAGAAC
CGTCCCGGAA
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GAACCCCAGA
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ATGTCCTGAT
AGAAAAGCGG
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AACAGTTCGG
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CGCATTGCAT
TGACAGGAGA
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GCCAGCCACG
GGACAGGTCG
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CCGAATAGCC
TTGTTCAATC
ATCCCCTGCG
TTGCAGGGCT
TTCGCTTGCT
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GGCTTTCTAC
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AATGTTGAGA
GAGCAAAACA
ATCAGTTCCA
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GACGGATTTG
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TCCAGCATGA
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CCGGCTTCCA
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CAGCCATGAT
TCCTGCCCCG
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ATAGCCGCGC
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GGCATCAGAG
TCTCCACCCA
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CCATCAGATC
TCCCAACCTT
GTCCATAAAA
TACCTGCTTT
AGCTGACATT
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TGAAGCT
GTCAGCAGTA
GGTTTTCCTC
TAGGTTGGAA
TTATACACTT
GTAGTTTGTC
ATCCGGGACC
CATGGATGCG
CACTGCCGGT
CCAACTCGCG
GATCCCCGCG
AAGCCCAACC
CAGGTTGGGC
GAAGAACTCG
CGGCGATACC
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CACACCCAGC
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CCGTCGGGCA
CCCCTGATGC
TCCGAGTACG
CAGGTAGCCG
GGATACTTTC
GCACTTCGCC
AGCACAGCTG
TGCCTCGTCC
AAAGAACCGG
CAGCCGATTG
AGCGGCCGGA
ATCCTCATCC
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CCGCCCAGTC
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TCCTTTAGCA
96146.doc -76- 200521231 SEQ ID NO ： 16 表現載體HCMV-G1 HuA6-VHE之核苷酸序列 (包含有由3921-4274之SEQ ID NO:ll(VHE)之人化重鏈表 現載體的完整DNA序列）
1 AGCTTTTTGC AAAAGCCTAG GCCTCCAAAA AAGCCTCCTC ACTACTTCTG 51 GAATAGCTCA GAGGCCGAGG CGGCCTCGGC CTCTGCATAA ATAAAAAAAA 101 TTAGTCAGCC ATGGGGCGGA GAATGGGCGG AACTGGGCGG AGTTAGGGGC 151 GGGATGGGCG GAGTTAGGGG CGGGACTATG GTTGCTGACT AATTGAGATG 201 CATGCTTTGC ATACTTCTGC CTGCTGGGGA GCCTGGTTGC TGACTAATTG 251 AGATGCATGC TTTGCATACT TCTGCCTGCT GGGGAGCCTG GGGACTTTCC 301 ACACCCTAAC TGACACACAT TCCACAGCTG CCTCGCGCGT TTCGGTGATG 351 ACGGTGAAAA CCTCTGACAC ATGCAGCTCC CGGAGACGGT CACAGCTTGT 401 CTGTAAGCGG ATGCCGGGAG CAGACAAGCC CGTCAGGGCG CGTCAGCGGG 451 TGTTGGCGGG TGTCGGGGCG CAGCCATGAC CCAGTCACGT AGCGATAGCG 501 GAGTGTATAC TGGCTTAACT ATGCGGCATC AGAGCAGATT GTACTGAGAG S51 TGCACCATAT GCGGTGTGAA ATACCGCACA GATGCGTAAG GAGAAAATAC 601 CGCATCAGGC GCTCTTCCGC TTCCTCGCTC ACTGACTCGC TGCGCTCGGT 651 CGTTCGGCTG CGGCGAGCGG TATCAGCTCA CTCAAAGGCG GTAATACGGT 701 TATCCACAGA ATCAGGGGAT AACGCAGGAA AGAACATGTG AGCAAAAGGC 751 CAGCAAAAGG CCAGGAACCG TAAAAAGGCC GCGTTGCTGG CGTTTTTCCA 801 TAGGCTCCGC CCCCCTGACG AGCATCACAA AAATCGACGC TCAAGTCAGA 851 GGTGGCGAAA CCCGACAGGA CTATAAAGAT ACCAGGCGTT TCCCCCTGGA 901 AGCTCCCTCG TGCGCTCTCC TGTTCCGACC CTGCCGCTTA CCGGATACCT 951 GTCCGCCTTT CTCCCTTCGG GAAGCGTGGC GCTTTCTCAT AGCTCACGCT 1001 GTAGGTATCT CAGTTCGGTG TAGGTCGTTC GCTCCAAGCT GGGCTGTGTG 1051 CACGAACCCC CCGTTCAGCC CGACCGCTGC GCCTTATCCG GTAACTATCG 1101 TCTTGAGTCC AACCCGGTAA GACACGACTT ATCGCCACTG GCAGCAGCCA 1151 CTGGTAACAG GATTAGCAGA GCGAGGTATG TAGGCGGTGC TACAGAGTTC 1201 TTGAAGTGGT GGCCTAACTA CGGCTACACT AGAAGGACAG TATTTGGTAT 1251 CTGCGCTCTG CTGAAGCCAG TTACCTTCGG AAAAAGAGTT GGTAGCTCTT 1301 GATCCGGCAA ACAAACCACC GCTGGTAGCG GTGGTTTTTT TGTTTGCAAG 1351 CAGCAGATTA CGCGCAGAAA AAAAGGATCT CAAGAAGATC CTTTGATCTT 1401 TTCTACGGGG TCTGACGCTC AGTGGAACGA AAACTCACGT TAAGGGATTT 1451 TGGTCATGAG ATTATCAAAA AGGATCTTCA CCTAGATCCT TTTAAATTAA 1501 AAATGAAGTT TTAAATCAAT CTAAAGTATA TATGAGTAAA CTTGGTCTGA
-77- 96146.doc 200521231 1551 1601 1651 1701 1751 1B01 1851 1901 1951 2001 2051 2101 2151 2201 2251 2301 2351 2401 2451 2501 2551 2601 2651 2701 2751 2801 2851 2901 2951 3001 3051 3101 3151 3201 3251 3301 3351
AACAAAT； TAAGAAAC
：TGAGAA 3GGATAA
CAGTTACCAA TTCGTTCATC CGGGAGGGCT ACGCTCACCG CCGAGCGCAG AATTGTTGCC CAACGTTGTT GTATGGCTTC TCCCCCATGT TGTCAGAAGT TGCATAATTC GGTGAGTACT TTGCTCTTGC CTTTAAAAGT AGGATCTTAC CAACTGATCT AAACAGGAAG TGTTGAATAC GGGTTATTGT TAGG 、CCA GAGGCCCTTT TGTGTGTTTG TCATGTCGCG AAAAATCGAT TTTCTGTGTA CGCGATATCT CGACTTTGGT ATATAGGTGA AGCTGGCACA CCATTAGCCA TTGGCCATTG GCTCATGTCC TAATAGTAAT CCGCGTTACA ACCCCCGCCC ATAGGGACTT
TGCTTAATCA
CATAGTTGCC
TACCATCTGG
GCTCCAGATT
AAGTGGTCCT
GGGAAGCTAG
GCCATTGCTG
ATTCAGCTCC
TGTGCAAAAA
AAGTTGGCCG
TCTTACTGTC
CAACCAAGTC
CCGGCGTCAA
GCTCATCATT
CGCTGTTGAG
TCAGCATCTT
GCAAAATGCC
TCATACTCTT
CTCATGAGCG
GGTTCCGCGC
TTATTATCAT
CGTCTTCAAG
TCCGAAATAC
CGATAGTGGT
ATTTGAAAAT
ACTGATATCG
GGCGATAGCG
GACTTGGGCG
CAGACGATAT
TGGCCAATGC
TATTATTCAT
CATACGTTGT
AACATTACCG
CAATTACGGG
TAACTTACGG
ATTGACGTCA
TCCATTGACG GTGAGGCACC TGACTCCCCG CCCCAGTGCT TATCAGCAAT GCAACTTTAT AGTAAGTAGT CAGGCATCGT GGTTCCCAAC AGCGGTTAGC CAGTGTTATC ATGCCATCCG ATTCT<
CACG< GGAAAACGTT ATCCAGTTCG TTACTTTCAC GCAAAAAAGG CCTTTTTCAA GATACATATT ACATTTCCCC GACATTAACC AATTCAGCTT GCGTTTTGAG GTTTATCGCC ATGGCATATT CCATTTTTCC CTTATATCGT ATTCTGTGTG GAGGCTATAT ATATCGATCT TGGTTATATA ATCCATATCA CCATGTTGAC GTCATTAGTT TAAATGGCCC ATAATGACGT TCAATGGGTG
TATCTCAGCG
TCGTGTAGAT
GCAATGATAC
AAACCAGCCA
CCGCCTCCAT
TCGCCAGTTA
GGTGTCACGC
GATCAAGGCG
TCCTTCGGTC
ACTCATGGTT
TAAGATGCTT
TAGTGTATGC
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CTTCGGGGCG
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GAATAAGGGC
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TATAAAAATA
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ATATGGAGTT
CCGCCCAACG
AGTAACGCCA
GGTAAACTGC
-78 - 96146.doc 200521231
3401 CCACTTGGCA GTACATCAAG TGTATCATAT GCCAAGTACG CCCCCTATTG 3451 ACGTCAATGA CGGTAAATGG CCCGCCTGGC ATTATGCCCA GTACATGACC 3501 TTATGGGACT TTCCTACTTG GCAGTACATC TACGTATTAG TCATCGCTAT 3551 TACCATGGTG ATGCGGTTTT GGCAGTACAT CAATGGGCGT GGATAGCGGT 3601 TTGACTCACG GGGATTTCCA AGTCTCCACC CCATTGACGT CAATGGGAGT 3651 TTGTTTTGGC ACCAAAATCA ACGGGACTTT CCAAAATGTC GTAACAACTC 3701 CGCCCCATTG ACGCAAATGG GCGGTAGGCG TGTACGGTGG GAGGTCTATA 3751 TAAGCAGAGC TCGTTTAGTG AACCGTCAGA TCGCCTGGAG ACGCCATCCA 3801 CGCTGTTTTG ACCTCCATAG AAGACACCGG GACC6ATCCA GCCTCCGCAA 3851 GCTTGCCGCC ACCATGGACT GGACCTGGAG GGTGTTCTGC CTGCTGGCCG 3901 TGGCCCCCGG CGCCCACAGC GAGGTGCAGC TGGTGGAGTC AGGAGCCGAA 3951 GTGAAAAAGC CTGGGGCTTC AGTGAAGGTQ TCCTGCAAGG CCTCTGGATA 4001 CACATTCACT AATTATATTA TCCACTGGGT GAAGCAGGAG CCTGGTCAGG 4051 GCCTTGAATG GATTGGATAT TTTAATCCTT ACAATCATGG TACTAAGTAC 4101 AATGAGAAGT TCAAAGGCAG GGCCACACTA ACTGCAAACA AATCCATCAG 4151 CACA6CCTAC ATGGAGCTCA GCAGCCTGCG CTCTGAGGAC ACTGCGGTCT 4201 ACTACTGTGC AAGATCAGGA CCCTATGCCT GGTTTGACAG CTGGGGCCAA 4251 GGGACCACGG TCACCGTCTC CTCAGGTGAG TTCTAGAAGG ATCCCAAGCT 4301 AGCTTTCTGG GGCAGGCCAG GCCTGACCTT GGCTTTGGGG CAGGGAGGGG 4351 GCTAAGGTGA GGCAGGTGGC GCCAGCCAGG TGCACACCCA ATGCCCATGA 4401 GCCCAGACAC TGGACGCTGA ACCTCGCGGA CAGTTAAGAA CCCAGGGGCC 44S1 TCTGCGCCCT GGGCCCAGCT CTGTCCCACA CCGCGGTCAC ATGGCACCAC 4501 CTCTCTTGCA GCCTCCACCA AGGGCCCATC GGTCTTCCCC CTGGCACCCT 4551 CCTCCAAGAG CACCTCTGGG GGCACAGCGG CCCTGGGCTG CCTGGTCAAG 4601 GACTACTTCC CCGAACCGGT GACGGTGTCG TGGAACTCAG GCGCCCTGAC 4651 CAGCGGCGTG CACACCTTCC CGGCTGTCCT ACAGTCCTCA GGACTCTACT 4701 CCCTCAGCAG CGTGGTGACC GTGCCCTCCA GCAGCTTGGG CACCCAGACC 4751 TACATCTGCA ACGTGAATCA CAAGCCCAGC AACACCAAGG TGGACAAGAA 4801 AGTTGGTGAG AGGCCAGCAC AGGGAGGGAG GGTGTCTGCT GGAAGCCAGG 4851 CTCAGCGCTC CTGCCTGGAC GCATCCCGGC TATGCAGCCC CAGTCCAGGG 4901 CAGCAAGGCA GGCCCCGTCT GCCTCTTCAC CCGGAGGCCT CTGCCCGCCC 4951 CACTCATGCT CAGGGAGAGG GTCTTCTGGC TTTTTCCCCA GGCTCTGGGC 5001 AGGCACAGGC TAGGTGCCCC TAACCCAGGC CCTGCACACA AAGGGGCAGG 5051 TGCTGGGCTC AGACCTGCCA AGAGCCATAT CCGGGAGGAC CCTGCCCCTG 5101 ACCTAAGCCC ACCCCAAAGG CCAAACTCTC CACTCCCTCA GCTCGGACAC 5151 CTTCTCTCCT CCCAGATTCC AGTAACTCCC AATCTTCTCT CTGCAGAGCC 5201 CAAATCTTGT GACAAAACTC ACACATGCCC ACCGTGCCCA GGTAAGCCAG -79-
96146.doc 200521231 5251 S301 5351 5401 5451 5501 5551 5601 5651 5701 5751 5801 5851 5901 5951 6001 6051 6101 6151 6201 6251 6301 6351 6401 6451 6501 6551 6601 6651 6701 6751 6801 6851 6901 6951 7001 7051
DCTACAA PCAAATA
CCCAGGCCTC
TGCATCCAGG
CTTCCTCAGC
CCAAAACCCA
CGTGGTGGTG
ACGTGGACGG
CAGTACAACA
GGACTGGCTG
TCCCAGCCCC
GGGGTGCGAG
TGAGAGTGAC
CCACAGGTGT
GGTCAGCCTG
TGGAGTGGGA
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GGACAAGAGC
ATGAGGCTCT
GGTAAATGAG
TCGCACGAGG CAGCATGGAA GATGGTTCTT ATCTGATATC CATGATAAGA GAAAAAAATG ACCATTATAA TATGTTTCAG ACCT(
ACAT( CACAATTTTT AGTAAGAAAA AGGTTACAGA TCCTTTGTGG AGCATGACTC CTACCTTTCT GCCTCATCAT ATTAAAGGCA TCTAAAATAC
GCCCTCCAGC
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GCACGTACCG
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ATATTTTTCC
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ACAGAGGCCG
ACCTCTGTCC
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TCAAAGGCTT
CAGCCGGAGA
CTCCTTCTTC
AGGGGAACGT
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CGTACCCCCT
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TCGAGCTCGG
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ACAAGTTAAC
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TGAGGTCAAG
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AACAACAATT
GGTTTTTTAA
ATCTCTAGTC
AAATTAAAAA
GACACTCTAT
ACTGTTATGC
TGTATAGCAG
AGAGTTCTAT
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AATGTTGAGA
GAGCAAAACA
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GTTTAACACA
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ACCTCCATCT
CCTCTTCCCC
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TTCAACTGGT
GCGGGAGGAG
TCCTGCACCA
AACAAAGCCC
TGGGACCCGT
CCCTCTGCCC
GCCCCGAGAA
CCAAGAACCA
GACATCGCCG
GACCACGCCT
AGCTCACCGT
TCCGTGATGC
CCTGTCTCCG
GCTCTCGCGG
CCCGGGCGCC
GCGAGACTGT GTGGCATGAG TCGATCCAGA AGAATGCAGT TTTATTTGTA GCATTCATTT AGCAAGTAAA AAGGCACTAT GCTAAAGGTA GCCTGTGTGG CTAC TGCAC TACTAAACAC TTGGGGTCTT GTCAGCAGTA GGTTTTCCTC TAGGTTGGAA TTATACACTT
^CTTATAA ：AGCTTTT 96146.doc -80 - 200521231 7101 7151 7201 7251 7301 7351 7401 74S1 7501 7551 7601 7651 7701 7751 7801 7851 7901 7951 8001 8051 8101 8151 8201 8251 8301 8351 8401 8451 8501 8551 8601 8651
：CGGAA ；GAAAT
GCCAGC GGACAC
AAAAATTTTA
CAATTATGTC
AAAGCGGCCA
CGGATAGCCG
AGAACTCCGC
AGGGGATCGA
CTGGAGGATC
TTTCATAGAA
GTCGCTTGGT
TCAAGAAGGC
GTAAAGCACG
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CGGCCACAGT
CGGCAAGCAG
TGCGCGCCTT
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TGCTCGCTCG
GATCAAGCGT
TCGGCAGGAG
CAATAGCAGC
CGCAAGGAAC
TGCAGTTCAT
GCGCCCCTGC
TCTGTTGTGC
GAACCTGCGT
TGTCTCTTGA
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GCCCCAGCTG
TAGCTATCGC
TTGCGTTTTC
CAGCACCGTT
GCCCTTGCGC
TATTTACCTT
ACACCACAGA
TCGTGCCTCC
CTGCTGGTTT
GAGGTCGTCC
GCCCGGGGTG
ATCCAGCCGG
GGCGGCGGTG
CGGTCATTTC
GATAGAAGGC
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AGCCAACGCT
CGATGAATCC
GCATCGCCAT
GAGCCTGGCG
GATCATCCTG
ATGCGATGTT
ATGCAGCCGC
CAAGGTGAGA
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GCCCGTCGTG
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GCTGACAGCC
CCAGTCATAG
GCAATCCATC
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CCAGTTTACT
GCAATTCCGG
CATGTAAGCC
CCTTGTCCAG
TCTGCGGACT
CCTGAGTGCT
AGAGCTTTAA AGTAAGGTTC CCACTCCTGC CCTGGATGCC AGCCTCAGGC GGCGAAGAAC CGTCCC< GAATO GAACCCCAGA GATGCGCTGC CAGCCCATTC ATGTCCTGAT AGAAAAGCGG GGGTCACGAC AACAGTTCGG ATCGACAAGA TCGCTTGGTG CGCATTGCAT TGACAGGAGA CCGCTTCAGT CCACG X3GTCG GGAACACGGC CCGAATAGCC TTGTTCAATC ATCCCCTGCG TTGCAGGGCT TTCGCTTGCT CACTGCAAGC ATAGCCCAGT GGCTTTCTAC TGCGGCAGCG
ATCTCTGTAG
CTTCACAAAG
AGTTCGGGGG
GACGGATTTG
AGCAGCTGAA
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AACGATTCCG
CTCGTGATGG
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AGCGGTCCGC
CCATTTTCCA
GAGATCCTCG
CTGGCGCGAG
CCGGCTTCCA
GTCGAATGGG
CAGCCATGAT
TCCTGCCCCG
GACAACGTCG
ATAGCCGCGC
GTCTTGACAA
GGCATCAGAG
TCTCCACCCA
ATGCGAAACG
CCATCAGATC
TCCCAACCTT
GTCCATAAAA
TACCTGCTTT
AGCTGACATT
GTGTTCCGCT
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GTAGTTTGTC
ATCCGGGACC
CATGGATGCG
CACTGCCGGT
CCAACTCGCG
GATCCCCGCG
AAGCCCAACC
CAGGTTGGGC
GAAGAACTCG
CGGCGATACC
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CCATGATATT
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CAGGTAGCCG
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AAAGAACCGG
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AGCGGCCGGA
ATCCTCATCC
CTTGGCGGCA
ACCAGAGGGC
CCGCCCAGTC
CTCTTTGCGC
CATCCGGGGT
TCCTTTAGCA 96146.doc •81- 200521231 SEQ ID NO ： 17 表現載體HCMV-K HuAb-VLl hum VI之核苷酸序列 (包含有由 3964-4284 之 SEQ ID NO:14(humVl=VLh)之人化 輕鏈表現載體的完整DNA序列）
1 CTAGCTTTTT GCAAAAGCCT AGGCCTCCAA AAAAGCCTCC TCACTACTTC 51 TGGAATAGCT CAGAGGCCGA GGCGGCCTCG GCCTCTGCAT AAATAAAAAA 101 AATTAGTCAG CCATGGGGCG GAGAATGGGC GGAACTGGGC GGAGTTAGGG 151 GCGGGATGGG CGGAGTTAGG GGCGGGACTA TGGTTGCTGA CTAATTGAGA 201 TGCATGCTTT GCATACTTCT GCCTGCTGGG GAGCCTGGTT GCTGACTAAT 251 TGAGATGCAT GCTTTGCATA CTTCTGCCTG CTGGGGAGCC TGGGGACTTT 301 CCACACCCTA ACTGACACAC ATTCCACAGC TGCCTCGCGC GTTTCGGTGA 351 TGACGGTGAA AACCTCTGAC ACATGCAGCT CCCGGAGACG GTCACAGCTT 401 GTCTGTAAGC GGATGCCGGG AGCAGACAAG CCCGTCAGGG CGCGTCAGCG 451 GGTGTTGGCG GGTGTCGGGG CGCAGCCATG ACCCAGTCAC GTAGCGATAG 501 CGGAGTGTAT ACTGGCTTAA CTATGCGGCA TCAGAGCAGA TTGTACTGAG 551 AGTGCACCAT ATGCGGTGTG AAATACCGCA CAGATGCGTA AGGAGAAAAT 601 ACCGCATCAG GCGCTCTTGC GCTTCCTCGC TCACTGACTC GCTGCGCTCG 651 GTCGTTCGGC TGCGGCGAGC GGTATCAGCT CACTCAAAGG CGGTAATACG 701 751 GTTATCCACA GAATCAGGGG ATAACGCAGG AAAGAACATG TGAGCAAAAG GCCAGCAAAA GGCCAGGAAC CGTAAAAAGG CCGCGTTGCT GGCGTTTTTC 801 CATAGGCTCC GCCCCCCTGA CGAGCATCAC AAAAATCGAC GCTCAAGTCA 851 GAGGTGGCGA AACCCGACAG GACTATAAAG ATACCAGGCG TTTCCCCCTG 901 GAAGCTCCCT CGTGCGCTCT CCTGTTCCGA CCCTGCCGCT TACCGGATAC 951 CTGTCCGCCT TTCTCCCTTC GGGAAGCGTG GCGCTTTCTC ATAGCTCACG 1001 CTGTAGGTAT CTCAGTTCGG TGTAGGTCGT TCGCTCCAAG CTGGGCTGTG 1051 TGCACGAACC CCCCGTTCAG CCCGACCGCT GCGCCTTATC CGGTAACTAT 1101 CGTCTTGAGT CCAACCCGGT AAGACACGAC TTATCGCCAC TGGCAGCAGC 1151 CACTGGTAAC AGGATTAGCA GAGCGAGGTA TGTAGGCGGT GCTACAGAGT 1201 TCTTGAAGTG GTGGCCTAAC TACGGCTACA CTAGAAGGAC AGTATTTGGT 1251 ATCTGCGCTC TGCTGAAGCC AGTTACCTTC GGAAAAAGAG TTGGTAGCTC 1301 TTGATCCGGC AAACAAACCA CCGCTGGTAG CGGTGGTTTT TTTGTTTGCA 1351 AGCAGCAGAT TACGCGCAGA AAAAAAGGAT CTCAAGAAGA TCCTTTGATC 1401 TTTTCTACGG GGTCTGACGC TCAGTGGAAC GAAAACTCAC GTTAAGGGAT 1451 TTTGGTCATG AGATTATCAA AAAGGATCTT CACCTAGATC CTTTTAAATT 1501 AAAAATGAAG TTTTAAATCA ATCTAAAGTA TATATGAGTA AACTTGGTCT -82 - 96146.doc 200521231 1551 1601 1651 1701 1751 1801 1851 1901 1951 2001 2051 2101 2151 2201 2251 2301 2351 2401 2451 2501 2551 2601 2651 2701 2751 2801 2851 2901 2951 3001 3051 3101 3151 3201 3251 3301 3351
AATATr TTTGAATGTA CCGAAAAGTG CCTATAAAAA TTGGCTGCAG AGATTTCTGT CCGATAGAGA TTGAAAATGT CCAAAAGTGA GTTTACGGGG TGTCGCAAAT ATCGCCGATA CTATACATTG TAGCATAAAT CATAATATGT ACATTGATTA TTCATAGCCC CCGCCTGGCT GTATGTTCCC TGGAGTATTT CGAAAAC CACTCG1
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ATTTCGTTCA
TACGGGAGGG
CCACGCTCAC
GGCCGAGCGC
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CTGGTGAGTA
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TAAACAAATA
TCTAAGAAAC
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AATGTGTGTT
ATTCATGTCG
GGAAAAATCG
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CGATATAGGT
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TATTGGCCAT
TGGCTCATGT
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TTCCGCGTTA
CGACCCCCGC
CAATAGGGAC
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TCCATAGTTG
CTTACCATCT
CGGCTCCAGA
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CCGGGAAGCT
TTGCCATTGC
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GTTGTGCAAA
GTAAGTTGGC
TCTCTTACTG
CTCAACCAAG
GCCCGGCGTC
GTGCTCATCA
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CTTCAGCATC
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TCATGCCATC
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CGATGTAACC
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rTATTG
CGATCTGTCT ATAACTACGA ACCGCGAGAC CAGCCGGAAG ATCCAGTCTA TAATAGTTTG GCTCGTCGTT CGAGTTACAT TCCTCCGATC TTATGGCAGC TTTTCTGTGA GCGGCGACCG CACATAGCAG .CTCT iTGCA CTGGGTGAGC GCGACACGGA AAGCATTTAT TTTAGAAAAA CCACCTGACG TAGGCGTATC TGAATAATAA CGCCGACTAA TGGCGATATT CGCCGATGTG TTTTTGGGCA GATGGGGATA ATCGCAGTTT GAGGCGACAT AATCAATATT CAATATTGGC ACATTTATAT TTGACTAGTT ATATATGGAG GACCGCCCAA ATAGTAACGC ACGGTAAACT
•83- 96146.doc 200521231 3401 3451 3501 3551 3601 3651 3701 3751 3801 3851 3901 3951 4001 4051 4101 4151 4201 4251 4301 4351 4401 4451 4501 4551 4601 4651 4701 4751 4801 4851 4901 4951 5001 5051 5101 51S1 5201
CGGATGAC AGAAAAGC
GCCCACTTGG
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GTTTGTTTTG
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CCCCCGCCCA
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ATTGAGTTTA
GCAAAGAGCT
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CCTCCCATCC
TTGCGGTCCT
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GCAGCCCGGG
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CTGAGGGGGT
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AATTTCTCTT
ATGCCAAGTA GCATTATGCC TCTACGTATT ATCAATGGGC CCCCATTGAC TTCCAAAATG CGTGTACGGT GATCGCCTGG GGGACCGATC GGATCCGCCC CTGCTGCTGC GTGTCCAGCC GCAGGGCCAG CCAGGTCAGG TGGGATCCCT TTACCATCAG CAAAGTAATA CAAACGTGAG CGT CAT AATTTAGAAC CATCAAGATT ATAAGCATGC AAACAACACA GCTTCTTTCC CATCTGATGA AATAACTTCT CCTCCAATCG ACAGCACCTA GAGAAACACA GCCCGTCACA CCCACCTGCT GACCCTTTTT TTTCACCTCA AGGAGAATGA CCTCATTTAA ATAAGGGACT
CGCCCCCTAT
CAGTACATGA
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GTGGATAGCG
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CCTGGCCATT
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GGCCATTCTT
GCAAAGCCCT
TTTATTAAGG
TTAAATACGC
TGTTTTCTGT
CCCAAGGGCA
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GGTAACTCCC
CAGCCTCAGC
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AAGAGCTTCA
CCTCAGTTCC
CCACAGGGGA
CCCCCCTCCT
ATAAATAAAG
TAATTATTAT
AAATATGTAG
96146.doc -84 - 200521231 5251 5301 5351 5401 54S1 5501 5551 5601 5651 5701 5751 5801 5851 5901 5951 6001 6051 6101 β!51 6201 6251 6301 6351 6401 6451 6501 6551 6601 6651 6701 6751 6801 6851 6901 6951 7001 7051 ACAACC AATGT3
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TAAAATAACA
GTTTAAGTTC
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ATTCTATTTT CAAGCCTTCT TCCTTGTTTT CAGGTCTTAC AAGCAAATTT CAACATGATA ATAGGGAAAT TGCCTTATTT GGCCGTATTG AGATTAAAAA ACAAATATAT CCCACCCACC AAAGCCAAAA TAAACTGTGG AGCTACAACT CATAAGAGAA TAAAGTTCAA CTCTTAGCTG CTTCTGGGGT TGATCTGTGC iCAT GTCAAGACCA CTGCCTAATC CAAGGTGCTC CTGTTTGGCT CTTCAGCAAG CCCATGTATG TGAGGACTCT TACTCATCCA TGAAGGGGTT ACAATCCCTT TGGGGAAGGA TGCCTCTTGA TGAGTAGGGG CACTCATCCC CTATGAATTC GGACAAACCA
DAAAGAAC 3TCAAGAC
96146.doc -85- 200521231 7101 7151 7201 7251 7301 7351 7401 7451 7501 7551 7601 7651 7701 7751 7801 7851 7901 7951 8001 8051 Θ101 8151 8201 8251 8301 8351 8401 8451 8501 8551 8601 8651 8701 8751 8801 B851 8901
CAACTAGAAT
ATTGCTTTAT
CAATTGCATT
TTTAAAGCAA
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AAAAAGCTAA
TCTATGCCTG
TATGCCTACT
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CCAGAGTCCC
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CGGAAAACC GAAATCTCC
96146.doc -86- 200521231
8 951 CAGAGCAGCC GATTGTCTGT TGTGCCCAGT CATAGCCGAA TAGCCTCTCC 9001 ACCCAAGCGG CCGGAGAACC TGCGTGCAAT CCATCTTGTT CAATCATGCG 9051 AAACGATCCT CATCCTGTCT CTTGATCAGA TCTTGATCCC CTGCGCCATC 9101 AGATCCTTGG CGGCAAGAAA GCCATCCAGT TTACTTTGCA GGGCTTCCCA 9151 ACCTTACCAG AGGGCGCCCC AGCTGGCAAT TCCGGTTCGC TTGCTGTCCA 9201 TAAAACCGCC CAGTCTAGCT ATCGCCATGT AAGCCCACTG CAAGCTACCT 9251 GCTTTCTCTT TGCGCTTGCG TTTTCCCTTG TCCAGATAGC CCAGTAGCTG 9301 ACATTCATCC GGGGTCAGCA CCGTTTCTGC GGACTGGCTT TCTACGTGTT 9351 CCGCTTCCTT TAGCAGCCCT TGCGCCCTGA GTGCTTGCGG CAGCGTGAAG SEQ ID NO ： 18
表現載艘HCMV-K HuAb-VLl hum V2之核苦酸序列 (包含有由 3926-4246 之 SEQ ID NO:13(humV2=VLm)之人 化輕鏈表現載體的完整DNA序列）
1 CTAGCTTTTT GCAAAAGCCT AGGCCTCCAA AAAAGCCTCC TCACTACTTC 51 TGGAATAGCT CAGAGGCCGA GGCGGCCTCG GCCTCTGCAT AAATAAAAAA 101 AATTAGTCAG CCATGGGGCG GAGAATGGGC GGAACTGGGC GGAGTTAGGG 151 GCGGGATGGG CGGAGTTAGG GGCGGGACTA TGGTTGCTGA CTAATTGAGA 201 TGCATGCTTT GCATACTTCT GCCTGCTGGG GAGCCTGGTT GCTGACTAAT 2S1 TGAGATGCAT GCTTTGCATA CTTCTGCCTG CTGGGGAGCC TGGGGACTTT 301 CCACACCCTA ACTGACACAC ATTCCACAGC TGCCTCGCGC GTTTCGGTGA 351 TGACGGTGAA AACCTCTGAC ACATGCAGCT CCCGGAGACG GTCACAGCTT 401 GTCTGTAAGC GGATGCCGGG AGCAGACAAG CCCGTCAGGG CGCGTCAGCG 451 GGTGTTGGCG GGTGTCGGGG CGCAGCCATG ACCCAGTCAC GTAGCGATAG 501 CGGAGTGTAT ACTGGCTTAA CTATGCGGCA TCAGAGCAGA TTGTACTGAG 551 AGTGCACCAT ATGCGGTGTG AAATACCGCA CAGATGCGTA AGGAGAAAAT 601 ACCGCATCAG GCGCTCTTCC GCTTCCTCGC TCACTGACTC GCTGCGCTCG 651 GTCGTTCGGC TGCGGCGAGC GGTATCAGCT CACTCAAAGG CGGTAATACG 701 GTTATCCACA GAATCAGGGG ATAACGCAGG AAAGAACATG TGAGCAAAAG 751 GCCAGCAAAA GGCCAGGAAC CGTAAAAAGG CCGCGTTGCT GGCGTTTTTC 801 CATAGGCTCC GCCCCCCTGA CGAGCATCAC AAAAATCGAC GCTCAAGTCA 851 GAGGTGGCGA AACCCGACAG GACTATAAAG ATACCAGGCG TTTCCCCCTG 901 GAAGCTCCCT CGTGCGCTCT CCTGTTCCGA CCCTGCCGCT TACCGGATAC 951 CTGTCCGCCT TTCTCCCTTC GGGAAGCGTG GCGCTTTCTC ATAGCTCACG 1001 CTGTAGGTAT CTCAGTTCGG TGTAGGTCGT TCGCTCCAAG CTGGGCTGTG -87 - 96146.doc 200521231
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^CAAAGTAA ?CAAACGTG GGATAAC GCAAAC； 96146.doc -89- 200521231 4751 4801 4851 4901 4951 5001 5051 5101 5151 5201 5251 5301 5351 5401 5451 5501 5551 5601 5651 5701 5751 5801 5851 5901 5951 6001 6051 6101 6151 6201 6251 6301 6351 6401 6451 6501 6551
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GTCTTGGTAA
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96146.doc -90- 200521231 6601 6651 6701 6751 6801 6851 6901 6951 7001 7051 7101 7151 7201 7251 7301 7351 7401 7451 7501 7551 7601 7651 7701 7751 7801 7851 7901 7951 8001 8051 8101 8151 8201 8251 8301 8351 8401
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-91 - 96146.doc 200521231 8451 8501 8551 8601 8651 8701 8751 8801 8851 8901 8951 9001 9051 9101 9151 9201 92S1 9301 9351
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TCGGGCATGC
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CAGCCGCCGC
GGTGAGATGA
TCCCTTCCCG
CGTCGTGGCC
GGGCACCGGA
GACAGCCGGA
GTCATAGCCG
ATCCATCTTG
GATCTTGATC
GTTTACTTTG
ATTCCGGTTC
GTAAGCCCAC
TGTCCAGATA
GCGGACTGGC
GAGTGCTTGC
SEQ ID NO ： 31 記為VHE-N73D之人化重鏈的部分胺基酸序列
EVQLVESGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT NYHHWVKQE PGQGLEWIGY FNPYNHGTKY NEKFKGRATL TADKSISTAY MELSSLRSED TAVYYCARSG PYAWFDTWGQ GTTVTVSS SEQ ID NO ： 32 記為VHE-N73D之人化重鏈的部分胺基酸序列
QVQLVESGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT NYIIHWVKQE PGQGLEWIGY FNPYNHGTKY NEKFKGRATL TADKSISTAY MELSSLRSED TAVYYCARSG PYAWFDTWGQ GTTVTVSS SEQ ID NO ： 33 -92-
96146.doc 200521231 編碼胺基酸序列SEQ ID NO:8之核苷酸序列
GACATTCTGCTGACCCAGTCTCCAGCCACCCTGTCTCTGAGTCCAGGAGAAAGAGCCA
CTCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGMCATTGGCACAAGCATACAGTGGTATCAACAAAAA
CCAGGTCAGGCTCCAAGGCTTCTCATAAGGTCTTCTTCTGAGTCTATCTCTGGGATCCC
TTCCAGGTTTAGTGGCAGTGGATCAGGGACAGATTTTACTCTTACCATCAGCAGTCTGG
AGCCTGAAGATTTTGCAG 丁 GTATTAC 丁 GTCAACAAAGTAATACCTGGCCATTCACGTTC
GGCCAGGGGACCAAGCTTGAAATCAAA SEQ ID NO ： 34 編碼胺基酸序列SEQ ID NO:31之核苷酸序列
GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCAGGAGCCGMGTGAAAAAGCCTGGGGCnCAGTGAAG
GTGTCCTGCAAGGCCTCTGGATACACATTCACTAATTATATTATCCACTGGGTGAAGCA
GGAGCCTGGTCAGGGCCTTGAATGGATTGGATATTTTMTCCTTACMTCATGGTACTA
AGTACAATGAGAAGTTCAMGGCAGGGCCACACTAACTGCAGACAAATCCATCAGCACA
GCCTACATGGAGCTCAGCAGCCTGCGCTCTGAGGACACTGCGGTCTACTACTGTGCM
GATCAGGACCCTATGCCTGGTTTGACACCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTC
CTCA SEQ ID NO ： 35 編碼胺基酸序列SEQ ID NO:32之核苷酸序列
CAGGTGCAGCTGGTGGAGTCAGGAGCCGAAGTGAAAAAGCCTGGGGCTTCAGTGAAG
GTGTCCTGCAAGGCCTC 丁 GOATACACATTCACTAAUATAUATCCACTGGGTGAAGCA
GGAGCCTGGTCAGGGCCTTGAATGGATTGGATATTTTAATCCTTACAATCATGGTACTA
AGTACAATGAGMGTTCAAAGGCAGGGCCACACTAACTGCAGACAAATCCATCAGCACA
<3CCTACATGC3A(3CTCAGCAGCCTC3CGCTCTGAGGACACT(3C(3GTCTACTAC 丁 G 丁 OCM
GATCAGGACCCTATGCCTGGTTTGACACCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTC
CTCA SEQ ID NO : 36 表現載體LCVLlSp20之核苷酸序列
1 CTAGAGTCCT AGAGAGGTCT GGTGGAGCCT GCAAAAGTCC AGCTTTCAAA 51 GGAACACAGA AGTATGTGTA TGGAATATTA GAAGATGTTG CTTTTACTCT 101 TAAGTTGGTT CCTAGGAAAA ATAGTTAAAT ACTGTGACTT TAAAATGTGA 96146.doc -93- 200521231 151 GAGGGTTTTC AAGTACTCAT TTTTTTAAAT GTCCAAAATT TTTGTCAATC 201 AATTTGAGGT CTTGTTTGTG TAGAACTGAC ATTACTTAAA GTTTAACCGA 251 GGAATGGGAG TGAGGCTCTC TCATACCCTA TTCAGAACTG ACTTTTAACA 301 ATAATAAATT AAGTTTAAAA TATTTTTAAA TGAATTGAGC AATGTTGAGT 351 TGGAGTCAAG ATGGCCGATC AGAACCAGAA CACCTGCAGC AGCTGGCAGG 401 AAGCAGGTCA TGTGGCAAGG CTATTTGGGG AAGGGAAAAT AAAACCACTA 451 GGTAAACTTG TAGCTGTGGT TTGAAGAAGT GGTTTTGAAA CACTCTGTCC 501 AGCCCCACCA AACCGAAAGT CCAGGCTGAG CAAAACACCA CCTGGGTAAT 551 TTGCATTTCT AAAATAAGTT GAGGATTCAG CCGAAACTGG AGAGGTCCTC 601 TTTTAACTTA TTGAGTTCAA CCTTTTAATT TTAGCTTGAG TAGTTCTAGT 651 TTCCCCAAAC TTAAGTTTAT CGACTTCTAA AATGTATTTA GAACTCATTT 701 TCAAAATTAG GTTATGTAAG AAATTGAAGG ACTTTAGTGT CTTTAATTTC 751 TAATATATTT AGAAAACTTC TTAAAATTAC TCTATTATTC TTCCCTCTGA 801 TTATTGGTCT CCATTCAATT CTTTTCCAAT ACCCGAAGCA TTTACAGTGA 851 CTTTGTTCAT GATCTTTTTT AGTTGTTTGT TTTGCCTTAC TATTAAGACT 901 TTGACATTCT GGTCAAAACG GCTTCACAAA TCTTTTTCAA GACCACTTTC 951 TGAGTATTCA TTTTAGGAGA AATACTTTTT TTTTAAATGA ATGCAATTAT 1001 CTAGGACCTG CAGGCATGCT GTTTTCTGTC TGTCCCTAAC ATGCCCTGTG 1051 ATTATCCGCA AACAACACAC CCAAGGGCAG AACTTTGTTA CTTAAACACC 1101 ATCCTGTTTG CTTCTTTCCT CAGGAACTGT GGCTGCACCA TCTGTCTTCA 1151 TCTTCCCGCC ATCTGATGAG CAGTTGAAAT CTGGAACTGC CTCTGTTGTG 1201 TGCCTGCTGA ATAACTTCTA TCCCAGAGAG GCCAAAGTAC AGTGGAAGGT 1251 GGATAACGCC CTCCAATCGG GTAACTCCCA GGAGAGTGTC ACAGAGCAGG 1301 ACAGCAAGGA CAGCACCTAC AGCCTCAGCA GCACCCTGAC GCTGAGCAAA 1351 GCAGACTACG AGAAACACAA AGTCTACGCC TGCGAAGTCA CCCATCAGGG 1401 CCTGAGCTCG CCCGTCACAA AGAGCTTCAA CAGGGGAGAG TGTTAGAGGG 1451 AGAAGTGCCC CCACCTGCTC CTCAGTTCCA GCCTGACCCC CTCCCATCCT 1501 TTGGCCTCTG ACCCTTTTTC CACAGGGGAC CTACCCCTAT TGCGGTCCTC 1551 CAGCTCATCT TTCACCTCAC CCCCCTCCTC CTCCTTGGCT TTAATTATGC 1601 TAATGTTGGA GGAGAATGAA TAAATAAAGT GAATCTTTGC ACCTGTGGTT 1651 TCTCTCTTTC CTCATTTAAT AATTATTATC TGTTGTTTTA CCAACTACTC 1701 AATTTCTCTT ATAAGGGACT AAATATGTAG TCATCCTAAG GCGGGATATC 1751 GAGATCTGAA GCTGATCCAG ACATGATAAG ATACATTGAT GAGTTTGGAC 1801 AAACCACAAC TAGAATGCAG TGAAAAAAAT GCTTTATTTG TGAAATTTGT 1851 GATGCTATTG CTTTATTTGT AACCATTATA AGCTGCAATA AACAAGTTAA 1901 CAACAACAAT TGCATTCATT TTATGTTTCA GGTTCAGGGG GAGGTGTGGG 1951 AGGTTTTTTA AAGCAAGTAA AACCTCTACA AATGTGGTAT GGCTGATTAT -94-
96146.doc 200521231
2001 GATCTCTAGT CAAGGCACTA TACATCAAAT ATTCCTTATT AACCCCTTTA 2051 CAAATTAAAA AGCTAAAGGT ACACAATTTT TGAGCATAGT TATTAATAGC 2101 AGACACTCTA TGCCTGTGTG GAGTAAGAAA AAACAGTATG TTATGATTAT 2151 AACTGTTATG CCTACTTATA AAGGTTACAG AATATTTTTC CATAATTTTC 2201 TTGTATAGCA GTGCAGCTTT TTCCTTTGTG GTGTAAATAG CAAAAAACTT CAAAGCAAGC 2251 AAGAGTTCTA TTACTAAACA CAGCATGACT AGCAATTCTG 2301 AAGGAAAGTC CTTGGGGTCT TCTACCTTTC TCTTCTTTTT TGGAGGAGTA 2351 GAATGTTGAG AGTCAGCAGT AGCCTCATCA TCACTAGATG GCATTTCTTC 2401 TGAGCAAAAC AGGTTTTCCT CATTAAAGGC ATTCCACCAC TGCTCCCATT 2451 CATCAGTTCC ATAGGTTGGA ATCTAAAATA CACAAACAAT TAGAATCAGT 2501 AGTTTAACAC ATTATACACT TAAAAATTTT ATATTTACCT TAGAGCTTTA 2551 AATCTCTGTA GGTAGTTTGT CCAATTATGT CACACCACAG AAGTAAGGTT 2601 CCTTCACAAA GATCCGGACC AAAGCGGCCA TCGTGCCTCC CCACTCCTGC 2651 AGTTCGGGGG CATGGATGCG CGGATAGCCG CTGCTGGTTT CCTGGATGCC 2701 GACGGATTTG CACTGCCGGT AGAACTCCGC GAGGTCGTCC AGCCTCAGGC 2751 AGCAGCTGAA CCAACTCGCG AGGGGATCGA GCATCCCCCA TGGTCTTATA 2801 AAAATGCATA GCTTTAGGAG GGGAGCAGAG AACTTGAAAG CATCTTCCTG 2851 TTAGTCTTTC TTCTCGTAGA CTTCAAACTT ATACTTGATG CCTTTTTCCT 2901 CCTGGACCTC AGAGAGGACG CCTGGGTATT CTGGGAGAAG TTTATATTTC 2951 CCCAAATCAA TTTCTGGGAA AAACGTGTCA CTTTCAAATT CCTGCATGAT 3001 CCTT6TCACA AAGAGTCTGA GGTGGCCTGG TTGATTCATG GCTTCCTGGT 3051 AAACAGAACT GCCTCCGACT ATCCAAACCA TAAGGCATCA TGTCTACTTT ACTTGCCAAT TGGCAAGAAA 3101 TCCGGTTGTT CAATAAGTCT TCCAAACTTT 3151 ATGAGCTCCT CGTGGTGGTT CTTTGAGTTC TCTACTGAGA ACTATATTAA 3201 TTCTGTCCTT CTACCCATAA TAAAGGTCGA TTCTTCTCAG GAATGGAGAA CCAGGTTTTC 3251 TCACCAGATT CTGTTTACCT TCCACTGAAG AGGTTGT6GT 3301 CATTCTTTGG AAGTACTTGA ACTCGTTCCT GAGCGGAGGC CAGGGTCGGT 3351 CTCCGTTCTT GCCAATCCCC ATATTTTGGG ACACGGCGAC GATGCAGTTC 3401 AATGGTCGAA CCATGATGGC AGCGGGGATA AAATCCTACC AGCCTTCACG 3451 3501 CTAGGATTGC AAAAGCCTAG CGTCAAGTTT GCCTCCAAAA GGGGGTACCG AAGCCTCCTC AGCTCGAATT ACTACTTCTG AGCTTTTTGC GAATAGCTCA 3551 GAGGGCCGAG GCGGCCTCGG CCTCTGCATA AATAAAAAAA ATTAGTCAGC 3601 CATGGGGCGG AGAATGGGCG GAACTGGGCG GAGTTAGGGG CGGGATGGGC 3651 GGAGTTAGGG GCGGGACTAT GGTTGCTGAC TAATTGAGAT GCATGCTTTG 3701 CATACTTCTG CCTGCTGGGG AGCCTGGGGA CTTTCCACAC CTGGTTGCTG 3751 ACTAATTGAG ATGCATGCTT TGCATACTTC TGCCTGCTGG GGAGCCTGGG 3801 GACTTTCCAC ACCCTAACTG ACACACATTC CACAGCTGCC TCGCGCGTTT
96146.doc -95- 200521231 3851 3901 3951 4001 4051 4101 4151 4201 4251 4301 4351 4401 4451 4501 4551 4601 4651 4701 4751 4801 4851 4901 4951 5001 5051 5101 5151 5201 5251 5301 5351 5401 5451 5501 55S1 5601 5651
CGGTGATGAC
CAGCTTGTCT
TCAGCGGGTG
CGATAGCGGA
ACTGAGAGTG
GATGCGTAAG
ACTGACTCGC
CTCAAAGGCG
AGAACATGTG
GCGTTGCTGG
AAATCGACGC
ACCAGGCGTT
CTGCCGCTTA
GCTTTCTCAT
GCTCCAAGCT
GCCTTATCCG
ATCGCCACTG
TAGGCGGTGC
AGAAGGACAG
AAAAAGAGTT
GTGGTTTTTT
CAAGAAGATC
AAACTCACGT
CCTAGATCCT
TATGAGTAAA
TATCTCAGCG
TCGTGTAGAT
GCAATGATAC
AAACCAGCCA
CCGCCTCCAT
TCGCCAGTTA
GGTGTCACGG
GATCAAGGCG
TCCTTCGGTC
ACTCATGGTT
TAAGATGCTT
TAGTGTATGC
GGTGAAAACC
GTAAGCGGAT
TTGGCGGGTG
GTGTATACTG
CACCATATGC
GAGAAAATAC
TGCGCTCGGT
GTAATACGGT
AGCAAAAGGC
CGTTTTTCCA
TCAAGTCAGA
TCCCCCTGGA
CCGGATACCT
AGCTCACGCT
GGGCTGTGTG
GTAACTATCG
GCAGCAGCCA
TACAGAGTTC
TATTTGGTAT
GGTAGCTCTT
TGTTTGCAAG
CTTTGATCTT
TAAGGGATTT
TTTAAATTAA
CTTGGTCTGA
ATCTGTCTAT
AACTACGATA
CGCGAGACCC
GCCGGAAGGG
CCAGTCTATT
ATAGTTTGCG
TCGTCGTTTG
AGTTACATGA
CTCCGATCGT
ATGGCAGCAC
TTCTGTGACT
GGCGACCGAG
TCTGACACAT
GCCGGGAGCA
TCGGGGCGCA
GCTTAACTAT
GGCCGCATAT
CGCATCAGGC
CGTTCGGCTG
TATCCACAGA
CAGCAAAAGG
TAGGCTCCGC
GGTGGCGAAA
AGCTCCCTCG
GTCCGCCTTT
GTAGGTATCT
CACGAACCCC
TCTTGAGTCC
CTGGTAACAG
TTGAAGTGGT
CTGCGCTCTG
GATCCGGCAA
CAGCAGATTA
TTCTACGGGG
TGGTCATGAG
AAATGAAGTT
CAGTTACCAA
TTCGTTCATC
CGGGAGGGCT
ACGCTCACCG
CCGAGCGCAG
AATTGTTGCC
CAACGTTGTT
GTATGGCTTC
TCCCCCATGT
TGTCAGAAGT
TGCATAATTC
GGTGAGTACT
TTGCTCTTGC
GCAGCTCCCG
GACAAGCCCG
GCCATGACCC
GCGGCATCAG
GCGGTGTGAA
GCTCTTCCGC
CGGCGAGCGG
ATCAGGGGAT
CCAGGAACCG
CCCCCTGACG
CCCGACAGGA
TGCGCTCTCC
CTCCCTTCGG
CAGTTCGGTG
CCGTTCAGCC
AACCCGGTAA
GATTAGCAGA
GGCCTAACTA
CTGAAGCCAG
ACAAACCACC
CGCGCAGAAA
TCTGACGCTC
ATTATCAAAA
TTAAATCAAT
TGCTTAATCA
CATAGTTGCC
TACCATCTGG
GCTCCAGATT
AAGTGGTCCT
GGGAAGCTAG
GCCATTGCTG
ATTCAGCTCC
TGTGCAAAAA
AAGTTGGCCG
TCTTACTGTC
CAACCAAGTC
CCGGCGTCAA
GAGACGGTCA
TCAGGGCGCG
AGTCACGTAG
AGCAGATTGT
ATACCGCACA
TTCCTCGCTC
TATCAGCTCA
AACGCAGGAA
TAAAAAGGCC
AGCATCACAA
CTATAAAGAT
TGTTCCGACC
GAAGCGTGGC
TAGGTCGTTC
CGACCGCTGC
GACACGACTT
GCGAGGTATG
CGGCTACACT
TTACCTTCGG
GCTGGTAGCG
AAAAGGATCT
AGTGGAACGA
AGGATCTTCA
CTAAAGTATA
GTGAGGCACC
TGACTCCCCG
CCCCAGTGCT
TATCAGCAAT
GCAACTTTAT
AGTAAGTAGT
CAGGCATCGT
GGTTCCCAAC
AGC6GTTAGC
CAGTGTTATC
ATGCCATCCG
ATTCTGAGAA
CACGGGATAA
96146.doc -96- 200521231 5701 5751 5801 5851 5901 5951 6001 6051 6101 6151 6201 6251 6301 6351 6401 6451 6501 6551 6601 6651 6701 6751 6801 6851 6901 6951 7001 7051 7101 7151 7201 7251 7301 7351 7401 7451 7501 GCTTTCATAG TTGAAAAGAl
AACAAATi TAAGAAAC
AGATAAAG CAGGTTTG
TACCGCGCCA
CTTCGGGGCG
ATGTAACCCA
CAGCGTTTCT
GAATAAGGGC
TATTATTGAA
TGAATGTATT
GAAAAGTGCC
TATAAAAATA
CTCGAGGAAG
CACCTTCCAG
AGCTACACGG
GGCTCCCATA
CTGACAGAGC
TAACAATATA
GTGAGTTGAA
TCTCACCTGC
GAGGCGCACC
TGAAAACCTA
GTAATGCATA
TTCATAGAAA
ACAATTTTTT
TAATTAAAAT
CAACAACAAC
CATCTACAGC
GAGCAGTATG
ACACTCTACA
ACATTAGTTT
CTGTGGGATT
AGCTGTGCCT
GACATGAGGA
TCACACTGAT
GCTGCTGCTG
GCTTCCTGTA
AATCATGTGG
CATAGCAGAA
AAAACTCTCA
CTCGTGCACC
GGGTGAGCAA
GACACGGAAA
GCATTTATCA
TAGAAAAATA
ACCTGACGTC
GGCGTATCAC
AGCTCAAACC
CTGAGCTGTC
GGGTTATTTA
TAGTATTCTG
TGAGTTGTGC
CTCGAAGCTC
CAGAGGACCA
AGCAATATCT
CGAGGAGGAC
AAAAAACACT
TCCTTATAGA
CATAGTATTT
TGTATGTGTG
AATGTGTAAA
TCAGGGAGTT
TCAGGCTCAG
AAAAAAACAA
TAACTGTGAA
ATGCCTAAAT
TAGACTATGA
TGTTTGTTGT
TTACAGGTCT
ACCCTTTGCT
TTTCTTCATA
CACACACAGT
TGGCTTACAG
CACTGTGCTG
GGATCTGTTT
CTTTAAAAGT AGGATCTTAC CAACTGATCT AAACAGGAAG TGTTGAATAC GGGTTATTGT lTAGG ,CCA GAGSCCCTTT CATGCTACTC ATAAATAATA TGTAAGACTC TTACTGTTCT TTCTCAGTCC AGGAAACATT AGAAATTTGT ATAAATTGTT ACAAATGAAC ATAGASAAGC AGAAGCCTAC ACATTATATC TGTGTGCATG AAGAGATCAT GTAATCAGGA AAACAAACAA AACAAAGGAG AGGATAATGG CATCTCGACA TAGAAATCAA TCAAAGAGAC GCAATAAGCT GATTTGCATG GTCAGGTCAC CATGAGTGTG GTAATGAAGA CTTGTCTCTG TCAATTTTTC
GCTCATCATT CGCTGTTGAG TCAGCATCTT GCAAAATGCC TCATACTCTT CTCATGAGCG GGTTCCGCGC TTATTATCAT CGTCTTCAAG TCTGGCTTGA AAGAGATTTT TGTCTTCATT GGCAATCACT TAAGGGATAC GTAGAAAAGG TGTGAGGTTG GATATCATGG ATGACAATCA .GCT 'GAT GAGTCTATGA TATGTGTGTA GAATTTAAGA AAGTTAAGGG AGGAAAAGAA AAGCTGTATG AACAAGTTAT TGGAGGAAAA AATAAGGTGT TCACATTCCC GCTGACCTGA TACCCAAAGC ACCCTTTGCT CTCACTCAGG CAGCACTAGA TGAAAATTCT AATTGTAGGT
GGAAAACGTT
ATCCAGTTCG
TTACTTTCAC
GCAAAAAAGG
CCTTTTTCAA
GATACATATT
ACATTTCCCC
GACATTAACC
AATTCAGCTG
TGGAAGCAAC
TTTATTAATA
TTAAAAACCA
GTGATCAAGA
ATCTACAAGA
AGGCAAAAGA
TGTCTCCTAC
CTACTAAAAT
GAATGAGGCC
GTCAGCAGAA
ATATCAGCCT
GACATATTTA
AATACATATG
GAGAACTGGG
AAAAATGTTG
AAAAAAACAA
GCCACAATAG
GTACTGCCTA
TAGAACAAAG
AAGACATAGA
ACAAAAAAAT
TGATTTCTGC
ATAGCTTACT
GGAGTCAGAA
TCCTGGCGTT
ATTTTATTGA
CTTGTGAATT
ACGCGTTGTG -97- 96146.doc 200521231
7551 ACATTCTGCT GACCCAGTCT CCAGCCACCC TGTCTCTGAG TCCAGGAGAA
7601 AGAGCCACTC TCTCCTGCAG GGCCAGTCAG AACATTGGCA CAAGCATACA
7651 GTGGTATCAA CAAAAACCAG GTCAGGCTCC AAGGCTTCTC ATAAGGTCTT
7701 CTTCTGAGTC TATCTCTGGG ATCCCTTCCA GGTTTAGTGG CAGTGGATCA
7751 GGGACAGATT TTACTCTTAC CATCAGCAGT CTGGAGCCTG AAGATTTTGC
7801 AGTGTATTAC TGTCAACAAA GTAATACCTG GCCATTCACG TTCGGCCAGG
7851 GGACCAAGCT TGAAATCAAA CGTAAGTAGA ATCCAAAGTC TCTTTCTTCC
7901 GTTGTCTATG TCTGTGGCTT CTATGTCTAA AAATGATGTA TAAAATCTTA
7951 CTCTGAAACC AGATTCTGGC ACTCTCCAAG GCAAAGATAC AGAGTAACTC
8001 CGTAAGCAAA GCTGGGAATA GGCTAGACAT GTTCTCTGGA GAATGAATGC
8051 CAGTGTAATA ATTAACACAA GTGATAGTTT CAGAAATGCT CTAGTT SEQ ID NO ： 37 表現載體HCVHEN73DSp20之核苷酸序列 1 ctagagaggt ctggtggagc ctgcaaaagt ccagctttca aaggaacaca gaagtatgtg 61 tatggaatat tagaagatgt tgcttttact cttaagttgg ttcctaggaa aaatagttaa 121 atactgtgac tttaaaatgt gagagggttt tcaagtactc atttttttaa atgtccaaaa 181 tttttgtcaa tcaatttgag gtcttgtttg tgtagaactg acattactta aagtttaacc 241 gaggaatggg agtgaggctc tctcataccc tattcagaac tgacttttaa caataataaa 301 ttaagtttaa aatattttta aatgaattga gcaatgttga gttggagtca agatggccga 361 tcagaaccag aacacctgca gcagctggca ggaagcaggt catgtggcaa ggctatttgg 421 ggaagggaaa ataaaaccac taggtaaact tgtagctgtg gtttgaagaa gtggttttga 481 aacactctgt ccagccccac caaaccgaaa gtccaggctg agcaaaacac cacctgggta 541 atttgcattt ctaaaataag ttgaggattc agccgaaact ggagaggtcc tcttttaact 601 tattgagttc aaccttttaa ttttagcttg agtagttcta gtttccccaa acttaagttt 661 atcgacttct aaaatgtatt taagctttct ggggcaggcc aggcctgacc ttggctttgg 721 ggcagggagg gggctaaggt gaggcaggtg gcgccagcca ggtgcacacc caatgcccat 781 gagcccagac actggacgct gaacctcgcg gacagttaag aacccagggg cctctgcgcc 841 ctgggcccag ctctgtccca caccgcggtc acatggcacc acctctcttg cagcctccac 901 caagggccca tcggtcttcc ccctggcacc ctcctccaag agcacctctg ggggcacagc 961 ggccctgggc tgcctggtca aggactactt ccccgaaccg gtgacggtgt cgtggaactc 1021 aggcgccctg accagcggcg tgcacacctt cccggctgtc ctacagtcct caggactcta 1081 ctccctcagc agcgtggtga ccgtgccctc cagcagcttg ggcacccaga cctacatctg 1141 caacgtgaat cacaagccca gcaacaccaa ggtggacaag agagttggtg agaggccagc 1201 acagggaggg agggtgtctg ctggaagcca ggctcagcgc tcctgcctgg acgcatcccg 1261 gctatgcagt cccagtccag ggcagcaagg caggccccgt ctgcctcttc acccggaggc 1321 ctctgcccgc cccactcatg ctcagggaga gggtcttctg gctttttccc caggctctgg 13日1 gcaggcacag gctaggtgcc cctaacccag gccctgcaca caaaggggca ggtgctgggc 1441 tcagacctgc caagagccat atccgggagg accctgcccc tgacctaagc ccaccccaaa -98- 96146.doc 200521231 1501 ggccaaactc tccactccct cagctcggac accttctctc ctcccagatt ccagtaactc 1561 ccaatcttct ctctgcagag cccaaatctt gtgacaaaac tcacacatgc ccaccgtgcc 1621 caggtaagcc agcccaggcc tcgccctcca gctcaaggcg ggacaggtgc cctagagtag 1681 cctgcatcca gggacaggcc ccagccgggt gctgacacgt ccacctccat ctcttcctca 1741 gcacctgaac tcctgggggg accgtcagtc ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc 1801 ctcatgatct cccggacccc tgaggtcaca tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac 1861 cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag 1921 ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac 1981 caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc 2041 cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa ggtgggaccc gtggggtgcg agggccacat 2101 ggacagaggc cggctcggcc caccctctgc cctgagagtg accgctgtac caacctctgt 2161 ccctacaggg cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg cccccatccc gggaggagat 2221 gaccaagaac caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctatccca gcgacatcgc 2281 cgtggagtgg gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacgc ctcccgtgct 2341 ggactccgac ggctccttct tcctctatag caagctcacc gtggacaaga gcaggtggca 2401 gcaggggaac gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc actacacgca 2461 gaagagcctc tccctgtccc cgggtaaatg agtgcgacgg ccggcaagcc cccgctcccc 2521 gggctctcgc ggtcgcacga ggatgcttgg cacgtacccc gtctacatac ttcccaggca 2581 cccagcatgg aaataaagca cccaccactg ccctgggccc ctgcgagact gtgatggttc 2641 tttccacggg tcaggccgag tctgaggcct gagtggcatg agggaggcag agcgggtccc 2701 actgtcccca cactggccca ggctgtgcag gtgtgcctgg gccgcctagg gtggggctca 2761 gccaggggct gccctcggca gggtggggga tttgccagcg tggccctccc tccagcagca 2821 gctgccctgg gctgggccac gagaagccct aggagcccct ggggacagac acacagcccc 2881 tgcctctgta ggagactgtc ctgtcctgtg agcgccctgt cctccgaccc cgatgcccac 2941 tcgggggcat gcctagtcca tgcgcgtagg gacaggccct ccctcaccca tctaccccca 3001 cggcactaac ccctggcagc cctgcccagc ctcgcacccg catggggaca caaccgactc 3061 cggggacatg cactctcggg ccctgtggag ggactggtgc agatgcccac acacacactc 3121 agcccagacc cgttcaacaa accccgcact gaggttggtc gagcgggagt gcggccagag 3181 cctgcctcgg ccgtcaggga ggactcccgg gctcactcga aggaggtgcc accatttcag 3241 ctttggtagc ttttcttctt cttttaaatt 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96146.doc -103- 200521231
2041 CCCATCGAGA AAACCATCTC CAAAGCCAAA GGTGGGACCC GTGGGGTGCG AGGGCCACAT 2101 GGACAGAGGC CGGCTCGGCC CACCCTCTGC CCTGAGAGTG ACCGCTGTAC CAACCTCTGT 2161 CCCTACAGGG CAGCCCCGAG AACCACAGGT GTACACCCTG CCCCCATCCC GGGAGGAGAT 2221 GACCAAGAAC CAGGTCAGCC TGACCTGCCT GGTCAAAGGC TTCTATCCCA GCGACATCGC 2281 CGTGGAGTGG GAGAGCAATG GGCAGCCGGA GAACAACTAC AAGACCACGC CTCCCGTGCT 2341 OGACTCCGAC GGCTCCTTCT TCCTCTATAG CAAGCTCACC GTGGACAAGA GCAGGTGGCA 2401 GCAGGGGAAC GTCTTCTCAT GCTCCGTGAT QCATGAOGCT CTGCACAACC ACTACACGCA 2461 GAAGAGCCTC TCCCTGTCCC CGGGTAAATG AGTGCGACGG CCGGCAAGCC CCCGCTCCCC 2521 GGGCTCTCGC GGTCGCACGA GGATGCTTGG CACGTACCCC GTCTACATAC TTCCCAGGCA 2581 CCCAQCATGG AAATAAAGCA CCCACCACTG CCCTGGGCCC CTGCGAGACT GTGATGGTTC 2641 TTTCCACGGG TCAGGCCGAG TCTGAGGCCT GAGTGGCATG AGGGAGGCAG AGCGGGTCCC 2701 ACTGTCCCCA CACTGGCCCA GGCTGTGCAG GTGTGCCTGG GCCGCCTAGG GTGGGGCTCA 2761 GCCAGGGGCT GCCCTCGGCA GGGTGGGGGA TTTGCCAGCG TGGCCCTCCC TCCAGCAGCA 2821 GCTGCCCTGG GCTGGGCCAC GAGAAGCCCT AGGAGCCCCT GGGGACAGAC ACACAGCCCC 2881 TGCCTCTGTA GGAGACTGTC CTGTCCTGTG AGCGCCCTGT CCTCCGACCC CGATGCCCAC 2941 TCGGGGGCAT GCCTAGTCCA TGCGCGTAGG GACAGQCCCT CCCTCACCCA TCTACCCCCA 3001 CGGCACTAAC CCCTGGCAGC CCTQCCCAGC CTCGCACCCG CATGGGGACA CAACCGACTC 3061 CGOGGACATG CACTCTCGGG CCCTOTGGAG GGACTGGTGC AGATGCCCAC ACACACACTC 3121 AGCCCAGACC COTTCAACAA ACCCCQCACT GAGGTTGGTC GAGCGGGAGT GCGGCCAGAG 3181 CCTGCCTCGG CCGTCAGGGA GGACTCCCGG GCTCACTCGA AGGAGGTGCC ACCATTTCAG 3241 CTTTGGTAGC TTTTCTTCTT CTTTTAAATT TTCTAAAGCT CATTAATTGT CTTTGATGTT 3301 TCTTTTCTGA TGACAATAAA ATATCCTTTT TAAGTCTTGT ACTTCGTGAT GGGAGCCGCC 3361 TTCCTGTGTC CACGCGCCTC CTGCCCCCGQ TGGGAAGCAC GGTCAGGAGG AGGCTGGTCC 3421 AGCTGCACCT CGGGGGCTCC CTGCACTCGC CCCCCGCCTC CTGCAGCCAC ACGCATTGCC 3481 CGAGCGACCC TCCCTGGCCC CTGTCACTAC ATGGACCCCT GGGGCTTCTC CTCTTTTCTA 3541 CATGGATGCA GTTTCTCCTC CTGCTGGGCA CGGTGCTGCC TGCCCTGGTC ACTCTGCGGG 3601 GGACAGGGCC TCCAQGGAAA GCTGGGTCGA GOCTOOGAGC TGGCTCAGGC TGGCCAGGCA 3661 GAGCCACAGG GAGGGCCTTC CAGAACCAAC TTGATGAGTT CATGGTCCGA AGCGAGAGGT GGGTGTCAGA 3721 TCCAGACATG ATAAGATACA TGGACAAACC ACAACTAGAA TGCAGTGAAA 3781 AAAATGCTTT ATTTGTGAAA TTTGTGATGC TATTGCTTTA TTTGTAACCA TTATAAGCTG 3841 CAATAAACAA GTTAACAACA ACAATTGCAT TCATTTTATG TTTCAGGTTC AGGGGGAGGT 3901 GTGGGAGGTT TTTTAAAGCA AGTAAAACCT CTACAAATGT GGTATOGCTG ATTATGATCT 3961 CTAGTCAAGG CACTATACAT CAAATATTCC TTATTAACCC CTTTACAAAT TAAAAAGCTA 4021 AAGGTACACA ATTTTTGAGC ATAGTTATTA ATAGCAGACA CTCTATGCCT GTGTGGAGTA 4081 AGAAAAAACA GTATGTTATG ATTATAACTG TTATGCCTAC TTATAAAGGT TACAGAATAT 4141 TTTTCCATAA TTTTCTTGTA TAGCAGTGCA GCTTTTTCCT TTGTGGTGTA AATAGCAAAG 4201 CAAGCAAGAG TTCTATTACT AAACACAGCA TGACTCAAAA AACTTAGCAA TTCTGAAGGA 4261 AAGTCCTTGG GGTCTTCTAC CTTTCTCTTC TTTTTTGGAG GAGTAGAATG TTGAGAGTCA 4321 GCAGTAGCCT CATCATCACT AGATGGCATT TCTTCTGAGC AAAACAGGTT TTCCTCATTA 4381 AAGGCATTCC ACCACTGCTC CCATTCATCA GrrCCATAGG TTGGAATCTA AAATACACAA 4441 ACAATTAGAA TCAGTAGTTT AACACATTAT ACACTTAAAA ATTTTATATT TACCTTAGAG
96146.doc -104- 200521231
4501 CTTTAAATCT CTGTAGGTAG TTTGTCCAAT TATGTCACAC CACAGAAGTA AGGTTCCTTC 4561 ACAAAGATCC GGACCAAAGC GGCCATCGTG CCTCCCCACT CCTGCAGTTC GGGGGCATGG 4621 ATGCGCGGAT AGCCGCTGCT GGTTTCCTGG ATGCCGACGG ATTTGCACTG CCGGTAGAAC 4681 TCCGCGAGGT CGTCCAGCCT CAGGCAGCAG CTGAACCAAC TCGCGAGGGG ATCGAGCCCG 4741 GGGTGGGCGA AGAACTCCAG CATGAGATCC CCGCGCTGGA GGATCATCCA GCCGGCGTCC 4801 CGGAAAACGA TTCCGAAGCC CAACCTTTCA TAGAAGGCGG CGGTGGAATC GAAATCTCGT 4861 GATOGCAGGT TGGGCGTCGC TTGGTCGGTC ATTTCGAACC CCAGAGTCCC GCTCAGAAGA 4921 ACTCGTCAAG AAGGCGATAG AAGGCGATGC GCTGCGAATC GGGAGCGGCG ATACCGTAAA 4981 GCACGAGGAA GCGGTCAGCC CATTCGCCGC CAAGCTCTTC AGCAATATCA CGGGTAGCCA 5041 ACGCTATGTC CTGATAGCGG TCCGCCACAC CCAGCCGGCC ACAGTCGATG AATCCAGAAA 5101 AGCGGCCATT TTCCACCATG ATATTCGGCA AGCAGGCATC GCCATGGGTC ACGACGAGAT 5161 CCTCGCCGTC GGGCATGCGC GCCTTGAGCC TGGCGAACAG TTCGGCTGGC GCGAGCCCCT 5221 GATGCTCTTC GTCCAGATCA TCCTGATCGA CAAGACCGGC TTCCATCCGA GTACGTGCTC 5281 GCTCGATGCQ ATGTTTCGCT TGGTGGTCGA ATGGGCAGGT AGCCGGATCA AGCGTATGCA 5341 GCCGCCGCAT TGCATCAQCC ATGATGOATA CTTTCTCGGC AGQAGCAAGG TGAGATGACA 5401 GGAGATCCTG CCCCGGCACT TCGCCCAATA GCAGCCAGTC CCTTCCCGCT TCAGTOACAA 5461 CGTGGAGCAC AGCTGCGCAA GGAACGCCCG TCGTGGCCAG CCACGATAGC CGCGCTGCCT 5521 CGTCCTGCAG TTCATTCAGG GCACCGGACA GGTCGGTCTT GACAAAAAGA ACCGGGCGCC 5581 CCTGCGCTGA CAGCCGGAAC ACGGCGGCAT CAGAOCAGCC GATTGTCTGT TGTGCCCAGT 5641 CATAGCCGAA TAGCCTCTCC ACCCAAGCGG CCGGAGAACC TGCGTGCAAT CCATCTTGTT 5701 CAATCATGCG AAACGATCCT CATCCTGTCT CTTGATCAGA TCTTGATCCC CTGCGCCATC 5761 AGATCCTTGG CGGCAAGAAA GCCATCCAGT TTACTTTGCA GGGCTTCCCA ACCTTACCAG 5821 AGGGCGCCCC AGCTGGCAAT TCCGGTTCGC TTGCTGTCCA TAAAACCGCC CAGTCTAGCT 5881 ATCGCCATGT AAGCCCACTG CAAGCTACCT GCTTTCTCTT TGCGCTTGCG TTTTCCCTTO 5941 TCCAGATAGC CCAGTAGCTG ACATTCATCC GGGGTCAGCA CCGTTTCTGC GGACTGGCTT 6001 TCTACGTGTT CCGCTTCCTT TAGCAGCCCT TGCOCCCTGA GTGCTTGCGG CAGCGTGAAG 6061 CTTTTTGCAA AAGCCTAQGC CTCCAAAAAA GCCTCCTCAC TACTTCTGGA ATAGCTCAGA 6121 GGCCGAGGCG GCCTCGGCCT CTGCATAAAT AAAAAAAATT AGTCAGCCAT GGGGCGGAGA 6181 ATGGGCGGAA CTGGGCGGAG TTAGGGGCGG GATGGGCGGA GTTAGGGGCG GGACTATGGT 6241 TGCTGACTAA TTGAGATGCA TGCTTTGCAT ACTTCTGCCT GCTGGGGAGC CTGGGGACTT €301 TCCACACCTG GTTGCTQACT AATTGAGATG CATGCTTTGC ATACTTCTGC CTGCTGGGGA 6361 GCCTGGGGAC TTTCCACACC CTAACTGACA CACATTCCAC AGCTGCCTCG CGCGTTTCGG 6421 TGATGACGGT GAAAACCTCT GACACATGCA GCTCCCGGAG ACGGTCACAG CTTGTCTGTA 6481 AGCGGATGCC GGGAGCAGAC AAGCCCGTCA GGGCGCGTCA GCGGGTGTTG GCGGGTGTCG 6541 GGGCGCAGCC ATGACCCAGT CACGTAGCGA TAGCGGAGTG TATACTGGCT TAACTATGCG 6601 GCATCAGAGC AGATTGTACT GAQAQTGCAC CATATGCGGT GTGAAATACC GCACAGATGC 6661 GTAAGGAGAA AATACCGCAT CAGGCGCTCT TCCGCTTCCT CGCTCACTGA CTCGCTGCGC 6721 TCGGTCGTTC GGCTGCGGCG AGCGGTATCA GCTCACTCAA AGQCGGTAAT ACGGTTATCC 6781 ACAGAATCAG GGGATAACGC AGGAAAGAAC ATGTGAQCAA AAGGCCAGCA AAAGGCCAGQ 6841 AACCGTAAAA AGGCCGCGTT GCTGGCGTTT TTCCATAGGC TCCGCCCCCC TGACGAGCAT 6901 CACAAAAATC GACGCTCAAG TCAGAGGTGG CGAAACCCGA CAGGACTATA AAGATACCAG
96146.doc -105- 200521231 €961 7021 7081 7141 7201 7261 7321 7381 7441 7501 7561 7621 7681 7741 7801 7861 7921 7981 8041 8101 8161 8221 8281 8341 8401 8461 8521 8581 8641 8701 8761 8821 8β81 8941 9001 9061 S121 9181 9241 9301 9361
GCGTTTCCCC TACCTGTCCG TATCTCAGTT CAGCCCGACC GACTTATCGC GGTCCTACAG GGTATCTGCG GGCAAACAAA AGAAAAAAAG AACGAAAACT ATCCTTTTAA TCTGACAGTT TCATCCATAG TCTGGCCCCA GCAATAAACC TCCATCCAGT TTGCGCAACG GCTTCATTCA AAAAAAGCGG TTATCACTCA TGCTTTTCTG CCGAGTTGCT AAAGTGCTCA TTGAGATCCA TTCACCAGCG AGGGCGACAC TATCAGGGTT ATAGGGGTTC ATCATGACAT GAGCTCGQTA GCTACACTTA GTGGCATCTA AAAATTATCA GTGGCTTTAA GGTTGQAGCC TATTTTTTTA GCCTTCCTCT TTCCTTTTTC GAGAACAACC CTCCCTCCCA AACAACATGT
CTGGAAGCTC CCTTTCTCCC CGGTGTAGGT GCTGCGCCTT CACTGGCAGC AGTTCTTGAA CTCTGCTGAA CCACCGCTGG GATCTCAAGA CACGTTAAGG ATTAAAAATG ACCAATGCTT TTGCCTGACT GTGCTGCAAT AGCCAGCCGG CTATTAATTG TTGTTGCCAT GCTCCGGTTC TTAGCTCCTT TGGTTATGGC TGACTGGTGA CTTGCCCGGC TCATTGGAAA GTTCGATGTA TG TTG ATTGTCTCAT CGCGCACATT TAACCTATAA CCCATCAGCC ATTATTTCTA AGCACAAAAA AAAAATTATG CACAGTGACA TTGTCATGCT TATCATTGAG TCCTTTCCAG AAACAGTATT CAGTTTTATT TTTTAATTGT TTTCACTTTA TTTCTGGGl GGAAATGTl
CCTCGTGCGC TTCGGGAAGC CGTTCGCTCC ATCCGGTAAC AGCCACTGGT GTGGTGGCCT GCCAGTTACC TAGCGGTGGT AGATCCTTTG GATTTTGGTC AAGTTTTAAA AATCAGTGAG CCCCGTCGTG GATACCGCGA AAGGGCCGAG TTOCCGGGAA TGCTGCAGGC CCAACGATCA CGGTCCTCCG AGCACTGCAT GTACTCAACC GTCAACACGG ACGTTCTTCG ACCCACTCGT AGCAAAAACA AATACTCATA GAGCGGATAC TCCCCGAAAA AAATAGGCGT AAAAAGCATG GTAGAACAGC GGAGAAAAAA AGTTTTACGA AGGAATGTGC ACAGAGAAAC CAGGTOCACA TATGAAGCAA TGTGCTATCA CATTCCTCCT CTATCTAGTC AGTCAAATAC
TCTCCTGTTC GTGGCGCTTT AAGCTGGGCT TATCGTCTTG AACAGGATTA AACTACGQCT TTCGGAAAAA TTTTTTGTTT ATCTTTTGTA ATGAGATTAT TCAATCTAAA GCACCTATCT TAGATAACTA GACCCACGCT CGCAGAAGTG GCTAGAGTAA ATCGTGGTGT AGGCGAGTTA ATCGTTGTCA AATTCTCTTA AAGTCATTCT GATAATACCG GGGCGAAAAC QCACCCAACT (3GAAGGCAAA CTCTTCCTTT ATATTTGAAT GTGCCACCTG ATCACGAGGC CCTGCCACAC TCTTTGGTTT ATCACAAAGA TTTCATCTTT ATGCTGCCAT TGTCATACAG GAAGACCAGA AAACTGCCAA GAACATAGTG ACTACCTCTC CAAACTAAGC AAGACACCTT
CGACCCTGCC CTCATAGCTC GTGTGCACGA AGTCCAACCC GCAGAGCGAG ACACTAGAAG GAGTTGGTAG GCAAGCAGCA CGGGGTCTGA CAAAAAGGAT GTATATATGA CAGCGATCTG CGATACGGGA CACCGGCTCC GTCCTGCAAC GTAGTTCGCC CACOCTCGTC CATOATCCCC GAAGTAAGTT CTGTCATGCC GAGAATAGTG CGCCACATAG TCTCAAGGAT GATCTTCAGC ATGCCGCAAA TTCAATATTA QTATTTAGAA ACGTCTAAGA CCTTTCGTCT AACATCAATT GCCAAAAAGA AATGATTGAG TTCCAAGTTG TATGGTGCTC CAGGGGGTGC AAGCACTTTC TGAAACTAGC CATTCAAAAQ TCATTCCCAC ACACGATCCA TAATATCAGC
GCTTACCGGA ACGCTGTAGG ACCCCCCGTT GGTAAGACAC GTATGTAGGC GACAGTATTT CTCTTGATCC GATTACGCGC CGCTCAQTGG CTTCACCTAG GTAAACTTGG TCTATTTCGT GGGCTTACCA AGATTTATCA TTTATCCGCC AGTTAATAGT GTTTGGTATG CATGTTGTGC GGCCGCAGTG ATCCGTAAGA TATGCGGCGA CAGAACTTTA CTTACCGCTG ATCTTTTACT AAAGGGAATA TTGAAQCATT AAATAAACAA AACCATTATT TCAAGAATTC TCTGGAAAAC ATCACCTATA AGGCATAATA AAATCATAGG TGCCTAAAAT CAAATTTCCA TATCAGGCTG AATTGTTAAA TCTAGCCTGA TGTTTGTGTT GTCCACATTA CCTTGTTCAT
96146.doc -106- 200521231
9421 AATCGTGCTT CTAGTGACTT AATGTACATG TCACACTGTA CTGTTGGGTT TTGTGTCTCA 9481 TCATGAACAA TGTTGTGAAiG gtattaagtg GAGAGTAAGC AGAATTAGAT TCCTCTAATG 9541 ATGCACACCC ACACTAAGAG CAGAAATAAT ATTAAAAATA GAAAAAAAAG TTTTACATGA 9601 GATTTCAAAT ACCCAGGTAT GAGCTGCAGT TTCTTCAAGT TAAAGCATCG AGGTTGTCAG 9661 TTACACTATT ACAGGAAACA TATGCAGAGT TTTTATTTTA GTATATTAGT TTTCACATAT 9721 GTGGAATTAC TATTAAACTA TTCTTTCTTT TCAAATGCTT ACCATTGTAA ATGAGTTTGT 9781 GACTTTGTGT AGGTGAGTGC ACATGACTCT GGATGCCTAA GAGGACTGAA GAAGTTGGAG 9841 TTATAGGTAG TTTTATTCTA CTTGACTGTT CAGTGGTAAA AATACAACTG AGGTCCTTTA 9901 AACTGCTGTT CATGAACTTC ΤΤΑΑΤΤΌΑΤΑ TATCTCATGA GATCTCTAAA CTATTTTTAT 9961 TATGACACGT TTCACCATTT TCACTGTAAC GATTTTTATG TTTTATATTA ATGTAACTAT 10021 ATGACACTTC CCAAAATCCC CATATTCACA ATTGAACTGT TTCAAAGTTT TACCTTGACT 10081 TATGGGAAAT GAAAACCCAC ATTTTATAAT TTTAAAATGA AATGTTTATT TTATATTTCT 10141 GCAAATTTCA CAAGGAAAGA TTAGTCACTG GTGTGTGAGA GCAGAGGAGC ATAAGAOTTC 10201 AGGAATAGAA TCCATTATGA TTCTGGAGGC AAGGAAGAAC TGATGCCAAG GTTTCAGTAT 10261 AAGAGCAGTA TCCACTGGAA AGGATAAAGT CACTACATCT GAGCACAGAG CAGGACATCT 10321 ACATAATGAG TGGTCACTAA TGGGCCACTG TTACACTGTT ATATGTATAA GGCTCAAGAA 10381 TGAGCACTGA GGCTGTAAGG TGTATGGGTG AGGACATCAG GATGTAAACC CAGCTCAGGT 10441 AGAGGACTCA GAGGACAGCA CAGTCAGCAT GAACTAATAA ACATCAGATA AGATAAGGCA 10501 CAAGCTCAGC TATATAGGGT AAGGOATCTT TGTAAATCTG ATTGTGCATC CAGTCTAGTT 10561 CAATGTGACT TAGGAAGCCC AGTCATATGC AAATCTAGAG AAGACTTTAG AGTAGAAATC 10621 TGAGGCTCAC CTCACATACC AGCAAGCGAG TGACCAGTTA GTCTTAAGGC ACCACTTCTT 10681 AGACATCATG GCTTGGGTGT GGACCTTGCC ATTCCTGATG GCAGCTGCCC AAAGTAAQAC 10741 ATCAGAAAAA AGAGTTCCAA GGGGAATTGA AGCAGTTCCA TGAATACTCA CCTTCCTGTG 10801 TTCTTTTCAC AGGTGTCCAG GCACAGGTGC AGCTGGTGGA GTCAGGAGCC GAAGTGAAAA 10861 AGCCTGGGGC TTCAGTGAAG GTGTCCTGCA AGGCCTCTGG ATACACATTC ACTAATTATA 10921 TTATCCACTG GGTGAAGCAG GAGCCTGGTC AGGGCCTTGA ATGGATTGGA TATTTTAATC 10981 CTTACAATCA TGGTACTAAG TACAATGAGA AGTTCAAAGG CAGGGCCACA CTAACTGCAG 11041 ACAAATCCAT CAGCACAGCC TACATGGAGC TCAGCAGCCT GCGCTCTGAG GACACTGCGG 11101 TCTACTACTG TGCAAGATCA GGACCCTATG CCTGGTTTGA CACCTGGGGC CAAGGGACCA 11161 CGGTCACCGT CTCCTCAGGT AAGAATGGCC ACTCTAGGGC CTTTGTTTTC TGCTGCTGCC 11221 TGTGGGATTT CATGAGCATT GCAAAGTTGT CCTCGGGACA TGTTCCGAGG GGACCTGGGC 11281 GGACTGGCCA GGAGGGGACG GGCACTGGGG TGCCTTGAGG ATCTGQGAGC CTCTGTGGAT 11341 TTTCCGATGC CTTTCGAAAA TGGGACTGAG GTTGGGTGCG TCTGAGACAG TAACTCAGCC 11401 TGGGGGCTTG GTGAAGATCG CCGCACAQCA GCGAGTCCGT GAAATATCTT ATTTAGACTT 11461 GTGAGGTGCG CTGTGTGTCA ATTTACATCT TAAATCCTTT ATTGGCTGGA AAGAGAATTG 11521 TTGGAGTGGG TGAATCCAGC CAGGAGGGAC GCGGGGGGAT CCA SEQ ID NO ： 39 表現載體LCVL2Sp20之核苷酸序列
1 CTAGAGTCCT AGAGAGGTCT GGTGGAGCCT GCAAAAGTCC AGCTTTCAAA
51 QQAACACAGA AGTATGTGTA TGGAATATTA GAAGATGTTG CTTTTACTCT 96146.doc - 107- 200521231
101 TAAGTTGGTT CCTAGGAAAA ATAGTTAAAT ACTGTGACTT TAAAATGTGA 151 GAGGGTTTTC AAGTACTCAT TTTTTTAAAT GTCCAAAATT TTTGTCAATC 201 AATTTGAGGT CTTGTTTGTG TAGAACTGAC ATTACTTAAA GTTTAACCGA 251 GGAATGGGAG TGAGGCTCTC TCATACCCTA TTCAGAACTG ACTTTTAACA 301 ATAATAAATT AAGTTTAAAA TATTTTTAAA TGAATTGAGC AATGTTGAGT 351 TGGAGTCAAG ATGGCCGATC AGAACCAGAA CACCTGCAGC AGCTGGCAGG 401 AAGCAGGTCA TGTGGCAAQG CTATTTGGGG AAGGGAAAAT AAAACCACTA 451 GGTAAACTTG TAGGTGTGGT TTGAAGAAGT GGTTTTGAAA CACTCTGTCC 501 AGCCCCACCA AACCGAAAGT CCAGGCTGAG CAAAACACCA CCTGGGTAAT 551 TTGCATTTCT TTTTAACTTA AAAATAAGTT GAGGATTCAG CCGAAACTGG AGAGGTCCTC 601 TTGAGTTCAA CCTTTTAATT TTAGCTTGAG TAGTTCTAGT 651 TTCCCCAAAC TCAAAATTAG TTAAGTTTAT CGACTTCTAA AATGTATTTA GAACTCATTT 701 GTTATGTAAG AAATTGAAGG TTAAAATTAC ACTTTAGTGT CTTTAATTTC 751 ΤΑΑΤΑΤΑΊΤΤ AGAAAACTTC TCTATTATTC TTCCCTCTGA 801 TTATTGGTCT CCATTCAATT CTTTTCCAAT ACCCGAAGCA TTTACAGTGA 851 CTTTGTTCAT TTGACATTCT GATCTTTTTT AGTTGTTTGT TTTGCCTTAC TATTAAGACT 901 GGTCAAAACG GCTTCACAAA TCTTTTTCAA GACCACTTTC 951 TGAGTATTCA TTTTAGGAGA AATACTTTTT TTTTAAATGA ATGCAATTAT 1001 CTAGGACCTG CAGGCATGCT GTTTTCTGTC TGTCCCTAAC ATGCCCTQTG CTTAAACACC 105X ATTATCCGCA AACAACACAC CCAAGGGCAG AACTTTGTTA 1101 ATCCTGTTTG CTTCTTTCCT CAGGAACTGT GGCTGCACCA TCTGTCTTCA 11S1 TCTTCCCGCC ATCTGATGAG CAGTTGAAAT CTOGAACTGC CTCTGTTGTG 1201 TGCCTGCTGA ATAACTTCTA TCCCAGAGAG GCCAAAGTAC AGTGGAAGGT 1251 GGATAACGCC CTCCAATCGG GTAACTCCCA GGAGAGTGTC ACAGAGCAGG 1301 ACAGCAAGGA CAGCACCTAC agcctcagca GCACCCTGAC GCTGAGCAAA 1351 GCAGACTACG AGAAACACAA AGTCTACGCC TGCGAAGTCA CCCATCAGGG 1401 CCTGAGCTCG CCCGTCACAA AGAGCTTCAA CAGGGGAGAG TGTTAGAGGG 1451 AGAAGTGCCC CCACCTGCTC CTCAGTTCCA GCCTGACCCC CTCCCATCCT 1501 TTGGCCTCTG ACCCTTTTTC CACAGGGGAC CTACCCCTAT TGCGGTCCTC 1551 CAGCTCATCT TTCACCTCAC CCCCCTCCTC CTCCTTGGCT TTAATTATGC 1601 TAATGTTGGA GGAGAATGAA TAAATAAAGT GAATCTTTGC ACCTGTGGTT 1651 TCTCTCTTTC CTCATTTAAT AATTATTATC TGTTGTTTTA CCAACTACTC 1701 AATTTCTCTT ATAAGGGACT AAATATGTAG TCATCCTAAG GCGGGATATC 1751 GAGATCTGAA GCTGATCCAG ACATGATAAG ATACATTGAT GAGTTTGGAC 1801 AAACGACAAC TAGAATGCAG TGAAAAAAAT GCTTTATTTG TGAAATTTGT 1851 GATGCTATTG GTTTATTTGT AACCATTATA AGCTGCAATA AACAAGTTAA 1901 CAACAACAAT TGCATTCATT TTATGTTTCA GGTTCAGGGG GAGGTGTGGG 1951 AGGTTTTTTA AAGCAAGTAA AACCTCTACA AATGTGGTAT GGCTGATTAT 2001 GATCTCTAGT CAAGGCACTA TACATC7VAAT ATTCCTTATT AACCCCTTTA 2051 CAAATTAAAA AGCTAAAGGT ACACAATTTT TGAGCATAGT TATTAATAGC 2101 AGACACTCTA TGCCTGTGTG GAGTAAGAAA AAACAGTATG TTATGATTAT
96146.doc -108- 200521231
2151 AACTGTTATG CCTACTTATA AAGGTTACAG AATATTTTTC CATAATTTTC 2201 TTGTATAGCA GTGCAGCTTT TTCCTTTGTG GTGTAAATAG CAAAGCAAGC 2251 AAGAGTTCTA TTACTAAACA CAGCATGACT CAAAAAACTT AGCAATTCTG 2301 AAGG7VAAGTC CTTGGGGTCT TCTACCTTTC TCTTCTTTTT TGGAGGAGTA 2351 GAATGTTGAG AGTCAGCAGT AGCCTCATCA TCACTAGATG GCATTTCTTC 2401 TGAGCAAAAC AGGTTTTCCT CATTAAAGGC ATTCCACCAC TGCTCCCATT 2451 2501 CATCAGTTCC AGTTTAACAC ATAGGTTGGA ATTATACACT ATCTAAAATA TAAAAATTTT CACAAACAAT ATATTTACCT TAGAATCAGT TAGAGCTTTA 2551 AATCTCTGTA GGTAGTTTGT CCAATTATGT CACACCACAG AAGTAAGGTT 2601 CCTTCACAAA OATCCGGACC AAAGCGGCCA CGGATAGCCG TCGTGCCTCC CCACTCCTGC 2651 AGTTCGGGGG CATGGATGCG CTGCTGGTTT CCTGGATGCC 2701 GACGGATTTG CACTGCCGGT AGAACTCCGC OAGGTCGTCC AGCCTCAGGC 2751 AGCAGCTGAA CCAACTCGCG AGGGGATCGA GCATCCCCCA TGGTCTTATA 2801 AAAATGCATA GCTTTAGGAG GGGAGCAGAG AACTTGAAAG CATCTTCCTG 2851 TTAGTCTTTC TTCTCGTAGA CTTCAAACTT ATACTTGATG CCTTTTTCCT 2901 CCTGGACCTC AGAGAGGACG CCTGGGTATT CTGGGAGAAG TTTATATTTC 2951 CCCAAATCAA TTTCTGGGAA AAACGTGTCA CTTTCAAATT CCTGCATGAT 3001 CCTTGTCACA AAGAGTCTGA GGTGGCCTGG TTGATTCATG GCTTCCTGGT 3051 AAACAGAACT GCCTCCGACT ATCCAAACCA TAAGGCATCA TGTCTACTTT ACTTGCCAAT 3101 TCCGGTTGTT CAATAAGTCT TCCAAACTTT TCTACTGAGA TGGCAAGAAA 31S1 ATGAGCTCCT CGTGGTGGTT CTTTGAGTTC ACTATATTAA, 3201 TTCTGTCCTT TAAAGGTCGA TTCTTCTCAG GAATGGAGAA TCCACTGAAG CCAGGTTTTC 3251 CTACCCATAA TCACCAGATT CTGTTTACCT AGGTTGTGGT 3 3 01 CATTCTTTGG AAGTACTTGA ACTCGTTCCT GAGCGGAGGC CAGGGTCGGT 3351 CTCCGTTCTT GCCAATCCCC ATATTTTGGG ACACGGCGAC GATGCAGTTC 3401 AATGGTCGAA CCATGATGGC AGCGGGGATA AAATCCTACC AGCCTTCACG 3451 CTAGGATTGC CGTCAAGTTT GGGGGTACCG AGCTCGAATT AGCTTTTTGC 3501 AAAAGCCTAG GCCTCCAAAA AAGCCTCCTC ACTACTTCTG GAATAGCTCA 3551 GAGGGCCGAG GCGGCCTCGG CCTCTGCATA AATAAAAAAA ATTAGTCAGC 3601 CATGGGGCGG AGAATGQGCG GAACTGGGCG GAGTTAGGGG CGGGATGGGC 3651 GGAGTTAGGG GCGGGACTAT GGTTGCTGAC TAATTGAGAT GCATGCTTTG 3701 CATACTTCTG CCTGCTGGGG AGCCTGGGGA CTTTCCACAC CTGGTTGCTG 3751 ACTAATTGAG ATGCATGCTT TGCATACTTC TGCCTGCTGG GGAGCCTGGG 3801 GACTTTCCAC ACCCTAACTG GGTGAAAACC ACACACATTC CACAGCTGCC TCGCGCGTTT 3851 CGGTGATGAC TCTGACACAT GCAGCTCCCG GAGACGGTCA 3901 CAGCTTGTCT GTAAGCGGAT GCCGGGAGCA GACAAGCCCG TCAGGGCGCG 3951 TCAGCGGGTG TTGGCGGGTG TCGGGGCGCA GCCATGACCC AGTCACGTAG 4001 CGATAQCGGA GTGTATACTG GCTTAACTAT GCGGCATCAG AGCAGATTGT 4051 ACTGAGAGTQ CACCATATGC GAGAAAATAC GGCCGCATAT GCGGTGTGAA ATACCGCACA 4101 GATGCGTAAG CGCATCAGGC GCTCTTCCGC TTCCTCGCTC 4151 ACTGACTCGC TGCGCTCGGT CGTTCGGCTG CGGCGAGCGG TATCAGCTCA
96146.doc •109- 200521231
4201 CTCAAAGGCG GTAATACGGT TATCCACAGA ATCAGGGGAT AACGCAGGAA 4251 AGAACATGTG AGCAAAAGGG CAGCAAAAGG CCAGGAACCG TAAAAAGGCC 4301 GCGTTGCTGG CGTTTTTCCA TAGGCTCCGC CCCCCTGACG AGCATCACAA 4351 AAATCQACGC TCAAGTCAGA GGTGGCGAAA CCCGACAGGA CTATAAAGAT 4401 ACCAGGCGTT TCCCCCTGGA AGCTGCCTGG TGCGCTCTCC TGTTCCGACC 4451 CTGCCGCTTA CCGGATACCT GTCCGCCTTT CTCCCTTCGG GAAGCGTGGC 4501 GCTTTCTCAT AGCTCACGCT GTAGGTATCT CAGTTCGGTG TAGGTCGTTC 4551 GCTCCAAGCT GGGCTGTGTG CACGAACCCC CCGTTCAGCC CGACCGCTGC 4601 GCCTTATCCG GTAACTATCG TCTTGAGTCC AACCCGGTAA GACACGACTT 4651 ATCGCCACTG GCAGCAGCCA CTGGTAACAG TTGAAGTGGT GATTAGCAGA GCGAGGTATG 4701 TAGGCC5GTGC TACAGAGTTC GGCCTAACTA CTGAAGCCAG CGGCTACACT 4751 AGAAGGACAG TATTTGGTAT CTGCGCTCTG TTACCTTCGG 4801 AAAAAGAGTT GGTAGCTCTT GATCCGGCAA ACAAACCACC GCTGGTAGCG 4851 GTGGTTTTTT TGTTTGCAAG CAGCAGATTA CGCGCAGAAA AAAAGGATCT 4^01 CAAGAAGATC CTTTGATCTT TTCTACGGGG TCTGACGCTC AGTGGAACGA 4951 AAACTCACGT TAAGGGATTT TGGTCATGAG ATTATCAAAA AGGATCTTCA 5001 CCTAGATCCT TTTAAATTAA AAATGAAGTT TTAAATCAAT CTAAAGTATA 5051 TATGAGTAAA CTTGGTCTGA CAGTTACCAA TGCTTAATCA GTGAGGCACC 5101 TATCTCAGCG ATCTGTCTAT TTCGTTCATC CATAGTTGCC TGACTCCCCG 5151 TCGTGTAGAT AACTACGATA CGGGAGGGCT TACCATCTGG CCCCAGTGCT 5201 GCAATGATAC CGCGAGACCC ACGCTCACCG GCTCCAGATT TATCAGCAAT 5251 AAACCAGCCA GCCGGAAGGG CCGAGCGCAG AAGTGGTCCT GCAACTTTAT 5301 CCGCCTCCAT CCAGTCTATT AATTGTTGCC GGGAAGCTAG AGTAAGTAGT 5351 TCGCCAGTTA ATAGTTTGCG CAACGTTGTT GCCATTGCTG CAGGCATCGT 5401 GGTGTCACGC TCGTCGTTTG GTATGGCTTC ATTCAGCTCC GGTTCCCAAC 5451 GATCAAGGCG AGTTACATGA TCCCCCATGT TGTGCAAAAA AGCGGTTAGC 5501 TCCTTCGGTC CTCCGATCGT TGTCAGAAGT AAGTTGGCCG CAGTGTTATC 5551 ACTCATGGTT ATGGCAGCAC TGCATAATTC TCTTACTGTC ATGCCATCCG 5601 TAAGATGCTT TTCTGTGACT GGTGAGTACT CAACCAAGTC ATTCTGAGAA 5651 TAGTGTATGC GGCGACCX3AG TTGCTCTTGC CCGGCGTCAA CACGGGATAA 5701 TACCGCGCCA CATAGCAGAA CTTTA7VAAGT GCTCATCATT GGAAAACGTT 5751 CTTCGGGGCG AAAACTCTCA AGGATCTTAC CGCTGTTGAG ATCCAGTTCG 5801 ATGTAACCCA CTCGTGCACC CAACTGATCT TCAGCATCTT TTACTTTCAC 5851 CAGCGTTTCT GGGTGAGCAA GACACX3GAAA AAACAGGAAG GCAAAATGCC GGAAAAAAGG 5901 GAATAAGGGC TGTTGAATAC TCATACTCTT CCTTTTTCAA 5951 TATTATTGAA GCATTTATCA GGGTTATTGT CTCATGAGCG GATACATATT 6001 TGAATGTATT TAGAAAAATA AACAAATAGG TAAGAAACCA GGTTCCGCGC ACATTTCCCC 6051 GAAAAGTGCC TATAAAAATA ACCTGACGTC TTATTATCAT GACATTAACC 6101 GGCGTATCAC GAGGCCCTTT CGTCTTCAAG AATTCAGCTG 6151 CTCGAGGAAG AGCTCAAACC CATGCTACTC TCTGGCTTGA TGGAAGCAAC 6201 GCTTTCATAG CTGAGCTGTC ATAAATAATA AAGAGATTTT TTTATTAATA -110· 96146.doc 200521231 6251 6301 6351 6401 64S1 6501 6551 6601 6651 6701 6751 6801 6851 6901 6951 7001 7051 7101 7151 7201 7251 7301 7351 7401 7451 7501 7551 7601 7651 7701 7751 7801 7851 7901 7951 8001 8051
ACATTAGTTT TGTTTGTTGT TCARAGAGAC TCACATTCCC CTGTGGGATT TTACAGGTCT GCAATAAGCT GCTGACCTGA
CAACAACAAC AAAAAAACAA AACAAAGGAG AAGCTGTATG GCCACAATAG CATCTACAGC TAACTGTGAA AGGATAATGG AACAAGTTAT GTACTGCCTA GAGCAGTATG ATGCCTAAAT CATCTCGACA TGGAGGAAAA TAGAACAAAG ACACTCTACA TAGACTATGA TAGAAATCAA AATAAGGTGT AAGACATAGA
TTGAAAAGAT
CACCTTCCAG
AGCTACACGG
GGCTCCCATA
CTGACAGAGC
TAACAATATA
GTGAGTTGAA
TCTCACCTGC
GAGGCGCACC
TGAAAACCTA
GTAATGCATA
TTCATAGAAA
ACAATTTTTT
TAATTAAAAT
AGCTGTGCCT
GACATGAGGA
TCACACTGAT
GCTGCTGCTG
GCTTCCTGTA
AATCATGTGG
ACATTCTGCT
AGAGCCACTT
GTGGTATCAA
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GGGACAGATT
AGTGTATTAC
GGACCAAGCT
GTTGTCTATG
CTCTGAAACC
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TAGTATTCTG
TGAGTTGTGC
GTCGAAGCTC
CAGAGGACCA
AGCAATATCT
CGAGGAGGAC
AAAAAACACT
TCCTTATAGA
CATAGTATTT
TGTATGTGTG
AATGTGTAAA
TCAGGGAGTT
TCAGGCTCAG
ACCCTTTGCT
TTTCTTCATA
CACACACAGT
TGGCTTACAG
CACTGTGCTG
GGATCTGTTT
GACCCAGTCT
TCTCCTGCAG
CAAAAAACAA
TATCTCTGGG
TTACTCTTAC
TGTCAACAAA
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TCTGTGGCTT
AGATTCTGGC
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ATTAACACAA
TGTAAGACTC
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TTCTCAGTCC
AGGAAACATT
AGAAATTTGT
ATAAATTGTT
ACAAATGAAC
ATAGAGAAGC
AGAAGCCTAC
ACATTATATC
TGTGTGCATG
AAGAGATCAT
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AAACAAACAA
GATTTGCATG
GTCAGGTCAC
CATGAGTGTG
GTAATGAAGA
CTTGTCTCTG
TCAATTTTTC
CCAGCCACCC
GGCCAGTCAG
ATGGTGCTCC
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GTAATACCTG
CX3TAAGTAGA
CTATGTCTAA
ACTCTCCAAG
GGCTAGACAT
GTGATAGTTT
TGTCTTCATT
GGCAATCACT
TAAGGGATAC
GTAGAAAAGG
TGTGAGGTTG
GATATCATGG
ATGACAATCA
AGATAAAGCT
CAGGTTTGAT
GAGTCTATGA
TATGTGTGTA
GAATTTAAGA
AAGTTAACX3G agoaaaagaa
TACCCAAAGC
ACCCTTTGCT
CTCACTCAGG
CAGCACTAGA
TGAAAATTCT
AATTGTAGGT
TGTCTCTGAG
AACATTGGCA
AAGGCTTCTC
GGTTTAGTGG
CTGGAGCCTG
GCCATTCACG
ATCCAAAGTC
AAATGATGTA
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GTTCTCTGGA
CAGAAATGCT
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GAATGAGGCC
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ATATCAGCCT
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AATACATATG
GAGAACTQGG
AAAAATGTTG
AAAAAAACAA
ACAAAAAAAT
TGATTTCTGC
ATAGCTTACT
GGAGTCAGAA
TCCTGGCGTT
ATTTTATTGA
CTTGTGAATT
ACGCGTTGTG
TCCAGGAGAA
CAAGCATACA
ATAAGGTCTT
CAGTGGATCA
AAGATTTTGC
TTCGGCCAGG
TCTTTCTTCC
TAAAATCTTA
AGAGTAACTC
GAATQAATGC
CTAGTT
96146.doc -Ill - 200521231 SEQ ID NO ： 40 表現載體HCVHESp20之核苷酸序列
1 CTAGAGAGGT CTGGTGGAGC CTGCAAAAGT CCAGCTTTCA AAGGAACACA SI GAAGTATGTG TATGGAATAT TAGAAGATGT TGCTTTTACT CTTAAGTTGG 101 TTCCTAGGAA AAATAGTTAA ATACTGTGAC TTTAAAATGT GAGAGGGTTT 151 TCAAGTACTC ATTTTTTTAA ATGTCCAAAA TTTTTGTCAA TCAATTTGAG 201 GTCTTGTTTG TGTAGAACTQ ACATTACTTA AAGTTTAACC gaggaatggg 251 AGTGAGGCTC TCTCATACCC TATTCAGAAC TGACTTTTAA CAATAATAAA 301 TTAAGTTTAA AATATTTTTA AATGAATTGA GCAATGTTGA GTTGGAGTCA 351 AGATGGCCGA TCAGAACCAG AACACCTGCA GCAGCTGGCA GGAAGCAGGT 401 CATGTGGCAA GGCTATTTGG OGAAGGGAAA ATAAAACCAC TAGGTAAACT 451 TGTAGCTGTG GTTTGAAGAA GTGGTTTTGA AACACTCTGT CCAGCCCCAC 501 CAAACCGAAA CTAAAATAAG GTCCAGGCTG AGCAAAACAC CACCTGGGTA ATTTGCATTT 551 TTGAGGATTC AGCCGAAACT GGAGAGGTCC TCTTTTAACT 601 TATTGAGTTC AACCTTTTAA TTTTAGCTTG AGTAGTTCTA GTTTCCCCAA 651 701 ACTTAAGTTT AGGCCTGACC ATCGACTTCT TTGGCTTTGG AAAATGTATT OGCAGGGAGG TAAGCTTTCT GGGCTAAGGT GGGGCAGGCG GAGGCAGGTG 751 GCGCCAGCCA QGTGCACACC CAATGCCCAT GAGCCCAGAC ACTGGACGCT 801 GAACCTCGCG GACAGTTAAG AACCCAGGGG CCTCTGCGCC CTGGGCCCAG 851 CTCTGTCCCA CACCGCGGTC ACATGGCACC ACCTCTCTTG CAGCCTCCAC 901 CAAGGGCCCA TCGGTCTTCC CCCTGGCACC CTCCTCCAAG AGCACCTCTG 951 GGGGCACAGC GGCCCTGGGC TGCCTGGTCA AGGACTACTT CCCCGAACCG 1001 GTGACGGTGT CGTGGAACTC AGGCGCCCTO ACCAGCGGCG TGCACACCTT 1051 CCCGGCTGTC CTACAGTCCT CAGGACTCTA CTCCCTCAGC AGCGTGGTGA 1101 CCGTGCCCTC CAGCAGCTTG GGCACCCAGA CCTACATCTG CAACGTGAAT 1151 CACAAGCCCA GCAACACCAA GGTGGACAAG AGAGTTGGTG AGAGGCCAGC 1201 ACAGGGAGGG AGGGTGTCTG CTGGAAGCCA GGCTCAGCGC TCCTGCCTGG 1251 ACGCATCCCG GCTATGCAGT CCCAGTCCAG GGCAGCAAGG CAGGCCCCGT 1301 CTGCCTCTTC ACCCGGAGGC CTCTGCCCGC CCCACTCATG CTCAGGGAGA 1351 GGGTCTTCTQ GCTTTTTCCC CAGGCTCTGG GCAGGCACAG GCTAGGTGCC 1401 CCTAACCCAG GCCCTGCACA CAAAGGGGCA GGTGCTGGGC TCAGACCTGC 1451 CAAGAGCCAT ATCCGGGAGG ACCCTGCCCC TGACCTAAGC CCACCCCAAA 1501 GGCCAAACTC TCCACTCCCT CAGCTCGGAC ACCTTCTCTC CTCCCAGATT 1551 CCAGTAACTC CCAATCTTCT CTCTGCAGAG CCCAAATCTT GTGACAAAAC 1601 TCACACATGC CCACCGTGCC CAGGTAAGCC AGCCCAGGCC TCGCCCTCCA 1651 GCTCAAGGCG GGACAGGTGC CCTAGAGTAG CCTGCATCCA GGGACAGGCC 1701 CCAGCCGGGT GCTGACACGT CCACCTCCAT CTCTTCCTCA GCACCTGAAC 1751 TCCTGGGGGG ACCGTCAGTC TTCCTCTTCC CCCCAAAACC CAAGGACACC
-112- 96146.doc 200521231 1801 1851 1901 1951 2001 2051 2101 2151 2201 2251 2301 2351 240124512501 2551 2601 2651 2701 27S1 2801 2851 2901 2951 3001 3051 3101 3151 3201 3251 3301 3351 3401 3451 3501 3551 3601
CTCATGATCT CCCGGACCCC TGAGGTCACA TGCGTGGTGG TGGACGTGAG CCACGAAGAC CCTGAGGTCA AGTTCAACTG GTACGTGGAC GGCGTGGAGG TGCATAATGC CAAGACAAAG CCGCGGGAGG AGCAGTACAA CAQCACGTAC
CGTGTGGTCA GCGTCCTCAC CGTCCTGCAC CAGGACTGGC TGAATGGCAA GGAGTACAAG TGCAAGGTCT CCAACAAAGC CCTCCCAGCC CCCATCGAGA AAACCATCTC CAAAGCCAAA GGTGQGACCC GTGGGGTGCG AGGGCCACAT
GGACAGAGGC CAACCTCTGT CCCCCATCCC GGTCAAAGGC GGCAGCCGGA GGCTCCTTCT GCAGGGGAAC ACTACACGCA CCGGCAAGCC CACGTACCCC
CGGCTCGGCC CCCTACAGGG GGGAGGAGAT TTCTATCCCA GAACAACTAC TCCTCTATAG GTCTTCTCAT GAAGAGCCTC CCCGCTCCCC GTCTACATAC
CACCCTCTGC CAGCCCCGAQ GACCAAGAAC GCGACATCGC AAGACCACGC CAAGCTCACC GCTCCGTGAT TCCCTGTCCC GGGCTCTCGC TTCCCAGGCA
CCTGAGAGTG AACCACAGGT CAGGTCAGCC CGTGGAGTGG CTCCCGTGCT GTGGACAAGA GCATGAGGCT CGGGTAAATG GGTCGCACGA CCCAGCATGG
ACCGCTGTAC GTACACCCTG TGACCTGCCT GAGAGCAATG GGACTCCGAC GCAGGTGGCA CTGCACAACC AGTGCGACGG GGATGCTTGG AAATAAAGCA
CCCACCACTG TCAGOCCGAG ACTGTCCCCA GTGGGGCTCA TGGCCCTCCC AGGAGCCCCT
CGCTGGGCCC TCTGAGGCCT CACTGGCCCA GCCAGGGGCT TCCAGCAGCA GGGGACAGAC
CTGCGAGACT GAGTGGCATG GGCTGTGCAG GCCCTCGGCA GCTGCCCTGG ACACAGCCCC
GTGATGGTTC AGGGAGGCAG GTGTGCCTGG GGGTGGGGGA GCTGGGCCAC TGCCTCTGTA
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CTGTCCTGTG AGCGCCCTGT CCTCCGACCC CGATGCCCAC TCGGGGGCAT GCCTAGTCCA TGCGCGTAGG GACAGGCCCT CCCTCACCCA TCTACCCCCA CGGCACTAAC CCCTGGCAGC CCTGCCCAGC CTCGCACCCG CATGGGGACA CAACCGACTC CGGGGACATG CACTCTCGQG CCCTGTGQAG GGACTGGTGC AGATGCCCAC ACACACACTC AGCCCAGACC CGTTCAACAA ACCCCGCACT GAGGTTGGTC GAGCGGGAGT GCGGCCAGAG CCTGCCTCGG CCGTCAGGGA GGACTCCCGG GCTCACTCGA AGGAGGTGCC ACCATTTCAG CTTTGGTAGC TTTTCTTCTT CTTTTAAATT TTCTAAAGCT CATTAATTGT CTTTGATGTT TCTTTTGTGA TGACAATAAA ATATCCTTTT TAAGTCTTGT ACTTCGTGAT GGGAGCCGCC TTCCTGTGTC CACGCGCCTC CTGCCCCCGG TGGGAAGCAC GGTCAGGAGG AGGCTGGTCC AGCTGCACCT CGGGGGCTCC CTGCACTCGC
CCCCCGCCTC CTGCAGCCAC ACGCATTGCC CGAGCGACCC TCCCTGGCCC
CTQTCACTAC ATGGACCCCT GGGGCTTCTC CTCTTTTCTA CATGGATGCA GTTTCTCCTC CTGCTGGGCA CGGTGCTGCC TGCCCTGGTC A.CTCTGCGGG GGACAGGGCC TCCAGGGAAA GCTGGGTCGA GGCTGGGAGC TGGCTCAGGC
96146.doc -113 - 200521231 3651 3701 3751 3801 3851 3901 3951 4001 4051 4101 4151 4201 4251 4301 4351 4401 4451 4501 4551 4601 4651 4701 4751 4801 4851 4901 4951 5001 5051 5101 5151 5201 5251 5301 5351 5401 5451 5501
TGGCCAGGCA GAGCCACAGG GAGGGCCTTC CAGAACCAAC CATGGTCCGA AGCGAGAGGT GGGTGTCAGA TCCAGACATG ATAAGATACA TTGATGAGTT TGGACAAACC ACAACTAGAA TGCAGTGAAA AAAATGCTTT ATTTGTQAAA TTTGTGATGC TATTGCTTTA TTTGTAACCA TTATAAGCTG CAATAAACAA GTTAACAACA ACAATTGCAT TCATTTTATG TTTCAGGTTC AGGQGGAGGT GTGGGAGGTT TTTTAAAGCA AGTAAAACCT CTACAAATGT GGTATGGCTG ATTATGATCT CTAGTCAAGG CACTATACAT CAAATATTCC TTATTAACCC CTTTACAAAT TAAAAAGCTA AAGGTACACA ATTTTTGAGC ATAGTTATTA ATAGCAGACA CTCTATGCCT GTGTGGAGTA AGAAAAAACA GTATGTTATG ATTATAACTG TTATGCCTAC TTATAAAGGT TACAGAATAT TTTTCCATAA TTTTCTTGTA TAGCAGTGCA GCTTTTTCCT TTGTGGTGTA AATAGCAAAG CAAGCAAGAG TTCTATTACT AAACACAGCA TGACTCAAAA AACTTAGCAA TTCTGAAGQA AAGTCCTTGG GGTCTTCTAC CTTTCTCTTC TTTTTTGGAG GAGTAGAATG TTGAGAGTCA GCAGTAGCCT CATCATCACT AGATGGCATT TCTTCTGAGC AAAA.CAGGTT TTCCTCATTA AAGGCATTCC ACCACTGCTC CCATTCATCA GTTCCATAGG TTGGAATCTA AAATACACAA ACAATTAGAA TCAGTAGTTT AACACATTAT ACACTTAAAA ATTTTATATT TACCTTAGAG CTTTAAATCT CTGTAGGTAG TTTGTCCAAT TATGTCACAC CACAGAAGTA AGGTTCCTTC ACAAAGATCC GGACCAAAGC GGCCATCGTG CCTCCCCACT CCTGCAGTTC GGGGGChTGG ATGCGCGGAT AGCCGCTGCT GGTTTCCTGG ATGCCGACGG ATTTGCACTG CCGGTAGAAC TCCGCGAGGT CGTCCAGCCT CAGGCAGCAG CTGAACCAAC TCGCGAGGGG ATCGAQCCCG GGGTGGGCGA AGAACTCCAG CATGAGATCC CCGCGCTGGA GGATCATCCA GCCGGCGTCC CGGAAAACGA TTCCGAAGCC CAACCTTTCA TAGAAGGCGG CGGTGGAATC GAAATCTCGT GATGGCAGGT TGGGCGTCGC TTGGTCGGTC ATTTCGAACC CCAGAGTCCC OCTCAGAAGA ACTCGTCAAG AAGGCGATAG AAGGCGATGC GCTGCGAATC GGGAGCGGCG ATACCOTAAA GCACGAGGAA GCGGTCAGCC CATTCGCCGC CAAGCTCTTC AGCAATATCA CGGGTAGCCA ACGCTATGTC CTGATAGCGG TCC6CCACAC CCAGCCGGCC ACAGTCGATG AATCCAGAAA AGCGGCCATT TTCCACCATG ATATTCGGCA AGCAGQCATC GCCATGGGTC ACGACGAGAT CCTCGCCGTC GGQCATGCGC GCCTTGAGCC TGGCGAACAG TTCGGCTGGC GCGAGCCCCT GATGCTCTTC GTCCAGATCA TCCTGATCGA CAAGACCGGC TTCCATCCGA GTACGT6CTC GCTCGATGCG ATGTTTCGCT TGGTGGTCGA ATGGGCAQGT AGCCGGATCA AGCGTATGCA GCCGCCGCAT TGCATCAGCC ATGATGGATA CTTTCTCGGC AGGAGCAAGG TGAGATGACA GGAGATCCTQ CCCCGGCACT TCGCCCAATA GCAGCCAGTC CCTTCCCGCT TCAGTGACAA CGTCGAGCAC AGCTGCGCAA GGAACGCCCG TCGTGGCCAG CCACGATAGC CGCGCTGCCT CGTCCTGCAG TTCATTCAGG GCACCGGACA
96146.doc -114- 200521231 5551 5601 5651 5701 5751 5801 5851 5901 5951 6001 6051 6101 6151 6201 6251 6301 6351 6401 6451 6501 6551 6601 6651 6701 6751 6801 6851 6901 6951 7001 7051 7101 7151 7201 7251 7301 7351 7401
GGTCGGTCTT ACGGCGGCAT TAGCCTCTCC CAATCATGCG CTGCGCCATC GGGCTTCCCA TTGCTGTCCA CAAGCTACCT CCAGTAGCTG TCTACGTGTT CAGCGTGAAG TACTTCTGGA AAAAAAAATT TTAGGGGCGG TTGAGATGCA TCCACACCTG CTGCTGGGGA AGCTGCCTCG GCTCCCGGAG AAGCCCGTCA ATGACCCAGT GCATCAGAGC GCACAGATGC CGCTCACTGA GCTCACTCAA AGGAAAGAAC AGGCCGCGTT CACAAAAATC AAGATACCAG CGACCCTGCC GTGGCGCTTT CGTTCGCTCC GCTGCGCCTT GACTTATCGC GTATGTAGGC ACACTAGAAG TTCGGAAAAA TAGCGGTGGT
GACAAAAAGA CAGAGCAGCC ACCCAAGCGG AAACGATCCT AGATCCTTGG ACCTTACCAG TAAAACCGCC GCTTTCTCTT ACATTCATCC CCGCTTCCTT CTTTTTGCAA ATAGCTCAGA AGTCAGCCAT GATGGGCGGA TGCTTTGCAT QTTGCTGACT GCCTGGGGAC CGCGTTTCGG ACGGTCACAG GGQCGCGTCA CACGTAGCGA AGATTGTACT GTAAGGAGAA CTCGCTGCGC AGGCGGTAAT ATGTGAGCAA GCTGGCGTTT GACGCTCAAG GCGTTTCCCC GCTTACCGGA CTCATAGCTC AAGCTGGGCT ATCCGGTAAC CACTGGCAGC GGTGCTACAG GACAGTATTT GAGTTGGTAG TTTTTTGTTT
ACCGGGCGCC GATTGTCTGT CCGGAGAACC CATCCTGTCT CGGCAAGAAA AGGGCGCCCC CAGTCTAGCT TGCGCTTGCG GGGGTCAGCA TAGCAGCGCT AAGCCTAGGC GGCCGAGGCG GGGGCGGAGA GTTAGGGGCG ACTTCTGCCT AATTGAGATG TTTCCACACC TGATGACGGT CTTGTCTGTA GCGGGTGTTG TAGCGGAGTG GAGAGTGCAC AATACCGCAT TCGGTCGTTC ACGGTTATCC AAGGCCAGCA TTCCATAGGC TCAGAGGTGG CTGGAAGCTC TACCTGTCCG ACGCTGTAGG GTGTGCACGA TATCGTCTTG AGCCACTGGT AGTTCTTGAA GGTATCTGCG CTCTTGATCC GCAAGCAGCA
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CAGCCGGAAC CATAGCGGAA CCATCTTGTT TCTTGATCCC TTACTTTGCA TCCGGTTCGC AAGCCCACTG TCCAGATAGC GGACTGGCTT GTGCTTGCGG GCCTCCTCAC CTGCATAAAT CTGGGCGGAG TGCTGACTAA CTGGGGACTT ATACTTCTGC CACATTCCAC QACACATGCA GGGAGCAGAC GGGCGCAGCC TAACTATGCG OTGAAATACC TCCGCTTCCT AGCGGTATCA GGGATAACGC AACCGTAAAA TGACGAGCAT CAGGACTATA TCTCCTGTTC TTCGGGAAGC CGGTGTAGGT CAGCCCGACC GGTAAGACAC GCAGAGCGAG AACTACGGCT GCCAGTTACC CCACCGCTGG AGAAAAAAAG
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GATCTCAAGA AACGAAAACT CTTCACCTAG GTATATATGA GCACCTATCT CCCCGTCGTG GTGCTGCAAT GCAATAAACC TTTATCCGCC GTAGTTCGCC ATCGTGGTGT CCAACGATCA TTAGCTCCTT TTATCACTCA ATCCGTAAGA GAGAATAGTG GATAATACCG ACGTTCTTCG GTTCGATQm TTCACCAGCG AAAGGGAATA TTCAATATTA ATATTTGAAT TCCCCGAAAA TAACCTATAA GAGCTCGGTA TCTGGAAAAC GCCAAAAAGA ATCACAAAGA AGTTTTACGA CACAGTGACA GGTTGGAGCC CAAATTTCCA AAGCACTTTC AAACTGCCAA TGTGCTATCA CAGTTTTATT
AGATCCTTTG ATCTTTTCTA CGGGGTCTGA CGCTCAGTGG CACGTTAAGG GATTTTGGTC ATGAGATTAT CAAAAAGGAT ATCCTTTTAA ATTAAAAATG AAGTTTTAAA TCAATCTAAA GTAAACTTGG TCTGACAGTT ACCAATGCTT AATCAGTGAG CAGCGATCTG TCTATTTCOT TCATCCATAG TTGCCTGACT TAGATAACTA CGATACGGGA GGGCTTACCA TCTQGCCCCA GATACCGCGA GACCCACGCT CACCGGCTCC AGATTTATCA AGCCAGCCGG AAGGGCCGAG CGCAQAAQTG GTCCTGCAAC TCCATCCAGT CTATTAATTQ TTGCCGGGAA GCTAGAGTAA AGTTAATAGT TTGCGCAACG TTGTTGCCAT TGCTGCAGGC CACGCTCGTC GTTTGGTATG GCTTCATTCA GCTCCGGTTC AGGCGAGTTA CATGATCCCC CATGTTGTGC AAAAAAGCGG CGGTCCTCCG ATCGTTGTCA GAA0TAAGTT GGCCGCAGTG TGGTTATOGC AGCACTGCAT AATTCTCTTA CTGTCATGCC TGCTTTTCTG TGACTGGTGA GTACTCAACC AAGTCATTCT TATGCGGCGA CCQAGTTGCT CTTGCCCGGC GTCAACACGG CGCCACATAG CAGAACTTTA AAAGTGCTCA TCATTGGAAA GGGCGAfiAAC TCTCAAGGAT CTTACCGCTG TTGAGATCCA ACCCACTCGT GCACCCAACT GATCTTCAGC ATCTTTTACT TTTCTGGGTG AQCAAAAACA GGAAGGCAAA ATGCCGCAAA AGGGCGACAC GGAAATGTTG AATACTCATA CTCTTCCTTT TTGAAGCATT TATCAGGGTT ATTGTCTCAT GAGCGGATAC GTATTTAGAA AAATAAACAA ATAGGGGTTC CGCGCACATT GTGCCACCTG ACGTCTAAGA AACCATTATT ATCATGACAT AAATAGGCGT ATCACGAGGC CCTTTCGTCT TCAAGAATTC CCCATCAGCC AAAAAGCATG CCTGCCACAC AACATCAATT GCTACACTTA ATTATTTCTA GTAGAACAGC TCTTTGGTTT ATCACCTATA GTGGCATCTA AGCACAAAAA GGAGAAAAAA AATGATTGAG AGGCATAATA AAAATTATCA AAAAATTATG TTTCATCTTT TTCCAAGTTG AAATCATAGG GTGGCTTTAA AGGAATGTGC ATGCTGCCAT TATGGTGCTC TGCCTAAAAT TTGTCATGCT ACAGAGAAAC TGTCATACAG CAGGGGGTGC ΤΑΤΤΤΓΤΊΤΑ TATCATTGAG CAGGTGCACA GAAGACCAGA TATCAGGCTG GCCTTCCTCT TCCTTTCCAG TATGAAGCAA TGAAACTAGC AATTGTTAAA TTCCTTTTTC AAACAGTATT GAACATAGTG CATTCAAAAG TCTAGCCTGA GAGAACAACC CATTCCTCCT ACTACCTCTC TCATTCCCAC TGTTTGTGTT
96146.doc -116- 200521231 9301 9351 94 01 9451 9501 9551 9601 9651 9701 9751 9801 9851 9901 9951 10001 10051 10101 10151 10201 10251 10301 10351 10401 10451 10501 10551 10601 10651 10701 10751 10801 10851 10901 109S1 11001 11051 11101 11151 11201
CTCCCTCCCA TTTTAATTGT CTATCTAGTC CAAACTAAGC ACACGATCCA GTCCACATTA AACAACATGT TTTCACTTTA AGTCAAATAC AAGACACCTT TAATATCAGC CCTTGTTCAT AATCGTGCTT CTAGTGACTT AATGTACATG TCACACTGTA CTGTTGGGTT TTGTGTCTCA TCATGAACAA TGTTGTGAAG GTATTAAGTG GAGAGTAAGC AGAATTAGAT TCCTCTAATG ATGCACACCC ACACTAAGAG CAGAAATAAT ATTAAAAATA GAAAAAAAAG TTTTACAT6A GATTTCAAAT ACCCAGGTAT GAGCTGCAGT TTCTTCAAGT TAAAGCATCG AGGTTGTCAG TTACACTATT ACAGGAAACA TATGCAGAGT TTTTATTTTA GTATATTAGT TTTCACATAT GTGGAATTAC TATTAAACTA TTCTTTCTTT TCAAATGCTT ACCATTGTAA ATGAGTTTGT GACTTTGTGT AGGTGAGTGC ACATGACTCT GGATGCCTAA GAGGACTGAA GAAGTTOGAG TTATAGGTAG TTTTATTCTA CTTGACTGTT CAQTGCTAAA AATACAACTG AGGTCCTTTA AACTGCTGTT CATGAACTTC TTAATTGATA TATCTCATGA GATCTCTAAA CTATTTTTAT TATGACACGT TTCACCATTT TCACTGTAAC GATTTTTATG 9 TTTTATATTA ATGTAACTAT ATGACACTTC CCAAAATCCC CATATTCACA ATTOAACTGT TTCAAAGTTT TACCTTQACT TATGGGAAAT GAAAACCCAC ATTTTATAAT TTTAAAATGA AATGTTTATT TTATATTTCT GCAAATTTCA
CAAGGAAAGA
AGGAATAGAA
QTTTCAGTAT
GAGCACAGAG
TTACACTGTT
TGTATGGGTG
GAGGACAGCA
CAAGCTCAGC
CAGTCTAGTT
AAQACTTTAQ
TGACCAGTTA
GGACCTTGCC
AGAGTTCCAA
TTCTTTTCAC
GAAGTGAAAA
ATACACATTC
AGGGCCTTGA
TACAATGAGA
CAGCACAGCC
TCTACTACTG
CAAGGGACCA
CTTTGTTTTC
TTAGTCACTG
TCCATTATGA
AAGAGCAGTA
CAGGACATCT
ATATGTATAA
AGGACATCAG
CAGTCAGCAT
TATATAGGGT
CAATGTGACT
AGTAGAAATC
GTCTTAAGGC
ATTCCTGATG
GQGGAATTGA
AGGTGTCCAG
AGCCTGGGGC
ACTAATTATA
ATGGATTGGA
AGTTCAAAGO
TACATGGAGC
TQCAAGATCA
CGGTCACCGT
TGCTGCTGCC
GTGTGTGAGA
TTCTGGAGGC
TCCACTGGAA
ACATAATGAG
GGCTCAAGAA
GATGTAAACC
GAACTAATAA
AAGGGATCTT
TAGGAAGCCC
TGAGGCTCAC
ACCACTTCTT
GCAGCTGCCC
AGCAGTTCCA
GCAGAGGTGC
TTCAGTGAAG
TTATCCACTG
TATTTTAATC
CAGGQCCACA
TCAGCAGCCT
GGACCCTATG
CTCCTCAGGT
TGTGGGATTT
GCAGAGGAGC
AAGGAAGAAC
AGGATAAAGT
TGGTCACTAA
TGAGCACTGA
CAGCTCAGGT
ACATCAGATA
TGTAAATCTG
AGTCATATGC
GTCACATACC
AGACATCATG
AAAGTAAGAC
TGAATACTCA
AGCTGGTGGA
GTGTCCTGCA
GGTGAAGCAG
CTTACAATCA
CTAACTGCAA
GCGCTCTGAG
CCTGGTTTGA
AAGAATGGCC
CATGAGCATT
ATAAGAGTTC
TGATGCCAAG
CACTACATCT
TGGGCCACTG
GGCTGTAAGG
AGAGGACTCA
AGATAAGGCA
ATTGTGCATC
AAATCTAGAG
AGCAAGCGAG
GCTTGGGTGT
ATCAGAAAAA
CCTTCCTGTG
GTCAGGAGCC
AGGCCTCTGG
GAGCCTGGTC
TGGTACTAAG
ACAAATCCAT
GACACTGCGG
CACCTGGGGC
ACTCTAGGGC
GCAAAGTTGT
96146.doc -117- 200521231 11251 11301 11351 11401 11451 11501 11551
CCTCGGGACA
GGCACTGGGG
CTTTGGAAAA
TGQGGGCTTG
ATTTAGACTT
ATTGGCTGGA
GCGGGGGGAT
TGTTCCGAGG
TGCCTTGAGG
TGGGACTGAG
GTGAAGATCG
GTGAGGTGCG
AAGAGAATTG
CCA
GGACCTGGGC
ATCTGGGAGC
GTTGGGTGCG
CCGCACAOCA
CTGTGTGTCA
TTGGAGTGGG
GGACTGGCCA
CTCTGTGGAT
TCTGAGACAG
GCGAGTCCGT
ATTTACATCT
TGAATCCAGC
GGAGGGGACG
TTTCCGATGC
TAACTCAGCC
GAAATATCTT
TAAATCCTTT
CAGGAGGGAC SEQ ID NO ： 41 表現載體HCVHQSp20之核苷酸序列
1 CTAGAGAGGT CTGGTGGAGC CTGCAAAAGT CCAGCTTTCA AAGGAACACA 51 GAAGTATGTG TATGGAATAT TAGAAGATGT TGCTTTTACT CTTAAGTTGG 101 TTCCTAGGAA AAATAGTTAA ATACTGTGAC TTTAAAATGT GAGAGGGTTT 151 TCAAGTACTC ATTTTTTTAA ATGTCCAAAA TTTTTGTCAA TCAATTTGAG 201 GTCTTGTTTG TGTAGAACTG ACATTACTTA AAGTTTAACC GAGGAATGGG 251 AGTGAGGCTC TCTCATACCC TATTCAGAAC TGACTTTTAA CAATAATAAA 301 TTAAGTTTAA AATATTTTTA AATGAATTGA GCAATGTTGA GTTGGAGTCA 351 AGATGGCCGA TCAGAACCAG AACftCCTGCA GCAGCTGGCA GGAAGCAGGT 401 CATGTGGCAA GGCTATTTGG GGAAGGGAAA ATAAAACCAC TAGGTAAACT 451 TGTAOCTGTG GTTTGAAGAA GTGGTTTTGA AACACTCTQT CCAQCCCCAC 501 CAAACCGAAA GTCCAGGCTG AGCAAAACAC CACCTGGGTA ATTTGCATTT 551 CTAAAATAAG TTGAGGATTC AGCCGAAACT GGAGAGGTCC TCTTTTAACT 601 TATTQAGTTC AACCTTTTAA TTTTAGCTTG AGTAGTTCTA GTTTCCCCAA 651 ACTTAAGTTT ATCGACTTCT AAAATCTATT TAAGCTTTCT GGGGCAGGCC 701 AGGCCTGACC TTGGCTTTGG GGCAGGQAGG GGGCTAAGGT GAGGCAGGTG 751 GCGCCAGCCA GGTGCACACC CAATGCCCAT GAGCCCAGAC ACTGGACGCT 801 GAACCTCGCG GACAGTTAAG AACCCAGGGG CCTCTGCGCC CTGGGCCCAG Θ51 CTCTGTCCCA CACCGCGGTC ACATGGCACC ACCTCTCTTG CAGCCTCCAC 901 CAAGGGCCCA TCGGTCTTCC CCCTGGCACC CTCCTCCAAG AGCACCTCTG 951 GGGGCACAGC GGCCCTGGGC TGCCTGGTCA AGGACTACTT CCCCGAACCG 1001 GTGACGGTGT CGTGGAACTC AGGCGCCCTG ACCAGCGGCG TGCACACCTT 1051 CCCGGCTGTC CTACAGTCCT CAGGACTCTA CTCCCTCAGC AGCGTGGTGA 1101 CCGTGCCCTC CAGCAGCTTG GGCACCCAGA CCTACATCTG CAACGTGAAT 11S1 CACAAGCCCA GCAACACCAA GGTGGACAAG AGAGTTGGTG AGAGGCCAGC 1201 AGAGGGAGGG AGGGTGTCTG CTGGAAGCCA GGCTCAGCGC TCCTGCCTGG 1251 ACGCATCCCG GCTATGCAGT CCCAGTCCAG GGCAGCAAGG CAGGCCCCGT
-118 - 96146.doc 200521231 1301 1351 1401 1451 1501 1551 1601 1651 1701 1751 1801 1B51 1901 1951 2001 2051 2101 2151 2201 2251 2301 2351 2401 2451 2501 2551 2601 2651 2701 2751 2801 2851 2901 2951 3001 3051 3101 3151
CTGCCTCTTC ACCCGGAGGC CTCTGCCCGC CCCACTCATG CTCAGGGAGA GGGTCTTCTG GCTTTTTGCC CAGGCTCTGG GCAGGCACAG GCTAGGTGGC CCTAACCCAG GCCCTGCACA CAAAQGGGCA GGTGCTGGGC TCAGACCTGC CAAGAGCCAT ATCCGGGAGG ACCCTGCCCC TGACCTAAGC CCACCCCAAA GGCCAAACTC TCCACTCCCT CAGCTCGGAC ACCTTCTCTC CTCCCAGATT CCAGTAACTC CCAATCTTCT CTCTGCAGAG CCCAAATCTT GTGACAAAAC TCACACATGC CCACCGTGCC CAGGTAAGCC AGCCCAGGCC TCGCCCTCCA GCTCAAGGCG GGACAGGTGC CCTAGAGTAG CCTGCATCCA GGGACAGGCC CCAGCCGGGT GCTGACAGGT CCACCTCCAT CTCTTCCTCA GCACCTGAAC TCCTGGGGGG ACCGTCAGTC TTCCTCTTCC CCCCAAAACC CAAGGACACC
CtCATGATCT CCCGGACCCC TGAGGTCACA TGCGTGGTGG TGGACGTGAG CCACGAAGAC CCTGAGGTCA AOTTCAACTG GTACGTGGAC GGCGTGGAGG TGCATAATGC CAAGACAAAG CCGCGGGAGG AGCAGTACAA CAGCACGTAC CGTGTGGTCA GCGTCCTCAC CGTCCTGCAC GAGGACTGGC TOAATGGCAA GGAGTACAAG TGCAAGGTCT CCAACAAAGC CCTCCCAGCC CCCATCGAGA AAACCATCTC CAAAGCCAAA GGTGGGACCC GTGGGGTGCG AGGGCCACAT GGACAGAGGC CGGCTCGGCC CACCCTCTGC CCTGAGAGTG ACCGCTGTAC CAACCTCTGT CCCTACAGGG CAGCCCCGAG AACCACAGGT GTACACCCTG CCCCCATCCG GGGAGQAGAT GAGCAAGAAC CAGGTCAGCC TGACCTGCCT GGTCAAAGGC TTCTATCCCA GCGACATCGC CGTGGAGTGO GAGAGCAATG GGCAGCCGGA GAACAACTAC AAGACCACGC CTCCCGTGCT GGACTCCGAC GGCTCCTTCT TCCTCTATAG CAAGCTCACC GTGGACAAGA GCAGGTGGCA GCftGGGGAAC GTCTTCTCAT GCTCCGTGAT GCATGAGGCT CTGCACAACC ACTACACGCA GAAGAGCCTC TCCCTGTCCC CGGGTAAATG AGTGCGACGG CCGGCAAGCC CCCGCTCCCC GGGCTCTCGC GGTCGCACGA GGATGCTTGG CACQTACCCC GTCTACATAC TTCCCAGGCA CCCAGCATGG AAATAAAGCA CCCACCACTG CCCTGGGCCC CTGCGAGACT GTGATGGTTC TTTCCACGGG TCAGQCCGAG TCTGAQGCCT GAGTGGCATG AGQGAGGCAG AGCGGGTCCC ACTGTCCCCA CACTGGCCCA GGCTGTGCAG GTGTGCCTGG GCCGCCTAGG GTGGGGCTCA QCCAGGGGCT GCCCTCGGCA GGGTGGGGGA TTTGCCAGCG TGQCCCTCCC TCCAGCAGCA GCTGCCCTGG GCTGQGCCAC GAGAAGCCCT AGGAGCCCCT GGGGACAGAC ACACAGCCCC TGCCTCTGTA GGAGACTGTC CTGTCCTGTG AGCGCCCTGT CCTCCGACCC CGATGCCCAC TCGGGGGCAT GCCTAGTCCA TGCGCGTAGG GACAGGCCCT CCCTCACCCA TCTACCCCCA CGGCACTAAC CCCTGGCAGC CCTGCCCAGC CTCGCACCCG CATGGGGACA CAACCGACTC CGGGGACATG CACTCTCGGG CCCTGTGGAG GGACTGGTGC AGATQCCCAC ACACACACTC AGCCCAQACC CGTTCAACAA ACCCCGCACT GAGGTTGGTC GAGCGGGAGT GCGGCCAGAG CCTGCCTCGG CCGTCAGGQA
96146.doc -119- 200521231 3201 3251 3301 3351 3401 3451 3501 3551 3601 3651 3701 3751 3801 3BS1 3901 3951 4001 4051 4101 4151 4201 4251 4301 4351 4401 4451 4501 45S1 4601 4651 4701 4751 4Θ01 4851 4901 4951 5001 5051 5101
GGACTCCCGG GCTCACTCGA AGGAGGTGCC ACCATTTCAG CTTTGGTAGC TTTTCTTCTT CTTTTAAATT TTCTAAAGCT CATTAATTGT CTTTGATGTT TCTTTTGTGA TGACAATAAA ATATCCTTTT TAAGTCTTGT ACTTCGTGAT GGGAGCCGCC TTCCTGTGTC CACGCGCCTC CTGCCCCCGG TGGGAAGCAC GGTCAGGAGG AOGCTGGTCC AGCTGCACCT CGOGGGCTCC CTGCACTCGC CCCCCGCCTC CTGCAGCCAC ACGCATTGCC CGAGCGACCC TCCCTGGCCC CTGTCACTAC ATGGACCCCT GGGGCTTCTC CTCTTTTCTA CATGGATGCA GTTTCTCCTC CTGCTGGGCA CGGTGCTGCC TGCCCTGGTC ACTCTGCGGG GGACAGGGCC TCCAGGGAAA GCTGGGTCGA GGCTGGGAGC TGGCTCAGGC TGGCCAGGCA GAGCCACAGG GAGGGCCTTC CAGAACCAAC CATGGTCCGA AGCGAGAGGT GGGTGTCAGA TCCAGACATG ATAAGATACA TTGATGAGTT TGGACAAACC ACAACTAGAA TGCAGTGAAA TTTGTGATGC TATTGCTTTA TTTGTAACCA GTTAACAACA ACAATTGCAT TCATTTTATG TTTCAGGTTC AGGGGGAGGT GTGGGAGGTT TTTTAAAGCA AGTAAAACCT CTACAAATGT GGTATGGCTG ATTATGATCT CTAGTCAAGG CACTATACAT CAAATATTCC TTATTAACCC CTTTACAAAT TAAAAAGCTA AAGGTACACA ATTTTTGAGC ATAGTTATTA ATAGCAGACA CTCTATOCCT GTOTGOAaTA AGAAAAAACA GTATGTTATQ ATTATAACTG TTATQCCTAC TTATAAAGGT TACAGAATAT TTTTCCATAA TTTTCTTGTA TAGCAGTGCA GCTTTTTCCT TTGTGGTGTA AATAGCAAAQ CAAGCAAGAG TTCTATTACT AAACACAGCA TGACTCAAAA AACTTAGCAA TTCTGAAGGA AAGTCCTTGG GGTCTTCTAC CTTTCTCTTC TTTTTTGGAG GAGTAGAATG TTGAGAQTCA GCAGTAGCCT CATCATCACT AGATOGCATT TCTTCTGAGC AAAACAGGTT TTCCTCATTA AAGGCATTCC ACCACTGCTC CCATTCATCA GTTCCATAGG TTGGAATCTA AAATACACAA ACAATTAGAA TCAGTAGTTT AACACATTAT ACACTTAAAA ATTTTATATT TACCTTAGAG CTTTAAATCT CTGTAGGTAQ TTTGTCCAAT TATQTCACAC CACAGAAGTA AGGTTCCTTC ACAAAGATCC GGACCAAAGC GGCCATCGTG CCTCCCCACT CCTGCAGTTC GGGGGCATGG ATGCGCGGAT AGCCGCTGCT GGTTTCCTGG ATGCCGACGG ATTTGCACTG CCGGTAGAAC TCCGCGAGGT CGTCCAGCCT CAGGCAGCAG CTGAACCAAC TCGCGAGGGG ATCGAGCCCG GGGTGGGCGA AGAACTCCAG CATGAGATCC CCGCGCTGGA GGATCATGCA GCCGGCGTCC TTCCGAAGCC CAACCTTTCA TAGAAGGCGG CGGTGGAATC GATGGCAGGT TGGGCGTCGC TTGGTCGGTC ATTTCGAACC CCAGAGTCCC GCTCAGAAGA ACTCGTCAAG AAGGCGATAG AAGGCGATGC GCTGCGAATC GGGAGCGGCG ATACCGTAWV GCACGAGGAA GCGGTCAGCC CATTCGCCGC CAAGCTCTTC AGCAATATCA CGGGTAGCCA ACGCTATGTC CTGATAGCGG TCCGCCACAC CCAGCCGGCC ACAGTCGATG AATCCAGAAA AGCGGCCATT TTCCACCATG ATATTCGGCA AGCAGGCATC GCCATGGGTC
AAAATGCTTT ATTTGTGAAA TTATAAGCTG CAATAAACAA
CGGAAAACGA GAAATCTCGT 96146.doc -120- 200521231 5151 5201 5251 5301 5351 5401 5451 5501 5551 5601 S651 5701 S751 5801 5851 5901 5951 6001 6051 6101 6151 6201 6251 6301 €351 6401 6451 6501 6551 6601 6651 6701 6751 6B01 6851 6901 6951 7001
TAGCCTCTCC CAATCATGCG
ACGACGAGAT CCTCGCCGTC GGGCATGCGG GCCTTQAGCC TGGCGAACAG TTCGGCTGGC GCGAGCCCCT GATGCTCTTC GTCCAGATCA TCCTGATCGA CAAGACCGGC TTGCATCCGA GTACGTGCTC GCTCGATGCG ATGTTTCGCT TGGTGGTCGA ATGGGCAGGT AGCCGGATCA AGCGTATGCA GCCGCCGCAT TGCATCAGCC ATGATGGATA CTTTCTCGGC AGGAGCAAGG TGAGATGACA GGAGATCCTG CCCCGGCACT TCGCCCAATA GCAGCCAGTC CCTTCCCGCT TCAGTGACAA CGTCGAGCAC AGCTGCGCAA GGAACGCCCG TCGTGGCCAG CCACGATAGC CGCGCTGCCT CGTCCTGCAG TTCATTCAGG GCACCGGACA GGTCGGTCTT GACAAAAAGA ACCGGGCGCC CCTGCGCTGA CAGCCGGAAC ACGGCGGCAT CAGAGCAGCC GATTGTCTGT TGTGCCCAGT CATAOCCGAA ACCCAAGCQG CCGGAGAACC TGCGTGCAAT CCATCTTGTT AAACGATCCT CATCCTGTCT CTTGATCAGA TCTTGATCCC CTGCGCCATC AGATCCTTGG C6GCAAGAAA GCCATCCAGT TTACTTTGCA GGGCTTCCCA ACCTTACCAG AGGGCGCCCC AGCTGGCAAT TCCGGTTCGC TTGCTGTCCA TAAAACCGCC CAGTCTAGCT ATCGCCATGT AAGCCCACTG CAAGCTACCT GCTTTCTCTT TGCGCTTGCG TTTTCCCTTG TCCAGATAGC CCAGTAGCTG ACATTCATCC GGGOTCAGCA CCGTTTCTGC GGACTGGCTT TCTACGTGTT CCGCTTCCTT TAGCAGCCCT TGCGCCCTGA GTGCTTGCGG CAGCGTGAAG CTTTTTGCAA AAGCCTAGGC CTCCAAAAAA GCCTCCTCAC TACTTCTGGA ATAGCTCAGA GGCCGAGGCG GCCTCGGCCT CTGCATAAAT AAAAAAAATT AGTCAGCCAT GGGGCGGAGA ATGGGCGGAA CTGGGCGGAG TTAGGGGCGG GATGGGCGGA GTTAGGGGCG GGACTATGGT TGCTGACTAA TTGAGATGCA TGCTTTGCAT ACTTCTGCCT GCTGGGGAGC CTGGGGACTT TCCACACCTG GTTGCTGACT AATTGAGATG CATGCTTTGC ATACTTCTGC CTGCTGGGGA GCCTGGQGAC TTTCCACACC CTAACTGACA CACATTCCAC AGCTGCCTCG CGCGTTTCGG TGATGACGGT GAAAACCTCT GACACATGCA GCTCCCGGAG ACGGTCACAG CTTGTCTGTA AGCGGATGCC GGGAGCAGAC AAGCCCGTCA GGGCGCGTCA GCGGGTGTTG GCGGGTGTCG GGGCGCAGCC ATGACCCAGT CACGTAGCGA TAGCGGAGTG TATACTGGCT TAACTATGCG GCATCAGAGC AGATTGTACT GAGAGTGCAC CATATGCGGT GTGAAATACC GCACAGATGC GTAAGGAGAA AATACCGCAT CAGGCGCTCT TCCGCTTCCT CGCTCACTGA CTCGCTGCGC TCGGTCGTTC GGCTGCGGCG AGCGGTATCA GCTCACTCAA AGGCGGTAAT ACGGTTATCC ACAGAATCAG GGGATAACGC AGGAAAGAAC ATGTGAGCAA AAGGCCAGCA AAAGGCCAGG AACCGTAAAA AGGCCGCGTT GCTGGCGTTT TTCCATAGGC TCCGCCCCCC TGACGAGCAT CACAAAAATC GACGCTCAAG TCAGAGGTGG CGAAACCCGA CAGGACTATA AAGATACCAG GCGTTTCCCC CTGGAAGCTC CCTCGTGCGC TCTCCTGTTC CGACCCTGCC GCTTACCGGA TACCTGTCCG CCTTTCTCCC TTCGGGAAGC 96146.doc -121 - 200521231 7051 7101 7151 7201 7251 7301 7351 7401 7451 7501 7551 7601 7651 7701 7751 7801 7851 7901 7951 8001 80S1 8101 B151 8201 8251 8301 8351 8401 8451 8501 8551 8601 8651 8701 8751 8801 8851
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CGTTCGCTCC
GCTGCGCCTT
GACTTATCGC
GTATGTAGGC
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TTCGGAAAAA
TAGCGGTGGT
GATCTCAAGA
AACGAAAACT
CTTCACCTAG
GTATATATGA
GCACCTATCT
CCCCGTCGTG
GTGCTGCAAT
GCAATAAACC
TTTATCCGCC
GTAGTTCGCC
ATCGTGGTGT
CCAACGATCA
TTAGCTCCTT
TTATCACTCA
ATCCGTAAGA
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GTTCGATGTA
TTCACCAGCG
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TTCAATATTA
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TAACCTATAA
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CTCATAGCTC
AAGCTGGGCT
ATCCGGTAAC
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GACAGTATTT
GAGTTGGTAG
TTTTTTGTTT
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ATCCTTTTAA
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TAGATAACTA
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GTATTTAGAA
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TCTGGCCCCA
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GACCCACGCT CACCGGCTCC AGATTTATCA AAGGGCCGAG CGCAGAAGTG GTCCTGCAAC CTATTAATTG TTGCCGGGAA GCTAGAGTAA TTGC6CAACG TTGTTGCCAT TGCTGCAGGC GTTTGGTATG GCTTCATTCA GCTCCGGTTC CATGATCCCC CATGTTGTGC AAAAAAGCGG ATCGTTGTGA GAAGTAAGTT GGCCGCAGTG AGCACTGCAT AATTCTCTTA CTGTCATGCC TGACTGGTGA GTACTCAACC AAGTCATTCT CCGAGTTGCT CTTGCCCGGC GTCAACACGG CAGAACTTTA AAAGTGCTCA TCATTGGAAA TCTCAAGGAT CTTACCGCTG TTGAGATCCA GCACCCAACT GATCTTCAGC ATCTTTTACT AGCAAAAACA GGAAGGCAAA ATGCCGCAAA GGAAATGTTG AATACTCATA CTCTTCCTTT TATCAGGGTT ATTGTCTCAT GAGCGGATAC AAATAAACAA ATAGGGGTTC CGCGCACATT ACGTCTAAGA AACCATTATT ATCATGACAT ATCACGAGGC CCTTTCGTCT TCAAGAATTC AAAAAGCATG CCTGCCACAC AACATCAATT ATTATTTCTA GTAGAACAGC TCTTTGGTTT
96146.doc -122- 200521231
8901 AGTTTTACGA TTTCATCTTT TTCCAAGTTG AAATCATAGG GTGGCTTTAA 8951 CACAGTGACA AGGAATGTGC ATGCTGCCAT TATGGTGCTC TGCCTAAAAT 9001 GGTTGGAGCC TTGTCATGCT ACAGAGAAAC TGTCATACAG CAGGGGGTGC 9051 CAAATTTCCA TATTTTTTTA TATCATTGAG CAGGTGCACA GAAGACCAGA 9101 AAGCACTTTC TATCAGGCTG GCCTTCCTCT TCCTTTCCAG TATGAAGCAA 9151 AAACTGCCAA TGAAACTAGC AATTGTTAAA TTCCTTTTTC AAACAGTATT 9201 TGTGCTATCA GAACATAGTG CATTCAAAAG TCTAGCCTGA GAGAACAACC 9251 CAGTTTTATT CATTCCTCCT ACTACCTCTC TCATTCCCAC TGTTTGTGTT 9301 CTCCCTCCCA TTTTAATTGT CTATCTAGTC CAAACTAAGC ACACGATCCA 9351 GTCCACATTA AACAACATGT TTTCACTTTA AGTCAfiATAC AAGACACCTT 9401 TAATATCAGC CCTTGTTCAT AATCGTGCTT CTAGTGACTT AATGTACATG 9451 TCACACTGTA CTGTTGGGTT TTGTGTCTCA TCATGAACAA TGTTGTGAAG 9501 GTATTAACTG GAGAGTAAGC AGAATTAGAT TCCTCTAATG ATGCACACCC 9551 ACACTAAGAG CAGAAATAAT ATTAAAAATA GAAAAAAAAG TTTTACATGA 9601 9651 GATTTCAAAT ACCCAGGTAT GAGCTGCAGT TTCTTCAAGT TAAAGCATCG AGGTTGTCAG TTACACTATT ACAGGAAACA TATGCAGAGT TTTTATTTTA 9701 9751 GTATATTAGT TTTCACATAT GTGGAATTAC TATTAAACTA TTCTTTCTTT TCAAATGCTT ACCATTGTAA ATGAGTTTGT GACTTTGTGT AGGTGAGTGC 9801 ACATGACTCT GGATGCCTAA GAGGACTGAA GAAGTTGGAG TTATAGGTAG 9851 TTTTATTCTA CTTGACTGTT CAGTGCTAAA AATACAACTG AGGTCCTTTA 9901 AACTGCTGTT CATGAACTTC TTAATTGATA TATCTCATGA GATCTCTAAA 9951 CTATTTTTAT TATGACACGT TTCACCATTT TCACTGTAAC GATTTTTATG 10001 TTTTATATTA ATGTAACTAT ATGACACTTC CCAAAATCCC CATATTCACA 10051 ATTGAACTGT TTCAAAGTTT TACCTTGACT TATGGGAAAT GAAAACCCAC 10101 ATTTTATAAT TTTAAAATGA AATGTTTATT TTATATTTCT GCAAATTTCA 10151 CAAGGAAAGA TTAGTCACTG GTGTGTGAGA GCAGAGGAGC ATAAGAGTTC 10201 AGGAATAGAA TCCATTATGA TTCTGGAGGC AAGGAAGAAC TGATGCCAAG 10251 GTTTCAGTAT AAGAGCAGTA TCCACTGGAA AGGATAAAGT CACTACATCT 10301 GAGCACAGAG CAGGACATCT ACATAATGAG TGGTCACTAA TGGGCCACTG 10351 TTACACTGTT ATATGTATAA GGCTCAAGAA TGAGCACTGA GGCTGTAAGG 10401 TGTATQGaTG AGGACATCAG GATGTAAACC CAGCTCAGGT AGAGGACTCA 10451 GAGGACAGCA CAGTCAGCAT GAACTAATAA ACATCAGATA AGATAAGGCA 10501 CAAGCTCAGC TATATAGGGT AAGGGATCTT TGTAAATCTG ATTGTGCATC 10551 CAGTCTAGTT CAATGTGACT TAGGAAGCCC AGTCATATGC AAATCTAGAG 10601 AAGACTTTAG AGTAGAAATC TGAGGCTCAC CTCACATACC AGCAAGCGAG 10651 TGACCAGTTA GTCTTAAGGC ACCACTTCTT AGACATCATG GCTTGGGTGT 96146.doc -123 - 200521231
10701 GGACCTTGCC ATTCCTGATG GCAGCTGCCC AAAGTAAGAC ATCAGAAAAA 10751 AGAGTTCCAA GGGGAATTGA AGCAGTTCCA TGAATACTCA CCTTCCTGTG 10801 TTCTTTTCAC AGGTGTCCAG GCACAGGTGC AGCTGGTGGA GTCAGGAGCC 10851 GAAGTGAAAA AGCCTGGGGC TTCAGTGAAG GTGTCCTGCA AGOCCTCTGG 10901 ATACACATTC ACTAATTATA TTATCCACTG GGT0AA0CAG GAGCCTGGTC 109S1 AGGGCCTTGA ATGGATTGGA TATTTTAATC CTTACAATCA TGGTACTAAG 11001 TACAATGAGA AGTTCAAAGG CAGGGCCACA CTAACTGCAA ACAAATCCAT 11051 CAGCACAGCC TACATGGAGC TCAGCAGCCT GCGCTCTGAG OACACTGCGG 11101 TCTACTACTG TGCAAGATCA GGACCCTATG CCTGGTTTGA CACCTGGGGC 11151 CAAGGGACCA CGGTCACCGT CTCCTCAGGT AAGAATGGCC ACTCTAGGGC 112 01 CTTTGTTTTC TGCTGCTGCC TGTGGGATTT CATGAGCATT GCAAAGTTGT 11251 CCTCGGGACA TGTTCCGAGG GGACCTGGGC GGACTGGCCA GGAGGGGACG 113 01 GGCACTGGGG TGCCTTGAGG ATCTGGGAGC CTCTGTGGAT TTTCCGATGC 11351 CTTTGGAAAA TGGGACTGAG GTTGGGTGCG TCTGAGACAG TAACTCAGCC 11401 TGGGGGCTTG GTGAAGATCG CCGCACAGCA GCGAGTCCGT GAAATATCTT 11451 ATTTAGACTT GTGAGGTGCG CTGTGTGTCA ATTTACATCT TAAATCCTTT 11501 ATTGGCTGGA AAGAGAATTG TTGGAGTGGG TGAATCCAGC CAGGAGGGAC 11551 GCGGGGGGAT CCA 實例9 : CD45RO/RB結合人化抗體之試管内功效 VHE/humVl 及 VHQ/humVl 為了決定CD45RO/RB結合人化抗體VHE/humVl及 VHQ/humVl比較嵌合抗體之功效，分析其降低人類T細胞 中細胞凋亡的能力與抑制T細胞增殖的能力。 細胞及試劑 周邊血液單核細胞（PBMC，peripheral blood mononuclear cell)係由已知血型但不知HLA型之健康人類捐贈者的白細 胞去除術樣品藉聚蔗糖-泛影葡胺 (Ficoll-Hypaque)(PharmaciaLKB)離心而分離。首先將使用 作為刺激細胞的PBMC藉利用CD3-塗佈的鐵磁珠（Miltenyi) 去除T及NK細胞。藉由磁場將珠子及污染的細胞移除。使 用消除T細胞的PBMC作為照射（50 Gy)後的刺激細胞。使用 -124- 96146.doc 200521231 CD4+T細胞作為MLR中之反應細胞並以CD4+T細胞負選擇 套組（Miltenyi)自PBMC分離。 將得到的細胞由 FACScan 或 FACSCalibur(Becton Dickinson & Co·，CA)分析，得到的細胞之純度為>75%。將 細胞懸浮於RPMI1640培養基，補充10%加熱去活化的 FCS、青黴素、鏈黴素及L-麩胺醯胺。 細胞凋亡分析 將三個健康自願捐贈者的人類PBMC在CD45R0/RB結合 嵌合 mAb、人化抗體（VHE/humVl 及 VHQ/humVl)或抗-LPS 控制組mAb存在中培養於生長培養基（RPMI1640 +10%FCS) 隔夜（<16小時）。若指出，包含交聯試劑（羊-抗人IgG的 FUb}片段（目錄編號109-006-098，JacksonLab))以微克/毫 升濃度為如樣品的抗-CD45抗體濃度兩倍高。由抗體試劑導 入的各孔中的PBS-濃度於所有樣品中保持固定，即於無交 聯劑的樣品為20%(v/v)或有交聯劑的樣品為40%(v/v)。較早 的實驗證實PBS的量不影響結果。 在抗體存在中培養隔夜後，使樣品經過流式細胞儀分析 並以細胞凋亡標記AnnexinV-FITC(目錄編號556419, BD/Pharmingen)及 T 細胞標記 CD2-PE(目錄編號 556609, BD/Pharmingen)染色。將樣品於 Becton Dickinson FACSCalibur儀器運轉並利用CellQuest Pro軟體將資料分 析。 由收集的資料，利用軟體Origin V7.0300套配曲線。用於 套配的方程式為 96146.doc -125- 200521231 一 A\ — Αι y^TTr 7~T7 + A2 . 1 + (x!x〇) (’’雙弯曲_邏輯·’） A1 :最末值（為套配部分設成”共享，，及，，浮動，，） A2 :起始值（為套配部分設成”共享"及，，浮動，，） P :次方 X〇 : ED5〇 ; IC5G(見下）。 無交聯劑存在下，VHE/humvl為最有效，其ED5。值為148 ±71 nM，其後為 VHQ/humV1，其 ΕΕ>5〇 值為 。 CD45RO/RB結合嵌合抗體為較不有效，其EDs〇值為土 1205 nM 〇 在交聯抗血清存在下，ED^值大幅移動至少兩位數大小 之更高功效。此外，交聯劑的存在允許於極高抗體濃度下 更咼$細胞凋亡，現高達80%，而無交聯劑的存在僅允許 最多50%細胞阔亡。在交聯劑的存在中，曲線（抗體濃度/% 細胞祠亡）為具有兩個高原的雙峰：第一個高原於低抗體濃 度（〜5 nM)到達，於此細胞凋亡程度相當於在無交聯劑存在 中得到的最大程度。第二個高原於高抗體濃度（〜5〇〇nM)到 達’於70-80% T細胞總數觀察到細胞凋亡。 關於在初生人類T細胞中引發細胞凋亡的能力，兩者 CD45RO/RB結合人化mAb皆等效及相較於CD45RO/RB結 合嵌合mAb更佳或相等。 混合淋巴球反應分析 將 ΙχΙΟ5個 PBMC 或 5xl04個 CD4+細胞與 ΐχΐ〇5個或 5χ104 96146.doc -126- 200521231 個T細胞消除的照射後（50 Gy)PBMC在不同濃度mAb存在 下或不存在下混合於96孔培養盤的各孔中。 將混合的細胞培養5天並由以3H-胸腺嘧啶刺激細胞於培 養的最後16-20小時而決定增殖。將各抗體濃度之MLR抑制 表示為抑制百分比，如實例2中所述。 增加VHE/humV1及VHQ/hum V1濃度於MLR的效果係於 三組反應細胞：刺激細胞組合中評估。所有抗體以劑量相 關方式抑制MLR。IC5〇值（見上）對人化Ab VHE/humVl(7±7 nM)及VHQ/humVl(39±54 nM)為類似。兩種人化抗體於抑 制MLR比母嵌合抗體（IC5〇為347±434 nM)更有效。如MLR 實驗通常見到，捐贈者變化性於此等實驗中為高。 VHE-N73D/humVl 為了說明VHE-N73D/humVl之生物功效，包括於人類周 邊血液單核細胞（PBMC，peripheral blood mononuclear cell) 中之細胞凋亡，將目標PBMC在不同濃度VHE-N73D/humVl 存在中培養隔夜及隨後藉流式細胞儀分析法分析細胞凋亡 標記AnnexinV之結合：將人類PBMC於1毫升含不同濃度 VHE-N73D/humVl、或另一人化CD45RO/RB結合分子變 體、VHE/humVl、或嵌合抗-CD45RO/RB mAb或同種型 IgGl 控制組mAb之組織培養培養基中培養隔夜。此外，將交聯 羊-抗人Ig Fc的F(aiy)2片段以2x各mAb整體濃度加入，模擬 由Fc受體交聯CD45RO/RB結合分子，其可於活體内發生。 於第二天，藉於400倍標準重力（g)離心10分鐘將細胞清洗並 將培養基去除。將細胞重新懸浮於FACS緩衝液（含1% v/v 96146.doc • 127· 200521231 FBS、0.1% w/v EDTA及0.1% w/v疊氮化鈉之PBS)並以每孔 lxl 05個細胞之細胞密度植入96孔V形底微量滴定盤内。將 各細胞樣品於50微升含100微克/毫升正常小鼠血清之FACS 緩衝液在4°C培養30分鐘以阻斷細胞上非專一結合位置及 以藻紅素（PE，phycoerythrin)連結的CD2以確認人類T細 胞。藉離心清洗兩次後，將細胞重新懸浮於100微升含1 : 100 v/v FITC-標記的AnnexinV之含弼AnnexinV•染色緩衝 液（賣主BD/Pharmingen套組556419)中。於室溫黑暗中培養 15分鐘後，加入7-胺基放線菌素D(7_AAD，7-amin〇 actinomycin D)以得到最終濃度1微克/毫升並利用 FACSCalibur流式細胞儀（Becton Dickinson)分析。可由分析 引發的細胞凋亡量（=AnnexinV-FITC螢光的強度）為抗體濃 度之函數，利用軟體Origin 7.5以雙彎曲-邏輯曲線符合方程 式計算抗體引發細胞凋亡功效之ED5G值。 於此分析中，觀察到所有受測的CD45RO/RB結合分子之 兩相效果：於抗體之低濃度，發現小於30%之低程度τ細 胞凋亡。計算VHE-N73D/humVl達到此程度細胞祠亡之 ED”值為0·31±0·13 nM。於抗體之較高濃度，可將細胞〉周亡 引發於高達70% T細胞。計算VHE-N73D/humVl達到此較高 細胞凋亡程度之EDw值為352 ± 83 nM。總之，發現 VHE-N73D/humVl也引發人類T細胞的細胞凋亡，其可由交 聯增強。 實例10 : CD45RB/RO結合分子之專一性 嵌合CD45RO/RB結合分子 96146.doc -128 - 200521231 CD45分子表現於戶斤有白血球上。然而，不同CD45同分異 構物由不同白血球亞群表現。為了決定CD45RB/RO結合嵌 合抗體分子之白血球亞群反應性，進行以亞群專一性標記 之人類白血球免疫螢光標記及同時以染劑結合的 CD45RB/RO結合嵌合抗體免疫螢光標記，隨後以流式細胞 儀分析。 簡而言之，藉由與藻紅素-偶合的抗體針對CD2(T淋巴 球）、CD14(單核球）、CD19(B淋巴球）、CD34(幹細胞）、 CD42a(血小板）、CD56(自然殺手細胞）或CD66b(顆粒球）培 養而確認人類周邊血液單核細胞（PBMC，peripheral blood mononuclear cell)、人類血小板、人類周邊血液嗜中性白血 球（neutrophils)或人類骨趙衍生的造血幹細胞之新鮮分離 製品特定的亞群。偵測到同時結合FITC-標記的嵌合 CD45RB/RO結合分子於T淋巴球、單核球、幹細胞、自然 殺手細胞及顆粒球，但不於血小板或B淋巴球上。 VHE-N73D/humVl 為了決定VHE-N73D/himiVl之白血球亞群反應性，進行 以亞群專一性標記之人類白血球免疫螢光標記及同時以染 劑結合的VHE-N73D/humVl免疫螢光標記，隨後以流式細 胞儀分析。 簡而言之，藉由與藻紅素-偶合的抗體針對CD3、CD4、 CD8(T淋巴球）、CD14(單核球）、CD16(自然殺手細胞及單 核球）、CD19(B淋巴球）或CD66b(顆粒球）培養而確認人類周 邊血液單核細胞（PBMC，peripheral blood mononuclear cell) 96146.doc -129- 200521231 或人類周邊血液嗜中性白血球之新鮮分離製品特定的亞 群。偵測到同時結合FITC-標記的VHE-N73D/hinnVl於T淋 巴球、單核球、自然殺手細胞及顆粒球上，但不於B淋巴球 上。因此，VHE-N73D/humVl分子不與人類B淋巴球反應。 實例11 :試管内引發抑制性T細胞（T調控細胞）及功能性癱 瘓的T細胞 為了證實CD45RO/RB結合嵌合抗體引發抑制性T細胞的 能力，將抗體於與抗原流行感冒嗜血桿菌之基質蛋白1(MP1) 反應的CD8+T細胞株產生期間以不同濃度加入。經由反覆 共同培養CD8 +人類淋巴細胞與CD 14 +人類單核球並以抗原 脈衝將此等細胞株產生。之後，可將CD14 +單核球以人類 淋巴細胞抗原-2陽性細胞株取代作為MP1抗原呈現細胞 (APC，antigen-presenting cell)。若將來自含有 CD45RO/RB 結合嵌合抗體之培養物的此MP-1專一的CD8+T細胞與新鮮 分離的人類CD8+T細胞混合並將此細胞混合物以於APC上 的MP1抗原刺激，加入來自培養於CD45RO/RB結合分子存 在之CD8+T細胞能夠以抗體劑量相關的方式降低IFN- τ製 造。於此IFN-r分析培養期間無CD45RO/RB結合嵌合抗體 存在，代表以CD45RO/RB mAb預先處理已引發能夠抑制新 鮮分離的T細胞活化之CD8+T細胞。因為由CD45RO/RB結 合嵌合抗體引發抑制細胞T調控細胞，抗體可能有用於疾 病，其失調及/或活化的T細胞族群被視為促成病理。此疾 病之實例包括自體免疫疾病、移植排斥、牛皮癖、皮膚炎、 發炎性腸道疾病及過敏症。 96146.doc -130- 200521231 為了證實嵌合CD45RO/RB結合分子使得T細胞對進一步 刺激低反應（無變應性）（即功能上癱瘓Τ細胞）的能力，如上 述將抗體於與流行感冒嗜血桿菌之抗原基質蛋白1(ΜΡ1)反 應的CD8+T細胞株產生期間加入。藉以由APC呈現的MP1 抗原活化T細胞（先前暴露至CD45RO/RB結合嵌合抗體）將 癱瘓評估。無CD45RO/RB結合分子存在於此培養物中。先 前未暴露至CD45RO/RB結合嵌合抗體之CD8+T細胞在提到 的刺激時製造IFN-r。相反地，以CD45RO/RB結合嵌合抗 體預先處理的CD8+T細胞反應抗原刺激顯示顯著降低至不 存在製造此細胞激素，證實CD45RO/RB結合嵌合抗體功能 上癱瘓人類T細胞的能力。因為由CD45RO/RB結合分子引 發功能性T細胞低反應性，可使用抗體於疾病，如自體免疫 疾病、移植排斥、牛皮癣、皮膚炎、發炎性腸道疾病或過 敏症，其活化的T細胞族群被視為促成病理。 實例12 :活體内研究於SCID-hu皮膚小鼠 利用SCID小鼠測試CD45RB/RO結合嵌合抗體於皮膚發 炎的醫療益處。將來自正常個體之人類皮膚移植至SCID小 鼠（SCID-hu皮膚）並藉過繼性轉移（adoptive transfer)分離自 人類個體無關於人類皮膚捐贈者的單核淋巴細胞模擬發炎 過程。 移植人類成人皮膚於SCID小鼠（SCID-hii皮膚小鼠） 將兩小片（1平方公分）由整個表皮、皮膚乳突層（papillary dermis)及部分網狀真皮（Reticular Dermis)組成的人類成人 皮膚（得自西方匈牙利區域組織銀行；WHRTB，West 96146.doc -131 - 200521231
Hungarian Regional Tissue Bank, Gyor)轉植於 SCID 小鼠 C.B17/GbmsTac-PrkdcscldLystbg 小鼠（Taconic，Germantown， NY)之右及左上背側取代小鼠皮膚。於移植後5-6週期間監 測移殖的品質並將成功移植的小鼠（SCID_hu皮膚小鼠，一 般>8 5%)選擇於CD45RB/RO結合嵌合抗體之活體内測試。 SCID小鼠中人類單核細胞之移植 在細胞懸浮（利用裝設有大小50目之細胞分離篩）及標準 密度梯度程序自人類成人脾切片（WHRTB，Gyor)將單核白 血球（Spl)分離。將約5xl08個Spl部分重新懸浮於1.5毫升 RPMI-10% FCS並於實驗第0天腹膜内注射（i.p·)進入 SCID-hu皮膚小鼠。於先前實驗已發現此等Spl數量足以於 細胞轉移後4-6週内於>90%小鼠引發致命異種-GvHD。 SCID-hu皮膚小鼠之抗體處理 於第0天（單核細胞注射後立即）、其後的第3及第7天及每 週間隔以CD45RB/RO結合嵌合抗體或以抗LPS控制組mAb 處理人類Spl重組的SCID-hu皮膚小鼠。將抗體以1毫克/公 斤體重（b.w.)之最終濃度於100微升PBS中皮下（s.c.)傳遞。 抗-CD45處理之評估 由移植的小鼠之存活及藉由監測皮膚移植的排斥評估 CD45RB/RO結合嵌合抗體的功效。結果之顯著性係由利用 對數秩檢驗（Log-rank test)(Mantel法）與Systat vlO軟體之助 以存活分析之統計方法評估。在實驗終了時，將人類皮膚 移植及小鼠肝、肺、腎及脾的切片由死鼠取出以作組織學 用途。一開始（細胞轉移前）及實驗全程（每兩天）將所有小鼠 96146.doc -132- 200521231 评重作為其健康狀態的間接估計。利用來自各鼠得到的體 重對PBMC轉移後天數值產生線性回歸直線及隨後利用非 參數曼惠二氏檢定法（Mann. Whitney㈣將其斜率（控制組 對抗-CD45處理的小鼠；)比較。 結果 人類皮膚移植受SCID小鼠非常良好耐受。起初，移植經 歷一段角質細胞（keratinocyte)過度增殖造成形成角化過度 痂。移植後約5週，痂脫離移植物並顯露含有所有於正常人 類細胞中觀察的特性結構之組織。於此過程期間，人類皮 膚移植物與相鄰小鼠皮膚融合並產生新生長的人類血管網 路連接移植物與下方的小鼠組織。轉移入SCID_hu皮膚小鼠 之循環的人類Spl(於實驗第〇天，皮膚移植後大約6週）滲透 皮膚移植物及在辨識表現於人類皮膚上的異體抗原分子後 發動發炎反應，其相像於發生在牛皮癬皮膚中皮膚發炎過 程’及於某些情況中完全破壞移植物。 以CD45RB/RO結合嵌合抗體處理此等小鼠抑制發炎過程 及避免人類皮膚移植的排斥。相反地，由控制組處理的小 鼠得到的樣品顯示大量滲入壞疽及劇烈破壞表皮之多重症 候。此過程由眼睛輕易地監測及由鼠的簡單照相紀錄。 六隻SCID-hu皮膚小鼠用異體抗原人類spi轉移及用控制 組抗-LPS mAb處理，六隻於單核細胞轉移後23天皆顯示強 烈發炎反應，清楚地由眼睛可見。所有小鼠顯示相當程度 的損害，包括紅斑、鱗及明顯的膿包。相反地，以CD45RB/RO 結合散合抗體處理的所有小鼠之皮膚移植有正常外觀。兩 96146.doc -133- 200521231 群小鼠之間的劇烈差異明確地為由於抗體處理，因為所有 小鼠之人類皮膚在實驗開始時皆有一致的外觀。此點不變 直到細胞轉移後第二週，此時控制組群開始發生損害。於 早核細胞轉移後3 4天將實驗終止。於此之前，一隻控制組 小鼠已死亡（第30天）及將四隻其他小鼠殺死（第27、27、27 及30天）因為嚴重異體-GvIiD。於抗體控制組處理的小鼠中 觀察的病理反應也與此等動物的重量減輕相關聯。 相反地，CD45RB/RO結合嵌合抗體處理的族群於整個實 驗時間期間顯示健康狀態。 實例13 :人類胰島細胞移植模型中CD45RB/RO結合嵌合抗 體之活體内活性 小鼠 將 NOD/SCID雌小鼠（Charles River Laboratories，Calco
Italy)保持於特定無病原體條件下。利用血糖儀（Gluc〇meter Elite)系統（Bayer，Germany)定量靜脈尾巴血液中的葡萄糖 濃度。藉由靜脈内注射180毫克/公斤鏈氮菌素 (streptozotocin)(Sigma，St.Luis，MO)於NOD/SCID小鼠中引 發糖尿病。於兩次連續葡萄糖測量超過250 mg/dl後做出糖 尿病的診斷。 胰島製備及移植 騰得自心跳屍多器官捐贈者。胰島係根據如說明於
Bertuzzi等人，Diabetes，！999, 48:1971-8 中的方法分離。將 純化的胰島培養於含25毫升補充10% FCS、1%L-麵胺酿 胺、1〇〇單位/毫升青黴素及100微克/毫升鏈黴素之Mi99培 96146.doc -134- 200521231 養基（Seromed Biochrom，Berlin，Germany)(完整培養基）之 無菌瓶中。將胰島於30°C於5% C02及95%潮濕空氣中培 養。將小鼠用腹膜内注射阿費丁（avertin)而麻醉及將1500 IE之人類胰島移植於受體糖尿病NOD/SCID小鼠之腎囊下 方，如0&¥&111八.1^.等人01&匕6163，1996,45:1161-7 中所述。 移植後，將50 xlO6個新鮮分離的PBMC腹膜内注射至 NOD/SCID小鼠。 移植小鼠之處理 將Hu-PBL-NOD/SCID移植的小鼠於第0、+3及+5天s.c·處 理1 mg/kg CD45RB/RO結合嵌合抗體。控制組小鼠以鹽水 溶液或以 IgG純化的 mAb(Vinci· Biochem，Italy)處理0 組織學分析 將含友人胰島移植物的腎極急速冷束於Tissue Tek(Miles Lab·，IN)並儲存於-70〇C。將5微米厚冷凍切片用生物素標記 的抗人類胰島素或人類CD3 mAb隨後以鏈霉親和素 (Streptavidin)過氧化物酶共輛物染色。使用二胺基聯苯胺 (DAKO，Carpenteria，CA)作為發色體及蘇木精（hematoxilin) 作為對比染劑。移植物的淋巴球滲入係基於蘇木精及曙紅 染色的冷;東切片而評估。 結果 移植人類胰島之正常NOD/SCID小鼠於移植後100天仍保 持正常血糖，而以人類胰島移植的hu-PBL-NOD/SCID小鼠 之平均排斥時間為35±13天。以本發明mAb短暫處理以人類 胰島移植的hu-PBL-NOD/SCID小鼠顯著延長人類胰島存 96146.doc • 135 - 200521231 活，其於移植後第60天存活率>70%及於第100天為50%。 於hu-PBL-NOD/SCID小鼠中於移植後100天進行人類胰 島移植物的組織學分析顯示於控制組接受體小鼠中大量滲 入CD3 +、CD4+及CD8 +陽性T細胞。相反地，於以CD45RB/RO 結合嵌合抗體處理的接受體小鼠中觀察到顯著較少滲入人 類細胞。相較於控制組接受體小鼠，胰島素的正染色證實 以CD45RB/RO結合嵌合抗體處理的hu-PBL-NOD/SCID接 受體小鼠中移植物功能。於胰島移植及以CD45RB/RO結合 嵌合抗體處理的hu-PBL-NOD/SCID小鼠中相較於控制組接 受體小鼠於血清中偵測到較少量人類IFN- 7。 此等資料顯示短期處理CD45RB/RO結合嵌合抗體藉由避 免移植物滲透及藉由於活體内抑制淋巴細胞調節的排斥反 應導致延長人類胰島異體移植存活。 【圖式簡單說明】 圖1顯示由π候選mAbn抑制原發性MLR於0.001及10微克/ 毫升之範圍内為劑量相關。”濃度”為”候選mAb”的濃度。 圖2顯示表現載體HCMV-G1 HuA6-VHQ之質體圖，包含 具有核苷酸序列SEQ ID NO: 12(3921-4274)之重鏈於完整表 現載體核苷酸序列SEQ ID NO: 15中。 圖3顯示表現載體HCMV-G1 HuA6-VHE之質體圖，包含 具有核苷酸序列SEQ ID NO: 11 (392 1-4274)之重鏈於完整表 現載體核苷酸序列SEQIDNO:16中。 圖4顯示表現載體HCMV-K HuAb-VLl humVl之質體圖， 包含具有核苷酸序列SEQ ID NO: 14(3964-4284)之輕鏈於完 96146.doc -136- 200521231 整表現載體核苷酸序列SEQIDNO:17中。 圖5顯示表現載體HCMV-K HuAb-VLl humV2之質體圖， 包含具有核苷酸序列SEQ ID NO: 13(3926-4246)之輕鏈於完 整表現載體核苷酸序列SEQIDNO:18中。 圖6顯示表現載體LCVL1SP20之質體圖，包含具有核苷酸 序列SEQ ID NO:33之輕鏈於完整表現載體核苷酸序列SEQ ID NO:36 中。 圖7顯示表現載體LCVL2SP20之質體圖，包含具有核苷酸 序列SEQ ID NO:13之輕鏈於完整表現載體核苷酸序列SEQ ID NO:39 中。 圖8顯示表現載體HCVHEN73DSp20之質體圖，包含具有 核苷酸序列SEQ ID NO:34之重鏈於完整表現載體核苷酸序 列 SEQ ID NO:37 中。 圖9顯示表現載體HCVHQN73DSp20之質體圖，包含具有 核苷酸序列SEQ ID NO:3 5之重鏈於完整表現載體核苷酸序 列 SEQ ID NO:38 中。 圖10顯示表現載體HCVHESp20之質體圖，包含具有核苷 酸序列SEQ ID NO: 11之重鏈於完整表現載體核苷酸序列 SEQ ID NO:40 中。 圖11顯示表現載體HCVHQSp20之質體圖，包含具有核苷 酸序列SEQ ID NO: 12之重鏈於完整表現載體核苷酸序列 SEQ ID NO:41 中。 圖 12 顯示 VHE/humVl、VHE/humV2、VHQ/humVl 及 VHQ/humV2之大小排阻層析（size exclusion chromatography) 96146.doc -137- 200521231 分析，及 VHE/humVl 與 VHE-N73D/humVl— 起之分析。 圖 13 顯示 VHE/humV2、VHE/humVl、VHQ/humV2、 VHQ/humVl 及 VHE/humV2 與 VHE-N73D/humVl — 起之陽 離子交換層析。 圖14顯示VHE/humV2與VHE-N73D/humVl之逆相層析。
96146.doc 138- 200521231 序列表 <110〉瑞士商諾華公司 <120〉治療性結合分子 <130> 4-33370A/NFI 9963 <140> TW 093128255 <141> 2004-09-17
<150〉 10/666,332 0414309.5 <151〉 2003-09-18 2004-06-25 <160〉 49 <170〉 Patentln 3.2版 <210〉 1 <211〉 107 <212> PRT <213〉人造 <220> <223>嵌合輕鏈之部分胺基酸序列 <400〉 1
Asp lie Leu Leu Thr Gin Ser Pro Ala lie Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15
Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gin Asn lie Gly Thr Ser 20 25 30 lie Gin Trp Tyr Gin Gin Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu lie 35 40 45
Arg Ser Ser Ser Glu Ser lie Ser Gly lie Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 96146.doc 200521231
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser He Asn Ser Val Glu Ser 65 70 75 80
Glu Asp lie Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Asn Thr Trp Pro Phe 85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105
<210〉 2 <211> 118 <212> PRT <213〉人造 <220〉 <223>嵌合重鏈之部分胺基酸序列 <400〉 2
Glu Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30
lie lie His Trp Val Lys Gin Glu Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45
Gly Tyr Phe Asn Pro Tyr Asn His Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Asp Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala He Tyr Tyr Cys 85 90 95 96146.doc -2- 200521231
Ala Arg Ser Gly Pro Tyr Ala Trp Phe Asp Thr Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 3 <211> 214 <212> PRT <213>人造
<220> <223>嵌合輕鏈之胺基酸序列 <400〉 3
Asp lie Leu Leu Thr Gin Ser Pro Ala lie Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15
Glu Arg Val Ser Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gin Asn He Gly Thr Ser 20 25 30
He Gin Trp Tyr Gin Gin Arg Thr Asn Gly Ser Pro Arg Leu Leu lie 35 40 45
Arg Ser Ser Ser Glu Ser lie Ser Gly lie Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser lie Asn Ser Val Glu Ser 65 70 75 80
Glu Asp lie Ala Asp Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Asn Thr Trp Pro Phe 85 90 95 96146.doc 200521231
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
Pro Ser Val Phe He Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly 115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140
Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin 145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210〉 4 <211> 448 <212〉 PRT <213〉人造 <220〉 <223>嵌合重鏈之胺基酸序列 <400> 4
Glu Val Gin Leu Gin Gin Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 15 10 15 96146.doc 200521231
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 lie lie His Trp Val Lys Gin Glu Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45
Gly Tyr Phe Asn Pro Tyr Asn His Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Asp Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala lie Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Ser Gly Pro Tyr Ala Trp Phe Asp Thr Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 φ
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin 165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 96146.doc 200521231
Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr He Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr 210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg 245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr 325 330 335
He Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu 340 345 350
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 96146.doc 200521231
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380
Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415
Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 5 <211> 321 <212> DNA <213〉人造 <220〉 <223>編碼SEQ ID NO:l多胜肽之核苷酸序列 <400〉 5
gacattctgc tgacccagtc tccagccatc ctgtctgtga gtccaggaga aagagtcagt 60 ttctcctgca gggccagtca gaacattggc acaagcatac agtggtatca acaaagaaca 120 aatggttctc caaggcttct cataaggtct tcttctgagt ctatctctgg gatcccttcc 180 aggtttagtg gcagtggatc agggacagat tttactctta gcatcaacag tgtggagtct 240 gaagatattg cagattatta ctgtcaacaa agtaatacct ggccattcac gttcggctcg 300 gggaccaagc ttgaaatcaa a 321
<210〉 6 <211〉 354 <212> DNA 96146.doc 200521231 <213>人造 <220> <223>編碼SEQ ID N0:2多胜肽之核苷酸序列 <400> 6 gaggtgcagc tgcagcagtc aggacctgaa ctggtaaagc ctggggcttc agtgaagatg 60 tcctgcaagg cctctggata cacattcact aattatatta tccactgggt gaagcaggag 120 cctggtcagg gccttgaatg gattggatat tttaatcctt acaatcatgg tactaagtac 180 aatgagaagt tcaaaggcag ggccacacta actgcagaca aatcctccaa cacagcctac 240 atggacctca gcagcctgac ctctgaggac tctgcgatct actactgtgc aagatcagga 300
ccctatgcct ggtttgacac ctggggccaa gggaccacgg tcaccgtctc ctca 354 <210> 7 <211> 107 <212〉 PRT <213〉人造 <220〉 <223>記爲humV2人化輕鏈之部分胺基酸序列(huraV2 = VLm) <400〉 7
Asp lie Leu Leu Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15 φ
Glu Arg Ala Thr Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gin Asn lie Gly Thr Ser 20 25 30 lie Gin Trp Tyr Gin Gin Lys Thr Asn Gly Ala Pro Arg Leu Leu lie 35 40 45
Arg Ser Ser Ser Glu Ser lie Ser Gly He Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 96146.doc 200521231
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Asn Thr Trp Pro Phe 85 90 95
Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu He Lys 100 105
<210> 8 <211〉 107 <212〉 PRT <213〉人造 <220〉 <223>記爲humVl人化輕鏈之部分胺基酸序列(humVl = VLh) <400〉 8
Asp He Leu Leu Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Asn lie Gly Thr Ser 20 25 30
lie Gin Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu He 35 40 45
Arg Ser Ser Ser Glu Ser lie Ser Gly He Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr He Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 96146.doc 9- 200521231
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Asn Thr Trp Pro Phe 85 90 95
Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 <210〉 9 <211> 118 <212> PRT <213〉人造 <220>
<223>記爲VHE人化重鏈之部分胺基酸序列 <400〉 9
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 lie He His Trp Val Lys Gin Glu Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45
Gly Tyr Phe Asn Pro Tyr Asn His Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe _ 50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asn Lys Ser He Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Ser Gly Pro Tyr Ala Trp Phe Asp Thr Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 110 96146.doc 10- 200521231
Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 10 <211> 118 <212> PRT <213>人造 <220〉 <223>記爲VHQ人化重鏈之部分胺基酸序列 <400> 10
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30
He He His Trp Val Lys Gin Glu Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45
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Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Ser Gly Pro Tyr Ala Trp Phe Asp Thr Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser 115 96146.doc - 11 - 200521231 <210〉 11 <211> 354 <212〉 DNA <213〉人造 <220〉 <223>編碼胺基酸序列SEQIDNO:9之核苷酸序列 <400〉 11
gaggtgcagc tggtggagtc aggagccgaa gtgaaaaagc ctggggcttc agtgaaggtg 60 tcctgcaagg cctctggata cacattcact aattatatta tccactgggt gaagcaggag 120 cctggtcagg gccttgaatg gattggatat tttaatcctt acaatcatgg tactaagtac 180 aatgagaagt tcaaaggcag ggccacacta actgcaaaca aatccatcag cacagcctac 240 atggagctca gcagcctgcg ctctgaggac actgcggtct actactgtgc aagatcagga 300 ccctatgcct ggtttgacac ctggggccaa gggaccacgg tcaccgtctc ctca 354 <210> 12 <211> 354 <212〉 DNA <213>人造 <220> <223>編碼胺基酸序列SEQIDNO:10之核管酸序列 · <400〉 12 caggtgcagc tggtggagtc aggagccgaa gtgaaaaagc ctggggcttc agtgaaggtg 60 tcctgcaagg cctctggata cacattcact aattatatta tccactgggt gaagcaggag 120 cctggtcagg gccttgaatg gattggatat tttaatcctt acaatcatgg tactaagtac 180 aatgagaagt tcaaaggcag ggccacacta actgcaaaca aatccatcag cacagcctac 240 atggagctca gcagcctgcg ctctgaggac actgcggtct actactgtgc aagatcagga 300 ccctatgcct ggtttgacac ctggggccaa gggaccacgg tcaccgtctc ctca 354 96146.doc -12- 200521231 <210〉 13 <211〉 321 <212〉 DNA <213>人造 <220> <223>編碼胺基酸序列SEQIDN0:7之核苷酸序列 <400〉 13 gacattctgc ttctcctgca aatggtgctc aggtttagtg gaagattttg gggaccaagc tgacccagtc gggccagtca caaggcttct gcagtggatc cagtgtatta tggagatcaa tccagccacc gaacattggc cataaggtct agggacagat ctgtcaacaa a ctgtctctga acaagcatac tcttctgagt tttactctta agtaatacct gtccaggaga agtggtatca ctatctctgg ccatcagcag ggccattcac aagagccact acaaaaaaca gatcccttcc tctggagcct gttcggccag 60 120 180 240 300 321 <210> 14 <211〉 321 <212〉 DNA <213>人造 <220>
<223>編碼胺基酸序列SEQIDNO:8之核苷酸序列 <400〉 14 gacattctgc ctctcctgca ggtcaggctc aggtttagtg gaagattttg gggaccaagc tgacccagtc gggccagtca caaggcttct gcagtggatc cagtgtatta tggagatcaa tccagccacc gaacattggc cataaggtct agggacagat ctgtcaacaa a ctgtctctga acaagcatac tcttctgagt tttactctta agtaatacct gtccaggaga agtggtatca ctatctctgg ccatcagcag ggccattcac aagagccact acaaaaacca gatcccttcc tctggagcct gttcggccag 60 120 180 240 300 321 96146.doc •13- 200521231 <210> 15 <211> 8687 <212> DNA <213〉人造 <220〉 <223〉表現載體HCMV-G1 HuA6-VHQ之核苷酸序列（自3921 -4274包含有SEQ ID NO: 12 (VHQ)之人化重鏈表現載體的完整DNA序列） <400〉 15 agctttttgc aaaagcctag gcctccaaaa aagcctcctc actacttctg gaatagctca 60 gaggccgagg cggcctcggc ctctgcataa ataaaaaaaa ttagtcagcc atggggcgga 120 gaatgggcgg aactgggcgg agttaggggc gggatgggcg gagttagggg cgggactatg 180 gttgctgact aattgagatg catgctttgc atacttctgc ctgctgggga gcctggttgc 240 tgactaattg agatgcatgc tttgcatact tctgcctgct ggggagcctg gggactttcc 300 acaccctaac tgacacacat tccacagctg cctcgcgcgt ttcggtgatg acggtgaaaa 360 cctctgacac atgcagctcc cggagacggt cacagcttgt ctgtaagcgg atgccgggag 420 cagacaagcc cgtcagggcg cgtcagcggg tgttggcggg tgtcggggcg cagccatgac 480 ccagtcacgt agcgatagcg gagtgtatac tggcttaact atgcggcatc agagcagatt 540 gtactgagag tgcaccatat gcggtgtgaa ataccgcaca gatgcgtaag gagaaaatac 600 cgcatcaggc gctcttccgc ttcctcgctc actgactcgc tgcgctcggt cgttcggctg 660 cggcgagcgg tatcagctca ctcaaaggcg gtaatacggt tatccacaga atcaggggat 720 aacgcaggaa agaacatgtg agcaaaaggc cagcaaaagg ccaggaaccg taaaaaggcc 780 gcgttgctgg cgtttttcca taggctccgc ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc 840 tcaagtcaga ggtggcgaaa cccgacagga ctataaagat accaggcgtt tccccctgga 900 agctccctcg tgcgctctcc tgttccgacc ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt 960 ctcccttcgg gaagcgtggc gctttctcat agctcacgct gtaggtatct cagttcggtg 1020 taggtcgttc gctccaagct gggctgtgtg cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc 1080 96146.doc • 14- 1140 200521231 gccttatccg gtaactatcg tcttgagtcc aacccggtaa gacacgactt atcgccactg gcagcagcca ctggtaacag gattagcaga gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt ggcctaacta cggctacact agaaggacag tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag ttaccttcgg aaaaagagtt ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg gtggtttttt tgtttgcaag cagcagatta cgcgcagaaa aaaaggatct caagaagatc ctttgatctt ttctacgggg tctgacgctc agtggaacga aaactcacgt taagggattt tggtcatgag attatcaaaa aggatcttca cctagatcct tttaaattaa aaatgaagtt ttaaatcaat ctaaagtata tatgagtaaa cttggtctga cagttaccaa tgcttaatca gtgaggcacc tatctcagcg atctgtctat ttcgttcatc catagttgcc tgactccccg tcgtgtagat aactacgata cgggagggct taccatctgg ccccagtgct gcaatgatac cgcgagaccc acgctcaccg gctccagatt tatcagcaat aaaccagcca gccggaaggg ccgagcgcag aagtggtcct gcaactttat ccgcctccat ccagtctatt aattgttgcc gggaagctag agtaagtagt tcgccagtta atagtttgcg caacgttgtt gccattgctg caggcatcgt ggtgtcacgc tcgtcgtttg gtatggcttc attcagctcc ggttcccaac gatcaaggcg agttacatga tcccccatgt tgtgcaaaaa agcggttagc tccttcggtc ctccgatcgt tgtcagaagt aagttggccg cagtgttatc actcatggtt atggcagcac tgcataattc tcttactgtc atgccatccg taagatgctt ttctgtgact ggtgagtact caaccaagtc attctgagaa tagtgtatgc ggcgaccgag ttgctcttgc ccggcgtcaa cacgggataa taccgcgcca catagcagaa ctttaaaagt gctcatcatt ggaaaacgtt cttcggggcg aaaactctca aggatcttac cgctgttgag atccagtteg atgtaaccca ctcgtgcacc caactgatct teageatett ttactttcac cagcgtttct gggtgagcaa aaacaggaag gcaaaatgcc gcaaaaaagg gaataagggc gacacggaaa 1200 1260 1320 1380 1440 1500 1560 1620 1680 1740 1800 1860 1920 1980 2040 2100 2160 2220 2280 2340 2400 96146.doc •15- 200521231 tgttgaatac ctcatgagcg acatttcccc tataaaaata aataataaaa tcatgtcgcg atttgaaaat ccatttttcc ttacggggga cgcagtttcg agctggcaca tattattcat atccatatca attgattatt atatggagtt acccccgccc tccattgacg tgtatcatat attatgccca tcatcgctat ttgactcacg accaaaatca gcggtaggcg tcatactctt gatacatatt gaaaagtgcc ggcgtatcac tgtgtgtttg cgatagtggt atggcatatt aaaagtgatt tggcgataga atataggtga tggccaatgc tggttatata taatatgtac gactagttat ccgcgttaca attgacgtca tcaatgggtg gccaagtacg gtacatgacc taccatggtg gggatttcca acgggacttt tgtacggtgg cctttttcaa tgaatgtatt acctgacgtc gaggcccttt tccgaaatac gtttatcgcc gaaaatgtcg tttgggcata cgactttggt cagacgatat atatcgatct gcataaatca atttatattg taatagtaat taacttacgg ataatgacgt gagtatttac ccccctattg ttatgggact atgcggtttt agtctccacc ccaaaatgtc gaggtctata tattattgaa tagaaaaata taagaaacca cgtcttcaag gcgttttgag gatagagatg ccgatgtgag cgcgatatct gacttgggcg gaggctatat atacattgaa atattggcta gctcatgtcc caattacggg taaatggccc atgttcccat ggtaaactgc acgtcaatga ttcctacttg ggcagtacat ccattgacgt gtaacaactc taagcagagc gcatttatca aacaaatagg ttattatcat aattcagctt atttctgtcg gcgatattgg tttctgtgta ggcgatagcg attctgtgtg cgccgataga tcaatattgg ttggccattg aacattaccg gtcattagtt gcctggctga agtaacgcca ccacttggca cggtaaatgg gcagtacatc caatgggcgt caatgggagt cgccccattg tcgtttagtg gggttattgt ggttccgcgc gacattaacc ggctgcagtg ccgactaaat aaaaatcgat actgatatcg cttatatcgt tcgcaaatat ggcgacatca ccattagcca catacgttgt ccatgttgac catagcccat ccgcccaacg atagggactt gtacatcaag cccgcctggc tacgtattag ggatagcggt ttgttttggc acgcaaatgg aaccgtcaga 2460 2520 2580 2640 2700 2760 2820 2880 2940 3000 3060 3120 3180 3240 3300 3360 3420 3480 3540 3600 3660 3720 3780 96146.doc -16- 200521231 tcgcctggag gcctccgcaa tggcccccgg ctggggcttc tccactgggt acaatcatgg aatccatcag actactgtgc tcaccgtctc gcctgacctt tgcacaccca cccaggggcc ctctcttgca cacctctggg gacggtgtcg acagtcctca cacccagacc agttggtgag ctgcctggac gcctcttcac tttttcccca aaggggcagg acgccatcca gcttgccgcc cgcccacagc agtgaaggtg gaagcaggag tactaagtac cacagcctac aagatcagga ctcaggtgag ggctttgggg atgcccatga tctgcgccct gcctccacca ggcacagcgg tggaactcag ggactctact tacatctgca aggccagcac gcatcccggc ccggaggcct ggctctgggc tgctgggctc cgctgttttg accatggact caggtgcagc tcctgcaagg cctggtcagg aatgagaagt atggagctca ccctatgcct ttctagaagg cagggagggg gcccagacac gggcccagct agggcccatc ccctgggctg gcgccctgac ccctcagcag acgtgaatca agggagggag tatgcagccc ctgcccgccc aggcacaggc agacctgcca acctccatag ggacctggag tggtggagtc cctctggata gccttgaatg tcaaaggcag gcagcctgcg ggtttgacac atcccaagct gctaaggtga tggacgctga ctgtcccaca ggtcttcccc cctggtcaag cagcggcgtg cgtggtgacc caagcccagc ggtgtctgct cagtccaggg cactcatgct taggtgcccc agagccatat aagacaccgg ggtgttctgc aggagccgaa cacattcact gattggatat ggccacacta ctctgaggac ctggggccaa agctttctgg ggcaggtggc acctcgcgga ccgcggtcac ctggcaccct gactacttcc cacaccttcc gtgccctcca aacaccaagg ggaagccagg cagcaaggca cagggagagg taacccaggc ccgggaggac gaccgatcca ctgctggccg gtgaaaaagc aattatatta tttaatcctt actgcaaaca actgcggtct gggaccacgg ggcaggccag gccagccagg cagttaagaa atggcaccac cctccaagag ccgaaccggt cggctgtcct gcagcttggg tggacaagaa ctcagcgctc ggccccgtct gtcttctggc cctgcacaca cctgcccctg 3840 3900 3960 4020 4080 4140 4200 4260 4320 4380 4440 4500 4560 4620 4680 4740 4800 4860 4920 4980 5040 5100 96146.doc •17- 200521231 acctaagccc accccaaagg ccaaactctc cactccctca gctcggacac cttctctcct cccagattcc agtaactccc aatcttctct ctgcagagcc caaatcttgt gacaaaactc acacatgccc accgtgccca ggtaagccag cccaggcctc gccctccagc tcaaggcggg acaggtgccc tagagtagcc tgcatccagg gacaggcccc agccgggtgc tgacacgtcc acctccatct cttcctcagc acctgaactc ctggggggac cgtcagtctt cctcttcccc ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc cggacccctg aggtcacatg cgtggtggtg gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag cagtacaaca gcacgtaccg tgtggtcagc gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg aatggcaagg agtacaagtg caaggtctcc aacaaagccc tcccagcccc catcgagaaa accatctcca aagccaaagg tgggacccgt ggggtgcgag ggccacatgg acagaggccg gctcggccca ccctctgccc tgagagtgac cgctgtacca acctctgtcc ctacagggca gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg gatgagctga ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctatcccagc gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctacagca agctcaccgt ggacaagagc aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg ggtaaatgag tgcgacggcc ggcaagcccc cgctccccgg gctctcgcgg tcgcacgagg atgcttggca cgtaccccct gtacatactt cccgggcgcc cagcatggaa ataaagcacc cagcgctgcc ctgggcccct gcgagactgt gatggttctt tccacgggtc aggccgagtc tgaggcctga gtggcatgag atctgatatc atcgatgaat tcgagctcgg tacccgggga tcgatccaga catgataaga tacattgatg agtttggaca aaccacaact agaatgcagt gaaaaaaatg ctttatttgt gaaatttgtg atgctattgc tttatttgta accattataa gctgcaataa acaagttaac 5160 5220 5280 5340 5400 5460 5520 5580 5640 5700 5760 5820 5880 5940 6000 6060 6120 6180 6240 6300 6360 6420 6480 96146.doc -18- 200521231 aacaacaatt agcaagtaaa acatcaaata gagcatagtt tatgattata tgtatagcag tactaaacac ctacctttct cactagatgg gctcccattc gtttaacaca gtagtttgtc aaagcggcca ctgctggttt agcctcaggc tccagcatga aagcccaacc gtcgcttggt gatagaaggc cagcccattc agcggtccgc ccatgatatt gcattcattt acctctacaa ttccttatta attaatagca actgttatgc tgcagctttt agcatgactc cttctttttt catttcttct atcagttcca ttatacactt caattatgtc tcgtgcctcc cctggatgcc agcagctgaa gatccccgcg tttcatagaa cggtcatttc gatgcgctgc gccgccaagc cacacccagc cggcaagcag tatgtttcag atgtggtatg acccctttac gacactctat ctacttataa tcctttgtgg aaaaaactta ggaggagtag gagcaaaaca taggttggaa aaaaatttta acaccacaga ccactcctgc gacggatttg ccaactcgcg ctggaggatc ggcggcggtg gaaccccaga gaatcgggag tcttcagcaa cggccacagt gcatcgccat gttcaggggg gctgattatg aaattaaaaa gcctgtgtgg aggttacaga tgtaaatagc gcaattctga aatgttgaga ggttttcctc tctaaaatac tatttacctt agtaaggttc agttcggggg cactgccggt aggggatcga atccagccgg gaatcgaaat gtcccgctca cggcgatacc tatcacgggt cgatgaatcc gggtcacgac aggtgtggga atctctagtc gctaaaggta agtaagaaaa atatttttcc aaagcaagca aggaaagtcc gtcagcagta attaaaggca acaaacaatt agagctttaa cttcacaaag catggatgcg agaactccgc gcccggggtg cgtcccggaa ctcgtgatgg gaagaactcg gtaaagcacg agccaacgct agaaaagcgg gagatcctcg ggttttttaa aaggcactat cacaattttt aacagtatgt ataattttct agagttctat ttggggtctt gcctcatcat ttccaccact agaatcagta atctctgtag atccgggacc cggatagccg gaggtcgtcc ggcgaagaac aacgattccg caggttgggc tcaagaaggc aggaagcggt atgtcctgat ccattttcca ccgtcgggca 6540 6600 6660 6720 6780 6840 6900 6960 7020 7080 7140 7200 7260 7320 7380 7440 7500 7560 7620 7680 7740 7800 96146.doc -19- 200521231 tgcgcgcctt gagcctggcg aacagttcgg ctggcgcgag cccctgatgc tcttcgtcca 7860 gatcatcctg atcgacaaga ccggcttcca tccgagtacg tgctcgctcg atgcgatgtt 7920 tcgcttggtg gtcgaatggg caggtagccg gatcaagcgt atgcagccgc cgcattgcat 7980 cagccatgat ggatactttc tcggcaggag caaggtgaga tgacaggaga tcctgccccg 8040 gcacttcgcc caatagcagc cagtcccttc ccgcttcagt gacaacgtcg agcacagctg 8100 cgcaaggaac gcccgtcgtg gccagccacg atagccgcgc tgcctcgtcc tgcagttcat 8160 tcagggcacc ggacaggtcg gtcttgacaa aaagaaccgg gcgcccctgc gctgacagcc 8220 ggaacacggc ggcatcagag cagccgattg tctgttgtgc ccagtcatag ccgaatagcc 8280 tctccaccca agcggccgga gaacctgcgt gcaatccatc ttgttcaatc atgcgaaacg 8340 atcctcatcc tgtctcttga tcagatcttg atcccctgcg ccatcagatc cttggcggca 8400 agaaagccat ccagtttact ttgcagggct tcccaacctt accagagggc gccccagctg 8460 gcaattccgg ttcgcttgct gtccataaaa ccgcccagtc tagctatcgc catgtaagcc 8520 cactgcaagc tacctgcttt ctctttgcgc ttgcgttttc ccttgtccag atagcccagt 8580 agctgacatt catccggggt cagcaccgtt tctgcggact ggctttctac gtgttccgct 8640 tcctttagca gcccttgcgc cctgagtgct tgcggcagcg tgaagct 8687 <210〉 16 <211> 8687 <212> DNA <213>人造 <220〉 <223>表現載體HCMV-G1 HuA6-VHE之核苷酸序列（自3921 -4274包含有SEQ ID NO: 11 (VHE)之人化重鏈表現載體的完整DNA序列） <400〉 16 agctttttgc aaaagcctag gcctccaaaa aagcctcctc actacttctg gaatagctca 60 gaggccgagg cggcctcggc ctctgcataa ataaaaaaaa ttagtcagcc atggggcgga 120 96146.doc -20- 200521231 gaatgggcgg aactgggcgg agttaggggc gggatgggcg gagttagggg cgggactatg 180 gttgctgact aattgagatg catgctttgc atacttctgc ctgctgggga gcctggttgc 240 tgactaattg agatgcatgc tttgcatact tctgcctgct ggggagcctg gggactttcc 300 acaccctaac tgacacacat tccacagctg cctcgcgcgt ttcggtgatg acggtgaaaa 360 cctctgacac atgcagctcc cggagacggt cacagcttgt ctgtaagcgg atgccgggag 420 cagacaagcc cgtcagggcg cgtcagcggg tgttggcggg tgtcggggcg cagccatgac 480 ccagtcacgt agcgatagcg gagtgtatac tggcttaact atgcggcatc agagcagatt 540 gtactgagag tgcaccatat gcggtgtgaa ataccgcaca gatgcgtaag gagaaaatac 600 cgcatcaggc gctcttccgc ttcctcgctc actgactcgc tgcgctcggt cgttcggctg 660 cggcgagcgg tatcagctca ctcaaaggcg gtaatacggt tatccacaga atcaggggat 720 aacgcaggaa agaacatgtg agcaaaaggc cagcaaaagg ccaggaaccg taaaaaggcc 780 gcgttgctgg cgtttttcca taggctccgc ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc 840 tcaagtcaga ggtggcgaaa cccgacagga ctataaagat accaggcgtt tccccctgga 900 agctccctcg tgcgctctcc tgttccgacc ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt 960 ctcccttcgg gaagcgtggc gctttctcat agctcacgct gtaggtatct cagttcggtg 1020 taggtcgttc gctccaagct gggctgtgtg cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc 1080 gccttatccg gtaactatcg tcttgagtcc aacccggtaa gacacgactt atcgccactg 1140 gcagcagcca ctggtaacag gattagcaga gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc 1200 ttgaagtggt ggcctaacta cggctacact agaaggacag tatttggtat ctgcgctctg 1260 ctgaagccag ttaccttcgg aaaaagagtt ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc 1320 gctggtagcg gtggtttttt tgtttgcaag cagcagatta cgcgcagaaa aaaaggatct 1380 caagaagatc ctttgatctt ttctacgggg tctgacgctc agtggaacga aaactcacgt 1440 taagggattt tggtcatgag attatcaaaa aggatcttca cctagatcct tttaaattaa 1500 96146.doc -21 - 200521231 aaatgaagtt ttaaatcaat ctaaagtata tatgagtaaa cttggtctga cagttaccaa tgcttaatca gtgaggcacc tatctcagcg atctgtctat ttcgttcatc catagttgcc tgactccccg tcgtgtagat aactacgata cgggagggct taccatctgg ccccagtgct gcaatgatac cgcgagaccc acgctcaccg gctccagatt tatcagcaat aaaccagcca gccggaaggg ccgagcgcag aagtggtcct gcaactttat ccgcctccat ccagtctatt aattgttgcc gggaagctag agtaagtagt tcgccagtta atagtttgcg caacgttgtt gccattgctg caggcatcgt ggtgtcacgc tcgtcgtttg gtatggcttc attcagctcc ggttcccaac gatcaaggcg agttacatga tcccccatgt tgtgcaaaaa agcggttagc tccttcggtc ctccgatcgt tgtcagaagt aagttggccg cagtgttatc actcatggtt atggcagcac tgcataattc tcttactgtc atgccatccg taagatgctt ttctgtgact ggtgagtact caaccaagtc attctgagaa tagtgtatgc ggcgaccgag ttgctcttgc ccggcgtcaa cacgggataa taccgcgcca catagcagaa ctttaaaagt gctcatcatt ggaaaacgtt cttcggggcg aaaactctca aggatcttac cgctgttgag atccagttcg atgtaaccca ctcgtgcacc caactgatct tcagcatctt ttactttcac cagcgtttct gggtgagcaa aaacaggaag gcaaaatgcc gcaaaaaagg gaataagggc gacacggaaa tgttgaatac tcatactctt cctttttcaa tattattgaa gcatttatca gggttattgt ctcatgagcg gatacatatt tgaatgtatt tagaaaaata aacaaatagg ggttccgcgc acatttcccc gaaaagtgcc acctgacgtc taagaaacca ttattatcat gacattaacc tataaaaata ggcgtatcac gaggcccttt cgtcttcaag aattcagctt ggctgcagtg aataataaaa tgtgtgtttg tccgaaatac gcgttttgag atttctgtcg ccgactaaat tcatgtcgcg cgatagtggt gtttatcgcc gatagagatg gcgatattgg aaaaatcgat atttgaaaat atggcatatt gaaaatgtcg ccgatgtgag tttctgtgta actgatatcg 1560 1620 1680 1740 1800 1860 1920 1980 2040 2100 2160 2220 2280 2340 2400 2460 2520 2580 2640 2700 2760 2820 96146.doc •22- 200521231 ccatttttcc aaaagtgatt tttgggcata cgcgatatct ggcgatagcg cttatatcgt ttacggggga tggcgataga cgactttggt gacttgggcg attctgtgtg tcgcaaatat cgcagtttcg atataggtga cagacgatat gaggctatat cgccgataga ggcgacatca agctggcaca tggccaatgc atatcgatct atacattgaa tcaatattgg ccattagcca tattattcat tggttatata gcataaatca atattggcta ttggccattg catacgttgt atccatatca taatatgtac atttatattg gctcatgtcc aacattaccg ccatgttgac attgattatt gactagttat taatagtaat caattacggg gtcattagtt catagcccat atatggagtt ccgcgttaca taacttacgg taaatggccc gcctggctga ccgcccaacg acccccgccc attgacgtca ataatgacgt atgttcccat agtaacgcca atagggactt tccattgacg tcaatgggtg gagtatttac ggtaaactgc ccacttggca gtacatcaag tgtatcatat gccaagtacg ccccctattg acgtcaatga cggtaaatgg cccgcctggc attatgccca gtacatgacc ttatgggact ttcctacttg gcagtacatc tacgtattag tcatcgctat taccatggtg atgcggtttt ggcagtacat caatgggcgt ggatagcggt ttgactcacg gggatttcca agtctccacc ccattgacgt caatgggagt ttgttttggc accaaaatca acgggacttt ccaaaatgtc gtaacaactc cgccccattg acgcaaatgg gcggtaggcg tgtacggtgg gaggtctata taagcagagc tcgtttagtg aaccgtcaga tcgcctggag acgccatcca cgctgttttg acctccatag aagacaccgg gaccgatcca gcctccgcaa gcttgccgcc accatggact ggacctggag ggtgttctgc ctgctggccg tggcccccgg cgcccacagc gaggtgcagc tggtggagtc aggagccgaa gtgaaaaagc ctggggcttc agtgaaggtg tcctgcaagg cctctggata cacattcact aattatatta tccactgggt gaagcaggag cctggtcagg gccttgaatg gattggatat tttaatcctt acaatcatgg tactaagtac aatgagaagt tcaaaggcag ggccacacta actgcaaaca aatccatcag cacagcctac atggagctca gcagcctgcg ctctgaggac actgcggtct 2880 2940 3000 3060 3120 3180 3240 3300 3360 3420 3480 3540 3600 3660 3720 3780 3840 3900 3960 4020 4080 4140 4200 96146.doc -23- 200521231 actactgtgc aagatcagga ccctatgcct ggtttgacac ctggggccaa gggaccacgg tcaccgtctc ctcaggtgag ttctagaagg atcccaagct agctttctgg ggcaggccag gcctgacctt ggctttgggg cagggagggg gctaaggtga ggcaggtggc gccagccagg tgcacaccca atgcccatga gcccagacac tggacgctga acctcgcgga cagttaagaa cccaggggcc tctgcgccct gggcccagct ctgtcccaca ccgcggtcac atggcaccac ctctcttgca gcctccacca agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaaccggt gacggtgtcg tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tggacaagaa agttggtgag aggccagcac agggagggag ggtgtctgct ggaagccagg ctcagcgctc ctgcctggac gcatcccggc tatgcagccc cagtccaggg cagcaaggca ggccccgtct gcctcttcac ccggaggcct ctgcccgccc cactcatgct cagggagagg gtcttctggc tttttcccca ggctctgggc aggcacaggc taggtgcccc taacccaggc cctgcacaca aaggggcagg tgctgggctc agacctgcca agagccatat ccgggaggac cctgcccctg acctaagccc accccaaagg ccaaactctc cactccctca gctcggacac cttctctcct cccagattcc agtaactccc aatcttctct ctgcagagcc caaatcttgt gacaaaactc acacatgccc accgtgccca ggtaagccag cccaggcctc gccctccagc tcaaggcggg acaggtgccc tagagtagcc tgcatccagg gacaggcccc agccgggtgc tgacacgtcc acctccatct cttcctcagc acctgaactc ctggggggac cgtcagtctt cctcttcccc ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc cggacccctg aggtcacatg cgtggtggtg gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg 4260 4320 4380 4440 4500 4560 4620 4680 4740 4800 4860 4920 4980 5040 5100 5160 5220 5280 5340 5400 5460 5520 96146.doc -24- 200521231 cataatgcca gtcctcaccg aacaaagccc ggggtgcgag cgctgtacca cccatcccgg ctatcccagc gaccacgcct ggacaagagc gcacaaccac ggcaagcccc gtacatactt gcgagactgt atctgatate tacattgatg gaaatttgtg aacaacaatt agcaagtaaa acatcaaata gagcatagtt tatgattata tgtatagcag tactaaacac agacaaagcc tcctgcacca tcccagcccc ggccacatgg acctctgtcc gatgagctga gacatcgccg cccgtgctgg aggtggcagc tacacgcaga cgctccccgg cccgggcgcc gatggttctt atcgatgaat agtttggaca atgctattgc gcatteattt acctctacaa ttccttatta attaatagea actgttatgc tgcagctttt agcatgactc gegggaggag ggactggctg catcgagaaa acagaggccg ctacagggca ccaagaacca tggagtggga actccgacgg aggggaacgt agagcctctc gctctcgcgg cagcatggaa tccacgggtc tegagetegg aaccacaact tttatttgta tatgtttcag atgtggtatg acccctttac gacactctat etaettataa tcctttgtgg aaaaaactta cagtacaaca aatggcaagg accatctcca gctcggccca gccccgagaa ggtcagcctg gagcaatggg ctccttcttc cttctcatgc cctgtctccg tcgcacgagg ataaagcacc aggeegagte tacccgggga agaatgeagt accattataa gttcaggggg gctgattatg aaattaaaaa gcctgtgtgg aggttacaga tgtaaatagc gcaattctga gcacgtaccg agtacaagtg aagccaaagg ccctctgccc ccacaggtgt acctgcctgg cagccggaga ctctacagca tccgtgatgc ggtaaatgag atgettggea cagcgctgcc tgaggcctga tcgatccaga gaaaaaaatg gctgcaataa aggtgtggga atetetagte gctaaaggta agtaagaaaa atatttttcc aaagcaagca aggaaagtcc tgtggtcagc caaggtctcc tgggacccgt tgagagtgac acaccctgcc tcaaaggctt acaactacaa agctcaccgt atgaggetet tgcgacggcc cgtaccccct ctgggcccct gtggcatgag catgataaga etttatttgt acaagttaac ggttttttaa aaggcactat cacaattttt aacagtatgt ataattttet agagttetat ttggggtctt 5580 5640 5700 5760 5820 5880 5940 6000 6060 6120 6180 6240 6300 6360 6420 6480 6540 6600 6660 6720 6780 6840 6900 96146.doc -25- 200521231 ctacctttct cactagatgg gctcccattc gtttaacaca gtagtttgtc aaagcggcca ctgctggttt agcctcaggc tccagcatga aagcccaacc gtcgcttggt gatagaaggc cagcccattc agcggtccgc ccatgatatt tgcgcgcctt gatcatcctg tcgcttggtg cagccatgat gcacttcgcc cgcaaggaac tcagggcacc cttctttttt catttcttct atcagttcca ttatacactt caattatgtc tcgtgcctcc cctggatgcc agcagctgaa gatccccgcg tttcatagaa cggtcatttc gatgcgctgc gccgccaagc cacacccagc cggcaagcag gagcctggcg atcgacaaga gtcgaatggg ggatactttc caatagcagc gcccgtcgtg ggacaggtcg ggaggagtag gagcaaaaca taggttggaa aaaaatttta acaccacaga ccactcctgc gacggatttg ccaactcgcg ctggaggatc ggcggcggtg gaaccccaga gaatcgggag tcttcagcaa cggccacagt gcatcgccat aacagttcgg ccggcttcca caggtagccg tcggcaggag cagtcccttc gccagccacg gtcttgacaa aatgttgaga ggttttcctc tctaaaatac tatttacctt agtaaggttc agttcggggg cactgccggt aggggatcga atccagccgg gaatcgaaat gtcccgctca cggcgatacc tatcacgggt cgatgaatcc gggtcacgac ctggcgcgag tccgagtacg gatcaagcgt caaggtgaga ccgcttcagt atagccgcgc aaagaaccgg gtcagcagta attaaaggca acaaacaatt agagctttaa cttcacaaag catggatgcg agaactccgc gcccggggtg cgtcccggaa ctcgtgatgg gaagaactcg gtaaagcacg agccaacgct agaaaagcgg gagatcctcg cccctgatgc tgctcgctcg atgcagccgc tgacaggaga gacaacgtcg tgcctcgtcc gcgcccctgc gcctcatcat ttccaccact agaatcagta atctctgtag atccgggacc cggatagccg gaggtcgtcc ggcgaagaac aacgattccg caggttgggc tcaagaaggc aggaagcggt atgtcctgat ccattttcca ccgtcgggca tcttcgtcca atgcgatgtt cgcattgcat tcctgccccg agcacagctg tgcagttcat gctgacagcc 6960 7020 7080 7140 7200 7260 7320 7380 7440 7500 7560 7620 7680 7740 7800 7860 7920 7980 8040 8100 8160 8220 96146.doc -26· 200521231 ggaacacggc ggcatcagag cagccgattg tctgttgtgc ccagtcatag ccgaatagcc 8280 tctccaccca agcggccgga gaacctgcgt gcaatccatc ttgttcaatc atgcgaaacg 8340 atcctcatcc tgtctcttga tcagatcttg atcccctgcg ccatcagatc cttggcggca 8400 agaaagccat ccagtttact ttgcagggct tcccaacctt accagagggc gccccagctg 8460 gcaattccgg ttcgcttgct gtccataaaa ccgcccagtc tagctatcgc catgtaagcc 8520 cactgcaagc tacctgcttt ctctttgcgc ttgcgttttc ccttgtccag atagcccagt 8580 agctgacatt catccggggt cagcaccgtt tctgcggact ggctttctac gtgttccgct 8640 tcctttagca gcccttgcgc cctgagtgct tgcggcagcg tgaagct 8687
<210〉 17 <211> 9400 <212> DNA <213>人造 <220〉 <223>表現載體HCMV-KHuAb-VLl humVl之核苷酸序列（自3964-4284包含有SEQIDNO: 14 (humVl=VLh)之人化輕鏈表現載體的完整DNA序列） <400〉 17 tcactacttc tggaatagct 60 aattagtcag ccatggggcg 120 cggagttagg ggcgggacta 180 gcctgctggg gagcctggtt 240 ctggggagcc tggggacttt 300 gtttcggtga tgacggtgaa 360 gtctgtaagc ggatgccggg 420 ggtgtcgggg cgcagccatg 480 ctatgcggca tcagagcaga 540
ctagcttttt gcaaaagcct aggcctccaa aaaagcctcc cagaggccga ggcggcctcg gcctctgcat aaataaaaaa gagaatgggc ggaactgggc ggagttaggg gcgggatggg tggttgctga ctaattgaga tgcatgcttt gcatacttct gctgactaat tgagatgcat gctttgcata cttctgcctg ccacacccta actgacacac attccacagc tgcctcgcgc aacctctgac acatgcagct cccggagacg gtcacagctt agcagacaag cccgtcaggg cgcgtcagcg ggtgttggcg acccagtcac gtagcgatag cggagtgtat actggcttaa 96146.doc -27- 200521231 ttgtactgag agtgcaccat atgcggtgtg aaataccgca cagatgcgta aggagaaaat 600 accgcatcag gcgctcttcc gcttcctcgc tcactgactc gctgcgctcg gtcgttcggc 660 tgcggcgagc ggtatcagct cactcaaagg cggtaatacg gttatccaca gaatcagggg 720 ataacgcagg aaagaacatg tgagcaaaag gccagcaaaa ggccaggaac cgtaaaaagg 780 ccgcgttgct ggcgtttttc cataggctcc gcccccctga cgagcatcac aaaaatcgac 840 gctcaagtca gaggtggcga aacccgacag gactataaag ataccaggcg tttccccctg 900 gaagctccct cgtgcgctct cctgttccga ccctgccgct taccggatac ctgtccgcct 960 ttctcccttc gggaagcgtg gcgctttctc atagctcacg ctgtaggtat ctcagttcgg 1020 tgtaggtcgt tcgctccaag ctgggctgtg tgcacgaacc ccccgttcag cccgaccgct 1080 gcgccttatc cggtaactat cgtcttgagt ccaacccggt aagacacgac ttatcgccac 1140 tggcagcagc cactggtaac aggattagca gagcgaggta tgtaggcggt gctacagagt 1200 tcttgaagtg gtggcctaac tacggctaca ctagaaggac agtatttggt atctgcgctc 1260 tgctgaagcc agttaccttc ggaaaaagag ttggtagctc ttgatccggc aaacaaacca 1320 ccgctggtag cggtggtttt tttgtttgca agcagcagat tacgcgcaga aaaaaaggat 1380 ctcaagaaga tcctttgatc ttttctacgg ggtctgacgc tcagtggaac gaaaactcac 1440 gttaagggat tttggtcatg agattatcaa aaaggatctt cacctagatc cttttaaatt 1500 aaaaatgaag ttttaaatca atctaaagta tatatgagta aacttggtct gacagttacc 1560 aatgcttaat cagtgaggca cctatctcag cgatctgtct atttcgttca tccatagttg 1620 cctgactccc cgtcgtgtag ataactacga tacgggaggg cttaccatct ggccccagtg 1680 ctgcaatgat accgcgagac ccacgctcac cggctccaga tttatcagca ataaaccagc 1740 cagccggaag ggccgagcgc agaagtggtc ctgcaacttt atccgcctcc atccagtcta 1800 ttaattgttg ccgggaagct agagtaagta gttcgccagt taatagtttg cgcaacgttg 1860 ttgccattgc tgcaggcatc gtggtgtcac gctcgtcgtt tggtatggct tcattcagct 1920 96146.doc -28 - 200521231 ccggttccca acgatcaagg cgagttacat gatcccccat gttgtgcaaa aaagcggtta 1980 gctccttcgg tcctccgatc gttgtcagaa gtaagttggc cgcagtgtta tcactcatgg 2040 ttatggcagc actgcataat tctcttactg tcatgccatc cgtaagatgc ttttctgtga 2100 ctggtgagta ctcaaccaag tcattctgag aatagtgtat gcggcgaccg agttgctctt 2160 gcccggcgtc aacacgggat aataccgcgc cacatagcag aactttaaaa gtgctcatca 2220 ttggaaaacg ttcttcgggg cgaaaactct caaggatctt accgctgttg agatccagtt 2280 cgatgtaacc cactcgtgca cccaactgat cttcagcatc ttttactttc accagcgttt 2340 ctgggtgagc aaaaacagga aggcaaaatg ccgcaaaaaa gggaataagg gcgacacgga 2400 aatgttgaat actcatactc ttcctttttc aatattattg aagcatttat cagggttatt 2460 gtctcatgag cggatacata tttgaatgta tttagaaaaa taaacaaata ggggttccgc 2520 gcacatttcc ccgaaaagtg ccacctgacg tctaagaaac cattattatc atgacattaa 2580 cctataaaaa taggcgtatc acgaggccct ttcgtcttca agaattcagc ttggctgcag 2640 tgaataataa aatgtgtgtt tgtccgaaat acgcgttttg agatttctgt cgccgactaa 2700 attcatgtcg cgcgatagtg gtgtttatcg ccgatagaga tggcgatatt ggaaaaatcg 2760 atatttgaaa atatggcata ttgaaaatgt cgccgatgtg agtttctgtg taactgatat 2820 cgccattttt ccaaaagtga tttttgggca tacgcgatat ctggcgatag cgcttatatc 2880 gtttacgggg gatggcgata gacgactttg gtgacttggg cgattctgtg tgtcgcaaat 2940 atcgcagttt cgatataggt gacagacgat atgaggctat atcgccgata gaggcgacat 3000 caagctggca catggccaat gcatatcgat ctatacattg aatcaatatt ggccattagc 3060 catattattc attggttata tagcataaat caatattggc tattggccat tgcatacgtt 3120 gtatccatat cataatatgt acatttatat tggctcatgt ccaacattac cgccatgttg 3180 acattgatta ttgactagtt attaatagta atcaattacg gggtcattag ttcatagccc 3240 96146.doc -29- 200521231 atatatggag ttccgcgtta cataacttac ggtaaatggc ccgcctggct gaccgcccaa cgacccccgc ccattgacgt caataatgac gtatgttccc atagtaacgc caatagggac tttccattga cgtcaatggg tggagtattt acggtaaact gcccacttgg cagtacatca agtgtatcat atgccaagta cgccccctat tgacgtcaat gacggtaaat ggcccgcctg gcattatgcc cagtacatga ccttatggga ctttcctact tggcagtaca tctacgtatt agtcatcgct attaccatgg tgatgcggtt ttggcagtac atcaatgggc gtggatagcg gtttgactca cggggatttc caagtctcca ccccattgac gtcaatggga gtttgttttg gcaccaaaat caacgggact ttccaaaatg tcgtaacaac tccgccccat tgacgcaaat gggcggtagg cgtgtacggt gggaggtcta tataagcaga gctcgtttag tgaaccgtca gatcgcctgg agacgccatc cacgctgttt tgacctccat agaagacacc gggaccgatc cagcctccgc aagcttgata tcgaattcct gcagcccggg ggatccgccc gcttgccgcc accatggaga cccccgccca gctgctgttc ctgctgctgc tgtggctgcc cgacaccacc ggcgacattc tgctgaccca gtctccagcc accctgtctc tgagtccagg agaaagagcc actctctcct gcagggccag tcagaacatt ggcacaagca tacagtggta tcaacaaaaa ccaggtcagg ctccaaggct tctcataagg tcttcttctg agtctatctc tgggatccct tccaggttta gtggcagtgg atcagggaca gattttactc ttaccatcag cagtctggag cctgaagatt ttgcagtgta ttactgtcaa caaagtaata cctggccatt cacgttcggc caggggacca agctggagat caaacgtgag tattctagaa agatcctaga attctaaact ctgagggggt cggatgacgt ggccattctt tgcctaaagc attgagttta ctgcaaggtc agaaaagcat gcaaagccct cagaatggct gcaaagagct ccaacaaaac aatttagaac tttattaagg aataggggga agctaggaag aaactcaaaa catcaagatt ttaaatacgc ttcttggtct ccttgctata attatctggg ataagcatgc tgttttctgt ctgtccctaa catgccctgt gattatccgc aaacaacaca cccaagggca gaactttgtt acttaaacac 3300 3360 3420 3480 3540 3600 3660 3720 3780 3840 3900 3960 4020 4080 4140 4200 4260 4320 4380 4440 4500 4560 4620 96146.doc -30- 200521231 catcctgttt gcttctttcc tcaggaactg tggctgcacc atctgtcttc atcttcccgc catctgatga gcagttgaaa tctggaactg cctctgttgt gtgcctgctg aataacttct atcccagaga ggccaaagta cagtggaagg tggataacgc cctccaatcg ggtaactccc aggagagtgt cacagagcag gacagcaagg acagcaccta cagcctcagc agcaccctga cgctgagcaa agcagactac gagaaacaca aagtctacgc ctgcgaagtc acccatcagg gcctgagctc gcccgtcaca aagagcttca acaggggaga gtgttagagg gagaagtgcc cccacctgct cctcagttcc agcctgaccc cctcccatcc tttggcctct gacccttttt ccacagggga cctaccccta ttgcggtcct ccagctcatc tttcacctca cccccctcct cctccttggc tttaattatg ctaatgttgg aggagaatga ataaataaag tgaatctttg cacctgtggt ttctctcttt cctcatttaa taattattat ctgttgttta ccaactactc aatttctctt ataagggact aaatatgtag tcatcctaag gcgcataacc atttataaaa atcatccttc attctatttt accctatcat cctctgcaag acagtcctcc ctcaaaccca caagccttct gtcctcacag tcccctgggc catggtagga gagacttgct tccttgtttt cccctcctca gcaagccctc atagtccttt ttaagggtga caggtcttac agtcatatat cctttgattc aattccctga gaatcaacca aagcaaattt ttcaaaagaa gaaacctgct ataaagagaa tcattcattg caacatgata taaaataaca acacaataaa agcaattaaa taaacaaaca atagggaaat gtttaagttc atcatggtac ttagacttaa tggaatgtca tgccttattt acatttttaa acaggtactg agggactcct gtctgccaag ggccgtattg agtactttcc acaacctaat ttaatccaca ctatactgtg agattaaaaa cattcattaa aatgttgcaa aggttctata aagctgagag acaaatatat tctataactc agcaatccca cttctagatg actgagtgtc cccacccacc aaaaaactat gcaagaatgt tcaaagcagc tttatttaca aaagccaaaa attggaaata gcccgattgt ccaacaatag aatgagttat 4680 4740 4800 4860 4920 4980 5040 5100 5160 5220 5280 5340 5400 5460 5520 5580 5640 5700 5760 5820 5880 5940 96146.doc -31 - 200521231 taaactgtgg tatgtttata cattagaata cccaatgagg agaattaaca agctacaact 6000 atacctactc acacagatga atctcataaa aataatgtta cataagagaa actcaatgca 6060 aaagatatgt tctgtatgtt ttcatccata taaagttcaa aaccaggtaa aaataaagtt 6120 agaaatttgg atggaaatta ctcttagctg ggggtgggcg agttagtgcc tgggagaaga 6180 caagaagggg cttctggggt cttggtaatg ttctgttcct cgtgtggggt tgtgcagtta 6240 tgatctgtgc actgttctgt atacacatta tgcttcaaaa taacttcaca taaagaacat 6300 cttataccca gttaatagat agaagaggaa taagtaatag gtcaagacca cgcagctggt 6360 aagtgggggg gcctgggatc aaatagctac ctgcctaatc ctgccctctt gagccctgaa 6420 tgagtctgcc ttccagggct caaggtgctc aacaaaacaa caggcctgct attttcctgg 6480 catctgtgcc ctgtttggct agctaggagc acacatacat agaaattaaa tgaaacagac 6540 cttcagcaag gggacagagg acagaattaa ccttgcccag acactggaaa cccatgtatg 6600 aacactcaca tgtttgggaa gggggaaggg cacatgtaaa tgaggactct tcctcattct 6660 atggggcact ctggccctgc ccctctcagc tactcatcca tccaacacac ctttctaagt 6720 acctctctct gcctacactc tgaaggggtt caggagtaac taacacagca tcccttccct 6780 caaatgactg acaatccctt tgtcctgctt tgtttttctt tccagtcagt actgggaaag 6840 tggggaagga cagtcatgga gaaactacat aaggaagcac cttgcccttc tgcctcttga 6900 gaatgttgat gagtatcaaa tctttcaaac tttggaggtt tgagtagggg tgagactcag 6960 taatgtccct tccaatgaca tgaacttgct cactcatccc tgggggccaa attgaacaat 7020 caaaggcagg cataatccag ctatgaattc taggatcgat ccagacatga taagatacat 7080 tgatgagttt ggacaaacca caactagaat gcagtgaaaa aaatgcttta tttgtgaaat 7140 ttgtgatgct attgctttat ttgtaaccat tataagctgc aataaacaag ttaacaacaa 7200 caattgcatt cattttatgt ttcaggttca gggggaggtg tgggaggttt tttaaagcaa 7260 gtaaaacctc tacaaatgtg gtatggctga ttatgatctc tagtcaaggc actatacatc 7320 96146.doc -32- 200521231 aaatattcct tagttattaa ttataactgt agcagtgcag aacacagcat tttctcttct gatggcattt cattcatcag acacattata ttgtccaatt ggccatcgtg ggtttcctgg caggcagcag catgagatcc caacctttea ttggtcggtc aaggcgatgc cattcgccgc tccgccacac atatteggea gccttgagee tcctgatcga tattaacccc tagcagacac tatgcctact etttttcctt gactcaaaaa tttttggagg ettetgagea ttccataggt cacttaaaaa atgtcacacc cctccccact atgeegaegg ctgaaccaac ccgcgctgga tagaaggegg atttcgaacc getgegaate caagctcttc ccagccggcc ageaggeate tggcgaacag caagaccggc tttacaaatt tctatgcctg tataaaggtt tgtggtgtaa acttagcaat agtagaatgt aaacaggttt tggaatctaa ttttatattt acagaagtaa cctgcagttc atttgcactg tcgcgagggg ggatcatcca cggtggaatc ccagagtccc gggagcggcg agcaatatca acagtcgatg gccatgggtc ttcggctggc ttccatccga aaaaagctaa tgtggagtaa acagaatatt atagcaaagc tctgaaggaa tgagagtcag tcctcattaa aatacacaaa accttagagc ggttccttca gggggcatgg ccggtagaac atcgagcccg gccggcgtcc gaaatctcgt gctcagaaga ataccgtaaa cgggtagcca aatccagaaa aegaegagat gcgagcccct gtacgtgctc aggtacacaa gaaaaaacag tttccataat aagcaagagt agtccttggg cagtagcctc aggcattcca caattagaat tttaaatctc caaagatccg atgegeggat teegegaggt gggtgggcga cggaaaacga gatggcaggt actcgtcaag gcacgaggaa acgctatgtc agcggccatt cctcgccgtc gatgetette getegatgeg tttttgagca tatgttatga tttcttgtat tetattacta gtcttctacc atcatcacta ccactgctcc cagtagttta tgtaggtagt ggaccaaagc agccgctgct cgtccagcct agaactccag ttccgaagcc tgggcgtcgc aaggegatag gcggtcagcc ctgatagcgg ttccaccatg gggeatgege gtccagatca atgtttcgct 7380 7440 7500 7560 7620 7680 7740 7800 7860 7920 7980 8040 8100 8160 8220 8280 8340 8400 8460 8520 8580 8640 96146.doc -33- 200521231
tggtggtcga atgggcaggt agccggatca agcgtatgca gccgccgcat tgcatcagcc 8700 atgatggata ctttctcggc aggagcaagg tgagatgaca ggagatcctg ccccggcact 8760 tcgcccaata gcagccagtc ccttcccgct tcagtgacaa cgtcgagcac agctgcgcaa 8820 ggaacgcccg tcgtggccag ccacgatagc cgcgctgcct cgtcctgcag ttcattcagg 8880 gcaccggaca ggtcggtctt gacaaaaaga accgggcgcc cctgcgctga cagccggaac 8940 acggcggcat cagagcagcc gattgtctgt tgtgcccagt catagccgaa tagcctctcc 9000 acccaagcgg ccggagaacc tgcgtgcaat ccatcttgtt caatcatgcg aaacgatcct 9060 catcctgtct cttgatcaga tcttgatccc ctgcgccatc agatccttgg cggcaagaaa 9120 gccatccagt ttactttgca gggcttccca accttaccag agggcgcccc agctggcaat 9180 tccggttcgc ttgctgtcca taaaaccgcc cagtctagct atcgccatgt aagcccactg 9240 caagctacct gctttctctt tgcgcttgcg ttttcccttg tccagatagc ccagtagctg 9300 acattcatcc ggggtcagca ccgtttctgc ggactggctt tctacgtgtt ccgcttcctt 9360 tagcagccct tgcgccctga gtgcttgcgg cagcgtgaag 9400
<210〉 18 <211> 9362 <212〉 DNA <213>人造 0 <220〉 <223>表現載體HCMV-K HuAb-VLl hum V2之核苷酸序列（自3926-4246包含有SEQ ID NO: 13(humV2=VLm)之人化輕鏈表現載體的完整DNA序列） <400〉 18 ctagcttttt gcaaaagcct aggcctccaa aaaagcctcc tcactacttc tggaatagct 60 cagaggccga ggcggcctcg gcctctgcat aaataaaaaa aattagtcag ccatggggcg 120 gagaatgggc ggaactgggc ggagttaggg gcgggatggg cggagttagg ggcgggacta 180 tggttgctga ctaattgaga tgcatgcttt gcatacttct gcctgctggg gagcctggtt 240 96146.doc -34- 200521231
gctgactaat tgagatgcat gctttgcata cttctgcctg ctggggagcc tggggacttt 300 ccacacccta actgacacac attccacagc tgcctcgcgc gtttcggtga tgacggtgaa 360 aacctctgac acatgcagct cccggagacg gtcacagctt gtctgtaagc ggatgccggg 420 agcagacaag cccgtcaggg cgcgtcagcg ggtgttggcg ggtgtcgggg cgcagccatg 480 acccagtcac gtagcgatag cggagtgtat actggcttaa ctatgcggca tcagagcaga 540 ttgtactgag agtgcaccat atgcggtgtg aaataccgca cagatgcgta aggagaaaat 600 accgcatcag gcgctcttcc gcttcctcgc tcactgactc gctgcgctcg gtcgttcggc 660 tgcggcgagc ggtatcagct cactcaaagg cggtaatacg gttatccaca gaatcagggg 720 ataacgcagg aaagaacatg tgagcaaaag gccagcaaaa ggccaggaac cgtaaaaagg 780 ccgcgttgct ggcgtttttc cataggctcc gcccccctga cgagcatcac aaaaatcgac 840 gctcaagtca gaggtggcga aacccgacag gactataaag ataccaggcg tttccccctg 900 gaagctccct cgtgcgctct cctgttccga ccctgccgct taccggatac ctgtccgcct 960 ttctcccttc gggaagcgtg gcgctttctc atagctcacg ctgtaggtat ctcagttcgg 1020 tgtaggtcgt tcgctccaag ctgggctgtg tgcacgaacc ccccgttcag cccgaccgct 1080 gcgccttatc cggtaactat cgtcttgagt ccaacccggt aagacacgac ttatcgccac 1140 tggcagcagc cactggtaac aggattagca gagcgaggta tgtaggcggt gctacagagt 1200 tcttgaagtg gtggcctaac tacggctaca ctagaaggac agtatttggt atctgcgctc 1260 tgctgaagcc agttaccttc ggaaaaagag ttggtagctc ttgatccggc aaacaaacca 1320 ccgctggtag cggtggtttt tttgtttgca agcagcagat tacgcgcaga aaaaaaggat 1380 ctcaagaaga tcctttgatc ttttctacgg ggtctgacgc tcagtggaac gaaaactcac 1440 gttaagggat tttggtcatg agattatcaa aaaggatctt cacctagatc cttttaaatt 1500 aaaaatgaag ttttaaatca atctaaagta tatatgagta aacttggtct gacagttacc 1560 96146.doc -35- 200521231 aatgcttaat cagtgaggca cctatctcag cgatctgtct atttcgttca tccatagttg cctgactccc cgtcgtgtag ataactacga tacgggaggg cttaccatct ggccccagtg ctgcaatgat accgcgagac ccacgctcac cggctccaga tttatcagca ataaaccagc cagccggaag ggccgagcgc agaagtggtc ctgcaacttt atccgcctcc atccagtcta ttaattgttg ccgggaagct agagtaagta gttcgccagt taatagtttg cgcaacgttg ttgccattgc tgcaggcatc gtggtgtcac gctcgtcgtt tggtatggct tcattcagct ccggttccca acgatcaagg cgagttacat gatcccccat gttgtgcaaa aaagcggtta gctccttcgg tcctccgatc gttgtcagaa gtaagttggc cgcagtgtta tcactcatgg ttatggcagc actgcataat tctcttactg tcatgccatc cgtaagatgc ttttctgtga ctggtgagta ctcaaccaag tcattctgag aatagtgtat gcggcgaccg agttgctctt gcccggcgtc aacacgggat aataccgcgc cacatagcag aactttaaaa gtgctcatca ttggaaaacg ttcttcgggg cgaaaactct caaggatctt accgctgttg agatccagtt cgatgtaacc cactcgtgca cccaactgat cttcagcatc ttttactttc accagcgttt ctgggtgagc aaaaacagga aggcaaaatg ccgcaaaaaa gggaataagg gcgacacgga aatgttgaat actcatactc ttcctttttc aatattattg aagcatttat cagggttatt gtctcatgag cggatacata tttgaatgta tttagaaaaa taaacaaata ggggttccgc gcacatttcc ccgaaaagtg ccacctgacg tctaagaaac cattattatc atgacattaa cctataaaaa taggcgtatc acgaggccct ttcgtcttca agaattcagc ttggctgcag tgaataataa aatgtgtgtt tgtccgaaat acgcgttttg agatttctgt cgccgactaa attcatgtcg cgcgatagtg gtgtttatcg ccgatagaga tggcgatatt ggaaaaatcg atatttgaaa atatggcata ttgaaaatgt cgccgatgtg agtttctgtg taactgatat cgccattttt ccaaaagtga tttttgggca tacgcgatat ctggcgatag cgcttatatc gtttacgggg gatggcgata gacgactttg gtgacttggg cgattctgtg tgtcgcaaat 1620 1680 1740 1800 1860 1920 1980 2040 2100 2160 2220 2280 2340 2400 2460 2520 2580 2640 2700 2760 2820 2880 2940 96146.doc -36· 200521231 atcgcagttt cgatataggt gacagacgat atgaggctat atcgccgata gaggcgacat 3000 caagctggca catggccaat gcatatcgat ctatacattg aatcaatatt ggccattagc 3060 catattattc attggttata tagcataaat caatattggc tattggccat tgcatacgtt 3120 gtatccatat cataatatgt acatttatat tggctcatgt ccaacattac cgccatgttg 3180 acattgatta ttgactagtt attaatagta atcaattacg gggtcattag ttcatagccc 3240 atatatggag ttccgcgtta cataacttac ggtaaatggc ccgcctggct gaccgcccaa 3300 cgacccccgc ccattgacgt caataatgac gtatgttccc atagtaacgc caatagggac 3360 tttccattga cgtcaatggg tggagtattt acggtaaact gcccacttgg cagtacatca 3420 agtgtatcat atgccaagta cgccccctat tgacgtcaat gacggtaaat ggcccgcctg 3480 gcattatgcc cagtacatga ccttatggga ctttcctact tggcagtaca tctacgtatt 3540 agtcatcgct attaccatgg tgatgcggtt ttggcagtac atcaatgggc gtggatagcg 3600 gtttgactca cggggatttc caagtctcca ccccattgac gtcaatggga gtttgttttg 3660 gcaccaaaat caacgggact ttccaaaatg tcgtaacaac tccgccccat tgacgcaaat 3720 gggcggtagg cgtgtacggt gggaggtcta tataagcaga gctcgtttag tgaaccgtca 3780 gatcgcctgg agacgccatc cacgctgttt tgacctccat agaagacacc gggaccgatc 3840 cagcctccgc aagcttgccg ccaccatgga gacccccgcc cagctgctgt tcctgctgct 3900 gctgtggctg cccgacacca ccggcgacat tctgctgacc cagtctccag ccaccctgtc 3960 tctgagtcca ggagaaagag ccactttctc ctgcagggcc agtcagaaca t tggcacaag 4020 catacagtgg tatcaacaaa aaacaaatgg tgctccaagg cttctcataa ggtcttcttc 4080 tgagtctatc tctgggatcc cttccaggtt tagtggcagt ggatcaggga cagattttac 4140 tcttaccatc agcagtctgg agcctgaaga ttttgcagtg tattactgtc aacaaagtaa 4200 tacctggcca ttcacgttcg gccaggggac caagctggag atcaaacgtg agtattctag 4260 96146.doc -37- 200521231 aaagatccta gaattctaaa ctctgagggg gtcggatgac gtggccattc tttgcctaaa 4320 gcattgagtt tactgcaagg tcagaaaagc atgcaaagcc ctcagaatgg ctgcaaagag 4380 ctccaacaaa acaatttaga actttattaa ggaatagggg gaagctagga agaaactcaa 4440 aacatcaaga ttttaaatac gcttcttggt ctccttgcta taattatctg ggataageat 4500 gctgttttct gtctgtccct aacatgccct gtgattatcc gcaaacaaca cacccaaggg 4560 cagaactttg ttacttaaac accatcctgt ttgcttcttt cctcaggaac tgtggctgca 4620 ccatctgtct tcatcttccc gccatctgat gagcagttga aatctggaac tgcctctgtt 4680 gtgtgcctgc tgaataactt ctatcccaga gaggccaaag tacagtggaa ggtggataac 4740 gccctccaat cgggtaactc ccaggagagt gtcacagagc aggacagcaa ggacagcacc 4800 tacagcctca gcagcaccct gacgctgagc aaagcagact acgagaaaca caaagtctac 4860 gcctgcgaag tcacccatca gggcctgagc tcgcccgtca caaagagctt caacagggga 4920 gagtgttaga gggagaagtg cccccacctg ctcctcagtt ccagcctgac cccctcccat 4980 cctttggcct ctgacccttt ttccacaggg gacctacccc tattgcggtc ctccagctca 5040 tctttcacct cacccccctc ctcctccttg gctttaatta tgctaatgtt ggaggagaat 5100 gaataaataa agtgaatctt tgcacctgtg gtttctctct ttcctcattt aataattatt 5160 atctgttgtt taccaactac tcaatttctc ttataaggga ctaaatatgt agtcatccta 5220 aggcgcataa ccatttataa aaatcatcct teattctatt ttaccctatc atcctctgca 5280 agacagtcct ccctcaaacc cacaagcctt ctgtcctcac agtcccctgg gccatggtag 5340 gagagacttg cttccttgtt ttcccctcct cagcaagccc tcatagtcct ttttaagggt 5400 gacaggtctt acagtcatat atcctttgat tcaattccct gagaatcaac caaagcaaat 5460 ttttcaaaag aagaaacctg ctataaagag aatcatteat tgcaacatga tataaaataa 5520 caacacaata aaagcaatta aataaacaaa caatagggaa atgtttaagt tcatcatggt 5580 acttagactt aatggaatgt catgccttat ttacattttt aaacaggtac tgagggactc 5640 96146.doc -38- 200521231 ctgtctgcca tgagattaaa attctataac atgcaagaat gtccaacaat ggagaattaa tacataagag aaaaccaggt cgagttagtg ctcgtgtggg aataacttea aggtcaagac tcctgccctc aacaggcctg atagaaatta agacactgga aatgaggact catccaacac actaacacag tttccagtca accttgccct tttgagtagg agggeegtat aacattcatt tcagcaatcc gttcaaagca agaatgagtt caagctacaa aaactcaatg aaaaataaag cctgggagaa gttgtgcagt cataaagaac cacgcagctg ttgagccctg ctattttcct aatgaaacag aacccatgta cttcctcatt acctttetaa catcccttcc gtactgggaa tctgcctctt ggtgagactc tgagtacttt aaaatgttgc cacttctaga gctttattta attaaactgt ctatacctac caaaagatat ttagaaattt gacaagaagg tatgatctgt atettatacc gtaagtgggg aatgagtctg ggcatctgtg acctteagea tgaacactca ctatggggca gtacctctct ctcaaatgac agtggggaag gagaatgttg agtaatgtcc ccacaaccta aaaggttcta tgactgagtg caaaagccaa ggtatgttta tcacacagat gttctgtatg ggatggaaat ggcttctggg gcactgttct cagttaatag gggcctggga ccttccaggg ccctgtttgg aggggacaga catgtttggg ctctggccct ctgcctacac tgacaatccc gacagtcatg atgagtatca cttccaatga atttaatcca taaagctgag tccccaccca aaattggaaa tacattagaa gaatctcata ttttcatcca tactcttagc gtcttggtaa gtatacacat atagaagagg tcaaatagct ctcaaggtgc etagetagga ggacagaatt aagggggaag gcccctctca tctgaagggg tttgtcctgc gagaaactac aatctttcaa catgaacttg cactatactg agacaaatat ccaaaaaact tagcccgatt tacccaatga aaaataatgt tataaagttc tgggggtggg tgttctgttc tatgettcaa aataagtaat acctgcctaa tcaacaaaac gcacacatac aaccttgccc ggcacatgta gctactcatc ttcaggagta tttgtttttc ataaggaage actttggagg ctcactcatc 5700 5760 5820 5880 5940 6000 6060 6120 6180 6240 6300 6360 6420 6480 6540 6600 6660 6720 6780 6840 6900 6960 96146.doc -39- 200521231 cctgggggcc atccagacat aaaaatgctt gcaataaaca tgtgggaggt tctagtcaag aaaggtacac aagaaaaaac tttttccata gcaagcaaga aaagtccttg agcagtagcc aaaggcattc aacaattaga gctttaaatc cacaaagatc ggatgcgcgg actccgcgag cggggtgggc cccggaaaac gtgatggcag gaactcgtca aagcacgagg aaattgaaca gataagatac tatttgtgaa agttaacaac tttttaaagc gcactataca aatttttgag agtatgttat attttcttgt gttctattac gggtcttcta tcatcatcac caccactgct atcagtagtt tctgtaggta cgggaccaaa atagccgctg gtcgtccagc gaagaactcc gattccgaag gttgggcgtc agaaggcgat aagcggtcag atcaaaggca attgatgagt atttgtgatg aacaattgca aagtaaaacc tcaaatattc catagttatt gattataact atagcagtgc taaacacagc cctttctctt tagatggcat cccattcatc taacacatta gtttgtccaa gcggccatcg ctggtttcct ctcaggcagc agcatgagat cccaaccttt gcttggtcgg agaaggcgat cccattcgcc ggcataatcc ttggacaaac ctattgcttt ttcattttat tctacaaatg cttattaacc aatagcagac gttatgccta agctttttcc atgactcaaa cttttttgga ttcttctgag agttccatag tacacttaaa ttatgtcaca tgcctcccca ggatgccgac agctgaacca ccccgcgctg catagaaggc teatttcgaa gcgctgcgaa gccaagctct agetatgaat cacaactaga atttgtaacc gtttcaggtt tggtatggct cctttacaaa actctatgcc ettataaagg tttgtggtgt aaaettagea ggagtagaat caaaacaggt gttggaatct aattttatat ccacagaagt ctcctgcagt ggatttgcac actcgcgagg gaggatcatc ggcggtggaa ccccagagtc tegggagegg tcagcaatat tetaggateg atgcagtgaa attataaget cagggggagg gattatgatc ttaaaaagct tgtgtggagt ttacagaata aaatagcaaa attetgaagg gttgagagtc tttcctcatt aaaatacaca ttaccttaga aaggttcctt tcgggggcat tgccggtaga ggategagee cagccggcgt tcgaaatctc ccgctcagaa cgataccgta cacgggtagc 7020 7080 7140 7200 7260 7320 7380 7440 7500 7560 7620 7680 7740 7800 7860 7920 7980 8040 8100 8160 8220 8280 8340 96146.doc -40- 200521231
caacgctatg tcctgatagc ggtccgccac acccagccgg ccacagtcga tgaatccaga 8400 aaagcggcca ttttccacca tgatattcgg caagcaggca tcgccatggg tcacgacgag 8460 atcctcgccg tcgggcatgc gcgccttgag cctggcgaac agttcggctg gcgcgagccc 8520 ctgatgctct tcgtccagat catcctgatc gacaagaccg gcttccatcc gagtacgtgc 8580 tcgctcgatg cgatgtttcg cttggtggtc gaatgggcag gtagccggat caagcgtatg 8640 cagccgccgc attgcatcag ccatgatgga tactttctcg gcaggagcaa ggtgagatga 8700 caggagatcc tgccccggca cttcgcccaa tagcagccag tcccttcccg cttcagtgac 8760 aacgtcgagc acagctgcgc aaggaacgcc cgtcgtggcc agccacgata gccgcgctgc 8820 ctcgtcctgc agttcattca gggcaccgga caggtcggtc ttgacaaaaa gaaccgggcg 8880 cccctgcgct gacagccgga acacggcggc atcagagcag ccgattgtct gttgtgccca 8940 gtcatagccg aatagcctct ccacccaagc ggccggagaa cctgcgtgca atccatcttg 9000 ttcaatcatg cgaaacgatc ctcatcctgt ctcttgatca gatcttgatc ccctgcgcca 9060 tcagatcctt ggcggcaaga aagccatcca gtttactttg cagggcttcc caaccttacc 9120 agagggcgcc ccagctggca attccggttc gcttgctgtc cataaaaccg cccagtctag 9180 ctatcgccat gtaagcccac tgcaagctac ctgctttctc tttgcgcttg cgttttccct 9240 tgtccagata gcccagtagc tgacattcat ccggggtcag caccgtttct gcggactggc 9300 tttctacgtg ttccgcttcc tttagcagcc cttgcgccct gagtgcttgc ggcagcgtga 9360 ag 9362 <210> 19 <211〉 11 <212〉 PRT <213〉人造 <220〉 <223>於SEQ ID NO: 1之CD45RO/RB結合分子中高度可變區域CDR1 96146.doc -41 · 200521231 <400〉 19
Arg Ala Ser Gin Asn lie Gly Thr Ser He Gin 1 5 10 <210> 20 <211> 7 <212> PRT <213>人造 <220> <223>於SEQ ID NO: 1之CD45RO/RB結合分子中高度可變區域CDR2 <400> 20
Ser Ser Ser Glu Ser lie Ser 1 5 <210> 21 <211> 9 <212> PRT <213〉人造 <220〉 <223>於SEQ ID NO: 1之CD45R0/RB結合分子中高度可變區域CDR3 <400〉 21
Gin Gin Ser Asn Thr Trp Pro Phe Thr 1 5 <210> 22 <211> 5 <212〉 PRT <213>人造 <220〉 <223>於SEQ ID NO: 2之CD45R0/RB結合分子中高度可變區域CDR1 <400> 22 -42- 96146.doc 200521231
Asn Tyr lie lie His 1 5 <210〉 23 <211〉 17 <212〉 PRT <213>人造 <220〉 <223>於SEQ ID NO: 2之CD45RO/RB結合分子中高度可變區域CDR2 <400〉 23
Tyr Phe Asn Pro Tyr Asn His Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 15 10 15
Gly <210〉 24 <211〉 9 <212〉 PRT <213>人造 <220>
<223>於SEQ ID NO:2之CD45RO/RB結合分子中高度可變區域CDR3 <400〉 24
Ser Gly Pro Tyr Ala Trp Phe Asp Thr 1 5 <210〉 25 <211> 33 <212> DNA <213>人造 <220> <223>編碼CDR1胺基酸序列之多核苷酸序列 <400> 25 96146.doc -43- 200521231 ggccagtcag aacattggca caagcataca gtg 33 <210〉 26 <211> 21 <212> DNA <213>人造 <220> <223>編碼CDR2胺基酸序列之多核苷酸序列 <400〉 26 ttcttctgag tctatctctg g 21 <210〉 <211〉 <212〉 <213> <220〉 <223>編碼CDR3胺基酸序列之多核苷酸序列 <400> 27 27 acaaagtaat acctggccat tcacgtt <210〉 <211〉 <212〉 <213〉 28 15 DNA 人造 <220> <223>編碼CDR1'胺基酸序列之多核苷酸序列 15 <400〉 28 ttatattatc cactg <210〉 29 <211〉 51 <212> DNA <213〉 人造 <220> 96146.doc -44· 200521231 <223>編碼CDR2’胺基酸序列之多核苷酸序列 <400> 29 ttttaatcct tacaatcatg gtactaagta caatgagaag ttcaaaggca g 如 WDNA· <210〉 <211〉 <212> <213> <220> <223>編碼CDR3 ’胺基酸序列之多核苷酸序列 <400〉 30 aggaccctat gcctggtttg acacctg <210> 31 <211〉 118 <212> PRT <213>人造 <220> <223>記爲VHE-N73D人化重鏈之部分胺基酸序列 <400〉 31
Glu Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 lie He His Trp Val Lys Gin Glu Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45
Gly Tyr Phe Asn Pro Tyr Asn His Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser lie Ser Thr Ala Tyr 96146.doc -45- 200521231 65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Ser Gly Pro Tyr Ala Trp Phe Asp Thr Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser 115
<210> 32 <211〉 118 <212〉 PRT <213〉人造 <220> <223>記爲VHQ-N73D人化重鏈之部分胺基酸序列 <400> 32
Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 20 25 30 lie lie His Trp Val Lys Gin Glu Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45
Gly Tyr Phe Asn Pro Tyr Asn His Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser lie Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 96146.doc 46- 200521231
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Ser Gly Pro Tyr Ala Trp Phe Asp Thr Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 33 <211> 321 <212〉 DNA <213>人造 <220> <223>編碼胺基酸序列SEQIDN0:8之核苷酸序列 <400〉 33 gacattctgc ctctcctgca ggtcaggctc aggtttagtg gaagattttg gggaccaagc tgacccagtc gggccagtca caaggcttct gcagtggatc cagtgtatta ttgaaatcaa tccagccacc gaacattggc cataaggtct agggacagat ctgtcaacaa a ctgtctctga acaagcatac tcttctgagt tttactctta agtaatacct gtccaggaga agtggtatca ctatctctgg ccatcagcag ggccattcac aagagccact acaaaaacca gatcccttcc tctggagcct gttcggccag <210〉 34 <211> 354 <212〉 DNA <213>人造 <220> <223>編碼胺基酸序列SEQIDN0:31之核苷酸序列 <400〉 34 gaggtgcagc tggtggagtc aggagccgaa gtgaaaaagc ctggggcttc agtgaaggtg 96146.doc -47- 200521231 tcctgcaagg cctctggata cacattcact aattatatta tccactgggt gaagcaggag 120 cctggtcagg gccttgaatg gattggatat tttaatcctt acaatcatgg tactaagtac 180 aatgagaagt tcaaaggcag ggccacacta actgcagaca aatccatcag cacagcctac 240 atggagctca gcagcctgcg ctctgaggac actgcggtct actactgtgc aagatcagga 300 ccctatgcct ggtttgacac ctggggccaa gggaccacgg tcaccgtctc ctca 354 <210〉 35 <211〉 354 <212> DNA <213>人造
<220〉 <223>編碼胺基酸序列SEQIDNO:32之核苷酸序列 <400〉 35
caggtgcagc tggtggagtc aggagccgaa gtgaaaaagc ctggggcttc agtgaaggtg 60 tcctgcaagg cctctggata cacattcact aattatatta tccactgggt gaagcaggag 120 cctggtcagg gccttgaatg gattggatat tttaatcctt acaatcatgg tactaagtac 180 aatgagaagt tcaaaggcag ggccacacta actgcagaca aatccatcag cacagcctac 240 atggagctca gcagcctgcg ctctgaggac actgcggtct actactgtgc aagatcagga 300 ccctatgcct ggtttgacac ctggggccaa gggaccacgg tcaccgtctc ctca 354 <210> 36 <211> 8096 <212> DNA <213>人造 <220> <223>表現載體LCVLlSp20之核苷酸序列 <400> 36 ctagagtcct agagaggtct ggtggagcct gcaaaagtcc agctttcaaa ggaacacaga 60 agtatgtgta tggaatatta gaagatgttg cttttactct taagttggtt cctaggaaaa 120 96146.doc -48 - 200521231 atagttaaat actgtgactt taaaatgtga gagggttttc aagtactcat ttttttaaat 180 gtccaaaatt tttgtcaatc aatttgaggt cttgtttgtg tagaactgac attacttaaa 240 gtttaaccga ggaatgggag tgaggctctc tcatacccta ttcagaactg acttttaaca 300 ataataaatt aagtttaaaa tatttttaaa tgaattgagc aatgttgagt tggagtcaag 360 atggccgatc agaaccagaa cacctgcagc agctggcagg aagcaggtca tgtggcaagg 420 ctatttgggg aagggaaaat aaaaccacta ggtaaacttg tagctgtggt ttgaagaagt 480 ggttttgaaa cactctgtcc agccccacca aaccgaaagt ccaggctgag caaaacacca 540 cctgggtaat ttgcatttct aaaataagtt gaggattcag ccgaaactgg agaggtcctc 600 ttttaactta ttgagttcaa ccttttaatt ttagcttgag tagttctagt ttccccaaac 660 ttaagtttat cgacttctaa aatgtattta gaactcattt tcaaaattag gttatgtaag 720 aaattgaagg actttagtgt ctttaatttc taatatattt agaaaacttc ttaaaattac 780 tctattattc ttccctctga ttattggtct ccattcaatt cttttccaat acccgaagca 840 tttacagtga ctttgttcat gatctttttt agttgtttgt tttgccttac tattaagact 900 ttgacattct ggtcaaaacg gcttcacaaa tctttttcaa gaccactttc tgagtattca 960 ttttaggaga aatacttttt ttttaaatga atgcaattat ctaggacctg caggcatgct 1020 gttttctgtc tgtccctaac atgccctgtg attatccgca aacaacacac ccaagggcag 1080 aactttgtta cttaaacacc atcctgtttg cttctttcct caggaactgt ggctgcacca 1140 tctgtcttca tcttcccgcc atctgatgag cagttgaaat ctggaactgc ctctgttgtg 1200 tgcctgctga ataacttcta tcccagagag gccaaagtac agtggaaggt ggataacgcc 1260 ctccaatcgg gtaactccca ggagagtgtc acagagcagg acagcaagga cagcacctac 1320 agcctcagca gcaccctgac gctgagcaaa gcagactacg agaaacacaa agtctacgcc 1380 tgcgaagtca cccatcaggg cctgagctcg cccgtcacaa agagcttcaa caggggagag 1440 96146.doc -49- 200521231 tgttagaggg agaagtgccc ccacctgctc ctcagttcca gcctgacccc ctcccatcct 1500 ttggcctctg accctttttc cacaggggac ctacccctat tgcggtcctc cagctcatct 1560 ttcacctcac ccccctcctc ctccttggct ttaattatgc taatgttgga ggagaatgaa 1620 taaataaagt gaatctttgc acctgtggtt tctctctttc ctcatttaat aattattatc 1680 tgttgtttta ccaactactc aatttctctt ataagggact aaatatgtag tcatcctaag 1740 gcgggatatc gagatctgaa gctgatccag acatgataag atacattgat gagtttggac 1800 aaaccacaac tagaatgcag tgaaaaaaat gctttatttg tgaaatttgt gatgetattg 1860 ctttatttgt aaccattata agctgcaata aacaagttaa caacaacaat tgcattcatt 1920 ttatgtttca ggttcagggg gaggtgtggg aggtttttta aagcaagtaa aacctctaca 1980 aatgtggtat ggctgattat gatctctagt caaggcacta tacatcaaat attccttatt 2040 aaccccttta caaattaaaa agctaaaggt acacaatttt tgagcatagt tattaatage 2100 agacactcta tgcctgtgtg gagtaagaaa aaacagtatg ttatgattat aactgttatg 2160 cctacttata aaggttacag aatatttttc cataattttc ttgtatagca gtgcagcttt 2220 ttcctttgtg gtgtaaatag caaagcaagc aagagttcta ttactaaaca cagcatgact 2280 caaaaaactt agcaattctg aaggaaagtc cttggggtct tctacctttc tcttcttttt 2340 tggaggagta gaatgttgag agtcagcagt agcctcatca tcactagatg gcatttcttc 2400 tgagcaaaac aggttttcct cattaaaggc attccaccac tgctcccatt catcagttee 2460 ataggttgga atctaaaata cacaaacaat tagaatcagt agtttaacac attatacact 2520 taaaaatttt atatttacct tagagcttta aatctctgta ggtagtttgt ccaattatgt 2580 cacaccacag aagtaaggtt ccttcacaaa gatccggacc aaagcggcca tcgtgcctcc 2640 ccactcctgc agttcggggg catggatgcg cggatagccg ctgctggttt cctggatgcc 2700 gacggatttg cactgccggt agaactccgc gaggtcgtcc agcctcaggc agcagctgaa 2760 ccaactcgcg aggggatcga gcatccccca tggtcttata aaaatgcata getttaggag 2820 96146.doc -50- 200521231 gggagcagag aacttgaaag catcttcctg ttagtctttc ttctcgtaga cttcaaactt atacttgatg cctttttcct cctggacctc agagaggacg cctgggtatt ctgggagaag tttatatttc cccaaatcaa tttctgggaa aaacgtgtca ctttcaaatt cctgcatgat ccttgtcaca aagagtctga ggtggcctgg ttgattcatg gcttcctggt aaacagaact gcctccgact atccaaacca tgtctacttt acttgccaat tccggttgtt caataagtct taaggcatca tccaaacttt tggcaagaaa atgagctcct cgtggtggtt ctttgagttc tctactgaga actatattaa ttctgtcctt taaaggtcga ttcttctcag gaatggagaa ccaggttttc ctacccataa tcaccagatt ctgtttacct tccactgaag aggttgtggt cattctttgg aagtacttga actcgttcct gagcggaggc cagggtcggt ctccgttctt gccaatcccc atattttggg acacggcgac gatgcagttc aatggtcgaa ccatgatggc agcggggata aaatcctacc agccttcacg ctaggattgc cgtcaagttt gggggtaccg agctcgaatt agctttttgc aaaagcctag gcctccaaaa aagcctcctc actacttctg gaatagctca gagggccgag gcggcctcgg cctctgcata aataaaaaaa attagtcagc catggggcgg agaatgggcg gaactgggcg gagttagggg cgggatgggc ggagttaggg gcgggactat ggttgctgac taattgagat gcatgctttg catacttctg cctgctgggg agcctgggga ctttccacac ctggttgctg actaattgag atgcatgctt tgcatacttc tgcctgctgg ggagcctggg gactttccac accctaactg acacacattc cacagctgcc tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg ttggcgggtg tcggggcgca gccatgaccc agtcacgtag cgatagcgga gtgtatactg gettaactat gcggcatcag ageagattgt actgagagtg caccatatgc ggccgcatat gcggtgtgaa ataccgcaca gatgegtaag gagaaaatac cgcatcaggc getetteege 2880 2940 3000 3060 3120 3180 3240 3300 3360 3420 3480 3540 3600 3660 3720 3780 3840 3900 3960 4020 4080 4140 96146.doc -51 - 200521231 ttcctcgctc actgactcgc tgcgctcggt cgttcggctg cggcgagcgg tatcagctca ctcaaaggcg gtaatacggt tatccacaga atcaggggat aacgcaggaa agaacatgtg agcaaaaggc cagcaaaagg ccaggaaccg taaaaaggcc gcgttgctgg cgtttttcca taggctccgc ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga ggtggcgaaa cccgacagga ctataaagat accaggcgtt tccccctgga agctccctcg tgcgctctcc tgttccgacc ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg gaagcgtggc getttctcat agctcacgct gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc gctccaagct gggctgtgtg cacgaacccc ccgttcagcc 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96146.doc -62- 200521231 tgaggctcac ctcacatacc agcaagcgag tgaccagtta gtcttaaggc accacttctt agacatcatg gcttgggtgt ggaccttgcc attcctgatg gcagctgccc aaagtaagac atcagaaaaa agagttccaa ggggaattga agcagttcca tgaatactca ccttcctgtg ttcttttcac aggtgtccag gcagaggtgc agctggtgga gtcaggagcc gaagtgaaaa agcctggggc ttcagtgaag gtgtcctgca aggcctctgg atacacattc actaattata ttatccactg ggtgaagcag gagcctggtc agggccttga atggattgga tattttaatc cttacaatca tggtactaag tacaatgaga agttcaaagg cagggccaca ctaactgcag acaaatccat cagcacagcc tacatggagc tcagcagcct gcgctctgag gacactgcgg tctactactg tgcaagatca ggaccctatg cctggtttga cacctggggc caagggacca cggtcaccgt ctcctcaggt aagaatggcc actctagggc ctttgttttc tgctgctgcc tgtgggattt catgagcatt gcaaagttgt cctcgggaca tgttccgagg ggacctgggc ggactggcca ggaggggacg ggcactgggg tgccttgagg atctgggagc ctctgtggat tttccgatgc ctttggaaaa tgggactgag gttgggtgcg tctgagacag taactcagcc tgggggcttg gtgaagatcg ccgcacagca gcgagtccgt gaaatatctt atttagactt gtgaggtgcg ctgtgtgtca atttacatct taaatccttt 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96146.doc -86 - 200521231 agcctggggc ttcagtgaag gtgtcctgca aggcctctgg atacacattc actaattata ttatccactg ggtgaagcag gagcctggtc agggccttga atggattgga tattttaatc cttacaatca tggtactaag tacaatgaga agttcaaagg cagggccaca ctaactgcaa acaaatccat cagcacagcc tacatggagc tcagcagcct gcgctctgag gacactgcgg tctactactg tgcaagatca ggaccctatg cctggtttga cacctggggc caagggacca cggtcaccgt ctcctcaggt aagaatggcc actctagggc ctttgttttc tgctgctgcc tgtgggattt catgagcatt gcaaagttgt cctcgggaca tgttccgagg ggacctgggc ggactggcca ggaggggacg ggcactgggg tgccttgagg atctgggagc ctctgtggat tttccgatgc ctttggaaaa tgggactgag gttgggtgcg tctgagacag taactcagcc tgggggcttg gtgaagatcg ccgcacagca gcgagtccgt gaaatatctt atttagactt gtgaggtgcg ctgtgtgtca atttacatct taaatccttt attggctgga aagagaattg ttggagtggg tgaatccagc caggagggac gcggggggat cca <210〉 41 <211> 11563 <212> DNA <213〉人造 <220〉 <223>表現載體HCVHQSp20之核苷酸序列 <400> 41 ctagagaggt ctggtggagc ctgcaaaagt ccagctttca aaggaacaca gaagtatgtg tatggaatat tagaagatgt tgcttttact cttaagttgg ttcctaggaa 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ctcatgatct cctgaggtca ccgcgggagg caggactggc cccatcgaga ggacagaggc ccctacaggg gaccaagaac cgtggagtgg ggactccgac gcaggggaac gaagagcctc gggctctcgc cccagcatgg tttccacggg actgtcccca gccaggggct gctgccctgg tgcctctgta tcgggggcat gggacaggcc tcctgggggg cccggacccc agttcaactg agcagtacaa tgaatggcaa aaaccatctc cggctcggcc cagccccgag caggtcagcc gagagcaatg ggctccttct gtcttctcat tccctgtccc ggtcgcacga aaataaagca tcaggccgag cactggccca gccctcggca gctgggccac ggagactgtc gcctagtcca ccagccgggt accgtcagtc tgaggtcaca gtacgtggac cagcacgtac ggagtacaag caaagccaaa caccctctgc aaccacaggt tgacctgcct ggcagccgga tcctctatag gctccgtgat cgggtaaatg ggatgcttgg cccaccactg tctgaggcct ggctgtgcag gggtggggga gagaagccct ctgtcctgtg tgcgcgtagg gctgacacgt ttcctcttcc tgcgtggtgg ggcgtggagg cgtgtggtca tgcaaggtct ggtgggaccc cctgagagtg gtacaccctg ggtcaaaggc gaacaactac caagctcacc gcatgaggct agtgcgacgg cacgtacccc ccctgggccc gagtggcatg gtgtgcctgg tttgccagcg aggagcccct agcgccctgt gacaggccct ccacctccat ccccaaaacc tggacgtgag tgcataatgc gcgtcctcac 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ttcctgtgtc cacgcgcctc ctgcccccgg tgggaagcac ggtcaggagg aggctggtcc 3420 agctgcacct cgggggctcc ctgcactcgc cccccgcctc ctgcagccac acgcattgcc 3480 cgagcgaccc tccctggccc ctgtcactac atggacccct ggggcttctc ctcttttcta 3540 catggatgca gtttctcctc ctgctgggca cggtgctgcc tgccctggtc actctgcggg 3600 ggacagggcc tccagggaaa gctgggtcga ggctgggagc tggctcaggc tggccaggca 3660 gagccacagg gagggccttc cagaaccaac catggtccga agcgagaggt gggtgtcaga 3720 tccagacatg ataagataca ttgatgagtt tggacaaacc acaactagaa tgcagtgaaa 3780 aaaatgcttt atttgtgaaa tttgtgatgc tattgcttta tttgtaacca ttataagctg 3840 caataaacaa gttaacaaca acaattgcat tcattttatg tttcaggttc agggggaggt 3900 gtgggaggtt ttttaaagca agtaaaacct ctacaaatgt ggtatggctg attatgatct 3960 ctagtcaagg cactatacat caaatattcc ttattaaccc ctttacaaat taaaaagcta 4020 aaggtacaca atttttgagc atagttatta atagcagaca ctctatgcct gtgtggagta 4080 agaaaaaaca gtatgttatg attataactg ttatgcctac ttataaaggt tacagaatat 4140 ttttccataa ttttcttgta tagcagtgca gctttttcct ttgtggtgta aatagcaaag 4200 caagcaagag ttctattact aaacacagca tgactcaaaa aacttagcaa ttctgaagga 4260 aagtccttgg ggtcttctac ctttctcttc ttttttggag gagtagaatg ttgagagtca 4320 gcagtagcct catcatcact agatggcatt tcttctgagc aaaacaggtt ttcctcatta 4380 96146.doc •90- 200521231 aaggcattcc accactgctc ccattcatca gttccatagg ttggaatcta aaatacacaa acaattagaa tcagtagttt aacacattat acacttaaaa attttatatt taccttagag ctttaaatct ctgtaggtag tttgtccaat tatgtcacac cacagaagta aggttccttc acaaagatcc ggaccaaagc ggccatcgtg cctccccact cctgcagttc gggggcatgg atgcgcggat agccgctgct ggtttcctgg atgccgacgg atttgcactg ccggtagaac tccgcgaggt cgtccagcct caggcagcag ctgaaccaac tcgcgagggg atcgagcccg gggtgggcga agaactccag catgagatcc ccgcgctgga ggatcatcca gccggcgtcc cggaaaacga ttccgaagcc caacctttca tagaaggcgg cggtggaatc gaaatctcgt gatggcaggt tgggcgtcgc ttggtcggtc atttcgaacc ccagagtccc gctcagaaga actcgtcaag aaggcgatag aaggcgatgc gctgcgaatc gggagcggcg ataccgtaaa gcacgaggaa gcggtcagcc cattcgccgc caagctcttc agcaatatca cgggtagcca acgctatgtc ctgatagcgg tccgccacac ccagccggcc acagtcgatg aatccagaaa agcggccatt ttccaccatg atattcggca agcaggcatc gccatgggtc acgacgagat cctcgccgtc gggcatgcgc gccttgagcc tggcgaacag ttcggctggc gcgagcccct gatgctcttc gtccagatca tcctgatcga caagaccggc ttccatccga gtacgtgctc gctcgatgcg atgtttcgct tggtggtcga atgggcaggt agccggatca agcgtatgca gccgccgcat tgcatcagcc atgatggata ctttctcggc aggagcaagg tgagatgaca ggagatcctg ccccggcact tcgcccaata gcagccagtc ccttcccgct tcagtgacaa cgtcgagcac agctgcgcaa ggaacgcccg tcgtggccag ccacgatagc cgcgctgcct cgtcctgcag ttcattcagg gcaccggaca ggtcggtctt gacaaaaaga accgggcgcc cctgcgctga cagccggaac acggcggcat cagagcagcc gattgtctgt tgtgcccagt catagccgaa tagcctctcc acccaagcgg ccggagaacc tgcgtgcaat ccatcttgtt 4440 4500 4560 4620 4680 4740 4800 4860 4920 4980 5040 5100 5160 5220 5280 5340 5400 5460 5520 5580 5640 5700 96146.doc -91 - 200521231 caatcatgcg aaacgatcct catcctgtct cttgatcaga tcttgatccc ctgcgccatc 5760 agatccttgg cggcaagaaa gccatccagt ttactttgca gggcttccca accttaccag 5820 agggcgcccc agctggcaat tccggttcgc ttgctgtcca taaaaccgcc cagtctagct 5880 atcgccatgt aagcccactg caagctacct gctttctctt tgcgcttgcg ttttcccttg 5940 tccagatagc ccagtagctg acattcatcc ggggtcagca ccgtttctgc ggactggctt 6000 tctacgtgtt ccgcttcctt tagcagccct tgcgccctga gtgcttgcgg cagcgtgaag 6060 ctttttgcaa aagcctaggc ctccaaaaaa gcctcctcac tacttctgga atagctcaga 6120 ggccgaggcg gcctcggcct ctgcataaat aaaaaaaatt agtcagccat ggggcggaga 6180 atgggcggaa ctgggcggag ttaggggcgg gatgggcgga gttaggggcg ggactatggt 6240 tgctgactaa ttgagatgca tgctttgcat acttctgcct gctggggagc ctggggactt 6300 tccacacctg gttgctgact aattgagatg catgctttgc atacttctgc ctgctgggga 6360 gcctggggac tttccacacc ctaactgaca cacattccac agctgcctcg cgcgtttcgg 6420 tgatgacggt gaaaacctct gacacatgca gctcccggag acggtcacag cttgtctgta 6480 agcggatgcc gggagcagac aagcccgtca gggcgcgtca gcgggtgttg gcgggtgtcg 6540 gggcgcagcc atgacccagt cacgtagcga tagcggagtg tatactggct taactatgcg 6600 gcatcagagc agattgtact gagagtgcac catatgcggt gtgaaatacc gcacagatgc 6660 gtaaggagaa aataccgcat caggcgctct tccgcttcct cgctcactga ctcgctgcgc 6720 tcggtcgttc ggctgcggcg agcggtatca gctcactcaa aggcggtaat acggttatcc 6780 acagaatcag gggataacgc aggaaagaac atgtgagcaa aaggccagca aaaggccagg 6840 aaccgtaaaa aggccgcgtt gctggcgttt ttccataggc tccgcccccc tgacgagcat 6900 cacaaaaatc gacgctcaag tcagaggtgg cgaaacccga caggactata aagataccag 6960 gcgtttcccc ctggaagctc cctcgtgcgc tctcctgttc cgaccctgcc gettaccgga 7020 tacctgtccg cctttctccc ttcgggaagc gtggcgcttt ctcatagctc acgctgtagg 7080 96146.doc -92- 200521231 tatctcagtt cagcccgacc gacttatcgc ggtgctacag ggtatctgcg ggcaaacaaa agaaaaaaag aacgaaaact atccttttaa tctgacagtt tcatccatag tctggcccca gcaataaacc tccatccagt ttgcgcaacg gettcattca aaaaaagcgg ttatcactca tgcttttctg ccgagttgct aaagtgctca ttgagatcca cggtgtaggt gctgcgcctt cactggcagc agttcttgaa ctctgctgaa ccaccgctgg gatctcaaga cacgttaagg attaaaaatg accaatgctt ttgcctgact gtgctgcaat agccagccgg ctattaattg ttgttgccat gctccggttc ttagctcctt tggttatggc tgactggtga cttgcccggc tcattggaaa gttcgatgta cgttcgctcc atccggtaac agccactggt gtggtggcct gccagttacc tagcggtggt agatcctttg gattttggtc aagttttaaa aatcagtgag ccccgtcgtg gataccgcga aagggccgag ttgccgggaa tgctgcaggc ccaacgatca cggtcctccg agcactgcat gtactcaacc gtcaacacgg aegttetteg acccactcgt aagctgggct tategtettg aacaggatta aactacggct ttcggaaaaa ttttttgttt atetttteta atgagattat tcaatctaaa gcacctatct tagataacta gacccacgct egeagaagtg getagagtaa atcgtggtgt aggegagtta atcgttgtca aattetetta aagteattet gataataccg gggcgaaaac gcacccaact gtgtgcacga agtccaaccc gcagagcgag acactagaag gagttggtag gcaagcagca cggggtctga caaaaaggat gtatatatga cagcgatctg cgatacggga caccggctcc gtcctgcaac gtagttcgcc cacgctcgtc catgatcccc gaagtaagtt ctgtcatgcc gagaatagtg cgccacatag tctcaaggat gatcttcagc accccccgtt ggtaagacac gtatgtaggc gacagtattt ctcttgatcc gattaegege cgctcagtgg cttcacctag gtaaacttgg tetatttegt gggcttacca agatttatca tttatccgcc agttaatagt gtttggtatg catgttgtgc ggccgcagtg atccgtaaga tatgeggega cagaacttta cttaccgctg atettttact 7140 7200 7260 7320 7380 7440 7500 7560 7620 7680 7740 7800 7860 7920 7980 8040 8100 8160 8220 8280 8340 8400 96146.doc -93- 200521231 ttcaccagcg tttctgggtg agcaaaaaca ggaaggcaaa atgccgcaaa aaagggaata 8460 agggcgacac ggaaatgttg aatactcata ctcttccttt ttcaatatta ttgaageatt 8520 tatcagggtt attgtctcat gagcggatac atatttgaat gtatttagaa aaataaacaa 8580 ataggggttc cgcgcacatt tccccgaaaa gtgccacctg acgtctaaga aaccattatt 8640 atcatgacat taacctataa aaataggcgt atcacgaggc cctttcgtct tcaagaattc 8700 gagctcggta cccatcagcc aaaaagcatg cctgccacac aacatcaatt tctggaaaac 8760 gctacactta attatttcta gtagaacagc tctttggttt gccaaaaaga atcacctata 8820 gtggcatcta agcacaaaaa ggagaaaaaa atcacaaaga aatgattgag aggcataata 8880 aaaattatca aaaaattatg agttttacga tttcatcttt ttccaagttg aaatcatagg 8940 gtggctttaa cacagtgaca aggaatgtgc atgctgccat tatggtgctc tgcctaaaat 9000 ggttggagcc ttgtcatgct acagagaaac tgtcatacag cagggggtgc caaatttcca 9060 tattttttta tatcattgag caggtgcaca gaagaccaga aagcactttc tatcaggctg 9120 gccttcctct tcctttccag tatgaagcaa aaactgccaa tgaaactagc aattgttaaa 9180 ttcctttttc aaacagtatt tgtgctatca gaacatagtg cattcaaaag tctagcctga 9240 gagaacaacc cagttttatt cattcctcct actacctctc teattcccac tgtttgtgtt 9300 ctccctccca ttttaattgt ctatctagtc caaactaagc acacgatcca gtccacatta 9360 aacaacatgt tttcacttta agtcaaatac aagacacctt taatatcagc ccttgtteat 9420 aatcgtgctt ctagtgactt aatgtacatg tcacactgta ctgttgggtt ttgtgtctca 9480 tcatgaacaa tgttgtgaag gtattaagtg gagagtaagc agaattagat tcctctaatg 9540 atgcacaccc acactaagag cagaaataat attaaaaata gaaaaaaaag ttttacatga 9600 gatttcaaat acccaggtat gagctgcagt ttcttcaagt taaagcatcg aggttgtcag 9660 ttacactatt acaggaaaca tatgcagagt ttttatttta gtatattagt tttcacatat 9720 gtggaattac tattaaacta ttctttcttt tcaaatgctt accattgtaa atgagtttgt 9780 96146.doc -94- 200521231 gactttgtgt ttataggtag aactgctgtt tatgacacgt atgacacttc tatgggaaat gcaaatttca aggaatagaa aagagcagta acataatgag tgagcactga agaggactca caagctcagc caatgtgact tgaggctcac agacatcatg atcagaaaaa ttcttttcac agcctggggc ttatccactg cttacaatca acaaatccat aggtgagtgc ttttattcta catgaacttc ttcaccattt ccaaaatccc gaaaacccac caaggaaaga tccattatga tccactggaa tggtcactaa ggctgtaagg gaggacagca tatatagggt taggaagccc ctcacatacc gcttgggtgt agagttccaa aggtgtccag ttcagtgaag ggtgaagcag tggtactaag cagcacagcc acatgactct cttgactgtt ttaattgata tcactgtaac catattcaca attttataat ttagtcactg ttctggaggc aggataaagt tgggccactg tgtatgggtg cagtcagcat aagggatctt agtcatatgc agcaagcgag ggaccttgcc ggggaattga gcacaggtgc gtgtcctgca gagcctggtc tacaatgaga tacatggagc ggatgcctaa cagtgctaaa tatctcatga gatttttatg attgaactgt tttaaaatga gtgtgtgaga aaggaagaac cactacatct ttacactgtt aggacatcag gaactaataa tgtaaatctg aaatctagag tgaccagtta attcctgatg agcagttcca agctggtgga aggcctctgg agggccttga agttcaaagg tcagcagcct gaggactgaa aatacaactg gatctctaaa ttttatatta ttcaaagttt aatgtttatt gcagaggagc tgatgccaag gagcacagag atatgtataa gatgtaaacc acatcagata attgtgcatc aagactttag gtcttaaggc gcagctgccc tgaatactca gtcaggagcc atacacattc atggattgga cagggccaca gcgctctgag gaagttggag aggtccttta ctatttttat atgtaactat taccttgact ttatatttct ataagagttc gtttcagtat caggacatct ggctcaagaa cagctcaggt agataaggca cagtctagtt agtagaaatc accacttctt aaagtaagac ccttcctgtg gaagtgaaaa actaattata tattttaatc ctaactgcaa gacactgcgg 9840 9900 9960 10020 10080 10140 10200 10260 10320 10380 10440 10500 10560 10620 10680 10740 10800 10860 10920 10980 11040 11100 96146.doc -95- 200521231 tctactactg tgcaagatca ggaccctatg cctggtttga cacctggggc caagggacca cggtcaccgt ctcctcaggt aagaatggcc actctagggc ctttgttttc tgctgctgcc tgtgggattt catgagcatt gcaaagttgt cctcgggaca tgttccgagg ggacctgggc ggactggcca ggaggggacg ggcactgggg tgccttgagg atctgggagc ctctgtggat tttccgatgc ctttggaaaa tgggactgag gttgggtgcg tctgagacag taactcagcc tgggggcttg gtgaagatcg ccgcacagca gcgagtccgt gaaatatctt atttagactt gtgaggtgcg ctgtgtgtca atttacatct taaatccttt attggctgga aagagaattg ttggagtggg tgaatccagc caggagggac gcggggggat cca 11160 11220 11280 11340 11400 11460 11520 11563 <210〉 <211〉 <212> <213〉 A造 2 3)n^ 4 3d a/ <220> <223> HuCD45LC-Mlu 引子 <400> 42 aaaacgcgtt gtgacattct gctgacccag tct <210〉 43 <211> 31 <212〉 DNA <213>人造 <220〉 <223〉HuCD45LC-Hind 引子
<400> 43 aaaaaagctt ggtcccctgg ccgaacgtga a <210> <211〉 <212〉 <213> GDNAAii 96146.doc -96- 200521231 <220〉 <223〉HuCD45HCEup 引子 <400〉 44 caggcagagg tgcagctggt ggagtca 27 <210> 45 <211〉 27 <212> DNA <213>人造
<220> <223〉HuCD45HCQup 引子 <400> 45 caggcacagg tgcagctggt ggagtca <210〉 46 <211> 29 <212> DNA <213〉 人造 <220〉 <223> HuCD45HClo 引子 <400〉 46
aaatccttct agaactcacc tgaggagac <210〉 47 <211〉 20 <212> PRT <213> 人造 <220> <223> 領導序列 <400> 47
Met Asp Trp Thr Trp Arg Val Phe Cys Leu Leu Ala Val Val Ala Pro 15 10 15 96146.doc -97-
Trp Thr Leu Pro Phe Leu Met Ala Ala Ala Gin Ser 5 10 15
200521231
Gly Ala His Ser 20 <210〉 48 <211〉 19 <212> PRT <213>人造 <220〉 <223>領導序列 <400〉 48 Met Ala Trp Val
Val Gin Ala <210〉 49 <211〉 35 <212〉 DNA <213>人造 <220〉 <223〉aCD45H-N73D 引子 <400〉 49 gccacactaa ctgcagacaa atccatcagc acagc
35 96146.doc 98-

Claims (1)

  1. 200521231 十、申請專利範圍： 1 · 一種包含至少一個抗原結合位置之結合分子，其於序列上 包含高度可變區域CDIU、CDR2及CDR3，該CDR1具有胺 基酸序列 Asn-Tyi*-Ile-Ile-His(NYIIH)，該 CDR2具有胺基 酸序列 Tyr-Phe-Asn-Pro-Tyr-Asn-His-Gly-Thr-Lys-Tyr-Asn-Glu-Lys-Phe-Lys-Gly(YFNPYNHGTKYNEKFKG)及 該 CDR3 具有胺基酸序列 Ser_Gly_Pro_Tyr-Ala-Trp-Phe· Asp-Thr(SGPYAWFDT)。 2. 如請求項1之結合分子，其包含 (a) 第一個區塊於序列上包含高度可變區域CDR1、CDR2 及CDR3，該CDR1具有胺基酸序列Asn-Tyr-Ile-Ile-His(NYIIH)，該 CDR2 具有胺基酸序列丁丫1-?1^-Asn-Pro-Tyr-Asn-His-Gly-Thr-Lys-Tyr-Asn-Glu-Lys-Ph e-Lys-Gly(YFNPYNHGTKYNEKFKG)及該 CDR3具有胺 基酸序 列 Ser-Gly-Pro-Tyr-Ala-Trp-Phe-Asp-Thr (SGPYAWFDT);及 (b) 第二個區塊於序列上包含高度可變區域CDR1’、CDR2’ 及 CDR3’，CDR1*具有胺基酸序列 Arg-Ala-Ser-Gln-Asn-Ile-Gly-Thr-Ser-Ile-Gln(RASQNIGTSIQ)，CDR2’具有胺 基酸序歹，J Ser-Ser-Ser-Glu-Ser-Ile-Ser(SSSESIS)及 CDR3,具有胺基酸序列 Gln-Gln-Ser-Asn-Thr-Trp-Pro-Phe-Thr(QQSNTWPFT) 〇 3. 如請求項1或2之結合分子，其為嵌合或人化結合分子。 4. 如請求項1至3中任一項之結合分子，其中欲合或人化結合 96146.doc 200521231 分子為嵌合或人化單株抗體。 5 ·如請求項1至4中任一項之結合分子，其係包含不超過一個 醣化位置。 6. 如請求項5之結合分子，其中該醣化位置為N-醣化位置。 7. 如請求項1至6中任一項之結合分子，其中無醣化位置存在 於可變區域中。 8. 如請求項1至7中任一項之結合分子，包含有SEQ ID NO: 1 之多胜肽及/或SEQ ID NO:2之多胜肽。 9. 如請求項1至7中任一項之結合分子，包含有SEQIDNO:3 之多胜肽及/或SEQ ID NO:4之多胜肽。 1 (K如請求項8或9中任一項之結合分子，其為嵌合單株抗體。 11. 一種人化抗體之結合分子，其包含SEQIDNOA或SEQID NO:10之多胜肽及/或SEQIDNO:7或SEQIDNO:8之多胜 肽。 12. —種人化抗體之結合分子，其包含SEQ ID NO:31或SEQ ID NO:32之多胜肽及/或SEQIDNO:7或SEQIDNO:8之多胜 肽。 13. —種人化抗體之結合分子，其包含 -SEQ ID NO:9之多胜肽及SEQ ID NO:7之多胜肽， -SEQIDNO:9之多胜肽及SEQIDNO:8之多胜肽， -SEQ ID NO:10之多胜肽及SEQ ID NO:7之多胜肽， -SEQ ID NO:10之多胜肽及SEQ ID NO:8之多胜肽， -SEQ ID NO:31之多胜肽及SEQ ID NO:7之多胜肽， -SEQ ID NO:31之多胜肽及SEQ ID NO:8之多胜肽， 96146.doc 200521231 •SEQ ID NO:32之多胜肽及SEQ ID NO:7之多胜肽，或 -SEQ ID NO:32之多胜肽及SEQ ID NO:8之多胜肽。 14. 一種分離的多核苷酸，其包含編碼如請求項1至13中任一 項之結合分子的多核苷酸。 15. 如請求項14之多核苷酸，其係編碼如請求項2之CDR1、 CDR2及CDR3之胺基酸序列及編碼如請求項2之CDR1’、 CDR2’及CDR3*之胺基酸序列之多核苷酸。 16. —種編碼CDR1’、CDR2’及CDR3’之胺基酸序列之多核苷 酸，其根據該 CDR1’具有胺基酸序列 Arg-Ala-Ser-Gln-Asn-Ile-Gly-Thr-Ser-Ile-Gln(RASQNIGT SIQ) ， CDR2,具有胺基酸序歹，J Ser麵Ser-Ser-Glu-Ser-Ile-Ser(SSSESIS) 及 CDR3’具有胺基酸序列 Gln-Gln-Ser_Asn-Thr-Trp-Pro_Phe-Thr (QQSNTWPFT)。 17. —種多核苷酸，其包含SEQIDNO:5之多核苷酸及/或SEQ ID NO:6之多核苦酸。 18. —種多核苷酸，其包含編碼SEQ ID NO: 7或SEQ ID NO: 8 之多胜肽及/或SEQIDNO:9或SEQIDNO:10之多胜肽之 多核苷酸。 19·一種多核苷酸，其包含SEQIDNO:ll或SEQIDNO:12之 多核苷酸及/或SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:14之多核苷 酸。 20.—種多核苷酸，其包含編碼SEQ ID NO: 7或SEQ ID NO: 8 之多胜肽及/或SEQ ID NO:31或SEQ ID NO:32之多胜肽之 多核苷酸。 96146.doc 200521231 21·—種多核苷酸，其包含SEq ID N〇:34或SEQ m N〇:35之 多核苷酸及/或SEQIDNO:33;SEQIDNO:14或SEQID ΝΟ··13之多核苷酸。 22.—種表現載體，其包含如請求項14至21中任一項之多核皆 酸。 2 3 · —種表現糸統’其包含如請求項14至21中任一項之多核苦 酸，其中當該表現系統或其部分存在於可相容宿主細胞 中時’该表現糸統或其部分能夠製造如請求項1至1 3中任 一項之多胜肽。 24. —種表現系統，其包含如請求項14至21中任一項之多核苦 酸’其中當該表現糸統或其部分存在於可相容宿主細胞 中時，該表現系統或其部分能夠製造其包含至少一個抗 原結合位置之結合分子，於序列上其包含高度可變區域 CDR1、CDR2及CDR3，該CDR1具有胺基酸序列Asn_Tyr-Ile-Ile-His(NYIIH)，該 CDR2 具有胺基酸序列丁丫!^!^ Asn-Pro-Tyr-Asn-His-Gly-Thr-Lys-Tyr-Asn-Glu-Lys-Phe-Lys-Gly(YFNPYNHGTKYNEKFKG)及該 CDR3 具有胺基 酸序列 Ser_Gly-Pro-Tyr-Ala-Trp-Phe-Asp-Thr(SGPYAWFDT)。 25· —種分離的宿主細胞，其包含如請求項23或24中任一項之 表現系統。 2 6 _ —種如請求項1至13中任一項之結合分子或人化抗體作為 醫藥之用途。 27.如請求項26之用途於治療及/或預防自體免疫疾病、移植 排斥、牛皮癣、皮膚炎、發炎性腸道疾病及/或過敏症。 96146.doc 200521231 28·如請求項27之用途於治療及/或預防移植抗宿主疾病 (GVHD, graft versus host disease) ° 29. —種如請求項丨至13中任一項之結合分子或人化抗體於製 備治療胰島細胞移植排斥的藥劑之用途。 30·如請求項26至29中任一項之用途，其中結合分子或人化抗 體其包含SEQ ID N0:31或SEQ ID NO:32之多胜肽及/或 SEQ ID NO:7或 SEQ ID N0:8之多胜肽。 31· —種醫藥組合物，其包含如請求項1至13中任一項之分子 或人化抗體伴隨至少一種醫藥上可接受的載體或稀釋 劑。 32· —種治療及/或預防關於自體免疫疾病、移植排斥、牛皮 癣、皮膚炎、發炎性腸道疾病及/或過敏症之疾病的方法， 其包括給予需要此治療及/或預防的對象有效量之如請求 項1至13中任一項之分子或人化抗體。 33· —種治療及/或預防牛皮癣的方法，其包括給予需要此治 療及/或預防的對象有效量之如請求項1至丨3中任一項之 結合分子或人化抗體。 34. —種治療及/或預防移植抗宿主疾病（GVHD，graft host disease)的方法，其包括給予需要此治療及/或預防的 對象有效量之如請求項丨至13中任一項之分子或人化抗 體。 35. —種治療及/或預防關於胰島細胞移植排斥之疾病的方 法，其包括給予需要此治療及/或預防的對象有效量之如 請求項1至13中任一項之結合分子或人化抗體。 96146.doc c 200521231 3 6.如請求項32至35中任一項之方法，其中結合分子或人化抗 體其包含SEQ ID NO:31或SEQ ID NO:32之多胜肽及/或 SEQ ID NO:7 或 SEQ ID NO:8 之多胜肽。 3 7. —種具有對CD45RO及CD45RB兩者皆有結合專一性的結 合分子於醫藥之用途。 3 8.如請求項37之用途，其中結合分子為嵌合、人化或完全人 類單株抗體。 39. 如請求項37或38之用途，其中結合分子以解離常數 (Kd)<15 nM結合至CD45RO同分異構物。 鲁 40. 如請求項37或38之用途，其中結合分子以解離常數 (Kd)<15 nM結合至CD45RB同分異構物。 41. 如請求項37至40中任一項之用途，其中結合分子結合 CD45同分異構物，其 -包括CD45分子之A及B抗原決定部位，但非C抗原決定 部位；及/或 -包括CD45分子之B抗原決定部位，但非A及非C抗原決 定部位；及/或 Φ -不包括CD45分子之任何A、B或C抗原決定部位之同分 異構物。 42. 如請求項37至41中任一項之用途，其中結合分子不結合 CD45同分異構物，其 -包括CD45分子之所有A、B及C抗原決定部位；及/或 -包括CD45分子之B及C抗原決定部位，但無A抗原決定部 位。 43. 如請求項37至42中任一項之用途，其中結合分子結合至 96146.doc 200521231 PEER細胞上之其目標抗原決定部位，及其中該結合為以 Kd<15 nM。
    96146.doc
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