TW200488B - - Google Patents

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200488 Λ 6 Π 6 五、發明説明（1 ) 链明背普 轻明節籌 本發明係有5S命名為LL-E19020 7之新穎抗生素，其製 •備及回收與純化之方法。 生前埒Μ銳明 — 美國專利第4,705,688號，抗生素雜誌41 (10)， 1511-1514 (19δδ)及抗生素雜誌 42(10), 14S9-1493 (1989)中揭示抗生素 LL-E19020 α 及 LL-E19020 /3 ° 抗生 素LL-E19020 α於C-21a上接有一個三糖，而C-23上接有 苯基醋酸醋基團，其结構如下： _

抗生棄LL-E19020 /3於C-21a上接有一個三糖，而在 (請先閱讀背而之注音？事項再塡寫本頁) 裝· 訂· 線. 經濟部屮央栉準局A工消奸合作杜印11 C-24上接有苯基醋酸酯基團，其结構如下：

本畝张尺度边用中SS家槔準（CNS)甲4規tM210x297公龙） 8]. 6. 10,000張⑻ 200488 Λ f) Π 6 五、發明説明（2 ) 色層分析雑誌4S4, 38 1 - 390 ( 1 98 9 )揭示一種Μ逆相 HPLC纯化法纯化抗生素LL-E19020 α之方法。美國專利第 4,704,276 及 4, 96δ,493 號中亦揭示抗生素 LL-E19020 α 及LL-E109020 /S可用於增加產肉動物之生長速率及治療 呼吸道疾病、雞瘟及壊死性腸炎。 ~ 抗生素雜誌41 ( 1 0 ), 1 293 - 1 299 ( 1 988 );抗生素雜誌 4 1 (1 0 )，1 3 0 0 - 1 3 1 5 ( 1 9 8 8 );抗生素雜誌 3 9 U 0 ), 1361-1367 (1986);抗生素雜誌 42(1), 94-101 (1989); 抗菌劑及化學療法雜誌，33(3 ), 322-325 (1989);及 1987年十月4- 7日舉行之第27屆抗菌劑化學療法内科會議 之計副及摘要第995號，第270頁中報告一族相闞之化合物 ，苯基法笼素（phenelfamycins)。 薛明槪要 現已發現命名為LL-E19020 7之新穎抗生素。該新穎抗· 生素LL-E 1 9020 7之结構如下： (請先閱讀背而之注意事項#填窍木頁) 裝- 訂- 線_ 經濟部屮央標準而A工消价合作社印31

從上述结構可知，抗生素LL-E19020 7與先前已知之抗 生素LL-E19020 α及LL-E19020 Θ不同之處在於 L L - E 1 9 0 2 0 7於C - 2 3上接有一個4 -羥苯基酷酸目旨基團。 本紙張尺度边用中S Η家烊準（CNS)*H規格（210x297公龙） 81. ti. 10,000張⑻ 200488 五、發明説明（3) LL-E19020 7之物化特性如下： 1. 分子量：1241(相應於[M+Na]+ FABMS=M/Z 1264 ) 2. 分子式：CesHesNOaz 微分析發現值（估計值）：C62.22( 62.85 ); H7.77 (7.66 ) ; N 0.92 (1. 13 )。 HRFAMBS: (Μ + 1Π+ = Μ/Ζ 12S0.5983 (估計值 1280.5983) 3. 比旋光度：[α]|β=-7〇 ( 1.001, MeOH) 4. 紫外線吸收光譜如圈I所示。 紫外線吸收[ΜβΟΗ]λ»βχ(ε): 231 nu (58,600); 2 8 7 η η ( 3 9 , 0 0 0 )。 5. 紅外線吸收光譜如圖I所示。 紅外線吸收[ΚΒ「]ν„·χ: 3411br, 2974, 2934, 2828, 1735, 1716sh, 1700, 1652, 1647, 1617, 1455, 1367 , 1222 , 1098 . 1023 cm~1 ° (請先閲讀背面之注意事項再码寫木頁) 裝- _ 經濟部屮央檁準而β工消"合作社印31 6 . 筲子 NMR [CDC1 a ]:光譜（ 300 MHz)如1 Η η 所示。 7 . 碳13 13 C HMR[CDCU]:光譜 如圖IV所示. 有意義之峰 值如 下 (TMS中之 δ值）： 173 . 4 127 . 5 74 • 64 49 . • 77 171 . 9 126 · 3 74 .51 41 .85 170 . 1 125 . 1 74 .42 40 • 92 ^ 155. 7 120 . 7 74 .07 39 .91 145. 7 115. 6 (2Χ) 72 • 19 39 .23 140 . 3 100 · 5 71 .83 38 .81 -5 - 本紙張尺度边用中國a家榀準（CNS)甲4規格（210x297公及) 200488 Λ 6 U 6 五、發明説明（4) 136 . 9 98 • 90 69 .10 32 .98 134 . 3 97 .28 67 .57 30 .98 132 . 0 96 .93 66 • 40 29 .91 130. 6 (2Χ) 89 • 16 66 • 07 23 .75 130 . 1 83 • 21 63 .57 18 .10 129 . 0 81 .64 56 .53 17 .20 128 . 5 77 .63 56 .10 17 .00 128 . 3 77 .20 55 .50 14 .84 128 . 2 76 • 46 55 .45 13 .5〇' 128 . 1 10 • 97 10 .18 8 . 使用 在 醋 酸 溶 液 中之 乙 腈梯 度 9 高 壓液 態 層 析法 ( HPLC ) 之 滯 留 時 間為 18 .5分 鐘 〇 9 . 使在 用 醋 酸 溶 液 中之 二 噚烷 梯 度 ， 高屬 液 態 層析 法 ( HPLC ) 之 滯 留 時 間為 19 .6分 鐘 〇 該 新穎 抗 生 素 LL ，E 19020 7係 在 控 制 條件 下 培 養利 嘉 鏈 黴 菌 坦沙 尼 爾 斯 亞 種 NRRL 1 80 36 時 t 伴 阐LL -E :19020 α 及 LL -Ε19020 β 之 生 成 而產 生 。將 該 新 穎 抗生 素 LL -E19020 7 與 LL-E19020 a 及 LL-E19020 β 分 離 ,接 著 K 高壓 液 態 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝· 訂 線- 經濟部+央梂準局1^工消#合作杜印尨 層析法（Η P L C )纯化。 画式簡诚 圖I所示係LL-E19020 7之紫外線吸收光譜。 圖II所示係LL-E19020 7之紅外線吸收光譜。 圖ΠΙ所示係L L - Ε 1 9 0 2 0 7之質子核磁共振光譜。 圖IV所示係L L - Ε 1 9 0 2 0 7之C - 1 3核磁共振光譜。 -6 - 本紙ifc尺度逍用中國Η家標準（CHS) Τ4規格（210x297公龙） 200488 Λ 15 (i 經濟部中央標準局^工消费合作社印製 五、發明説明（5 ) 較徉具鵂啻腌例銳明 抗生素LL-E19020 7係於含有可同化碳源及氮源之水性 營養培養基中需養發酵利嘉鐽緻菌坦沙尼爾斯HRRL 18036菌株而製得。該微生物係保存於紐約珍珠河市美國 氰胺公司B藥研究部門之培養品種收集處，编碼為 _ LL-E19020 。該新穎抗生素之活培養物已寄存於伊利諾州 61604皮爾利市美國農業部北區研究中心之専利培養物收 集實驗室中，且已列為永久培養物。該寄存中心將該菌株 命名為 NRRL· 18036 。 培養物LL-E19020產生短螺旋狀孢子鏈，為10至50個孢 子長，有時孢子鐽較長。該等孢子鏈有接合之傾向，而在 ISP培養基，如燕麥片及無機鹽-澱粉上形成乾燥黑色围 塊。以電子顯微鏡檢視，該孢子具有光滑表面。該菌株含 有二胺基庚二酸之L -異構物，從而分類為_黴菌靥。 在碳水化合物利用之ISP試驗中，LL-E19020可依靠阿 拉伯糖，果糖，肌醇，甘露糖醇，蜜三糖，鼠李糖，蔗糖 及木糖而生長，而不利用嫌維素。 下文表I係LL-E19020與生理與外形與其最相近之利嘉 鏈黴素ISP 5461,在高登生理系列（Gordon physiological series )中反應之比較。 因為LL-E19020與ISP 5461有五處不同之特徴（黃嗎„呤 水解，草酸鹽去羧基作用，使赤摒醇.鼠李糖及甲基 -D-木糖苷形成酸），故被命名為利黑鐽》菌之亞種。^_L_ -7 - (請先閲請背而之注意事項再填寫木頁) 裝· 線. 本紙張尺度边用中SB家楳準（CNS)T4規格（210X297公;tt) 81. 6 . 10,000張（i!) 200488 Λ 6 Μ 6 五、發明説明（6 ) 經濟部中央櫺準局β工消费合作社印3i U/RE19020及利惠锤徽菌TSP之窩替試賒反_ 反觴 1.!,-R1<i020 ISP 546 降解/轉化 酪蛋白 ,+ + 黃喋呤 + 次黃喋呤 + + 酪胺酸 + + 腺嘌呤 + + 齑牛 - 澱粉酶 + + 白明膠酶 + + 磷酸酯酶 + + 硝酸鹽堪原酶 - - 尿素酶 + + 七葉甘酶 + + 牛#於 5 χ氯化納 + + 水楊酸鹽 - - 溶菌酶原汁 微量 微量 利闬 醋酸鹽 + 苯甲酸鹽 + + 榫檬酸鹽 + + 羌 T (鏞） (請先閲請背而之注意事項再填窍本頁) 裝· 訂 線. 本紙張尺度边用中國Η家楳準（CNS) T4規格（2丨0X297公龙） 81. 6. 10,000¾ (H) 200488 Λ (; 15 6 五、發明説明（7 ) I.1.-F.R19020及刹翥铺徽菌TSP之高登試賒反腱 TSP 5461 經濟部屮央準杓只工消费合作社印製 乳酸鹽 蘋果酸鹽 黏酸鹽 箄酸鹽 丙酸鹽 丙嗣酸鹽 琥珀酸鹽 酒石酸鹽 牛再·溫麻ίο π42t 50 t： 斋牛辟 核糖醇 阿拉伯糖 纖維二糖 糊精 半乳糖酵 赤癣糖醇 果糖 半乳糖 表 T (鑛） (請先閲請背而之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度边用中國ffl家橒準（CNS) 規格（210x297公龙） 81. 6. 10.000¾ (H) 200488

Λ 6 Η G 經濟部屮央栉準而β工消份合作社印3i 五、發明説明（8 ) 利嘉播激菌TSP之高铎試賒反腱 反應 葡萄糖 甘油 肌酵 乳糖 麥芽糖 甘兹糖醇 甘茲糖 蜜二糖 α -甲基-D-葡萄糖苷 + + 蜜三糖 + + 鼠李糖 + - 水揚苷 + + 山梨糖醇 + + 蔗糖 + + 海_糖 + + 木糖 + + /3 -甲基-D-木糖苷 + - 應了解，上述特徴僅係說明之用，為製備該新穎抗菌劑 ，本發明並不限於該特定微生物，或不限於完全符合上_述 特微之微生物。事實上，吾人驥想可包括使用經各種方法 所生成之該微生物突變株，突變之方法如曝S於X -輻射， 紫外線輻射，Ν’-甲基- Ν’ -硝基-N-亞硝基胍，放線菌噬菌 -10 - U.-F.1 9020 TSP 1 (請先閲請背而之注意事項再填寫本頁) 裝- 訂 線· 本紙張尺度边用中國ffl家標準（CNS) Ή規怙（210x297公龙） 81. 6.】0,_張（1[) 經濟部屮央榀準XJCX工消赀合作杜印製 200488 五、發明説明（9 ) 體等。 利嘉鏈徽菌坦沙尼爾斯亞種NRRL 18036之培養可在多種 液態培養基上進行。可用於製備LL-E19020 7之培養基含 有—種可同化之碳源，諸如糊精，蔗糖，麥茅糖，甘油等 ;—種可同化之氮源，諸如蛋白質，蛋白霣水解產物，多 胜肽，胺基酸及玉米糖漿等；及無機陰離子及陽離子，_諸 如鉀，納，銨，鈣，硫酸鹽，碳酸鹽，磷酸鹽，氛化物等 。微量原素，諸如钃，鉬及飼等係圼培養基中其他成份之 雜質方式而添加。發酵權中之通氣作用係將無菌空氣強迫 通過或通至發酵培養基之表面。係使用機械攪拌冀進行發 酵槽之進一步攪拌作用。若需要，可加入消泡劑，諸如矽 _油° 抗生素LL-E19020 7從發酵原汁中之回收，係藉以諸如 醋酸乙酯之溶劑萃取該原汁，接著使用〇_1Μ醋酸銨pH4.3 /乙腈（1: 1 )M — 12公升逆相管柱（C18接合相40微米 )高壓液態層析該羥醋酸乙酯萃取之原汁，得LL-E19020 γ及LL-E10929 α之混合物。堪績使用〇.1}<醋酸銨？[14.3 /乙腈（1: 1 )以一 12公升逆相管柱（C18接合相40微米 )高壓液態層析純化該綬混合物，得純化之LL-E19020 7 及 LL-E 1 9020 cc。 奮例一 接種物之脚借 一 依據下列配方製備用於使原始接種物生長之檷準培養基 -11- 本紙張又度边用中國®家橒準（CNS)T4規ta(210x297公龙） 81. 6. 10,000張（ί!) (請先lttli/ί背而之注意事項4填寫本頁)

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Λ fi 15 G 五、發明説明（10) 右旋糖 糊精 酵母萃取物 N Z Amine A 碳酸鈣 消泡劑 加水至 1.0¾ 2.0¾ 0.5¾ 0.5¾ 0.1¾ 0.3¾ 100.0¾ 經濟部屮央櫺準^工消奸合作社印^ 注意事項：NZ Amine A為酪蛋白之胰液消化物，係紐約 偉市Scheffield Chemical公司之註冊商標。 該培蓍基經滅菌後，取其10 0奄升（在500毫升燒瓶中 )接種利嘉鐽徽菌坦沙尼爾斯亞種NRRL 18036。然後將該 培養基置於旋轉式振盪器上，在28Ό下培養48小時，其係 原始接棰物。隨後，K該原始接種物接種在瓶中之10公升 相同滅菌培養基。該培養物生長24小時後成為第二接種物 。而後，以該第二接種物接種在發酵權中之300公升相同 滅菌培養基中。在301下培養該培養基44小時，通過每分 鐘每公升糖化膠0.66公升之滅菌空氣，並以200 rpm攪拌 翼攪拌之，得第三接種物。 g例二 發睹 製備配方如下之發酵物培養基 糊精 右旋糖 大豆粉 .0¾ .5% .5¾ 12 (請先閲請背而之注意事項再填寫本頁) 本紙张尺度逍用中家楳準（CHS)IM規格（210X297公放） 81. 6. 10,000張⑻ 200488 Λ Η 6 五、發明説明（1马 經濟部屮央楛準而β工消«·合作社印製 玉 米 漿 0 . 5¾ 碳 酸 m 0 . 5¾ 矽 嗣 消 泡 劑 0 . 3¾ 加 水 至 100 . 0¾ 此 培 養 物 纆 滅 菌 後 » 取 其 1 5 0 0 公 升 » 以1 50 公 升 實 例- — 之 第 三 接 種 物 接 種 0 於 28Ό 下 進行 發 酵 .通 遇 每 分 鐘 每 公 升 糖 化 膠 3 . 3 公 升 之 滅 菌 空 氣 >並 使 用 100 Γ Ρ m m 拌 翼 攪 拌 123 小 時 t 此 時 收 集 糖 化 膠 〇 首 例 三； 製 備 配 方 如 下 之 發 酵 物 培 養 基 糊 精 7 . 0¾ 右 旋 糖 0 · 5% 大 豆 粉 1 . 5¾ 玉 米 漿 0 . 5¾ 碳 酸 鈣 0 . 5% 矽 m 消 泡 劑 0 . 3¾ 加 水 至 100 . 0¾ 此 培 養 物 m 滅 菌 後 取 其 3 0 0 0 公 升 9 以300 公 升 類 似 於 實 例 — 所 製 備 之 第 三 接 種 物 接 種。 於 28 J下 進 行 發 酵 通 過 每 分 鐘 每 公 升 耱 化 膠 6 . 5 公 升之 滅 菌 空氣 » 並 使 用 100 r P C1 m 拌 m m 拌 89小 時 9 此 時 收集 糖 化 膠。 窗 例 四 LK- -F.1 90?f > ^之分雜及会 S 例 二 及 實 例 三 所 述 之 兩 次 發酵 作 用 所得 糖 化 膠 缌 體 積 13 (請先閲請背而之注意事項再填窍本頁) 裝· 訂- 線， 本紙51c尺度边用中Η Η家標準（CNS) T4規格（210X2取公龙） 81. 6. 10,000張（II) 200488 Λ Η (5 經濟部屮央標準而β工消费合作社印虹 五、發明説明（13 達3 2 0 0公升，Κ 1 6 0 0公升甲醇稀釋之，並通過矽藻土過濾 。以3 2 0公升水沖洗濾餅，將沖洗液加至濾液中，得總體 積5000公升。取800公升至蒸餾器中，蒸發成500公升。 重複此步驟，直至缌體積降為295 α公升為止，繼之以 1 450公升醋酸乙酯稀釋。移除下層，將900公升上層蒸g 成79 . 5公升。K 80公升醋酸乙酯稀釋該濃縮液，移除下層 。蒸發上層，得2.4公升糖漿。重覆K己烷傾析該粗產物 ，將之溶於甲酵中，並部份部份地加至一 12公升逆相管柱 中（C18接合相40微米）。於棵準操作中，將400毫升糖 漿溶於甲酵中，得终膀積700毫升，置入逆相管中，於 pH 4.3下以1: 1 0.1M醋酸銨：乙腈溶析，蒸發揮發質， 得38克未纯化LL-E1902 0 7 。如此操作數次，结合所得產 物0 1.1.-F. 19020 α Έί l.l.-F. 1 9020 純化 將總共100克之未純化LL-E19020 7加至一 12公升逆相 管柱（C18接合相40微米）中，以0.1M醋酸銨緩衝液pH 4.3乙晴溶析（1:1 )溶析。將各部份命名為F卜F28,每 一部份收集之體積為20公升。將F4部份與15公升二氣甲烷 攪拌1小時。分離二氯甲烷層，蒸發成1公升，K氛化鈣 乾燥之.蒸發後將殘餘物溶於75毫升甲醇中，過濾之。Μ 每次5毫升之量將該濾液加至一 2.2 X 25公分（10微米_ )逆相C18層析管柱中。以9.9毫升/分中之速率，使用 40%在0.05 Μ醋酸銨媛衝液（pH 4.5 )中之乙睛溶析該管 柱。以醋酸乙酯萃取經2.5至3小時後所收集之溶析液。 -14 - (請先閲請背而之注意事項再填寫木頁) 本紙张尺度边用中8困家標準（CNS) <Ρ4規格（210x297公;¢) 81. 6. 10,000¾ (H) 200488 Λ 6 η g 五、發明説明（13) 蒸發有機相層成一糖漿，將之溶於t -丁醇中，冷凍乾燥後 得160毫克纯化LL-E19020 7 。 分枳#高Μ液餽層析法（HP I.C) 以兩種不同之分析性高壓液態層析法分析LL-E19020 7 成份。與LL-E19020 α及/3相較，其滯留時間顯示於下""表 經濟部中央櫺準局员工消费合作社印51 滯留 時 間 ( 分鐘 ) 成 份 糸统 A 系统 B LL -E19020 α 22 . 7 23 . 5 LL -E19020 β 27 . 6 26 . 7 LL -E 1 9020 7 18 . 5 19 . 6 A Η P L C 系 统： 具 有 護 管之 Α1 It e c h a d s 〇 r b 0 S ph ere HS 5 u Cl 8 管 柱（ 4 . 6 X 250 毫 米 ) > 以乙 腈 之 1¾醋酸 溶 液 梯 度 溶 析 〇 起始 姐 份 為 40 % 乙 腈 » 線 性地 於 25分 鐘内 增 加 至 70 % 4 保 持70 % 5分 鐘° 流 速 為 1 . 0毫 升 / 分 鐘0 B Η P L C 糸 统： 具 有 護 管之 A 1 It e c h a d s 〇 r b 0 S p h ere HS 5 u Cl 8 管 柱（ 4 . 6 X 250 毫 米 ) Μ 二 m 垸 之 1 ί；醋 酸 溶 液 梯 度 溶 析 。起 始 姐 份 為55 % 二 吗 院 ,於 25分 鐘 内增 加 至 70 % » 並 保 持70 % 五 分 鐘。 流 速 為 1 . 0毫 升 / 分 鐘。 1,1,- Ε19020 Μ ΤΜ1 TL γ夕活鵂外抗菊活忡 以 標 準 瓊 脂稀 釋 培 養 法， 針 對 多 種 革蘭 氏 陽 性 菌及 陰 性 菌 * 測 定 LL .-E19020 7 之活 體 外 抗 菌 活性 〇 將 含 有5¾羊 血 及 Μ 兩 倍 增 加濃 度 LL ‘-Ε19020 7 之 牟 爾- 希 頓 瓊 脂（ -15- 本紙張尺度边用中國a家捣準（CNS)甲4規格（210x297公龙） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝. 訂 線- 經濟部屮央樑準杓贝工消伢合作社印製 200488Λ f;____H_G___ 五、發明説明（I4) Mueller-Hinton agar )倒入培養皿中。K史提爾裡製器 將瓊脂表面接種1至5 X 104個菌落形成單位之细菌。記 錄經18小時培養後可抑制一種菌株生長之抗生素最低灌度 ,為該菌株之最低抑制濃度。 璁脂稀箱掊着之傷低抑制遒麻方法 1.在牟爾-希頓原汁中製備範圍介於2560至0.15微克/ 奄升之連續兩倍藥物稀釋液及溶液對照姐。 2 .將2奄升蕖物稀釋液（1 〇 X )加至加有含5 · 6 去纖維 蛋白羊血之18毫升牟爾-希頓瓊脂之滅菌螺旋蓋瓶中。在 含有5¾羊血之瑱脂中，藥物之最終濃度為256至0.015微 克/奄升。 3. 將每一測試微生物之一些分雛菌落接種在5毫升胰蛋 白酶大豆原汁或腦心臟灌注原汁中。在3510下振盪培養物 五小時。 4. 在牟爾-希頓原汁中稀釋每一培養物1:50倍（ ),使用史提爾複製器塗在瓊脂板上。對照姐瓊脂 板應最後接種，以確保活性有楗體在整個操作中存活。靜 置垤接種之瓊脂板，直至接種斑被完全吸收。 5. 轉化瓊脂板，在35C下於二氧化碳中培養18小時。 6. 記錄出現完全抑制作用時之抗菌劑最低濃度為最低抑 制港度（MIC )。细小、幾乎不可見之孩狀或單一菌落二F 記0 其结果如下： LL-E 1 9020 7夕沃髁外杭Μ活忡 -16 - (請先閲請背而之注意事項4塡寫本頁) 本紙尺度边用中S Η家橒準（CNS) ΤΜ規格（2丨0x297公；»：) 81. 6. 10,000張（Η) ^00488 五、發明説明（15 ) Λ (ί I? 6 經浒部屮央棵準局Α工消仲合作社印31 最 低抑制 ί滴麻（ 微克/豪孙） 有 楠 髑 L_L -R 1 9 0 2 0 ^ 1 . 金 黃 葡 萄 球 菌 NEMC 87-69 32 2 . 金 黃 葡 萄 球 菌 ROSE (MP) ΐ 32 3 . 金 黃 葡 萄 球 菌 IVES 160 32 4 . 金 黃 葡 萄 球 菌 IVES 396 64 5 · 金黃葡萄球菌 VGH 84-47 64 6 . 金 黃 葡 萄 球 菌 CMC 83-131 64 7 . 金 黃 葡 萄 球 菌 SMITH (MP) 128 8 . 金 黃 葡 萄 球 菌 ATCC 25923 >128 9 . 金 黃 葡 萄 球 菌 ATCC 292 1 3 128 ία 溶 血 葡 萄 球 菌 AV AH 88-1 64 1L 溶 血 葡 萄 球 菌 AV AH 88-3 16 12. 表 皮 葡 萄 球 菌 IVES 455 16 ia 腸 球 菌 S P P • ARUM 87-41 8 14 腸 球 菌 S P P * CHBM 88-60 16 15. 腸 球 菌 S P P • WRV A 88-33 16 16· 腸 球 菌 S P P • UC I 85-30 16 17. 腸 球 菌 S ,P P VGH 84-69 16 ia 腸 球 菌 S P P . CMC 83-120 16 ia 化 81 性 鏈 球 菌 AMCH 88-84 0.12 2α 化 m 性 m 球 菌 AMCH 88-86 0 . 5 2L 化 m 性 鏈 球 菌 C203 (MP) 0.12 22 肺 炎 鐽 球 菌 SV-1 (MP) 0.12 -17 - (請先閲讀背而之注意亊項#硯窍本頁) 裝· 線· 本紙張尺度边用中0Q國家標準（CNS) 1M規格（210x297公：¢) 81. 6. 10,000張（ί[) 200488 Λ G Π 6 五、發明説明（6 ) 2a肺炎鏈球菌 CHBM 88 -75 16 24肺炎鐽球菌 TEX85-2 0.5 2&穿孢桿菌 DAV IES 32 26肺炎克雷伯氏菌NEMC87-271 >128 27.大腸桿菌 ATCC25922 >128 2a 大腸桿菌 ATCC 352 1 8 >128 2a綢綠假單胞菌12-4-4 (MP) >128 經濟部屮央桴準杓只工消合作社印^ MP = 活體内研究所用之老鼠堪代物 從上述之活體外數據可知，LL-E19020 7無格蘭氏陰性 菌活性（MIC >128«克/毫升），對葡萄球菌及腸球菌之 活性為差至中度（MIC 8-128 w克/毫升），而對非腸道 球菌之鏈球菌之活性則相當好（MIC 0.12-16 w克/奄升 )0 奮例六 1.1.-FI Q0?.0 T夕活鵂肉活件 抗生素LL-E 1 9020 7之活體内抗菌活性係以懋浮於原汁 中之2.0 X 102 CFU/0.5毫升化膿性鍵球菌 C203或懋浮 於5 S；豬S黏液中之2 . 8 X 1 0 e C F U / 0 . 5毫升金黃葡萄球菌 Smith株腹腔内注射感染購自査爾斯河岸實驗室（ Charles River Laboratories )每隻重 20士 2 克之雌 CD-1小老鼠而測定。感染30分鐘後，皮下治療在0.5毫i 0.2%水性瓊脂中之下示劑量測試化合物。Μ相同之投槩方 式處理未經感染之小老鼠Κ研究毒性。 其结果如下： -18 - (請先閲-背而之注意事項洱填寫本頁) 裝- 線- 本紙51尺度边用中8 Η家標毕（CNS)T4規岱（210x297公龙） 81. 6. 10,000¾ (H) 200488 Λ 6 Π 6 五、發明説明（17) IJ,-R190?0 沃髏囟活袢 經濟部屮央伐準而A工消仰合作社印奴 感染後十壬存活吐例 單一皮下 化膿性鍵球菌C203 金黃葡萄球菌Smith 量（M「"Kfi) I.I.-R 1 9020 7 U.-R19020 ^ 64 HT 0/5 _ 32 NT 0/5 16 4/5 0/5 8 3/5 0/5 4 1/5 - - 0/5 2 0/5 0/5 1 0/5 0/5 0.5 0/5 0/5 咦染後十 天存活 比例 望一崁下 劑畺（Mfi/ΚΠ) LL-R190^0 ύ 64 2/2 32 2/2 16 2/2 8 2/2 4 2/2 2 2/2 一 1 2/2 0.5 2/2 上述數據顯 示 LL-E19020 7對小 老鼠抗急性致死性感染 (請先閱讀背而之注意事項再填寫本頁) 裝· 訂_ 線- 本紙張尺度边用中89 Η家標準（CNS) T 4規格（210X297公tf) 81. 6. 10,000張（Η) ^00488 Λ fi 15 6 經濟部屮央準，^Α工消费合作社印31 五、發明説明（1 δ) 之活體内活性。LL-E 1 9020 7對抗化膿性鍵球菌C203 之EDs〇值約介於4-8毫克/公斤/皮下。對LL-E19020 7 對抗金黃葡萄球菌Smith感染之ED50值約 >64毫克/公斤 /皮下。皮下投予與用於該保護試驗中相同之劑量時， LL-E190207不產生毒性症狀。 ^ 抗生素LL-E19020 γ之實用性在於其抗菌活性。例如該 抗菌劑可用於抑制细菌感染，做為局部抗菌劑及做為實驗 室之一般消毒劑。除其抗菌活性Κ外，該等化合物可做為 禽類抗球S劑及生長促進劑與腥臈蟲藥。 用於治療上.本發明化合物可Μ習用之蕖學姐合物型式 投予而用於所需之用途上。該姐合物可络調製成通於口眼 ，非經臈道給藥或局部給藥。活性成份可與非毒性藥學上 可接受載劑混合，該載劑之型式可依投藥之劑型，即口服 ，非經腸道給藥或局部用藥而定。 若該化合物係用於上述之用途，其可與一棰Κ上之槩學 上可接受載劑混合，例如溶劑，稀釋劑等，而以如錠劑， 膠囊劑，可分敗粉劑，或含有約0.05至5¾懸浮劑之懸浮液 劑，或含有約10至50¾糖之耱漿劑，及含有約20至50¾乙 酵之酏劑之型式口服給槩，或Μ滅菌注射溶液或含有在等 張介質中約0.05至5¾懸浮劑之懸浮液之型式#烴睹道給藥 。該等B藥製劑可含有約0.05至90¾之活性成份，通常 介於約5-60重量％，及載劑。 經由任何局部姶縈途徑.應每日投與〇.2-1〇〇.〇奄克/ 公斤體重之有效量化合物1至5次，包括但不限於口服給 -20 - (請先閱請背而之注意事項洱填寫本頁) 本紙張尺度边用中國困家標毕（CNS) Τ 4規怙（210X297公址） 81. 6. 10,000¾ (II) 經濟部屮央標準，^β工消费合作社印製 〇004B8 Λ G ____MG_ 五、發明説明（19) 藥，非g腸道給藥（包括皮下注射，靜脈注射，肌肉注射 ，胸腔内注射，灌注法），噴霧吸入法，直腸給藥。該給 第係κ含有習用非毒性蕖學上可接受載劑，佐劑及載體之 劑型投予。應了解，對於任何特定之病患，特定之劑量及 用藥之頻率係依多種因素而定，包括所使用特定化合物之 活性，新陳代謝檯定性及該化合物之作用期，年龄，《i •健康狀況，性別，飲食，給藥型式及時間，排泄速率· 藥物併用吠況，特定病症之嚴重性及接受治療個體。 該活性化合物可口服，及經靜脈，肌肉或皮下注射。依 活性成份之性質及所需之特定給槩型式選擇適合之固態載 體，包括澱粉，乳耱，磷酸二鈣，微晶纖維素，蔗糖及# 嶺土，及液態戧體，包括滅菌水，聚乙二醇，非離子性界 面活性劑及食用油，諸如玉米油，花生油及芝麻油。可含 有習用於製備第學姐合物之佐劑，香料，著色劑.防腐劑 及抗氧化劑，例如維他命E,抗壞血酸，BHT及BHA ° 就製備及投藥方便之親點，較佳之槩學组合物為固態姐 合物，特別是錠劑及硬膠囊及液體填充膠囊。較佳係口眼 投予化合物。 活性化合物亦可非經腸道給藥或腹腔内注射。該等活性 化合物之游離鹹或槩理上可接受鹽之溶液或懸浮液，可在 水中通當地與界面活性劑混合而製得，諸如羥丙基期维素 。亦可製備在甘油，液態聚乙二酵及其混合物中之分敗肩 。於—般之儲存及使用狀況下，該等製劑含有—種防腐劑 K防止微生物之生長。 -21 - (請先閲讀背而之注意事項外填寫木頁) U 張尺度 ία 用中;娜(210χ29·_) 81. 6 10,000張（Η)

t,〇〇4SB 經濟部屮央標準而CX工消货合作社印製 Λ fi _____________Π_0_ 五、發明説明（29 用於注射用之製劑型態包括滅菌水溶液或分散液，及供 使用時製成滅菌注射溶液或分散液之滅菌粉末。無論如何 ，製劑之型態須經滅菌，且須充液至易於注射之程度。在 製備及儲存條件下，其必須穩定而可防止諸如佃菌及黴菌 之微生物污染。載劑可為含水，乙酵，多酵（如甘油.丙 二酵及液態聚乙二酵），其適當混合物及植物油之溶劑^ 分敗介質。 本發明有闞一種增加產肉動物及魚頚生長速率及阏料利 用率之方法，係將有效量之選自LL-E19020 7及其蕖學上 可接受邇類之抗生素投予該動物或魚類。 本發明亦有關於一種預防，治療或控制溫血動物ffl菌感 染之方法，係以治療有效量之選自LL-E19020 7及其藥學 上適用鹽頚之抗生素投予該動物。 本發明尚有關於適於口服、可有效增加產肉動物及魚類 表現且可預防及控制產肉動物及寵物细菌感染之動物飼料· 姐合物。 根據本發明，LL-E19020 7抗生素化合物或其藥學上適 用鹽類可口服或非经腸道投予單雳或反芻動物。該化合物 可與動物飼料一起投予或做為上覆料給予。其亦可圼大藥 丸，小槩九，錠劑，丸劑，口服膠等给予，或摻於動物欧 水中給予。 當其係接於飼料中或伴«飼料給予時.一般而言，總 度介於0.001至約1,000 ppm之LL-E：L9020 7或其蕖學上 可接受盥類可有效增加生長速率及改菩宿主之動物飼料利 -22 - (請先閲請背而之注意事項再填窝本頁) 裝· 訂· 線. 本紙it尺度边用中as家楳準(CNS)甲4規格（210X297公;《：) 81. S. 10,000張（H) 200488 Λ (; IU; 經濟部屮央榀準而Α工消伢合作社印製 五、發明説明（21) 用率。 應了解，因本發明抗生素可有效治療單胃及反芻動物， 其體重可能包括僅數公克至大至數千公斤，是K治療所需 之抗生素有效量不同。此外，每一動物之治療有效量會依 該動物之發育期及種別而不同。 本發明化合物對牛隻，綿羊，豬，山羊，兔子，馬匹及 家禽之增重及改善飼料效率特別有效。 製備可提供產肉動物所需之增加生長及飼料效率之動物 飼料姐合物可使上述之抗生素或其鹽類，或含彼等之補肋 飼料與足量之適當動物飼料混合，以使终飼料中含所需量 之活性化合物。 製備動物補助飼枓可使約1.0至75重量S；之該抗生素或 其鹽類與約99至25重量X之載劑或稀釋劑混合。適於製備 補助飼料之載劑或稀釋劑包括：苜蓿粉，大豆粉，棉子油 粉，亞麻子油粉，氯化納，玉米粉，甘蔗麥芽糖，尿素， 骨粉，魚粉，玉米穗軸粉，氛化鈣及其他類似物。於補助 飼料中使用載劑或稀釋劑可改菩補助飼料加至終飼料後活 性成份分佈之均勻度。因此，其具有重要之功能，可確保 活性成份在飼料中均勻分佈。 於實際之農用中，該補肋飼料可做為上覆料，以確保活 性成份均勻分佈在經覆蓋之阏料上方。 用於非腸道給藥時，該抗生素或其鹽類可製成糊劑或外 丸劑，並Μ做為植人物投予，一般係投至所欲增加生長速 率及/或改菩飼料效率之動物之頭部或耳部之皮下。 -23 - (請先閱讀背而之注意事項再場寫木頁) 本紙張尺度边用中國困家搽毕（CNS) T4規岱（210X297公;《：) 81. 6. 10,000» (!!) £00488 經濟部屮央標準而A工消费合作社印製 五、發明説明¢2) 實際應用時，非經腸道給槩一般係注射動物足量之上述 抗生素或抗生素鹽類，以提供每日約0.01至毫克/公 斤體重之活性成份。 製備糊劑可將該抗生素或抗生素鹽類分散於藥學上可接 受之油中，例如花生油，芝麻_及玉米油。 製備含有效量選自LL-E19020 7之抗生素之小藥丸可將 該抗生素與稀釋劑混合，如烴臘，生物可降解聚合物， carnauba蟠或類似物。若必要，亦可加人潤滑劑以改菩 小蕖丸之製備，如硬脂酸鎂或硬脂酸鈣。 當然，應了解，為達到可提供動物增加之生長速率及/ 或改菩飼料利用所需之劑量，可同時投與多於一個之小藥 丸至一動物。此外，業已發琨為維持動物體内遇當之槩物 釋出量，另可在處理之過程中周期性地植入額外之植入物 Ο 非經腸道或口服投予本發明之抗生素化合物可有效預防 ，控制及治療目前畜牧飼養方法常見之细菌性，病。該等 疾病包括豬赤痢.亦稱為血痢及出血性大腸炎，其係養豬 業常遣遇之疾病。該廣泛分佈之疾病通常具一或多個下述 之特徴性症狀：下痢，出血性下痢，生長遲滯，步伐頫跛 ,眼瞼腫脹及皮毛粗糙。另一重要之雇業疾病為壞死性腸 炎，其係一種家禽業所見嚴重之腸道疾病。若未經査貴β 豬赤痢及壊死性腸炎可對畜牧生產產生重大衝擊。 根據本發明，用於治療時，選自LL-E19020 7或其蕖學 上適用鹽類之抗生素係妥菩地混合於受改染動物或家禽之 -2 4 - (請先閲請背而之注意事項#填寫木頁) 本紙張尺度边用中Β Η家《準（CNS)T4規格（210x297公龙） 81. 6. 10,000張（11) 200488 Λ 6 15 6 五、發明説明（23) 飼料或歆水中。該抗生素亦可通當地製成預混料或如前述 者製成補肋飼料。 實例七 瀨試化合物捎加雄等牛再及改蕃其飼料利用率之評估 於本試驗中，將一日舲Peterson X Arbor Ac res雜隻分 成每籠等重之五隻公雞及五隻母雞。阐機處理，每處理六 重覆。Μ給飼25 ppm比飼Μ未加藥飼料雞隻評估該化合物 ,Μ飼料中含200 ppm青徽素者為陽性對照姐。 於第一天及第14天秤雄籠重量，並於秤重日測量飼料消 耗量。自由給飼水及飼料，連纘照明及補充溫度。 此試驗中使用之家禽飼料如下： (請先wllii背而之注意事項再蜞寫本頁) 裝- 經濟部屮央標準局β工消伢合作社印5i 維 他 命 — 胺 基酸預混料 0 . 5¾ 微 量 元 素 0 . 1¾ 氛 化 钠 0 . 3¾ 磷 酸 二 鈣 1 . 2¾ 碎 石 灰 0 . 5¾ 安 定 脂 質 4 . 0¾ 脫 水 苜 蓿 > 17X蛋 白筲 2 . 0¾ 玉 米 m 粉 t 41¾蛋 白質 5 . 0¾ 鲱 魚 粉 I 60¾蛋白 質 5 . 0¾ 大 豆 油 粉 » 44¾蛋 白質 30 . 0¾ 一 碎 黃 玉 米 100 . 0¾ 述 姐 合 物 中 之維他命- 胺基酸預混料係依下示 之配方 製備。所示量係每公克终姐合物中之量。 -25 - 本紙張尺度边用中Η 8家標準（CNS)甲4規格（210X297公龙) 81.6.10,000張（||) 線. 200488

A f) W G 五、發明説明（24) 丁 基 化 羥基甲苯 125 . 0 毫 克 d 1 -甲硫胺酸 500 . 0 毫 克 維 他 命 A 3 300 . 0 I . U . 維 他 命 D 3 1100. ,0 I . C . 核 黃 素 4 . .4 毫 克 維 他 命 E . 2 . .2 I . U . 菸 m 酸 27 . • 5 牽 克 泛 酸 8 .8 毫 克 氯 化 膽 鹼 500 .0 毫 克 葉 酸 1 .43奄 克 維 他 命 K 1 .1 牽 克 維 他 命 B 1 2 11 .0微克 碎 黃 玉 米 5 .0 毫 克

所得數據如表I所示，由其可知抗菌性LL-E 19020 7與未投藥之對照姐相較，可改菩雜隻之增重及增加其飼料利用率。 表II (請先間請背而之注意事項再填寫木頁) 裝· 訂- 線- 經濟部屮央標準XJCX工消伢合作社印製 較對照 較對照 處理 增重 姐改菩 飼料轉 組改菩 方式 PPm (克） % 換率 % 對照姐 - 321 - 1.322 - E 19020 7 25 342 6 . 5 1.297 1 . 9 青黴素 200 344 7.2 1.317 0.4 -26 - 本紙張尺度边用中困困家標準（CNS) T4規tS(210x297公龙） 31. 6. 10,000張（H)

Claims (1)

1. A7 B7 C7 D7 修正 補充 a 六、申請專利範面 L '-種抗生素LL-E19020 γ，其 «) 结構如下

   (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) .装. (b)元素分析：C 62.22 ; H7.77; N 0.92; (〇 分子量：1241 (相應於[M + Ha] + FABMS = M/Z 1264 ) (d) 比旋光度：[α ] 2eD = -7° ( 1 . 001 , MeOH) <e) 特徴性紫外線吸收光譜如圓I所示； •打· (f) 持徴性紅外線吸收光譜如圖I所示； (g) 特徴性質子核磁共振光譜如圖Μ所示； (h) 特街[性碳-13核磁共振光繒如圆IV所示； (i) 使用在_酸溶液中之乙腈梯度，特徽性HPLC滯留時間 為18.5分鐘；且 .綠 Φ 使在用醣酸溶液中之二吗烷梯度，特微性HPLC滯留時 間為19.6分鐘。 經濟部中央標準扃印裝 2.-種製備根據申請専利範圍第1項之抗生素LL-E1902(W之 方法，其包括在含有可同化碳源，氮源及無機鹽之液態培 餐基中，使利嘉鐽撇菌坦沙尼爾斯亞種（StrePtomvces f 4 (210X297 公廣） A7 B7 C7 D7 200488 A'申請專利範園 lydicus ssp. tanzanius )NRRL 18036或其突變株進行 需氧發酵，至該培養基產生賁質抗生素活性，而後回收抗 生素 LL-E19020 7 。 a 一種製備根據申謫専利範圃第1項之抗生素LL-E19020 7 之方法，其包括使含有可同化碳源，氮源及無機Μ且經利 嘉鐽徽菌诅沙尼爾斯亞種NRRL 18036或其突變株接種之液 態培養基進行需氧發酵，在25至32¾之溫度下維持該發酵 物約80-200小時，收集糖化膠並萃取該抗生素。 < —種對抗鍵球菌（streptococcus)之抗生素路第姐合物， 其含有抗生量之根據申請專利範圍第1項之抗生素 LL-E19020 7 及藥學上可接受載劑。 5· 一種增加產肉動物及魚類生長速率之方法，此方法包括施 用生長速率增加量之選自根據申請専利範園第1項之抗生 素LL-E19020 7 或其槩學上適用鹽類之抗生素至該動物或 魚類。 6- 根據申請專利範園第5項之方法，其中該抗生素或抗生素 鹽類係Μ約0.001至1,000 PPm之溻度於飼料或飲水中口 服投予該產肉動物或魚類。 7- 根據申誚專利範圔第5項之方法，其中該抗生素或抗生素 鹽類係以足夠提供每日每公斤«重約0.01-100«克之劑 霣非烴腸道投予該產肉動物。 a —種增加產肉動物飼料利用率之方法，此方法包括口眼投 予該動物飼料效率埔加最之抗生性烴埋擇可食載_及飼料 效率增加最之選自根據申請専利範圏第1項之抗生索 -2 - 甲 4(210X297 公尨) ....................................f .............¾...............................ir.........~ ................線 (請先閱讀背面之注意事項再填奪本页) 經濟部中央揉準局印M 200488 Α7 Β7 C7 D7 六、申請專利範固 LL-E190207或其藥學上逋用蘧類之抗生素。 a 根據申誧専利範圃第8項之方法，其中該抗生素或抗生素 鹽類係Μ約0.001至1,000 ppm之濃度於飼料或飲水中口 腋投予該產肉動物或魚類。 1Q 一種增加產肉動物及魚類生長速率之動物飼料姐合物，其 包含一種可食載_及一種生長速率增加量之選自根據申請 專利範画第1項之抗生素LL-E19020 7或其藥學上迪用期 類之抗生素。 11 根據申請専利範園第10項之動物飼料姐合物，其中該抗生 素之含量足使飼料中抗生素之终漉度介於約0.001-1,〇〇〇 ppm ° Ά —種增加飼料利用率之動物飼料姐合物，其包含一種可食 載劑及一種飼料效率增加董之選自根據申請専利範圍第1 項之抗生素LL-E19020 7或其藥學上通用鹽類之抗生素。 13·—種偽用於預防，治療或控制溫血動物细菌感染之動物飼 料姐合物，其包含一種可食載劑及一種抗菌有效量之選自 根據申請専利範圍第1項之抗生素LL-E19020 7或其藥學 上適用鹽類之抗生素。 ...................................< ..............«-· (請先«I讀背面之注意事項再填其本頁) .打. •綠· 經濟部中央揉準局印裝 肀 4(210X297 公沒）