TW200410981A - Novel artificial nucleic acid - Google Patents

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200410981 玖、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於具有優異的反義或抗原活性、或解碼核酸、DNA 酶及RNA干擾機能，且可在生物内安定地製造非天然型的寡核苷酸 類似物的中間體之新穎交聯核酸衍生物。 【先前技術】 具有優異的反義或抗原活性或解碼核酸、DNA酶及RNA干擾機 能，且在生物内安定地寡核苷酸作爲有用的醫藥係爲期待的。 由於天然型寡核苷酸於血液中或細胞内存在著各種的核苷酶，已 知會快速地分解速，爲克服此項缺點，以製造種種的非天然型的寡核 苷酸類似物，將其嘗試開發作爲醫藥。 例如與寡核苷酸的磷酸二酯結合内的磷原子結合之氧原子以硫 原子取代、該氧原子以甲基取代、該氧原子以硼原子取代、寡核苷酸 的糖部分或鹽基部分經化學修飾者等係爲已知。又更具體而言，ISIS 社開發作爲人類唾液腺病毒性（human cytomegalovirus)網膜炎的 治療藥之硫醇鹽型寡核苷酸ISIS 2922，已作爲VitraveneTM於美國 販賣。 然而，上述的非天然型寡核苷酸類似物中，反義或抗原活性強， 即根據與mRN A或DN A安定的互補鏈形成能、或對各種核苷酶的安定 性、與生物内的各種蛋白質進行非特異結合的副作用發現等而考慮， 更優異的係具有反義或抗原活性、在生物内安定，且副作用的發現少 之非天然型的寡核苷酸類似物係爲所期望的。 又核酸糖部的構形方面，已知有S型及N型，前者方面爲DNA、 後者方面爲 RNA 已知其構形（J.Am.Chem.Soc., 94，8205(1992) 及：[.八111.(：1^111.5〇^，95，2 3 3 3 ( 1 99 3 ))。因此，選取5型的核酸方 200410981 面係選擇性的與DNA結合，在使用前述的反義用途等的情況下，與通 常的核酸相比，具有如DNA選擇性的優點。進一步選取S型構形、模 倣DNA的核酸衍生物，特別是作爲解碼核酸（Gene Thrapy，8, 1 6 3 5 (2 00 1 ))、DNA酶（Nature, 3 7 5, 6 1 1 ( 1 9 9 5 ))有用係爲所期待 的。進一步與DN A結合性高的核酸衍生物、DN A晶片等之特定基因檢 測藥、作爲診斷藥或爲了開始増幅的引物係爲有用。 以非天然型寡核苷酸類似物的製造中間體而構成之化合物、與本發 明的中間體有所關連的化合物係如特開200 1 -64297號中所記載。即 如下列之通式 [化3]

(上述式中R1()1及R1G3係表示相同或不同的氫原子、羥基的核酸 合成保護基等，R1()2係表示氫原子、碳數1至6個之烷基或胺基的核酸 合成保護基，係表示亦可含有選自於下述aiGG族群之取代基的嘌 Π令-9 -基或2 -氧基-1，2 -二氫嘧、π定-1 -基）所表示的化合物。 (a1⑽族群）鹵素原子、碳數1至6個之烷基、羥基、氫硫基、胺基 等。 然而’上述化合物中，核酸的2’位上具有羥基或其衍生物係爲必 須的，已知爲經氫原子所取代的化合物。 [特許文獻1 ] 特開 2 0 0 1 - 6 4 2 9 7 號 200410981 [發明所欲解決之課題] 本發明的課題係提供一種新穎的二環核苷衍生物，其係具有優異 的反義或抗原活性、或解碼核酸、具有DN A酶及RN A干擾機能、且在 生物内製造安定的寡核苷酸而組成的中間體。 、 又，本發明的課題係提供一種含有1或2個以上該二環核苷構造之 新穎寡核苷酸類似物。 本發明的發明者爲解決該課題持續專心硏究的結果，發現含有 3胺基-3’-N，4’-C-亞甲基、2’位爲氫原子所取代的新穎的二環核苷 衍生物，爲製造含有對DNA形成二本鏈或三本鏈核酸性質之寡核苷 酸類似物的中間體係爲有用，又該二環核苷構造含有1或2個以上的 新穎寡核苷酸類似物爲具有優異的核酸酶抗性，以製造優異的反義 藥、抗原藥、解碼核酸、DNA酶或RNA干擾核酸，進一步與DNA 高結合性的核酸衍生物，其係作爲DNA晶片等特定的基因檢測藥、 診斷藥或作爲爲増幅開始的引物係爲有用，而完成本發明。 [解決課題的手段] 本發明之交聯核酸衍生物係爲： 1)通式（1) [化4]

[式中，R1係表示氫原子、羥基的核酸合成保護基、磷酸基、核酸 合成之保護基所保護的磷酸基或以式-P(R3a)R3b所表示的基（式中， &33及尺31)係表示相同或不同的羥基、核酸合成之保護基所保護的羥 200410981 基、氫硫基、核酸合成之保護基所保護的氫硫基、胺基、核酸合成之 保護基所保護的胺基、 碳數1至6個之烷氧基、碳數1至6個之烷硫基、碳數1至7個之氰 烷氧基或碳數1至6個之烷基所取代的胺基）所表示的基、 R2係表示爲氫原子、碳數1至6個之烷基或胺基的核酸合成保護 基， B係表示選自於下述所示族群亦可含有取代基之嘌呤-9-基或2-氧基-1, 2-二氫嘧啶-1-基]、 所表示的化合物及其醫藥上可接受之鹽類。 U群） 羥基、 核酸合成之保護基所保護的羥基、 碳數1至6個之烷氧基、 氫硫基、 核酸合成之保護基所保護的氫硫基、 碳數1至6個之烷硫基、 胺基、 核酸合成之保護基所保護的胺基、 碳數1至6個之烷基所取代的胺基、 碳數1至6個之烷基、及、 鹵素原子。 本發明的化合物或其醫藥上可接受之鹽類中，較佳者係爲： WR1係爲氫原子、脂肪族醯基、芳香族醯基、1至3個之芳基所 取代的甲基、以苯基環爲低級烷基、低級烷氧基、鹵素或氰基所取代 的1至3個芳基取代之甲基、或矽烷基之化合物或其醫藥上可接受之鹽 200410981 類、 3) 1^1係爲氫原子、乙醯基、苯基、苯甲基、對甲氧基苯甲基、二 甲氧基三苯甲基、單甲氧基三苯甲基、第三丁基二苯基矽烷基、 - P(OC2H4CN)(NCH(CH3)2)、-P(OCH3)(NCH(CH3)2)-膦醯基、 或2-氯苯基或4 -氯苯基磷酸基之化合物或其醫藥上可接受之鹽類、 4) R2係爲氫原子、碳數1至6個之烷基、脂肪族醯基、芳香族醯 基、單甲氧基三苯甲基、芳羥基羧基、或以芳基環爲1至2個之低級烷 氧基或硝基所取代亦可的芳烷基羥基羧基之化合物或其醫藥上可接受 之鹽類、 5) R2係爲氫原子、碳數1或2個之烷基、脂肪族醯基、單甲氧基 三苯甲基、芳羥基羧基、或以芳基環爲1至2個之低級烷氧基或硝基所 取代亦可的芳烷基羥基羧基之化合物或其醫藥上可接受之鹽類、 6) R2係爲氫原子、甲基、三氟乙醯基、苯氧乙醯基、單甲氧基三 苯甲基、或苯甲基羥基羧基之化合物或其醫藥上可接受之鹽類、 7 )B係爲6-胺嘌呤-9-基（即腺嘌呤基）、經胺基爲核酸合成之保護 基所保護的6-胺嘌呤-9-基、2,6-二胺嘌呤-9-基、經胺基爲核酸合成 之保護基所保護的2，6-二胺嘌呤-9-基、2-胺基-6-氯嘌呤-9-基、經胺 基爲核酸合成之保護基所保護的2-胺基-6-氯嘌呤-9-基、2-胺基-6-氟嘌呤-9-基、經胺基爲核酸合成之保護基所保護的2_胺基_6_氟嘌呤 -9-基、2-胺基-6-溴嘌呤-9-基、經胺基爲核酸合成之保護基所保護的 2-胺基-6-溴嘌呤-9-基-2-胺基-6-羥基嘌呤-9-基（即鳥嘌呤基）、經胺 基爲核酸合成之保護基所保護的2-胺基-6-羥基嘌呤-9-基、經胺基及 經基爲核酸合成之保護基所保護的2 -胺基-6-經基嘿B令-9·基、6 -胺基 -2-甲氧基嘌呤-9-基、6-胺基-2-氯嘌呤-9-基、6-胺基-2-氟嘌呤-9-基、2,6 -二甲氧基嘌呤-9-基、2,6 -二氯嘌呤-9-基、6 -氫硫嘌呤-9- 200410981 基_ 2 -氧基-4 -胺基-1，2 -二氫嘧D定-基（即胞嘧、D定基）、經胺基爲核酸 合成之保護基所保護的厂氧基-4-胺基-1，2-二氫嘧啶-1-基、2-氧基 -4-胺基-5-氟-1，2-二氫嘧啶-1-基、經胺基爲核酸合成之保護基所保 護的2-氧基-4-胺基-5-氟-1, 2-二氫嘧啶基、4-胺基-2-氧基-5-氯基-1，2-二氫嘧啶-卜基、2-氧基甲氧基-1，2-二氫嘧啶_卜基、 2 -氧基-4 -氫硫-1，2 -二氫嘧啶-卜基-2 -氧基-4 -經基-1，2 -二氫喃D定 -1 -基（即尿喃D定基）、2 -氧基-4 -羥基-5 -甲基-1，2 -二氫嘧D定-卜基（即 胸嘌呤基）、4 -胺基-5-甲基-2 -氧基-1，2 -二氫嘧啶-1-基（即5 -甲基胞 嘧啶基）或經胺基爲核酸合成之保護基所保護的4 —胺基-5 _甲基-2 -氧 基-1，2 -二氫嘧啶-1-基之化合物或其醫藥上可接受之鹽類、 8)B係爲6 -苯甲醯基胺嘌呤-9-基、腺嘌呤基、2 -異丁醯胺基-6-羥基嘌呤_ 9 _基_鳥嘌呤基、2_氧基-4-苯甲醯胺基-1, 2-二氫嘧啶-1-基、胞嘧啶基、2-氧基-5-甲基-4-苯甲醯胺基-1，2-二氫嘧啶-1-基、 5-甲基胞嘧啶基、尿嘧啶基或胸嘌呤基之化合物或其醫藥上可接受之 鹽類。 在上述之中，R1係選自於上述2)或3)、R2係選自於上述4)至6)、 B係選自於上述7)至8)所得任意的組合爲佳，特佳爲2)-4)及7)的組合 以及3)、6)及8)的組合。 含有本發明的新穎寡核苷酸類似物之核酸試劑及醫藥係爲： 1)通式（la) [化5] 200410981

[式中， B係表示爲亦可含有選自於下述α群之取代基的嘌呤-9-基或2-氧基-1，2 -二氫嘧啶-1 -基]所表示的構造含有1或2個以上之寡核苷酸 類似物及其醫藥上可接受之鹽類。但是，含有2個以上之上述構造時， 該構造間的Β係可爲相同或不同。 (α群） 羥基、 核酸合成之保護基所保護的羥基-碳數1至6個之烷氧基、 氫硫基、 核酸合成之保護基所保護的氫硫基、 碳數1至6個之烷硫基、 胺基、 核酸合成之保護基所保護的胺基、 碳數1至6個之烷基所取代的胺基、 碳數1至6個之烷基、及、 鹵素原子。 因此，「寡核苷酸類似物」係爲天然型的寡核苷酸中核苷單位爲 經上述構造（Ia)l或2個以上取代之非天然型的者，此類之類似物中， 200410981 亦可含有作爲其他核苷或核苷酸單位之例如糖部分爲經修飾之糖衍生 物、磷酸二酯結合部分爲經硫醇氯化之硫醇鹽衍生物、末端的磷酸部 分爲經酯化之酯體、嘌呤鹽基上的胺基爲經醯胺基化之醯胺基體。 含有本發明的新穎的寡核苷酸類似物之核酸試劑及醫藥中，較佳 者爲： 2 )B係爲6-胺嘌呤-9-基（即腺嘌呤基）、經胺基爲核酸合成之保護 基所保護的6-胺嘌呤-9-基、2,6-二胺嘌呤-9-基、2-胺基-6-氯嘌呤 -9-基、經胺基爲核酸合成之保護基所保護的2-胺基-6-氯嘌呤-9-基、 2-胺基-6-氟嘌呤-9-基、經胺基爲核酸合成之保護基所保護的2-胺基 -6-氟嘌呤-9-基-2-胺基-6-溴嘌呤-9-基、經胺基爲核酸合成之保護基 所保護的2-胺基-6-溴嘌呤-9-基、2-胺基-6-羥基嘌呤-9-基（即鳥嘌呤 基）、經胺基爲核酸合成之保護基所保護的2-胺基-6-羥基嘌呤-9-基、 經胺基及羥基爲核酸合成之保護基所保護的2-胺基-6-羥基嘌呤-9-基、6 -胺基-2-甲氧基嘿Π令-9-基、6 -胺基-2-氯嘿Π令-9-基、6 -胺基- 2-氟嘌呤-9 -基、2,6 -二甲氧基嘌呤-9 -基、2,6 -二氯嘌呤-9-基、6-氫 硫嘌呤-9-基、2-氧基-4-胺基-1, 2-二氫嘧啶-卜基（即胞嘧啶基）、經 胺基爲核酸合成之保護基所保護的2-氧基-4-胺基-1，2-二氫嘧啶-1-基、2-氧基-4-胺基-5-氟-1, 2-二氫嘧啶-1-基、經胺基爲核酸合成之 保護基所保護的2-氧基-4-胺基-5-氟-1，2-二氫嘧啶-1-基、4-胺基-2-氧基-5-氯-1，2-二氫嘧啶-1-基-2-氧基-4-甲氧基-1,2-二氫嘧啶-1-基、2-氧基-4-氫硫-1，2-二氫嘧啶-1-基、2-氧基-4-羥基-1,2-二氫 嘧啶-1-基（即尿嘧啶基）、2-氧基-4-羥基-5-甲基-1，2-二氫嘧啶-1-基（即胸嘌呤基）、4-胺基-5-甲基-2-氧基-1，2-二氫嘧啶-1-基（即5-甲基胞嘧啶基）或經胺基爲核酸合成之保護基所保護的4-胺基-5-甲基 -2-氧基-1，2-二氫嘧啶-卜基之寡核苷酸類似物及其醫藥上可接受之 -13- 200410981 鹽類， 3 )B係爲6-苯甲醯基胺嘌呤-9-基、腺嘌呤基、2-異丁醯胺基-6-羥基嘌呤-9-基、鳥嘌呤基、2-氧基-4-苯醯胺基-1，2-二氫嘧啶-卜 基、胞嘧啶基、2 -氧基-5 -甲基-4 -苯甲醯胺基-1，2 -二氫嘧啶-1 -基、 5 -甲基胞嘧啶基-尿嘧啶基或胸嘌呤基之寡核苷酸類似物及其醫藥上 可接受之鹽類。 上述R1的定義中，「羥基的核酸合成保護基」若爲核酸合成時可 安定地保護羥基者，並沒有特別地限制，可爲例如甲醯基、乙醯基、 丙醯基、丁醯基、異丁醯基、戊醯基、三甲基乙醯基、戊醯、異戊醯、 辛醯基、癸醯基、8-甲基壬醯基、3-乙基辛醯基、3, 7-二甲基辛醯基、 ~f *醯基、十三醯基、十六醯基、14 -甲基十五醯基、13，13 -二甲基 十四醯基、卜甲基十七醯基、十九醯基、二十醯基及二十一醯基類之 烷羰基、琥珀醯基、谷氨醯基、己二醯基類之羧化烷羰基，氯乙醯基、 二氯乙醯基、三氯乙醯基、三氟乙醯基類之鹵化低級烷羰基，甲氧基 乙醯基類之低級烷氧基低級烷羰基、（E)-2-甲基-2-喋啶基類之不飽和 烷羰基等之「脂肪族醯基」； 苯甲醯基、α-萘甲醯基、β-萘甲醯基類之芳羰基、2-溴苯甲醯基、 4-氯苯甲醯基類之鹵化芳羰基、2，4，6-三甲基苯甲醯基、4-甲苯醯 基類之低級烷化芳羰基、4-對甲氧苯甲醯基類之低級烷氧基化芳基羰 基、2-羧基苯甲醯基-3-羧基苯甲醯基、4-羧基苯甲醯基類之羧基化芳 羰基、4-硝基苯甲醯基、2-硝基苯甲醯基類之硝化芳羰基：2-(甲羥基 羰基）苯甲醯基類之低級烷氧基羰化芳羰基-4-苯基苯甲醯基類之芳基 化芳羰基等之「芳香族醯基」； 四氫吡喃-2-基、3-溴四氫吡喃-2-基、4-甲氧基四氫毗喃-4-基-四氫噻喃-2-基、4-甲氧基四氫噻喃-4-基類之「四氫吡喃醯基或四氫 200410981 噻喃醯基」；四氫呋喃-2-基、四氫噻吩-2-基類之「四氫吡喃醯基或 四氫噻喃醯基」；三甲基矽烷基、三乙基矽烷基、異丙基二甲基矽烷 基、第三丁基二甲基矽烷基、甲基二異丙基矽烷基、甲基二-第三丁基 矽烷基、三異丙基矽烷類之三低級烷矽烷基、二苯基甲基矽烷-第三丁 基二苯基矽烷基、二苯基異丙基矽烷基、苯基二異丙基矽烷類之1至2 個之芳基所取代的三低級烷矽烷基等之「矽烷基」；甲氧基甲基-1， 1-二甲基-1-甲氧基甲基、乙氧基甲基、丙氧基甲基、異丙氧基甲基、 丁氧基甲基、第三丁氧基甲基類之「低級烷氧基甲基」； 2-甲氧基乙氧基甲基類之「低級烷氧基化低級烷氧基甲基」； 2, 2, 2-三氯乙氧基甲基、雙（2-氯乙氧基）甲基類之「鹵化低級 烷氧基甲基」； 1-乙氧基乙基、1-(異丙氧基）乙基類之「低級烷氧基化乙基」； 2, 2，2 -三氯乙基類之「鹵素化乙基」； 苯甲基、α-萘甲基、β-萘甲基、二苯基甲基、三苯基甲基、α-萘基二苯基甲基、9-蒽甲基類之「1至3個之芳基所取代的甲基」； 4-甲基苯甲基、2, 4, 6-三甲基苯甲基、3, 4, 5-三甲基苯甲基、 4-甲氧基苯甲基、心甲氧基苯基二苯基甲基、4，4’-二甲氧基三苯基 甲基-4，4’，4三甲氧基三苯基甲基、2-硝基苯甲基、4-硝基苯甲 基、4-氯苯甲基、4-溴苯甲基、4_氰苯甲基類之「以苯基環爲低級烷 基、低級烷氧基、鹵素或氰基所取代的1至3個芳基取代之甲基」； 甲羥基羰基、乙羥基羰基、第三丁羥基羰基、異丁氧基羰基類之 「低級烷氧基羰基」；2，2, 2-三氯乙羥基羰基、2-三甲基矽烷乙羥 基羰基類之「鹵素或三低級烷矽烷基所取代的低級烷氧基羰基」； 乙烯基羥基羰基、烯丙羥基羰基類之「烯基羥基羧基」； 苯甲基羥基羰基、4-甲氧基苯甲基羥基羰基、3，4-二甲氧基苯 200410981 甲基羥基羰基、2-硝基苯甲基羥基羰基、4-硝基苯甲基羥基羰基類之 「以芳基環爲1至2個之低級烷氧基或硝基取代亦可之芳烷基羥基羧 基」。 在R1方面，較佳爲脂肪族醯基、芳香族醯基、1至3個之芳基所 取代的甲基、以苯基環爲低級烷基、低級烷氧基、鹵素或氰基所取代 的1至3個芳基取代之甲基、或矽烷基，更較佳爲乙醯基、苯基、苯甲 基、對甲氧基苯甲基、二甲氧基三苯甲基、單甲氧基三苯甲基或第三 丁基二苯基矽烷基。 上述中「核酸合成之保護基所保護的磷酸基」的核酸合成之保護 基爲核酸合成時安定地保護磷酸基者時，並沒有特別地限制，可爲例 如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、第二丁基、第三 丁基、正戊基、異戊基、2-甲基丁基、新戊基、1-乙基丙基、正己基、 異己基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、3, 3-二甲基丁基、2, 2-二甲基丁基、1，1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁 基、1，3-二甲基丁基、2，3-二甲基丁基、2-乙基丁基類之「低級烷 基」； 2-氰乙基、2-氰-1，1-二甲基乙基類之「氰化低級烷基」； 2-甲基二苯基矽烷乙基、2-三甲基矽烷乙基、2-三苯基矽烷基乙 基類之「矽烷基所取代的乙基」； 2, 2, 2-三氯乙基-2, 2, 2-三溴乙基、2, 2, 2-三氟乙基、2, 2, 2-三氯-1、1-二甲基乙基類之「鹵素化低級烷基」； 乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-甲基-2-丙烯基、1-甲基-1-丙烯基、2-甲基-1-丙烯基、2-甲基-2-丙烯基、2-乙基-2-丙烯基、 1-丁烯基、2-丁烯基、卜甲基-2-丁烯基、1-甲基-1-丁烯基、2-甲基 -2-丁烯基、1-乙基丁烯基、3-丁烯基、1-甲基-3-丁烯基、2-甲 -16- 200410981 基-3-丁烯基、卜乙基-3-丁烯基、1-戊烯基-2-戊烯基、卜甲基-2-戊 燃基、2 -甲基-2-戊嫌基、3 -戊儲基-1-甲基-3-戊嫌基、2 -甲基-3-戊 烯基、4-戊烯基、1-甲基-4-戊烯基-2-甲基-4-戊烯基、1-己烯基、 2- 己烯基、3-己烯基、4-己烯基、5-己烯基類之「低級烯基」； 環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、原冰片烷基、金剛 烷基類之「環烷基」； 2-氰丁烯基類之「氰化低級烯基」； 苯甲基、α-萘甲基、β-萘甲基、茚基甲基、菲甲基、蒽甲基、二 苯基甲基、三苯基甲基、1-苯乙基、2-苯乙基、1-萘基乙基、2-萘基 乙基、1-苯基丙基、2-苯基丙基、3-苯基丙基、1-萘基丙基、2-萘基 丙基、3-萘基丙基、1-苯基丁基、2-苯基丁基、3-苯基丁基、4-苯基 丁基、1-萘丁基、2-萘丁基、3-萘丁基、4-萘丁基、1-苯基戊基、2-苯基戊基、3-苯基戊基、4-苯基戊基、5-苯基戊基、1-萘戊基、2-萘 戊基、3-萘戊基、4-萘戊基、5-萘戊基、1-苯基己基、2-苯基己基、 3- 苯基己基、4-苯基己基、5-苯基己基、6-苯基己基、1-萘己基、2-萘己基、3-萘己基、4-萘己基、5-萘己基、6-萘己基類之「芳烷基」； 4-氯苯甲基、2-(4-硝基苯基）乙基、鄰硝基苯甲基-4-硝基苯甲 基、2, 4-二硝基苯甲基、4-氯-2-硝基苯甲基類之「以芳基環爲硝基、 鹵素原子所取代之芳烷基」； 本基、印基、萘基、菲基、蒽基類之「芳基」； 2-甲基苯基、2,6-二甲基苯基-2-氯苯基，4-氯苯基、2,4-二氯 苯基-2,5-二氯苯基、2-溴苯基-4-硝基苯基-4-氯-2-硝基苯基類之「低 級烷基、鹵素原子、硝基所取代的芳基」。 較佳爲「低級烷基」、「氰基所取代的低級烷基」、「芳烷基」、 「以芳基環爲硝基、鹵素原子所取代之芳烷基」或「低級烷基-鹵素原 -17- 200410981 子、硝基所取代的芳基」，更較佳爲2_氰乙基、2，2，2-三氯乙基、 苯甲基、2-氯苯基或4-氯苯基。 上述的「碳數1至6個之烷基」，可爲例如甲基、乙基、正丙基、 異丙基、正丁基、異丁基、第二丁基、第三丁基、戊基、己基類之碳 數1至6個之直鏈或分枝烷基，較佳爲碳數1至4個之烷基，更較佳爲碳 數1或2個之烷基，最佳爲甲基。 上述R2的定義中，「胺基的核酸合成保護基」可在核酸合成時安 定地保護胺基者時，並沒有特別地限制，可爲例如甲醯基、乙醯基、 丙醯基、丁醯基、異丁醯基、戊醯基、三甲基乙醯基、戊醯、異戊醯、φ 辛醯基、癸醯基、8-甲基壬醯基、3-乙基辛醯基、3, 7-二甲基辛醯基、 十一醯基、十三醯基、十六醯基、14-甲基十五醯基、13, 13-二甲基 十四醯基、1-甲基十七醯基、十九醯基、二十醯基及二十一醯基類之 烷羰基，琥珀醯基、谷氨醯基、己二醯基類之羰化烷羰基、氯乙醯基、 二氯乙醯基、三氯乙醯基、三氟乙醯基類之鹵化低級烷羰基、甲氧基 乙醯基類之低級烷氧基低級烷羰基、（E)-2-甲基-2-丁醯基類之不飽和 烷羰基等之「脂肪族醯基」； 苯甲醯基、ct-萘甲醯基、β-萘甲醯基類之芳基羰基、2-溴苯甲醯 0 基、4-氯苯甲醯基類之鹵化芳羰基、2, 4, 6-三甲基苯甲醯基、4-甲 苯醯基類之低級烷化芳羰基-4-對甲氧苯甲醯基類之低級烷氧基化芳 羰基、2-羧基苯甲醯基-3-羧基苯甲醯基、4-羧基苯甲醯基類之羰化芳 羰基-4-硝基苯甲醯基、2-硝基苯甲醯基類之硝化芳羰基；2-(甲羥基 羰基）苯甲醯基類之低級烷氧基羰化芳羰基、4-苯基苯甲醯基類之芳基 化芳羰基等之「芳香族醯基」； 甲羥基羰基、乙羥基羰基、第三丁氧基羰基、異丁氧基羰基類之 「低級烷氧基羰基」； -18- 200410981 2, 2, 2-三氯乙羥基羰基、2-三甲基矽烷乙羥基羰基類之「經鹵 素或三低級烷矽烷基所取代的低級烷氧基羰基」； 乙烯基羥基羰基、烯丙羥基羰基類之「烯基羥基羧基」； 苯甲基羥基羰基、4-甲氧基苯甲基羥基羰基、3, 4-二甲氧基苯 甲基羥基羰基、2_硝基苯甲基羥基羰基、4-硝基苯甲基羥基羰基類之 「以芳基環爲1至2個低級烷氧基或硝基所取代亦可的芳烷基羥基羧 基」； 4-甲基苯甲基、2, 4, 6-三甲基苯甲基、3, 4, 5-三甲基苯甲基、 心甲氧基苯甲基、4-甲氧基苯基二苯基甲基、4, 4’-二甲氧基三苯基 甲基'4，4’，4三甲氧基三苯基甲基-2-硝基苯甲基、4-硝基苯甲 基、4-氯苯甲基、4-溴苯甲基、4-氰苯甲基類之「以芳基環爲低級烷、 低級烷氧基、鹵素或氰基所取代之1至3個之芳基所取代的甲基」及「芳 羥基羰基」。 較佳爲「脂肪族醯基」、「芳香族醯基」、「以芳基環爲1至2 個之低級烷氧基或硝基取代亦可之芳烷基羥基羧基」或「以芳基環爲1 至2個之低級烷氧基或硝基取代亦可的芳烷基羥基羧基」，更佳爲「脂 肪族醯基」、「以芳基環爲1至2個之低級烷氧基或硝基取代亦可之芳 院基經基殘基」或「以芳基環爲1至2個低級院氧基或硝基所取代亦可 的芳烷基羥基羧基」，特較佳爲三氟乙醯基、單甲氧基三苯甲基、或 苯甲基羥基羧基。 上述α群的定義中，「鹵素原子」可舉例爲氟原子、氯原子、溴 原子或碘原子，較佳爲氟原子或氯原子。 上述R3a&R3b以及α群的定義中，「碳數1至6個之烷基」係可舉 例爲甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、第二丁基、第 三丁基、戊基、己基類之碳數1至6個之直鏈或分枝烷基，較佳爲甲基 200410981 或乙基。 上述的「核酸合成之保護基所保護的羥基」的核酸合成之保護 基，可例如爲與前記「羥基的核酸合成保護基」所例示之基爲同樣的 基，較佳爲「脂肪族醯基」或「芳香族醯基」’更較佳爲苯甲醯基。 作爲上述的「核酸合成之保護基所保護的氫硫基」核酸合成之保 護基，例如爲前記「羥基的核酸合成保護基」者之外’可舉例爲甲硫 基、乙硫基、第三丁硫基類之烷硫基、苯甲基硫基類之芳硫基等之「形 成二硫化物之基」，較佳爲「脂肪族醯基」或「芳香族醯基」，更較 佳爲苯甲醯基。 上述尺3&及1^31)以及cx群的定義中，作爲「核酸合成之保護基所保 護的胺基」的核酸合成之保護基，可例如爲與前記「胺基的核酸合成 保護基」所例示之基爲同樣的基，較佳爲「脂肪族醯基」或「芳香族 醯基」，更較佳爲苯甲醯基。 作爲上述的「碳數1至6個之烷氧基」，可舉例爲甲氧基、乙氧基、 正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、第二丁氧基、第三丁氧 基、戊氧基、己氧基類之碳數1至6個之直鏈或分枝烷氧基，較佳爲甲 氧基或乙氧基。 作爲上述的「碳數1至6個之烷硫基」，可舉例爲甲硫基、乙硫基、 丙基硫基、異丙基硫基、丁基硫基、異丁基硫基、第二丁基硫基、第 三丁基硫基、戊基硫基、己基硫基，較佳爲甲硫基或乙硫基。 作爲上述的「碳數1至6個之烷基所取代的烷胺基」，可舉例爲甲 胺基、乙胺基、丙胺基、異丙胺基、丁胺基、異丁胺基、第二丁胺基、 第三丁胺基、戊胺基、己胺基、二甲胺基、二乙胺基、二丙胺基、二 異丙胺基、二丁胺基、二異丁胺基、二（第二丁基）胺基、二（第三丁基) 胺基、二戊胺基、二己胺基，較佳爲甲胺基、乙胺基、二甲基胺或二 200410981 乙胺基。 上述的碳數1至7個之氰烷氧基’可舉例爲氰甲氧基、氰基乙氧基 -氰基丙氧基、氰基丁氧基、氰基戊氧基、氰基己氧基等，較佳爲2-氰基乙氧基。 上述的「其醫藥上可接受之鹽類」，含有本發明的化合物Π)以 及上述構造（la)之寡核苷酸類似物’因爲含有鹽，較佳爲其鹽，作爲 其類之鹽較佳爲鈉鹽、鉀鹽、鋰鹽類之鹼金屬、鈣鹽、鎂鹽類之鹼土 族金屬鹽、鋁鹽、鐵鹽、鋅鹽、銅鹽、鎳鹽、鈷鹽等之金屬鹽··銨鹽 類之無機鹽，第三辛胺鹽、二苯甲胺基鹽、嗎啉鹽、葡萄胺鹽、苯基 甘胺酸烷酯鹽 '乙二胺鹽、N-甲基麩醯胺酸鹽、脈鹽、二乙胺基鹽、 三乙基胺鹽、二環己胺基鹽、Ν，Ν’-二苯甲基乙二胺基鹽、氯普羅卡 因鹽、普羅卡因鹽、二乙醇胺基鹽、Ν -苯甲基-苯乙胺基鹽、六氫吡笙 鹽、四甲基銨鹽、三（羥甲基）胺甲基烷鹽類之有機鹽類之胺基鹽；氟 化氫酸鹽、鹽酸鹽、溴化氫酸鹽、碘化氫酸鹽類之鹵素化氫酸鹽、硝 酸鹽、過氯酸鹽、硫酸鹽、燐酸鹽等之無機酸鹽；甲基烷磺酸鹽、三 氟甲基烷磺酸鹽、乙烷磺酸鹽類之低級鏈烷磺酸鹽、苯磺酸鹽、對甲 苯磺酸鹽類之芳基磺酸鹽、醋酸鹽、蘋果酸鹽、富馬酸鹽、琥珀酸鹽、φ 檸檬酸鹽、乙二酸鹽、草酸鹽、馬來酸鹽等之有機酸鹽；及甘胺酸鹽、 賴胺酸鹽、精胺酸鹽、鳥胺酸鹽、麩醯胺酸鹽、天冬胺酸鹽類之胺酸 鹽，含有二環核苷構造（la)之寡核苷酸類似物之情況下，鈉鹽、鉀鹽 及三乙基胺鹽係爲較佳，化合物（I)之情況下，自由體爲較佳。 又，含有本發明的化合物（I)以及上述構造（Ia)之募核甘酸類似 物，藉由放置於大氣中以吸收水分，吸着水爲附著水和物的情況下， 本發明亦包括其類之鹽。 進一步含有本發明的化合物（I)以及上述構造（1 a)之寡核苷酸類 -21- 200410981 似物，吸收其他種的溶劑，若由溶劑和物而合成時，本發明亦包括其 類之鹽。 作爲發明的二環核苷衍生物（1)的具體實例，係可舉例如下述表1 及表2中所示之化合物。 在表1及表2中· 「Bn」係表示爲苯甲基、「Bz」係表示爲苯基、「PhOAcjii ' 苯氧基乙酿基、「Me」係表不爲甲基、「ΡΜΒη」係表不爲封甲氧基 苯甲基、「iPr」係表示爲異丙基、「MMTr」S、4 -甲氧基三苯基甲 基、「DMTr」係表示爲4，4’-二甲氧基三苯基甲基、「TES」係表 φ 示爲三乙基矽烷基、「Tfa」係表示爲三氟乙醯基、「TMTr」係表示 爲4, 4，，，4，，-三甲氧基三苯基甲基、「TMS」係表示爲三甲基矽烷基、 「TBDMS」係表示爲第三丁基二苯基矽烷基、「TB DPS」係表示爲 第三丁基二苯基矽烷基-「PCN」係表示爲氰基乙氧基（二異丙基胺） 膦基、「PMN」係表示爲甲氧基（二異丙基胺）膦基。

-22- 200410981 [表1] R5

例示化合物 號碼 R1 R2 R4 R5 卜1 Η Η Η Η 1-2 Η Η Η ΟΗ 1-3 Η Η Η SH 1-4 Η Η Η νη2 1 -5 Η Me Η νη2 1-6 Η Η Η OMe 1-7 Η Η F Η 1-8 Η Η F νη2 1-9 Η Η CI Η 1-10 Η Η CI νη2 1-11 Η Η CI CI 1-12 Η- Η Βγ Η 1-13 Η Η Βγ νη2 1-14 Η Η 0Η Η 1-15 Η Η ΟΗ ΟΗ 卜16 Η Η ΟΗ νη2 1-17 Η Η OMe OMe 1_18 Η Η OMe νη2 1-19 Η Η νη2 Η 1-20 Η Η νη2 F 1-21 Η Η m2 C! 1-22 Η Η ΝΗ〇 Br -23- 200410981

1-23 Η H nh2 OH 1-24 Η Me nh2 OH 1-25 Η H nh2 nh2 1-26 Η H nh2 OMe 1-27 Η PhOAc H NHBz 1-28 Η Tfa H NHBz 1-29 Η PhOAc NHBz OH 1-30 Η Tfa NHBz OH 1-31 Βη PhOAc H NHBz 1-32 ΡΜΒη PhOAc H NHBz 1-33 .Βη Tfa H NHBz 1-34 ΡΜΒη Tfa H NHBz 1-35 Βη PhOAc NHBz OH 1-36 ΡΜΒη PhOAc NHBz OH 1-37 Βη Tfa NHBz OH 1-38 ΡΜΒη Tfa NHBz OH 1-39 MMTr PhOAc H NHBz 1 - 40 DMTr PhOAc H NHBz 1-41 ΤΜΤγ PhOAc H NHBz 1-42 MMTr Tfa H NHBz 1-43 DMTr Tfa H NHBz 1 一 44 TMTr Tfa H NHBz 1-45 MMTr PhOAc NHBz OH 1 - 46 DMTr PhOAc NHBz OH 1-47 TMTr PhOAc NHBz OH 1-48 MMTr Tfa NHBz OH 1 - 49 DMTr Tfa NHBz OH 1-50 TMTr Tfa NHBz OH 1-51 TBDPS PhOAc H NHBz 1-52 TBDMS PhOAc H NHBz 1-53 TMS PhOAc H NHBz 1-54 TBDPS Tfa H NHBz 1-55 TBDMS Tfa H NHBz 1 - 56 TMS Tfa H NHBz 1-57 TBDPS PhOAc NHBz •OH 1 一 58 TBDMS PhOAc NHBz OH

-24 200410981 1 - 59 TMS PhOAc NHBz OH 1-60 TBDPS Tfa NHBz OH 1-61 •TBDMS Tfa NHBz OH 1-62 TMS Tfa NHBz OH 1-63 DMTr Tfa NHCOCH(CH3)2 oh 1-64 DMTr PhOAc nhcoch(ch3)2 oh 1-65 DMTr Me nhcoch(ch3)2 oh 1-66 DMTr Me H NHBz 1-67 TBDMS Tfa NHCOCH(CH3)2 oh 1-68 H Me nhcoch(ch3)2 oh 1-69 H Me H NHBz 1-70 TBDPS. MMTr H NHBz W1 TBDPS MMTr nhcoch(ch3)2 OH 1-72 TBDMS MMTr H NHBz 1-73 TBDMS MMTr NHC0CH(CH3)2 OH 1-74 H MMTr H NHBz 1-75 H MMTr NHCOCH(CH3)2 oh 1-76 PCN MMTr H NHBz 1-77 PCN MMTr NHCOCH(CH3)2 OH 1-78 PMN MMTr H NHBz 1 - 79 PMN MMTr NHCOCH-(CH3)2 oh

[表2] R6

[化7] 例示化合物 號碼 R1 R2 R6 R7 2-1 -25- 200410981

1-1 Η H Cl H 2-3 Η H OH H 2-4 Η Me OH H 2-5 Η H OH Me 2-6 Η Me OH Me 2-7 Η H SH H 2-8 Η H nh2 H 2-9 Η Me nh2 H 2-10 Η H nh2 F 2-11 Η H nh2 C] 2-12 Η H nh2 Me 2-13 Η H OMe H 2-14 Η PhOAc OH H 2 -15 Η Tia OH H 2-16 Η PhOAc OH Me 2-17 Η Tfa OH Me 2-18 Η PhOAc NHBz H 2-n Η Tfa _2 H 2-20 Βη PhOAc OH H 2 - 21 ΡΜΒη PhOAc OH H 2-22 Βη Tfa OH H 2-23 ΡΜΒη Tfa OH H 2-24 Βη PhOAc OH Me 2-25 ΡΜΒη PhOAc OH Me 2 - 26 Βη Tfa OH Me 2 - 27 ΡΜΒη Tfa OH Me 2-28 Βη PhOAc NHBz H 2 - 29 ΡΜΒη PhOAc NHBz H 2-30 Βη Tfa NHBz H 2-31 ΡΜΒη Tfa NHBz H 2-32 ΜΜΤγ PhOAc OH H 2-33 DMTr PhOAc OH H 2-34 TMTr PhOAc OH H 2-35 MMTr Tfa OH H 2-36 DMTr Tfa OH K 2 - 37 TMTr Tfa OH H

-26- 200410981 2 - 38 2-39 2-40 2-41 2-42 2-43 2 - 44 2-45 2 - 46 2-47 2-48 2-49 2-50 .2-51 2 - 52 2-53 2-54 2-55 2-56 2-57 2-58 2-59 .2-60 2-61 2-62 2-63 2-64 2-65 2-65 2-67 2-68 2 - 69 2-70 2-71 2-72 2-73 • MMTr Ph〇Ac OH Me DMTr PhOAc OH Me TMTr PhOAc OH Me MMTr Tfa OH Me DMTr Tfa OH Me TMTr Tfa OH Me MMTr PhOAc NHBz H DMTr PhOAc NHBz H TMTr PhOAc NHBz H MMTr Tfa NHBz H DMTr Tfa NHBz H TMTr Tfa NHBz H TBDPS PhOAc OH H TBDMS PhOAc OH H TMS PhOAc OH H TBDPS Tfa OH H TBDMS Tfa OH H TMS Tfa OH H •TBDPS PhOAc OH Me TBDMS PhOAc OH Me TMS PhOAc OH Me TBDPS Tfa OH Me TBDMS Tfa OH Me TMS Tfa OH Me TBDPS PhOAc NHBz H TBDMS PhOAc NHBz H TMS PhOAc NHBz H TBDPS Tfa NHBz H TBDMS Tfa NHBz H TMS Tfa NHBz H DMTr Tfa NHBz Me H Me NHBz Me TBDPS (MMTr) NH OH H TBDPS (MMTr)NH OH Me TBDPS (WMTr)NH NHBz H TBDPS (MMTr)NH NHBz Me

-27- 200410981 2 - 74 TBDMS (MMTr) ΝΗ OH H 2-75 TBDMS (MMTr)NH OH Me 2-76 TBDMS (MMTr)NH NHB2 H 2-77 TBDMS (MMTr)NH NHBz Me 2-78 Η (MMTr)NH OH H 2 - 79 Η (MMTr)NH OH Me 2-80 Η (MMTr)NH NHBz H 2-81 Η (MMTr)ΜΗ NHBz Me 2 - 82 PCN (MMTr)NH OH H 2-83 PCN (MMTr)NH OH Me 2-84 PCN (MMTr)NH NHBz H 2-85 PCN (MMTr)NH NHBz Me 2-86 ΡΜΝ (MMTr)NH OH H 2-87 ΡΜΝ (MMTr)NH OH Me 2 - 88 ΡΜΝ (MMTr)NH NHBz H 2-89 ΡΜΝ (MMTr)NH NHBz Me

上述表中較佳的化合物號碼爲1-3、卜4、1-5、1-8、1-10、1-11、 卜 17、卜 18、1-20、卜21、卜 22、卜23、1-24、1-25、卜28、1-30、 1- 54 、 1-60 、 1-70至卜79 、 2-5-2-6 、 2-7 、 2-8 、 2-9 、 2-10、 2- 11-2-12、2、13、2-16、2-17、2-19、2-42'2-56、2-59、 2-65、2-70至2-90的化合物。 更佳的化合物，可舉例爲化合物號碼1-4、1-23、1-76至1-79、 2-5、2-6、2-8、2-16、2-17、2-42、2-56、2-59、2-83 至 2-90 的化合物。 【發明內容】 發明實施的形態 -28- 200410981 本發明的二環核苷衍生物（1)係根據下述記載之人法而製造 [化8]

(丨丨） .(HD R1On B A-2 NR2 (I) 上述步驟表中、R1、R2、B係爲與上述意義相同。 R8係表示爲羥基的核酸合成保護基，較佳爲第三丁基二甲基矽烷 基、三甲基矽烷、三乙矽烷、三異丙基矽烷基、二甲基異丙基矽烷基、 二乙基異丙基矽烷基、第三丁基二苯基矽烷基、二苯基甲基矽烷基、 三苯基矽烷類之矽烷基；甲氧基三苯基甲基、4, 4，-二甲氧基三苯 基甲基、4, 4’，4’’-三甲氧基三苯基甲基類之三苯甲基；苯甲基、對 甲氧基苯甲基類之芳烷基，更較佳爲第三丁基二苯基矽烷基。 R9係表示爲胺基的核酸合成之保護基，較佳爲「脂肪族醯基」、 「芳香族醯基」、「以芳基環爲經1至2個之低級苯氧基或硝基取代亦 可的芳烷基羥基羰基」或「以芳基環爲1至2個之低級苯氧基或硝基取 代亦可的芳烷基羥基羰基」，更較佳爲「脂肪族醯基」、「以芳基環 爲1至2個之低級苯氧基或硝基取代亦可的芳烷基羥基羰基」或「以芳 基環爲1至2個之低級苯氧基或硝基取代亦可的芳烷基羥基羰基」，特 較佳爲三氟乙醯基、單甲氧基三苯甲基、或苯甲基羥基羰基。 B1係表示爲亦可含有從下述αΐ群所選擇之取代基的嘌呤-9-基 或2 -氧基-1，2 -二氫嘧啶-卜基。 -29- 200410981 Ο 1群） 鹵素原子、 碳數1至6個之烷基、 羥基、 核酸合成之保護基所保護的羥基、 氫硫基、 核酸合成之保護基所保護的氫硫基、 胺基、 核酸合成之保護基所保護的胺基、 碳數1至6個之烷氧基、 碳數1至6個之烷硫基，及 碳數1至6個之烷基所取代的單或二烷胺基。 Α法係爲將化合物（III)作爲起始原料以得到目的化合物（1)之方 法。 以下，就A法的各步驟做詳細的説明。 <八法> (A-1步驟） 本步驟係在惰性溶劑中、氫及觸媒存在下，變換以習知方法製造 化合物（II)之羥基上的氫原子，而製造化合物（III)之步驟。 化合物（II)與特開200 1 -64297號中之化合物（I)相同，從特開 200 1 -64297號中所記載之方法而得到。 本步驟進行羥基與硫羰基的加成（A-l a)後，接著藉由進行還原反 應（A-lb)而完成。 作爲（A-l a)羥基與硫羰基之加成使用的溶劑，若沒有參與本反應 者則並沒有特別地限制，較佳可使用二乙基醚、四氫呋喃、二曙烷類 200410981 之醚類；甲醯胺基、二甲基甲醯胺基-二甲基乙醯胺基、N-甲基-2-毗 咯啶酮、六甲基膦三醯胺基類之醯胺基類；乙腈、異丙腈類之腈類， 更佳爲腈類。 一般所使用的試劑，若爲硫羰基加成中使用者的話，並沒有特別 地限制，較佳爲使用鹵化苯氧基硫羰基類，更較佳爲使用氯化苯氧基 硫鑛基。 反應温度及反應時間根據起始物質、溶劑及觸媒的種類等而有所 不同，通常爲〇°C至100°C(較佳爲20°c至40°c)、5分鐘至48小時（較 佳爲1小時至10小時）。 反應終了後，本反應的目的化合物，係經由例如濃縮反應混合 物、加入不混合水與醋酸乙酯類之有機溶劑、經水洗後，再將含有目 的化合物之有機層分離、且經無水硫酸鎂等乾燥後，蒸餾萃取溶劑而 得到。 所得到的化合物視需要可藉由習知方法，例如再結晶、再沈殿、 矽凝膠管柱層析法等來做進一步精製。又，未精製部分可將其接著用 於其次的反應。 (A-lb)還原反應 所使用的溶劑，可舉例爲例如苯、甲苯、二甲苯類之芳香族烴類； 二乙基醚、二異丙基醚、四氫呋喃、二噚烷基、二甲氧基乙烷基、二 乙二醇二甲基醚類之醚類，較佳爲芳香族烴類，更較佳爲甲苯。 所使用的還原劑，可舉例爲使用例如偶氮二異丁腈、三苯基硼類 之自由基起始劑作爲觸媒，使用氫化三丁基錫，氫化三苯基錫、氫化 二丁基錫類之自由基還原劑之方法，較佳爲偶氮二異丁腈及氫化三丁 基錫的組合。 反應温度係根據原料化合物、反應試劑而有所不同，可在2 0 °C至 200410981 200°C下進行，較佳爲50°C至120°C。 反應時間係根據反應温度、原料化合物、反應試劑或使用的溶劑 的種類而有所不同，通常反應時間爲1小時至3天間，較佳爲3小時至 2 4小時。 反應終了後，本反應的目的化合物，係經由例如濃縮反應混合 物、加入不混合水與醋酸乙酯類之有機溶劑、經水洗後，再將含有目 的化合物之有機層分離、且經無水硫酸鎂等乾燥後，蒸餾萃取溶劑而 得到。 所得到的化合物視其需要，可藉由習知方法，例如再結晶、再沈 φ 殿、矽凝膠管柱層析法等做進一步精製。 (A-2步驟） 本步驟在惰性溶劑申以A-1步驟製造之化合物（II)中，反應脫保 護試劑。又，視需要進行烷基化，以製造化合物（I)之步驟。 脫保護的方法根據保護基的種類而有所不同，若未產生其他的副 反應之方法的話，並沒有特別地限制，可藉由例如”Protective Groups in Organic Synthesis" (Theodora W. Greene著、1981 年、A Wiley-Interscience Publication發行）中記載的方法進行。 _ 又，不同種類的保護基爲複數個存在時，可適當地組合此等方 法，已進行順次脫保護。 特別是，當保護基爲（1)「脂肪族醯基或芳香族醯基」、（2)「1 至3個之芳基所取代的甲基」或「以芳基環爲經低級烷基、低級烷氧基、 鹵素、氰基取代之1至3個之芳基所取代的甲基」、（3)「矽烷基」之情 況下，可用以下的方法進行。 (1)脂肪族醯基及芳香族醯基的情況下，通常在惰性溶劑中、反 應鹽基而進行。 >32- 200410981 使用的溶劑，若爲通常的加水分解反應中所使用者的話’並沒有 特別地限制，可使用例如水；甲醇、乙醇、正丙醇類之醇類；四氫呋 喃、二曙烷類之醚類等之有機溶劑或水與上述有機溶劑的混合溶劑， 較佳爲醇類。 所使用的鹽基，在化合物的其他部分中沒有參與影響的話’並沒 有特別地限制，較佳爲可使用鈉甲醇鹽類之金屬醇鹽類；碳酸鈉、碳 酸鉀、碳酸鋰類之鹼金屬碳酸鹽；氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鋰、 氫氧化鋇類之鹼金屬氫氧化物或氨水、濃氨、甲醇類之氨類’較佳爲 鹼金屬碳酸鹽。 反應温度及反應時間根據起始物質、溶劑及使用的鹽基等而有所 不同，並沒有特別地限制，其可爲抑制副反應，通常在〇°〇至150°c、 實施1至1 〇小時。 反應終了後，本反應的目的化合物（1)按照習知方法從反應混合 物取得。例如濃縮反應混合物、加入不混合水及醋酸乙酯類之有機溶 劑，經水洗後，將含有目的化合物之有機層分離、經硫酸鈉酐等乾燥 後，蒸餾去除溶劑而得到。 所得到的化合物視需要以習知方法’根據例如再結晶或矽凝膠管 柱層析法等做進一步精製。 (2)保護基係爲「1至3個之芳基所取代的甲基」或「以芳基環爲 低級烷基、低級烷氧基、鹵素、氰基取代之1至3個芳基所取代的甲基」 的情況時，在惰性溶劑中可使用還原劑而進行。 所使用的溶劑可舉例較佳爲甲醇、乙醇、異丙醇類之醇類；二乙 基醚、四氫呋喃、二噚烷類之醚類；甲苯、苯、二甲苯類之芳香族烴 類；己烷基、環己烷類之脂肪族烴類：醋酸乙酯、醋酸丙酯類之酯類； 醋酸類之有機酸類或此等的有機溶劑與水之混合溶劑。 -33- 200410981 所使用的還原劑，通常若爲接觸還原反應中所使用的話，並沒有 特別地限制，可舉例較佳爲鈀碳素、雷氏鎳、氧化鉑、鉑黒、铑一氧 化鋁、三苯基膦-氯化铑、鈀-硫酸鋇。 壓力並沒有特別地限制、通常在1至10氣壓下進行。 反應温度係爲〇°C至60°c，較佳爲20°c至40°c。 反應時間係爲10分鐘至24小時，較佳爲1至3小時。 反應終了後，本反應的目的化合物（I)按照習知方法從反應混合 物取得。例如：從反應混合物去除還原劑、加入沒有混合水與醋酸乙 酯類之有機溶劑、經水洗後，將含有目的化合物之有機層分離、經硫 φ 酸鈉酐等乾燥後，蒸餾萃取溶劑而得到。 所得到的化合物視需要以習知方法，根據例如再結晶、矽凝膠管 柱層析法等做進一步精製。 「經3個芳基所取代的甲基」，也就是說，在三苯甲基的情況亦 可使用酸而進行。 在此種情形下，使用的溶劑可舉例爲例如苯、甲苯、二甲苯類之 芳香族烴類；二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、1，2 -二氯乙烷、氯苯、二 氯苯類之鹵素化烴類；甲醇、乙醇、異丙醇、第三丁醇類之醇類：乙 | 腈、異丙腈類之腈類；甲醯胺基、N，N -二甲基甲醯胺基、N，N -二甲 基乙醯胺基、N -甲基-2 -吡咯啶酮、N -甲基吡咯啶酮、六甲基膦三醯 胺基類之醯胺基類：醋酸類之有機酸類，較佳爲有機酸（特別是醋酸） 或醇類（特別是第三丁醇）。 所使用的酸較佳爲醋酸或三氟醋酸。 反應温度係爲〇°C至60°C，較佳爲20至40°C。 反應時間係爲10分鐘至24小時，較佳爲1至3小時。 反應終了後，本反應的目的化合物（I)按照習知方法從反應混合 -34- 200410981 物取得。例如：中和反應混合物、加入沒有混合水與醋酸乙酯類之有 機溶劑、經水洗後，將含有目的化合物之有機層分離、經硫酸鈉酐等 乾燥後，蒸餾萃取溶劑而得到。 所得到的化合物視需要以習知方法，根據例如再結晶、矽凝膠管 柱層析法等做進一步精製。 (3)保護基爲「矽烷基」的情況下，通常係藉由生成氟化四丁基 銨、化水素酸、氟化氫酸、吡啶基、氟化鉀類之氟陰離子的化合物 處理’或藉由經醋酸、甲基烷磺酸、對甲苯磺酸、三氟醋酸、三氟甲 基烷磺酸類之有機酸或鹽酸類之無機酸處理而去除。 再者，藉由氟陰離子去除時，添加甲酸、醋酸、丙酸類之有機酸 可促進反應。 所使用的溶劑，若爲不阻害反應、部分溶解起始物質的話，並沒 有特別地限制，舉例較佳可爲二乙基醚、二異丙基醚、四氫呋喃、二 噚烷基、二甲氧基乙烷基、二乙二醇二甲基醚類之醚類；乙腈-異丙腈 類之腈類；水；醋酸類之有機酸及此等的混合溶劑。 反應温度係爲〇°C至100°C，較佳爲20至7〇°c。 反應時間係爲5分鐘至48小時，較佳爲1至24小時。 反應終了後，本反應的目的化合物（I)按照習知方法從反應混合 物取得。例如：蒸餾萃取溶劑，藉由矽凝膠管柱層析法精製而得到。 R2爲碳數1至6個之烷基化合物，其係以前述的方法將1^0脫保護 後，藉由使用烷化劑及鹽基而製造。 再者，藉由氟陰離子去除時，添加甲酸、醋酸、丙酸類之有機酸 可促進反應，較佳可爲二乙基醚、二曙烷基、四氫呋喃類之醚類；二 氯甲烷、氯仿、四氯化碳、二氯乙烷、氯苯、二氯苯類之氯化烴類及 此等的混合溶劑。 •35- 200410981 所使用的烷化劑較佳爲碘化烷。 所使用的鹽基以三乙胺基、吡啶基、二甲基胺吡啶基、1, 8-二 吖二環[5, 4, 〇]十一 烯類之有機鹽基爲較佳。 反應温度係爲-30°C至40°C，較佳爲-10至20°C。 反應時間係爲1至100小時，較佳爲12至48小時。 反應終了後，本反應的目的化合物（I)按照習知方法從反應混合 物取得。例如蒸餾去除溶劑，藉由矽凝膠管柱層析法精製而得到。 R1爲磷酸基或被保護的磷酸基之情況下，可進一步追加以下的方 法而進行。 即，在惰性溶劑中R1爲氫化合物（I)時，反應所期望的磷氧化試 劑（例如2-氯苯基膦雙三唑鹽）。 使用的溶劑，若不阻害反應的話，並沒有特別地限制，通常使用 吡啶基類之芳香族經胺基。 反應温度爲-20°c至100°C並沒有特別地限制，通常在室温下實 施。反應時間，因爲根據溶劑、反應温度而有所不同，反應溶劑係使 用吡啶，於室温下實施時爲1小時。 反應終了後，目的化合物係藉由例如適當中和反應混合物，又不 溶物存在時藉由濾過去除後，加入沒有混合水與醋酸乙酯類之有機溶 劑、經水洗後，將含有目的化合物之有機層分離、經無水硫酸鎂等乾 燥後，蒸餾萃取溶劑而得到。 所得到的目的化合物視需要以習知方法，藉由例如再結晶、再沈 殿或管柱層析法等做進一步精製。 磷酸基上的保護基於核酸合成時通常以被使用之方法去除。 R1係爲以前述式-P(R3a)R3b所表示之基的情況時，可進一步進 行下列追加的方法。 200410981 本步驟在惰性溶劑中、脫酸劑存在下，R1爲氫化合物時，係反應 式X-P(R3a2)R3b2(式中，R3a2及R3b2係表示爲經相同或不同核酸合 成之保護基所保護的羥基、核酸合成之保護基所保護的氫硫基、核酸 合成之保護基所保護的胺基、碳數1至6個之烷氧基、碳數1至6個之烷 硫基、碳數1至7個之氰烷氧基或碳數1至6個之烷基所取代的胺基，X 係表示爲鹵素原子）所表示的亞磷氧化劑。 使用的亞磷氧化劑，較佳者爲氯嗎福啉基甲氧基膦、氯嗎福啉基 氰基乙氧基膦、氯二甲基胺甲氧基膦、氯二甲基胺氰基乙氧基膦、氯 二異丙基胺甲氧基膦、氯二異丙基胺氰基乙氧基膦類之膦類，更較佳 φ 爲氯嗎福啉基甲氧基膦、氯嗎福啉基氰基乙氧基膦、氯二異丙基胺甲 氧基膦、氯二異丙基胺氰基乙氧基膦。 使用的溶劑若於反應中沒有參與影響的話，並沒有特別地限制， 較佳可爲四氫呋喃-二乙醚、二噚烷類之醚類。 所使用的脫酸劑可舉例爲吡啶基、二甲基胺吡啶基類之雜環胺基 類；三甲胺基、三乙胺基、二異丙基乙胺基類之脂肪族胺基類，較佳 爲脂肪族胺基類（特別是二異丙基乙胺基）。 反應温度並沒有特別地限制，通常可爲-50至50 °C，較佳爲室温。 0 反應時間係根據所使用的原料、試劑、温度等而有所不同，通常 爲5分鐘至30小時，較佳爲在室温下反應30分鐘。 反應終了後，目的化合物係藉由例如適當中和反應混合物、又不 溶物存在時，藉由過濾去除後，加入沒有混合水與醋酸乙酯類之有機 溶劑、經水洗後，將含有目的化合物之有機層分離、經無水硫酸鎂等 乾燥後，蒸餾去除溶劑而得到。 所得到的目的化合物視需要以習知方法，例如再結晶、再沈殿或 層析法等做進一步精製。 -37- 200410981 基於所預期的，將各官能基上之保護基在核酸合成時，用一般使 用之方法去除。 使用本發明的化合物（I)，根據以下所述之B法，製造含有上述構 造（la)之寡核苷酸類似物。 [化9]

ΗΟ-, B

B-1 R110-i B 、NR10 (lb) (IV)

B-2 -^-^寡核苷酸 上述步驟表中，R1()係表示爲胺基的核酸合成保護基（特別是，經 甲氧基取代亦可的三苯甲基），R11係表示爲藉由反應膦醯基、後述之 單取代-氯（烷氧基）膦類或二取代-烷氧基膦類所形成之基。 以下就B法的各步驟做詳細的説明。 〈B法〉 (B-1步驟） 本步驟爲在惰性溶劑中以A法所製造之化合物（lb)(該化合物以 A-2步驟將R1脫保護，相當於所得之化合物（1))中，醯胺酸鹽化上通 常使用單取代-氯（烷氧基）膦類或二取代-烷氧基膦類進行反應，以製 造化合物（IV)之步驟。 所使用的溶劑，若不參與反應影響者的話，並沒有特別地限制， 較佳爲四氫呋喃、二乙基醚、二噚烷類之醚類。 使用的單取代-氯（烷氧基）膦類，係舉例如氯（嗎福啉基）甲氧基 -38- 200410981 膦、氯（嗎福啉基）氰基乙氧基膦、氯（二甲基胺）甲氧基膦、氯（二甲基 胺）氰基乙氧基膦、氯（二異丙基胺）甲氧基膦、氯（二異丙基胺）氰基乙 氧基膦類之膦類，較佳爲氯（嗎福啉基）甲氧基膦、氯（嗎福啉基）氰基 乙氧基膦、氯（二異丙基胺）甲氧基膦、氯（二異丙基胺）氰基乙氧基膦。 使用單取代-氯（烷氧基）膦類時，在使用脫酸劑之此種情形下， 所使用的脫酸劑可舉例爲吡啶基、二甲基胺吡啶基類之雜環胺基類、 三甲胺基、三乙胺基、二異丙基乙胺基類之脂肪族胺基類，較佳爲脂 肪族胺基類（特別是二異丙基乙胺基）。 所使用的二取代-烷氧基膦類，可舉例如雙（二乙基胺）氰基乙氧 基膦、雙（二乙基胺）甲磺醯基乙氧基膦、雙（二異丙基胺）（2, 2, 2-三 氯乙氧基）膦、雙（二異丙基胺）（4-氯苯基甲氧基）膦類之膦類，較佳爲 雙（二乙基胺）氰基乙氧基膦。 使用二取代-烷氧基膦類之情況下，所使用的酸在此種情形下， 作爲使用的酸較佳爲四唑，醋酸或對甲苯磺酸。 反應温度並沒有特別地限制，通常可爲-5 0至50°C，較佳爲室温。 反應時間係根據所使用的原料、試劑、温度等而有所不同，通常 爲5分至30小時，較佳爲在室温反應之情況下反應30分鐘。 反應終了後，本反應的目的化合物（13)按照習知方法從反應混合 物取得。 例如適當混合反應混合物，又不溶物存在的情況下，藉由過濾去 除後，添加不混合水及醋酸乙酯之有機溶劑、用水洗後，將含有目的 化合物之有機層分離、經硫酸鈉酐等乾燥後，蒸餾萃取溶劑而得到。 所得到的目的化合物視需要以習知方法，藉由例如再結晶、再沈 殿或矽凝膠管柱層析法等做進一步精製。 或本步驟在惰性溶劑中（較佳爲二氯甲烷類之鹵素化烴類）' 化合 200410981 物（lb)中，反應三_(1，2, 4-三唑基）磷酸酯後，添加水、Η-膦酸酯化、 以製造化合物（IV)之步驟。 反應温度並沒有特別地限制，通常可爲-20至100°C，較佳爲1〇 至 4 0〇C。 反應時間根據所使用的原料、試劑、温度等而有所不同，通常爲 5分至30小時，較佳爲在室温反應之情況下反應30分鐘。 反應終了後，本反應的目的化合物根據習知方法從反應混合物而 取得。例如適當中和反應混合物、又不溶物存在的情況下藉由過濾去 除後，添加不混合水及醋酸乙酯類之有機溶劑，用水洗後，將含有目 φ 的化合物之有機層分離、經硫酸鈉酐等乾燥後，蒸餾萃取溶劑而得到。 得到的目的化合物視需要以習知方法，藉由例如再結晶、再沈殿 或層析法等做進一步精製。 (B-2步驟） 本步驟用至少1個以上的B-1所製造的化合物（IV)、及爲製造所 期望的核苷酸排列之寡核苷酸，可使用必要的市售的磷醯胺酸鹽試劑 等，按照一般的方法在DNA自動合成機上，製造含有目的構造（la)之 寡核苷酸類似物的步驟。 φ 具有所期望的核苷酸排列之寡核苷酸類似物，DNA合成機、使用 藉由例如帕奇椰魯瑪社的膦醯胺酸鹽法模型392等的文獻（Nucleic Acids Research, 12, 4539( 1 984))所記載的方法準備製造。 又，按照所預期的硫醇氯化情況下，使用反應硫之外的四乙基秋 蘭姆二硫化物（TETD、應用生物系統公司）、Beaucage試劑（米尼寶 公司）等之3價的磷酸以形成硫醇鹽之試劑，其係使用如文獻 (Tetramheron Letters，32，3005(1991)、J.Am.Chem.Soc.，112， 1 2 5 3 ( 1 9 90))所記載的方法準備以製造硫醇鹽衍生物。 -40- 200410981 所得到的粗製寡核苷酸，使用低聚肽（逆相層析法）精製，精製物 的純度可藉由HPLC進行分析來確認。 所得到的寡核苷酸類似物的鏈長，核苷單位通常爲2至50個，較 佳爲1 0至3 0個。 所得到的寡核苷酸類似物，對於各種核苷酶紛紛分解投入生物 後’可長時間在生物内存在。又、例如與mRNA形成安定的雙鏈，可 阻害成爲病因的蛋白質之生合成，與基因組中的雙鏈DN A之間形成三 鏈’而阻害mRNA的轉錄，以抑制細胞中被感染的病毒的増殖。又、 所得到的寡核苷酸類似物係選取S型構形，在DNA及RNA可混在的狀 φ 況時，與選擇的DNA結合，例如作爲DNA酶係爲有用。 本發明的寡核苷酸類似物，開始時作爲抗腫瘍劑、抗病毒劑，可 阻害特定基因的作用，治療疾病作爲醫藥品係爲可期待的。 本發明的寡核苷酸類似物，配合例如緩衝劑及/或安定劑等之慣 用的助劑作爲非經口投藥製劑，而產生核糖核蛋白體製劑。又、局部 所用的製劑係配合慣用醫藥用載體的軟膏、乳霜、液劑或膏藥等調劑。 其使用量根據症狀、年齡、投藥方法等而有所不同，例如平均i 回按照下限爲0-0.01毫克/公斤體重（較佳爲〇·〇1毫克/公斤體重）、上 0 限爲100毫克/公斤體重（較佳爲10毫克/公斤體重）以1日平均1至數回 症狀而使用係爲所希望的。 【實施方式】 以下係表示實施例及參考例，更進一步詳細說明本發明，本發明 的範圍並不受其限制。 【實施例】 (實施例1) 3f-(4-甲氧基三苯甲基）胺基-3，-脫氧-3，-N，4，-C- 亞甲基胸苷 -41- 200410981 (la) 5’-〇-第三丁基二苯基矽烷-3’-苯氧基乙醯胺基-2’-Ο-苯氧 基硫羰基-3’-脫氧-3’-Ν，4’亞甲基-5 -甲基尿苷 於氮氣流下，在5’-0-第三丁基二苯基矽烷-8’-苯氧基乙醯胺基 -3’-脫氧-3’-Ν，4’-C-亞甲基-5-亞甲基尿苷（以參考例4所得到的化 合物：69毫克，0.108毫莫耳）的無水乙腈溶液（10毫升）中，添加4-(二 甲基胺）吡啶基（32毫克，0.259毫莫耳）、氯化苯氧基硫基羰基（18毫升， 0.130毫莫耳），於室溫下攪拌3小時。添加水後將溶劑蒸餾萃取，以 醋酸乙酯萃取，有機層用飽和碳酸氫鈉水溶液、水、飽和食鹽水加以 洗浄。有機層用硫酸鈉酐乾燥之後，將溶劑蒸餾萃取可得到目的化合 φ 物（l〇4mg)。化合物未精製部分可於其次反應中使用。 (lb) 5’-0·第三丁基二苯基矽烷-3’-苯氧基乙醯胺基-3，-脫氧 -3’-N，4’-C-亞甲基胸苷 於氮氣流下，在前反應中所得到的1 a ( 1 0 4 m g )之無水甲苯溶液 (10毫升）中，添加氫化三丁基錫（69毫升，0.25 8毫莫耳），2, 2，-偶氮 二異丁腈（11毫克，0.065毫莫耳），經13小時迴流。更添加氫化三丁基 錫（69毫升，0.25 8毫莫耳）、2, 2，-偶氮二異丁腈（11毫克，〇·065毫莫 耳），攪拌4小時。溶劑蒸餾去除，藉由矽凝膠管柱層析法（11_己烷：醋 | 酸乙酯=1 : 1 )精製’而得到無色油狀物之目的化合物（3 7毫克，〇 . 〇 5 9 笔旲耳，2步驟中有5個爲55%)。 ^-NMRCDMSO-d6, 150 °〇 ： δ 0.81(s, 9H), 1.38(s, 3H), 1-85(s, lH), 2.36(dd, 1H, J =6, 14Hz), 3.71, 4.01(AB, 2H, J=llHz), 3.74, 3.80(AB, 2H, J=llHz), 4.33(s, 2H),4.70(d, 1H, J = 5Hz), 6.18(t, 1H, J = 8Hz), 6.67-7.39(m, 16H). (lc) 5’-0 -第三丁基二苯基矽烷_3，_(4_甲氧基三苯甲基）胺基 -3’-脫氧-3’-N，4’-C-亞甲基胸苷 -42 - 200410981 在lb(136毫克，0-22毫莫耳丨的〗，ο二噚烷溶液（5毫升）中、添 加2 8%氨水溶液（1毫升），於66它中攪拌。進一步28%氨水溶液於3小 時後追加0.8ml、16小時後追加lml、2〇小時後追加lnU、26小時後 追加2 m 1，合計攪拌4 0小時。萃取溶劑蒸餾可得到i〗的粗成績體（2 〇 〇 毫克）。接著，於氮氣流下，在所得到的i i的粗成績體（使用2 〇 〇毫克 中的100毫克）之無水吡啶基溶液（3ml)中，於室温下，添加4-甲氧基 三苯甲基氯化物（51毫克，0.1 7毫莫耳），於室溫下攪拌丨4小時。添加 飽和碳酸氫鈉水溶液、以醋酸乙酯萃取、有機層用水、飽和食鹽水洗 浄。有機層經硫酸鈉酐乾燥、溶劑蒸餾萃取後，藉由矽凝膠管柱層析 法（η-己烷：醋酸乙酯：3 : 1—1 : 1)精製，可得到作爲無色油狀物質 之目的化合物（12毫克，0.016毫莫耳）。 iH-NMRCCDCl3) : δ 0.95(s，9Η)，1.24(d，3Η，J=lHz), 1.67(m, 1H), 2.61, 3.50(AB, 2H, J=10Hz), 2.90, 3.58(AB, 2H, J=10Hz), 2.80(dd, 1H, J = 5, 13Hz), 3.79(s, 3H), 4.15(d, 1H, J = 5Hz), 6.84(d, 2H, J = 9Hz), 7.11(dd, 1H, J = 5, 10Hz), 7. 17-7.56(m,23H), 8.27(brs, 1H). (13)3’-(4-甲氧基三苯甲基）胺基-3，-脫氧_3’_;^,4，-0：-亞甲基 胸苷 於氮氣流下，在lc(l〇毫克，〇·〇ΐ3毫莫耳）的無水四氫呋喃溶液 (1毫升）中，添加氟化四丁基銨（1.0M於四氫呋喃，14μ1，0.014毫莫 耳），於室溫下攪拌2小時。進一步添加氟化四丁基銨（1·〇μ於四氫呋 喃，14μ1，0.0 14毫莫耳），攪拌20小時。溶劑蒸餾去除後，藉由矽凝 膠管柱層析法（η-己烷椰酸乙基=1 : 1)精製，可得到作爲無色油狀物 質之目的化合物體（5毫克，0.010毫莫耳，77%)。 1 Η - Ν Μ E ( C D C 13) : δ 1 . 8 0 (in，1 Η )，1 · 9 0 ( d，3 Η，J = 1 Η ζ ), 200410981 2.52，3.26(AB，2H，J=12Hz)，2.72(dd, 1H，J = 5，14Ηζ)，2·97， 3·60(ΑΒ，2H，J=10Hz)，3.79 (s, 3H)，3.98 (d，1H，J = 5Hz)， 6.84(d，2H, J = 9Hz), 6.89(dd，1H，J = 5, 9Hz)，7.1 8-7.53(m, 1 3H). (4)5’-0-(1^，1二異丙胺基-/3-氰乙氧基膦基）-3’-(4-甲氧基 二本甲基）胺基-3’-脫氧-3’- N，4’- C-亞甲基胸昔 ld(5毫克，0.010毫莫耳）、二異丙基銨四唑（2毫克，0.012毫莫 耳）的混合物以無水乙腈共沸3次後，作爲無水乙腈-無水四氫呋喃溶液 (3:1’〃/¥，2毫升）。於氮氣流下，在室温下滴下2-氰乙基11^，1^’3’- φ 四異丙基膦二醯胺酸鹽（5μ1，0.017毫莫耳），於室温下攪拌11小時。 溶劑蒸餾去除後，藉由矽凝膠管柱層析法（η-己烷：醋酸乙基=2 : 1) 精製，可得到作爲無色油狀物質之目的化合物（7毫克，1 0 0 % )。 31 Ρ - N M R ( a c e t ο n e - d 6 ) : (5 1 4 9 · 7，1 4 9 · 4 _ (參考例1)5-0 -第三丁基二苯基矽烷脫氧]，2-〇_異亞丙基 -3 -苯氧乙醯胺基- 3- N，4-C -亞甲基- a- D-呋喃核糖 於氮氣流下，在3 -胺基-5 - Ο -第三丁基二苯基矽烷_ 3 _脫氧_ i， 2-0 -異亞丙基- 3- N, 4-C -亞甲基- 〇_D -呋喃核糖（特開2001-64297 · 號公報的參考例6所記載的化合物：170克、3 ·87毫莫耳）的無水氯化 亞甲基溶液（7〇毫升）中，於下添加氯化苯氧乙醯基（〇.59毫升、 4.26¾旲耳）、二乙基胺（〇·81毫升、5.81毫莫耳），在室温下攪拌3 0 分鐘。於反應溶液中添加飽和碳酸氫鈉水溶液、用氯化亞甲基萃取， 用水、飽和食鹽水加以洗浄。將有機層經硫酸鈉酐乾燥、溶劑蒸餾去 除後，藉由矽凝膠管柱層析法（n_己烷：醋酸乙酯=4 : n進行精製， 可得到作爲無色油狀物質之標記化合物（2〇2克' 回收率91%)。 [a]D25 +75.2(c 1.05, CHC13). -44- 200410981 IR v max(KBr) cm"1 ： 2936, 2856, 1654, 1595, 1432, 1380, 1221， 1108. ^-NMECCDCls) 6ppm ： 1.01(27/4H, s), 1.03(9/4H, s), 1.44(3/4H，s), 1.56(9/4H，s), 3.64，3·79(6/4Η，AB，J=llHz)， 3.66, 3.77 (2/4H, AB, J = llHz), 3.8 8, 4.0 5 ( 6/4 H , A B , J = llHz), 4.18, 4·28(2/4Η，AB，J = 10Hz)，4·53-4·85(4Η，m)，6.04(1/4H， d, J = 5Hz)， 6.08(3/4H, d, l = 5Hz), 6.8 5 - 7.04 ( 3 H , m)， 7.24-7.45 (8H, m), 7.5 4 - 7.6 1 (4 H , m).

^-NMRCDMSO-de, 150〇C)6ppm ： 1.06(9H,s), 1.35(3H, s), 1.48(3H, s), 3.81-4.01(4H, m), 4.53, 4.61(2H, AB, J=15Hz), 4.75-4.78(2H, m), 6.01(1H, d, J = 3Hz), 6.93-6. 98(3H, m), 7.24-7.30(2H, m), 7 · 3 8 - 7 · 4 7 ( 6 H， m)， 7,62-7.64(4H, m)· 13C-NMR(DMSO-d6, 150 °C)6ppm： 18.1, 18.5,25.9,26.0, 64.4, 66.1, 78.9, 85.1, 109.0, 112.3, 114.0, 120.3, 126.8, 128.4, 128.8, 132.3, 134.1, 157.4.

Mass(FAB) m/z 574(MH + ).

Anal· calced for C33H39N〇6Si*H2〇 : c，69.08 ; H，6.85 ; N, 2.44. Found：C, 68.87； Η,6·86; N, 2.43. (參考例2)5-0 -第三丁基二苯基矽烷脫氧]，二乙醯基 -3 -苯氧基乙醯胺基-3-N，4-C -亞甲基-α及々-Εκ呋喃核糖 於氮氣流下，在參考例1中所得到的化合物（2〇()克、3 49毫莫 耳）之醋酸溶液（15毫升）中，於室温下添加無水醋酸（3 6 3毫升、384 笔吴耳）、濃硫酸（0.032鼋升、0.63毫莫耳），攪拌丄小時。在〇它於飽 和碳酸氫鈉水溶液中滴下反應液進行中和，然後將其過濾。將母液以 >45- 200410981 醋酸乙酯萃取，用飽和碳酸氫鈉水溶液、飽和食鹽水加以洗浄。將有 機層經硫酸鈉酐乾燥、溶劑蒸餾萃取後，藉由矽凝膠管柱層析法（η-己烷：醋酸乙酯=2 : 1)進行精製，可得到作爲無色油狀物質之標記化 合物（1 · 6 0克、回收率7 4 % )。 α異構物 [a]D24 + 6 0.7 (c 1.03, CHC13). IRvmax(KBr) cnT1 ·· 3059, 2936, 2859, 1755, 1659, 1595, 1 43 2，1 3 68, 1 220，1 109,101 1.

iH-NMRCCDCh) δρριη : 1.0 2(9/2H，s)，1，0 5(9/2H，s)， 1.76(3/2H, s), 1.95(3/2H, s), 2.07(3/2H, s), 2. 10(3/2H, s), 3.71, 3.77(2/2H, AB, J=12Hz), 3.76(2/2H, s ), 4.0 8 ( 2 / 2 H , s), 4.29, 4.35(2/2H，AB，l=10Hz)，4.55, 4·57(2/2Η，AB，J = 15Hz)， 4.61， 4.74(2/2H， AB， J=15Hz)， 5.04(1/2H， d, J = 6Hz)， 5. 10(1/2H, d, J = 6Hz)，5 · 1 7 ( 1 / 2 H，d d，J = 5，6Hz)，5.30( 1/2H, dd, J = 5, 6Hz), 6.570/2H, d, J = 5Hz), 6.59(1/2H, d, J = 5Hz), 6.85-7.02(3H, m), 7.2 4 - 7.4 5 ( 8 H，m), 7 · 5 4 - 7.6 4 (4 H , m) ·

1H-NMR(DMSO-d6, 1 5 0 °C ) δ p p m ： 1.07(9H，s)，1.95(3H， s)，2.00(3H，s)，3.94(2H，s)，4.08, 4.25(2H，AB，J = 9Hz)，4.56, 4.64(2H, AB, J=14Hz), 5.01(1H, b r s )， 5.2 2 (1 H , brs)， 6·93-6·96(3Η，m), 7·25-7·3 1(2Η, m)，7.43(6H，brs)，7.63(4H， b r s ). 13C-NMR(DMSO-d6, 150 〇C) δρριη : 18.2, 19.0, 19.6, 26.0, 63.3，65.9，71.3，8 3.4,95·0，114.0，1 20.4, 1 26.8，126.8, 128.4, 128.8, 132.2, 132.3, 134.1, 134.2,157.3, 166.9, 167.9, 168.0. -46- 200410981

Mass(FAB) m/z 618(MH + ).

Anal, calced for C33H39N06Si : C，66. 10 ; H，6.36 ； N， 2.27. Found ： C, 66.19 ； H，6.42 ; N，2.24. 沒異構物 [a]D24 +17.0(c 1.02，CHC13)· IRvmax(KBr) cm-1 : 3048, 2936, 2859, 1753, 1660, 1595, 1431，1 3 67，1 220, 1 1 09. 1H-NMR(CDC13) 5ppm ： 1.04(27/8H, s), 1.06(45/8H, s), 1.86(9/8H, s), 1 .93( 1 5/8H,s), 2.02(3H, s), 3.68, 3.76(6/8H, AB，J = llHz)，3.72, 3.73(10/8H，AB，J = llHz)，3.96,4.30(6/8H, AB, l = HHz), 4.18, 4.44(10/8H, AB, J=10Hz), 4.58(2H, s), 5.05(3/8H, d, J = 5Hz), 5.08(5/8H, d, J = 6Hz), 5.27(5/8H, dd, J = 3, 6Hz), 5.32(3/8H, dd, J=l, 6Hz), 6 · 2 2 (5 / 8 H，d，J = 3 H z )， 6.23(3/8H, d, J = lHz), 6.8 4 - 7.0 2 ( 3 H , m), 7.2 4 - 7.4 5 ( 8 H , m), 7.61-7.63(4H, m). 1H-NMR(DMSO-d6, 150 °C) 6ppm ： 1.07(9H, s), 1.92(3H, s)，1·97(3Η, s), 3.91(2H，s)，3.99，4·3 1(2H，AB, J=10Hz), 4.5 5, 4.59(2H, AB, J=15Hz), 5.00(1H, d, J = 5Hz), 5.26(1H, brs), 6.23(1H, brs), 6.9 2 - 7.0 0 ( 3 H , m), 7.2 5 - 7.3 1 ( 2 H , m), 7.40-7.43 (6H, m), 7.6 3 - 7.6 5 (4 H , m). 13C-NMR(DMSO-d6，，150〇C) δρρηι ·· 18.2，19.2, 19.5, 26.0，64.0，65.9，74.5，83.9，100.0，114.0，120.5，126.8, 128.4，1 2 8.8, 1 3 2.2, 1 34.2, 1 5 7.2, 1 67.2, 1 67.3,1 67.8.

Mass(FAB) m/z 6 1 8(MH + ).

Anal, calced for C 3 3 H 3 9 N O 6 S i · 1 /1 0 H 2 〇 : C, 66.10 ； H, 200410981 6·36 ； Ν, 2.27. Found ： C,65.91 ； Η, 6.38 ； Ν, 2.26. (參考例3)2’- 乙醯基-5’- Ο-第三丁基二苯基矽烷脫氧 苯氧基乙醯胺基-3，-N，4，-C-亞甲基-5-甲基尿苷 於氮氣流下，在參考例2所得到的化合物（1 89毫克、0.31毫莫耳） 的無水二氯乙烷溶液（3毫升）中，添加胸線嘧啶（〇·5 9毫克，〇·4 7毫莫 耳）、Ν，〇-雙（三甲基矽烷）醯胺酸鹽（〇·3 1毫升、1.24毫莫耳），加熱 還流2小時。於〇°C下冷却、添加三甲基矽烷三氟磺酸（〇· 〇6毫升、〇 34 毫莫耳），且加熱還流7小時。在反應溶液中添加飽和碳酸氫鈉水溶液、 溶劑蒸餾去除後，以醋酸乙酯萃取，用水、飽和食鹽水加以洗浄。有 機層經硫酸鈉酐乾燥、溶劑蒸餾去除後，藉由矽凝膠管柱層析法（n_ 己烷：醋酸乙酯=1 : 1)進行精製，可得到作爲白色粉末的標記化合物 (215毫克、回收率1〇〇%)。

mp 99>101〇C

[a]D 24 + 3 5.6 (c 0.80，CHC1，）· IRvmax(KBr) cm-1 : 3199, 3068, 2954, 2859, 1691，1595, 1 463, 1 374，1 225，1110.

'H-NMRiCDCb) δρριη： 1.06(9/3H, s), 1.10(18/3H, s), 1.61(6/3H, s), 1.65(3/3H, s), 1.98(3/3H, s), 2.08(6/3, s), 3.71, 3.93(2/3H, AB, J=12Hz), 3.78, 3.92(4/3H,AB, J=llHz), 4.04, 4.11(2/3H, AB, J=llHz), 4.29, 4.33(4/3H, AB, J=llHz), 4.54-4.76(2H? m), 5.08(1/3H, d, J = 6Hz), 5.09(2/3H, dd, J = 6, 8Hz), 5.21(2/3H, d, J = 6Hz), 5.3 7 ( 1 / 3 H , d d , J = 6, 8Hz), 6.48(1H, d, J = 8Hz), 6.8 4 - 7.1 7 (4 H , m), 7.2 9 - 7.4 7 ( 7 H , m), 7·54-7·65(4Η，m)，9·19(1/3Η，s)，9.23(2/3H, s). iH-NMI^DMSO-dh 150°C) δρριη ·· 1·08(9Η，s)，1.66(3H， -48- 200410981 S)，1 ·93(3Η, s)，4.03，4.07(2H, AB, J = llHz)，4· 10, 4.40(2H, AB, J = HHz), 4.58, 4.65(2H, AB, l=15Hz),5.07(lH, d, l = 6Hz), 5.41(1H, dd, J = 6, 7Hz), 6.28(1H, J = 7Hz), 6.93-7.00(3H, m), 7.25 -7.42( 8H, m), 7.6 3 - 7.6 5 (4 H , m), 10.73(1H, s). 13C-NMR(DMSO-d6, 150〇C)5ppm： 11.5, 19.1,20.1,27.0, 64.5, 66.8, 73.2, 82.4,87.0, 110.6, 115.0, 121.4, 127.7, !29.3, 129.8, 133.0, 133.3, 135.0, 135.1,135.7, 150.4, 158.1, 163.0, 168.2, 169.1.

Mass(FAB) m/z 6 84(MH + ).

Anal, calced for C 3 7 Η 4 ι N 3 0 8 S i · 1 / 7 H 2 〇 : C, 64.99 ； H, 6·〇4 ； N, 6.14. Found ： C,64.74 ； H, 6.06 ： N, 6.12. (參考例4)5’-O-第三丁基二苯基矽烷-3，_苯氧乙醯胺基-3’-脫 氧-3、N，4，-C-亞甲基-5-甲基尿苷 於氮氣流下，在參考例3中所得到的化合物1〇〇毫克、0.15毫莫 耳）的無水甲醇溶液（10毫升）中，於0°C下添加碳酸鉀（6毫克、0.043 毫莫耳），在室温下攪拌3小時。將用醋酸加以中和之後的溶劑蒸餾去 除’添加水、以醋酸乙酯萃取後，將有機層用水及飽和食鹽水加以洗 浄。將有機層經硫酸鈉酐乾燥、溶劑蒸餾萃取後，藉由矽凝膠管柱層 析法（η-己烷：醋酸乙酯=1 : 2)進行精製，可得到作爲無色結晶的標 記化合物（92毫克、回收率98%)。

m p 8 9 - 9 2 〇C

[a]D 24 + 6 4.5 (c 0.97，CHC13)· IRvmax(KBr) cm'1 ： 3207, 3068, 2933, 2859, 1692, 1467, 1240, 1109. ^-NMRCCDCls) 8ppm ： 1.08(9H, s), 1.59(9/5H, s), 200410981 1.62(6/5H, s), 1.94(3/5H, s ) . 2.3 5 ( 2 / 5 H , s), 3.72, 4.01(2H, m), 4.1 8-4.37(2H, m), 4.5 9 - 4.8 2 ( 2 H , m), 4.8 8 - 4.9 5 ( 1 H , m), 5. 10(3/5H, d, J = 5Hz), 5.26(2/5H，d，J = 8Hz)，6.38(3/5H，d， J = 8Hz)， 6.44(2/5H, d, J = 7Hz), 6 · 8 5 - 7 · 0 3 ( 3 H， m), 7. 1 1-7.47(8H, m), 7.6 0 > 7.6 2 (4 H , m)，9.22(3/5H， s)， 9.7 1 (2/5H, s).

Mass(FAB) m/z 642(MH + ). (實施例2)(寡核苷酸類似物的合成） 使用核酸合成機（Applied Biosystems公司製造 Expedite(TM) 8909)，調整爲2·0μιη〇1刻度。關於各合成週期中的 溶劑、試劑、膦醯胺酸鹽的濃度與天然寡核苷酸合成的情況相同，溶 劑、試劑、天然型核苷的5’-膦醯胺酸鹽體亦完全使用GLEN RESEARCH公司製造者。固相係使用GLEN RESEARCH公司製造 的Universal Support (0·2μπιο1)。5’-經基爲以固相結合的 3’-0-DMTr-胸線嘧啶的DMTr基，藉由三氯醋酸脫保護，其3’-羥基 中係使用天然核苷酸合成用的膦醯胺酸鹽及實施例le的化合物進行重 複縮合反應，合成各個排列的修飾寡核苷酸類似物。合成週期係以下 列種類。 合成週期（使用天然型5’-膦醯胺酸鹽體時） 1) 去三苯甲基作用三氯醋酸/二氯甲烷；70秒 2) 偶聯作用膦醯胺酸鹽（25eq)、四唑/乙腈；300秒 3) 帽子形成作用1-甲基咪唑/四氫呋喃、無水醋酸/吡啶基/四氫 呋喃；3 0秒 4) 氧化作用碘素/水/吡啶基/四氫呋喃；5秒 合成週期（使用實施例le的化合物時） 200410981 1) 去三苯甲基作用三氯醋酸/二氯甲烷；120秒 2) 偶聯作用膦醯胺酸鹽（25eq)、四唑/乙腈；1 200秒 3) 帽子形成作用卜甲基咪唑/四氫呋喃、無水醋酸/吡啶基/四氫 呋喃；3 0秒 4) 氧化作用碘素/水/吡啶基/四氫呋喃；5秒 合成含有目的排列的寡核苷酸之後，藉由三氯醋酸/二氯甲烷進 行脫三苯甲基化將3’-DMTr基脫保護。然後，按照習知方法，以膿氨 水處理從載體一同切出低聚合物，使磷原子上的保護基氰基乙基脫 離、進一步使核酸鹽基上的保護基脫離。 將得到的天然型寡核苷酸及修飾寡核苷酸類似物以逆相HP LC 進行精製，以得到作爲目的的寡核苷酸。 以下的排列係爲按照本合成法： 5’-gCgUntUgCt-3’（排列表的排列號碼1):寡核苷酸1 5’-gcgttntntgct-3’（排列表的排列號碼2):寡核苷酸2 5f-gCgntntntgCt-3f(排列表的排列號碼3):寡核苷酸3 5’1〇$^1111111§(^-3’（排列表的排列號碼4):寡核苷酸4 排列表的排列號碼5):寡核苷酸5 在上述排列中，η係表示含有實施例le的鱗醯胺酸鹽體所使用的 下述構造之核苷單位。 [化 1〇]

-51- 200410981 所得到的修飾寡核苷酸類似物的精製，係以逆相 HPLC(HPLC :島津製作所製 LOVP ;管柱：WAKO WAKOPAK WS-DNA(10X250mm) ; 0.1M 醋酸三乙基胺水溶液（TEAA)，pH7 ; 8->16%CH3CN/30分鐘，直線型梯度；50°C ; 3·0毫升/分鐘；254 奈米）進行。 所得到的寡核苷酸根據MALDI-TOF-MS進行構造確認。結果如 表3所示。 [表3] Μ-Η 被験化合物 Cald. Found 寡核苷酸1 3643.45 3643.76 寡核苷酸2 3654.47 3654.41 寡核苷酸3 3665.50 3665.30 寡核苷酸4 3665.50 3665.44 寡核苷酸5 2990.08 2990.14 (試験例1)核苷酶酵素抗性的測定 在含有寡核苷酸5(10g)緩衝溶液400μ1(50ιηΜ Tris (ΡΗ8.0) 及10mM MgCl2)中，添力口 〇.24pg的3’-核酸外切酶 (phosphodiesterase from Crotalus durissus (Boehringer M a η n h e i m))，混合液於3 7 °C下進行保護反應。在一定時間後取出混 合液的一部份，藉由於9 0 °C加熱2分鐘使酵素失去活性以終止反應。 在各時間的混合液中的寡核苷酸殘量用逆相高速液體層析法定量，測 定於核苷酶存在下的寡核苷酸量的經時變化。與上述對照，比較合成 具有與寡核苷酸5相同排列的天然型DNA。結果如表4所示。 [表4] 200410981 寡核苷酸殘留率（％) 被験化合物 開始時（〇分） 2 0分 9 0分 寡核苷酸5 1〇〇 90 83 寡核苷酸（天然型） 1〇〇 無法檢測 無法檢測 從上述可明顯的顯示本發明化合物的顯著核苷酶抗性。 (試験例2)構形的測定 核酸構形的確認方法，係使用NMR的結合定數（J)以得知Alt ona 式（J.Am.Chem.Soc.，94,8205 ( 1 992)及 J.Am.Chem. Soc·，95, 2333(1993)。 [化 1 1] [數1]

Base

V-endo (3E) 形 RO " Η 2'-endo (2E) X = 〇H or Η S型插形 S(%)= (4 ,,2，p - 1) x 100 (Al tona式） 6.9 實施例1的化合物係按照上述式計算，J l，2，/9的値爲1 〇，s ( % ) 爲1 00以上。因而，實施例1的化合物係選取S型構形，而可知含有DN A 選擇性。 (試験例3) DN A選擇性的測定 具有寡核苷酸1至4個互補的排列之DN A及RN A的融解温度（Tm) 係按照以下的方法測定。即將4 # Μ具有寡核苷酸及互補排列之DN a 或 RNA 樣本溶液（lOOmM NaCl，lOmM Na2HP04 緩衝液（ρΗ7·2)、 200410981 400 // L)於沸騰水中水浴，在約8小時內緩慢地冷卻至室温。樣本溶液 使用分光光度計（BECKMAN DU650)加濕測定。温度以0.5/分鐘上 昇5 °C至90 °C，於間隔0.5 °C 260nm左右的吸收極大波長測定紫外線吸 收強度。在1°C變化量爲最大的温度作爲Tm (融解温度），在該温度下 評估本發明的化合物的互補鏈形性能。亦測定天然型DN A的融解温度 作爲對照。結果如表5所示。 [表5] 寡核苷酸殘留率（％ )

Tm( zl Tm)°C 被験化合物 DNA RNA 天然型DNA 5 1.7 47.0 寡核苷酸1 5 1 .9( + 0.2) 45.7(-1.3) 寡核苷酸2 52.4(+0.4) 46.0(-0.5) 寡核苷酸3 52.9(+0.4) 43.9(-1.0) 寡核苷酸4 52-2(+0.2) 45-2(-0.6) 從上述可明顯的知道本發明的化合物係顯示顯著的D N A選擇性。 [發明的効果] 含有本發明的新穎二環核苷衍生物之核酸試劑，具有優異的反義 或抗原活性、或解碼核酸、DN A酶及RN A干擾機能，且爲製造在生物 内安定的寡核苷酸的中間體係爲有用的。 本發明的新穎的寡核苷酸類似物，於生物内安定，作爲反義藥、 抗原藥、解碼核酸、DNA酶、RNA干擾核酸係爲有用。進一步作爲特 定基因的檢測用（探針）係爲有用，更進一步作爲特定基因的増幅起始 用（引物）係爲有用。 【圖式簡單說明】：無 -54- 200410981 [排列表自由正文（free text)] 排列號碼1 :爲了測試01^ A選擇性的合成寡核苷酸 排列號碼2 :爲了測試DNA選擇性的合成寡核苷酸 排列號碼3 :爲了測試DNA選擇性的合成寡核苷酸 排列號碼4 :爲了測試DNA選擇性的合成寡核苷酸 排列號碼5 :爲了測試核苷酶抗性的合成寡核苷酸 [排列表] 序列名單 <1 10>三共股份有限公司 <120>新穎人工核苷酸具有糖部S型構形

<130>2003060SL < 1 40> <141> < 1 6 0 > 5 <170>PatentIn Ver· 2.0 <220〉 <223> 發明人：今西武（IMANISHI，Takeshi) 發明人：小比賀聰（OBIKA，Satoshi) <2 1 0> 1 <2 1 1 > 12 <212>DNA <213>人工序列 <220> <223 >人工序列之敘述：用於測試DNA選擇性之合成寡核苷酸 <220> 200410981 <221>修飾鹼基 <222>(6) <22 3 >胸腺嘧啶脫氧核苷或經修飾的胸腺嚼D定脫氧核音 <400> 1 , 12 gcgttntttg ct

<2 1 0>2 <2 1 1> 1 2 <212>DN A <213>人工序列 <220> <223>人工序列之敘述：用於測試DNA選擇性之合成寡核苷酸 <220> < 2 2 1 >修飾鹼基 <222>(6) <2 2 3 >胸腺嘧啶脫氧核苷或經修飾的胸腺嘧啶脫氧核苷 <220>

< 2 2 1 >修飾鹼基 <222>(8) <22 3 >胸腺嚼Π定脫氧核苷或經修飾的胸腺嘧啶脫氧核苷 <400> 1 gcgttntntg ct η

<2 1 0>3 <2 1 1 > 1 2 <212>DNA 56- 200410981 <213>人工序列 <220> <223>人工序列之敘述：用於測試DNA選擇性之合成寡核苷酸 <220> <221>修飾鹼基 <222>(4)

<2 2 3 >胸腺嘧啶脫氧核苷或經修飾的胸腺嘧啶脫氧核苷 <220> < 2 2 1 >修飾鹼基 <222>(6) <2 2 3 >胸腺嘧啶脫氧核苷或經修飾的胸腺嘧啶脫氧核苷 <220> < 2 2 1 >修飾鹼基 <222>(8)

<2 2 3 >胸腺嘧啶脫氧核苷或經修飾的胸腺嘧啶脫氧核苷 <400> 1 gcgntntntg ct 12

<2 1 0>4 <2 1 1 > 1 2 <212>DNA < 2 1 3 >人工序列 <220> <22 3 >人工序列之敘述··用於測試DNA選擇性之合成寡核苷酸 -57- <220> 200410981

< 2 2 1〉修飾驗基 <222>(6) <2 2 3 >胸腺嚼D定脫氧核苷或經修飾的胸腺嘧啶脫氧核苷 <220> < 2 2 1 >修飾鹼基 <222>(7) <2 2 3 >胸腺嚼D定脫氧核苷或經修飾的胸腺嘧啶脫氧核苷 <220> < 2 2 1 >修飾鹼基 <222>(8) <2 2 3 >胸腺赔Π定脫氧核苷或經修飾的胸腺嘧啶脫氧核苷 <400> 1 gcgttnnntgct 12 <210>5 <211> 1 0 <212>DNA <213>人工序列 <220> <223>人工序列之敘述：用於測試DNA選擇性之合成寡核苷酸 <221>修飾鹼基 <222>(9) <2 2 3 >胸腺嘧啶脫氧核苷或經修飾的胸腺嘧啶脫氧核苷 <400> 1 ttttttttnt 1〇

- 58-

Claims (1)

1. 200410981 拾、申請專利範圍： 1. 一種式（I)所示之化合物或其醫藥上可接受之鹽類’ [化1]

   [式中， R1係表示爲氫原子、羥基的核酸合成保護基、憐酸基 '核酸合成之 保護基所保護的磷酸基或式-P(R3a)R3b所示的基（式中’以3及尺31) 係表示爲相同或不同的羥基、核酸合成之保護基所保護的羥基、氫 硫基、核酸合成之保護基所保護的氫硫基、胺基、核酸合成之保護 基所保護的胺基、碳數1至6個之烷氧基、碳數1至6個之烷硫基、 碳數1至7個之氰烷氧基或碳數1至6個之烷基所取代的胺基）， R2係表示爲氫原子、碳數1至6個之烷基或胺基之核酸合成之保護 基， B係表示爲亦可含有選自於下述a群之取代基的嘌呤-9-基或2-氧 基-1，2-二氫嘧啶·1-基]， 〇 (α群） 羥基、 核酸合成之保護基所保護的羥基、 碳數1至6個之烷氧基、 氫硫基、 核酸合成之保護基所保護的氫硫基、 碳數1至6個之烷硫基、 胺基、 -59- 200410981 核酸合成之保護基所保護的胺基、 碳數1至6個之烷基所取代的胺基、 碳數1至6個之烷基、及 鹵素原子。 2·如申請專利範圍第1項之化合物或其醫藥上可接受之鹽類，其中Ri 係爲氫原子，脂肪族醯基，芳香族醯基，經1〜3個芳基取代之甲基， 以苯基環爲低級烷基、低級烷氧基、鹵素或氰基所取代的1至3個芳 基取代之甲基，或矽烷基。 3·如申請專利範圍第1項之化合物或其醫藥上可接受之鹽類，其中R1 係爲氫原子、乙醯基、苯基、苯甲基、對甲氧基苯甲基、二甲氧基 三苯甲基、單甲氧基三苯甲基、第三丁基二苯基矽烷基、 -P(OC2H4CN)(NCH(CH3)2)、-P(OCH3)(NCH(CH3)2)、膦醯 基、或2-氯苯基或4-氯苯基磷酸基。 4·如申請專利範圍第1至3項中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽 類，其中R2係爲氫原子、碳數！至6個之烷基、脂肪族醯基、芳香族 醯基、單甲氧基三苯甲基、芳羥基羧基，或以芳基環爲1至2個之低 級烷氧基或硝基所取代亦可的芳烷基羥基羧基。 5·如申請專利範圍第1至3項中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽 類，其中R2係爲氫原子、碳數1或2個之烷基、脂肪族醯基、單甲氧 基三苯甲基、芳羥基羧基、或以芳基環爲1至2個之低級烷氧基或硝 基所取代亦可的芳烷基羥基羧基。 6.如申請專利範圍第1至3項中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽 類，其中R2係爲氫原子、甲基、三氟乙醯基、苯氧乙醯基、單甲氧 基三苯甲基或苯甲基羥基羧基。 7 .如申請專利範圍第1至6項中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽 200410981 類，其中B係爲經6_胺嘌呤-9-基（即腺嘌呤基）、經胺基爲核酸合成 之保護基所保護的6-胺嘌呤-9-基、2,6-二胺嘌呤-9-基、經胺基爲 核酸合成之保護基所保護的2，6 -二胺嘌呤-9 -基、2 -胺基-6 -氯嘌呤 -9-基、經胺基爲核酸合成之保護基所保護的2_胺基_6_氯嘌呤_9_ 基、2-胺基-6-氟嘌呤-9-基、經胺基爲核酸合成之保護基所保護的 2-胺基-6-氟嘌呤-9-基、2-胺基-6-溴嘌呤-9-基、經胺基爲核酸合 成之保護基所保護的2-胺基-6-溴嘌呤-9-基、2-胺基-6-羥基嘌呤 -9-基（即鳥嘌呤基）、經胺基爲核酸合成之保護基所保護的2-胺基 -6-羥基嘌呤-9-基、經胺基及羥基爲核酸合成之保護基所保護的2-胺基-6-經基嘌Π令-9-基、6 -胺基-2-甲氧基嘌啥-9-基、6 -胺基- 2-氯嘌呤-9-基、6-胺基-2-氟嘌呤-9-基、2,6-二甲氧基嘌呤-9-基、 2,6-二氯嘌呤-9-基、6-氫硫嘌呤-9-基、2-氧基-4-胺基-1，2-二 氫嘧啶-1-基（即胞嘧啶基）、經胺基爲核酸合成之保護基所保護的2-氧基-4-胺基-1，2-二氫嘧啶-1-基、2-氧基-4-胺基-5-氟-1，2-二 氫嘧啶-1-基、經胺基爲核酸合成之保護基所保護的2-氧基-4-胺基 -5-氟-1，2-二氫嘧啶-1-基-4-胺基-2-氧基-5-氯-1，2-二氫嘧啶 -1-基、2-氧基_4-甲氧基-1，2-二氫嘧啶-1-基-2-氧基-4-氫硫-1, 2-二氫嘧啶-1-基、2-氧基-4-羥基-1，2-二氫嘧啶-1-基（即尿嘧啶 基）、2-氧基-4-羥基-5-甲基-1，2-二氫嘧啶-1-基（即胸嘌呤基）、 4 -胺基-5 -甲基-2 -氧基-1，2 -二氫嘧啶-1 -基（即5 -甲基胞嘧啶基） 或經胺基爲核酸合成之保護基所保護的4 -胺基-5 -甲基-2 -氧基-1， 2 -二氫嘧啶-1 -基。 8 .如申請專利範圍第1至6項中任一項之化合物或其醫藥上可接受之鹽 類，其中B係爲6-苯甲醯基胺嘌呤-9-基、腺嘌呤基、2-異丁醯胺基 -6-羥基嘌呤-9-基、鳥嘌呤基、2-氧基-4-苯甲醯胺基-1，2-二氫嘧 -61- 200410981 啶-1-基、胞嘧啶基-2 -氧基-5 -甲基-4 -苯甲醯胺基-1，2 -二氫嘧啶 -1-基、5-甲基鳥嘌呤基、尿嘧啶基或胸嘌呤基。 9· 一種含有1或2種以上下列通式（la)所示構造之寡核苷酸類似物或其 醫藥上可接受之鹽類， [化2]

   [式中， B係表示爲亦可含有選自於下述a群之取代基的嘌呤-9-基或2-氧基 -1，2-二氫嘧啶-1-基]， U群） 羥基、 核酸合成之保護基所保護的羥基、 碳數1至6個之烷氧基、 氫硫基、 核酸合成之保護基所保護的氫硫基、 碳數1至6個之烷硫基、 胺基、 核酸合成之保護基所保護的胺基、 碳數1至6個之烷基所取代的胺基、 碳數1至6個之烷基、及 鹵素原子。 -62- 200410981 1 0 ·如申請專利範圍第9項之寡核苷酸類似物或其醫藥上可接受之鹽 類，其中Β係爲6-胺嘌呤基（即腺嘌呤基）、經胺基爲核酸合成之 保護基所保護的6-胺嘌呤-9-基、2,6-二胺嘌呤-9-基、經胺基爲核 酸合成之保護基所保護的2,6-二胺嘌呤-9-基、2-胺基-6-氯嘌呤 -9-基、經胺基爲核酸合成之保護基所保護的2-胺基-6-氯嘌呤-9-基、2-胺基-6-氟嘌呤-9-基、經胺基爲核酸合成之保護基所保護的 2-胺基-6-氟嘌呤-9-基、2-胺基-6-溴嘌呤-9-基、經胺基爲核酸合 成之保護基所保護的2-胺基-6-溴嘌呤-9-基、2-胺基-6-羥基嘌呤 -9-基（即鳥嘌呤基）、經胺基爲核酸合成之保護基所保護的2_胺基 -6-羥基嘌呤-9-基、經胺基及羥基爲核酸合成之保護基所保護的2-胺基-6-羥基嘌呤-9-基' 6-胺基-2-甲氧基嘌呤-9-基、6-胺基-2-氯嘌呤-9-基、6-胺基-2-氟嘌呤-9-基、2,6-二甲氧基嘌呤-9-基、 2,6-二氯嘌呤-9-基、6-氫硫嘌呤-9-基、2-氧基-4-胺基-1，2-二 氫嘧啶-1-基（即胞嘧啶基）、經胺基爲核酸合成之保護基所保護的2-氧基-4-胺基-1，2-二氫嘧啶-1-基、2-氧基-4-胺基-5·氟-1，2-二 氫嘧啶-1-基、經胺基爲核酸合成之保護基所保護的2-氧基-4-胺基 -5-氟-1, 2-二氫嘧啶-卜基、4-胺基-2-氧基-5-氯-1，2-二氫嘧啶 -卜基、2-氧基-4-甲氧基-1，2-二氫嘧啶-1-基、2-氧基-4-氫硫-1， 2-二氫嘧啶-1-基、2-氧基-4-羥基-1，2-二氫嘧啶-1-基（即尿嘧啶 基）、2-氧基-4-羥基-5-甲基-1，2-二氫嘧啶-卜基(即胸嘌呤基）、 4-胺基-5-甲基-2-氧基-1，2-二氫嘧啶-1-基（即5-甲基胞嘧啶基） 或經胺基爲核酸合成之保護基所保護的4-胺基-5-甲基-2-氧基-1， 2 -二氫喃卩定-1 -基。 1 1 ·如申請專利範圍第9項之寡核苷酸類似物或其醫藥上可接受之鹽 類，其中Β係爲6-苯甲醯基胺嘌呤-9-基、腺嘌呤基、2-異丁醯胺基 •63- 200410981 -6-羥基嘌呤-9-基、鳥嘌呤基、2-氧基-4-苯甲醯胺基-1, 2-二氫嘧 啶-1-基、胞嘧啶基、2-氧基-5-甲基-4-苯甲醯胺基-1，2-二氫嘧啶 -1-基、5-甲基、胞嘧啶基、尿嘧啶基或胸嘌呤基。 -64- 200410981 柒、指定代表圖： (一） 本案指定代表圖為：無。 (二） 本代表圖之元件代表符號簡單說明: 捌、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式：