TW200409641A - Pituitary adenylate cyclase activating peptide (PACAP) receptor (VPAC2) agonists and their pharmacological methods of use - Google Patents

Pituitary adenylate cyclase activating peptide (PACAP) receptor (VPAC2) agonists and their pharmacological methods of use Download PDF

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Yu-Chang John Wang
Wayne A Froland
Drew N Kelner
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Wang Wei
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Description

200409641 A7
五、發明說明（1 ) 本申請案主張2002年7月12曰申請的美國臨 ：：" [發明所屬之技術領域] 5本發明乃有關新料之多狀及料多肽供治療 用途。更特別地，本發明之多料用 ' 式激發腴島素自姨臟Θ細胞釋 賴㈣糖的方 例如糖尿病或葡萄糖耐力受損@ Μ惟患代謝失調 供-種治療選擇。又知（糖尿病前期狀態）的病人提 10 [先前技術】 15 糖尿病的特徵為葡萄糖代謝受損，糖尿病患者血中葡 萄糖含量_地升高。賴根本缺陷可將糖尿病分為兩大 類1里糖尿病，或騰島素依賴型糖尿病（聽Μ)，發生 於病人的騰腺缺乏製造騰島素㈣細胞；及2型糖尿 病:或非姨島素依賴型糖尿病(NIDDM)，發生於卢細胞功 月b受4貝及騰島素作用改變的病人。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 20 1型糖尿病患者目前係以胰島素治療，而2型糖尿病 患者多數以刺激Θ細胞功能之製劑或明進病人對姨島 素的組織敏感度之製劑來治療。長期以後，幾乎一半的2 型糖尿病患者對這些製劑失去反應而必須採用胰島素療 法。目前用於治療2型糖尿病的藥物如下。 « -葡萄糖苷酶抑制劑（例如，Precose®、 Voglibose™、與Miglitol®)藉由延缓小腸吸收葡萄糖而減 少餐後葡萄糖之昇幅。彼等藥物很安全且為輕度至中度染 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 200409641 A7 _________ B7 五、發明說明（2) 感糖尿病患者提供治療。然而，文獻中曾報導其胃腸方面 之副作用。 胰島素敏化劑為加強身體對胰島素的反應之藥物。噻 唾啶二闕類例如Avandia™[洛西利塔宗（rosiglitazone)]與 5 ActosTM活化過氧化物酶體增生劑活化受體(PPAR)t亞型 及調節尚未被完整敘述的一組基因之活性。此類別的第一 個藥物，Rezulin™[措利塔宗（troglitazone)]，由於肝酵素 含量升向及藥物引發之肝毒，已自市場上退出。這些肝效 應對於使用Avandia™與八〇1:〇31^1的病人並未造成重大問 10 題。縱使如此，仍建議接受治療的第一年每隔2個月及其 後定期進行肝酵素試驗。AvandiaTM與ActosTM似與體液 滯留及水腫有關。由於擔心發生充血性心臟衰竭， AvandiaTM未被指示與胰島素一起使用。另一個潛在的副 作用為體重增加。 15 胰島素分泌促進素[例如，利用依賴ATP之K+通道 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 產生作用之磺醯脲類（SFUs)與其他製劑]為目前用於治療2 型糖尿病的另一種藥物。SFUs為具有輕度至中度空腹糖 企症的2型糖尿病患者之標準療法。SFUs具有包括引發 低血糖之可能性、體重增加、及高初級與二級失敗率等極 20 限。1〇至20%初期治療的病人未能顯示明顯的治療效果 (初級失敗）。二級失敗係指經六個月的SFU治療後，再喪 失20-30%治療效果。有50%的SFU反應者於治療5_7年 後需要胰島素治療(Scheen，et al·，Diabetes Res. Clin. Pract. 6:533-543, 1989)。 -4-
@ ^#^(CNS)A4 x 297 ^ ------—J 200409641 A7
Glucophage™(二甲雙胍HC1)為雙胍類，其利用降低 肝臟葡萄糖生產及增加周邊葡萄糖攝取與利用而降低2 糖。此藥物對於輕度至中度罹患者之血糖降低有效，且= 有體重增加或引發低血糖之可能性等副作用。然而， 5 Glucophage™具有包括胃腸不適與乳酸性酸毒症等許多副 作用，為70歲以上之糖尿病患者與腎或肝功能受損的串 者之禁忌。最後，Glucophage™* SFUs —樣，具有相同 之初級及二級失敗率。 胰島素療法係於膳食、運動，及口服給藥未能適當控 10制企糖後，才著手進行。此治療法的缺點為可注射、會產 生低血糖及引起體重增加。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 由於目前的治療法有許多問題’因此需要新的治療法 來治療2型糖尿病患者。特別是，需要新的治療法來保持 正常（葡萄糖依賴性)之胰島素分泌。此種新穎藥物需具備 15下列特徵·依賴葡萄糖來促進姨島素分泌（亦即，僅在出 現血糖升高時才產生胰島素分泌）；初級及二級失敗率 低；及保持胰島細胞的功能。本文所揭示的新療法之開發 策略乃基於環狀腺苷單磷酸(CAMP)的傳訊機制及其對胰 島素分泌之影響。 20 環狀AMP為胰島素分泌過程的主要調控子。於蛋白 激酶A路徑被活化後，此傳訊分子之升高促進K+通道之 關閉。關閉K+通道引起細胞去極化，接著打開Ca++通 道’隨即引致騰島素顆粒之胞外分泌。在低fe萄糖濃度不 存在下，對胰島素分泌幾乎沒有影響（Weinhaus，et al.， 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 x 297公釐） 200409641 A7 B7 五、發明說明（4)
Diabetes 47: 1426-1435，1998)。分泌促進素如腦下腺腺苷 酸環化酶活化胜肽（“PACAP”)與GLP-1 (似胰高血糖激素 胜肽_1)利用該cAMP系統以依賴葡萄糖之方式調控胰島 素分泌（Komatsu, et al.，Diabetes 46: 1928-1938，1997 ; 5 Filipsson, et al.5 Diabetes 50:1959-1969, 2001 ； Drucker,
Endocrinology 142:521-527，2001)。藉由 cAMP 例如 GLP- 1與PACAP之升高而作用之胰島素分泌促進素，除了增 進胰島素釋放之外，亦可增進胰島素合成(Skoglund, et al.，
Diabetes 49:1156-1164， 2000 ； Borboni， et al·， 10 Endocrinology 140:5530-5537，1999)。 PACAP為依賴葡萄糖而自胰臟召細胞分泌胰島素之 強力刺激子。有三種不同的PACAP受體型（PAC1、 VPAC1、與 VPAC2)曾被敘述(Harmar, et al·，Pharmacol.
Reviews 50:265-270，1998 ; Vaudry，et al·，Pharmacol. 15 Reviews 52:269-324，2000) o PACAP 未表現受體選擇性， 對所有三種受體具有可比較的活性及效力。PAC1主要位 於CNS，而VPAC1與VPAC2分佈較為廣泛。VPAC1位 於CNS以及肝、肺及腸。VPAC2位於CNS、胰臟、骨骼 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 肌、心、腎、脂肪組織、睪丸及胃。最近的研究爭辯 20 VPAC2為自/3細胞分泌胰島素之原由(Inagaki，et al.，Proc.
Natl. Acad. Sci. USA 91:2679-2683, 1994 ； Tsutsumi, et al.?
Diatetes 51:1453-1460, 2002)。PACAP 之此趨胰島素性作
用係由結合諸蛋白質G之GTP居間促成。細胞内cAMP 之堆積接著活化万細胞中之非選擇性陽離子通道而增加 -6- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 200409641 A7
五、發明說明（5) [Ca++]，並促進含胰島素的分泌顆粒之胞外分泌。 PACAP為經由cAMP居間促成的訊息轉導路徑發揮 其作用之代謝、神經内分泌及神經遞質胜肽激素超級家族 之最新成員（Arimura，Regul. Peptides 37:287-303，1992)〇 5 此具生物活性之胜肽呈38-胺基酸胜肽(PACAP-38)及/或 呈具有醯胺化羧基末端之27-胺基酸胜肽(PACAP-27)兩種 分子型’自生合成前驅物中釋放出來(Arimura，前文文 獻）。 最高濃度之此二型胜肽出現於腦及睪丸(Arimura，前 10 文文獻）。較短型胜肽，PACAP-27，與血管活性腸多肽 (VIP)具有68%結構同質性。然而，PACAP與VIP於中樞 神經系統中之分佈暗示這些結構相關的胜肽具有不同的神 經遞質功能（Koves，et al·，Neuroendocrinology 54:159-169， 1991) 〇 15 最近的研究已證明PACAP-38從生殖作用中的角色 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (McArdle，Endocrinology 135:815-817, 1994)到激發胰島素 分泌能力（Yadaeia/.，J.及〇/, CT^m. 269: 1290-1293 (1994)) 之各種不同生物效應。此外，PACAP似乎在脂質與碳水 化合物代謝之激素調控（Gray，et al·，Mol· Endrocrinol. 20 15:1739-47，2001);晝夜節律功能（Harmar，et al.，Cell 109:497-508, 2002);及免疫系統、生長、能量衡定、與 男性生殖功能（Asnicar，et al·，Endrocrinol. 143:3994-4006, 2002);食慾調控（Tachibana, et al·，Neurosci. Lett. 339:203_206, 2003);以及急性與慢性炎症、敗血性休 -7- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 200409641 A7 B7 五、發明說明（6 ) 克、與自體免疫疾病（例如，全身性紅斑狼瘡）(Pozo,
Trends Mol. Med· 9:211-217, 2003)上扮演重要角色。 血管活性腸胜肽(VIP)為最先從肉猪小腸上部分離出 之 28 個胺基酸胜肽（Said and Mutt，Science 169:1217-1218, 5 1970 ;美國專利案3,879,371)。此胜肽屬於結構相關、包 括蜥蜴素(helodermin)、促胰泌素、生長激素釋放抑制因 子、與胰高血糖激素等小多肽類之一族。VIP的生物效應 由活化與細胞内AMP傳訊系統相連接的膜結合受體蛋白 質居間促成。這些受體最初即所謂VIP-PAC1與VIP-10 VPAC1，但是，後來發現彼等為與VPAC1及VPAC2相 同之受體。VIP對VPAC1及VPAC2表現可比較的活性 與效力。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 為了增進VIP在人類肺液中之穩定性，Bolin等 (Biopolymers 37:57-66，1995)製造一系列設計用來增進此 15 胜肽的螺旋傾向及減少蛋白水解降解之νιρ變異體。取 代作用集中於被暗指在受體結合中不重要之位置8、12、 17、及25-28。此外，”GGT”序列被附加在VLP變異蛋白 質C-端’希望更為有效地罩蓋螺旋結構。最後，為了進 一步穩定螺旋結構而合成數個環狀變異體（美國專利案 20 5,677,419)。雖然這些努力並非針對受體選擇性，但卻得 到比VPAC2選擇性大1 〇〇倍以上的兩個相似物（G〇urlet, et al.? Peptides 18:403-408, 1997 ； Xia5 et al., J. Pharmacol. Exp. Ther.，281:629-633，1997)。 GLP-1於餐後自腸之L-細胞釋出，具有腸降血糖素 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公着） 200409641 A7 B7 五、發明說明（7 ) 激素之功能（亦即，促使葡萄糖誘導之胰島素自胰臟彡細 胞釋出hGLP-Ι為由胰高血糖激素基因視組織種類而分 化表現之37-胺基酸胜肽。各種臨床數據證實GLP-1對於 提升/3細胞中cAMP之含量具有有利的影響。對控制不 5 良的2型糖尿病患者注射GLP-1會使其空腹血糖量正常 化（Gutniak，et al。New Eng. J. Med, 326:1316-1322, 1992)，較長期之注射可改善/3細胞至具有正常患者的功 能（Rachman，J· et al·，Diabetes 45:1524_1530, 1996)。最近 有報導證實，對於葡萄糖耐力受損的患者，GLP-1可改善 10 細胞的能力至對葡萄糖有反應（Byrne, et al.，Diabetes 47:1259-1265，1998)。然而，由於此胜肽半衰期短，因此 所有這些效果均很短暫。
Amylin製藥公司正以Exendin 4™ (AC2993)，原先被 Gila Monster鑑定出之39個胺基酸胜肽，進行第ΠΙ期試 15 驗。Amylin已提出報告記述，臨床研究證明以Exendin 4TM處理的2型糖尿病病患，其血糖控制有所改善。但 是，明顯地發生噁心及呕吐現象。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 申請人於WO 01/23420中揭示於活體内具有VPAC2 受體作用劑功能之新穎多肽，其全部内容併入本文以資參 20考’特別是，申請人揭示被鑑定為R3P66之VPAC2作用 劑。然而’其中敘述之多肽，包括PJP66在内，就調配 中與多肽相關的穩定性問題，以及多肽的半衰期問題而 言’均非適當之業界候選者。 因此，業界對於具有PACAP、GUM、或Exendin -9- I紙張尺度適用甲圏國冢標準(CNS)A4規格（_210 x 297公麓） 200409641 A7 B7 五、發明說明（ 10 15 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 20 葡萄糖依賴性胰島素促分泌素活性，惟副作用較少，較佳 為調製穩定且具有長的血漿半衰期之改良胜肽有所需求。 再者，緊密控制血糖含量可預防長期之糠尿病併發症。因 此，新穎的糖尿病藥物可提供病人增進之生活品質。 [發明内容I 發明概述 本發明提供於活體内具有VPAC2受體（下文稱 VPAC2)作㈣之功能、且有效治療可由具有νρΑ(：2作 用劑活性的製劑改善之疾病與狀况之新穎多肽。較佳為， 本發明之多肽性VPAC2作㈣，對VPAC2比對 VPAC1肖PAC1具有較大效力。舉例而言，惟不受此 限，這些多肽激發胰島素合成及以依賴葡萄糖的方式自騰臟/5細胞_ ’及隨後之血_少。這些胰島素促分泌辛 多肽被證實㈣騎激發下’ Μ劑對照組更能降低金 糖。又更佳為，本發明多肽於調配時穩定，且具有長半衰期，於衍生化時，具有長期之活體内作用。 本發明之多狀為罹患，如，代謝生 八哥失調例如由於内源胰島素分泌降低而產生疾病之病人’特別是2型糖尿病患 者’ «萄糖耐力受損m島素分泌輕微改變之糖尿病前期狀態）之患者，提供新穎之療法。+ 此外，本發明多肽可用於預防及/或治療1型糖尿病、杠故^ 好娠糠尿病、年輕人成熟發病型糖尿病（MODY)、隱性自挪| 3體免疫糖尿病成人 (LADA)、及相關之糖尿病性血脂異參$节與其他糖尿病併發 症，以及高血糖症、高胰島素血症、益&_萄糖耐力受損、空 -10- 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐)一- 200409641 A7 五、發明說明（9) 腹葡萄糖障礙、血脂異常、高三酸甘油脂血症、x症候 群、及胰島素抗阻。 10 15 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 20 本發明多肽亦可用於預防及/或治療肥胖症(例如，調 控食慾與食物攝取）、粥樣硬化性疾病、高脂血症、高膽 固醇血症、低HDL含量' 高血壓、心血管疾病（包括粥樣 硬化、冠狀心臟疾病、冠狀動脈疾病、與高血壓）、腦血 管疾病與末梢血管疾病；預防及/或治療狼瘡、多囊性印 巢症候群、致癌性、與增生症、氣喘、男性生關題、潰 癌睡眠失调、月曰質與碳水化合物代謝失調、晝夜調節異 ㊉生長失调、症量衡定失調、免疫疾病包括自體免疫疾 病（例如，全身性紅斑狼瘡）、以及紐與慢性炎症、敗血 性休克、經本文確認之其他㈣，或如後文所述之其他功 厶μ _ 詳言之’本發明之一態樣為選自包括SEQ ID NOs: 1 至152 ,、至7種生物功能證明與所列諸序列編號之多 肽（總稱為「本發明多肽」）實質上相同之片段、衍生物及 變異體（包含其魏相等物)職_之乡肽。本發明之較 佳具體實例為選自包括SEQ仍N〇s:丨至％與seq瓜 NOs. 115至152 '其至少-種生物功紐明與前列諸序列 編號之多肽實質幼同之諸、衍生物及變異體所成組群 之多肽。本發明之更佳具體實例為選自包括seq①術 ⑴與卿①斷⑴幻^其至少—種生物功能 證明與前列諸糊㈣之多肽實相同之片段、衍生物 及變異體所成組群之多肽。本發明之最佳具體實例為選自 -11- 本紙張尺度剌中標準(CNS)A4規格（21Gx297^Jy 200409641 hi B7 五、發明說明（10) 包括SEQ ID N〇s: 1、2、115、與116、其至少一種生物 功能證明與前列諸序列編號之多肽實質上相同之片段、衍 生物及變異體所成組群之多肽。 本發明另一具體實例為編碼本發明多肽之多核苷酸， 5及重組表現本發明多肽所需之隨從載體及宿主細胞。這些 多核苷酸序列包含SEQ ID NOs: 154-264。 本龟明亦提供選擇性結合本發明多肽之抗體與抗體片 段。此等抗體係用於檢測本發明多肽，及可藉此項技藝中 悉知之方法鑑定及製造。亦產生辨識本發明多肽之多株n 10 端IgG抗體與單株c端Fab抗體。 本發明也有關治療哺乳動物糖尿病、糖尿病相關病 症、及/或受本發明多肽影響，較佳為受本發明多肽之 VPAC2作用劑功能影響之其他疾病或狀況之方法，該方 法包括投與該哺乳動物治療有效量之本發明之任何多狀或 15對VPAC2具活性之任何多肽，例如SEQ仍N〇s: 152 ° 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本發明同時揭示製造本發明多肽（包括重紐多狀及合 成多肽二者）之方法。 ° 發明之詳細說明 20 本發明提供新穎、之多肽、及其片段、衍生物及變異 體，其顯露至少一種與第la至id圖之多肽(總稱為本發 明多肽）貫質上相同之生物功能。本發明多肽於活體内具 有VPAC2作用劑之功能，或者具有預防及/或治療例如糖 尿病(包括1型與2型糖尿病）、扭娠糖尿病、年輕人成熟發病型糖 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 200409641 A7 B7 五、發明說明（11) 屎病（MODY)(Herman，et al·，Diabetes 43:40，1994)、隱性 自體免疫糖尿病成人(LADA)(Zimmet，et al.，Diabetes Med. 11:299，1994)、及相關之糖尿病性血脂異常與其他糖尿病 併發症，以及高血糖症、高胰島素血症、葡萄糖耐力受 5損、空腹葡萄糖障礙 '血脂異常、高三酸甘油脂血症、χ 症候群、及胰島素抗阻等病症或狀況之功能。 此外，本發明多肽亦可用於預防及/或治療肥胖症（例 如，調控食慾與食物攝取）、粥樣硬化性疾病、高脂血 症、高膽固醇血症、低HDL含量、高血壓、心血管疾病 10 (包括粥樣硬化、冠狀心臟疾病、冠狀動脈疾病、與高血 壓）、腦血管疾病與末梢血管疾病；用於預防及/或治療狼 瘡、多囊性卵巢症候群、致癌性、與增生症、氣喘、男性 生殖問題包括人類精子活動力、潰瘍、睡眠失調、經本文 確認之其他狀況，或如後文所述之其他功能。 15 較佳為，本發明多肽以依賴葡萄糖的方式激發胰島素 自胰臟石細胞釋出。又更佳為，本發明多肽於水性與非 水性調配物二者中均穩定，並展現大於一小時之血漿半衰 期。 ^ 經濟部智慧財產局員工湞費合作社印製 本發明多肽為VPAC2作用劑；彼等較佳為對VPac2 20之選擇性為對VPAC1及/或PAC1選擇性之至少1〇件之 選擇性VPAC2作用劑；更佳為，對VPAC2之選擇性為 對VPAC1及/或PAC1選擇性之至少ι〇〇倍之選擇性 VPAC2作用劑；最佳為，彼等以依賴葡萄糖的方式激發 胰島素釋入血漿中而不致引發血漿葡萄糖含量停滯或增加
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五、發明說明（ 12 該等血糖含量停滯或增加為例如2型糖尿病之治療帶來 不良後果）。此外，本發明多肽較好為VPAC2受體之選擇 ^作用劑，因而導致，例如，增加釋出胰島素至血漿中， :選擇性地對抗為例如胃腸持水性、及域不希望之心血 "效應如〜搏數增加等不為所喜或危險副作用的原由之其 他受體。 、本發明多肽於水性與非水性調配物二者中均穩定。較 佳為’本發明多肽溶於水(pH介於7與8之間）或非水性 有機溶劑時，於37|C，一週期間内，展現小於1〇%之 1〇降解率。又更佳為，本發明多肽溶於水(pH介於7與8 之間）或非水性有機溶劑中時，於37_4(rc，一週期間内， f見！、於5/。之降解率。再者，本發明之組成物與調配物 可含有本發明多肽與約2%至約30%之DMSO。於本發明 另/、體實例中’組成物與調配物可視需要包含約〇 2% 15至約3%(w/v)另外的溶劑例如丙二醇、二甲基甲醯胺、碳 酸丙烯酯、聚乙二醇、與三酸甘油酯。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 最後，本發明衍生化之多肽經IV注射於大鼠後，較 好展現至少一小時之血漿半衰期，更好此血漿半衰期為至 少2小時，又更好為至少3小時。 20 本發明夕肽為内源胰島素分泌降低或葡萄糖耐力受損 的病人，特別是2型糖尿病患者，提供新穎的療法。亦 即本發明多肽為長效之VPAC2作用劑，可用於維持、 改善、及恢復受葡萄糖激發之胰島素分泌。再者， VPAC2文體之選擇性胜肽作用劑可加強胰臟中依賴葡萄 -14- 本紙張尺度·巾_ S¥i(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 200409641
五、發明說明（u) 糖之胰島素分泌’不會弓丨致與其他pacap受體之非選擇 性活化相關之副作用。 、 ，界疋本說月曰王文所用的-些名詞於下，其他名詞 則於提㈣予m特定胺麵之單字母簡寫、其對應 胺基酸、及三字母簡寫如下示：a，丙胺酸_; c，半 胱胺酸㈣；D、天冬_(asp);E，賴酸(㈣士笨 丙胺酸(帅G，甘胺酸(gly); H，組胺酸(his); ι，異白 胺酸帅K，離胺酸(lys);L，白胺酸(㈣；M，甲硫胺 10 15 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 20 酸(met);N，天冬醢胺(咖）；P，脯胺酸(㈣㈧，麵胺 酿胺(gln);R，精胺酸㈣絲胺酸㈣；τ，蘇胺酸 _;V，類胺酸㈣；w，色胺酸⑽)；τ，路胺酸 (tyr)。 「編碼多肽之多核*酸」1涵蓋僅含有編碼該多肽 之多核㈣以及含有另外的編以，或非編碼序列之多核 普酸。本發明進-步有關與上文所述序列㈣之多核智 酸’只要該等序列之間具有至少約7G%、較佳至少处 冒。、更健㈣95%之同―性。本剌特财關在則 條件下雜交於上文所述？核苷酸之編瑪多肽之多核苦酸。 本文所用之「嚴苛條件」意指「嚴苛雜交條件」。較程 為’只在序列之間具有至少、約90%及較佳95%至97%同 一性下才發生雜交。於一較佳具體實例中，雜交於上文所 述多核苷酸之多核苷酸編碼保留與由cDNA編碼之成熟 多肽實質上相同生物功能或活性之多肽。 功月b相荨」及「實質上相同生物功能或活性」各指 -15- 本紙張尺度適财iii^(CNS)A4規格（2胸297公^-—~—- 200409641 A7 B7 五、發明說明（14) 5 當各多肽之生物活性係以相同程序測定時，生物活性之程 度在與其相較之另一多肽所展示生物活性之約3〇〇/。之内 至100%或更多者。例如，與第i圖之多肽功能相等之多 肽為，在進行實例7之環狀AMP閃爍接近測定法測試 時，證明於表現人類VPAC2受體之CH〇細胞株中堆積 cAMP 者。 訂 為VPAC2作用劑之本發明多肽為，進行實例7之實 驗流程測試時，證明約30%至約1〇〇%或更多最大 PACAP-27 VPAC2作用劑活性者。本發明之較佳多肽， 10 為對VPAC2勝於對PACAP、VPAC1、與PAC1受體之 選擇性作用劑，係於使用表現適當受體之細胞進行實例7 實驗流程測試該多肽時，證明VPAC2作用劑活性對 VPAC1活性比率為約1〇:1或更高，更佳約1〇〇:1或更 高，及/或證明VPAC2作用劑活性對PAC1活性比率為約 15 1〇:1或更高，更佳約100:1或更高之彼等多肽。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 20 「嚴苛雜交條件」係指將欲雜交之二多核苷酸（或片 段）置於含50%曱醯胺、5x SSC(750 mM NaQ、75 mM檸 檬酸鈉）、50 mM磷酸鈉（pH 7.6)、5x鄧哈氏溶液 (Denhard’s solution)、10%葡聚糖硫酸鹽、與20微克/毫 升變性、剪切之鱈魚精子DNA之溶液中，於42。(：保育隔 夜，然後於約65°C之O.lx SSC洗滌濾片。 「片段」、「衍生物」與「變異體」等詞，在述及第 1圖之多肽時，意指保留與該等多肽實質上相同的生物功 能或活性之多肽之片段、衍生物與變異體，進一步詳述於 -16- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 200409641 A7 B7 五、發明說明G5) 下文。 相似物包含於其内含有本發明多狀胺基酸序列之前多 肽。本發明之活性多肽可藉天然、活體内程序或藉此項技 藝中悉知之程序例如藉酵素性或化學切割法，自完整前多 5 肽分子之附加胺基酸處切割。例如，28-胺基酸原態胜肽 VIP係呈較大分子之多肽自然表現，然後經活體内處理， 釋出28-胺基酸活性成熟胜肽。 片段乃如本文揭示的活體内模式中所述，保留實質上 類似功能活性之部分多肽。 10 衍生物包含對多肽之所有修飾，其實質上保存本文揭 示之功能，及包含附加結構及伴隨之功能（例如，具有較 大半衰期之經PEG基化之多肽），及賦與標靶導向專一性 或附加活性(例如對意指標乾之毒性）之融合多肽，進一步 詳述於下文。 15 本發明多肽可為重組多肽、天然純化之多肽、或合成 多肽。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本發明多肽之片段、衍生物或變異體可為（i)其中一或 多個胺基酸殘基被保守性或非保守性胺基酸殘基(較佳為 保守性胺基酸殘基)取代且該經取代之胺基酸殘基可或不 20 可由遺傳密碼編碼者，或（ii)其中一或多個胺基酸殘基包 含取代基基團者，或(出)其中成熟多肽與另一化合物[例如 增加該多肽的半衰期之化合物（例如，聚乙二醇融合 者’或（iv)其中附加之胺基酸與成熟多肽融合者，例如領 導序列或促進分泌序列或用於純化該成熟多肽或前多肽序 -17- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（21Q X 297公 ~" 200409641 A7 B7 五、發明說明（16) 列之序列 5 10 15 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 20 列與較大多肽(例如，人類白 蛋白、抗體或Fc)融合以増加作用時間者。從本文之教示 顯知，此等片段、衍生物及變異體與相似物均在熟習此項 技藝人士熟知之範圍内。 較好，本發明之衍生物含有於—或多個預測位置製造 之保守性胺基酸取代(界定於下文），較佳為非必要胺基酸 殘基。「非必要」胺基酸殘基為改變蛋白質之野生型序列 而不更改生物活性之殘基，至於「必要」胺基酸殘基乃生物活性所[「料性絲峡代」為其巾絲酸殘基經 具有相似侧鏈之胺鎌絲置換i具有相似側鏈之胺基 酸殘基家族減項技射e有界定。此家族包含具驗性侧 鏈之胺驗(例如，雜酸、、㈣酸）、具酸性側 鏈之胺基酸(例如，天冬胺酸、楚胺酸）、具未帶電荷的極 性侧鏈之胺基酸(例如，甘胺酸、天冬醯胺、麵胺酿胺、 絲胺酸、‘蘇胺酸、胳胺酸 '半胱胺酸）、具有非極性侧鍵 之胺基酸(例如，丙胺酸、類胺酸、白胺酸、異白胺酸、 脯胺酸、苯丙親、甲硫胺酸、色胺酸）、具有$分支側 鏈之胺基酸（例如，蘇胺酸、纈胺酸、異白胺酸)及具芳族侧鏈之胺基酸(例如，酪胺酸、苯丙胺酸、色胺酸、組胺 酸）。保枝胺級殘基奸在㈣性蛋白f功能部位内 之胺基酸殘基(例如19與27殘基，此等殘基為蛋白質活性例如VPAC2活性及/或VPAC2選擇性所必需）不可進行 非保守性取代H或具线时科包㈣於作為藥 劑以產生抗邀、適於作為研究試劑等之多肽片段。片段包-18- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（21〇χ297公釐） 200409641 A7
五、發明說明（17) 括含有以類似於或衍生自本發明纽胺基酸序列之胺基 酸序列’及展現該多肽之至少-種活性，惟較本文揭示之 全長多肽含有較少胺基酸之胜肽。典型地，該等生物活性 部分含有具有多肽的至少一種活性之功能部位或主結構。 5多肽之生物活性部分可為，例如，其長度為5或5個以上 胺基酸之胜肽。此等生物活性部分可合成或以重組技術製 備，及可藉本文揭示或此項技藝中悉知之方法評估本發明 多狀之一或多種功能活性。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 此外，本發明之較佳衍生物包括與另一化合物融合之 10成熟多肽，其中該另一化合物為例如增加該多肽的半衰期 及/或減少該多狀之潛在免疫發生性之化合物（例如，聚乙 二醇，’’PEG”）。於peg基化之情形下，多肽與PEG之融 合可藉熟悉此項技藝人士已知之任何方法來完成。例如， PEG基化作用可藉先於多肽中引入半胱胺酸突變，以提 15供連接PEG之連接子，隨後以PEG•馬來醯亞胺進行部 位-專一性衍生化而完成。半胱胺酸可添加於胜肽之c_ ‘ ’為本發明中之較佳位點（參見，例如，Tsutsumi，et al.， Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97(15):8548-53, 2000 ;
Veronese，Biomaterials 22:405-417，2001 ; Goodsoon & 20 Katre，Bio/Technology 8:343_346，1990) 〇 本發明多肽之變異體包括具有足夠類似於第1圖諸序 列編號或其功能部位的胺基酸序列之胺基酸序列之多肽。 「足夠類似」一詞意指相對於第二胺基酸序列，第一胺基 酸序列含有足夠或最小數量之相同或相等胺基酸殘基，使 -19- $^張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公爱了 A7
經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 200409641 五、發明說明（18) 第&與第一胺基酸序列具有共同結構功能部位及/或共同 功此活}±。例如，含有至少約45%(較佳約至娜)相 同共同結構功能部位之胺基酸序列，於本文中即界定為足 夠類似較好’變異體與本發明較佳多肽之胺基酸序列足 5夠類似。變異體包括由在嚴苛條件下，與本發明多核苦酸 或其補體雜交之多核普酸編石馬之多狀之變異體。此等變異 體通常保留本發明多肽之功能活性。多核賊之片段庫可 用來產生供篩選與接續之選定之各式各樣之片段群。例 如，片段庫之產生可藉由在每一個分子只產生約一個切口 10之條件下以核酸S#處理多核苷酸之雙股pcR片段，使 雙股DNA變性，再使該DNA復性形成包含得自不同切 口產物之意義/反義對雙股DNA，以S1核_處理以自 再形成之雙股結構除去單股部分，及將生成之片段庫連接 於表現載體巾。此方法，可得到編碼本發明多肽之各 15種大小的N_端及内部片段之表現庫。 變異體包括由於發生誘變而有不同胺基酸序列之多 狀。具有如VPAC2作用劑功能之變異體可利用筛選本發 明多肽的突變物（例如截頭突變物）組合庫之vpAc2作用 劑活性予以鑑定。 20 力|體實例中，各式各樣之相似物庫係藉於核苦酸 層次之組合誘變而產生，及由各式各樣之基因庫來編碼。 各式各樣之變異體庫之製造可藉，例如，酵素性地將合成 之寡核苷酸混合物連接於基因序列中，使潛在變異體胺基 酸序列之簡併組可呈個別多肽表現，或者，呈含有該組二 -20- '
200409641 A7 _ B7 五、發明說明（19) 列之一組較大融合蛋白質（例如，供噬菌體表現）表現。有 多種方法可用於自簡併寡核苷酸序列製造潛在變異體庫。 簡併基因序列的化學合成可於自動化DNA合成器中進 行，然後將該合成基因連接於適當表現載體中。簡併組基 5因之使用容許將編碼所需潛在變異體序列組之所有序列供 應於一混合物中。合成簡併寡核苷酸的方法於此項技藝中 為已知（參見，例如，Narang，Tetrahedron 39:3，1983 ; Itakura，et al.，Annu· Rev. Biochem· 53:323，1984 ; Itakura, et al.? Science 198:1056, 1984 ； Ike5 et al.5 Nucleic Acid Res. 10 11:477, 1983)。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 此項技藝中用於篩選由點突變或切截製造的組合庫之 基因產物及用於篩選cDNA庫中具有選定性質的基因產 物之數種技術為已知。此等技術適用於迅速篩選由^^作 用劑多肽組合變異產生之基因庫。可處理高產量分析之最 15廣為使用之筛選大基因庫之技術典型地包括將基因庫選殖 至可複製之表現載體中，以所得載體庫轉形適當細胞，及 在所需活性之檢測有助於單離編瑪基因（其產物被檢測）的 載體之條件下，表現該組合基因。重複整體誘變肿⑷， ^種提高基因庫中功能突變物頻率之技術，可與篩選測定 20法組合使用以鑑定所需變異體。 —本發明也提供篏合型或融合型多肽。脉導向序列録 &计而定位輸送纽至胰臟，使潛在之副作用減至最小。 本發明多肽可由彼此以肽鍵或緩修飾之狀鍵（亦即，狀同 位質)相連接之胺基酸組成，及可含有由基因編碼的2〇個 -21、 本紙張尺度適用中國ii：標準((：卿八4規格（21〇χ297^^〜------— 200409641 A7 B7 " ___________ 五、發明說明（20 ) 胺基酸以外之胺基酸。該等多肽可藉由天然程序，例如後 轉譯作用處理，或以此項技藝中悉知之化學修飾技術予以 修飾。此等修飾作用詳述於基礎教科書及更為細述之專題 論文，以及許多研究文獻中。修飾作用可發生於多肽的任 5 何地方，包括胜肽主鏈、胺基酸側鏈及胺基或幾基末端。 可以理解的是，相同類型之修飾作用可能以相同或不同程 度存在特定多肽的數個部位。同時，特定多肽可能含有許 多類型之修飾作用。多肽可具支鏈，例如，泛素化的結 果，亦<為具或不具支鏈之環狀。環狀、分支鏈、及分支 10 鏈環狀多肽可由後轉譯作用之天然程序產生，或可利用合 成法製造。修飾作用包括乙醯化、醢化、ADP-核糖基 化、醯胺化、共價連接黃素、共價連接血基質部分、共價 連接核苷酸或核苷酸衍生物、共價連接脂質或脂質衍生 物、共價連接磷脂醯肌醇、交聯、環化、形成二硫鍵、脫 15甲基化、形成共價交聯、形成半胱胺酸、形成焦麩胺酸、 甲醯化、7 _羧基化、糖基化 '形成GPI固定物（anch〇r)、 羥化、碘化、甲基化、肉豆蔻醯化、氧化、PEG基化、 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 蛋白水解處理、填酿化、異戊烯化（prenylati〇n)、消旋 化、硒醯化、硫酸鹽化、轉移RNA居間促成之添加胺基 20 酸於蛋白質例如精胺酸化、及泛素化（參見，例如，
PjQteins, Structure and Molecular Properties. 2nd ed·，Τ· Ε· Creighton，W. H. Freeman and Company, New York (1993)，Posttranslational Covalent Modification of Proteins, B. C. Johnson，ed·，Academic Press, New York，pgs. 1-12 -22- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公爱） 200409641 A7 ---- B7 五、發明說明（21) (1983) , Seifter et al.? Meth. Enzymol 182:626-646, 1990 ；
Rattan，et al·，Ann n.Y. Acad· Sci. 663:48-62, 1992)。 本發明之多肽包含第1圖之多肽(SEQ ID NOs: 1至 152)，以及其中於序列中具有非實質變異之序列。「非實 5質變異」包括實質上維持本發明多肽之至少一種生物功能 之任何序列添加、取代或缺錢異體，其中生物功能較佳 為VPAC2作用劑活性，更佳為選擇性vpAC2作用劑活 性，及最佳為本文中闡明之胰島素分泌活性。彼等功能相 等物較好包括與第1圖之多肽具有至少約 90%同一性之 10多肽，更好為與第丨圖之多肽具有至少95%同一性之多 肽，又更好為舆第i圖之多肽具有至少97%同一性之多 肽’也包括該等多肽實質上具有相同生物活性之部分。然 而，其胺基酸序列具有第i圖多肽之非實質變異且展示本 文進一步敘述之功能相等性之任何多肽均涵蓋於本發明之 15 敘述中。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 如此項技藝中所已知，兩多肽間之「相似性」係針對 一多肽之胺基酸序列及其保守性胺基酸取代與第二多肽之 序列進行比較而決定。此等保守性取代包括上文、 Dayhoff (The^AtLas of Protein Sequence and Structure 5, 20 1978)、及 Argon (EMBO J_ 8:779-785, 1989)所述者。例 如，屬於下列組群之一之胺基酸代表保守性變化： -ala、pro、gly、gin、asn、ser、thr ; -cys、ser、tyr、thr ; -val、ile、leu、met、ala、phe ; -23- 本紙張尺度適用中國國家標隼(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 200409641 A7 B7 五、發明說明（22 ) -lys、arg、his ·, -phe、tyr、trp、his ;及 -asp、glu 〇 5 10 15 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本發明也有關編碼本發明多狀之多核普酸、以及包人 彼等多核苷酸之載體、經本發明載體基因工程改造之宿主 細胞、及利用重組技術製造本發明多肽。宿主細胞可為經 本發明載體（其可為，例如，選瘦載體或表現載體）基因工 程改造(轉導、轉形或轉染）者。載體可，例如，呈^體、 病毒顆粒、噬菌體等形式。經改造之宿主細胞可培養於經 修飾適於活化啟動子、或選擇轉形株之習知營養典養美 中。培養條件，例如溫度、PH等，係先前選擇表^宿^ 細胞所用者，為熟悉此項技藝人士所顯知。本發明之多核 普酸可用於以重組技術製造多肽。因此，例如，該多核皆 酸序列可包含於任何一種或多種表現栽劑中，特別是用於 表現多肽之載體或質體。此等載體包含染色體、非染色體 及合成DNA序列（例如，SV40之衍生物）；細菌質體；嗟 菌體DNA;酵母質體；衍生自質體及噬菌體]31^八組合之 載體；病毒DNA例如疫苗、腺病毒、禽痘病毒、與假狂 犬病病毒。然而，只要可於宿主中複製及存活，任何載體 20 或質體均可使用。 適當之DNA序列可利用多種程序嵌入載體中。通 常，DNA序列係利用此項技藝已知之程序嵌入適當核酸 内切限制酶位置中。此等及其他程序係在熟習此項技藝人 士悉知之範圍内。將表現載體中之DNA序列操作性地連 -24- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公董） 200409641 A7 --Β7
，於適當表現控制序列（啟動子），以引導mRNA合成。此 等啟動子之代表性貫例包含，惟不限於，Ltr或sv4〇啟 動子、大腸桿菌lac或trp、噬菌體；IPl啟動子、及已知 可於原核生物或真核生物細胞或其病毒中控制基因表現之 /、啟動子。表現載體亦含有開始轉譯之核糖體結合位點 及轉錄終結子。載體也可包含用於擴增表現之適當序列。 此外，表現載體較好含有提供用力選擇轉形宿主細胞之表 /現型特性（例如用於真核細胞培養之二氫葉酸還原酶或新 铋素抗性、或例如於大腸桿菌之四環素或胺苄青黴素抗性) 10之基因。含有如上文所述適當DNA序列、以及適當啟動 子或控制序列之載體，可用於轉形適當宿主，使該宿主表 現該蛋白質。適當宿主之代表性實例包含，惟不限於，細 菌細胞，例如大腸桿菌、鼠傷寒沙門桿菌 鏈黴菌屬；真菌細胞，例如酵母；昆蟲細 15胞，例如果蠅屬S2及黏蟲屬Sf9 ;動物細胞例如CH〇、 COS或Bowes黑色素瘤；腺病毒；植物細胞等。從本文 經濟部智慧財產局員Η消費合作社印製 之教示顯知，適當宿主之選擇係在熟習此項技藝人士悉知 之範圍内。 本發明亦包括含有一或多個上文廣泛敘述的序列之重 20組構築體。該構築體包含其内已以正向或逆向嵌入本發明 序列之載體，例如質體或病毒載體。於此具體實例之較佳 態樣中，該構築體進-步包含操作性連接於該序列之調控 序列，包括，例如，啟動子。有大量適當載體及啟動子為 熟習此項技藝人士所悉知，且為市售可得。茲提供下 -25 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（21〇 X 297公爱） 200409641 A7 B7 五、發明說明（24 ) 列載體作為例示，細菌性：PQE70、pQE60、pQE-9、 pBS、phagescript、psiX174、pBluescript SK、pBsKS、 pNH8a、pNH16a、pNH18a、pNH46a、pTRC99A、 PKK223-3、pKK233-3、pDR540、與 PRIT5 ;真核生物 5 十生·· pWLneo、pSV2cat、p〇G44、pXTl、pSG、pSVK3、 pBPV、pMSG、與PSVL。然而，只要可於宿主中複製及 存活，任何質體或載體均可使用。啟動子區域可使用帶有 可選擇標記之CAT(氯黴素轉移酶)載體或其他載體，從任 何需要之基因中選擇。二適當載體為PKK232-8與 10 PCM7。特別指名之細菌啟動子包括iaci ' lacZ、丁3、 丁7、gpt、λ PR、PL與trp。真核生物性啟動子包括緊鄰 CMV前端、HSV胸腺核苷激酶、SV40前後端、得自反 轉錄轉病毒之LTRs、及小鼠金屬魏基蛋白_1。適當載體 及啟動子之選擇係在熟習此項技藝者悉知之範圍内。 15 本發明也有關含上述構築體之宿主細胞。宿主細胞可 經 濟 部 智 慧 財 jk 局 員 工 消 費 合 作 社 印 製 為鬲等真核生物細胞，例如嗜乳動物細胞，或低等真核生 物細胞，例如酵母細胞，或者宿主細胞可為原核生物細 胞’例如細菌細胞。欲將構築體引入宿主細胞中，可利用 磷酸鈣轉染法、DEAE-葡聚糖居間促成之轉染法、或電穿 20 孔法予以進行(Davis，et al·，Basic Methods in Molecular
Biology，1986)。可以習知方法利用宿主細胞中之構築體 以製造由重組序列編碼之基因產物。或者，本發明之多肽 可利用習知之胜肽合成器予以合成製造。 在控制適當啟動子下，成熟蛋白質可於哺乳動物細 -26- g尺度適用中國規格（21〇 χ 297公爱)-~--~ - 200409641 A7 ______________________ B7 五、發明說明（25 )
胞、酵母、細菌、或其他細胞中表現。不含細胞之轉譯系 統亦可使用衍生自本發明DNA構築體之RNA來製造該 等蛋白質。用於原核生物及真核生物宿主中之適當選殖及 表現載體見述於 Sambrook，et al.，Molecular Cloning: A 5 Laboratory Manual, Second Edition，（Cold Spring Harbor， N.Y·，1989)，其揭示内容併入本文以資參考。 經濟部智慧財產扃員工消費合作社印製 藉喪入促進子序列於載體中，可增加高等真核生物中 編碼本發明多肽的DNA之轉錄作用。促進子為DNA之 順式作用元件，通常為約10至约3〇〇 bp，係作用於啟動 10子以增加其轉錄作用，其實例包括在複製起點後侧之sv 促進子(bp 1〇〇至270)、巨細胞病毒啟動子前端促進子、 在複製起點後侧之多瘤促進子、及腺病毒促進子。通常， 重組表現載體包括複製起點與容許宿主細胞轉形之可選擇 標記（例如大腸桿菌之胺苄青黴素抗性基因或釀酒酵母 15 TRP1基因），及衍生自高度表現基因之啟動子，以引導下 游結構序列之轉錄作用。此等啟動子可衍生自編碼糖原酵 解酵素例如3-磷酸甘油酸激酶(PGK)、α因子、酸性磷酸 酶、或熱休克蛋白質之操縱子。異質結構序列係以轉譯、 起始及終止序列組合成適當狀態，較佳為，具有弓I導轉譯 20蛋白質分泌至周質空間或細胞外培養基的能力之前導序 列。視需要地，異質序列可編碼包括賦與需要特性（例 如，表現重組產物的安定或單一純化作用）之议_端鑑定胜 肽之融合蛋白質。 供細菌用途的有用表現載體之構築係將編焉所需蛋白 -27- 200409641 A7 B7 五、發明說明（26 ) 質之結構DNA序列與適當轉譯、起始及終止訊息一起嵌 入’成為具有功能啟動子之可操作讀取狀態。載體含有一 或多個表現型選擇標記及一複製起點以確定保持該載體 及，如果需要，則於宿主内提供擴增作用。用於轉形之適 5當原核生物宿主包括大腸桿菌、枯草桿菌、鼠傷寒沙門桿 菌、及假單胞菌、鏈黴菌、與葡萄球菌等屬之多種菌種， 惟亦可選用其他菌種。供細菌用途的有用表現載體可包含 選擇標記及衍生自含有悉知選殖載體pBR322(ATCC 37017)之基因元件的市售可得質體之細菌性複製起點。此 10等市售載體包括，例如，PKK223-3 (Pharmacia Fine
Chemicals，Uppsala，Sweden)與 GEM1 (Promega，Madison，
Wis·，USA)。彼等pBR322「主鏈」部分可與適當啟動子 及欲表現之結構序列結合。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 於適當宿主株轉形並生長至適當細胞密度後，利用適 15當方法(例如，溫度轉移或化學誘導法)對所選定啟動子去 阻遏，使細胞再培養一段時間。典型地離心收集細胞，以 物理或化學方法使其破裂，保留所得粗抽取物供進一步純 化用。表現蛋白質所用之微生物細胞可利用任何習知方法 使其破裂，包括冷凍-解凍循環、超音波處理、機械破 20 碎、或使用溶胞劑等方法。 多種哺乳類細胞培養系統也可用來表現重組蛋白。哺 乳類表現系統之實例包含Gluzman (Cell 23:175，1981)所 述之猴腎纖維母細胞COS-7系，及能表現相容載體之其 他細胞株，例如，C127、3T3、CHO、HeLa與BHK細胞 -28- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 200409641 A7 B7
株。哺乳類表現載體可包含複製起點、適當啟動子與促進 子，也包含任何必需之核糖體結合位點、聚腺苷酸化位 點、接合供體與受體位點、轉錄終止序列、 轉錄序列。衍生自s·病毒基因體之職序=% 5如，SV40起點、啟動子前側、促進子、接合、及聚腺苷 酸化位點可用來提供必需之非轉錄基因元件。 本發明之多肽可利用迄今使用之方法，包括硫酸錢或 乙醇沉殿法、酸抽取法、陰離子或陽離子交換層析法、磷 酸纖維素層析法、疏水性交互作用層析法、親和層析法、 10羥構灰石層析法、及外源凝集素層析法，自重組細胞培養 液回收與純化。可依需要使用蛋白質再折叠步驟，完成成 I、、蛋白質之構形。最後’使用高效能液相層析法⑽ 進行最後純化步驟。 本發明多肽可為化學合成程序之產物，或利用重組技 15術以原核生物或真核生物宿主（例如，細菌、酵母、高等 植物、昆蟲及哺乳類細胞）予以製造。視重組製造程序所 用宿主而定，本發明多肽可以哺乳類或其他真核生物性碳 經濟部智慧財產肩員工消費合作社印製 水化合物予以糖基化，亦可未予以糖基化。本發明多肽也 可包含起始f硫胺酸胺基酸殘基。經單離或純化之本發明 20多肽或其生物活性部分’以重組技術製造時，實質上不含 其他細胞物質或培養基；以化學方法合成時，實質上不含 化學前驅體或其他化學藥劑。較好’本發明經單離之多肽 肽或，可染物質。重組製造本發明多肽或其生物活性部分 -29-
本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297 實質上不含細胞物質及具有少於約3〇%(乾重比）之非多 200409641 A7 發明說明（28) 10 15 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 20 時，培養基較好佔多肽製劑容積之少於約3〇0/。。 * ^學合 成本發明多肽時，製劑較好含有少於約3〇%乾重比 學前驅體或非本發明化學藥劑。 Kb 本發明多肽可如下文詳細實例所述，方便地予r时 離。純化之多肽製劑純度至少約7〇% ;較好，其 單 約85%至約99%。製劑的純度可利用此項技藝中已知= 任何方法予以評估，例如SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳法= 質譜儀/液相層析法。 彳7 ' 編碼本發明多肽之多核苷酸可使用此項技藝中悉知之 方法整體或部分合成（參見，例如，Caruthers，et ai >s[ueiAcids Res. Symp· Ser. 215-223, 1980 ; Hom，et al·，NuclAcids Res· Symp. Ser· 225·232, 1980)。然後將編瑪多肽之 多核苷酸選殖入表現載體中，以表現該多肽。 熟習此項技藝人士將瞭解，製造具有非天然存在的密 碼子之編碼多肽之核苷酸序列可能有所助益。例如，可選 擇為特定原核生物或真核生物宿主所喜之密碼子，以增加 多肽之表現率，或製造具有所需性質（例如半衰期比以天 然存在的序列產生的轉錄本更長）之RNA轉錄本。 基於多種原因，本文揭示之核苷酸序列可使用此項技 藝中一般已知之方法建造，以更改編碼多肽之序列，其中 更改包括，惟不限於，修飾多肽或mRNA產物之閉合、 處理、及/或表現。藉由基因片段及合成寡核苷酸之無規 破碎與PCR再组合使DNA重新洗牌，可用來建造核苷酸 序列。例如，位點導向之誘變可用來嵌入新的限制切割位 -30- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4 H21〇 χ 297公爱） 訂 200409641 A7 B7 五、發明說明（29 ) 點、更改糖基化模式、改變密碼子偏好、製造接合變異 體、引入突變等。 本發明亦提供在熟習此項技藝人士瞭解範圍内之相關 化合物，例如化學模擬物、有機模擬物、或胜肽模擬物。 5本文所用之「模擬物」、「胜肽模擬物」、「有機模擬 物」與「化學模擬物」等詞擬涵蓋具有與本發明胜肽等同 之立體方位原子排列之胜肽衍生物、胜肽相似物、與化學 化合物。可以瞭解的是，本文所用「等同」一詞擬涵蓋於 模擬化合物中具有產生與該等原子之相同或足夠相似之排 10列或方位而具有本發明胜肽之生物功能之具特定原子取代 之化合物、或該胜肽中之化學基團。於本發明之胜肽模擬 物中，化學組成之立體排列於結構上及/或功能上等同於 該胜肽主鏈與胺基酸側鏈成分之立體排列，而產生具有實 質生物活性的本發明胜肽之該等胜肽_、有機…及化學模 15擬物。彼等名詞係根據此項技藝中之瞭解而使用，例如， 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 見述於 Fauchere (Adv· Drug Res. 15:29，1986) ; Veber & Freidinger (TINS p.392, 1985);與 Evans 等(J. Med. Chem 30:1229, 1987)，均併入本文以資參考。 可以瞭解的是，本發明各胜肽之生物活性均存在藥效 20團。此項技藝中之藥效團據瞭解，係包含生物活性結構需 求之理想化、立體界定。胜肽·、有機一及化學模擬物可 經設計，使各藥效團符合當前之電腦模擬軟體（電腦輔助 藥物設計）。該等模擬物可利用根據得自本發明胜肽取代 基原子位置資訊之結構-功能分析予以製造。 -31 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公复)— 200409641 A7 B7 五、發明說明（30) 本發明提供之胜肽可藉由此項技藝中已知之任何化學 方法，有利地予以合成，特別是，例如，使用市售可得的 自動化胜肽合成器之固相合成技術。本發明之模擬物可藉 由習知用於合成胜肽之固相或溶液相方法合成（參見，例 5 如，Merrifield，J. Am. Chem· Soc. 85:2149-2154，1963 ; Carpino, Acc. Chem· Res· 6:191-98，1973 ; Birr，Aspects of the Merrifield Peptide Synthesis, Springer-Verlag: Heidelberg, 1978 ； The Peptides: Analysis，Synthesis, Biology，Vols· 1，2，3，and 5，（Gross & Meinhofer，eds.)5 10 Academic Press: New York，1979 ; Stewart，et al·，Solid Phase Peptide Synthesis, 2nd ed.? Pierce Chem. Co.: Rockford，III。1984 ; Kent，Ann· Rev· Biochem. 57:957-89, 1988 ;及 Gregg, et al·，Int· J. Peptide Protein Res· 55:161-214, 1990，該等文獻全部内容均併入本文以資參考）。 15 以使用固相合成方法為佳。簡言之，將N-經保護之 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 C端胺基酸殘基連接於不溶性支撐體例如二乙烯苯交聯聚 苯乙烯、聚丙烯醯胺樹脂、矽藻土/聚醯胺(pepsin K)、經 控制之細孔玻璃、纖維素、聚丙烯膜、塗覆丙烯酸之聚乙 烯棒等。使用脫保護、中和、及相繼經保護胺基酸衍生物 20偶聯之週期循環，根據胺基酸序列，從C端連接胺基 酸。有些胜肽之合成可使用採用酸敏感性樹脂之FMOC 策略。此時，較佳固體支撐體為二乙烯苯交聯聚苯乙烯， 其係市售可得且呈多種官能化形式，包括氣曱基樹脂、羥 曱基樹脂、對位乙醯胺基曱基樹脂、二苯甲胺(BHA)樹 -32- 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 200409641 A7 B7 五、發明說明（31) 脂、4-甲基二苯甲胺(MBHA)樹脂、肟樹脂、4-烷氧苄醇 樹脂(Wang樹脂）、4-(2’，4’-二甲氧苯基胺甲基)-苯氧甲基 樹脂、2,4-二甲氧二苯甲基·胺樹脂、與4-(2’，4、二甲氧苯 基-FMOC-胺基-甲基)-苯氧乙醯胺基正白胺醯基-MBHA樹 5 脂(Rink醯胺MBHA樹脂）。此外，如果需要，則酸敏感 性樹脂亦提供C端酸。α-胺基酸之特佳保護基為鹼不穩 定之9-芴基甲氧羰基(FMOC)。 與BOC(第三丁氧羰基)及FMOC基團化學相容的胺 基酸側鏈官能基之適當保護基於此項技藝中為悉知。使用 10 FMOC化學法時，以下述經保護之胺基酸衍生物較佳·· FMOC-Cys(Trit)、FMOC-Ser(But)、FMOC-Asn(Trit)、 FMOC-Leu、FMOC-Thr(Trit)、FMOC-Va卜 FMOC-Gly、 FMOC-Lys(Boc)、FMOC-Gln(Trit)、FMOC-Hlu(OBut)、 FMOC-His(Trit)、FMOC-Tyr(But)、FMOC-Arg(PMC 15 (2,2,5,7,8-五甲基色滿-6-磺醯基））、[^10(：-八1^印0(：)2、 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 FMOC-Pro、與FMOC-TYp(BOC)。胺基酸殘基可藉使用 多種偶聯劑與此項技藝中已知之化學方法予以偶聯，例如 與DIC(二異丙基-碳化二亞胺）、DCC(二環己基碳化二亞 胺）、BOP(六氟磷酸苯并三唑基氧基參二甲胺基鱗）、 20 PyBOP(六氟磷酸苯并三唑基小基-氧基-參-批咯啶鱗）、 PyBrOP(六氟磷酸溴-參-吡咯啶鱗）直接偶聯；經由完成之 (performed)對稱酐；經由活性酯例如五氟苯酯類；或經由 完成之HOBt (1-羥基苯并三唑）活性酯或藉使用FMOC-胺 基酸氟化物與氣化物；或藉使用FMOC-胺基酸-N-羧基酐 -33- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公爱） 200409641 A7 B7 五、發明說明（32 ) 類。較佳為於HOBt或HOAt (7-u丫羥基苯并三嗅)存在 下’以HBTU (六氣填酸2-(1Η_苯弁三σ坐_ι_基）1 1 3四 甲基錁）或HATU (六氟磷酸2-(1沁7-〇丫_苯并三吐小 基），1，1，3,3-四甲基錄）予以活化。 5 固相方法可以人工技術進行，惟以於市售可得之胜狀 合成器上（例如，Applied Biosystems 431A 等；Applied
Biosystems，Foster City，CA))自動合成為佳。於典型之合 成中’係將第一個（C端）胺基酸裝載於氣三苯甲基樹脂 上。然後可使用根據ABI FastMoc實驗流程（Applied 10 Biosystems)之相繼脫保護(使用20%哌啶/NMP (N_曱基。比 咯啶))與偶聯循環，產生胜肽序列。亦可使用以乙酸酐封 端之雙偶聯及三偶聯。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 合成的模擬胜肽可與樹脂裂離，並以含適當清除劑之 TFA (三氟乙酸)處理，進行脫保護。許多裂離試劑均可使 15用，例如Reagent K (0.75克結晶苯酚、0.25毫升乙二硫 醇、0.5毫升茴香硫醚、0.5毫升脫離子水、10毫升TFA) 等。過濾使胜肽與樹脂分離，並以乙醚沉澱法予以單離。 進步之純化可利用習知方法達成，例如凝膠過渡法與逆 相HPLC (高效能液相層析法）。根據本發明之合成模擬物 20 可呈醫藥上可接受之鹽型，尤其是鹼加成鹽，包括有機鹼 與無機鹼之鹽。酸性胺基酸殘基之鹼加成鹽係根據熟習此 項技藝人士悉知之方法，以適當鹼或無機鹼處理胜肽而製 備，或可將該適當鹼凍乾，直接製得所需鹽。 通常，熟習此項技藝人士將認知，本文所述之胜肽可 -34- 本紙張尺錢財國標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 200409641 A7 __B7 五、發明說明（33) 利用各種化學技術加以修飾，以產生主要具有與未修飾胜 肽相同活性及視需要具有其他需要性質之胜肽。例如，胜 肽之羧基基團可呈醫藥上可接受之陽離子之鹽型而提供。 胜肽内之胺基可呈醫藥上可接受之酸加成鹽型，例如 5 HC1、ΗΒΓ、乙酸、苯甲酸、曱苯磺酸、馬來酸、酒石 酸、與其他有機酸鹽，或可轉化成醯胺。硫醇可以任何— 種或許多公認之保護基，例如，乙醯胺基，予以保護。熟 習此項技藝人士亦將認知於本發明胜肽中引入環狀結構之 方法，俾使與原態結合組態更為接近。例如，可於胜肽中 10添加羧基端或胺基端半胱胺酸殘基，使胜肽於氧化時含有 二硫鍵，因而產生環狀胜肽。其他胜肽環化方法包括形成 硫醚及羧基-與胺基-終端醯胺與酯。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 詳言之’可使用多種技術構築與對應胜肽化合物具有 相同或類似之所需生物活性，但是比該胜肽在溶解性、穩 15定性、及對水解與蛋白水解之感受性上具有更有利活性之 胜肽衍生物與相似物。該等衍生物與相似物包括，於Ν 端胺基、C端緩基經修飾之胜肽，及/或將胜肽中之一或 多個醯胺鍵結改變為非醯胺鍵結之胜肽。可以瞭解的是， 可於一個胜肽模擬結構上結合二或多個該等修飾（例如， 20於C端羧基上進行修飾並於胜肽的兩個胺基酸之間含入_ CH2-胺甲酸根鍵結）。 胺基終端之修飾作用包括烷化、乙醯化、添加苯醯幾 基（carbobenzoyl)、及形成琥珀醯亞胺基。詳言之，可使 N端胺基反應形成具式rc(0)NH-_之醯胺基，式中R為 -35- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 200409641 A7 B7 五、發明說明（34) 烧基，較佳為低級烷基，係藉與醯基鹵化物，RC(〇)C1， 或酸酐反應而加入。典型地，此反應可藉於惰性稀釋劑 (例如，二氣甲烷）中，使約等莫耳或過量（例如約5莫耳) 醯基鹵化物與胜肽接觸而進行，稀釋劑中較好含過量（例 5如，約1〇當量）三級胺，例如二異丙基乙胺，以清除反應 中產生的酸。其餘反應條件為習知（例如，室溫3〇分 鐘）。於終端胺基進行烷化提供低級烷基N-取代，隨後如 上述與醯基鹵化物反應，將提供具式RC(〇)NR-之烷基 醯胺基。或者，使胺基終端與琥珀酸酐反應，令其共價連 10接於琥珀醯亞胺基。使用大約等莫耳量或過量琥珀酸酐 (例如，約5當量），以此項技藝中悉知之方法，包括使用 過量（例如，10當量）三級胺例如二異丙基乙胺，於適當惰 性溶劑（例如，二氣曱烷）中，如Wollenberg等（美國專利 案4,612，132，其全部内容併入本文以資參考)所述，使終 15端胺基轉化成琥珀醢亞胺。亦可瞭解的是，該琥珀醢基可 被，例如，以習知方法製備之（：2_至C6成基或__SR取代 基取代，以於胜肽之N端提供經取代之琥珀醯亞胺。該 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 等烷基取代基可利用使低級烯烴(C2·至c6-烷基)與馬來酸 酐以Wollenberg等（上文文獻)敘述之方法反應而製備；— 20 SR取代基可利用使RSH與馬來酸酐（其中r如上述界定） 反應而製備。於另一有利具體實例中，可將終端胺基衍生 化，形成苄氧羰基丽-或經取代之苄氧羰基·匪—基。此 衍生物可利用於適當惰性稀釋劑（例如，二氣甲烷）中，與 約等當量或過量苄氧羰基氯(CBZ-C1)或經取代之CBZ-C1 -36- i紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐）一 ---- 200409641 A7 B7 五、發明說明（35) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 反應予以製備’稀釋劑中較好含三級胺，以清除反應中產 生的酸。於又’衍生物中，其N端含有續醯胺基，係利 用於適當惰性豨釋劑（例如，二氣甲烷）中，與等當量或過 量(例如，5當f) s(〇)2Ci (其中r為燒基，較佳為低 5級烷基）反應而將終端胺轉化成磺醯胺。較好，該惰性稀 釋劑含過量（例如’ 10當量）三級胺例如二異丙基乙胺，以 清除反應中產生的酸。其餘反應條件為習知（例如，室溫 30分鐘）。終端胺可產生胺甲醯基，係利用於適當惰性稀 釋劑(例如，二氣甲烷）中，與等當量或過量(例如，5當量) 10 R—oc(o)ci 或 R—〇C(0)〇C6H4—p—no2 (其中 R 為烷基， 較佳為低級烷基）反應，將終端胺轉化成胺曱醯基。較 好，該惰性稀釋劑含過量（例如，約10當量）三級胺例如 二異丙基乙胺’以清除反應中產生的酸。其餘反應條件為 習知（例如，室溫30分鐘）。終端胺亦可形成脲基，係利 15 用於適當惰性稀釋劑（例如，二氣甲烧）中，與等當量或過 量（例如，5當量）R—N=C=〇反應，將終端胺轉化成脲（亦 即，RNHC(〇)NH—)，其中R如上述界定。較好，該惰性 稀釋劑含過量（例如，約10當量）三級胺，例如二異丙基 乙胺。其餘反應條件為習知（例如，室溫約3〇分鐘）。 20 製備C端羧基被酯（例如，—c(0)0R，式中R為烷 基，較佳為低級烧基）置換之胜肽模擬物時，可使用製備 胜肽酸時所用之樹脂，側鏈經保護之胜肽可以鹼與適當醇 (例如’甲醇）予以裂離。側鏈保護基可以習知方式去除， 利用以氟化氫處理，得到所需之酯。製備c端羧基被醯 -37- 本紙張尺度適用中國國轉準(CNS)A4規格（2ΐ〇χ297公爱） 200409641 A7 — B 7 五、發明說明（π) 胺-C(〇)NR3R4置換之胜肽模擬物時，係使用二苯曱胺樹 月曰作為胜肽合成之固體支撐體。合成完成後，以氟化氣處 理，使胜肽自支撐體釋離，直接產生游離之胜肽醯胺（亦 即，C端為一C(〇)NH2)。或者，於合成胜肽時，使用氣甲 5基化樹脂，結合與氨之反應，使側鏈經保護之胜肽自支撐 體釋離，獲得游離胜肽醯胺，並與烷基胺或二烷基胺反 應，獲得側鏈經保護之烷基醯胺或二烷基醯胺（亦即，C 端為一CCC^NRR!，其中R與Rl為烷基，較佳為低級烷 基）。然後利用以氟化氫處理，以習知方式去除侧鏈保 10護，得到游離之醯胺、烷基醯胺、或二烷基醯胺。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 於另一替代具體實例中，C端羧基或C端酯可利用 將竣基之--0H或酯之酯（一〇R)分別以N端胺基置換，引 起環化反應而形成環狀胜肽。例如，在合成及釋離，得到 胜肽酸後，於溶液例如二氣甲烷(CHei2)、二甲基甲醯胺 15 (DMF)或其混合物中，將該游離酸以適當羧基活化劑例如 壤己基％l化^一亞胺(DCC)轉化成活化醋。然後以n端胺 置換該活化酯，形成環狀胜肽。環化反應，不是聚合反 應，可根據此項技藝中悉知之方法，藉使用極稀之溶液予 以增進。 20 此項技藝中所瞭解及由本發明提供之胜肽模擬物係與 本發明胜肽於結構上類似，惟具有一或多個視需要被選自 於下之鍵結置換之胜肽鍵結者·· —ch2nh.....CH2S—、__ CH2CH2—、一CH=CH--(順式與反式兩種構象體）、一 coch2.....CH(OH)CH2_·、與—CH2SO—，該置換反應係 -38- >紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐) ' ^----- 200409641 A7 B7 五、發明說明（37 ) 利用此項技藝中已知並進一步於下述文獻中敘述之方法： Spatola, Chemistry and Biochemistry of Amino Acids, Peptides，and Proteins, (Weinstein, ed·)，Marcel Dekker: New York，p· 267，1983 ; Spatola，Peptide Backbone 5 Modifications 1:3，1983 ; Morley，Trends Pharm. Sci. pp. 463-468, 1980 ； Hudson, et al.5 Int. J. Pept. Prot. Res. 14:177-185，1979 ; Spatola，et al·，Life Sci· 38:1243-1249, 1986 ； Hann5 J. Chem. Soc. Perkin Trans. I 307-314, 1982 ； Almquist，et al·，J. Med. Chem· 23:1392-1398，1980 ; 10 Jennings-White, et al.? Tetrahedron Lett. 23:2533, 1982 ； Szelke，et al·，EP045665A ; Holladay，et al·，Tetrahedron Lett. 24:4401-4404, 1983 ;及 Hruby，Life Sci. 31:189-199, 1982 ;均併入本文以資參考。此等胜肽模擬物較胜肽具體 實例具有明顯的優點，包括例如，製造較為經濟、具有較 15 大的化學穩定性或增進之藥理性質（例如半衰期、吸收、 效力、功效等）、抗原性減少、及其他性質。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本發明胜肽之模擬相似物亦可使用習知原則或循理性 藥物設計製得（參見，例如，Andrews，et al.，Proc. Alfred Benzon Symp. 28:145-165, 1990 ； McPherson, Eur. J. 20 Biochem. 189:1-24, 1990 ； Hoi, et al.5 in Molecular Recognition: Chemical and Biochemical Problems, (Roberts, ed.) ; Royal Society of Chemistry，pp. 84-93，1989a ; Hol， Arzneim-Forsch· 39:1016-1018，1989b ; Hol，Agnew Chem·
Int. Ed，Engl. 25:767-778, 1986 ;其揭示内容均併入本文以 -39- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 200409641 A7 B7 五、發明說明（38) 資參考）。 根據習知藥物設計方法，可針對其結構與「原態」胜 肽結構具有共同屬性之分子任意進行測試，製得所需之模 擬分子。由結合分子特定基團之改變產生的定量貢獻可藉 5測定該推定模擬物之生物活性，與胜肽活性進行比較而決 定。於循理性藥物設計之較佳具體實例中，係將模擬物設 計成共享該胜肽最穩定立體構象之屬性。因此，例如，可 設計模擬物，使其擁有如本文所揭示，與本發明胜肽所展 示者類似之以足以引發離子性、疏水性、或凡得瓦爾作用 10 之方式定位之化學基團。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 進行循理性模擬物設計之較佳方法係使用能形成胜肽 立體結構代表之電腦系統，例如Hoi, 1989a ; Hol， 1989b ;及Hol，1986所例示者。本發明胜肽的胜肽·、有 機-、及化學模擬物之分子結構可使用此項技藝中市售可 15 得之電腦辅助藥物設計程式予以製造。該等程式之實例包 括 SYBYL 6·5®、HQSARTM、與 ALCHEMY 2000™ (Tripos) ; GALAXY™ 與 AM2000tm (AM Technologies， Inc.，San Antonio，TX) ; CATALYST™ 與 CERIUS™ (Molecular Simulations，Inc.，San Diego，CA) ; CACHE 20 PRODUCTS™、TSAR™、AMBER™、與 CHEM-X™ (Oxford Molecular Products, Oxford， CA)及 CHEMBUILDER3D™ (Interactive Simulations, Inc.? San Diego, CA)。 使用，例如，技藝公認之分子模擬程式，以本文揭示 -40- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 200409641 A7 B7 五、發明說明（39) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 之胜肽製造之胜肽_、有機-、及化學模擬物可使用習知化 學合成技術予以製造，該等技術較佳為經設計能提供高產 生量篩選者，包括組合化學法。用於製造本發明之胜肽-、有機-、及化學模擬物之組合方法包括例如，由 5 SIDDCO (Tuscon， Arizona) ； Tripos， Inc·，; Calbiochem/Novabiochem (San Diego, CA) ； Symyx Technologies, Inc. (Santa Clara, CA) ； Medichem Research, Inc. (Lemont， IL) ; Pharm-Eco Laboratories, Inc. (Bethlehem, PA);或 N.V. Organon (Oss, Netherlands)提供 10 之噬菌體表現陣列、固相合成法、及組合化學陣列。本發 明胜肽-、有機-、及化學模擬物之組合化學生產可根據此 項技藝中已知之方法，包括，惟不限於，於Terrett， (Combinatorial Chemistry, Oxford University Press, London, 1998) ; Gallop, et al·，J. Med· Chem· 37:1233-51，1994 ; 15 Gordon，et al·，J· Med. Chem. 37:1385-1401，1994 ; Look，et al·，Bioorg. Med· Chem. Lett. 6:707_12，1996 ; Ruhland，et al.，J· Amer. Chem· Soc· 118:253-4，1996 ; Gordon, et al.， Acc. Chem. Res. 29:144-54, 1996 ； Thompson & Ellman, Chem. Rev. 96:555-600, 1996 ； Fruchtel & Jung, Angew. 20 Chem. Int· Ed. Engl. 35:17-42，1996 ; Pavia，“The Chemical Generation of Molecular Diversity’’，Network Science Center，www.netsci.org，1995 ; Adrian, et al·，“Solid Support Combinatorial Chemistry in Lead Discovery and SAR Optimization,” Id·， 1995 ； Davies and Briant， -41- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 200409641 A7 B7 五、發明說明（4〇 ) “Combinatorial Chemistry Library Design using Pharmacophore Diversity，” Id·，1995 ; Pavia, “Chemically Generated Screening Libraries: Present and Future，” Id” 1996 ;及美國專利案 5,880,972 ; 5,463,564 ; 5,331，573 與 5 5,573,905中揭示之技術予以製造。 新合成之多肽可利用製備性高效能液相層析法實質純 化（參見’例如 ’ Creighton，Proteins: Structure And Molecular Principles, WH Freeman and Co., New York, N.Y,，1983)。本發明合成多肽之組成可利用胺基酸分析或 10 以，例如，Edman降解程序（Creighton，前文文獻）予以證 實。此外，多肽胺基酸序列的任何部分可於直接合成期間 加以更改及/或使用化學方法與得自其他蛋白質之序列組 合，以製造變異多肽或融合多肽。 亦可根據本發明使用本發明多肽，於活體内表現該等 15多狀，此常稱為「基因治療」。因此，例如，於活體外， 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 可用編碼多肽之多核苷酸(DNA或RNA)建造細胞，然後 k供建造細胞給擬以該多狀治療的病人。此等方法在此項 技藝中已悉知。舉例而言，可藉此項技藝中已知之程序， 使用含有編碼本發明多狀的RNA之反轉錄病毒粒子建造 20 細胞。 使用基因治療的胰島素促分泌素之局部輸送，可將治 療劑供應至標的區域(例如胰臟）。其實例如：使用胰臟專 一性啟動子製造小鼠泠細胞胰臟腫瘤模式出紐沾肪，
Nature 315(6015):115-22, 1985)。 ’ -42- 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210X297公釐^ -------------—_ 200409641 A7 B7 五、發明說明（Ο) 活體内與試管内之基因治療方法均被慮及。數種用於 將潛在性治療基因轉移至經界定之細胞群之方法為已知 (參見，例如，Mulligan, Science 260:926-31，1993)。這些 方法包括，例如： 5 1)直接基因轉移（參見，例如，Wolff，et al·，Science 247:1465-68, 1990); 2) 脂質體居間促成之DNA轉移（參見，例如，
Caplen, et aL? Nature Med. 3:39-46, 1995 ； Crystal,
Nature Med. 1:15-17, 1995 ； Gao and Huang, 10 Biochem. Biophys. Res. Comm. 179:280-85， 1991)； 3) 反轉錄病毒居間促成之DNA轉移（參見，例如，
Kay，et al·，Science 256:808-13, 1992); 4) DNA病毒居間促成之DNA轉移；此等DNA病毒 15包括，例如，腺病毒（較佳為Ad-2或Ad_5為基底之載 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 體）、疱疹病毒（較佳為單純疱疹病毒為基底之载體）、與 細小病毋（較佳為「缺陷」或非自體細小病毒為基底之載 體，更佳為以腺苷相關病毒為基底之載體，最佳為AAV_ 2為基底之載體)(參見，例如，ah et ai，Gene Therapy 20 1:367_84，1994 ;美國專利案4,797,368 ;與美國專利案 5，139,941 ;併入本文以資參考。 用於轉移所關注基因之特定載體系統之選擇取決於多 項因素其重要因素為標的細胞群的性質。反轉錄病毒 載體雖然已被精深研究及用於許多基因治療用途，惟彼等 -43- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 ---------- 200409641 A7 B7 五、發明說明（42) 載體通常不適於感染未分裂的細胞。此外，反轉錄病毒具 有發生腫瘤的可能性。然而，慢病毒載體領域之新近發展 可能規避一些此等限制（參見，例如，Naldini，et ai.. Science 272:263-67，1996)。 5 衍生反轉錄病毒質體載體之反轉錄病毒包含，惟不限 於，莫洛尼氏（Moloney)鼠類白血病病毒、脾臟壞死病 毒、例如勞氏肉瘤病毒、哈偉氏(Harvey)肉瘤病毒、鳥類 白血球增生病病毒、長臂猿白血病病毒、人類免疫缺乏症 病毒、腺病毒、骨髓增生性肉瘤病毒、與哺乳類腫瘤病毒 10 等反轉錄病毒。 腺病毒的優點為具有寬廣的宿主範圍、可感染停止分 化或分化末期之細胞(例如神經元或肝細胞）、且本質上被 認為不會致癌（參見，例如，Ali et al·，1994)。腺病毒似乎 不會整合入宿主基因體中。由於存在染色體外，因此發生 15 嵌入性誘變的風險大為減少（Ali et al·，1994)。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 腺苷相關病毒具有與腺病毒基底載體類似之優點。然 而，AAVs對於人類染色體19具有部位專一性整合作用 (參見，例如，Ali et al·，1994)。 於一較佳具體實例中，係使用編碼本發明多肽胰島素 20促分泌素之DNA進行例如糖尿病及糠尿病相關疾病等病 症之基因治療。 根據此具體實例，係提供使用編碼本發明多肽胰島素 促分泌素或變異蛋白質的DNA之基因治療給有其需要、 感染中、或剛診斷後之病人。 -44- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 200409641 A7 B7 五、發明說明（43 ) 熟習此項技藝人士將瞭解，根據此具體實例，可使用 含有多肽胰島素促分泌素、多肽胰島素促分泌素之DNA 或DNA片段、衍生物或變異體之任何適當之基因治療載 體。構築該等載體之技術於此項技藝中已悉知（參見，例 5 如，Anderson，Nature 392:25-30，1998 ; Verma，et al.，
Nature 389:239-242，1998)。欲將含有多肽胰島素促分泌 素DNA之載體引入標的部位，可使用已知技術來達成。 載體可含一或多個啟動子。可使用之適當啟動子包 含，惟不限於，反轉錄病毒LTR、SV40啟動子；與人類 10 巨細胞病毒（CMV)啟動子（Miller，et al·，Biotechniques 7(9):980-990，1989);或任何其他啟動子（例如，細胞啟動 子如真核生物細胞啟動子包括，惟不限於，組織蛋白、 pol III、與；5-肌動蛋白啟動子）。可使用之其他病毒啟動 子包含，惟不限於，腺病毒啟動子、胸腺核苷激酶(τκ)啟 15動子、與Β19細小病毒啟動子。從本文涵蓋之教示，適 當啟動子之選擇對熟習此項技藝人士而言為顯而易見。 編碼本發明多肽的核苷酸序列係在適當啟動子之控制 經 濟 部 智 慧 財 產 局 員 工 消 費 合 作 社 印 製 下。可使用之適當啟動子包含，惟不限於，腺病毒啟動子 例如腺病毒大後側(major late)啟動子；或異質啟動子例如 20巨細胞病毒（CMV)啟動子；呼吸性融合細胞病毒(RSV)啟 動子；可誘發之啟動子例如MMT(金屬巯基蛋白）啟動 子；熱休克啟動子；白蛋白啟動子；Ap〇AI啟動子，·人類 球蛋白啟動子，病毒性胸腺核苷激酶啟動子例如單純疱疹 胸腺核苷激酶啟動子,·反轉錄病毒LTRs(包括上文所述經 -45-
200409641 A7 B7 五、發明說明（44) 修飾之反轉錄病毒LTRs) ; /3-肌動蛋白啟動子；與人類 生長激素啟動子。啟動子亦可為控制編碼多肽的基因之原 態啟動子。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 反轉錄病毒質體載體係用於將包裝細胞株轉導形成生 5 產者細胞株。可被轉導的包裝細胞實例包含，惟不限於， ΡΕ501、ΡΑ317、ψ-2、ψ_ΑΜ、ΡΑ12、Τ19-14Χ、νΤ-19-17·Η2、m/CRE、v)/CRIP、GP+E-86、GP+envAml2、與如 Miller (Human Gene Ther· 1:5-14，1990，其全部内容併入 本文以資參考)所述之DAN細胞株。載體可經由此項技藝 10 中已知之任何方法轉導包裝細胞。此等方法包括，惟不限 於，電穿孔法、使用脂質體、與CaP〇4沉澱法。或者， 可將反轉錄病毒質體載體包埋於脂質體中，或與脂質結 合’然後投與宿主。生產者細胞株產生包含編碼多肽的核 苷酸序列之感染性反轉錄病毒載體粒子，接著可使用此等 15 反轉錄病毒載體粒子於試管内或活體内轉導真核生物細 胞。經轉導之真核生物細胞將表現編碼多肽的核普酸序 列。可被轉導之真核生物細胞包括，惟不限於，胚幹細 胞、胚癌細胞、以及造血幹細胞、肝細胞、纖維母細胞、 肌胚細胞、角質細胞、内皮細胞、與支氣管上皮細胞。 20 基因治療之不同處理方法為「轉核治療」，其係於活 體外處理病人細胞，以於再引入病人體内後，誘發休眠染 色體基因製造所關注之蛋白質。轉核治療假設個體具有活 化所需之正常互補基因。轉核治療涉及於活體外將能活化 新生基因之啟動子或其他外源調控序列引入病人細胞之染 -46- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 200409641 A7 B7 五、發明說明（45 ) 色體DNA中，培養及選擇具製造蛋白質活性之細胞，然 後將活化細胞再引入病人體内，意圖使其徹底建立。於是 該「基因活化」細胞可於相當長，可能與病人的壽命一樣 長的時間内，製造所關注之蛋白質（參見，例如，美國專 5利案5,641，670與5,733,761，其全部内容併入本文以資參 考）。 本發明亦涵蓋選擇性結合本發明多肽之抗體與抗體片 段。此項技技藝中已知之任何種類之抗體均可使用此項技 藝中悉知之方法產生。舉例而言，可產生專一性地與本發 10明多肽的抗原決定部位結合之抗體。本文所用之「抗體」 包含完整之免疫球蛋白分子，以及其片段，例如Fab、 F(ab’)2、與Fv，彼等能與本發明多肽之抗原決定部位結 合。典型地，形成抗原決定部位需要至少6、8、10、或 12個鄰接胺基酸(contiguous amino acids)。然而，涉及非 15 鄰接胺基酸之抗原決定部位可能需要更多胺基酸，例如， 至少15、25、或50個胺基酸。 專一性地與本發明多肽抗原決定部位結合之抗體可治 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 療性地使用，以及用於免疫化學試驗，例如西方墨點反 應、ELISAs、放射免疫試驗、免疫組織化學試驗、免疫 20 沉澱反應、或此項技藝中已知之其他免疫化學試驗中。各 種免疫試驗可用於鑑定具有所需專一性之抗體。用於競爭 性結合試驗或免疫放射試驗的許多實驗流程於此項技藝中 為悉知。該等免疫試驗典型地涉及測量免疫原與專一性地 與該免疫原結合的抗體間錯合物之形成。 -47- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 200409641 A7
五、發明說明（46) 典型地，用於免疫化學試驗時，專一性地與本發明多 肽結合之抗體所提供之檢測訊號，比與其他蛋白質提供之 檢測訊號高出至少5、10、或20倍。較佳為，專一性地 與本發明多肽結合之抗體不檢測免疫化學試驗中之其他蛋 5白質，且可於溶液中之本發明多肽進行免疫沉澱反應。 本發明多肽可用於使哺乳動物，例如小鼠、大鼠、兔 子、天竺鼠、猴子、或人類免疫以產生多株抗體。如果需 要’則可使本發明多肽與載劑蛋白質（例如胎牛血清白蛋 白、甲狀腺球蛋白、及頂孔透螺血藍蛋白）併合。視宿主 10種類而異，可使用多種佐劑以增進免疫反應。此等佐劑包 含’惟不限於，佛氏佐劑（Freund’s adjuvant)、礦物朦（例 如，氫氧化銘）、及界面活性物質（例如，脫脂酸卵磷脂、 多元醇乳化劑 '聚陰離子類、胜肽、油乳液、頂孔透螺血 藍蛋白、與二硝基苯酚）。用於人類之佐劑中，以BCG 15 (卡介苗）與細小棒狀桿菌謂/wv·)尤其有 用。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 欲製備專一性地與本發明多肽結合之單株抗體時，可 使用提供以連續細胞株培養製造抗體分子之任何技術。此 等技術包含，惟不限於，融合瘤技術、人類B細胞融合 20 瘤技術、與EBV融合瘤技術（Kohler，et al·，Nature 256:495-97，1985 ; Kozbor，et al·，J· Immunol. Methods 81:3142, 1985 ； Cote et al.5 Proc. Natl. Acad. Sci. 80:2026-30, 1983 ; Cole，et al·，Mol. Cell Biol· 62:109-20, 1984)。 此外，可使用被開發用於製造「嵌合型抗體」，使小 -48- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 200409641 A7 B7 五、發明說明（47 ) 鼠抗體基因與人類抗體基因接合而製得具有適當抗原專一 性與生物活性的分子之技術(Morrison，et al.，Proc. Natl.
Acad. Sci. 81:6851-55，1984 ; Neuberger，et al·，Nature 312:604-08，1984 ; Takeda，et al.5 Nature 314:452-54, 5 1985)。亦可將單株抗體與其他抗體「人類化」，以於治 療使用時，防止病人對該抗體產生免疫反應。該等抗體之 序列與欲直接用於治療之人類抗體足夠類似，或可能需要 更改幾個關鍵殘基。利用個別殘基位點導向誘變或利用置 入(grating of)整個互補決定區，置換與人類序列不同的殘 10基，可使嚙齒類抗體與人類抗體間之序列差異減至最小。 或者，可使用重組方法（參見，例如，GB2i88638B)製造 人類化抗體。專一性地與本發明多肽結合之抗體亦可含有 部分或完全人類化之抗原結合部位，如美國專利案 5,565,332中所揭示。 15 或者’可使用此項技藝中已知之方法將產生單鏈抗體 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 所述技術加以改良，以製造專一性地與本發明多肽結合之 單鏈抗體。具有相關專一性惟不同個體基因型組成之抗 體’可利用對無規組合免疫球蛋白庫進行鏈洗牌而產生 (Burton, Proc· Natl. Acad· Sci· 88:11120-23，1991) 〇 20 單鏈抗體之構築亦可使用DNA擴增法，例如使用融 合瘤 cDNA 作為模板之 pcr 法（Thirion, et al.5 Eur. J. Cancer Prev. 5:507-11，1996)。單鏈抗體可具單專一性或 雙專一性，且可為二價或四價。四價、雙專一性單鏈抗體 之構築見’例如，Coloma & Morrison (Nat. Biotechnol. -49- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X297公麓） 200409641 A7 B7 五、發明說明（48 ) 15:159-63，1997)之教示。二價、雙專一性單鏈抗體之構 築見’例如，Mallender & Voss (J. Biol· Chem· 269:199- 206, 1994)之教示。 編碼單鏈抗體的核苷酸序列之構築可使用人工或自動 5核苷酸合成法，如下文所述，將其選殖入使用標準重組 DNA方法之表現構築體中，並引入至表現該編碼序列之 細胞中。或者，可使用，例如，纖維狀噬菌體技術 (Verhaar，et al·，Int· J· Cancer 61:497_501，1995 ; Nicholls， et al” J· Immunol. Meth· 165:81_91，1993)直接產生。 ίο 專一性地與本發明多肽結合之單株抗體亦可如文獻中 所揭不（Orlandi，et al·，Proc· Natl· Acad· Sci· 86:38333-37, 1989，Winter，et al·，Nature 349:293-99，1991)，藉於淋巴 細胞體中誘發活體内生產或藉篩選具有高專一性結合試劑 之免疫球蛋白庫或小組而產生。 15 可構築其他種類的抗體，供本發明方法之治療用途。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 例如，可如WO 93/03151所揭示，構築嵌合型抗體。亦 可製備衍生自免疫球蛋白且為多價及多專一性之結合蛋 白’例如「二株抗體（diabodies)」（參見，例如，w〇 94/13804)。 20 具有與本發明多肽結合的能力之人類抗體亦可如下 述’以MorphoSys HuCAL®庫鑑定。可將本發明多肽塗覆 於微量滴定盤上，並與MorphoSys HuCAL^Fab噬菌體庫 一起培育。未與本發明多肽結合之連接噬菌體之Fabs自 盤中被沖洗掉，只留下與本發明多肽緊密結合之噬菌體。 -50- 本紙張尺度iSjf中標準(CNS)A4規格（21Q χ 297公爱 -- 200409641 A7 B7 五、發明說明（49 ) 該結合噬菌體可，例如，藉改變pH予以溶洗或利用以大 腸桿菌溶洗及藉感染大腸桿菌宿主予以擴增。可重複此定 位程序一或兩次，以獲得緊密結合本發明多肽之抗體族 群。然後表現其中之Fabs，純化，以ELISA試驗進行篩 5 檢。 根據本發明之抗體可利用此項技藝中悉知之方法予以 純化。例如，可使抗體通過結合本發明多肽的管柱，進行 親和純化。然後使用高鹽濃度的缓衝液，將結合抗體自管 柱中溶洗出來。 10 本發明多肽，由於具有於試管内激發自胰臟胰島細胞 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 分泌胰島素之能力，及藉由於活體内引起血糖降低，而可 用於治療糖尿病，包括1型與2型糖尿病（非胰島素依賴 型糖尿病）。該等治療亦可延緩糖尿病與糖尿併發症之發 生。本發明多肽可用於防止葡萄糖耐力受損之患者繼續進 15 展成2型糖尿病。可使用本發明多肽治療或預防的其他疾 病與狀況包括：年輕人成熟發病型糖尿病 (MODY)(Herman，et al·，Diabetes 43:40，1994);隱性自體 免疫糖尿病成人（LADA)(Zimmet，et al.，Diabetes Med. 11:299，1994);葡萄糖耐力受損（IGT)(Expert Committee 20 on Classification of Diabetes Mellitus, Diabetes Care 22 (Supp. 1):S5, 1999);空腹葡萄糖障礙(IFG)(Charles，et al·， Diabetes 40:796，1991);扭娠糖尿病（Metzger，Diabetes， 40:197, 1991);及代謝性X症候群。 本發明多肽對於例如肥胖症之病症亦有效，且可用於 -51- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） ZUU4UV04i ZUU4UV04i 5 10 15 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 20 >口療粥樣硬化性疾、古 狐含量、古血厭T"月曰血症、高膽固醇血症、低 _ _门壓、心血官疾病（包括粥樣硬化、冠狀心 血其“冠狀動脈疾病、與高㈣）、腦血管疾病與末梢 二於r狼療、多囊性印巢症候群、致癌 脂質與碳水化合物:謝m,、潰癌、睡眠失調、 -吾你〜周、晝攸調節異常、生長失調、 :1紅斑二調、免疫疾病包括自體免疫疾病(例如，全身 、^_、以及紐與慢性炎症、及敗血性休克。 & 2發明多肽亦可用於治療㈣，例如，細胞分化以製 ㈣細胞、胰島素敏感性與血糖含量調控（彼等涉 及例如騰❹細胞功能異常、分泌騰島素之腫瘤及/或由 於對胰島素之自體抗體、對騰島素受體之自體抗體、或對 胰臟心胞㈣激作狀自體抗體造成之自體免疫低血 糖）導致形成動脈粥樣硬化斑之巨嗟細胞分化 、炎性反 應、致癌性、增瘦、脂肪細胞基因表現、脂肪細胞分化、 胰臟沒細胞量減少、胰島素分泌、對胰島素之組織敏感 性、脂肉瘤細胞生長、多囊性印巢疾病、慢性不排印症、 雄! 生素過多症、黃體激素製造、類固醇生成、細胞之氧化 還原電位與氧化壓力、氧化氮合成_(NQS)製造、厂穀胺 醯基轉肽酶、過氧化氫酶、血漿三酸甘油酯、HDL·、與 LDL膽固醇含量等之生理性疾病。 本發明多肽亦可用於本發明方法中，以治療糖尿病之 續發病因（Expert Committee on Classification of Diabetes Mellitus，Diabetes Care 22 (Supp· l):S5, 1999)。該等續發 -52- 本紙張尺度通用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐）
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五、發明說明（si 病因包括糖皮質激素過量、生長激素過量、嗜鉻細胞瘤、 與藥物誘發之糖尿病。可能誘發糖尿病之藥物包含，惟不 限於，吡嘧尼劑（pydminil)、菸鹼酸、糖皮質激素、苯妥 因（phenytoin)、甲狀腺激素、冷-腎上腺素能劑、干擾 5 素及用於治療HIV感染之藥物。 此外，本發明多肽可用於治療氣喘（Bolin，et al.，
Biopolymer 37:57-66, 1995);美國專利案 5,677,419 ;顯示 多肽R3P0對鬆弛天竺鼠支氣管平滑肌具有活性）；低血 壓感應(VIP誘發之氣喘病人之低血壓、心跳過速、臉部 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 10 潮紅XMorice，et al.5 Peptides 7:279_280，1986 ; Morice，et al·，Lancet 2:1225-1227, 1983);男性生殖問題(Si〇w，etal.5 Arch. Androl· 43(1):67_71，1999);作為抗細胞凋亡/神經保 護劑（Brenneman，et al·，Ann· Ν· Υ· Acad· Sci. 865:207-12, 1998);於局部缺血狀態時之心臟保護作用（Kalfin，et al., J. 15 Pharmacol· Exp. Ther· 1268(2):952-8, 1994 ; Das，et al·， Ann· N. Y. Acad. Sci. 865:297-308，1998)，生理時鐘之操 控及其相關病症(Hamar，et al.，Cell 109:497-508，2002; Shen，et al.5 Proc. Natl· Acad. Sci· 97:11575-80, 2000);及 最後作為抗潰瘍劑(Tuncel，et al·，Ann. N. Y. Acad. Sci. 20 865:309-22, 1998)。 本發明多肽可單獨使用或與熟習此項技藝人士已知之 其他治療劑及/或化合物組合使用，以治療糖尿病及相關 病症。或者，本文所述之方法與化合物可於組合療法中部 分或完全使用。 -53- 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 200409641 A7 _____ __B7 五、發明說明（52 ) 本發明多肽亦可與用於治療糖尿病之其他已知治療叫 組合投與，該等治療劑包括PPAR作用劑、伽服藥物: 非續醯脲促分泌素、α-葡萄糖普酶抑·、姨島素· 劑、胰島素促分泌素、降低肝蠘葡萄糖生產之化合物、姨 5島素與抗肥胖症藥物。該等治療劑可於投與本發明多狀之 前、同時或之後進行投與。胰島素包含長效與短效型及姨 島素調配物。PPAR作用劑可包含任何ppAR次單元作用 劑或其組合。例如，PPAR作用劑可包含ppAR_a、 ppm_7 二或三# PPAR次單元之任何組 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 10合。PPAR作用劑包含，例如，洛西利塔宗與皮歐利塔宗 (pioglitazone)。磺醯脲藥物包含，例如，優降糖 (glybudde)、亞曼瑞（glimepiride)、氣磺丙脲與泌樂得 (glipkide)。可與本發明多肽一起投與用於治療糖尿病之 〇：-葡萄糖苷酶抑制劑包含阿卡波糖(acarb〇se)、米格利妥 15 (miglitol)與培欣(voglib〇se)。可用於治療糖尿病之胰島素 敏化劑包含噻唑啶二酮類與非噻唑啶二酮類。可與本發明 多肽一起投與用於治療糖尿病之降低肝臟葡萄糖生產之化 σ物包a 一曱雙胍，例如Glucophage與Glucophage XR。可與本發明多肽一起投與用於治療糖尿病之胰島素 20促分泌素包含磺醢脲與非磺醢脲藥物：GLP-1、GIP、腸 促胰液肽、那替利耐（nateglinide)、美格替耐 (meglitmide)、諾和隆錠(repagHnide)、優降糖、亞曼瑞、 氯磺丙脲與泌樂得。GLP-1包含半衰期比原態GLP-1更 長的GLP-1衍生物，例如，脂肪酸衍生之GLP-i與激素 -54- 尺度適用中i國家標^^ST2_l〇 X 297公釐)------— 200409641 A7 ____B7 五、發明說明（53 ) exendin。於本發明之一具體實例中，本發明多肽係與胰 島素促分泌素組合使用，以增加胰臟点細胞對胰島素促分 泌素之敏感性。 本發明多肽亦可組合抗肥胖症藥物而於本發明方法中 5 使用。抗肥胖症藥物包含石-3作用劑、CB-1拮抗劑、食 您抑制劑例如諾美婷(sibutramine，Meridia)、與脂肪酶抑 制劑例如使你酷（orlistat，Xenical)。 本發明多肽亦可組合常見用於治療糖尿病病人脂質失 調之藥物而於本發明方法中使用。該等藥物包含，惟不限 10於，HMG-CoA還原酶抑制劑、菸鹼酸、膽汁酸結合劑、 及纖維酸衍生物。此外，本發明多肽亦可與抗高血壓藥物 例如；S-封阻劑及ACE抑制劑組合使用。 此等共同療法可以兩種或兩種以上藥物之任何組合投 與（例如，本發明多肽組合胰島素敏化劑與抗肥胖症藥 15物）。此等共同療法可呈如上述之醫藥組成物形式投與。 茲於下文界定本文所用之各名詞。 於介紹本發明或其較佳具體實例之元件時，均意指一 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 或一種以上之元件。「包括」、「包含」、與「具有」 等词均擬包括一切而意指可能存在所列元件以外之附加元 20 件。 本文所用「實驗對象」一詞包含哺乳類（例如，人類 與動物）。 治療」一詞包含於直接或間接地改善包括人類在内 的實驗對象之狀況、延緩該實驗對象狀況或疾病進展之目 -55-
200409641 A7 B7 54 五、發明說明 的下，提供該實驗對象醫療援助之任何程序、行為、鹿 用、療法等。 「組合療法」或「共同療法」意指投與二或多種治療 劑以治療糖尿病狀況及/或病症。該等投與涵蓋二或多種 5治療劑以實際上同時之方式共同投與，例如呈具有固定比 率的活性成分之單一膠囊，或各抑制劑分立之分別多個膠 囊。此外’此等投與包括以連續方式使用各種治療劑。 「治療有效」意指於避免或使給與治療處理之相關副 作用減至最小下，達成改善糖展病或病症嚴重性目找所於 10 與各製劑之量。 15 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 「醫藥上可接受」意指主題項目適用於醫藥產品。 根據一般悉知用於測定哺乳動物上述確認狀況治療效 力之試驗方法，並將其結果與用於治療彼等狀況的已知醫 藥劑之結果進行比較，則易於決定本發明多肽治療各所 指徵之有效劑量。治療各該等病症所投與活性成分 如，多肽）之量，根據例如所用特定化合物與劑量軍7仅例 投與方式、治療期長短、所治療病人年齡與性別、及立、 療病症性質與程度等狀況，可有極大差異。 所冶 20 所投與活性成分之總量通常每天每；斤體 〇顧毫克至約200毫克之間，較佳為介於請；約 細毫克之間。單位劑量可含約㈣5毫克至約⑼^約 活性成分，每天可投與—或多次。供注射（包括靜脈=克 皮下、及非經腸注射)及使用灌注技術投 、 置可為約_至約200毫^公斤。每日之直腸劑量= 本紙張尺度適财 _&i|l(CNS)A4^ (21Gx297^y 200409641 A7 B7 五、發明說明（55 ) 可為0.01至200 *克/公斤總體重。經皮投與之濃度可為 維持0.01至約200毫克/公斤曰劑量所需之濃度。 當然，各病患特定之起始與持續劑量療法將隨參與診 斷者裁定之病症性質與嚴重性、所用特定多肽之活性、病 5人年齡、病人飲食、投與時間、投與路徑、藥物排泄率、 藥物組合等而不同。本發明多肽治療所需模式與用劑次數 可由熟習此項技藝人士使用習知治療試驗予以確定。 本發明多肽藉由呈適當調配之醫藥組成物投與有其需 要之病人而可達成所需之藥理效果。供本發明目的之病人 10為需要冶療特定狀況或疾病之哺乳動物，包括人類。因 此，本發明涵蓋一種醫藥組成物，其係由醫藥上可接受之 載劑與醫藥上有效量之多肽所組成。醫藥上可接受之栽劑 為於與活性成分有效活性一致之濃度下，對病人較為無毒 無害，俾使起因於載劑之任何副作用不損及活性成分的有 15利效應之任何載劑。多肽之治療有效量為對所治療之特定 病症產生效果或發揮影響之量。本文所述之多肽可以任何 有效之習知劑量單位形式（包括，例如，立即及定時釋放 經 濟 部 智 慧 財 產 局 員 工 消 費 合 作 社 印 製 之製劑、經口、非經腸、局部等），與醫藥上可接受之載 劑一起投與。 10 供經口投與時，多肽可調配成固體或液體製劑，例 如’膠囊、丸劑、錠劑、片劑、酏劑、熔體、粉劑、溶 液、懸浮液、或乳液，及可根據此項技藝中製造醫藥組成 物之已知方法予以製備。固體單位劑量型可為含有例如界 面活性劑、潤滑劑、與惰性填充劑（例如乳糖、蔗糖、磷 -57- 本紙張尺錢財國規格 (210x297 公釐） 0409641
五、發明說明（56 ) 酸鈣、與玉米澱粉)之—般硬-或軟_殼明膠型膠囊。 5 於另-具體實财，本發明多肽可與習知鍵劑基底 (例如乳糖、諸、與玉米澱粉）組合料劑（例如阿拉伯 膠、玉綠粉、或明膠）；於投與後意欲協助破碎及溶解 錠劑之朋解劑(例如馬鈴薯澱粉、海錢、玉米;殿粉、及 關華豆你意欲增進鍵劑粒化流速及防止鍵劑物質黏著 於製錠模具與衝壓機表面之潤滑劑（例如，滑石粉、硬脂 10 酸、或硬脂_、_鋅）；染料；著色劑；及意欲增加 錠劑之美學品質使其更為病人接受之調味劑一起製鍵。用 於口服液體劑量型之適當賦形劑包括稀釋關如水及醇 類，例如，乙醇、节醇、與聚乙烯醇類、醫藥上可接受之 界面活性劑（可添加或不添加）、懸浮劑、或乳化劑。亦可 存在多種其他物質作為塗層或者修飾劑量單位之物理形 式。例如錠劑、丸劑或膠囊可以蟲膠、糖或二者予以塗 15 覆。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 可分散的粉劑與粒劑適用於製備水性懸浮液，其提供 活性成分與分散劑或潤濕劑、懸浮劑、及一或多種防腐劑 之換合物。適當之分散劑或潤濕劑與懸浮劑已如上述例 不。亦可存在其他賦形劑，例如，上文敘述之增甜劑、調 20 味劑與著色劑。 本發明醫藥組成物亦可呈水包油乳液之形式。其油相 可為植物油例如液態石蠟或植物油之混合物。適當之乳化 劑可為（1)天然存在之膠例如阿拉伯膠與黃耆膠；（2)天然 存在之磷脂例如黃豆及卵磷脂；（3)衍生自脂肪酸與己糖 -58- 本紙張尺度適用中國國規格(21〇ϋ爱) 五、發明說明（57) :肝之醋或部分醋，例如，山梨聚糖單油酸醋；及⑷該 與環氧乙燒之縮合產物，例如，聚氧乙稀山梨聚糖 早油酸酯。乳液中亦可含增甜劑與調味劑。 5 油性懸浮液可藉懸浮活性成分於植物油（例如花生 ^撖棍油、芝麻油、或椰子油）或無機油(例如液態石劂 中予以調配。油性懸浮液中可含增祠劑，例如，蜂堪、硬 2蠘、或錄蠘醇。懸浮液中亦可含1 腐劑，例 如，對羥苯甲酸·乙酯正丙舻· ‘ ^ —或多種著色劑，·一或 10 ΓΓ 或多種增甜劑例如蔑糖或糖精。 糖漿無劑可使用增甜劑例如甘油、丙二醇、山裂糖 醇：糖予以調配。此等調配物亦可含鎮痛劑與防腐 劑、調味劑及著色劑。 、才树明多肽亦可於生理上可接受之稀釋劑中 ，與醫藥 15 :起成為多肽之可注射劑量型供非經腸投與(亦即， 無菌二Γ脈内、肌内、或腹膜内投與)，該等載劑可為 糖溶液.2體混合物例如水、食鹽水、葡萄糖水及相關 丙二：Γ、異丙醇、或十六基醇;二醇類例如 A名乙一醇；甘油縮酮類例如22_二 w 20 、_例如聚(乙二醇)4°°「油^脂肪ΐ了 二/日，甘油§旨；或乙醯基化之脂肪酸甘油3旨添加* 、'醫藥上可接受之界面活性劑例如肥、二3 鳴!如果膠、增嶋―)、甲基纖 :基織維素、物基織維素、或心其他::： •59- 本紙張尺度適财國^i^(CNS)A4規1(21〇 X 297公釐） 200409641 A7 B7 五、發明說明（58) 可用於本發明非經腸調配物中的油類之實例為石油、 動物、植物油類，或合成來源者，例如’花生油、黃豆 油、芝麻油、棉籽油、玉米油、橄欖油、礦脂、及無機 油。適當之脂肪酸包含油酸、硬脂酸、及異硬脂酸。適當 5 之脂肪酸酯為，例如，油酸乙酯與肉豆蔻酸異丙酯。適當 之皂類包含脂肪鹼金屬、銨、與三乙醇胺鹽及適當清潔劑 包含陽離子性清潔劑，例如，二甲基二烷基銨鹵化物、烧 基吡錠齒化物、及烷基胺乙酸鹽；陰離子性清潔劑，例 如，烧基、芳基、與浠烴續酸醋，烧基、烯烴、謎、與單 10 甘油酯硫酸鹽，及磺基琥珀酸酯；非離子性清潔劑，例 如，脂肪胺氧化物、脂肪酸烷醇醯胺、與聚氧乙烯聚丙烯 共聚物；及兩性清潔劑，例如，烷基-/3-胺基丙酸酯、與 2-烷基咪唑啉四級銨鹽，以及其混合物。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本發明之非經腸組成物可於溶液中典型地含有約0.5 15 至約25重量％活性成分。亦可有利地使用防腐劑與緩衝 劑。為了減少或消除注射部位之刺激，該等組成物可含親 水-親脂平衡值(HLB)為約12至約17之非離子性界面活性 劑。於該等調配物中，界面活性劑之量可介於約5至約 15重量％之間。該界面活性劑可為具有上述HLB值之單 20 一成分或可為具有所需HLB值的二或多種成分之混合 物。 非經腸調配物中所用的界面活性劑實例為聚乙烯山梨 聚糖脂肪酸酯族，例如，山槊聚糖單油酸酯及環氧乙烷與 由環氧丙烧與丙二醇縮合形成的親脂基底之高分子量加合 -60- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公爱） 200409641 A7 B7 五、發明說明（59) 物。 醫藥組成物可呈無菌之可注射水性懸浮液形式。該等 懸浮液可根據已知方法使用適當分散劑或潤濕劑及懸浮劑 (例如羧曱基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維 5 素、海藻酸鈉、聚乙烯吡咯啶酮、黃耆膠與阿拉伯膠）予 以調配；分散劑或潤濕劑可為天然存在之磷脂（例如卵鱗 脂）、環氧烷與脂肪酸之縮合產物（例如，聚氧乙烯硬脂酸 酯）、環氧乙烧與長鏈脂族醇之縮合產物（例如，十七乙烯 氧鯨蠟醇）、環氧乙烷與衍生自脂肪酸及己糖醇的部分酯 10 之縮合產物（例如聚氧乙烯山梨糖醇單油酸酯）、或環氧乙 烷與衍生自脂肪酸與己糖醇酐的部分酯之縮合產物（例 如，聚氧乙烯山梨聚糖單油酸酯）。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 無菌注射製劑亦可為於無毒非經腸可接受稀釋劑或溶 劑中之無菌注射溶液或懸浮液。可使用之稀釋劑或溶劑 15 為，例如，水、林格氏溶液、及等張氣化鈉溶液。此外， 可方便地使用無菌固定油作為溶劑或懸浮介質。欲達此目 的，可使用任何廠牌之固定油，包括合成之單或二甘油 酯。此外，可使用脂肪酸(例如油酸）製備注射劑。 本發明組成物亦可呈栓劑形式供藥物之經直腸投與。 20 彼等組成物可利用混合藥物（例如，多肽）與在一般溫度時 為固體，但是在直腸溫度時為液體，因此於直腸中熔解而 釋出藥物之適當無刺激性賦形劑予以製備。該等物質為， 例如，可可脂及聚乙二醇。 於本發明方法中使用之另一調配物使用經皮之輸送裝 -61- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 200409641 A7
f「貼片」）。此等經皮貼片可用於提供控制量之本發明 夕狀之持雜或_触以。輪送賴_經皮貼片之 ==用=藝所悉知(參見，例如，美國專利案 〇23,252’併人本文以f參考），貼片可建 性、脈動性、或依需要輸送醫藥劑。 10 亦可能需求或需要經由機械式輸送裝置將醫藥梭成物 引入病人體内。輸送醫_之機械式輸送裝置之建構盘使 用為此項技藝所悉知。例如，直接投㈣物至腦部之Μ 技術通常涉及放置藥物輸送導管於病人之腦室系統内，以 繞過腦血管障壁。-種用於輸送_至體内特定結構部位 之該等植入式輸送系統敘述於美國專利案5 011 472，其 内容併入本文以資參考。 本發明組成物亦可依需求或需要而含其他習知之醫藥 上可接受之複合成分，通常稱為難或稀關。本發明之 任何組成物可藉添加抗氧化_丨如抗駐酸）或其他適當 腐劑予以保藏。可使用將該等組成物製備成適當劑量型 之習知程序。 經 濟 部 智 慧 財 產 肩 員 工 消 費 合 作 社 印 製 適用於調配組成物供其意指投與途徑之常用醫藥成分 包含·酸化劑’例如，惟不限於，乙酸、檸檬酸、富馬 20酸、鹽酸、石肖酸；及驗化劑，例如，惟不限於，氨溶液、 碳酸錢、二乙醇胺、單乙醇胺、氫氧化鉀、糊酸鈉、碳酸 鈉、氫氧化鈉、三乙醇胺、三乙醇胺水楊酸鹽 (trolamine) 〇 其他醫藥成分包含，例如，惟不限於，吸附劑（例 -62- 200409641 B7 Α7
五、發明說明（61) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 如，粉末纖維素及活性焦碳）；氣溶膠推進劑（例如，二氧 化碳、CC12F2、F2C1C-CC1F2及CC1F3);空氣置換劑（例 如，氮及氬）；抗真菌防腐劑（例如，苯甲酸、對羥苯甲酸 丁酉旨、對羥苯甲酸乙酯、對羥苯甲酸甲酯、對羥苯曱酸丙 5 酯、苯甲酸鈉）；抗微生物防腐劑（例如，氣化苄烷銨、氯 化苄乙氧銨、苄醇、氣化鯨蠟基吡錠、氯丁醇、酚、苯基 乙基醇、硝酸苯基汞及硫柳汞）；抗氧化劑（例如，抗壞血 酸、棕櫚酸抗壞jk酸酯、丁基化之羥基甲苯醚、丁基化之 羥基甲苯、次亞磷酸、單硫甘油、五倍子酸丙酯、抗壞血 10 酸鈉、亞硫酸氫鈉、甲醛硫羥酸鈉、偏亞硫酸鈉）；黏合 物質（例如，嵌段聚合物、天然與合成橡膠、聚丙烯酸 酉旨、聚胺基甲酸g旨、石夕酮及苯乙烯-丁二烯共聚物）；缓衝 劑（例如，偏磷酸鉀、磷酸二氫鉀、乙酸鈉、無水檸檬酸 鈉及檸檬酸鈉二水合物）；載劑（例如，阿拉伯膠糖漿、芳 15香族糖漿、芳香族酏劑、櫻桃糖漿、可可糖漿、柑橘糠 漿、糖漿、玉米油、礦物油、花生油、芝麻油、抑菌性乳 化納注射劑及抑菌性注射用水）；嵌合劑（例如，乙二胺四 乙酸二納及乙二胺四乙酸）；著色劑（例如，FD&C紅色3 號、FD&C紅色20號、FD&C黃色6號、FD&C藍色2 20色、D&C綠色5號、D&C橘色5號、D&C紅色8號、 焦糖與氧化鐵紅）；澄清劑（例如，膨潤土）；乳化劑（例 如，惟不限於，阿拉伯膠、鯨蠟基聚乙二醇、鯨蠟醇、單 硬脂酸甘油酯、卵磷脂、山梨聚糖單油酸酯、聚硬脂酸乙 二酯50);膠囊化劑（例如，明膠與纖維素乙酸酞酸酯）； -63- _— ___________________ ...__——— 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（21〇χ297公釐） 200409641 A7 B7 五、發明說明（62 ) 調味劑（例如，大茴香油、肉桂油、可可亞、薄荷醇、甜 橘油、薄荷油與香草精）；潤濕劑（例如，甘油、丙二醇與 山梨糖醇）；研磨劑（例如，礙物油與甘油）、油類（例如， 花生油、礦物油、撖欖油、芝麻油與植物油）；軟膏基底 5 (例如，羊毛脂、親水性軟膏、聚乙二醇軟膏、礦脂、親 水性礦脂、白軟膏、黃軟膏、與玫瑰水軟膏）；滲透增強 劑（經皮輸送）(例如，單羥或多羥醇類、飽和或不飽和脂 肪醇類、飽和或不飽和脂肪酯類、飽和或不飽和脂肪二羧 酸類、精油、磷脂醯基衍生物、腦磷脂、萜類、醯胺類、 10 醚類、酮類及脲類）；增塑劑（例如，酞酸二乙酯與甘 油）；溶劑（例如，醇、玉米油、棉軒油、甘油、異丙醇、 礦物油、油酸、花生油、純水、注射用水、注射用無菌水 及灌注用無菌水）；硬化劑（例如，鯨蠟醇、鯨蠟酯蠟、微 結晶蠛、石蠛、硬脂醇、白蠛與黃蠛）；栓劑基底（例如， 15 可可脂與聚乙二醇類（混合物)）；界面活性劑（例如，氣化 苄烧銨、壬氧醇(nonoxynol)lO、oxtoxynol 9、聚山梨糖醇 酯80、硫酸十二酯鈉與山梨聚糖單棕櫚酸酯）；懸浮劑（例 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 如，洋菜、膨潤土、增稠劑、魏曱基纖維素納、經乙基纖 維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、高嶺土、甲基 20 纖維素、黃耆膠與矽酸鋁鎂(veegum));增甜劑（例如，阿 斯巴甜、葡萄糖、甘油、甘露糖醇、丙二醇、糖精鈉、山 梨糖醇與蔗糖）；錠劑抗黏著劑（例如，硬脂酸鎂與滑石 粉）；錠劑黏合劑（例如，阿拉伯膠、海藻酸、羧甲基纖維 素鈉、壓縮性糖、乙基纖維素、明膠、液態葡萄糖、曱基 -64- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） A7五、發明說明（63 ) 10 15 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 20 纖維素、鱗咬馳倾粉 如，磷酸氫二鈣、裒鬼丄 敫劑與膠囊稀釋劑（例 ^ 領土、糖、I) 素、粉末纖維素、沉fA 、甘露糖醇、微晶纖維 。收·酸鈣、 糖醇與澱粉）；錠劑塗覆劑（例 灭暖納、磷酸鈉、山梨 維素、羥丙基纖維素、經两 液態葡萄糖、羥乙基纖 乙基纖維素、纖維乙酸酞酸纖維素、甲基纖維素、 形劑（例如，磷酸氣二舞）· ^▲，膠）；錠劑直接壓縮賦 羧甲基纖維素鈣、裰a M & i刎朋解劑（例如，海藻酸、 做日日纖維素、安 potassium)、海藻酸鈉 來特樹脂（polacrillin ^ 我粉乙醇酴知也 劑（例如，膠態矽石、玉 八及納與澱粉）；錠劑滑移 (例如，硬脂酸鈣、涵昨雜/々與滑石粉）；錠劑潤滑劑 辞）；錠劑/膠囊不遷明劑（例如，吻油、硬脂酸與硬脂酸 (例如巴西棕櫊蠟與白蠟）·择一氧化鈦）；錠劑拋光劑 與石蠟）；張力劑（例如，g增稠劑（例如，蜂蠟、鯨蠟醇 (例如，海藻酸、膨濶土 與氣化鈉），黏度增加劑 基纖維素、料_魅增稠劑1甲基纖維素納、甲 如，十七乙烯氧基_醇黃耆膠P及潤濕劑(例 酸酯、聚氧乙烯山犁糖醢g月曰、聚乙烯山梨糖醇單油 酯)。 、^皁〉由酸顒、及聚氧乙烯硬脂酸 本文所述之多肽可呈一— 其他醫_組合(_合不醫_投與，或與—或多種 與。例如，太發明“ 不被接受之不利效應)投 、 可與已知之抗肥胖症劑，或與已知 之抗糖尿絲抗其他指徵之_等，以及與詩合物或組 合物組合投與。
4 訂 200409641 A7 B7 五 '發明說明（64 ) 本文所述之多肽亦可於研究與診斷學上呈游離鹼形式 或呈組成物，或呈分析參考標準等予以利用。因此，本發 明包含一種組成物，其係由惰性載劑及有效量與本文所述 之多肽，或其鹽或酯所組成。惰性載劑為不干預所攜帶的 5多肽並為其提供支撐、輸送方式、容積、微量物質等之任 何材質。有效量之多肽乃對所進行之特定程序產生效果或 造成影響之量。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 一般已知，於水性及非水性環境中，多肽會進行水 解、脫醯胺、氧化、消旋化及異構化等反應。利用毛細管 10 電泳法，易於檢測例如水解、脫醢胺或氧化等降解反應。 儘管酵素性降解，惟具有延長的血漿半衰期或生物駐留時 間之多肽至少於水性溶液中很穩定。多肽於體溫下，必需 於一天以上期間，展現小於10%之降解。又更佳者為， 多肽於體溫下，於一天以上期間，展現小於5%之降解。 15 由於慢性糖尿病病人為終身治療，因此彼等治療劑最好方 便投與，若係經由非經腸途徑，則更以減少投與次數為 佳。於體溫下，數週期間之穩定性（亦即，降解率小於幾 個百分比）容許用藥頻率減少。於冷藏溫度下，數年的穩 定性將容許製造商提供液體調配物，避免再組成之不便。 20 此外，於有機溶劑中之穩定性可提供調配成為新穎劑量形 式（例如植入物）之多肽。 適用於供經皮下、靜脈内、肌内等之調配物及適當之 醫藥載劑可利用此項技藝中悉知之任何方法予以製備，其 調配與投與技術亦見述於先前技藝中（參見，例如， -66- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 200409641 A7 B7 五、發明說明（65 )
Remington’s Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Co·， Easton，Pa” 20th edition，2000) o 下文之實例係用於說明前文敘述之本發明，惟決不對 本發明之範圍構成侷限。 5 膠囊調配物 膠囊係以下述成分製備： .本發明多肽 10毫克 澱粉 109毫克 硬脂酸鎂 1毫克 摻合諸成分，以適當網篩過篩，然後裝填於硬明膠膠 囊中。 錠劑調配物 10 錠劑係以下述成分製備： 經 濟 部 智 慧 財 產 局 員 工 消 費 合 作 社 印 製 本發明多肽 纖維素，微晶 膠態二氧化矽 硬脂酸 200毫克 10毫克 5.0毫克 混合諸成分並壓製成錠。可施敷適當之水性與非水性 塗層以增加美味、增進精緻性與穩定性或延遲吸收。 無菌IV溶液 15 使用無菌、注射用水製造本發明多肽之毫克/毫升溶 液’並依需要調整pH。以無菌之5%葡萄糖稀釋該溶液， 本紙張尺度綱巾關家縣 **67- 200409641 A7 B7 五、發明說明（66) 使其呈IV注入物投與。 肌内懸浮液 製備下述肌内懸浮液： 50微克/毫升 5毫克/毫升 4毫克/毫升 9毫克/毫升 9毫克/毫升 本發明多肽 羧甲基纖維素鈉 TWEEN 80 氯化鈉 苄醇 此懸浮液係供肌内投與。 5 硬殼膠囊 將標準的兩片硬明膠膠囊各以粉末活性成分、150毫 克乳糖、50毫克纖維素與6毫克硬脂酸鎂裝填，製備大 量單位膠囊。 軟明膠膠囊 10 製備活性成分於易消化油（例如黃豆油、棉籽油或橄 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 欖油）中之混合物，利用正排量泵浦將其注入熔融明膠 中，形成含有活性成分之軟明膠膠囊。洗滌該等膠囊及乾 燥。活性成分可溶於聚乙二醇、甘油與山梨糖醇之混合物 中，以製備水可溶混之藥物混合物。 15 立即釋放之錠劑/膠囊 彼等係以習知與新穎程序製造之固體口服劑量型，這 些單位不需使用水即可口服而立即溶解並輸送藥物。活性 成分係混於含有例如糖、明膠、果膠與增甜劑之液體中， -68- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 200409641 A7 _ B7 五、發明說明（67 ) 利用冷凍乾燥及固態抽取技術將該等液體固化成為固體錠 劑或膠囊。該醫藥化合物可以黏彈性與熱彈性糖及聚合物 或發泡成分壓製，以製造意欲供不需要水即立即释放之多 孔性基質。 5 對於熟習此項技藝人士而言，可以顯見的是，可對本 發明進行更改或修飾而仍不偏離本文揭示之本發明之精神 或範疇。 [實施方式】 茲敘述下列實例，使本發明更易被瞭解。惟此等實例 10僅供說明之用而決不對本發明範圍構成侷限。本文提及的 所有文獻全部内容均併入本文以資參考。 實例敗狀合成方法 本發明之多肽係經設計以增進穩定性及延長其半衰 期。詳言之，彼等胜肽之未突變形式（參見，例如，wo 15 01/23420 ’併入本文以資參考）於水性與非水性環境中展 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 現N端水解、脫醯胺、以及二聚與三聚等作用。欲增進 穩定性及減少水解、脫醯胺、及二聚/三聚等作用，乃使 天冬醯胺殘基(位置9與28)突變成為麩胺醯胺殘基。此 外，亦使位置17之纈胺酸、位置19之丙胺酸、位置29 20 之離胺酸、位置30之精胺酸、與位置31之酪胺酸產生突 變。再者，如下文所述，亦將本發明多肽PEG基化，以 延長半衰期。 本發明之一些多肽乃依照下述一般程序進行合成： 利用 FMOC/第三丁基策略（pennington & Dunn，Peptide -69- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 200409641 A7 B7 五、發明說明（68)
Synthesis Protocols, Volume 35, 1994)，於使用 Rapp-Polymere PEG-聚苯乙烯樹脂（1^卩{)-?〇1)〇1^代，丁111^1^611， Germany)之連續流動條件下，進行胜肽合成；完成合成 後，將胜肽自樹脂裂離，使用TFA/DTT/H20/三異丙基矽 5 烷（88/5/5/2)脫除保護基；以冷乙醚將胜肽自裂離混合液 中沉澱出來；此沉澱以冷乙醚洗滌三次，溶於5%乙酸 後，將其凍結乾燥·，利用Waters ALLIANCE®系統(Waters Corporation, Milford，ΜΑ)，於 YMC_Pack ODS_AQ 管柱 (YMC，Inc·，Wilington，NC)上使用水/含 3%TFA 之 0%至 10 100%乙腈梯度流洗，進行逆相層析；及利用VOYAGER DETM MALDI 質量光譜儀（型號 5-2386-00，PerSeptive BioSystems，Framingham，ΜΑ)之 MALDI 質量光譜，檢測 該等胜肽；以1/1之比率添加胜肽試樣至Matrix緩衝液 (50/50 dH2〇/含3%TFA之乙腈）中；純度未符合>95%標準 15 之胜肽以 Waters Delta Prep 4000 HPLC 系統（Waters Corporation，ΜΑ)，利用逆相層析法予以純化。 實例2.胜肽PEG基化 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 活體内胜肽可經由連接聚乙二醇(PEG)基團，從而減 少被腎臟清除及降低蛋白酶降解而增加其半衰期。 20 VPAC2受體作用劑由於在活體内的半衰期極短，因此其 用途大為受限；但是，將PEG基團連接於胜肽(PEG基化) 足以延長其半衰期至容許進行一天一次至一週一次之治 療。 PEG基化可利用熟習此項技藝人士已知之任何方法 -70- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 200409641 A7 B7 五、發明說明（69 ) 進行。然而，於此實例中，PEG基化之進行係於胜肽中 引入單一半胱胺酸突變，隨後經由胜肽的硫氫基與甲氧 基-PEG_ 馬來醯亞胺試劑（Nektar (Inhale/shearwater)，San
Carlos，CA)的馬來醯亞胺基團間之穩定硫醚鍵結，使該半 5胱胺酸PEG基化。較好將該單一半胱胺酸引入胜肽之c 端，俾使PEG基化使活性減小之可能性減至最小。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 詳言之’添加2倍莫耳過量之mPEG-mal (MW 22kD 與43kD)試劑至1毫克胜肽(例如，於胜肽c端具有半胱 胺酸突變之SEQ ID NO·· 1)，使其溶解於pH 6之反應缓衝 10 液(〇·1Μ Na 磷酸鹽/〇·ιμ NaCl/O.lM EDTA)中。於室溫 0.5小時後，添加2倍莫耳過量之DTT至mPEG-mal中， 以終止反應。施加該胜肽_PEG-mal反應混合物陽離子交 換管柱，去除殘留的PEG試劑，隨後利用凝膠過濾管柱 去除殘留的游離胜肽。利用SDS-PAGE與MALDI-TOF 15質譜分析法測定純度、質量與PEG基化位置數。於連接 22 kD PEG於本發明胜肽時，保留具效力之VPac2受體 活性。再者，VPAC2相對於VPAC1與PAC1之受體選擇 性活性仍保留。可能以較小PEG(例如，線型22 kD PEG) 進行PEG基化，較不可能減少胜肽活性；而以較大 20 PEG(例如，分支鏈43 kD PEG)進行PEG基化，較可能減 少活性。然而，較大之PEG將增加血漿半衰期，使一週 注射一次成為可能（Harris, et al·，Clin· Pharmacokinet. 40:539-551, 2001) 〇 實例L胜肽選殖 -71- jS尺度適財關家標準(CNS)A4規格（21() x 297公麓） —— 200409641 A7 B7 五、發明說明（ 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 為了重組表現彼等胜肽，將編碼胜肽之DNA序列自 C端選殖至具有分開單體型胜肽與麩胱甘肽S·轉移酶 (GST)之單一因子Xa識別位點之GST。編碼融合於欲製 造胜肽的DNA序列之因子Xa識別位置之基因，其合成 5 係將緊鄰欲選殖基因DNA序列5’端含有Bam HI或Xho I 限制酶切割位置的兩個重疊單股DNA片段(70-90單元）雜 交’隨後經由大片段DNA聚合酶I (Life Technologies, Inc·，Gaithersburg，MD)進行反股之DNA合成。根據各胜 肽所設計胺基酸序列之反轉譯而選擇各基因之DNA序 10 列。在某些情形下，係利用已由上述方法製得的基因之 PCR變異方法產生編碼胜肽之基因（Picard，et al.，Nucleic Acids Res 22:2587-91，1994 ; Sambrook，et al·，Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press，New York，1989)。然後將該雙股產物以 15 Bam HI與Xho I分解並連接於亦以Bam HI及Xho I切 割過之 pGEX-6P-l (Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway，NJ)。例如，欲表現與GST融合之SEQ ID NO: 1時，將經設計之DNA序列（第2圖）選殖入pGEX-6P-l 中〇 20 實例4.胜肽重組表現與純化 於37°C，使以含GST-胜肽融合體的質體轉形之 BL21 細胞（Stratagene，La Jolla, CA)生長至 〇D60〇 達 0.6 至 1.0 ’ 並於 37°C 以 1 niM IPTG(Life Technologies，Carlsbad， CA)培育2小時。使細胞(2升)於7,700 g離心15分鐘， -72- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 200409641 A7 B7 五、發明說明（71 ) 稱重，於-20°C貯存至少3小時。將冷凍之細胞沉澱物每 克細胞再懸浮於100毫升含有250微升蛋白酶抑制劑混合 液(Sigma Chemical, St. Louis，MO)之冰冷 pbs 中，進行 1 分鐘之超音波處理共3次，每次間隔15秒。於i〇,〇〇〇 g 5 再使細胞離心20分鐘。於4°C，使上澄液與2亳升50% 楚胱甘肽璦脂糖4B樹脂（Pharmacia)於振盪器上混合隔 夜。於1，500 g離心上澄液/樹脂15分鐘，將其裝填於空 的 Poly_Prep 層析管柱(Bio-Rad, Hercules，CA)中，以 30 毫升PBS、隨後以10毫升因子Xa緩衝液（1 mIvi CaCl2、 10 100 niM Naa、及 50 mM Tds-HCl，pH 8.0)洗滌。以添加 60單位因子xa(pharmacia)之1毫升因子Xa緩衝液於4。〇 培月隔夜’使胜狀自管柱裂離’並使用2毫升回路(l〇〇p) 及2毫升/分鐘流速依下述程序於C18 HPLC (Beckman 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製
System Gold)上進行分離：1〇分鐘緩衝液a (0.1% 15 TFA/H2〇)、30 分鐘梯度至緩衝液 B (0.1% TFA/ACN)、10 分鐘緩衝液A、10分鐘梯度、及1〇分鐘緩衝液a。收集 波.區分(各1毫升），並利用1〇-2〇%麥黃酮-Sds凝膠電 泳法進行篩選。收集含第1圖胜肽之區分，予以乾燥。典 型產率為母升大腸桿菌培養液獲得數百毫克游離胜肽。重 20組胜狀經證實具有與其合成版相同的活性。 實例^自分散的大鼠胰島細胞分泌胰島素 如下文所述，測量由許多本發明胜肽傳介的分散大 鼠姨島之胰島素分泌。使用膠原酶分解自SD大鼠（200-250克）單離出之蘭氏小島。此分散之胰島細胞以胰蛋白 -73- 本紙張尺度適用中國國豕標準(CNS)A4規袼（2i〇x297公釐） 200409641 A7 B7 五、發明說明（72 ) 酶處理，接種於96 V形底培養盤，使其成為丸狀。接著 於添加或未添加本發明胜肽的培養基中培養隔夜。抽吸出 培養基，於37°C，以含3 mM葡萄糖的Krebs-Ringer-HEPES緩衝液預培育細胞30分鐘。去除預培育緩衝液， 5 添加或未添加胜肽下，於37°C，以含適當葡萄糖濃度(例 如，8 mM)的Krebs-Ringer-HEPES緩衝液培育細胞適當 時間。一些研究中，亦包含適當濃度之GLP_卜取出部分 上澄液，以SPA測定其胰島素含量。其結果以r相對於 對照組之倍數」（FOC)表示。於300 nM濃度下，胺基酸 10序列為SEQ ID NO: l+cys+PEG(43 kD)的胜肽，使分散胰 島細胞之胰島素分泌增加為大約1·7倍（第4圖）。 此試驗中，自分散的大鼠胰島細胞胰島素分泌之增 加係界定為增加至少1·4倍。本發明多肽之VPAC2受體 作用劑成分產生至少1.4倍至約1.7倍之自分散的胰島細 15 胞胰島素分泌之增加。 實例6. PEG基化胜肽對大鼠腹膜内葡萄糖耐力之影笔 皮下投與大鼠本發明PEG基化胜肽後，檢測其活體 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 内活性。對禁食過夜的大鼠皮下注射對照組或pEG基化 胜肽（1-100微克/公斤）。三小時後，測量基礎血糖，自腹 20膜内投與大鼠2克/公斤葡萄糖。經15、3〇、及6〇分鐘 後，再測量血糖。相對於載劑進行IPGTT(Ip葡萄糖耐力 試驗)後，本發明代表性PEG基化胜肽明顯地降低血糖含 量，其葡萄糖AUC減少17%至28%(第5圖）。此結果證 明PEG基化胜肽延長活體内之葡萄糖降低活性。除此之 -74- 200409641 A7 B7 五、發明說明（73 ) 外，也顯示延長之活體内胜肽半衰期。PACAP-27具有很 短的活體内半衰期（<10分鐘）。於投與胜肽3小時後，本 發明PEG基化胜肽仍具降低血糖的能力，此為胜肽於此 時間點存在循環中之明顯指徵，因此，相對於PACAP-5 27，本發明胜肽之半衰期已延長。
實例7.環狀AMP SPA 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 將表現VPAC2胜肽之CHO細胞以8 x 1〇4個細胞/槽 之量平板培養於96槽培養盤，於37°C，使其於α MEM、核苷、麩胺醯胺（Gibco/BRL，Rockville, MD)、5% 10 FBS、100微克/毫升pen/strep、0·4毫克/毫升潮黴素、 與1·5毫克/毫升遺傳質（Geneticin)(Gibco/BRL)中生長24 小時。除去培養基，以PBS洗滌培養盤。於37°C，使細 胞與胜肽(在具有1% BSA與100/zM IBMX之10 mM Hepes、150 mM NaQ、5 mM KC卜 2·5 mM CaCl2、1·2 15 mM KH2P04、1.2 mM MgS04、25 mM NaHC〇3 (pH 7·4)中) 一起培育15分鐘。使用CAMP SPA直接篩選測定系統 (Amersham Pharmacia Biotech Inc·，Piscataway，NJ)定量細 胞抽取液中之環狀AMP。根據此套組中之指示，測定溶 胞產物中存在之cAMP量。針對各胜肽濃度產生之cAMP 20 量作圖，使用Prizm軟體進行非線性迴歸分析，測定各胜 狀之EC50。 本發明多係根據VIP設計，VIP已被證實對PAC1缺 乏活性（Vaudry，et al·，Pharmacol. Re. 52:269-324, 2000)。 因此，一般相信本發明多肽對PAC1不具有可觀察到之活 -75- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 200409641 A7 B7 五、發明說明（Μ ) 性。 以本發明代表性多肽進行此試驗的結果示於下文表 1。經確認為P5、P7、P8、P12、與P12 + PEG之多肽均 為VPAC2受體之強力作用劑，其活化受體至内源胜肽 5 (PACAP-27)達成受體活化最高量之100%。再者，該等經 確認為P5、P7、P8、P12、與P12 + PEG之多肽為選擇性 VPAC2受體作用劑，對VPAC1的作用活性很弱。 PACAP-27為VPAC1之強力作用劑。 表1 胜肽 SEQ ID NO. VPAC2 EC»(nM) VPAC1 ECso (nM) PACAP-27 SEQ ID NO: 116 0.09 0.35 P5 SEQ ID NO: 1 0.33 232.5 P7 SEQ ID NO: 5 7.81 >1000 P8 SEQ ID NO: 2 0.19 130.5 P12 SEQ ID NO: 1 + Cys(於C端） 0.38 >1000 P12 加 22 kD PEG 1.32 >1000 P12 加 43 kD PEG 4.19 >1000 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 實例8.醫藥組成物-IV與SC調配物 使用此項技藝中悉知之任何製造方法，以4毫克 SEQ ID NO: 1之多肽、或具有相當於4毫克多肽含量之 衍生多肽、與1升無菌食鹽水製備無菌之IV注射用調配 -76- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 200409641 A7 B7 五、發明說明（75 ) 物。SC調配物可使用較高濃度之多肽。於確認為SEQ ID NO: 1之多肽、或衍生多肽之情形下，取4毫克溶於1〇〇 毫升食鹽水或DNSO中，無菌過濾後，將此組成物裝填 於無菌小瓶中。 5 實例9、含本發明多肽的調配物之穩定性 將實例8所述調配物置於恒定室中，定期取出試樣， 以毛細管電泳法進行分析，此測定法為檢測彼等調配物中 多肽降解作用最敏感之方法。計算各個波峰面積之總和， 將母多肽之波峰面積除以總波峰面積（第6與第7圖），其 10商為純度％。由於新鮮多肽中存在不純物質，因此將不同 時間點的純度除以初始純度，使純度變化常態化。 實例10.胜肽專一性抗體之產生及利用EL1SA測定胜肽 藉使用ABI 433A胜肽合成器合成本發明多肽之專一 片段，產生對本發明多肽具專一性之多株抗體。然後使胜 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 15 肽與樹脂裂離，於 Beckman System Gold Analytical and Preparative HPLC系統上進行純化。使用perspective MALDI質譜分析儀鑑定正確產物，並使用凍乾機乾燥胜 肽。然後經由Cys上之游離硫氫基，使胜肽(2毫克）與頂 孔透螺血藍蛋白（KLH)併合。 20 於第〇、14、35、56、及77天，對紐西蘭白母兔進 行免疫處理。第0天，以250微克胜肽與完全佛氏佐劑皮 下’主射投與各兔。接續之免疫處理，每隻兔子使用125微 克胜肽。第21天開始採血，以後每隔21天持續為之。抗 胜狀抗體之純化係將粗血清通過專一胜肽親和性純化管柱 -77- ;紙張尺度適(斯297公^-—-- 200409641 A7 B7 五、發明說明（76 5 ο 1
5 1X 經濟部智慧財彥局員工消費合祚社印製 20 予以進行。利用ELISA測定抗體力價。 、以對本發明胜肽具專一性之c端M〇rph〇sys F(ab)胜 肽被覆96槽I麵ui〇n 4HBX培養盤，於代，令其培育 隔夜。然後封阻培養盤，以防止非專一性結合。接著，於 33%血漿中稀釋標準胜肽溶液(25〇〇奈克/毫升至16〇微微 克/毫升），試樣於緩衝液中進行1:3之稀釋，隨後於室溫 培月1.5小時。洗滌後，於培養盤上培育對本發明胜肽具 專一性之多株N端抗體一小時。隨後添加辣根過氧化酶 (HRP)·驢·抗_兔抗體，將試樣與標準溶液再培育一小時。 與3,3’，5,5乂四甲基聯苯胺(TMB)溶液一起培育後，讀取培 養盤之〇〇45〇，進行檢測評估（第8圖）。 透過此項技藝中悉知之試管内、活體外、及活體内試 驗可達成本發明多肽活性之表露。例如，欲表露醫藥劑用 於治療糖尿病與相關病症例如X症候群、葡萄糖耐力受 損、空腹葡萄糖障礙、與高胰島素血症；粥樣硬化性疾病 與相關病症例如高三酸甘油酯血症與高膽固醇血症；及肥 胖症之效力，可進行下述試驗。 血糖含量測定方法 進行 db/db 小鼠（得自 Jackson Laboratories, Bar Harbor，ME)之抽血(經由眼睛或尾靜脈），根據相等的血糖 含量平均值將小鼠分組。每天以測試多肽進行經口給藥 (於醫藥上可接受之載劑中強行餵飼）一次，共計14天。 此時，再經由眼睛或尾靜脈抽血及測定血糖含量。各情形 下’係以 Glucometer Elite XL (Bayer Corporation，Elkhart， -78- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 200409641 A7 B7 五、發明說明（77 ) IN)測定葡萄糖含量。 三酸甘油酯含量測定方法 進行 ΙιΑροΑΙ 小鼠（得自 jacks〇I1 Laboratories，Bar
Harbor, ME)之抽血(經由眼睛或尾靜脈），根據相等的血清 5二酸甘油§曰含量平均值將小鼠分組。每天以測試多肽進行 經口給藥（於醫藥上可接受之載劑中強行餵飼）一次，共計 8天。然後’再經由眼睛或尾靜脈抽血及測定血清三酸甘 油酯含量。各情形下，係以Technicon Axon Autoanalyzer (Bayer Corporation，Tarrytown，NY)測定三酸甘油酯含 10 量。 HOL-贍面醇含量測定方法 欲測定血漿HDL-膽固醇含量時，進行hApoAi小鼠 之抽血，並根據相等的血漿HDL·膽固醇含量平均值將小 鼠分組。每天以載劑或測試多肽經口給藥一次，共計7 15天’於第8天再進行抽血。使用Synchron Clinical System (CX4) (Beckman Coulter, Fullerton，CA)分析血漿之 HDL， 膽固醇。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 總膽固醇、HIXL·膽固醇、三酸甘油_、與葡萄糖含量測 定方法 20 於另一活體内試驗中，進行肥胖猴之抽血，然後每天 以載劑或測試多肽經口給藥一次，共計4週，再抽血一 次。使用 Synchron Clinical System (CX4) (Beckman Coulter，Fullerton，CA)分析血清之總膽固醇、HDL-膽固 醇、三酸甘油g旨、與葡萄糖。如Oliver等（Proc. Natl. -79- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 200409641 A7
五、發明說明（78)
Acad· Sci. USA 98:5306-5311，2001)所述，利用 NMR 光譜 法進行脂蛋白亞族分析。 對心血管參數的影響之測定方法 亦針對心血管參數(例如，心搏數與血壓）進行評估。 5 以載劑或多肽每天一次，對SHR大鼠經口給藥2週。使 用如 Grinsell 等（Am· J. Hypertens· 13:370-375, 2000)所述 之尾動脈收縮壓測量法(tail-cuff method)測量血壓與心搏 數。於猴子之試驗中，係如Shen等（J. Pharmacol. Exp· Therap. 278··1435_1443, 1996)所述，偵測血壓與心搏數。 1〇 化合物對於整夜禁食之痩鼠飼料攝取量減少（抑制食慾)之 效力評估 禁食後再银飼之短期餵食試驗(Fasted_Refed Acute Feeding Assay) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 此實驗流程之目的在於測定單一劑量未知化合物對於 15 整夜禁食之瘦鼠消耗食物之效應。肥胖症領域中常使用禁 食後再餵飼之大鼠模式來鑑定具有抑制食慾效應潛力之化 合物。此動物模式曾成功地用來鑑別與確認用於或已用於 處理肥胖者的體重的化合物之效力性質（參見，例如， Balvet et al.，Gen. Pharmacol. 13:293-297，1982 ; 20 Grignaschi et al·，Br. J· Pharmacol. 127:1190-1194，1999 ; McTavish and Heel，Drug 43:713-733，1992 ; Rowland et al·， Life Sci· 36:2295-2300, 1985) 〇 典型之研究包含平均體重大約280克之60-80隻大公 鼠(n=10/處理組）。於控制溫度與濕度及12/12光暗週期之 -80- 張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐) "" 200409641 A7 五、發明說明（79) 標準動物室中餵飼大鼠。將大鼠分 ^ , 蘢飯飼於鋪設網狀物之 节籠中，持續供應水及飼料至禁食供研究用為止。 變：根據大鼠在載劑試驗中> |… 載劑試驗在進行效力試驗之前2至7 現予以分組。 5使大氣整夜禁食(共約10-18小時 |行於暗期， 齡工u 然後供與0·5毫弁盼 -小時後，將預先稱重之飼料罐放 ？ 罐中，測量大鼠消耗之飼料重。根叙於甸料
达友甚致：於暗期，使大鼠整夜禁食（共約i6 U 時）。然後以指定之多肽劑量處理…小時後，將預小 重之飼料罐放回籠中。其後30、6〇、9〇、18 稱 州 180、與 24〇 15 鐘，圯錄飼料之攝取量。於各時間點，將溢出之飼料回 於飼料罐中，然後將飼料罐稱重。測量各時間點之飼=收 耗量。使用適當統計分析測定各處理組間之差異。/消 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 化合物對於肥胖的薩克(Zucker)fa/fa大鼠鳢重及飼料 消耗量減少之政力評估 、水 長期健食試驗（Chronic Feeding Assay) 20 此實驗流程之目的在於測定未知化合物之長期於與對 於肥胖的薩克fa/fa大鼠體重及飼料與水消耗量之效力、 肥胖的薩克fa/fa大鼠常用來測定減重中之化合物效力。 此動物模式曾成功地用來鑑別及確認用於或已用於處理肥 胖者的體重的化合物之效力性質（參見，例 J X ，A1- -81- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公爱） 200409641 A7 B7 五、發明說明（80 )
Barazanji et al.? Obes Res. 8:317-323, 2000 ;
Assimacopoulos-Jeannet et al., Am. J. Physiol. 260(2 Pt 2):R278-283, 1991 ； Dryden et al.? Horm. Metab. Res. 31:363-366, 1999 ； Edwards and Stevens, Pharmacol. 5 Biochem. Behav. 47:865-872, 1994 ； Grinker et al.?
Pharmacol. Biochem. Behav. 12:265-275, 1980) 〇 典型之研究包含平均體重大約550克之60-80隻薩克 fa/fa公鼠(n=10/處理組）。於控制溫度與濕度及12/12光 暗週期之標準動物室中餵飼大鼠。持續供應水及飼料。將 10 每大鼠分籠餵飼於鋪設方袼網之大鼠鞋盒中。於記錄體重 及24小時飼料與水消耗量之二日基線測量之前，使老鼠 適應方格網地板及研究載劑之模擬用藥至少四天。根據其 基線體重’將老鼠分派於6-8個處理組之一，使得各組間 平均體重之平均值與標準誤差均相近。 15 每天於光暗週期之暗期以前，以分派之多肽劑量經口 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 強飼老鼠，如此進行預定之日數（典型地為6-14天）。於 餵飼時，同時測量體重、飼料與水之消耗量。最後一天， 利用C〇2吸入法使老鼠安樂死，並測量體重。 使用此長期餵食試驗，可測定本發明多肽對於減少或 20 控制體重之效力。 以上說明書中提及的所有文獻及專利案均併入本文以 資參考。對於熟悉此項技藝人士而言，在不偏離本發明範 圍及精神下，本發明所述組成物與方法之各種修飾及變化 乃顯見之事。本發日种雖曾料吨佳频㈣加以欽 -82- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210又^7^：爱）|_---------- 200409641
、發明說明 81 實上隹需瞭解本發明之請求不應過度受限於此等詳例。事 、、、二I刀子生物或相關領域人士顯知之實施本發明上 V才、式之各種修飾意欲涵蓋於下述申請專利範圍内。熟習 ^技藝人士將認知，或可讀信只要使用例行實驗，即可 ^得本文所述本發明詳細具體實例之許多相等物。該等相 等物意欲涵蓋於下述申請專利範圍内。 [圖式簡單說明】 第1a至Id圖描述多肽SEq ID n〇s: 1至152之胺基 酸序歹j SEQ ID NOs: 115至152係指於半胱胺酸c端經
1〇由馬來醯亞胺鍵結被PEG基化之胜肽。pEG可為22 kD 線型PEG或43 kD分支鏈peg。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 第2圖描述選殖入pQExjp]中以產生SEQ ν〇· 1胺基酸序列之DNA序列（SEQIDN0:153)。劃出底線之 限制切割酶位置BamHI與xh〇容許對框選殖(in frame 15 clomng)入pGEX-6P_l表現載體中。編碼Xa因子識別位 置之12單元DNA序列及2個終止密碼子以粗字體突顯 出來。中間未突顯的序列編碼SEQ ID NO: 1 (胺基酸序 歹，!）。得自VIP之突變密碼子以小寫字母核苷酸描述。 第3a至3h圖描述SEQ ID NOs: 154至264之核苷酸 20 序列。這些核苷酸序列編碼本發明之多肽。 第4圖乃說明暴露於本發明PEG基化胜肽後，分散 的大鼠胰島細胞分泌胰島素之條形圖。 第5圖乃表露利用皮下(SC)途徑投與本發明peg基 化胜肽，葡萄糖消耗(disposal)増進之條形圖。 -83- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 200409641 A7 B7 五、發明說明（82 ) 第6圖描述三個VPAC2類似物(P5、P7、與對照組 R3P66)在1毫克/毫升含150 mMNaCl與20 mM磷酸鹽， pH 8.0之水性溶液中，於40°C培育期間之穩定性趨向。 試樣係利用毛細管電泳法進行分析，以測定胜肽純度。於 5 第2週與第4週時間點之純度係以初始之純度百分比予以 常態化。 第7圖描述三個VPAC2類似物(P7、P8、與對照組 R3P66)在2毫克/毫升二甲亞颯(DMSO)溶液中，於40°C 培育期間之穩定性趨向。試樣係利用毛細管電泳法進行分 10 析，以測定胜肽純度。於第2週與第4週時間點之純度係 以初始之純度百分比予以常態化。 第8圖說明全長PEG基化胜肽相較於N端缺少一個 胺基酸之相似PEG基化胜肽之選擇性辨識。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 200409641 A7 B7 五、發明說明（83 ) 序列表 <110> 拜耳醫藥品公司（Bayer Pharmaceudcals Corporation) 潘曉群(Clark PAN) 威廉(James WHELAN) 王有章(Yu-Chang John WANG) 弗 ft ▲ (Wayne A. FROLAND) 凱爾諾(Drew N. KELNER) 杜瑪斯(Michael L. DUMAS) 王緯(Wei WANG) <120> 墙下腺腺苷酸環化酶活化胜肽(PACAP)受艎(VPAC2)作用劑及其使用之藥理方法 <130> MSB-7295 <150> US 60/395,738 <151> 2002-07-12 <160> 264 <170> Patentln 版本 3,2 <210> 1 <211> 31 <212> PRT <213> 智人 <400> 1 His ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 10 15
Val Ala Ala
Lgs Lys Tyr Leu Gin Ser lie Lys Gin Lys Arg Tyr <210> 2 <211> 31 <212> PRT <213> 智人 <220> <221> 各項特徵 <222〉 （1)··(31〕 <223> Ac為乙醭基 <400> 2 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製
Ac-His Thr Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr 丁hr Arg Leu A「g Lys 1 5 10 15
Val Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin ser He Lys Gin Lys Arg Tyr 20 25 30 <210> 3 <211> 31 <212> PRT <213> 智人 <400> 3
Gin
His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tvr Thr Ara Leu Arg Lys Gin 1 5 10 15第1頁 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 200409641 A7 B7 五、發明說明（84 )
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser ne Lys Gin Lys Arg Tvr 20 25 30 <210> 4 <211> 29 <212> PRT <213> 智人 <400> 4
His Ser Asp Ala Val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lvs Gin 1 5 10 15
Val Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser He Lys Gin Lys <210> 5 <211> 31 <212> PRT <213> 智人 <400> 5
His Thr Glu Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin val Ala Ala Lys Tyr Leu Gin ser 2S He Lys Gin Lys Arg 30 Tyr <210> 6 <211> 31 <212> PRT <213> 智人 <400> 6 His Ser Asp 1 Ala Val 5 Phe Thr Asp Gin Tyr 10 Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 Leu Ala Val Lys 20 Lys Tyr Leu Gin Asp 25 lie Lys Gin Gly Gly 30 Thr <210> 7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 7
His ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr xhr Arg Leu Arg Lys Gin 丄 > 10 15
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser ne Lys Gln Lys Arg <210> 8 <211> 31 <212> PRT <213> 智人 第2頁 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 χ 297公釐） 200409641 A7 B7 五、發明說明（S5 <400> 8
His ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Ty^ Thr Ar9 Leu Ar9 Gin
Leu Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Thr Lys Gln Lys 20 25 <210> 9 <211> 31 <212> PRT <213> 智人 <400> 9
His ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 10 15
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Thr lie Lys Gin Lys Arg Tyr 20 25 30 <210> 10 <211> 31 <212> PRT <213> 智人 <400> 10
His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 10 15
Met Ala Ala His Lys Tyr Leu Gin Ser lie Lys Gin Lys Arg Tyr 20 25 30 <210> 11 <211> 31 <212> PRT <213> 智人 <400> 11
His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 1 5 10 15 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製
Met Ala Ala Lys His Tyr Leu Gin Ser lie Lys Gin Lys Arg Tyr 20 25 30 <210> 12 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 12
His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Ara Leu Arg Lys Gin 1 5 10 15
Met Ala Gly Lys Lys Tyr Leu Gin Ser He Lys Gin Lys Arg 第3頁 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 200409641 A7 B7 五、發明說明（86 <210> 13 <211> BO <212> PRT <213> 智人 <400> 13
His Ser Asp Ala Val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 10 15
Met Ala Lys Lys Lys Tyr Leu Gin Ser ne Lys Gin Lys Arg 2〇 25 r 30 <210> 14 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 14
His Ser Asp Ala val Phe 丁hr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 10 15
Met Ala Arg Lys Lys Tyr Leu Gin Ser He Lys Gin lvs Arg 20 25 30 <210> 15 <211> 30 <212> PRT <213>智人 <400> 15
His Ser Asp Ala Val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 10 15
Met Ala ser Lys Lys Tyr Leu Gin Ser He Lys Gin Lys Arg 20 25 30 <210> 16 <211> 30 PRT 智人 <212> <213> 經濟部智慧財產扃員工消費合作社印製 <400> 16
His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin IS i〇 15
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser lie Pro Gin Lys Arg 20 25 30 <210> 17 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 17 第4頁 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 200409641 A7 B7 五、發明說明（87 )
His ser asp Ala val Phe Thr Asp cln Tyr Arg Leu Arg , s Gln
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser He Gin Gin Lys Arg <210> 18 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 18
His Ser Asp Ala Val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 1 5 10 15
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser He Ara Gin lvs Ara 20 25 a ^ 30 <210> 19 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 19
His Ser Asp Ala Val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 1 5 10 15
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser He Lys Gin Arg Arg 20 25 30 <210> 20 <211> BO <212> PRT <213> 智人 <400> 20
His ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tvr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 10 15
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser lie Lys Gin Lys Ala 20 25 30 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <210> 21 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 21
His ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys <3ln 1 5 10 15
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin ser lie Lys Gin Lys Phe 20 25 30 <210> 22 第5頁 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 x 297公釐） 200409641 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明（88 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 22 His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 10 15
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin ser lie Lys Gin Lys His 20 25 30 <210> 23 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 23 His ser Asp Ala Val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 10 15 Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser He lys Gin Lys lie 20 25 30 <210> 24 <211> 30 <212> <213> PRT 智人 <400> 24 His ser Asp Ala Val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 1 5 10 15 Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin ser He Lys Gin Lys Lys 20 25 30 <210> 25 <211> 30 <212> <213> PRT 智人 <400> 25 His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Ara Leu Arg Lys Gin 1 5 10 15 Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser iie Lys Gin Lys Leu 20 25 3〇 <210> 26 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 26 His ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Ara Leu Arg Lys Gin 1 5 10 y 15第6頁 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公复） 200409641 A7 B7 五、發明說明（89
Met Ala Ala L^s Lys Tyr Leu Gin Ser Xle Lys Gln Lys <210> 27 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 27 His ser Asp Ala Val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser ne Lys Gln Lys Pro 25 30 <210> 28 <211> 30 <212> PRT 如人 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <213> <400> 28
His Ser Asp Ala Val Phe Thr Asp Gln Tyr Thr Ara Leu Ara Lys Gin 1 5 10 15
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gln Ser He Lys Gin Lys Gln 20 25 30 <210> 29 <21X> BO <212> PRT <213>智人 <400> 29
His Ser Asp Ala Val Phe Thr Asp Gln Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gln 15 10 15
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gln Ser lie Lys Gln Lys Ser 20 25 30 <210> 30 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 30 His Ser Asp Ala Val Phe Thr Asp Gin T^r Thr Ar9 Leu Arg \XS Gln 1 15
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gln Ser lTe Lys Lys <210> 31 <211> 30 <212> PRT <213>智人 20 25 第7頁 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公漦） 200409641 A7 B7 五、發明說明（9〇 <400> 31
His ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 10 15
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser lie Lys Gin Lys val 20 25 30 <210> 32 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 32 His ser Asp Ala val Phe Thr Asp 1 5 10 15
Met Ala Ala Ljs Lys Tyr Leu Gin ser He Lys cln Lys Trp <210> 33 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 33
His Ser Asp Ala Val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin IS 10 15
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin ser lie Lys Gin Lys Tyr 20 25 30 <210> 34 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 34
His Ser Asp Ala Val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 1 5 l〇 15 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製
Met Ala Gly Lys Lys Tyr Leu Gin ser lie Lys Gin Arg lie 20 25 30 <210> 35 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 35
His ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tgr Thr Arg Leu Arg Lys Gin
Met Ala Lys Lys Lys Tyr Leu Gin Ser lie Lys Gin Arg He 20 25 30 第8頁 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 200409641 A7 B7 五、發明說明（91 ) <210> 36 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 36
His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 10 15
Met Ala Ser Lys Lys Tyr Leu Gin Ser lie Lys Gin Arg He 20 25 30 <210> 37 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 37
His Ser Asp Ala Val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 10 15
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser lie Pro Gin Arg lie 20 25 30
3830K <210> <211> <212> <213> 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <400> 38 His Ser Asp Ala Val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 10 15 Met Ala Ser Lys Lys Tyr Leu Gin Ser lie Arg Gin Arg lie 20 25 30 <210> 39 <211> 31 <212> PRT <213> 智人 <400> 39 His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Asn Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 1 5 10 15 val Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin ser He Lys Gin Lys Arg Tyr <210> 40 <211> 31 <212> PRT <213> 智人 <220> 20 25 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 200409641 A7 B7 五、發明說明（92 <221> 各項特徵 <222> (1) · · (31) <223> Ac為乙理基 <400> 40
Ac-His Thr Asp A!a val Phe Thr Asp Asn Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 10 15 val Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin ser tle Lys Gln Lys Tyr 30 <210> 41 <211> 31 <212> PRT <213> 智人 <400> 41
His ser Asp Ala val Phe Thr Asp Asn Tyr rhr Arg Leu Arg l^s Gin Ala Ala. Lys Lys Tyr Leu Gin Ser lie Lys Gin Lys Arg Tvr ’c 3〇 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <210> 42 <211> 29 <212> PRT <213> 智人 <400> 42 His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Asn Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 10 15 val Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin ser lie Lys Gin Lys 20 25 <210> 43 <211> 31 <212> PRT <213>智人 <400> 43 His Thr Glu Ala val Phe Thr Asp Asn Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 10 15
Val Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin ser lie Lys Gin Lys Arg Tyr <210> 44 <211> 31 <212> PRT <213> 智人 <400> 44 25 30
His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Asn Tyr Thr Arg Leu Arg Lys 15 10 15
Gin 第10頁 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 200409641 A7 B7 五、發明說明（93
Leu Ala val Lys Lys Tyr Leu Gin Asp ne lvs Gin Gly Gly Thr 20 25 7 30 <210> 45 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 45 15
His Ser Asp Ala Val Phe Thr Asp Asn Tyr rhr Arg Leu Arg Lys Gin
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser lie Lys Gin Lys Arg 20 25 30 <210> 46 <211> 31 <212> PRT <213> 智人 <400> 46
His ser Asp Ala Val Phe Thr Asp Asn Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 1 5 ID 15
Leu Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Thr lie Lys Gin Lys Arg Tyr 20 25 30 <210> 47 <211> 31 <212> PRT <213>智人 <400> 47
His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Asn Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 10 15
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Thr lie Lys Gin Lys Arg Tyr 20 25 30 <210> 48 <211> 31 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <212> PRT <213> 智人 <400> 48
His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Asn T^r Thr Arg Leu Arg Lys Gin 20 25
Met Ala Ala yls Lys Tyr Leu Gin Sfr lie Lys Gln Lys <210> 49 <211> 31 <212> PRT <213> 智人 第11頁 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 200409641 A7 B7 五、發明說明（94 ) <400> 49
His ser Asp Ala val Phe Thr Asp Asn Tyr 了hr Arg Leu Arg L^s Gin 15 10 15
Met Ala Ala Lys His Tyr Leu Gin Ser lie Lys Gin Lys Arg Tyr 20 25 30 <210> 50 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 50
His Ser Asp Ala Val Phe Thr Asp Asn Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 10 15
Met Ala Gly Lys Lys Tyr Leu Gin Ser He Lys Gin Lys Arg 20 25 30 <210> 51 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 51
His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Asn Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 10 15
Met Ala Lys Lys Lys Tyr Leu Gin Ser lie Lys Gin Lys Arg 20 25 30 <210> 52 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 52
His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Asn Tvr Thr Ara Leu Arg Lys Gin 1 5 10 y 15 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製
Met Ala Arg Lys Lys Tyr Leu Gin Ser He Lys Gin Lys Arg 20 25 30 <210> 53 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 53
His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Asn Tvr Thr Ara Leu Arg Lys Gin 1 5 10 y 15
Met Ala ser i^s Lys Tyr Leu Gin Ser ile Lys Gin Lys Arg 20 25 30 第12頁 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公董） 200409641 A7 B7 五、發明說明（95 <210> 54 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 54
His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Asn Tyr Thr Arq Leu Arg Lys Gin 1 5 10
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser ile Pro Gin Lys A「q 20 25 30 <210> 55 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 55
His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Asn Tyr jhr Arg Leu Arg Lys Gin
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin ser ne Gln Gin Lys Arg 20 25 3〇 <210> 56 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 56 jis Ser Asp A*la Phe Thr Asp Asn 以 Thr Arg Leu Arg Lys Gin
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser ne Arg Gin Lys Arg 20 2S y J 3〇y <210> 57 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <400> 57
His ser Asp Ala val Phe Thr Asp Asn Thr Arg Leu Arg Gln 25 30
Met Ala Ala Lgs Lys Tyr Leu Gin Ser ne Lys Gln Arg ^rg <210> 58 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 58 第13頁 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 200409641 A7 B7 五、發明說明（96
His ser Asp Ala val Phe Thr Asp Asn Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 10 15
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin ser lie Lys Gin Lys Ala 20 2S 30 <210> 59 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 59
His ser Asp Ala val Phe Thr Asp Asn Tvr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 10 15
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin ser lie Lys Gin Lys Phe 20 25 30 <210> 60 <211> 30 <212> <213> PRT 智人 <400> 60
His ser Asp Ala val Phe Thr Asp Asn Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 1 5 10 15
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser He Lys Gin Lys His 20 25 30 <210> 61 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 61
His Ser Asp Ala Val Phe Thr Asp Asn Tvr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 1 5 10 15
Met Ala Ala L^s Lys Tyr Leu Gin Ser Πβ Lys Gin Lys lie 25 30 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <210> 62 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 62
His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Asn Tyr Thr Arg Leu Arg l^s Gin 1
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin ser lie Lys Gin Lys Lys <210> 63 20 25 30 第14頁 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 200409641 A7 B7 五、發明說明（97 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 63
His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Asn Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 10 15
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser lie Lys Gin Lys Leu 20 25 30 <210> 64 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 64
His ser Asp Ala val Phe Thr Asp Asn Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 10 15
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser He Lys Gin Lys Met 20 25 30 <210> 65 <211> BO <212> PRT <213> 智人 <400> 65 Ser Asp Ala val Phe Thr
His
Asp Asn Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 10 15 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 ^yr Thr Arg Leu Arg Lys Gin
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser He Lys Gin Lys Pro 20 25 30 <210> 66 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 66
His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Asn Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 10 15
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser He Lys Gin Lys Gin 20 25 30 <210> 67 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 67
His Ser Asp Ala Val Phe Thr Asp Asn 1 5 第15頁 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 200409641 A7 B7 五、發明說明（98 )
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser He Lys Gin lvs Ser 20 25 7 7 30 <210> 68 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 68 His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Asn Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 10 15 Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser lie Lys Gin Lys Thr 20 25 30 <210> 69 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 69 fs Ser Asp Ala yal Phe Thr Asp Asn Tyr Thr Arg Leu Arg Lgs Gin 10
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin ser lie Lys Gin Lys val 20 25 30 <210> <211> <212> <213> oo 7 3 RT人 p智 <400> 70 His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Asn Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 10 15 Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser lie Lys Gin Lys Trp 20 2S 30 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <210> 71 <2U> 30 <212> <21B> PRT 智人 <400> 71 His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Asn Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 10 15 Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser lie Lys Gin Lys Tyr 20 25 30 <210> 72 <211> 30 <212> PRT <213> 如人 第16頁 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 200409641 A7 B7 五、發明說明（99 <400> 72
His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Asn Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 1 5 10 15
Met Ala Gly Lys Lys Tyr Leu Gin Ser lie Lys Gin Arg lie 20 25 3〇 <210> 73 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 73
His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Asn Tyr Thr Arq Leu Arq Lys Gin 1 5 10 15
Met Ala Lys Lys Lys Tyr Leu Gin Ser He Lys Gin Arg lie 20 25 30 <210> 74 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 74
His ser Asp Ala val Phe Thr Asp Asn Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin
Met Ala ser Lys Lys Tyr Leu Gin Ser He lvs Gin Arg He 20 25 7 30 <210> 75 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 75 15
His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Asn Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser ne pr〇 Gin Arg lie 20 25 30 <210> 76 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 76 )is Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Asn Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 1 5 IQ 15
Met Ala Ser Lys Lys Tyr Leu Gin ser ile Ara Gin Arg lie 20 25 9 30 第17頁 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公复） 200409641 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明（1〇〇 <210> 77 <211> 31 <212> PRT <213> 智人 <400> 77 j^lis Ser Asp Ala yal Phe Thr Asp Gin 工yr Thr Arg Leu Arg Gin 15 val Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser ne LyS Asn Lys Arg Tyr 20 25 30 <210> 78 <211> 31 <212> <213> PRT 智人 <220> <221> 各項特徵 <222> (1)·(31) <223> AC為乙接基 <400> 78 Ac-His Thr Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 val Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser He Lys Asn Lys Arg Tyr 20 25 30 <210> 79 <211> 31 <212> PRT <213> 智人 <400> 79 jis Ser Asp Ala yal Phe Thr Asp Gin Tyr 丁hr Arg Leu Arg Lys Gin 15
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser ile Lys Asn Lys Arg Tyr 20 25 y 30 <210> 80 <211> 29 <212> PRT <213> 智人 <400> 80 His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 1 5 10 15 Val Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Sep ne lvs Asn Lys 20 25 <210> 81 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 200409641 A7 B7 五、發明說明（101 ) <211> 31 <212> PRT <213> 智人 <400> 81
His Thr Glu Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 10 15 val Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser He Lys Asn Lys Arg Tyr 20 25 7 7 30 <210> 82 <211> 31 <212> PRT <213> 智人 <400> 82
His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 10 15
Leu Ala val Lys Lys Tyr Leu Gin Asp He Lys Asn Gly Gly Thr 20 25 30 <210> 83 <211> 30 <212> PRT <213>智人 <400> 83
His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 10 15
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser He Lys Asn Lys Arg 20 25 30 <210> 84 <211> 31 <212> PRT <213> 智人 <400> 84 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製
His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 10 15
Leu Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Thr lie Lys Asn Lys Arg Tyr 20 25 30 <210> 85 <211> 31 <212> PRT <213> 智人 <400> 85
His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg l^s Gin 第19頁 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 200409641 A7 B7 五、發明說明（i〇2)
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Thr ne Lys Asn Lys Arg Tyr 25 30 25
BO 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <210> 86 <211> 31 <212> PRT <213> 智人 <400> 86
His ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr rhr Arg Leu Arg Lys Gin 1 b l〇 15
Met Ala Ala His Lys Tyr Leu Gin Ser ne Lys Asn Lys Arg Tyr <210> 87 <211> 31 <212> PRT <213> 智人 <400> 87
His ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr rhr Arg Leu Arg Lys Gin Met Ala Ala Lys His Tyr Leu Gin Ser ne Lys Asn Lys Arg Tyr <210> 88 <211> 30 <212> PRT <213>智人 <400> 88
His ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr Jhf Arg Leu Arg ^yS Gln Met Ala Gly Lys Lys Tyr Leu Gin Ser Ile Lys Asn Lys <210> 89 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 89
His ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin
Met Ala Lys Lys Lys Tyr Leu Gin Ser lle Lys Asn Lys <210> 90 <211> 30 <212> <213> PRT 智人 25 第2〇頁 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297 200409641 A7 B7 五、發明說明（) <400> 90
His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 1 5 10 15
Met Ala Arg Lys Lys Tyr Leu Gin ser Πβ Lys Asn Lys Arg 20 25 30 <210> 91 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 91
His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tvr Thr Arq Leu Arg Lys Gin 1 5 10 y 15
Met Ala Ser L^s Lys Tyr Leu Gin Ser ne Lys Asn Lys Arg <210> 92 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 92
His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arq Leu Arg lvs Gin 1 5 10 15
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser He pro Asn Lys Arg 20 25 3〇 <210> 93 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 93
His ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 1 5 10 15 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser ne Gln Asn Lys Arg ^ 30 <210> 94 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <4〇〇> 94
His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr jhr Arg Leu Arg Lys Gin
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser n€ Arg Asn Lys Arg o 3〇 第21頁 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格(210x297公 200409641 A7 B7 五、發明說明（104 ) <210> 95 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 95 His Ser Asp Ala Val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin IS 10 15 Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser lie Lys Asn Arg Arg 20 25 30 <210> 96 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 96 His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 10
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser lie Lys Asn Lys Ala 20 25 30 <210> 97 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 97 His ser Asp Ala val Phe 丁hr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 10 15 Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin ser lie Lys Asn Lys Phe 20 25 30 <210> 98 <211> 30 <212> <213> PRT 智人 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <400> 98 His Ser Asp Ala Val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 1 5 10 15
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin ser He Lys Asn Lys His 20 25 30 <210> <211> <212> <213> <400> 99¾99 第22頁 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 200409641 A7 B7 五、發明說明（l〇5 )
His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 1 5 10 y 15
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser He Lys Asn Lys He 20 25 30 <210> 100 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 100
His Ser Asp Ala Val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 10 15
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser lie Lys Asn Lys Lys 20 25 30 <210> 101 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 101
His Ser Asp Ala Val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 10 15
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin ser lie Lys Asn Lys Leu 20 25 30 <210> 102 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 102
His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 10 15
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin ser lie Lys Asn Lys Met 20 25 30 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <210> 103 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 103
His Ser Asp Ala Val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 10 15
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser He Lys Asn uys Pro <210> 104 第23頁 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 x 297公釐） 200409641 A7 B7 五、發明說明（106 ) <211> 30 <212> FRT <213> 智人 <400> 104
His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 in 15
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin S|r ne Lys Asn Lys Gin <210> 105 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 105
His ser Asp Ala Val Phe Thr Asp Gin Tvr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 10 15
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin ser ne lys Asn Lys ser 20 25 3〇 <210> 106 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 106
His ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 1 5 10 15
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser He Lys Asn Lys Thr 20 25 30 <210> 107 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 107 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 15
His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser lie Lys Asn Lys val 20 25 30 <210> 108 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 108
His ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 1 5 10 15 第24頁 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 200409641 A7 B7 五、發明說明（i〇7 )
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin ser lie Lys Asn Lys Trp <210> 109 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 109
His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 10 15
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin ser He Lys Asn Lys Tyr 20 25 30 <210> 110 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 110
His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 1 5 10 15
Met Ala Gly Lys Lys Tyr Leu Gin Ser lie Lys Asn Arg lie 20 25 30 <210> 111 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 111
His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 10 15
Met Ala Lys Lys Lys Tyr Leu Gin Ser lie Lys Asn Arg lie 20 25 30 <210> 112 <211> 30 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <212> PRT <213> 智人 <400> 112
His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 10 15
Met Ala Ser Lys Lys Tyr Leu Gin Ser lie Lys Asn Arg lie 20 25 30
<210> 11B <211> 30 <212> PRT <213> 智人 第25頁 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 200409641 A7 B7 五、發明說明（ι〇0 <400> 113
His ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 10 15
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin ser lie Pro Asn Arg lie 20 25 30 <210> 114 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <400> 114
His Ser Asp Ala Val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 10 15
Met Ala Ser Lys Lys Tyr Leu Gin Ser He Arg Asn Arg lie 20 25 30 <210> 115 <211> 32 <2X2> PRT <213> 智人 <220> <221> 各項特徵 <222> (1)··(32) <223> PEG為聚乙二酵 <400> 115
His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 1 5 10 15
val Ala Ala L^s Lys Tyr Leu Gin ser lie Lys Gin Lys Arg Tyr Cys-PEG 20 25 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <210> 116 <211> 32 <212> PRT <213> 智人 <220> <221> 各項特微 <222> (1)··(32) <223> Ac為乙醯基；PEG為聚乙二醇 <400> 116
Ac-His Thr Asp Ala Val Phe Thr Asp Gin Tvr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 10 15
val Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser lie Lys Gin Lys Arg Tyr cys-PEG <210> 117 20 25 30 第26頁 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 200409641 A7 B7 五、發明說明（l〇9 ) <211> 32 <212> PRT <213> 智人 <220> <221> 各項特徵 <222> (1)·.(32) <223> PEG為聚乙二酵 <400> 117
His Ser Asp Ala Val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 i〇 15
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin ser He Lys Gin Lys Arg Tyr cys-PEG <210> 118 <211> 30 <212> PRT <213> 智人 <220> <221> 各項特徵 <222> (1).·(30) <223> PEG為彖乙二酵 <400> 118
His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 10 15 val Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser lie Lys Gin Lys cys-PEG 20 25 30 <210> 119 <211> 32 <212> PRT <213> 智人 <220> <221> 各項特徵 <222> (1)..(32) <223> PEG為聚乙二酵 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <400> 119
His Thr Glu Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 10 15 val Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser lie Lys Gin Lys Arg Tyr Cys-PEG 20 25 30 <210> 120 <211> 32 <212> PRT <213> 智人 <220> 第27頁 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 x 297公釐） 200409641 A7 B7 五、發明說明（110 ) <221> 各項特徵 <222> (1)..(32) <223> PEG為聚乙二醇 <400> 120
His ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 1 5 10 15
Leu Ala val Lys Lys Tyr Leu Gin Asp lie Lys Gin Gly Gly Thr Cys-PEG 20 25 30 <210> 121 <211> B1 <212> PRT <213> 智人 <220> <221> 各項待徵 <222> (1)·(31) <223> PEG為聚乙二醇 <400> 121 1 15
His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin T^r Thr Arg Leu Arg Lys Gin
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser lie Lys Gin Lys Arg cys-PEG 20 25 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <210> 122 <211> 32 <212> PRT <213> 智人 <220> <221> 各項特徵 <222> CD.. (32) <223> PEG為聚乙二醇 <400> 122
His ser Asp Ala Val Phe 丁hr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 1 5 K l〇 15
Leu Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Thr lie Lys Gin Lys Arg Tyr cys-PE< 20 <210> 123 <211> 32 <212> <213> PRT 智人 <220> <221> 各項特徵 <222> (1)··(32) <223> PEG為聚乙二酵 <400> 123 25 第28頁 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公餐） 200409641 A7 B7 五、發明說明（m )
His ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Thr lie Lys Gin Lys Arg Tyr cys-PEG <210> 124 <211> 32 <212> PRT <213> 智人 <220> <221> 各項特徵 <222> (1)..(32) <223> PEG為聚乙二酵 <400> 124
His ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin
Met Ala Ala 岛s Lys 丁yr Leu Gin ||r lie Lys Gin Lys 益g Tyr cys-PEG <210> 125 <211> 32 PRT 智人 <212> <213> <220> <221> 各項特徵 <222> (1)·.(32) <223> PEG為聚乙二酵 <400> 125
His ser Asp Ala Val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 1 5 10 15
Met Ala Ala Lys His Tyr Leu Gin ser lie Lys Gin Lys Arg Tyr cys-PEG 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <210> 126 <211> 31 <212> <213> <220> <221> 各項特徵 <222> (1)··(31) <223> PEG為聚乙二酵 <400> 126 His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 10
Met Ala Gly Lys Lys Tyr Leu Gin Ser lie Lys Gin Lys Arg cys-PEG 20 25第29頁 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 200409641 A7 B7 五、發明說明（112 ) <210> 127 <211> 31 <212> PRT <213> 智人 <220> <221> 各項特徵 <222> (1)..(31) <223> PEG為聚乙二酵 <400> 127
His ser Asp Ala Val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin
Met Ala Lys Lys Lys Tyr Leu Gin Ser ne Lys Gln Lys Arg Cys.PEG <210> 128 <211> 31 <212> PRT <213> 智人 <220> <221> 各項特徵 <222> (1) . · Gl) <223> PEG為聚乙二醇 <400> 128
His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 10 15
Met Ala Arg Lys Lys Tyr Leu Gin ser lie Lys Gin Lys Arg Cys-PEG <210> 129 <211> B1 <212> PRT <213>智人 <220> <221> 各項特徵 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <222> (1)··(31) <223> PEG為聚乙二酵 <400> 129
His Ser Asp Ala Val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 1 5 10 15
Met Ala ser Lgs Lys Tyr Leu Gin Ser He Lys Gin Lys Arg Cys-PEG <210> 130 <211> 31 <212> PRT <213> 智人 第30頁 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公爱） 200409641 A7 B7 五、發明說明（113 ) <220> <221> 各項特徵 <222> (1)··(31) <223> PEG為聚乙二酵 <400> 130
His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tvr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 10 15
Met Ala Ala ugs Lys Tyr Leu Gln Ser ne Pr〇 Gln Lys Arg Cys-PEG <210> 131 <211> 31 <212> PRT <213> 智人 <220> <221> 各項特徵 <222> (1)··(31) <223> PEG為聚乙二醇 <400> 131
His ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gln Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gln 15 10 15
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gln Ser lie Gln Gln Lys Arg Cys-PEG 20 25 30 <210> 132 <211> 31 <212> PRT <213> 智人 <220> <221>各項特徵 <222> ⑴· ·（31) <223> PEG為聚乙二醇 <400> 132 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製
His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gln Tyr Thr Arg Leu Arg gs Gln 15 l〇 15
Met Ala Ala L^s Lys Tyr Leu Gln ser He Arg Gln Lys Arg Cys-PEG <210> 133 <211> 31 <212> PRT <213> 智人 <220> <221> 各項特徵 <222> (1)..(31) <223> PEG為聚乙二醇 第31頁 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 200409641 A7 B7 五、發明說明（1M )
<400> 13B
His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr rhr Arg Leu Arg L^s Gin
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser I1e Lys Gln Afg Arg Cys^pEG <210> 134 <211> 31 <212> PRT <213> 智人 <220> <221> 各項特徵 <222> (1) · · (31) <223> PEG為聚乙二醇 <400> 134
His Ser Asp Ala Val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser ne Lys Gln Lys Cys^PEG <210> 135 <211> 31 <212> PRT <213> 智人 <220> <221> 各項特徵 <222> (1)·.(31) <223> PEG為聚乙二醇 <400> 135
His Ser Asp Ala Val Phe Thr Asp Gln Tyr Thr Arg Leu Arg ^ys Gln 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製
Met Ala Ala L^s Lys Tyr Leu Gln Ser ne Ly$ Gln Lys pje Cys-PEG <210> 136 <211> 31 <212> PRT <213> 智人 <220> <221> 各項特徵 <222> (1) ·. (31) <223> PEG為聚乙二酵 <400> 136
His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gln Tyr rhr Arg Leu Arg Lys Gln 1 5 10 15 第32頁 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公^一 200409641 A7 B7 五、發明說明（115 )
Met
Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser lie Lys <3Tn Lys Cys-PEG 20 25 30 25 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <210> 137 <211> 31 <212> PRT <213> 智人 <220> <221> 各項特徵 <222> (1)··C31) <223> PEG為聚乙二醇 <400> 137
His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 10 15
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin ser lie Lys Gin Lys lie Cys-PEG <210> 138 <211> 31 <212> PRT <213> 智人 <220> <221>各項特徵 <222> (1)··(31) <223> PEG為聚乙二醇 <400> 138
His ser Asp Ala val Phe 丁hr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin IS 10 15
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser He Lys Gin Lys Lys cys-PEG 20 25 30 <210> 139 <211> 31 <212> PRT <213> 智人 <220> <221> 各項特徵 <222> ⑴· (31〕 <223〉 PEG為聚乙二醇 <400> 139 His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tvr Thr Ara Leu Ara Lys Gin 1 5 10
Met Ala Ala <210> 140 if
Lys Lys Tyr Leu Gin Ser ne Lys Gin Lys Leu Cys-PE6 20 25 30 第33頁 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 200409641 A7 B7 五、發明說明（116 ) <211> 31 <212> PRT <213> 智人 <220> <221> 各項特徵 <222> (1〕· ·（31) <223> PEG為聚乙二醇 <400> 140
His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg lys Gin 1 5 10 15
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser He Lys Gin Lys Met cys-PEG 20 25 30 <210> 141 <211> 31 <212> PRT <213> 智人 <220> <221> 各項特徵 <222> (1)··(31) <223> PEG為聚乙二醇 <400> 141
His Ser Asp Ala Val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 10 15
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin ser He Lys Gin Lys Pro cys-PEG 20 25 30 <210> 142 <211> 31 <212> PRT <213> 智人 <220> <221> 各項特徵 <222> (1)·.(31) <223> PEG為聚乙二醇 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <400> 142
His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 10 15
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser lie Lys Gin Lys Gin Cys-PEG 20 25 30 <210> 143 <211> B1 <212> PRT <213> 智人 <220> 第34頁 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐) 200409641 A7 B7 五、發明說明（in) <221> 各項特徵 <222> (1)··(31) <223> PEG為聚乙二醇 <400> 143
His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin ryr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 l〇 15
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin ser lie Lys Gin Lys ser cys-PEG 20 25 30 <210> 144 <211> 31 <212> PRT <213> 智人 <220> <221> 各項特徵 <222> (1) · · C31) <223> PEG為聚乙二醇 <400> 144
His Ser Asp Ala Val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys <5ln
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser lie Lys Gin Lys Thr Cys-PEG 20 25 30 <210> 145 <211> 31 <212> PRT <213> 智人 <220> <221> 各項特徵 <222> (1)·(31) <223> PEG為聚乙二醇 <400> 145
His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 1 5 10 15 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin ser lie Lys Gin Lys val cys-PEG 20 25 30 <210> 146 <211> B1 <212> PRT <213> 智人 <220> <221> 各項特徵 <222> (1)··(31〕 <223> PEG為聚乙二醇 <400> 146 第35頁 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 x 297公釐） 200409641 A7 B7 五、發明說明（118 )
His ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg L^s Gin
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser lie Lys Gin Lys Trp Cys-PEG 20 25 30 <210> 147 <211> 31 <212> PRT <213> 智人 <220> 各項特徵 <222> (1)··(31) <223> PEG為聚已二酵 <400> 147
His Ser Asp Ala Val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 10 15
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser He Lys Gin Lys Tyr Cys-PEG 20 25 30 <210> 14a <211> 31 <212> PRT <213> 智人 <220> <221> 各項特徵 <222> (1)..(31) <223> PEG為聚乙二酵 <400> 148
His ser Asp Ala Val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 10 15
Met Ala Gly Lys Lys Tyr Leu Gin Ser lie Lys Gin Arg He Cys-PEG 20 25 30 <210> 149 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <211> 31 <212> PRT <213> 智人 <220> <221> 各項特徵 <222> (1) .. (31) <223> PEG為聚乙二醇 <400> 149
His ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 1 5 10 15
Met Ala Lys Lys Lys Tyr Leu Gin ser lie Lys Gin Arg lie Cys-PEG 20 25 30 第36頁 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公麓） 200409641 A7 B7 PRT 智人 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明（119 ) <210> 150 <211> 31 <212> PRT <213>智人 <220> <221> 各項特徵 <222> (1).·(31) <223> PEG為聚乙二酵 <400> 150
His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 15 10 15
Met Ala Ser Lys Lys Tyr Leu GTn Ser lie Lys Gin Arg lie Cys-PEG 20 25 30 <210> 151 <211> 31 <212> PRT <213> 智人 <220> <221> 各項特徵 <222> (1),·C31) <223> PEG為聚乙二醇 <400> 151
His Ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin Tyr Thr Arg Leu Arg Lys Gin 1 5 10 15
Met Ala Ala Lys Lys Tyr Leu Gin Ser lie Pro Gin Arg lie Cys-PEG
20 25 BO <210> 152 <211> 31 <212> <213> <220> <221> 各項特徵 <222> (1)·(31) <223> PEG為聚乙二酵 <400> 152 His ser Asp Ala val Phe Thr Asp Gin 1 5 ΙΓ
Thr Arg Leu Arg Lys Gin
Met Ala ser Lys Lys Tyr Leu Gin Ser ne Arg Gin Arg lie Cys-PEG <210> 153 <211> 123 <212> DNA <213> 智人 25 30 第37頁 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公 200409641 A7 B7 五、發明說明（i2〇) <400> 153 ggatccatcg aaggtcgtca ctccgacgct gttttcaccg accagtacac gcgtctgcgt aaacaggttg ctgcaaagaa atacctgcag tccatcaagc agaagcgtta ctaatgactc gag <210> 154 <211> 93 <212> DNA <213> 智人 <400> 154 60 120 123 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacaggt tgctgcaaag aaatacctgc agtccatcaa gcagaagcgt tac 60 93 <210> 155 <211> 93 <212> DNA <213> 智人 <400> 155 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag aaatacctgc agtccatcaa gcagaagcgt tac 60 93 <210> 156 <211> 87 <212> DNA <213> 智人 <400> 156 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacaggt tgctgcaaag aaatacctgc agtccatcaa gcagaag · 60 87 <210> 157 <211> 93 <212> DNA <213> 智人 <400> 157 cacaccgaag ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacaggt tgctgcaaag aaatacctgc agtccatcaa gcagaagcgt tac 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 60 93 <210> 158 <211> 93 <212> DNA <213> 智人 <400> 158 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagct ggctgttaag aaatacctgc aggacatcaa gcagggcggt acc <210> 159 <211> 90 <212> DNA <213>智人 第38頁 60 93 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 200409641 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明（m) <400> 159 60 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag aaatacctgc agtccatcaa gcagaagcgt 90 <210> 160 <211> 93 <212> DNA <213> 智人 <400> 160 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagct ggctgcaaag 60 aaatacctgc agaccatcaa gcagaagcgt tac 93 <210> 161 <211> 93 <212> DNA <213> 智人 <400> 161 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag 60 aaatacctgc agaccatcaa gcagaagcgt tac 93 <210> 162 <211> 93 <212> DNA <213> 智人 <400> 162 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcacac 60 aaatacctgc agtccatcaa gcagaagcgt tac 93 <210> 163 <211> 93 <212> <213> DNA 智人 <400> 163 60 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag cactacctgc agtccatcaa gcagaagcgt tac 93 <210> 164 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 164 60 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctggcaag aaatacctgc agtccatcaa gcagaagcgt 90 <210> 165 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 165 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctaaaaag 60 第39頁 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 x 297公釐） 200409641 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明（122 ) aaatacctgc agtccatcaa gcagaagcgt 90 <210> 166 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 166 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctcgtaag aaatacctgc agtccatcaa gcagaagcgt <210> 167 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 167 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggcttccaag aaatacctgc agtccatcaa gcagaagcgt <210> 168 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 168 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag aaatacctgc agtccatccc ccagaagcgt <210> 169 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 169 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag aaatacctgc agtccatcca gcagaagcgt <210> 170 <211> 90 <212> DMA <213> 智人 <400> 170 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag aaatacctgc agtccatccg tcagaagcgt <210> 171 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 171 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag aaatacctgc agtccatcaa gcagcgtcgt第40頁 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 60 90 60 90 60 90 60 90 60 90 60 90 200409641 A7 B7 五、發明說明（123 ) <210> 172 <211> 90 <212> ONA <213> 智人 <400> 172 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag aaatacctgc agtccatcaa gcagaaggca 60 90 <210> 173 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 173 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag aaatacctgc agtccatcaa gcagaagttc 60 90 <210> 174 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 174 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag aaatacctgc agtccatcaa gcagaagcac <210> 175 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 175 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag aaatacctgc agtccatcaa gcagaagatc 60 90 60 90 <210> 176 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 176 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag aaatacctgc agtccatcaa gcagaagaag 60 90 <210> 177 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 177 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag aaatacctgc agtccatcaa gcagaagctg
<210> 178 <211> 90 <212> DNA 第41頁 60 90 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 200409641 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明（124 ) <213> 智人 <400> 178 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag aaatacctgc agtccatcaa gcagaagatg <210> 179 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 179 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag aaatacctgc agtccatcaa gcagaagccc <210> 180 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 180 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag aaatacctgc agtccatcaa gcagaagcag <210> 181 <211> 90 <212> DNA <213>智人 <400> 181 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag aaatacctgc agtccatcaa gcagaagtcc <210> 182 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 182 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag aaatacctgc agtccatcaa gcagaagacc 60 90 60 90 60 90 60 90 60 90 <210> 183 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 18B cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag 60 aaatacctgc agtccatcaa gcagaaggtt 90 <210> 184 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 184 第42頁 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 200409641 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明 (125 ) cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag 60 aaatacctgc agtccatcaa gcagaagtgg 90 <210> 185 <211> <212> 90 ONA <213> 智人 <400> 185 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag 60 aaatacctgc agtccatcaa gcagaagtac 90 <210> 186 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 186 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctggtaag 60 aaatacctgc agtccatcaa gcagcgtatc 90 <210> 187 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 187 60 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctaaaaag aaatacctgc agtccatcaa gcagcgtatc 90 <210> 188 <211> 90 <212> <213> DNA 智人 <400> 188 60 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggcttccaag aaatacctgc agtccatcaa gcagcgtatc 90 <210> 189 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 189 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag 60 aaatacctgc agtccatccc ccagcgtatc 90 <210> X90 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 190 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggcttccaag 60 aaatacctgc agtccatccg tcagcgtatc 90 第43頁 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 200409641 A7 B7 五、發明說明（126 ) <210> 191 <211> 93 <212> DNA <213> 智人 <400> 191 cactccgacg ctgttttcac cgacaactac acgcgtctgc gtaaacaggt tgctgcaaag aaatacctgc agtccatcaa gcagaagcgt tac 60 93 <210> 192 <211> 93 <212> DNA <213> 智人 <400> 192 cactccgacg ctgttttcac cgacaactac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag aaatacctgc agtccatcaa gcagaagcgt tac 60 93 <210> 193 <211> 87 <212> DNA <213> 智人 <400> 193 cactccgacg ctgttttcac cgacaactac acgcgtctgc gtaaacaggt tgctgcaaag aaatacctgc agtccatcaa gcagaag 60 87 <210> 194 <211> 93 <212> DNA <213>智人 <400> 194 cacaccgaag ctgttttcac cgacaactac acgcgtctgc gtaaacaggt tgctgcaaag aaatacctgc agtccatcaa gcagaagcgt tac 60 93 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <210> 195 <211> 93 <212> DNA <213> 智人 <400> 195 cactccgacg ctgttttcac cgacaactac acgcgtctgc gtaaacagct ggctgttaag aaatacctgc aggacatcaa gcagggcggt acc <210> 196 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 196 cactccgacg ctgttttcac cgacaactac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag aaatacctgc agtccatcaa gcagaagcgt <210> 197 第44頁 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 60 93 60 90 200409641 A7 B7 五、發明說明（l27 <211> 93 <212> DNA <213> 智人 <400> 197 cactccgacg ctgttttcac cgacaactac acgcgtctgc gtaaacagct ggctgcaaag aaatacctgc agaccatcaa gcagaagcgt tac <210> 198 <211> 93 <212> DNA <213> 智人 <400> 198 cactccgacg ctgttttcac cgacaactac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag aaatacctgc agaccatcaa gcagaagcgt tac <210> 199 <211> 93 <212> DNA <213>智人 <400> 199 cactccgacg ctgttttcac cgacaactac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcacac aaatacctgc agtccatcaa gcagaagcgt tac <210> 200 <211> 93 <212> DNA <213> 智人 <400> 200 cactccgacg ctgttttcac cgacaactac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag cactacctgc agtccatcaa gcagaagcgt tac 60 93 60 93 60 93 60 93 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <210> 201 <211> 93 <212> DNA <213> 智人 <400> 201 cactccgacg ctgttttcac cgacaactac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag cactacctgc agtccatcaa gcagaagcgt tac <210> 202 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 202 cactccgacg ctgttttcac cgacaactac acgcgtctgc gtaaacagat ggctaaaaag aaatacctgc agtccatcaa gcagaagcgt <210> 203 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 第45頁 60 93 60 90 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 200409641 A7 B7 DNA 智人 五、發明說明（128 ) <400> 203 cactccgacg ctgttttcac cgacaactac acgcgtctgc gtaaacagat ggctcgtaag 60 aaatacctgc agtccatcaa gcagaagcgt 90 <210> 204 <211> 90 <212> <213> <400> 204 cactccgacg ctgttttcac cgacaactac acgcgtctgc gtaaacagat ggcttccaag 60 aaatacctgc agtccatcaa gcagaagcgt 90 <210> 205 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 205 cactccgacg ctgttttcac cgacaactac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag aaatacctgc agtccatccc ccagaagcgt <210> 206 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 206 cactccgacg ctgttttcac cgacaactac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag aaatacctgc agtccatcca gcagaagcgt <210> 207 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 207 cactccgacg ctgttttcac cgacaactac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag aaatacctgc agtccatccg tcagaagcgt 60 90 60 90 60 90 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <210> 208 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 208 cactccgacg ctgttttcac cgacaactac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag aaatacctgc agtccatcaa gcagcgtcgt <210> 209 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 209 cactccgacg ctgttttcac cgacaactac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag 第46頁 60 90 60 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 200409641 A7 B7 五、發明說明（l29 ) 90 60 90 aaatacctgc agtccatcaa gcagaaggca <210> 210 <211> 90 <212> ONA <213> 智人 <400> 210 cactccgacg ctgttttcac cgacaactac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag aaatacctgc agtccatcaa gcagaagttc <210> 211 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 211 cactccgacg ctgttttcac cgacaactac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag aaatacctgc agtccatcaa gcagaagcac 60 90 <210> 212 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 212 60 90 <210> 213 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 213 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 cactccgacg ctgttttcac cgacaactac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag aaatacctgc agtccatcaa gcagaagatc cactccgacg ctgttttcac cgacaactac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag 60 aaatacctgc agtccatcaa gcagaagaag 90 <210> 214 <211> 90 <212> ONA <213> 智人 <400> 214 cactccgacg ctgttttcac cgacaactac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag aaatacctgc agtccatcaa gcagaagctg <210> 215 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 215 cactccgacg ctgttttcac cgacaactac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag aaatacctgc agtccatcaa gcagaagatg第47頁 60 90 60 90 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 200409641 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明（13〇) <210> 216 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 216 cactccgacg ctgttttcac cgacaactac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag 60 aaatacctgc agtccatcaa gcagaagccc 90 <210> 217 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 217 cactccgacg ctgttttcac cgacaactac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag 60 aaatacctgc agtccatcaa gcagaagcag 90 <210> 218 <211> 90 <212> <213> DNA 智人 <400> 218 cactccgacg ctgttttcac cgacaactac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag 60 aaatacctgc agtccatcaa gcagaagtcc 90 <210> 219 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 219 60 cactccgacg ctgttttcac cgacaactac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag aaatacctgc agtccatcaa gcagaagacc 90 <210> 220 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 220 60 cactccgacg ctgttttcac cgacaactac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag aaatacctgc agtccatcaa gcagaaggtt 90 <210> 221 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 221 60 cactccgacg ctgttttcac cgacaactac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag aaatacctgc agtccatcaa gcagaagtgg 90 <210> 222 <211> 90 第48頁 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 x 297公釐） 200409641 A7 B7 五、發明說明（131 ) <212> DNA <213> 智人 <400> 222 cactccgacg ctgttttcac cgacaactac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag aaatacctgc agtccatcaa gcagaagtac 60 90 <210> 223 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 223 cactccgacg ctgttttcac cgacaactac acgcgtctgc gtaaacagat ggctggtaag aaatacctgc agtccatcaa gcagcgtatc 60 90 <210> 224 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 224 cactccgacg ctgttttcac cgacaactac acgcgtctgc gtaaacagat ggctaaaaag aaatacctgc agtccatcaa gcagcgtatc 60 90 <210> 225 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 225 aaatacctgc agtccatcaa gcagcgtatc 60 90 <210> 226 <211> 90 <212> ONA <213> 智人 <400> 226 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 aaatacctgc agtccatccc ccagcgtatc <210> 227 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 227 cactccgacg ctgttttcac cgacaactac acgcgtctgc gtaaacagat ggcttccaag aaatacctgc agtccatccg tcagcgtatc <210> <211> <212> <213> 228 93 DNA 智人 第49頁 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 60 90 60 90 200409641 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明（132 ) <400> 228 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacaggt tgctgcaaag 60 aaatacctgc agtccatcaa gaacaagcgt tac 93 <210> 229 <211> 93 <212> DNA <213> 智人 <400> 229 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag aaatacctgc agtccatcaa gaacaagcgt tac <210> 230 <211> 87 <212> ONA <213> 智人 <400> 230 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacaggt tgctgcaaag aaatacctgc agtccatcaa gaacaag <210> 231 <211> 93 <212> DNA <213>智人 <400> 231 cacaccgaag ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacaggt tgctgcaaag aaatacctgc agtccatcaa gaacaagcgt tac <210> 232 <211> 93 <212> DNA <213> 智人 <400> 232 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagct ggctgttaag aaatacctgc aggacatcaa gaacggcggt acc <210> 233 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 233 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag aaatacctgc agtccatcaa gaacaagcgt <210> 234 <211> 93 <212> DNA <213>智人 <400> 234 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagct ggctgcaaag第50頁 60 93 60 87 60 93 60 93 60 90 60 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 200409641 A7 B7 五、發明說明（133 ) aaatacctgc agaccatcaa gaacaagcgt tac 93 <210> 235 <211> 93 <212> DNA <213> 智人 <400> 235 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag aaatacctgc agaccatcaa gaacaagcgt tac 60 93 <210> 2B6 <211> 93 <212> DNA <213> 智人 <400> 236 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcacac aaatacctgc agtccatcaa gaacaagcgt tac 60 93 <210> 237 <211> 93 <212> DNA <213>智人 <400> 237 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag cactacctgc agtccatcaa gaacaagcgt tac 60 93 <210> 2B8 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 238 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctggcaag aaatacctgc agtccatcaa gaacaagcgt 60 90 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 <210> 239 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 239 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctaaaaag aaatacctgc agtccatcaa gaacaagcgt 60 90 <210> 240 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 240 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctcgtaag aaatacctgc agtccatcaa gaacaagcgt第51頁 60 90 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 200409641 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明（I34) <210> 241 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 241 60 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggcttccaag aaatacctgc agtccatcaa gaacaagcgt 90 <210> 242 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 242 60 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag aaatacctgc agtccatccc caacaagcgt 90 <210> 243 <211> <212> 90 DNA <213> 智人 <400> 243 60 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag aaatacctgc agtccatcca gaacaagcgt 90 <210> 244 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 244 60 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag aaatacctgc agtccatccg taacaagcgt 90 <210> 245 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 245 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag 60 aaatacctgc agtccatcaa gaaccgtcgt 90 <210> 246 <211> 90 <212> <213> DNA 智人 <400> 246 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag 60 aaatacctgc agtccatcaa gaacaaggca 90 <210> 247 <211> 90 <212> DNA 第52頁 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 200409641 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明 (135 ) <213> 智人 <400> 247 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag 60 aaatacctgc agtccatcaa gaacaagttc 90 <210> 248 <211> 90 <212> ONA <213> 智人 <400> 248 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag 60 aaatacctgc agtccatcaa gaacaagcac 90 <210> 249 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 249 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag 60 aaatacctgc agtccatcaa gaacaagatc 90 <210> 250 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 250 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag 60 aaatacctgc agtccatcaa gaacaagaag 90 <210> 251 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 251 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag 60 aaatacctgc agtccatcaa gaacaagctg 90 <210> 252 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 252 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag 60 aaatacctgc agtccatcaa gaacaagatg 90 <210> 253 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 253 第53頁 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 200409641 A7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明（136 ) cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag 60 aaatacctgc agtccatcaa gaacaagccc 90 <210> 254 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 254 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag aaatacctgc agtccatcaa gaacaagcag <210> 255 <211> 90 <212> DNA <213>智人 <400> 255 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag aaatacctgc agtccatcaa gaacaagtcc <210> 256 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 256 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag aaatacctgc agtccatcaa gaacaagacc <210> 257 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 257 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag aaatacctgc agtccatcaa gaacaaggtt <210> 258 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 2S8 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag aaatacctgc agtccatcaa gaacaagtgg <210> <211> <212> <213> 9 A人 2590DN智 60 90 60 90 60 90 60 90 60 90 <400> 259 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag 60 aaatacctgc agtccatcaa gaacaagtac 90第54頁 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 200409641 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明（137 ) <210> <211> <212> <213> 260 90 DNA 智人 <400> 260 ^ cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctggtaag 60 aaatacctgc agtccatcaa gaaccgtatc 90 <210> <211> <212> <213> 261 90 DNA 智人 <400> 261 ^ cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctaaaaag 60 aaatacctgc agtccatcaa gaaccgtatc 90 <210> 262 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 262 aaatacctgc agtccatcaa gaaccgtatc <210> 263 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 263 60 90 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggctgcaaag 60 aaatacctgc agtccatccc caaccgtatc 9〇 <210> 264 <211> 90 <212> DNA <213> 智人 <400> 264 cactccgacg ctgttttcac cgaccagtac acgcgtctgc gtaaacagat ggcttccaag 60 aaatacctgc agtccatccg taaccgtatc 90 第55頁 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐）

Claims (1)

  1. 200409641 A8 B8 C8 _D8_ 六、申請專利範圍 1. 一種多肽，係選自包括SEQ IDNOs: 1至152、與其功 能相等片段、衍生物、及變異體之組群。 2. —種多核苷酸，係編碼如申請專利範圍第1項之多肽 序列、或其簡併變異體。 5 3. —種載體，包括如申請專利範圍第2項之多核苷酸。 4. 一種宿主細胞，包括如申請專利範圍第3項之載體。 5. —種用於製造多肽之方法，包括： a) 在適於表現該多肽的條件下，培養如申請專利範 圍第4項之宿主細胞；及 10 b) 從該宿主細胞培養液中回收該多肽。 6. —種純化抗體，其專一性地與如申請專利範圍第1項 之多肽結合。 7. 如申請專利範圍第1項之多肽，其中該多肽係選自包 括SEQ ID N〇s: 1、2、3、4、與5之組群。 15 8.如申請專利範圍第1項之多肽，其中該多肽係選自包 括 SEQ ID NOs: 115、116、117、118、與 119 之組 群。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 9. 一種多核苷酸，係選自包括SEQ ID NOs: 154至264 之組群。 20 10. —種醫藥組成物，其包括治療有效量之如申請專利範 圍第1項之多肽、或其功能相等片段、衍生物、及變 異體，與醫藥上可接受載劑之組合。 11.如申請專利範圍第10項之醫藥組成物，其中該組成 物含有約2%至約30% DMSO及視需要地，含有選自 -85 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 200409641 8 8 8 8 A B c D 申請專利範圍 包括丙二醇、二曱基曱醯胺、破酸丙烯酯、聚乙二 醇、與三酸甘油酯之溶劑。 12·如申請專利範圍第1〇項之醫藥組成物，其中該多肽 係選自包括 SEQ ID N〇s: 1、2、3、4、5、ι15、 116、117、118、與 119 之組群。 13· —種醫藥組成物，其包括治療有效量之如申請專利範 圍第1項之多肽或其功能相等片段、衍生物、及變異 體，與醫藥上可接受載劑及一或多種醫藥劑之組合。 10 15 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 20 14. 如申請專利範圍第13項之醫藥組成物，其中該醫藥 劑係選自包括PPAR作用劑、績醢脲藥物、非續醢脲 促分/必素、α-葡萄糖芽酶抑制劑、胰島素敏化劑、騰 島素促分泌素、降低肝臟葡萄糖生產之化合物、胰島 素、抗肥胖症藥物' HMG-CoA還原酶抑制劑、終驗 酸、膽汁酸結合劑、纖維酸衍生物與抗高血壓劑之組 群。 15. —種醫藥組成物，其包括治療有效量之如申請專利範 圍第1項之多肽、或其功能相等片段、衍生物、及變 異體，與惰性載劑之組合。 16· —種用於治療糖尿病之醫藥組成物，其包括治療有效 量之如申請專利範圍第1項之多肽。 17·如申請專利範圍第16項之醫藥組成物，其中該糖尿 病係選自包括1型糖尿病、2型糖尿病、年輕人成熟 發病型糖尿病、隱性自體免疫糖尿病成人、與妊娠糖 尿病之組群。 -86 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規^ (210 x 297公楚y 200409641 AS BS C8 ----~-- 六、申請專利範圍 18· —種用於治療X症候婵之醫藥組成物，其包括治療 有效量之如申請專利範園第1項之多肽。 19· 一種用於治療糖尿病相關病症之醫藥組成物，其包括 治療有效量之如申請專利範圍第1項之多肽。 5 20·如申請專利範圍第19頊之醫藥組成物，其中該糖尿 病相關病症係選自包括高血糖症、高姨島素血症、葡 萄糖耐力受損、空腹葡萄糠障礙、血脂異常、高三酸 甘油酯血症、與胰島素柷15且之組群。 21· 一種用於治療糖尿病之醫藥組成物，其包括治療有效 10 量之如申請專利範圍第1頊之多肽與一或多種醫藥劑 之組合。 22. 如申請專利範圍第21頊之醫藥組成物，其中該醫藥 劑係選自包括PPAR作用劑、磺醯脲藥物、非磺醯脲 促分泌素、α-葡萄糖苷酶抑制劑、胰島素敏化劑、胰 15 島素促分泌素、降低肝緘葡萄糖生產之化合物、胰島 素與抗肥胖症藥物之組_ ° 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 23. 如申請專利範圍第22頊I醫藥組成物，其中該糖尿 病係選自1型糖尿病、2贺糖尿病、年輕人成熟發病 型糖尿病、隱性自體免疫糖尿病成人、與妊娠糖尿病 20 之組群。 24· —種用於治療Χ症候群之醫藥組成物，其包括治療 有效量之如申請專利範園第1項之多肽與一或多種醫 藥劑之組合。 25·如申請專利範圍第24頊之醫藥組成物，其中該醫藥 -87 一 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公爹） 六、申請專利範圍 5 10 15 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 20 劑係選自包括PPAr ^作用劑、續醒脲藥物、非碍酿朋 葡萄糖苷酶抑制劑、胰島素敏化 =，分泌素、降低肝臟葡萄糖生產之化合物、騰島 素與抗肥胖症藥物之組群。 26_:疼種古用於f療糖尿病相關病症之醫藥組成物，其包括 效1之如申請專利範圍帛1項之多肽與-或多 種醫藥劑之組合。 27 Γ/請專利範圍第26項之醫藥組成物，其中該糖展 :相關病症係選自包括高血糖症、高騰島素血症、葡 萄糖耐力受損、空腹葡萄糖障礙、血脂異常、高三酸 甘油酯血症、與胰島素抗阻之組群。 28. 如申請專利範圍第27項之醫藥組成物，其中該醫藥 劑係選自包括PPAR作用劑、顧脲藥物、非確酿腺 促分泌素、α-葡萄糖苦酶抑制劑、姨島素敏化劑、姨 島素促分泌素、降低肝臟葡萄糖生產之化合物、胰島 素與抗肥胖症藥物之組群。 29. -種用於治療糖尿病、χ症候群、或糖尿病相關病症 之醫藥組成物，其包括治療有效量之如申請專利範圍 第1項之多肽與一或多種選自包括HMG-coA還原酶 抑制劑、菸鹼酸、膽汁酸結合劑、纖維酸衍生物、與 抗Γ%血壓劑之醫藥劑之組合。 30. 如申請專利範圍第29項之醫藥組成物，其中該糖尿 病相關病症係選自包括高血糖症、高胰島素血症、葡 萄糖耐力受損、空腹葡萄糖障礙、血脂異常、高三酸 88 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 200409641 A8 B8 C8 -----—-— D8 _ 六、申請專利範圍 甘油酯血症、與胰島素抗阻之組群。 31.如申請專利範圍第21至3〇項之醫藥組成物，其中該 如申清專利範圍第1項之多肽及一或多種醫藥劑係呈 早一醫樂劑量調配物投與。 5 32.-種用於治療或預防糖尿病續發病因之醫藥組成物， 其包括治療有效量之如申請專利範圍第丨項之多肽。 33·如申請專利範圍第32項之醫藥組成物，其中該續發 病因係選自包括糖皮質激素過量、生長激素過量、嗜 鉻細胞瘤、與藥物誘發之糖尿病之組群。 10 34.-種用於治療或預防糖尿病續發病因之醫藥組成物， 其包括治療有效量之如申請專利範圍第丨項之多肽與 一或多種醫藥劑之組合。 35·如申請專利範圍第34項之醫藥組成物，其中該醫藥 劑係選自包括PPAR作用劑、磺醯脲藥物、非磺醯脲 15 促分泌素、葡萄糖苷酶抑制劑、胰島素敏化劑、胰 島素促分泌素、降低肝臟葡萄糖生產之化合物、胰島 素與抗肥胖症藥物之組群。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 36· —種用於治療呼吸性疾病之醫藥組成物，其包括治療 有效量之如申請專利範圍第1項之多肽。 20 37. —種用於治療肥胖症之醫藥組成物，其包括治療有效 量之如申請專利範圍第1項之多肽。 3 8 · —種用於调控食慾之醫藥組成物，其包括治療有效量 之如申請專利範圍第1項之多肽。 39. —種用於治療心血管疾病之醫藥組成物，其包括治療 -89 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 200409641 A8 B8 C8 _D8_ 六、申請專利範圍 有效量之如申請專利範圍第1項之多肽。 40. —種用於治療脂質與碳水化合物代謝失調之醫藥組成 物，其包括治療有效量之如申請專利範圍第1項之多 肽。 5 41. —種用於治療睡眠失調之醫藥組成物，其包括治療有 效量之如申請專利範圍第1項之多肽。 42. —種用於治療男性生殖失調之醫藥組成物，其包括治 療有效量之如申請專利範圍第1項之多肽。 43. —種用於治療生長失調或能量衡定失調之醫藥組成 10 物，其包括治療有效量之如申請專利範圍第1項之多 肽。 44. 一種用於治療免疫疾病之醫藥組成物，其包括治療有 效量之如申請專利範圍第1項之多肽。 45. —種用於治療自體免疫疾病之醫藥組成物，其包括治 15 療有效量之如申請專利範圍第1項之多肽。 46. —種用於治療急性與慢性炎症之醫藥組成物，其包括 治療有效量之如申請專利範圍第1項之多肽。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 47. —種用於治療敗血性休克之醫藥組成物，其包括治療 有效量之如申請專利範圍第1項之多肽。 20 48. —種用於對有其需要的實驗對象激發胰島素以依賴葡 萄糖的方式釋出之醫藥組成物，其包括如申請專利範 圍第1項之多肽。 49. 一種基因治療組成物，其包括如申請專利範圍第2項 之多核苷酸與治療有效的基因治療載體之組合。 -90 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 200409641 A8 B8 C8 _D8_ 六、申請專利範圍 50. 如申請專利範圍第1項之多肽，係用於治療及/或預 防糖尿病與糖尿病相關病症。 51. —種藥劑，其含有至少一種如申請專利範圍第1項之 多肽，與至少一種醫藥上可接受、醫藥上安全之載劑 5 或賦形劑之組合。 52. —種使用如申請專利範圍第1項之多肽製造用於治療 及/或預防糖尿病與糖尿病相關病症藥劑之用途。 53. 如申請專利範圍第51項之多肽，係用於治療及/或預 防糖尿病。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐）
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