TH62696B - วิธีการสำหรับการผลิตกรดแอล-อะมิโนโดยใช้แบคทีเรียที่มีการแสดงออกของยีน pckA ที่ถูกทำให้เด่นขึ้น - Google Patents

Abstract

DC60 (28/06/47) การประดิษฐ์นี้เกี่ยวข้องกับวิธีการสำหรับการผลิตกรดแอล-อะมิโน, เช่น แอล-ทริปโตแฟน, แอล-เฟนิฃ อะลานีน และ แอล-ไทโรซีน, โดย ใช้แบคทีเรียของตระกูล Escherichia, และ โดยที่ผลการผลิต กรด แอล-อะมิโนของแบคทีเรียที่กล่าวถึงถูกทำให้เด่นขึ้นโดยการ ทำให้เด่นขึ้นของการทำหน้าที่ของ PEP คาร์บอกซีไคเนส, ที่ซึ่ง ถูกถอดรหัสโดยยีน pckA

Claims (3)

ข้อถือสิทธฺ์ (ทั้งหมด) ซึ่งจะไม่ปรากฏบนหน้าประกาศโฆษณา :------27/10/2560------(OCR) หน้า 1 ของจำนวน 2 หน้า ข้อถือสิทธิ 1. วิธีการสำหรับการผลิตกรดอะโรเมติกแอล-อะมิโนที่ถูกเลือกจากกลุ่มที่ประกอบด้วย แอล-ทริปโตแฟน, แอล-เฟนิลอะลานีน และ แอล-ไทโรซีนโดยการหมักที่ประกอบรวมด้วยการเพาะ เลี้ยงแบคทีเรียที่ผลิตกรดแอล-อะมิโน Escherichia coli ที่ซึ่ง แบคทีเรียดังกล่าวได้ถูกดัดแปลงเพื่อ ให้มีการทำหน้าที่เพิ่มขึ้นของฟอสโฟอีนอล ไพรูเวท (PEP) คาร์บอกซีไคเนส, ในอาหารเพาะเลี้ยงที่ ทำให้เกิดการสะสมของ กรดแอล-อะมิโน ในอาหารเพาะเลี้ยง และการเก็บรวมกรดแอล-อะมิโน จากอาหารเพาะเลี้ยง ที่ซึ่ง การทำหน้าที่ของ PEP คาร์บอกซีไคเนสถูกทำให้เพิ่มขึ้นโดยการดัด แปลงลำดับที่ควบคุมการแสดงออกของยีน PEP คาร์บอกซีไคเนสบนโครโมโซมของแบคทีเรียนั้น เพื่อที่การแสดงออกของยีนนั้นจะถูกทำให้เพิ่มขึ้น, หรือ โดยการเพิ่มจำนวนสำเนาของยีน, และ ที่ ซึ่ง แบคทีเรียยังถูกดัดแปลงเพื่อให้มีการแสดงออกที่เพิ่มขึ้นของกรอบอ่านเปิด yddG โดยการเพิ่ม จำนวนสำเนาของ กรอบอ่านเปิด yddG ที่ซึ่ง ยีน yddG สามารถถูกโคลนโดยการใช้ไพรเมอร์ที่ แสดงอยู่ใน SEQ ID NO 7 และ 8 2. วิธีการตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่ง ตัวกระตุ้นตามธรรมชาติของยีน PEP คาร์บอกซีไคเนส ดังกล่าว ถูกแทนที่ด้วยตัวกระตุ้นที่แรงมากกว่า 3. วิธีการตามข้อถือสิทธิที่ 2 ที่ซึ่ง ตัวกระตุ้นที่แรงมากกว่าดังกล่าวคือ ตัวกระตุ้น ppsA ซึ่งถูกกระตุ้นด้วย FruR โปรตีน 4. วิธีการตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซึ่ง การเรียงตัวไซน์-ดัลกาโน (SD) ตามธรรมชาติของยีน PEP คาร์บอกซีไคเนส ดังกล่าว ถูกแทนที่ด้วยการเรียงตัว SD ที่มีประสิทธิภาพมากขึ้น 5. วิธีการตามข้อถือสิทธิที่ 4 ที่ซึ่งการเรียงตัว SD ที่มีประสิทธิภาพมากขึ้นดังกล่าวคือ การ เรียงตัว SD ที่มียีน (สูตร)10 จากฟาจ์ก T7 1.ในบัญชีการเรียงตัว (B) โปรตีนซึ่งประกอบรวมด้วยการเรียงตัวกรดอะมิโนที่แสดงไว้ใน SEQ ID NO:2 ใน บัญชีการเรียงตัวที่รวมถึง การลบออก, การแทนที่, การแทรก หรือ การเติมใส่ของหนึ่งถึงสิบกรดอะ มิโน และ ซึ่งมีการทำหน้าที่ของ PEP คาร์บอกซีไคเนส 1.หรอตัวทดสอบที่ซึ่งสามารถถูกเตรียมขึ้นจากการเรียงตัวนิวคลีโอไทด์ดังกล่าว ภายใต้สภาวะเข้มงวด และ ถอดรหัสโปรตีนที่มีการทำหน้าที่ของ PEP คาร์บอกซีไคเนส โดยที่ สภาวะเข้มงวดเป็นสภาวะที่ซึ่งการล้างถูกทำที่ 60๐ซ, และ ความเข้มข้นเกลือที่ตรงกับ 1 X SSC และ0.1% SDS 8. วิธีการตามข้อใดข้อหนึ่งในข้อถือสิทธิที่ 1 ถึง 5 ที่ซึ่ง ยีน PEP คาร์บอกซีไคเนสถอดรหัส โปรตีนซึ่งประกอบรวมด้วยการเรียงตัวของกรดอะมิโนที่แสดงใน SEQ ID NO:2 ในบัญชีการเรียง ตัว 1.1 0. วิธีการตามข้อใดข้อหนึ่งในข้อถือสิทธิที่ 1 ถึง 9 ที่ซึ่ง แบคทีเรียมีการแสดงออกที่เพิ่ม ขึ้นของยีนอื่นๆ สำหรับการสังเคราะห์ชีวภาพกรดอะโรเมติกอะมิโน ------------ แก้ไข 4 สิงหาคม 2560 1. วิธีการสำหรับการผลิตกรดอะโรเมติกแอล-อะมิโนที่ถูกเลือกจากกลุ่มที่ประกอบด้วย แอล-ทริปโตแฟน, แอล-เฟนิลอะลานีน และ แอล-ไทโรซีนโดยการหมักที่ประกอบรวมด้วยการเพาะ เลี้ยงแบคทีเรียที่ผลิตกรดแอล-อะมิโน Escherichia coli ที่ซึ่ง แบคทีเรียดังกล่าวได้ถูกดัดแปลงเพื่อ ให้มีการทำหน้าที่เพิ่มขึ้นของฟอสโฟอีนอล ไพรูเวท (PEP) คาร์บอกซีไคเนส, จากอาหารเพาะเลี้ยง ที่ซึ่ง การทำหน้าที่ของ PEP คาร์บอกซีไคเนสถูกทำให้เพิ่มขึ้นโดยการดัดแปลงลำดับที่ควบคุมการ แสดงออกของยีน PEP คาร์บอกซีไคเนสบนโครโมโซมของแบคทีเรียนั้นเพื่อที่การแสดงออกของยีน นั้นจะถูกทำให้เพิ่มขึ้น, หรือ โดยการเพิ่มจำนวนสำเนาของยีน, และ ที่ซึ่ง แบคทีเรียยังถูกดัดแปลง เพื่อให้มีการแสดงออกที่เพิ่มขึ้นของกรอบอ่านเปิด (yddG) โดยการเพิ่มจำนวนสำเนาของ กรอบ อ่านเปิด yddG ที่ซึ่ง ยีน yddG สามารถถูกโคลนโดยการใช้ไพรเมอร์ที่แสดงอยู่ใน SEQ ID NO 7 และ 8 ---------- 1. แบคทีเรียที่ผลิตกรดแอล-อะมิโนของตระกูล Escherichia, โดยที่แบคทีเรียได้ถูกดัด แปลงเพื่อให้มีการทำหน้าที่ที่เด่นขึ้น ของ PEP คาร์บอกซีไคเนส 2. แบคทีเรียตามข้อถือสิทธิข้อ 1 โดยที่การทำหน้าที่ ของ PEP คาร์บอกซีไคเนสถูกทำให้ เด่นขึ้นโดยการดัดแปลงการเรียง ตัวควบคุมการแสดงออกของยีน PEP คาร์บอกซีไคเนสบน โครโมโซมของ แบคทีเรียเพื่อให้การแสดงออกของยีนถูกทำให้เด่นขึ้น หรือ โดย การเพิ่มจำนวนชุด ทำซ้ำของยีนนั้น 3. แบคทีเรียตามข้อถือสิทธิข้อ 2 โดยที่ที่ตัวกระตุ้นตามธรรม ชาติของยีนที่กล่าวถึงถูก แทนที่ด้วยตัวกระตุ้นที่แรงมากกว่า 4. แบคทีเรียตามข้อถือสิทธิข้อ 2 โดยที่การเรียงตัว SD ตามธรรม ชาติของยีนที่กล่าวถึง ถูกแทนที่ด้วยการเรียงตัว SD ตัวที่มี ประสิทธิภาพมากกว่า 5. แบคทีเรียตามข้อใดข้อหนึ่งของข้อถือสิทธิข้อ 2 ถึง ข้อ 4 โดยที่ ยีน PEPคาร์บอกซีไคเน สมีต้นกำเนิดมาจากแบคทีเรียของ ตระกูล Escherichia 1.ในบัญชี การเรียงตัวที่รวมถึงการหักออก,การ แทนที่, การเติมใส่ หรือ การเพิ่มของกรดอะมิโนตัวหนึ่ง หรือ หลายตัว, และ ที่ซึ่งมีการทำหน้าที่ของ PEPคาร์บอกซีไคเนส 1. หรือตัวทดสอบที่ ซึ่งสามารถถูกเตรียมขึ้นจากการเรียงตัวนิวคลีโอไทด์นั้นภายใต้ สภาวะเข้มงวด และ ถอดรหัสโปรตีนที่มีการทำหน้าที่ของ PEPคาร์ บอกซีไคเนส 8. แบคทีเรียตามข้อถือสิทธิข้อ 7 โดยที่สภาวะเข้มงวดเป็นสภาวะ ที่ซึ่งการล้างถูกทำที่ 60 ํC, และ ความเข้มข้นเกลือ ที่ตรงกับ 1x SSC และ 0.1% SDS 9. แบคทีเรียตามข้อใดข้อหนึ่งของข้อถือสิทธิ ข้อ 1 ถึง ข้อ8 โดยที่แบคทีเรียถูกดัดแปลง ต่อไปเพื่อให้มีการ แสดงออกที่เด่นขึ้นของกรอบอ่านเปิด yddG 1 0. แบคทีเรียตามข้อใดข้อหนึ่งของข้อถือสิทธิ ข้อ 1 ถึง ข้อ 9 โดยที่กรดแอล-อะมิโนเป็น กรดอะโรเมติกแอล-อะมิ โนที่ถูกเลือกจากกลุ่มที่ประกอบด้วยแอล-ทริปโตแฟน, แอล-เฟนิฃอะ ลา นีน และ แอล-ไทโรซีน 1

1. วิธีการสำหรับการผลิตกรดอะโรเมติกแอล-อะมิโน ที่ประกอบด้วย การเพาะเลี้ยง แบคทีเรียตามข้อใดข้อหนึ่งของข้อถือสิทธิ ที่ 1 ถึง 10 ในตัวกลางเพาะเลี้ยงเพื่อทำให้เกิดการสะสม ของกรด แอล-อะมิโนในตัวกลางเพาะเลี้ยงนั้น และ การเก็บรวมกรดแอล-อะมิ โนจากตัวกลางเพาะ เลี้ยงนั้น 1

2. วิธีการตามข้อถือสิทธิข้อ 11 โดยที่กรดแอล-อะมิโนเป็นกรดอะ โรเมติกแอล-อะมิโนที่ ถูกเลือกจากกลุ่มที่ประกอบด้วยแอล-ทริป โตแฟน, แอล-เฟนิลอะลานีน และ แอล-ไทโรซีน 1

3. วิธีการตามข้อถือสิทธิข้อ 12 โดยที่แบคทีเรียมีการแสดงออก ที่ถูกทำใหเด่นขึ้นของยีน สำหรับการสังเคราะห์ชีวภาพกรดอะโรเ มติกอะมิโน