TH23117U - ชุดตรวจวัดเชื้อลิสทีเรีีย โมโนไซโตจิเนส (Listeria monocytogenes) - Google Patents

Abstract

ชุดตรวจวัดเชื้อลิสทีเรีย โมโนไซโตจิเนส (Listeria monocytogenes) ประกอบด้วย นํ้ายาขวดที่หนึ่ง คือ สารผสมสำหรับตกตะกอนโปรตีนในนํ้านม นํ้ายาขวดที่สอง คือ สารแขวนลอยของอนุภาคนาโนทองประจุ บวกที่ติดฉลากด้วยแอนติบอดีต่อเชื้อลิสทีเรีย โมโนไซโตจิเนส (Listeria monocytogenes) และ1นายาขวดที่ สาม คือ สารละลายโซเดียมอะซิเตตบัฟเฟอร์ (sodium acetate buffer) ที่มีพีเอช (pH) 5.0-5.5 เพื่อพัฒนา ชุดตรวจวัดเชื้อลิสทีเรีย โมโนไซโตจิเนส {Listeria monocytogenes) ในนํ้านม โดยใช้อนุภาคนาโนทองประจุ บวกติดฉลากกับแอนติบอดีที่จำเพาะกับเชื้อลิสทีเรีย โมโนไซโตจิเนส (Listeria monocytogenes) ในการ ตรวจวัดเชื้อ โดยใช้เวลาตรวจวัด 15 นาที สามารถอ่านผลบวกได้ด้วยตาเปล่า

Claims (5)

1. ชุดตรวจวัดเชื้อลิสทีเรีย โมโนไซโตจิเนส (Listeria monocytogenes) ประกอบด้วย นํ้ายาขวดที่หนึ่ง คือ สารผสมสำหรับตกตะกอนโปรตีน ประกอบด้วย กรดอะซิติกที่มีดวามเข้มข้น 20 เปอร์เซ็นต์ ผสมกับกรดไตรคลอโรอะซิติกที่มีความเข้มข้น 25 เปอร์เซ็นต์ ในอัตราส่วน 1:1-5 นํ้ายาขวดที่สอง คือ สารแขวนลอยของอนุภาคนาโนทองประจุบวกที่ติดฉลากด้วยแอนติบอดีต่อเชื้อ ลิสทีเรีย โมโนไซโตจิเนส (Listeria monocytogenes) โดยมีความเข้มข้น 4-6 นาโนโมลาร์ นํ้ายาขวดที่สาม คือ สารละลายโซเดียมอะซิเตตบัฟเฟอร์ (sodium acetate buffer) ที่มีพีเอช (pH) 5.0-5.5 และมีความเข้มข้น 0.1-0.2 โมลาร์

2. ชุดตรวจวัดเชื้อลิสทีเรีย โมโนไซโตจิเนส (Listeria monocytogenes) ตามข้อถือสิทธิที่ 1 ที่ซี่ง นํ้ายาขวดที่สอง มีขั้นตอนการเตรียมดังนี้ ก. การสังเคราะห์อนุภาคนาโนทองแบบทรงกลมประจุบวก เริ่มจากนำสารไฮโดรเจน เตตระคลอโรออเรทไตรไฮเดรท (Hydrogen tetrachloroaurate (III) trihydrate) มาละลายในนํ้าปราศจากไอออน ให้มีความเข้มข้น 1 มิลลิโมลาร์ จากนั้นเติมสารละลายซีสเทียมีน ไฮโดรคลอไรด์ (cysteamine hydrochloride) ลงในส่วนผสม ทั้งหมด และกวนผสมให้เข้ากันเป็นเวลา 15-30 นาที จากนั้นเติมโซเดียมโบโรไฮไดรด์ (Sodium borohydride) ที่มีความเข้มข้น 10-20 มิลลิโมลาร์ เป็นเวลา 10-30 วินาที และกวนผสมทั้งหมด เป็นเวลา 2-4 ชั่วโมง นำสารแขวนลอยที่ได้มากรองด้วยฟิลเตอร์เมมเบรน ขนาด 0.22-0.45 ไมโครเมตร จะได้อนุภาค นาโนทองแบบทรงกลมประจุบวก ที่มีความเข้มข้นเท่ากับ 16-20 นาโนโมลาร์ ข. การแลกเปลี่ยนเอมีนลิแกนด์บนอนุภาคนาโนทองทรงกลม เติมสารละลายเอมีนเทอร์มิเนตลิแกนด์ ที่มีความเข้มข้น 10-20 ไมโครโมลาร์ ลงในอนุภาคนาโน ทองที่ได้จากข้อ ก แล้วกวนสารละลายที่อุณหภูมิห้อง จากนั้นเติมสารละลายไฮโดรคลอริก (hydrochloric) ที่ความเข้มข้น 1 โมลาร์ จนสารละลายมี ค่าพีเอช (pH) เท่ากับ 5.0 แล้วกวนสารละลายทั้งหมด เป็นเวลา 48-72 ชั่วโมง ที่อุณภูมิห้องในสภาวะที่ ปราศจากออกซิเจน จะได้สารแขวนลอยอนุภาคนาโนทอง แล้วนำสารแขวนลอยอนุภาคนาโนทองที่ได้ไปแยกบริสุทธิ์ ด้วยถุงไดอะไลซิส (dialysis) เซลลูโลส ที่มี ขนาดรูพรุนคัดเลือกโมเลกุล (molecular weight cut-off) ขนาด 12000-14000 โดยเปลี่ยนน้ำกลั่นทุก 4-6 ชั่วโมง เป็นเวลา 2-3 วัน นำสารแขวนลอยอนุภาคนาโนทองที่อยู่ภายในถุงไดอะไลซิส (dialysis) เซลลูโลส ไประเหิดนํ้าออก ด้วยเครื่องทำแห้งแบบแช่เยือกแข็ง (freeze dryer) เป็นเวลา 24-48 ชั่วโมง จะได้อนุภาคนาโนทองประจุบวก แบบผงที่มีหมู่ปลายเป็นหมู่เอมีน ค. การตรึงโมโนคลอนอลแอนติบอดีลงบนอนุภาคนาโนทองทรงกลม นำสาร 1-เอทิล-3-(3-ไดเมทิลอะมิโนโพรพิล) คาร์โบไดอิไมด์ ไฮโดรคลอไรด์ (l-ethyl-3-(3- dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride) มาละลายในสารละลายโซเดียมอะซิเตตบัฟเฟอร์ (sodium acetate buffer) จนกระทั่งมีความเข้มข้นเท่ากับ 0.2 โมลาร์ น่าสารเอ็น-ไฮดรอกซีซัคซินิไมด์ (N-hydroxysuccinimide) มาละลายในสารละลายโซเดียมอะซิ เตตบัฟเฟอร์ (sodium acetate buffer) จนกระทั่งมีความเข้มข้นเท่ากับ 0.2 โมลาร์ จากนั้นผสมสารสารละลาย1-เอทิล-3-(3-ไดเมทิลอะมิโนโพรพิล) คาร์โบไดอิไมด์ ไฮโดรคลอไรด์ (l-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride) และสารละลายสารเอ็น-ไฮดรอกซี ซัคซินิไมด์ (N-hydroxysuccinimide) ให้เข้ากัน แล้วเติมสารละลายทั้งหมดลงในอนุภาคนาโนทองประจุบวกที่ได้จากข้อ ข ที่ถูกเจือจางด้วยน้ำ กลั่นจนกระทั่งมีความเข้มข้นเท่ากับ 10-20 มิลลิกรัมต่อมิลลิตร จากนั้นเติมสารละลายโมโนคลอนอลแอนติบอดีที่จำเพาะต่อเชื้อลิสทีเรีย โมโนไซโตจิเบส (Listeria monocytogenes) ลงในส่วนผสมทั้งหมด แล้วผสมให้เข้ากันที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 4-8 ชั่วโมง แล้วเติมสารละลายโซเดียมอะซิเตตบัฟเฟอร์ (sodium acetate buffer) ลงในส่วนผสมทั้งหมด เพื่อหยุดปฏิกิริยา แล้วน่าไปปีนเหวี่ยง ที่ความเร็ว 3500 รอบ/นาที เป็นเวลา 30 นาที นำส่วนของสารละลาย ใสด้านบนทิ้งเพื่อกำจัดส่วนเกินของปฏิกิริยาออก นำตะกอนที่ได้ละลายด้วยสารละลายโซเดียมอะซีเตต บัฟเฟอร์ (sodium acetate buffer) จะได้สารแขวนลอยของอนุภาคนาโนทองประจุบวกที่ติดฉลากด้วย แอนติบอดีต่อเชื้อลิสทีเรีย โมโนไซโตจิเนส (Listeria monocytogenes)

3. ขุดตรวจวัดเชื้อลิสทีเรีย โมโนไซโตจิเนส (Listeria monocytogenes) ตามข้อถือสิทธิที่ 1 หรือ 2 ที่ ซึ่ง โมโนคลอนอลแอนติบอดีที่จำเพาะต่อเชื้อลิสทีเรีย โมโนไซโตจิเนส (Listeria monocytogenes) เตรียม จาก เติมสารละลายโซเดียมอะซิเตตบัฟเฟอร์ (sodium acetate buffer) ลงในโมโนคลอนอลแอนติบอดีที่ จำเพาะต่อเชื้อลิสทีเรีย โมโนไซโตจิเนส (Listeria monocytogenes) จนมีความเข้มข้นเท่ากับ 100-200 ไมโครกรัม/มิลลิลิตร

4. ชุดตรวจวัดเชื้อลิสทีเรีย โมโนไซโตจิเนส (Listeria monocytogenes) ตามข้อถือสิทธิที่ 1 -3 ข้อใด ข้อหนึ่ง ที่ซึ่ง สารละลายโซเดียมอะซิเตตบัฟเฟอร์ (sodium acetate buffer) ที่เหมาะสมคือ มีพีเอช (pH) 5.0-

5.5