TH12409C3 - กระบวนการสร้างห้องสมุดฟอสมิด (fosmid library) ของสิ่งมีชีวิต - Google Patents
กระบวนการสร้างห้องสมุดฟอสมิด (fosmid library) ของสิ่งมีชีวิตInfo
- Publication number
- TH12409C3 TH12409C3 TH1403000167U TH1403000167U TH12409C3 TH 12409 C3 TH12409 C3 TH 12409C3 TH 1403000167 U TH1403000167 U TH 1403000167U TH 1403000167 U TH1403000167 U TH 1403000167U TH 12409 C3 TH12409 C3 TH 12409C3
- Authority
- TH
- Thailand
- Prior art keywords
- dna
- size
- organisms
- target
- phosphid
- Prior art date
Links
Abstract
DC60 (24/06/59) การประดิษฐ์นี้มีจุดมุ่งหมายเพื่อปรับปรุงกระบวนการสร้างห้องสมุดฟอสมิด (fosmid library) ในสิ่งมีชีวิต เพื่อเป็นอีกทางเลือกหนึ่งที่มีขั้นตอนไม่ยุ่งยาก ซึ่งจะช่วยลดระยะเวลาการทำงานลงได้ 1-2 วัน จึงมีผลต่อการลดการใช้ แรงงาน สารเคมี และค่าใช้จ่ายลง โดยที่คุณภาพของห้องสมุดฟอสมิดยังคงดีในระดับมาตรฐานยอมรับได้ เพื่อการนำ ห้องสมุดฟอสมิดไปใช้งานต่อในอนาคต โดยที่กระบวนการตามการประดิษฐ์สามารถประยุกต์ใช้ได้กับดีเอนเอของ สิ่งมีชีวิตทุกชนิดไม่ว่าจะเป็นสิ่งมีชีวิตที่มีจีโนมขนาดเล็ก เช่น จุลินทรีย์ และสามารถใช้ได้ในสิ่งมีชีวิตที่มีจีโนมขนาด ใหญ่ เช่น พืชและสัตว์ เป็นต้น โดยกระบวนการ ประกอบด้วยขั้นตอน ดังนี้ การสกัดดีเอนเอของสิ่งมีชีวิตเป้าหมาย การทำดีเอนเอของสิ่งมีชีวิตเป้าหมาย ให้มีขนาดเล็กลงด้วยวิธีทางการกายภาพ (physical shearing)เพื่อให้ได้ดีเอนเอ ขนาดเหมาะสมในการโคลนนิ่ง โดยประเมินขนาดของดีเอ็นเอเบื้องต้นบนเจลอะกาโรส (agarose gel) การคัดเลือก ดีเอนเอของสิ่งมีชีวิตเป้าหมายบนเจลอะกาโรส เพื่อให้ได้ดีเอนเอขนาดตามที่ต้องการ โดยการแยกดีเอนเอบนเจล อะกาโรสและตัดดีเอนเอบนเจลอะกาโรสในช่วง 30-60 กิโลเบส การสกัดดีเอนเอของสิ่งมีชีวิตเป้าหมายขนาดตามที่ ต้องการออกจากเจลอะกาโรส ด้วยวิธีอิเล็กโทรอีลูชั่น (Electroelution) การทำให้ดีเอนเอของสิ่งมีชีวิตเป้าหมายขนาด ตามที่ต้องการมีความเข้มข้นขึ้น (DNA concentration) ด้วยวิธีการตกตะกอนดีเอนเอด้วยเอทานอลและโซเดียม อะซิเตต การซ่อมแซมด้านปลายของดีเอนเอของสิ่งมีชีวิตเป้าหมายขนาดตามที่ต้องการ (DNA end repair) เพื่อให้ได้ ปลายดีเอนเอที่เหมาะสมในการเชื่อมต่อกับดีเอนเอพาหะ (vector) ที่มีปลายด้านทู่ได้ การเชื่อมชิ้นดีเอนเอของสิ่งมีชีวิต เป้าหมายขนาดตามที่ต้องการที่ซ่อมแซมด้านปลายแล้วเข้ากับดีเอนเอพาหะชนิดฟอสมิด (Ligation) เพื่อสร้างห้องสมุด ฟอสมิด การบรรจุห้องสมุดฟอสมิดลงในตัวฟาส (phage packaging) การโยกย้ายห้องสมุดฟอสมิดเข้าสู่เชื้อแบคทีเรีย Escherichia coli การเก็บห้องสมุดฟอสมิดลงในเพลท (Bacterial storage plate ) ที่ -80 องศาเซลเซียส แก้ไขบทสรุปการประดิษฐ์ 24/06/2559 การประดิษฐ์นี้มีจุดมุ่งหมายเพื่อปรับปรุงกระบวนการสร้างห้องสมุดฟอสมิด (fosmid library) ในสิ่งมีชีวิต เพื่อเป็นทางอีกทางเลือกที่มีขั้นตอนไม่ยุ่งยาก ซึ่งจะช่วยลดระยะเวลาการทำงานลงได้ 1-2 วัน จึงมีผลต่อการลดการใช้ แรงงาน สารเคมี และค่าใช้จ่ายลง โดยมีคุณภาพของห้องสมุดฟอสมิดยังคงดีในระดับมาตรฐานยอมรับได้ เพื่อการนำ ห้องสมุดฟอสมิดไปใช้งานต่อในอนาคต โดยที่กระบวนการตามการประดิษฐ์นี้สามารถประยุกต์ใช้ได้กับดีเอนเอของ สิ่งมีชีวิตทุกชนิดไม่ว่าจะเป็นสิ่งมีชีวิตที่มีจีโอโนมขนาดเล็ก เช่น จุลินทรีย์ และสามารถใช้ได้ในสิ่งมีชีวิตที่มีจีโนมขนาด ใหญ่ เช่น พืชและสัตว์เป็นต้น โดยกระบวนการ ประกอบด้วยขั้นตอน ดังนี้ การสกัดดีเอ็นเอของสิ่งมีชีวิตเป้าหมาย การทำดีเอ็นเอของสิ่งมีชีวิตเป้าหมาย ให้มีขนาดเล็กลงด้วยวิธีการทางภายภาพ (physical shearing)เพื่อให้ได้ดีเอนเอ ขนาดเหมาะสมในการโคลนนิ่ง โดยประเมินขนาดของดีเอ็นเอเบื้องต้นเจลอะกาโรส (agarose gel) การคัดเลือก ดีเอนเอของสิ่งมีชีวิตเป้าหมายบนเจลอะกาโรส เพื่อให้ได้ดีเอนเอขนาดตามที่ต้องการ โดยการแยกดีเอนเอบนเจล อะกาโรสและตัดดีเอนเอบนเจลอะกาโรสในช่วง 30-60 กิโลเบส การสกัดดีเอนเอของสิ่งมีชีวิตเป้าหมายขนาดตามที่ ต้องการออกจากเจลอะกาโรส ด้วยวิธีอิเล็กโทรอีลูชั่น Electroelution) การทำให้ดีเอนเอของสิ่งมีชีวิตเป้าหมายขนาด ตามที่ต้องการมีความเข้มข้นขึ้น (DNA concentration) ด้วยวิธีการตกตะกอนดีเอนเอด้วยเอทานอลและโซเดียม อะซิเตต การซ่อมแซมด้านปลายของดีเอนเอของสิ่งมีชีวิตเป้าหมายขนาดตามที่ต้องการ (DNA end repair) เพื่อให้ได้ ปลายดีเอนเอที่เหมาะสมในการเชื่อมต่อกับดีเอนเอพาหะ (vector) ที่มีปลายด้านทู่ได้ การเชื่อมชิ้นดีเอนเอของสิ่งมีชีวิต เป้าหมายขนาดตามที่ต้องการที่ซ่อมซ่อมด้านปลายแล้วเข้ากับดีเอนเอพาหะชนิดฟอสมิด (Ligation) เพื่อสร้างห้องสมุด ฟอสมิด การบรรจุห้องสมุดฟอสมิดลงในตัวฟาส (phage packaging) การโยกย้ายห้องสมุดฟอสมิดเข้าสู่เชื้อแบคทีเรีย Escherichia coli การเก็บห้องสมุดฟอสมิดลงในเพลท (Bacterial storage plate ) ที่ -80 องศาเซลเซียส ------------------------------------------------------------------ การประดิษฐ์นี้มีจุดมุ่งหมายเพื่อปรับปรุกระบวนการสร้างห้องสมุดฟอสมิด (fosmid library) ในสิ่งมีชีวิต เพื่อเป็นทางอีกทางเลือกที่มีขั้นตอนไม่ยุ่งยาก ซึ่งจะช่วยลดระยะเวลาการทำงานลงได้ 1-2 วัน จึงมีผลต่อการลดการใช้ แรงงาน สารเคมี และค่าใช้จ่ายลง โดยมีคุณภาพของห้องสมุดฟอสมิดยังคงดีในระดับมาตรฐานยอมรับได้ เพื่อการนำ ห้องสมุดฟอสมิดไปใช้งานต่อในอนาคต โดยที่กระบวนการตามการประดิษฐ์สามารถประยุกต์ใช้ได้กับดีเอนเอของ สิ่งมีชีวิตทุกชนิดไม่ว่าจะเป็นสิ่งมีชีวิตที่มีจีโอโนมขนาดเล็ก เช่น จุลินทรีย์และสามารถใช้ได้ในสิ่งมีชีวิตที่มีจีโนมขนาด ใหญ่ เช่น พืชและสัตว์เป็นต้น โดยกระบวนการ ประกอบด้วยขั้นตอน ดังนี้ การสกัดดีเอ็นเอของสิ่งมีชีวิตเป้าหมาย การทำดีเอ็นเอของสิ่งมีชีวิตเป้าหมายให้มีขนาดเล็กลงด้วยวิธีทางการภายภาพ (physical shearing)เพื่อให้ได้ดีเอนเอ ขนาดเหมาะสมในการโคลนนิ่ง โดยประเมินขนาดของดีเอ็นเอเบื้องต้นเจลอะกาโรส (agarose gel) การคัดเลือก ดีเอนเอของสิ่งมีชีวิตเป้าหมายบนเจลอะกาโรส เพื่อให้ได้ดีเอนเอขนาดตามที่ต้องการโดยการแยกดีเอนเอบนเจล อะกาโรสและตัดดีเอนเอบนเจลอะกาโรสในช่วง 30-60 กิโลเบส การสกัดดีเอนเอของสิ่งมีชีวิตเป้าหมายขนาดตามที่ต้องการออกจากเจลอะกาโรส ด้วยวิธีอิเล็กโทรอีลูชั่น Electroelution) การทำให้ดีเอนเอของสิ่งมีชีวิตเป้าหมายขนาดตามที่ต้องการมีความเข้มข้นขึ้น DNA concentration) ด้วยวิธีการตกตะกอนดีเอนเอด้วยเอทานอลและโซเดียม อะซิเตต การซ่อมแซมด้านปลายของดีเอนเอของสิ่งมีชีวิตเป้าหมายขนาดตามที่ต้องการ (DNA end repair) เพื่อให้ได้ปลายดีเอนเอที่เหมาะสมในการเชื่อมต่อกับดีเอนเอพาหะ (vector) ที่มีปลายด้านทู่ได้ การเชื่อมชิ้นดีเอนเอของสิ่งมีชีวิตเป้าหมายขนาดตามที่ต้องการที่ซ่อมซ่อมแซมด้านปลายแล้วเข้ากับดีเอนเอพาหะชนิดฟอสมิด (Ligation) เพื่อสร้างห้องสมุดฟอสมิด การบรรจุห้องสมุดฟอสมิดลงในตัวฟาส (phage packaging) การโยกย้ายห้องสมุดฟอสมิดเข้าสู่เชื้อแบคทีเรีย Escherichia coli การเก็บห้องสมุดฟอสมิดลงในเพลท (Bacterial storage plate ) ที่ -80 องศาเซลเซียส
Claims (2)
1. กระบวนการสร้างห้องสมุดฟอสมิดของสิ่งที่ซึ่งประกอบด้วยขั้นตอนดังนี้ 1.1 การสกัดดีเอนเอของสิ่งมีชีวิตเป้าหมาย เลือกได้จาก วิธีการเตรียมในรูปของดีเอนเอฝังอยู่ในเจล (plug) หรือ การเตรียมด้วยซีแทบ (cetyl trimethyl ammonium bromide; CTAB) หรือ การเตรียมด้วย แอลคาไลน์ไลน์ไลซิส (alkaline lysis) อย่างใดอย่างหนึ่ง 1.2 การทำดีเอนเอของสิ่งมีชีวิตเป้าหมาย ให้มีขนาดเล็กลงด้วยวิธีการทางกายภาพ (physical shearing) เลือกได้จาก วิธีการดูดขึ้นดูดลง (pipetting) หรือ การเพิ่มความเย็นแล้วลดความเย็น (freeze thaw cycle) เพื่อให้ได้ดีเอนเอขนาดเหมาะสมในการโคลนนิ่ง โดยประเมินขนาดของดีเอนเอเบื้องต้นบน เจลอะกาโรส (agarose gel) 1.3 การคัดเลือกดีเอนเอของสิ่งมีชีวิตเป้าหมายบนเจลอะกาโรส เพื่อให้ได้ดีเอนเอขนาดที่ต้องการ โดยการแยกดีเอนเอเจลอะกาโรสและตัดดีเอนเอบนเจลอะกาโรสในช่วง 30-60 กิโลเบส 1.4 การสกัดดีเอนเอของสิ่งมีชีวิตเป้าหมายขนาดตามที่ต้องการออกจากเจลอะกาโรส ด้วยวิธีอิเล็กโทร อีลูชั่น (Electroelution) 1.5 การทำให้ดีเอนเอของสิ่งมีชีวิตเป้าหมายขนาดตามที่ต้องการมีความเข้มข้นขึ้น (DNA concentration) ด้วยวิธีการตกตะกอนดีเอนเอด้วยเอทานอลและโซเดียมอะซิเตต 1.6 การซ่อมแซมด้านปลายของดีเอนเอของสิ่งมีชีวิตเป้าหมายขนาดตามที่ต้องการ (DNA end repair) เพื่อให้ได้ปลายดีเอนเอที่เหมาะสมในการเชื่อมต่อกับดีเอนเอพาหะ (vector) ที่มีปลายด้านทู่ได้ 1.7 การเชื่อมชิ้นดีเอนเอของสิ่งมีชีวิตเป้าหมายขนาดตามที่ต้องการที่ซ่อมแซมด้านปลายแล้วเข้ากับ ดีเอาเอพาหะชนิดฟอสมิด (Ligation) เพื่อสร้างห้องสมุดฟอสมิด 1.8 การบรรจุห้องสมุดฟอสมิดลงในตัวฟาส (phage packaging) 1.9 การโยกย้ายห้องสมุดฟอสมิดเข้าสู่เชื้อแบคทีเรีย Escherichia coli 1.10 การเก็บห้องสมุดฟอสมิดลงในเพลท (Bacterial storahe plate) ที่ -80 องศาเซลเซียส
2. กระบวนการสร้างห้องสมุดฟอสมิดของสิ่งมีชีวิตตามข้อถือสิทธิ 1 ที่ซึ่งสิ่งมีชีวิตเป้าหมายเลือกได้จาก พืช หรือ สัตว์ หรือจุลินทรีย์ อย่างใดอย่างหนึ่ง ------------------------------------------------------------------------ 1.กระบวนการสร้างห้องสมุดฟอสมิดของสิ่งมีชีวิตที่ซึ่งประกอบด้วยขั้นตอนดังนี้ 1.1 การสกัดดีเอนเอของสิ่งมีชีวิตเป้าหมาย 1.2 การทำดีเอนเอของสิ่งมีชีวิตเป้าหมาย ให้มีขนาดเล็กลงด้วยวิธีการทางกายภาพ (physical shearing) เพื่อให้ได้ดีเอนเอขนาดเหมาะสมในการโคลนนิ่ง โดยประเมินขนาดของดีเอ็นเอเบื้องต้นเจล อะกาโรส (agarose gel) 1.3 การคัดเลือกดีเอนเอของสิ่งมีชีวิตเป้าหมายบนเจลอะกาโรส เพื่อให้ได้ดีเอนเอขนาดตามที่ต้องการ โดยการแยกดีเอนเอบนเจลอะกาโรสและตัดดีเอนเอบนเจลอะกาโรสในช่วง 30-60 กิโลเบส 1.4การสกัดดีเอนเอของสิ่งมีชีวิตเป้าหมายขนาดตามที่ต้องการออกจากเจลอะกาโรส ด้วยวิธีอิเล็กโทร อีลูชั่น Electroelution) 1.5 การทำให้ดีเอนเอของสิ่งมีชีวิตเป้าหมายขนาดตามที่ต้องการมีความเข้มข้นขึ้น DNA concentration) ด้วยวิธีการตกตะกอนดีเอนเอด้วยเอทานอลและโซเดียมอะซิเตต 1.6 การซ่อมแซมด้านปลายของดีเอนเอของสิ่งมีชีวิตเป้าหมายขนาดตามที่ต้องการ (DNA end repair) เพื่อให้ได้ปลายดีเอนเอที่เหมาะสมในการเชื่อมต่อกับดีเอนเอพาหะ (vector) ที่มีปลายด้านทู่ได้ 1.7 การเชื่อมชิ้นดีเอนเอของสิ่งมีชีวิตเป้าหมายขนาดตามที่ต้องการที่ซ่อมซ่อมแซมด้านปลายแล้วเข้ากับ ดีเอนเอพาหะชนิดฟอสมิด (Ligation) เพื่อสร้างห้องสมุดฟอสมิด 1.8 การบรรจุห้องสมุดฟอสมิดลงในตัวฟาส (phage packaging) 1.9 การโยกย้ายห้องสมุดฟอสมิดเข้าสู่เชื้อแบคทีเรีย Escherichia coli 1.10 การเก็บห้องสมุดฟอสมิดลงในเพลท (Bacterial storage plate ) ที่ -80 องศาเซลเซียส
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| TH12409C3 true TH12409C3 (th) | 2017-02-10 |
| TH12409A3 TH12409A3 (th) | 2017-02-10 |
Family
ID=
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EA201892810A1 (ru) | Гибридные последовательности нуклеиновых кислот для геномной инженерии | |
| ES2768976T3 (es) | Edición de genoma mediada por nucleasa | |
| MX2018015529A (es) | Etiquetado utilizando transposomas inmovilizados con ligadores. | |
| US8748134B2 (en) | Transcription activator-like effector assembly | |
| CN102061291B (zh) | 一种溶菌酶及其制备和应用 | |
| AU2017286122A1 (en) | Use of Cpf1 endonuclease for plant genome modifications | |
| HRP20201040T1 (hr) | Inženjering složenog genoma omogućen sustavom crispr | |
| MX388092B (es) | Metodos mejorados para la modificacion de acido nucleicos diana. | |
| EP3699280A3 (en) | Novel cas9 systems and methods of use | |
| SG10201807736SA (en) | Composition and method for stabilizing nucleic acids in biological samples | |
| WO2017109167A3 (en) | Reconstitution of dna-end repair pathway in prokaryotes | |
| TH12409C3 (th) | กระบวนการสร้างห้องสมุดฟอสมิด (fosmid library) ของสิ่งมีชีวิต | |
| TH12409A3 (th) | กระบวนการสร้างห้องสมุดฟอสมิด (fosmid library) ของสิ่งมีชีวิต | |
| CN105671061A (zh) | 植物乳杆菌素plnE和plnF的异源表达方法 | |
| CN104313044A (zh) | 零背景克隆载体及其制备方法和应用 | |
| RU2016145258A (ru) | Микроорганизм, обладающий улучшенным уровнем внутриклеточной энергии, и способ продуцирования l-аминокислоты с его помощью | |
| Andreou | Isolation of plasmid DNA from bacteria | |
| CN101200718B (zh) | 类人胶原蛋白基因、其不同重复数的同向串联基因、含有串联基因的重组质粒及制备方法 | |
| Badr et al. | Genome editing by site-directed nucleases and its applications in producing climate change resilient crop plants | |
| EA200600585A1 (ru) | Система селекции, содержащая маркеры селекции, не связанные с устойчивостью к антибиотикам | |
| Vasilyev et al. | The mathematical model of grain drying with the use of electroactivated air | |
| CN111278983A (zh) | 基因敲除方法 | |
| ROCHA et al. | CRISPR/CAS GENOME EDITING: INNOVATIONS AND IMPACTS ON ANIMAL PROTEIN PRODUCTION | |
| Moradian et al. | Construction of T-vector derived from pBluescript ΙΙ SK with a positive selection marker, a rapid system for cloning | |
| CN102286518A (zh) | 构建严谨型t7表达系统宿主菌的方法 |