SU988867A1 - Способ приготовлени посевного материала дл культивировани плесневых грибов вида aSpeRGILLUS аUтамоRI,продуцирующих глюкоамилазу (его варианты) - Google Patents

Способ приготовлени посевного материала дл культивировани плесневых грибов вида aSpeRGILLUS аUтамоRI,продуцирующих глюкоамилазу (его варианты) Download PDF

Info

Publication number
SU988867A1
SU988867A1 SU813322984A SU3322984A SU988867A1 SU 988867 A1 SU988867 A1 SU 988867A1 SU 813322984 A SU813322984 A SU 813322984A SU 3322984 A SU3322984 A SU 3322984A SU 988867 A1 SU988867 A1 SU 988867A1
Authority
SU
USSR - Soviet Union
Prior art keywords
culture
units
activity
nutrient medium
days
Prior art date
Application number
SU813322984A
Other languages
English (en)
Inventor
Татьяна Николаевна Писаренко
Елизавета Алексеевна Двадцатова
Борис Алексеевич Устинников
Вера Ивановна Родзевич
Эльвира Ивановна Бурцева
Наталья Николаевна Воронцова
Маргарита Васильевна Соловьева
Тамара Галиевна Воробьева
Мария Тихоновна Кочубеева
Галина Петровна Калюжка
Владимир Сергеевич Власенко
Леонид Александрович Калюжка
Original Assignee
Всесоюзный Научно-Исследовательский Институт Продуктов Брожения
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Всесоюзный Научно-Исследовательский Институт Продуктов Брожения filed Critical Всесоюзный Научно-Исследовательский Институт Продуктов Брожения
Priority to SU813322984A priority Critical patent/SU988867A1/ru
Application granted granted Critical
Publication of SU988867A1 publication Critical patent/SU988867A1/ru

Links

Landscapes

  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

лени  посевного материала дл  культивировани  плесневых грибов вида Aspergillus awamori, продуцирующих глюкоамилазу, предусматривающему посев продуцента на увлажненную питательную среду, содержащую источник углерода, солодовые ростки и необходимые минеральные соли, выращивание продуцента до обильного спороношени  и последующее культивирование на производственной питательной среде, в качестве источника углерода в твердых питательных средах используют 50-90% пшеничных отрубей и ЦО3Q% муки: кукурузной или чменной, или рисовой, или ржаной, или маниоки или соевой, а процесс выращивани  продуцента ведут в две стадии при различном температурном режиме, поддержива  его на первой стадии в течение 5-6 дней равным 29-31° С, а по до . стижении обильного спороношени  температуру снижают до 20-24 с и осущест вл ют вторую стадию также в течение 5-6 сут с последующей селекцией полученных на этой среде конидий в несколько пассажей, при этом в качестве производственной среды используют высококонцентрированное по углероду зерновое сусло с концентрацией 15-25°Б. При этом при выращивании штамма Asp. awamori 466 селекцию ведут в дв пассажа при повышении активности от 100 ед ГлА/г сухой культуры на стадии выращивани  до 300 ед ГлА/г сухой культуры после второго пассажа Кроме того, увлажнение питательны сред осуществл ют раствором следующих солей, вес.%: NaNOj, 0, (МН4)НР04 0,2-0,3; КН2.Р04 0,22-0,23 КС1 0,11-0,12; MgS04 0,103-0,104; FeS04 0,011-0,015; MnS04 0,05-0,06; CoS04 0,004-0,005; Zn $04 0,0010 ,002; CuS04 0,004-0,005; вода - остальное . Способ приготовлени  посевногй ма териала дд  культивировани  плесневы грибов вида Asp. awamori, продуцирующих глюкоамилазу, предусматривающий посев продуцента на питательную среду , содержащую источник углерода, выращивание продуцента до обильного спороношени  и последующее культивирование на производственной питатель ной среде, посев продуцента осуществл ют на среду, содержащую растворимый крахмал , агар-агар 1-2%, и  чменное сусло 7-8%, а процесс выращивани  ведут в две стадии при различном температурном режиме, поддержива  его на первой стадии в течение 56 дней равным 29-31 С, а по достижении
обильного спороношени  температуру снижают до и осуществл ют вторую стадию в течение 5-6 сут, при этом в качестве производственной питательной среды используют высококонцентрированное по углероду зерновое сусло с концентрацией 15-25 5.
Засев посевного материала в производственную питательную среду осуществл ют в количества 0,001250 ,005 к объему питательной среды.
Предлагаемь1Й способ осуществл ют следующим образом.

Claims (5)

  1. Готов т концентрированную по крахмалу твердую питательную среду, содержащую от 50 до 90 пшеничных отрубей с соответствующей добавкой солодовых ростков или от 40 до 90% маниОки , или ржаной, или  чменной, или рисовой, или кукурузной или соевой муки с соответствующей добавкой солодовых ростков. Увлажн ют твердую среду до 60% влажности или просто водопроводной водой Или раствором солей слёду10щего состава, вес,%: НаНО- Q ,Э, (NH4)2HP04 0,2; 0,22; КС1.0,11 MgS04 0,103; FeS04 0,011; N0804.0,005 CoS04 0,004; ZnS04 0,001; CuS040,001 вода - остальное. Культуру выращивают 5-6 дней при 29-31 С, а затем температуру снижаЮт до 20-24 С и осуществл ют вторую стадию выращивани  также 5-6 дней. После этого осуществл ют селекцию культуры на этой же среде при тех же параметрах и времени. Получают 1 и II пассажи культуры. Готовые пассажи засевают на зерновое сусло, содержащее . Посев продуцента можно осуществл ть на среду, содержащую растворимый крахмал от 2 до 15%, агар-агар 1-2% и  чменное , сусло 7-8%, а затем готовые пассажи засевают на зерновое сусло, содержащее 15-25 Б. Активность посевного материала с применением концентрированных по крахмалу сред варьирует от 100 до 210 ед/г сухой культуры, а количество спор от 2,2 до 4,2 млрд, конидий на 1 г сухой культуры-. Причем наблюдаетс  коррел ци  активации культур с увеличением дозировки крахмала и полное отсутствие коррел ции в отношении спорообразовани . в св зи с этим дл  увеличени  спорообразовани , а также активации конидиального материала, с целью уменьшени  расхода культур, можно добавл ть растворы солей при увлажнении тверды питательных сред. При готовленный посевной материал засевают в производственную среду в ко личестве 0,00125-0,005. Дозировку полученного активированного конидиального посевного материала на высококонцентрированные среды необходимо проводить с учетом конкурентной борьбы за субстрат (т.е. концен трации среды по углероду) и с учетом природы атакуемости субстрата (различные по крахмалу субстраты) , например, дл  различных штаммов Asp awamori в диапазоне от 25 до 100 тыс конидий на 1 мл среды (18-20 Бал к . курузного сусла) и от 800 тыс. до 1 млн. конидий на 1 мл среды (1820 Бал пшеничного,  чменного, рисового , соевого, ржаного сусла). При соблюдении рекомендуемых условий выращивани  и дозировки посевного конидиального материала активность глюкоамилазы в культуральной жидкости на 6-7 сут роста составл ет 300 350 ед/мл культуральной жидкости дл  1 пассажа ед/мл культуральной жидкости, дл  второго пассажа 500-600 ед/мл культуральной жидкости . П р и м е р 1. Питательную среду состо щую из 50% пшеничных отрубей и 501 солодовых ростков, увлажн ют до 60 водопроводной водой, засевают культурой гриба Asp. awamori 66 выращенной на агаризованной среде сл дующего состава, %: сахароза 2, азот нокислый натрий (НаНОз) 0,9Г, однозамещенный фосфорнокислый калии () 6,1, магний сернокислый (MgSO) 0,05; хлористый калий ,(КС) 0,05; сернокислое железо (FeSO 0,001 , агар-агар 2 (при 22С в течение 14 дней). Засе нную культуру выращивают 6 дней при в термостате, а затем выращивают при 2СР С также 6 дней. По сле выращивани  осуществл ют селекц культуры на этой же среде при тех же параметрах температуры и времени. И получают 1 и П пассажи культуры пере севом выращенной культуры на 1 пасса и 1 пассажа на II пассаж. АКТИВНОСТЬ глюкоамилазы готовых посевных культур составл ет 115 ед/г 76 сухой культуры, 220 ед/г сухой культуры Т пассажа, 250 ед/г сухой культуры II пассажа. Ззтем готовую культуру засевают в количестве 70-90 тыс. конидий на 1 мл питательной среды на 18Бал кукурузное сусло. После 7 сут культивировани  активность глюкоамилазы в культуральной жидкости составл ет дл  пассажа 350 ед/мл; 1 пассажа 410 ед/мл, Ш пассажа 550 ед/мл. П р и м е р 2. Питательную среду, состо щую из 50% кукурузной муки и 50% солодовых ростков, приготовл ют, выращивагоу и рассевают на пассажи 1 и f так же, как в примере 1. Полученный конидиальный споровый материал с активностью 250 ед/г сухой культуры засевают 60-80 тыс. конидий на 1 мл питательной среды на кукурузное сусло. После 7 сут культивировани  получают культуральную жидкость с активностью глюкоамилазы: 1 пассажа lOO ед/мл, . II пассажа бОО ед/мл. Примерз. Приготовл ют на косом агаре культуру Asp. awamori на среде, содержащей,вес. %: растворисодержащеи вес. могр крахмала lOi 8 Бал  чменное сусло , агар-агар 2. Культуру выращивают при тех же услови х температуры и вре мени, что и в примере 1. Затем полученную культуру засевают в количестве 90 тыс. конидий на 1 мл питательной среды на кукурузном сусле. После 7 сут культивировани  активность глюкоамилазь на 18 Бал кукурузном сусле составл ет 350 ед/мл, на кукурузном сусле - QQ ед/мл ( дл  2% концентрации растворимого крахмала в среде) и tOO ед/мл дл  18 Бал кукурузного сусла 10 растворимого крахмала на косом агаре), 500 ед/мл дл  кукурузного сусла (10% растворимого крахмала на косом агаре). П р и м е р 4. Твердую питательную среду того же состава, что в примере 1, увлажн ют до 60% солевым раствором состава, вес.%: азотнокислый натрий (NaNOj) 0,9; двузамеи4енный фос .форнокислый аммоний (Н)РО 0,2, однозамещенный фосфорнокислый калий KHjjO 0,22, хлористый калий КСi 0,11, сернокислый, магний MgSO 0,103 сернокислое железо закисное : 0,011 сернокислый марганец MnS040 ,005, сернокислый кобальт CoS04 , 004, сернокислый цинк .OOl сернокисла  медь CuSO 0,00, вода остальное, Получают конидиальный материал с активностью 150 ед ГлА/г сухой культуры. Затем его высевают в количестве 78 тыс..конидий на 1 мл питательной среды кукурузного сусла. На 7 сут роста получают культуральную жидкость с активностью kOQ ед ГлА/мл культуральной жидкости П р -и м е р 5. Питательную сре-г ду, состо щую из 70 ржаной муки, 30 солодовых ростков, увлажн ют до 60% водопроводной водой, выращивают и рассевают на пассажи так же, как и в примере 1. Полученный посев ной материал с активностью 205 ед/г сухой культуры засевают в количестве 850 тыс, кс{иидий на 1 мл питатель ной среды на 18 Бал кукурузное сусло . После 7 сут культивировани  получают культуральную жидкость с активностью ГлА дл  I пассажа ЗООед/мл II - 350 ед/мл; 111 - lOO ед/мл. П р и м е р 6. Питательную среду , состо щую из 70%  чменной муки И 30%солодовых ростков, увлажн ют и рассевают так же, как в примере 1. Полученный посевной материал с активностью 200 ед/г сухой культуры засевают в количестве 900 тыс. кони дий на 1 мл питательной среды на ку курузное сусло . После сут культивировани  получают активность глюкоамилазы (ГлА) дл : 1 пассажа 350 ед/мл, П - 400 ед/мл, Ш - 30 ед/мл П р им ер 7« Питательную среду состо щую из 50% рисовой муки и 50% солодовых ростков, приготовл ют, выращивание и рассев производ т так же, как в примере 1. Полученный конидиальный материал с активностью 210 ед/г сухой культуры засевают в количестве 830 тыс. конидий на 1 мл питательной среды на 19Бал кукурузное сусло. После 7 сут культивировани  получают культуральную жидкость с активностью ГлА дл : 1 пассажа 330 ед/мл; дл  11 - too ед/мл, дл  III - 500 ед/мл. П р и м е р-8. Питательную среду,, состо щую из 50% маниоки и 50% солодовых ростков, приготовл ют вырашивание и рассев производ т так же, как и в примере Ь Полученный посевной материал с активностью ГлА 200 ед/г сухой культуры засевают в количесдве 900 тыс. конидий на 1 мл питатель ной среды на 18°Бал кукурузное сусло . После 7 сут культивировани  по7 .8 лучают культуральную жидкость с активностью ГлА дл  1 пассажа 320 ед/мл, дл  II - 370 ед/мл; дл  М - 50 ед/мл. П р и м е р 9. Питательную среду, состо щую из 50% пшеничных отрубей и 50% солодовых ростков, засевают штаммом гриба Asp. awamori и рассевают так же, как в примере 1. Полученный посевной материал с активностью 100 ед/г сухой культуры засевают в количестве 50 тыс конидий на 1 мл питательной среды 18Бал кукурузное сусло.,После 7 сут культивировани  получают культуральную жидкость с активност1зю ГлА дл : 1 пассажа 80 ед/мл, дл  П - 150 ед/млJ дл  111 - 200 ед/мл. Согласно изобретению, получают споронос щую культуру от (2-)10 спор в 1 г воздушно-сухой культуры, но более активизированную, котора  при дальнейшем культивировании в глубинных услови х на высококонцентрированны углеводных средах позвол ет увеличить биосинтез глюкоамилазы в 2-3 раза по сравнению с контролем (вегетативной культурой). Кроме того, упрощаетс  технологическа  схема подготовки посевного материала: исключаетс  посев в маточники , обеспечиваетс  микробиологическа  стерильность процесса, сокраща- . етс  на 1 ,5-2 сут врем  приготовлени  посевного материала, активность новых конидиальных культур при хранеНИИ 20-25 0 не уменьшаетс  в течение 1-1,5 лет, а дл  I и II пассажей повышаетс  по сравнению с контролем , т.е. хранением культуры на косом агаре, уменьшаетс  расход конидиального посевного материала по сравнению с прин тым ранее в 100 раз, а по сравнению с вегетативным в 200 раз. Формула изобретени  1. Способ приготовлени  посевного материала дл  культивировани  плесневых грибов вида Aspergillus awamori , продуцирующих глюкоамилазу, предусматривающий посев продуцента на увлажненную питательную среду, содержащую источник углерода, солодовые ростки и необходимые минеральные соли, выращивание продуцента до обильного спороношени  и последующее культивирование на производственной питательной среде, о т л и ч аю щ и и с   теи, что с целью повышени  активности посевного материала путем адаптации его к высококонцентрированным производственным углеводным питательным средам и сокращени  расхода посевного материала, в качестве источника.углерода в твёрдых питательных средах используют 5090 пшеничных отрубей и tQ-ЭQ% муки: кукурузной или  чменной, или рисовой , или ржаной, или маниоки, или соевой, а процесс выращивани  продуцента ведут в две стадии при различном температурном режиме, поддержива  его на первой стадии в течение дней равным 29-31С, а по достижении обильного спороношени  температуру . снижают до 20-2i ® С и осуществл ют вторую стадию в течение 5-6 сут с последующей селекцией полученных на этой среде конидий в несколько пассажей, при этом в качестве производственной питательной среды используют высококонцентрированное по углероду зерновое сусло с концентрацией 15-25 Б.
  2. 2,Способ по п. 1, отличающийс  тем, что при выращивании в качестве продуцента штамма Aspergillus awamori 466 селекцию ведут в два пассажа при повышении активности от 100 ед ГлА/г сухой культуры на стадии выращивани  до
    300 ед ГлА/г сухой культуры после второго пассажа,
  3. 3,Способ по пп, 1 и , отличающийс  тем, что увлажнение питательных сред осуществл ют раствором следующих солей, вес.%: ,9-lj (NH4)zHP04 0.2-0,3; КНарОд 0,22-0,23; КС1 0,11-0,12; MgS04. 0,103-0,104; FeS04. 0,011-0,015, MnSO.. 0,05-0,06; CoS040,,005j
    ZnS04. 0,001-0,002; CuSO 0,0040 ,005, эода - остальное,
  4. 4t Способ приготовлени  посевного материала дл  культивировани 
    плесневых грибов Aspergillus awamori , продуцирующих гшжоамилазу, предусматривахмций посев продуцента на питательную среду, содержащую источник углерода, выращивание продуцента до обильного спороношени  и последующее культивирование на производственной питательной среде, отличающийс  тем, что, с целью активации посевного материала путем адаптации его к высококонцентрированым по углероду питательным средам, посев продуцента осу .ществл ют на питательную среду, со- , держащую 2-15% растворимого крахйала , 1-2% агар-агара и 7-8  чменного сусла, а процесс выращивани  ведут в две стадии при различном темпер турном режиме, поддержива  его .на первой стадии в течение 5-6 дней
    равным 29-31С, а по достижении обильного спороношени  температуру снижают до 20-24с и осуществл ют вторую стадию в течение 5-6 сут, при этом в качестве производственной питательной среды используют высококонцентрированное по углероду зерновое сусло с концентрацией 15-25 Б,
  5. 5. Спосс по пп. 1-4, отличающийс  тем, что засев посевного материала в производственную питательную среду осуществл ют в количестве 0,00125-0,005% к объему питательной среды
    Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе
    1.Грачева И.М. Технологи  фер-. ментных препа затов. Н., 1979, с, б7-б9.
    2.Авторское свидетельство СССР № 668941, кл. С 12 N 9/34, 1977 (прототип),
SU813322984A 1981-07-23 1981-07-23 Способ приготовлени посевного материала дл культивировани плесневых грибов вида aSpeRGILLUS аUтамоRI,продуцирующих глюкоамилазу (его варианты) SU988867A1 (ru)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SU813322984A SU988867A1 (ru) 1981-07-23 1981-07-23 Способ приготовлени посевного материала дл культивировани плесневых грибов вида aSpeRGILLUS аUтамоRI,продуцирующих глюкоамилазу (его варианты)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SU813322984A SU988867A1 (ru) 1981-07-23 1981-07-23 Способ приготовлени посевного материала дл культивировани плесневых грибов вида aSpeRGILLUS аUтамоRI,продуцирующих глюкоамилазу (его варианты)

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SU988867A1 true SU988867A1 (ru) 1983-01-15

Family

ID=20971155

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SU813322984A SU988867A1 (ru) 1981-07-23 1981-07-23 Способ приготовлени посевного материала дл культивировани плесневых грибов вида aSpeRGILLUS аUтамоRI,продуцирующих глюкоамилазу (его варианты)

Country Status (1)

Country Link
SU (1) SU988867A1 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6667066B2 (en) * 1999-01-25 2003-12-23 Gie Agro Industrie Multi-enzyme product with glucoamylase, proteolytic and xylanase activities and method for producing same by solid state fermentation of wheat bran with Aspergillus niger

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6667066B2 (en) * 1999-01-25 2003-12-23 Gie Agro Industrie Multi-enzyme product with glucoamylase, proteolytic and xylanase activities and method for producing same by solid state fermentation of wheat bran with Aspergillus niger

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US4551164A (en) Microbial plant growth promoter
CN109456105A (zh) 一种缓解茄科作物连作障碍的微生物菌剂制备及使用方法
CN113980836B (zh) 贝莱斯芽孢杆菌及其在草莓根腐病防治中的应用
CN112501072B (zh) 一种作物根际土壤调理剂及其制备方法和应用
CN105110961A (zh) 一种香菇液体发酵培养基及其生产香菇的方法
CN101863705B (zh) 一种水产养殖水体浮游植物的生长促进剂
CN105439723A (zh) 一种用于农场现场发酵的解淀粉芽孢杆菌药肥及其应用
CN105439725A (zh) 一种用于农场现场发酵的多粘类芽孢杆菌药肥及其应用
CN104263679A (zh) 一种高效解磷菌及其应用
CN106665044A (zh) 一种富硒西红柿的培育方法
CN109468259A (zh) 一种促进芽孢生成的培养基
CN103155794A (zh) 一种防止袋栽平菇不出菇的方法
CN108285915A (zh) 赤霉酸的发酵方法
CN105439726A (zh) 一种应用于农场现场发酵的巨大芽孢杆菌菌肥及其应用
CN105255762A (zh) 一种用于土壤调理的微生态制剂
CN104261942A (zh) 白灵菇液体菌种培养基及菌种的扩繁方法
CN104620861A (zh) 利用桑枝种植金针菇的方法
CN104177182A (zh) 一种利用玉米芯生产蛹虫草子实体的栽培方法
JPS63501286A (ja) 微生物性植物成長促進剤と収量増強剤
SU988867A1 (ru) Способ приготовлени посевного материала дл культивировани плесневых грибов вида aSpeRGILLUS аUтамоRI,продуцирующих глюкоамилазу (его варианты)
CN105439724A (zh) 一种用于农场现场发酵的胶冻样芽孢杆菌菌肥及其应用
CN106472072A (zh) 一种君子兰的播种育苗方法
CN108887145A (zh) 一种微生物育苗基质及其制备方法与应用
CN107778095A (zh) 一种环保型玉米秸秆肥料及其制备方法
CN114679999A (zh) 一种基于玉米的丛枝菌根真菌菌剂及其制备方法