SU939549A1 - Способ получени посевного материала дл производства лимонной кислоты - Google Patents

Description

Изобретение относитс  к микробиологической промышленности, а именно к способу получени  посевного материала дл  производства поверхностным или глубинным методами лимонной кислоты. Известен способ получени  посевного материала, используемой дл  получени  лимонной кислоты, путем выращивани  штамма Aspergil niger ЭУ-119 на питательной среде Однако применение этого штамма на стадии приготовлени  посевного материала дает низкий выход спор (конидий) с низкими показател ми биохимической активности. Наиболее близким решением по технической сущности и достигаемому эффекту  вл етс  способ получен посевного.материала дл  производства лимонной кислоты путем рырациеани  штамма A pcrgillus niger Р-1 на сусло-агаровой питательной среде, содержащей все необходимые компоненты питани . j Выход спор с 1 дм площади спорул ции составл ет 1,0-1,1 г. Всхожесть спор - 80. Содержание спор в 1 г - до Zt млрд. В услови х поверхностного культивировани  штамм синтезирует лимонную кислоту из сахара мелассы с выходом до ЭЭ° 2. Недостатки известного способа-низкий выход спор с единицы площади спорул ции, невысокое качество посевного материала за счет незначительного содержани  спор в посевном материале, что  вл етс  следствием морфологических особенностей штамма - длинных конидиеносцев, а также высока  себестоимость целевого продукта (719 РУб. за 1 кг. Цель изобретени  - увеличение выхода спор с единицы площади спорул ции и улучшение качества по39 севного материала всхожести и содержани  спор в 1 г , а также снижение его себестоимости. Указанна  цель достигаетс  тем, что в способе получени  посевного материала дл  производства лимонной кислоты, предусматривающем выращивание спор плесневого гриба вида Aspergillus niger на питательной среде, содержащей истриники углерода , азота и минеральные соли, из вида Asper iilus niger используют штамм Aspergillus niger R-3. Штамм Aspergillus niger R-3 получен в результате селекции путем ступенчатой обработки этиленимином N-нитрозометилмочевиной и ультрафиолетовыми лучами штамма Aspergillus niger ЭУ-119. Мутантный штамм хранитс  в коллекции микроорганизмов Института микробиологии им. Августа Кирхштейна ЛатвССР, депонирован под № F 28 Штамм также депонирован во ВНИИгене тики и имеет коллекционный номер ЦМПМ F-13.2. Штамм имеет следующую характерис тику. Морфологические признаки. У п тисуточной культуры на среде Чапека-Докса конидиальные головки округлые, в диаметре 200-220 мкм. Везикуль слегка выт нутой формы З х37- 6х50 мкм. Стеригмы однослойные . Длина стеригм - 9-15 мкм. Кони дии темно-коричневые, круглые, в ди метре 5-7 мкм. Конидиеносцы длиной 1-3 мм. Культуральные признаки. Гигантска  колони  штамма R-3 выращиваетс  на среде Чапека-Докса в чашке Петри при , на п тые сутки имеет круглую форму, диаметр колонии мм, аспорогенна  зона 4-8 мм. Колонии на сусло-агаре (5 сут, при 32°С)имеют круглую форму диаметром мм. Аспорогенна  зона 6-10 мм. Центр колонии выпуклый с редким темно-коричневым спороношением , обладает высокой устойчивость к бактери м-антагонистам, встречающимс  в процессе лимоннокислого бро жени  . Биохимические признаки. Хорошо сбраживает мелассу. Выход лимонной кислоты от сахара мелассы до 100%. Из суммы синтезированных кислот на долю лимонной приходитс  55-99, на долю щавелевой кислоты Отношение к источникам углерода. Ассимилирует сахарозу, глюкозу, фруктозу, мальтозу, гидролизаты растительного сырь , этанол. Не ассимилирует уксусную кислоту. Отношение к источникам азота. Усваивает органический и минеральный азот.. На сусло-агаровой питательной среде в услови х поверхностного культивировани  штамм Aspergillus niger R-3 дает выход спор 1,3-1,5 г с 1 дм площади спорул ции. Всхожесть спор 90-98%. Содержание спор в 1 г 30-35 млрд. Посевной материал штамма Aspergillus niger R-3 готов т следующим образом. Готов т спорул ционную среду, содержащую источник углерода, азота и минеральные соли. В качестве источника углерода используют пивное сусло илисолодовый экстракте содержанием в среде 5-9% по сухому веществу . Остальные компоненты питательной среды берут в следующих количествах, вес.%: Мочевина0,05-0,1 NaCl1-2 5Н О 0,0001 2-3 Агар рН среды поддерживают на уровне Среду засевают культурой штамма Aspergillus niger R-3. Культивирование производ т в поверхностных услови х, регулиру  температуру и влажность. Длительность процесса 9-10 сут. Камеры аэрируют в течение всего процесса культивировани . По данной технологии получают 1,,5 г спор с 1 дм спорул ционной площади. Дл . определени  всхожести суспендируют в мелассном растворе и культивируют при в течение 10 ч. Соотношение проросших и непроросших спор определ ют под микроскопом. Всхожесть спор штамма R-3 90-981. Посевной материал готов т смешива  споры с активным углем 1:1, смесь тщательно перемешивают. Количество спор определ ют в 1 г полученного таким образом посевного материала; Дл  данного штамма этот показатель 15-17,5 млрд. Споры

Claims (1)

1. Кюветы засевают культурой штамма^ 35 для засева используют 1 мг спор на 1 дм³· площади споруляции. Кюветы помещают в камеру, которая аэрирует- . ся стерильным воздухом.

   Первые 4 сут влажность постепен- до но снижают с 80 до 60% в последующие 5,5 сут - с 60 до 40%, т.е. на 3,5-3,8% в сутки. Температуру в первые 4 сут поддерживают на уровне 32+1 °C, в последующие 4,5 сут - 45

   30+1° С, а последние 24 ч температуру снижают до 24^вС. Регуляцию температуры осуществляют, подключая мост переменного тока КСМ - 3, на шкале которого задан температурный режим, к обогревающему устройству.

   Процесс культивирования штамма R-3 завершается на 10-е сутки. Сбор спор осуществляют специаль-?

   Способ получения посевнРго материала для производства лимонной кислоты путем выращивания спор плесневого гриба вида Aspergillus niger на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, отличающийс я тем, что, с целью увеличения выхода спор, повышения качества посевного материала и снижения его себестоимости, из вида Aspergillus niger используют штамм Aspergillus niger R-3.