SU918294A1 - Способ получени терапевтически активного сложного полиэфира серной кислоты с мукополисахаридом из трахей крупного рогатого скота - Google Patents

Description

Изобретекне касаетс  способа получени  терапевтически активного сложного по шэ4н{ра серной кислоты с мукопошсахарипом из трахей крупного рогатого скота пригонного в качестве фармацевтическогч) 5 срецства ал  лечени  заболеваний суставов , который главным образом можно вво- пить внутрь суставов.

Сложные полиаф1фы серной кислоты с 10 мукополисахарипом, облаааюшие .тормоз щим свертыванием крош и/или липолитиче .ским(антилнпемическим) цействием, могут быть ПО79Я0ИЫ сульфатщ}оваиием полнсахариаов животного или растительного 15 происхождени  (Pharw. Praxis, 12,281 (1969)).

Несмотр  на то, что соответствующие способы получени  чарто сооержат такие техническн сломшые ступени очистки как 20 энзиматические шаги частичного отщей ени  группы при помощи папаина, трипеина, гиалурониаазы или бактериальных протеаз, известные до сих пор препараты на рснозании резко выраженного гапариноиаиого 25

дайсгви  или другого их состава, как правило, не пригодны дл  печени  заболеваний суставов относительно действи  и переносимости, что особенно вьшвл етс 

при внутрисуставном введении.

Известны способы выделении кислых мукополисахаридов (DE- OS 1492 О 17, DE-OS 14678Ш, БЕ 843 О95, IP ; 031353, ЗрО761бО, iP123444), не пригодных, однако, дл  внутрисуставной инъекции при заболевани х суставов.

По ОЕ-03 1492017 кислые полисахариды получают из костной или хр щевой ткани при помощи экстракции слабощелочным , водным раствором эти ендиа.минтетрауксусной кислоты, обработкой экс1 рактов при рН 5 катионообменной- смолой iP 50 и энзиматическим отщеплением нерастворимых остатков при помощи папаина и трипеина и последующим осаждением кислых полисахаридов четвертичными соединени ми аммони .

Далее дуоденальный гепариноиц с антихюпемическим действием по DE-OS 1467 ею был очизиён фракционным осажцеиием четвертичными сло ми аммен ни  или хлористого цинк а. Сульфата хонцррйтина были получены обработкой хр ша пепсином и папаином (BE 843095), кудатуральной жидкостью штаммов Sirratia или Ьас. subt. (IP 031353), обработкой кожи животных липазой, проназой и хроматографироваиием на &owev -1(1 076160) или очисткой при помощи хромагографироеани  на грубопористой, сильноосновной «шокообменной смоле (1г 123444). Йзгогрви емые по  понским патентам 7000 156-R (Defwent 04390R), 7001 445 ( Derw&nt O6504R), 7004 744 ( Derwettt 14519R).. t3l4 078 ( Defwevit 2S548U) низкомолекул рные полисульфаты хонпроина (молекул рный вес 4ОО-6000), получаемые Ш ч обработкой сульфата хонцроитнна (молекул рный вес 4ОО-4000) хЛсзр сульфоновой кислотой в пириаине или формамнде с последующим подшелачиванием, перегонкой с вод ным паром или обработ«9й катионообменной смолой или же депотшериз цией полисульфата хондроитина щт помощи хонароитиназы и фракционным осшкшнием органическими растворител; мЯ хот  и обладают высоким ангилипемичесKtxMf т.е. антиартериосклеротическим ,ствием, одного, пригодность дл  тченй  ааЗелеванкй неизвестна, Целью изобретени   вл етс  под/чение сложного полиэфира серной кислоты с му кополисахаридом в качестве терапевтического средства, вводимого пр мо в суставную сумку при дегенеративных забо лбВ(ши х суставов. Изобретение основываетс  на задаче разработать способ получеии  высокоочищенного сложного полиэфира серной кисло ты с к укополисахаридом, свободного от . непереносимых: полисахаридных и iq)OTe- иневьос составныхчастей,: В соответствии с т з-обретением устбьновлэно , что дл  получени  герапевтичеок« активного и переносимого суставами препарата с целью отщеплени  мешающих высокомолекул рньсс полисахаридов цнонировани  этиловым сшртом сьфой смеси мукополисахаридов, подученной иэвест шм способом ив трахей крупного рогатого скота путем щелочной экстракции , фракционирование проводитс  преимущественно осаждением предварительной фракции при рН 1-2 И концентра1шей этилового спирта 30-34 об.%, которую отбрасывают, и последукхцим осажпб« 9 44 нием желаемой мукополисахарионой фрактга Концентрацией этилового спирта 7О74 об,%. Подученную главную фракцию после частичного гипролиза н сульфати- рованн  пл  огделенн  низ омолекул рных составных частей с молекул рным весом до SOOO подвергают диализу в внде 6%-ного водного раствора при рН 910 и при помощи польк волокон или мембран;Частичный гидролиз сол ной кислоты к сульфатирование хлЬрсульфоно .вой кислотой в среде формамида проводитс  известным способом.. Полученный продукт очшдаетс  сильнокислотной катионообменной смолой и обесцвечиваетс  перекис1;Ю . Полученный слокный полиэфир серной кислоты с к Ополисахаридом (МПС) со-, держит 11-13,5% серы, 1,7-2,2% азота, 2О-26%; уроновой с kиcлoты. Тормоз ща  свертывание крови активность по сравнению со стандартом гепарина составл ет менее 15 международных г единиц на мг.; После 12-крвтного вливани  по О,2 мл раствора 50 мг МПС/мл в правый коленный сустав задних конечностей кроликов . (по три иньекшга в неделю) никаких воспалительных реакций суставной сумки не |1аблюдалось После 10-кратногр внутрисуставного вливани  по 5О мг МПС/1 мл человеку обиаруживалась хороша  переносимость и эффективность препарата при деганерати ных заболевашЫх коленного сустава Пример 1. 10 кг свежих трахей Крупного рогатого скота размельчают в м сорубке и попученную; массу трижды перемешивают с 35 д адетона при комнатной температуре .() в течение 3 ч. После каждого пер1вМешивани  фильтруют через грубое сито, Г убоволоконистый псрошок из трахей сушат на воздухе. Выход 2,15О кг, Пример 2. 2 кг сухого порошка трахей экстрагируют 60О г едкого натра и 15 л воды в течение 2О ч при 15 С, изредка переМещива .-Затем |фибавлением 3,9 л 18%-ной сол ной кислоты, рН раствора довод т до 1 и центриф ггируют. К прозрачному це трифугату (16 л) прибавл ют 48 л этавола после i .нгто ни  в течеще 15 ч при - С осадок отоед юг. центрифупфовавием и промьюают алкоголем и ацетоаом в сушат в вакуумном эксикаторе.. Выход 203,4 г сырой мукополисахвридной смеси Пример 3, 20О г сырой мукопо лисахарицной смеси раствор ют в 18ООмл

Claims (1)

1. Способ получения терапевтически активного сложного полиэфира серной киолоты с мукополисахаридом из трахей крупного рогатого скота,, о т л и ч а Гоад и й с я тем, что выделяют мукополисахаридную фракцию путем фракционирования низшим алифатическим спиртом сырой мукополисахаридной смеси, полученной известным методом щелочной экстракции трахей крупного рогатого скота. Мукополисахарицную фракцию подучают пре-* имущественно осаждением предварительной фракции при pH 1-2 и 20®С юнцентра- . нией этилового спирта 30-34 об,%, ко- . торую отбрасывают и последующим осаждением желаемой мукополисахаридной фракции концентрацией этилового спирта 70-74 об,%. Далее способ подучения характеризуется тем, что мукополисахаридную фракцию после частичного гидролиза , и сульфатирования, проводимых известный ра при pH 9-10 и 4-25°С с целью диализа фильтруют через полые волокна или мембраны с границей исключения до молекулярного веса 5000,. очищают ее при fwpnnawHMtt МПС—фракции в 750 мл и ди-so помощи сильнокислотной катионообменной стиллированной воды фильтруют через 750 мл сильнокислотной катионообменной смолы, состоящей на сополимеризага стирола и дивинибензола с сульфогруппами в ядре (Н+ - форма). Прибавлением- 4 и; 55 раствора едкого натра, pH фильтрата цоВНИИПИ Заказ 2039Z29 смолы и обесцвечивают перекисью водорода.

   Признано изобретением по результатам экспертизы, осуществи иной вецомст— вом по изобретательству Германской Демократической Республики.