SU833986A1 - Способ получени агарозы - Google Patents

Description

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АГАРОЗЫ

Изобретение относитс  к химической технологии, в частности к способу получени  агарозы, котора  используетс  в научно-исследовательской работе в медицине, биохимии и генетике в качестве инертного носител  при электрофорезе, иммунодиффузии , иммуноэлектрофорезе, гельфильтрации . В последнее врем  агароза используетс  также в качестве матриц дл  получени  ионообменных материалов и специфических сорбентов дл  аффинной хроматографии. Исходным сырьем дл  получени  агарозы  вл етс  агар.

Наиболее близким к предлагаемому  вл етс  метод, основанный на удалении сульфогрупп агаропектина химическим путем - щелочна  десульфатаци  агара в присутствии боргидрида натри . В известном способе ага раствор ют в 1М гидроокиси натри , содержс1щем боргидрид натри . Раствор выдерживают в течение 2 ч при , затем охлаждают до бОС,осаждают агарозу равным объемом этанола, промывают водой и сушат. Показатель электроэндоосмоса (.-ni() 0,13-0,50 . Прочность гел  400-600 г/см 1.

Недостатки известного способа в том, что полученна  агароза имеет сравнительно низкую прочность гел , так как жесткие услови  десульфатации привод т к частичной деструкции полисахарида, и так как осаждение агарозы проводитс  в щелочной среде, требуетс  длительна  промывка осажденного продукта водой до полного удалени  следов щелочи, что делает весьма простой способ получени  агарозы длительным и трудоемким при использовании его в промышленности.

Цель изобретени  - повышение качества целевого продукта и упрощение процесса.Поставленна  цель достигаетс  тем, что в способе получени  агарозы десульфатацией агара в присутствии гидроокиси и боргидрида натри  с последующим осаждением агарозы, десульфатацию провод т 0,7-2,0%ного водного раствора агара, предварительно обработанного гелем гидроокиси алюмини  при объемном соотношении гел  и раствора агара 1:3-4, при весовых соотношени х гидроокиси натри  и агара 1:0,6-0,8 и боргидрида натри  и агара 1:25-27, а реакционную смесь после осаждени  ага розы нейтрализуют кислотой до рН 6В предлагаемом способе агар раствор ют в воде нагреванием до 8086 С и к раствору добавл ют гель гидроокиси алюмини . Объемные соотношени  гел  гидроокиси алюмини  и 0, 7-2, 0%-7НогЬ раствора- агара 1:3-4. руспензию перемешивают в течение 10 мин при 70-80 С. Гель гидроокиси отдел ют дентрифугированием при 45бО- С. К прозрачному центрифугату добавл ют раствор боргидрида натри  в воде и гидроокись натри . Весовые соотношени  гидроокиси натри  и агара 1: О, б-0,8 и боргидрида натри  и агара 1:25-27. Температуру раствора довод т до 80-85 С и выдерживают при этой температуре в течение 2 ч. Затем реакционную смесь охлаждают до , осаждают агарозу добавлением равного количества этанола.. После охлаждени  реакционной смеси до 2025 - С ее нейтрализуют добавлением кислоты до рН 6-7, след , чтобы температура суспензии не превышала . Нейтрализованную суспензию выдерживают при комнатной температуре в течение 10 ч, осадок аг.арозы отфильтровывают, промывают несколькими порци ми деминерализованной воды и высуи вают. Показатель электроэндоосмоса (-т.) 0,15-0,20, прочность гел  700-900 г/см. Пример. 200 г агара загружают в 30-ти литровую эмалированную емкость, заливают 10 л деминера лизованной воды и нагревают при перемешивании механической мешалкой на вод ной бане до полного растворени  агара (1 ч при нагревании до 80-85С) . После этого к раствору при перемешивании добавл ют 3,3 л гел  гидроокиси Алюмини  (соотношение 1:3), Гель добавл ют такимобразом , чтобы темпера тура суспензии не опускалась ниже б5-70°с. После добавлени  всего количества гел  до вод т температуру до и выдерживают при этой температуре в течение 10 мин. Гель гидроокиси алюмини  отдел ют центрифугированием на осадительной центрифуге в течение 5 мин при 2500 об/мин и температуре не ниже Прозрачный центрифугат сливают в ЗО-Фи литровую эмалированную емкост включают мешалку и добавл ют 100 мл раствора боргидрида натри  в демине Рсшизованной воде при соотношении . агара и боргидрида натри  1:27 (7,4 боргидрида натри  раствор ют в 100 деминерализованной воды и фильтруют через бумажный фильтр). Продолжа  п ремешивание, порци ми добавл ют 250 едкого натра, довод т температуру раствора до и выдерживают реак ционную смесь при такой температуре в течение 2 ч (соотношение агара и едкого натра 1:0,8). После выдерживани  раствор охлаждают , продолжа  перемешивание, до 50 С„ Осаждают агарозу добавлением 16 л этанола. Осажденную агарозу в спиртовом супернатанте охлаждают до 20-25 0 и нейтрализуют добавлением концентрированной уксусной кислоты до рН 6-7. Добавление кислоты провод т таким образом, чтобы температуЬа суспензии не превышала-30 0. После выдерживани  при комнатной температуре в течение 10-15 ч осадок собирают на фильтре, промывают трем  порци ми по 20 л деминерализованной воды, высушивают этанолом и ацетоном . Прочность гел  800 г/см, электроэндоосмос (-т) 0,15. П р и м е р 2. 400 г агара загружают в 50-ти литровую эмалированную емкость, заливают 20 л деминерализованной воды и нагревают при перемешивании механической мешалкой на вод ной бане до полного растворени  агара (1 ч при нагревании До 8085 0 ). После этого к раствору при перемешивании добавл ют 5 л гел  гидроокиси алюмини  (соотношение 1:4). Гель добавл ют с такой скоростью, чтобы температура суепензии не опускалась ниже 65-70 0. После добавлени  всего количества гел  довод т температуру до воС и выдерживают при этой температуре в течение 10 мин. Гель гидроокиси алюмини  отдел ют центрифугированием на осадительной центрифуге в течение 5 мин при 2500 об/мин и температуре не ниже 45С. Центрифугат сливают в 50-ти литровую эмалированную емкость, включают мешалку и добавл ют 200 мл .раствора боргидрида натри  в деминерализованной воде при соотношении агара и боргидрида натри  1:25 (16 г боргидрида натри  раствор ют в 200 мл деминерализованной воды и фильтруют через бумажный фильтр). Продолжа  перемешивание, порци ми добавл ют 660 г едкого натра, довод т температуру раствора до 85°С и выдерживают реакционную смесь при этой температуре в течение 2 ч (соотношение агара и едкого натра 1:0,6). После выдерживани  раствор охлаждают при включенной мешалке до . Агарозу осаждают добавлением 25 л эта1Нола, Осажденную агароэу в спиртовом супернатанте охлаждают до 20250с и нейтрализуют добавлением концентрированной уксусной кислоты до рН 6-7. Добавление кислоты провод т таким образом, чтобы температура сузпензии не превышала . После выдерживани  при комнатной температуре в течение 10-15 ч осадок собирают на нутч-фильтре, прокывают трем  порци ми по 40 л деминерализованной

воды высушивают этанолом и ацетоном. Прочность гел  900 г/см, электроэндоосМос (-тр)-0,18,

Пр и м е р3.140 г агара раствор ют в 20 л вох(Ы, получа  0,7%ный раствор, при температуре выше б5®С добавл ют -5 л гел .гидроокиси алюмини , выдерживают 10 мин, отдел ют гель центрифугированием при 2500 об/мин.

К прозрачному центрифугату добавл ют 200 г едкого натра (соотношение едкого натра и агара 1:0,7) и 5,6 г боргидрида натри  {соотношение боргидрида и агара 1:25) и нагревают в течение 2 ч при . Охлаждают раствор до , осаждают агарозу добавлением 25 л Танола. Осадок вместе с жидкостью нейтрализуют уксусной кислотой до рН б, вьадер ивают 10 ч, фильтруют, промывают и сушат . Прочность гел  700 г/см,

Предлагаемый способ даетвозможность значительно повысить качество агарозы, увеличива  прочность гел  , с 400-600 r/cvr (по известному способу) до 700-900 г/см , а такЛе . создает экономию деминерализованной

воды дл  промывки агарозы, рабочего и технологического времени процесса.

Claims (1)

1. :Формула изобретени  .

   Способ получени  агарозы десульфатацией агара в присутствии гидроокиси и боргидрида натри  с послйдую щим осаждением агарозы, отличающийс  тем, что, с целью повыше0 ни  качества целевого продукта и упрощени  процесса, десульфатацию провод т 0,7-2,0%-ного водного раствора агара, предварительно обработанного гелем гидроокиси а помини  5 при объемном соотношении гел  и раствора агара 1:3-4, при весовых соотношени х гидроокиси натри  и агара 1:0,6-0,8. и боргидрида натри  и агара 1:25-27, а реакционную смесь после осаждени  агароэы нейтрализу0 ют кислотой-до рН 6-7.

   Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе 25 1. L6nnerdal В., taSsТ .jAnnal , Biochem. 1976, p. 72, 527(прототип);