ДНФОСФАТИДИЛГЛИЦЕРИНА, ФОСФАТИДИЛЭТАНОЛАМИНА И ФОСФАТИДИЛХО.Л11НА ненные экстракты промывают 1/5 час дистиллированной воды. Водный слой отбрасывают. Хлороформ-метанольный слой упаривают под вакуумомна рото ном испарителе при 40-45 С, остаток раствор ют в 80 нп хлороформа, прибавл ют 1/5 часть 2%-ного водно раствора хлористого магни , энергич но встр хивают около 2 мин и оставл ют в делительной воронке на холо до полного отделени водной фазы. Нижн хлороформенна фаза готова к нанесению на колонку. Выход общих липидов 12 г. Из них фосфолипиды со тавл ют 73%. В состав фосфолипидов вход т, %: дифосфатидилглицерин 10 фосфатидилэтаноламин 29,Оi фосфатид холии 39,0, сфингомиэлин 7,5; фосфатидилинозитид 7,3, фосфатидилсернн 3,6 лизофосфатидилхолин 1,5, фосфатидна кислота 0,8 и лизофосфатидилэтаноламин 0,4. Дл разделени общих липидов (465 мг) используют 17 г неактивированного силикагел марки Л 40/100 М. Отношение силикагел к загружаемой.фракции фосфолипидов 50:1, Силикагель суспендируют в хлороформе и загружают в колонку диаметром 1,6 см и высотой адсорбционного столба 16 см, т.е. отношение диаметра к вы соте 1;10. Объем колонки 30 мл. Фра цию общих липидов в 3,1 мл хлорофор ма внос т в колонку и начинают процесс элюировани . Дп элюировани используют: 11 колоночных объемов (ЗЗО мп) хлороформа. Вымывают все нейтральные липиды. 26 колоночных объемов (780 мл) хлороформ-метанола 93:7. Первые три колоночных объема (90 мл) отбрасывают как содержащие следы нейтральных липидов. Оставшиес 23 колоночных объема вымывают хроматографически чистый дифосфатидилглицерин - 34 мг. Выход около 99%. 60 колоночных объемов (1800 мл) хлороформ-метанола 9:1 с добавкой 4 мл/л системы 25%-ного водного аммиака. Первые восемь колоночных объемов (240 мл) отбрасывают как содержащие следы дифосфатидилглицерина и фосфатидилэтаноламина. Оставшиес 52 колоночных объема (1560 мл) вымывают 97 мг хроматографичёски чистого фосфатидилэтаноламина . Выход около 98%. 25 колоночных объемов (750 мл) хлорофом-метанола 8:2 с добавкой 15 мл/л системы 25%-ного водного аммиака. Первый колоночный объем, содержащий следы фосфатидилэтаноламина , отбрасывают. Последующие 12 колоночных объемов (360 мл) вымывают 84 мг хроматографически чистого фосфатидилхолина, т.е. выход около 63%. Оставшиес 12 колоночных объемов (360 мп) вымывают остатки фосфатидилхолииа в смеси со сфингомиэлином и фосфатидилинозитом. Оставшиес фосфолипиды могут быть вымыты хлороформ-метанолом 1:1, Из 465 мг общих липидов (340 мг фосфолипидов) получают 34 мг хроматографически чистого дифосфатидилглицерина , 97 мг фосфатидилэтаноламина и 84 мг фосфатидилхолина. Использование предлагаемого способа совместного получени дифосфатидил глицерина, фосфатидилэтаноламина и фосфатидилхолина позвол ет быстро, просто, с одной колонки, практически без потерь дл таких целевых продуктов, как дифосфатидилглицерин и фосфатидилэтаноламин, одновременно получить хроматографически чистые дифосфатидилглицерин , фосфатидилэтаноламин и фосфатидилхрлин с повьш1енным выходом. Одноколоночное разделение целевых продуктов позвол ет получать их в более нативной форме за счет сокращени процедур и времени вьщелени ,так как известно, что фосфатидилэтаноламин и дифосфатидилглицерин содержат в своем составе значительное количество легкоокисл ющихс полиненасыщенных жирных кислотJ т.е. получать целевые продукты более высоког-о качества и значительно дешевле по сравнению с препаратами близкой чистоты, выпускаемых за рубежом. Так, дифосфатидилглицерин в 45 раз, фосфатидилэтаноламин в 25 раз, а фосфатидилхолии в 9 раз дешевле. Формула изобретени Способ одновременного получени дифосфатидилглицерина, фосфатидилэтаноламина и фосфатидилхолина, отличающийс тем, что измельченное гов жье сердце экстрагируют последовательно хлороформом и хлороформ-метанолом,, вз тых в
5 825084. 6
соотношении 2:1, экстракт о6радаты /геле, при этом сначала выдел ют дивают дистиллированной водой, далее фосфатидилглицерин хлороформ - меупаривают , полученный осадок раст-танолом в соотношении 93:7, затем
вор ют в хлороформе, затем обраба-фосфатидилэтаноламин хлороформ-метывают 2%-ным водным раствором хло-j танолом 9:1 в присутствии раствора
ристого магни , водный слой удал ютаммиака и фосфатидилхолин хлороформи целевые продукты выдел ют послеДо-метанолом 8:2 в присутствии раствовательно хроматографией на силика-ра аммиака.