SU787464A1 - Способ получени рибонуклеаз из - Google Patents
Способ получени рибонуклеаз из Download PDFInfo
- Publication number
- SU787464A1 SU787464A1 SU782691466A SU2691466A SU787464A1 SU 787464 A1 SU787464 A1 SU 787464A1 SU 782691466 A SU782691466 A SU 782691466A SU 2691466 A SU2691466 A SU 2691466A SU 787464 A1 SU787464 A1 SU 787464A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- ribonucleases
- specific
- buffer
- preparing
- aspergillus clavatus
- Prior art date
Links
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Description
(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РИБОНУКЛЕЛЗ ИЗ ASPERGILLUS CLAVATUS Изобретение относитс к биохимии а именно к способам одновременного получени вне- и внутриклеточных ферментов микробиологическим путем. Известен способ получени гуанил специфичной внеклеточной рибонуклеа зы Aspergillus clavatus, предусматривающий культивирование продуцента на комплексной питательной среде, отделение мицели фильтрованием, осаждение рибонуклеаз из фильтрата культуральной жидкости с последующей хроматографией ферментов на ДЭАЭ-целлюлозе и кристаллизацией. повторной хроматографии на ДЭ целлюлозе провод т гельфильтрацию на сефадексе С-75. Способ предполагает получение только одного фермен :та из материала одной ферментации 1 Недостатками данного способа вл ютс невысокий-выход фермента и получение только одного фермента. Цель изобретени - повышение выхода целевых продуктов, более полно использование сырь и возможности разделени неспецифичных и гуанилспецифичных рибонуклеаз. Указанна цель достигаетс тем, что мицелий продуцента лиофильно вы сушивают, экстрагируют из него буфером при рН 4-9 внутриклеточные рибонуклеазы , а затем по единой схеме осуществл ют очистку внутриклеточных и внеклеточных рибонуклеаз, полученных осаждением из фильтрата культуральной жидкости, после хроматографии на ДЭАЭ-целлюлозе провод т разделение неспецифичных и гуанилспецифичных рибонуклеаз на йЛЕсефадексе , после чего препараты неспецифичных рибонуклеаз подверга рт гельфильтрации на сефадексе G-75 и хроматографии на QАЕ-сефадексе, а препараты гуанилспецифичных рибонуклеаз хроматографируют на КМ-целлюлозе и кристаллизуют. Способ осуществл ют по следующей схеме. Гриб Aspergillus clavatus выращивают на комплексной питательной среде. Мицелий отфильтровывают и лиофильно сушат. Белки из лиофильно высушенного мицели экстрагируют буферным раствором. Белки фильтрата культуральной жидкости осаждают добавлением сульфата аммони и раствор ют в буферном растворе. Белки и экстракта и раствора сорбируют на ДЭАЭ-целпюлозе , элюируют. Элюаты хроматографируют на колонках с QAE-сефадексом
дл разделени неспецифичных и гуанилспецифичных РНКаз. Далее растворы неспецифичных рибонуклеаэ подвергают гельфильтрации на колонках с сефадексом G-75. Элюаты хроматографируют на колонках с ОАЕ-сефадексом, Растворы гуанилспецифичных рибонуклеаз подвергают хроматографии на колонках с КМ-целлюлозой, затем провод т кристаллизацию ферментов при диализе.
Пример. Гриб Aspergiltus clavat us выращивают в ферментере на комплексной среде. Мицелий отфильтровывают и лиофильно сушат. Белки из лиофильно высушенного мицели экстрагируют 0,05 М трис-НСе буфером, рН 7,5 (16 л/кг сухого мицели ). Белки фильтрата культуральной жидкости осаждают добавлением сульфата аммони (660 г/л) и раствор ют в 0,1 М трис-НСЕ буфере, рН 7,5. Белки из экстракта и раствора белков, осажденных сульфатом аммони , сорбируют в статике на ДЭАЭ-целлюлозе или ДЭАЭсефадексе (5 г сухого сорбента/1 л), уравновешенных 0,1 М трис-НСВ буфером , рН 7,5. Элюцию провод т 2 л 0,5 М ацетатного буфера, рН 4,5. Элюат подвергают хроматографии на колонке с QАЕ-сефадексом (5x50 см), элюцию провод т линейным градиентом ионной силы исходного буфера (0,05-0,5М
Далее очистку неспецифичных и гуанилспецифичных рибонуклеаз провод т раздельно. Растворы неспецифичных рибонуклеаз подвергают гельфильтрации на колонке с сефадексом G-75 (5x100 см), уравновешенной 0,05 М трис-HCt буфером, рН 7,05, содержащим 0,1 М КСР. Затем провод т хроматографию на колонке с QAE-сефадексом (5x50 см) , фермент элюируют линейным градиентом ионной силы исходного буфера (0,,5 м) . Растворы гуанилспецифичных рибонуклеаз подвергают хроматографии на колонке с КМ-целлюлозой (5x20 см), уравновешенной 0,05 М ацетатным буфером, рН 4,5. Фермент элюируют линейным градиентом 0-0,5 М NaCl в исходном
буфере. Затем провод т кристаллизацию ферментов при диализе против разбавленных буферов, РН 3,5, 5,0, 5,6.
Описанный способ позвол ет получить в результате одного процесса культивировани по единой схеме очистки четыре фермента: неспёцифичные и гуанилспецифичные вне- и внутриклеточные рибонуклеазы.
Claims (1)
1. Авторское свидетельстве) СССР № 596616, кл. С 12 Р 13/00, 1978.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU782691466A SU787464A1 (ru) | 1978-11-30 | 1978-11-30 | Способ получени рибонуклеаз из |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SU782691466A SU787464A1 (ru) | 1978-11-30 | 1978-11-30 | Способ получени рибонуклеаз из |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SU787464A1 true SU787464A1 (ru) | 1980-12-15 |
Family
ID=20796414
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU782691466A SU787464A1 (ru) | 1978-11-30 | 1978-11-30 | Способ получени рибонуклеаз из |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| SU (1) | SU787464A1 (ru) |
-
1978
- 1978-11-30 SU SU782691466A patent/SU787464A1/ru active
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| von Ehrenstein | [76] Isolation of sRNA from intact Escherichia coli cells | |
| US3708397A (en) | Syrup conversion with immobilized glucose isomerase | |
| Lis | Purification of glutamic-aspartic transaminase | |
| JPH04228072A (ja) | リポペプチドデアシラーゼ | |
| EP0531639A2 (en) | Tocopherol cyclase | |
| Yamasaki et al. | Purification and crystallization of α-glucosidase from Mucor javanicus | |
| IE43801B1 (en) | Process for the preparation of clavulanic acid | |
| SU787464A1 (ru) | Способ получени рибонуклеаз из | |
| SU579901A3 (ru) | Способ получени 7-( - -аминофенилацетамидо)-дезацетоксицефалоспорановой кислоты (цефалексина) | |
| JP2787446B2 (ja) | Ａｂ−００６抗生物質及びその製造方法 | |
| Misaki et al. | Studies on the Protease Constitution of Aspergillus oryzae Part I. Systematic Separation and Purification of Proteases | |
| CA1143683A (en) | Production of increased yields of cellulolytic enzymes from thielavia terrestris and separating methods therefor | |
| JPS6010718B2 (ja) | メイタンシノ−ル，メイタナシンおよびメイタンシノ−ル・プロピオネ−トの製造法 | |
| US4581332A (en) | Novel alkaline protease | |
| US4100028A (en) | Method for purification of proteolytic enzymes | |
| GB1487269A (en) | Enzyme recovery method | |
| JPH01281082A (ja) | ノイラミニダーゼ・アイソザイムｓ及びガングリオシド類の製造法 | |
| JPH0998779A (ja) | トレハロース合成酵素、その製法及びそれを用いたトレハロースの製造法 | |
| SU596616A1 (ru) | Способ получени кристаллической гуанил-рибонуклеазы | |
| JP2891023B2 (ja) | ランチオニン含有物の製造方法 | |
| GB1491263A (en) | Method of cultivating single-cell food proteins by a fermentation process | |
| US3661716A (en) | Process for simultaneous fractionation and purification of protease and ribonuclease of rhizopus mold | |
| SU582745A3 (ru) | Способ получени туберкулина | |
| RU2230119C1 (ru) | Способ получения дисахарида | |
| SU1402619A1 (ru) | Способ получени фосфоэстераз гриба РеNIсILLIUм вRеVI-сомрастUм |