SU787031A1 - Способ получени препарата "трансфер-фактора - Google Patents

Description

1

Изобретение относитс  к медицине а именно к иммунологии, и может быть использовано при получении иммунологических стимул торов.

В современной терапии иммунодефицитных состо ний, аллергических и аутоиммунных заболеваний, а также при лечении хронических инфекций и В онкологичес сой практике в качестве вспомогательного средства примен ютс  низкомолекул рные (ниже 300GC10000 дальтон) компонены лимфоцитарных лизатов, называемые препаратами трансфер-фактора (фактора, перенос щего реципиенту клеточный иммунитет от донора лимфоцитов). Подобный препарат может быть использован с диагностическими цел ми и в экспериментальной эммунологии.

Известны способы получени  препарата трансфер-фактора из лимфоцитов донорской крови, лимФоидных органов , например миндалин, из которых тем или иным способом (замораживание и оттаивание, фенольна  экстракци , экстракци  детергентами) готов т экстракт или лизат. Полученные лизаты или экстракты подвергают диализу или ультрафильтрации дл  выделени  низкомолекул рной Фракции, которую затем лиофилизируют 1.

Известен также способ получени  препарата трансфер-фактора дл 

5 индукции клеточного иммунитета:препарат экстрагируют с тритона Х-100 из культивированных лимфоцитов , разрушенных замораживанием и. оттаиванием, затем вьадел ют низкомоtO лекул рную фракцию экстракта с

помощью ультрафильтрации на полых волокнах ХМ-50, РМ-10 и М-2 (Амикон, США) и лиофилизируют 2.

Однако указанный способ предусматривает в качестве исходнО1 о сырь  только лимфоциты, источники которых могут быть ограничены. Кроме того, применение детергента (тритона Х-100) дл  оптимизации условий

20 экстракции не обеспечивает получени  препарата без привнесенных примесей: В конечном продукте остаетс  тритон Х-100, обладающий побочной биологической активностью, поскольку способ не предполагает условий дл  его удалени .

Цель изобретени  - расширение сырьевой базы дл  получени  препарата. Поставленна  цель достигаетс 

30 тем, что В предлаг аемом способе получени  препарата трансфер-фактора в качестве биологического материала используют плазму донорской крови, экстракцию провод т этанолом при конечной концентрации его 3,0-3,5% и насыщении раствора двуокисью углерода , а. в качестве газа, создающего давление при ультрафильтрации, исJrloльзyют двуокись углерода при рабо чем движении его 0,15-0,20 МПа.

Пример . После обычной подготовки к ультрафильтрации (центрифуги ровани  и фильтрации через мембранный фильтр Владипор МФА-0 55) 482,5 см плс13мы донорской-крови помещают в  чейку дл  ультрафильтрации. При посто нном перемешивании без вспенивани  прибавл ют см этанола

(9. Воздух из  чейки вытесн ют с помощью сжатой углекислоты, после герметизации ультрафильтрационной системы устанавливают рабочее давление углекислоты 0,2 МПа. Ультрафильтрацию ведут в течение 4 ч {мембрана Владипор УЛМ-150, рабоча  площадь 150 см ). Содержащийс  в фильтрате активный продукт разливают по 2 см в ампулы и лиофилизируют.

Тестирование полученного препарата провод т по измерению его цитоиммобилизующей активности.

Результаты реакции торможени  ,активной миграции макрофагов морской свинки представлены в табл.1, а изменение электрофоретической подвижности индикаторных клеток - в табл,2.

Таблица 1

Перитонеальные

клетки

морской

свинки ;Прединкубаци , -1 препаратом трансфер90 мин при комнатной температуре. Миграци  из капилл ров в течение 18 ч

Клетки PPD Стабилизикрови ту- туберку- рованные беркулин- лина эритроциты негативного донора

Прединкубаци , как б опыте, представленном в табл.1 Оценка реакции с помощью цитоферометра (Оптон).

7(f;fc

Стафилокок- Макрофаги ковый анти- морской фагин свинки

14 фактора in vitro культивировани . Твблица2

Как видно из приведенных результатов тестировани , препарат трансфер-фактора , полученный по предлагаемому способу, сообщает лимфоцитам нормальной морской свинки и туберкулин-негативного донора способность вьщел ть лимфокины в ответ на антиген (антифагин - в реакции торможени  миграции макрофагов морской свинки и PPD - в реакции замедлени  электрофоретической подвижности индикаторных клеток).

Использование предлагаемого способа получени  препарата трансферфактора позвол ет привлечь дополнительный источник сырь , свободный от микробной контаминации (например, по сравнению с лимфоцитами миндалин) Препарат трансфер-фактора может быть добавочным продуктом при производстве донорского гамгла-глобулин а и антилимфоцитарного глобулина, формула изобретени 

Способ получени  препарата трансфер-фактора путем экстракции биологического материала с последующей ультрафильтрацией экстракта под давлением газов, отличающий с   тем, что, с целью расширени  сырьевой базы, в качестве биологического материала используют плазму донорской крови, экстракцию провод т этанолом при конечной концентрации его 3,0-3,5% и насыщении раствора двуокисью углерода, а в качестве газа, создающего давление при ультрафильтрации используют двуокись углерода при рабочем далвении его 0,15-0,20 МПа.

Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе

1.Лоуренс X. и Эль-Аскари С. Приготовление и очистка фактора переноса . Методы изучени  in vitro клеточного иг.мунитета. М. , 1974, с.256-272.

2.Патент Великобритании 1443948,-кл. А 61 К 45/00, 20.10.1972.

Claims (1)

1. формула изобретения

   Способ получения препарата трансфер-фактора путем экстракции биологического материала с последующей ультрафильтрацией экстракта под давлением газов, отличающий с я тем, что, с целью расширения сырьевой базы, в качестве биологичес кого материала используют плазму до5 норской крови, экстракцию проводят этанолом при конечной концентрации его 3,0-3,5% и насыщении раствора двуокисью углерода, а в качестве газа, создающего давление при ульЮ трафильтрации используют двуокись углерода при рабочем далвении его 0,15-0,20 МПа.