SU571267A1 - Способ получени фитогемагглютинина - Google Patents

Description

i . .

, Изобретение ОТНОСИТСЯ к способам получени  биологически активных веществ, которые могут найти применение в биологии и.медицине в качестве стимул торов митозов в культуре кчеток, а также как стимул тор |Кроветворенй  при введении в организм.

Известен способ получени  фитбгемагглк инийа из муки различньге сортов фасоли пу:тем высаливани  из раствора целевого про;дукта сульфатом аммони  в кислом значении рН, диализа, добавлени  солей и окончательным отделениеМфитслгемагглю ининав ацетоне с последуюшей стерилизацией и концентрированием продукта.

Однако такой способ не обеспечивает высокой ЧИСТОТЫ и активности целевого про дукта.

С целью повышени  чистоты/и активное:-. ти целевого продукта по предлагаемому ciioсобу в качестве источника сырь  исполь«зуют сорта фасоли, имеющие белые почковидные бобы, из которых после экстракции выдел ют фитогемагглютинин путем обработки раствора экстрактом щитовидной железы, затем осадок раствор ют в воде, нейтрайизуют , после Диализе добавл ют .хлорнотый кальций и хлористый марганеа.

Дл  получени  митогенноактивных препаратов фитогемагглютининов пригодны сорта фасоли, имеющие белые почковидные бобы со средними размерами 16x8x5,2 мм н весом 400-50О г йа 1 Ттыс. сем и.

Размол бобов фасоли провод т на гомргйнизаторе типа кофемолки с достаточной пропускной способностью или на жерновой мельнице . Дл  Хорошего выхода препарата padMap частиц муки не более 0,5 мм.

3 кг фасолевой муки экстрагируют 15 л 1%-Ного раствора хлористого, натри  при посто нном перемешивании I  . Центрифугируют 15 мин при ЗООО об/мин. Надосадочную жидкость довод т до . рН 4 концентрированной СГ1ЛЯНОЙ кислотой, и осадок дал ют центрифугированием 20 мин. Надосадочную жидкость довод т до рН 8 раствором едкрго натра и осадок удал ют центрифугированием 15 мин. Надосадочиую жидкость собирают и довод т до рН 6,5 концентрированной сол ной кислотой.

К надосалочной жидкости добавл ют 9ОО мл экстракта щитовидной железы. Смесоставл ют на 0,5 -2 ч, после чего осадок собирают центрифугированием 15 мин .при ЗООО об/мин. Осадок отмывают 3 раза тр&хкратным объемом холодного физраствора .

Экстракт щитовидной железы получают путем размалывани  щитовидных желез крупного рогатого скота на м сорубке экстрагировани  2 ч трехкратным объемом физраствора и центрифугировани  15 мин нри ЗООО об/мин.

Осадок, полученный на предьщущей стадии , размешивают в воде до объема 80О1ООО мл и довод т до рН 3 концентрированной сол ной кислотой. К раствору добавл ют сульфат аммони  из расчета 550 г/л и корректируют рН до. 3. Осадок собир&ют центрифугированием-15 мин при 6000 оё/мин Затем осадок размешиватот в трехкратном, объеме воды, довод т до рН 3 и центрифугируют 15 мин при 6ООО об/мин. К полученной надосадочной жидкости добавл ют сульфат аммони  из расчета 400-450 г/л. Осадок собирают центрифуг«рс анием 2Омин при 6ООО об/мин, раствор ют его в 100мл воды и довод т до рН 7. Полученный раствор диализуют против дистиллированной во|ды 24 ч при 4с. При этом часть белка выпадает в осадок. К полученной таким образом суспензии добавл ют из расчета на 10О мл 1 г хлористого натри  200 мг хлористого кальци  и 5О мг хлористого марганца ,, после чего диализуют еще 12ч

против 1 % хлористого натри . По OKOHffiнии диализа раствор центрифугируют дл  удалени  небольшого осадка, стерилизуют фильтрованием через фильтр Зейца, стерильно фасуют во флаконы по 10 мг белка и лиофилизуют.

Выход продукта 2-2,5 г из 1 кг сырь . Полученный фи гемагглютинин облада РТ митогенной активностью, обеспечивающей

не менее 15О метафазных пластинок на 10О мкг ФГА и вызывают балластное превращение не менее 75% лимфоцитов в культуре .

Предлагаемый способ обеспечивает увеличение выхода продукта в 3-4 раза с высокой степенью чйстотыИ активностью продукта .

Claims (1)

1. Формула изобретени 

   Способ получени  фитогемагглютинина путем экстракции фасолевой муки раствором .хлористого натри  и последующим вььсаливанием сульфатом аммони  и диализом, отличающийс  тем, что, с целью повышени  чистоты и активности целевого продукта, в качестве источника сырь  исползуют сорта фасоли; имеющие белые почковидные бобы, из которых после экстракции вьщел ют фитогемагглютинин путем обработки раствора экстрактом щитовидной железы , затем осадок раствор ют в воде, нейтрализуют после диализа добавл ют хлористый кальций и .хлористый марганец.