SU1187824A1

SU1187824A1 - Способ получени иммуностимул тора

Info

Publication number: SU1187824A1
Application number: SU833588257A
Authority: SU
Inventors: Владимир Хацкелевич Хавинсон; Вячеслав Григорьевич Морозов; Нина Дмитриевна Сидорова; Владимир Леонидович Константинов; Олег Васильевич Чайка; Серафима Петровна Князева
Priority date: 1983-05-03
Filing date: 1983-05-03
Publication date: 1985-10-30

Abstract

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУНОСТИМУЛЯТОРА , включающий замораживание сырь , измельчение, экстрагирование 3%-ным раствором уксусной кислоты с добавлением хлористого цинка, фильтрование , обработку надосадочной жидкости ацетоном, отделение осадка, перерастворение его в воде и выделение целевого продукта, отличающ и и с тем, что, с целью повышени специфической активности целевого продукта, в качестве сырь используют лимфатические узлы животных, а сьфье перед заморозкой обрабатывают ацетоном.

Description

00

vj

00 bsD 4

Изобретение относитс к медицинской промьшшенности и касаетс способов получени биологически активных веществ из животного сырь , в частности веществ, обладающих иммуностимулиру ощим действием.

Цель изобретени - повышение специфической активности целевого продукта .

Пример .Берутлимфатические узлы животных, удал ют жировой слой, обрабатывают ацетоном с температу5°С

20 ч, заморалсивагот при -20 С

рой 0,5 кг лимфатических узлов измельчают на волчке, загружают в реактор с мешалкой и заливают 5 л 3%-ного раствора уксусной кислоты. Туда же добавл ют 0.005 кг хлористого цинка и экстрагируют 24 ч, перемешива 1 ч через каждые 8ч.

По окончании экстракции субстрат сливают и центрифугируют 20 мин со скоростью 3000 об/мин, надосадочную кидкость декантируют, к ней добавл ют ацетон (I часть элюата и 10 часте ацетона)j перемешивают и формируют оса./ток в течение 20 ч, Выпавитй осадок Б леушивают, измельчают и растворют 0,01 кг осадка в 0,5 л воды при ,0 (экстрагент - 1%-ньш раствор уксусной кислоты), Экстракцию провод т 4 ч. Удал ют балластные вещества путем фильтрации, В прозрачньй раствор добавл ют уксусной кислоты до ,0, Раствор стерильно фильтруют через пластины EKS, разливают во флаконы так, чтобы в калсдом содержалось по 10 мг вещества, и лиофилизируют.

Выход активного вещества из исходного сырь составит 0,005 кг,

II р и м е р 2, Берут лимфатически узлы лсивотных, промывают и обрабатывают ацетоном с температурой в течение 18 ч. Ацетон удал ют и сырье замораживают при t -20 С,

Берут 1 кг лимфатических узлов, измельчают. Измельченное сырье загружают в реактор с мешалкой и заливают 10 л 3%-ного раствора уксусной кислоты , туда же добавл ют0,01 кг хлорис того цинка и экстрагируют 28 ч, перемешива 1 ч через каждые 8 ч.

По окончании экстракции -субстрат сливают и центрифугируют в течение 20 мин со скоростью 3000 об/мин, надосадочную жидкость декантируют, к ней добавл ют ацетон при 18°С в соотношении 1:10 (1 часть элюата

и 10 частей ацетона), перемешивают и формируют осадок в течение 18 ч, Выпавший осадок высушивают фильтрованием , измельчают и раствор ют 0,02 кг в 1 л воды при ,0 (экстргент - 1%-ный раствор уксусной кислоты ) , Экстракцию провод т 3 ч при непрерьшном перемешивании, фильтруют После удалени балластных веществ в прозрачный раствор добавл ют уксусной кислоты до ,0, Раствор .стерильно фильтруют через пластины EKS, разливают во флаконы так, чтобы в каждом содержалось по 10 мг вещества , и лиофилизируют. Выход активного вещества из исходного сырь составл ет 0,01 кг,

П р и м е р 3, Подготавливают сырье - лимфатические узлы животных, и обрабатывают его ацетоном с температурой 24 ч, ацетон удал ют и замораживают при t -20°C, Берут 10кг лимфатических узлов, измельчают. Измельченное сырье помещают в реактор с мешалкой и заливают 100 л водного раствора.3%-ной уксусной кислоты , добавл ют 0,1 кг хлористого цинка и экстрагируют 36 ч при беспрерывном перемешивании в течение часа через каждые 8 ч.

По окончании экстрагировани субстрат отдел ют и центрифугируют его в течение 20 мин со скоростью 3000 об/мин, Надосадочную жидкость декантируют, к ней добавл ют ацетон в соотношении 1:10 (на 1 часть элюата 10 частей ацетона), перемеигивают и формируют осадок 24 ч. Выпавший осадок в количестве 0,2 кг высушивают фршьтрованием, измельчают и раствор ют в 2 литрах воды, подкисленной до ,0 уксусной кислотой.

Провод т экстракцию при непрерывном перемешивании 3 ч, удал ют балластные вещества путем фильтрации, В отфильтрованный раствор добавл ют уксусной кислоты до ,0, Раствор стерильно фильтруют через пластины EKS,, разливают во флаконы по 10 мг в каждый и лиофилизируют. Выход активного вещества, полученного предлагаемым способом, относительно используемого сырь составит 0,1 кг,

Биологическую активность вещества, вьщеленного из лимфатических узлов, оценивают следующим образом.

Животных, морских свинок, самцов весом 200-250 г раздел ют на 2 группы - опытную и контрольную по 25 шту в каждой. Опытным животным ввод т по 1 мг биологически активного вещества , полученного из лимфатических узлов, растворенного в 0,5 мл физиологического раствора. Вещество ввод т внутримышечно в течение А дней ежедневно. Контрольным животным ввод т по 0,5 мл физиологического раствора по аналогичной схеме. На п тые сутки всех животных забивают, вьдел ют тимус, селезенку и лимфатические узлы, определ ют в них удельную концентрацию лимфацитов (удельна концентраци - это количество клеток в тыс чах на 1 мг ткани).

Результаты исследований отражены в таблице.

Орган

Введение вещества, полученного из лимфатических узлов, приводит к значительному увеличению лимфоцитов во всех органах иммунной системы в среднем в 1,5-2 раза.

Вещество, полученное из лимфатических узлов, представл ет собой комплекс низкомолекул рных белковых веществ. При изучении токсичности обнаружено, что вещество не обладает в терапевтических дозах no6o4HiiO4 эффектом. Вещество может быть использовано в качестве иммуностимул тора с высокой биологической активностью.

Удельна концентраци (тыс, /мг) клеток в органах иммунной системы

Тимус

239 546 ±36 0,01

Claims

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУНОСТИМУЛЯТОРА, включающий замораживание сырья, измельчение, экстрагирование '3%-ным раствором уксусной кислоты с добавлением хлористого цинка, фильтрование, обработку надосадочной жидкости ацетоном, отделение осадка, перерастворение его в воде и выделение целевого продукта, отличающ и й с я тем, что, с целью повышения специфической активности целево го продукта, в качестве сырья используют лимфатические узлы животных, а сырье перед заморозкой обрабатывают ацетоном.

1187824 2