SU537114A1

SU537114A1 - Способ удалени пирогенных веществ из -аспарагиназы

Info

Publication number: SU537114A1
Application number: SU2058867A
Authority: SU
Inventors: Герш Израилевич Клейнер; Раймонд Арнольдович Жагат; Людмила Васильевна Пояркова; Лариса Михайловна Елизаровская; Дайна Яновна Дайя; Инара Карловна Звиргзда-Звиргздиня
Original assignee: Ордена Трудового Красного Знамени Институт Органического Синтеза Ан Латвийской Сср
Priority date: 1974-09-02
Filing date: 1974-09-02
Publication date: 1976-11-30

Description

танавливают рН 6,5-7,0 и снова центрифугируют . Получают 17,8 мл раствора с удельной активностью 180 МЕ/мг белка.

Аналогичным образом провод т вторую кристаллизацию . Получают 9,7 мл раствора L-аСпарагиназы с удельной активностью 185 МЕ/мг белка. После третьей кристаллизации получают 2,64 мл раствора с удельной активностью 200 МЕ/мг белка.

Провод т испытание на пирогенность. Прин та тест-доза равн етс lOUO ME на кг веса кролика.

Раствор L-аспарагиназы, полученный растворителем кристаллического вещества в воде , развод т до концентрации 1000 МЕ/мл, внос т в качестве стабилизатора глицин в количестве 18,9 мг/мл, отфильтровывают через мембранный фильтр и лиофилизируют.

Результаты испытани на пирогенность представлены в табл. 1.

Таблица 1

Пример 2. 20 г лиофилизированного сырца L-аспарагиназы с удельной активностью 50 МЕ/мг белка раствор ют в 230 мл апнрогенной воды, подкисл ют до рН 5,2-5,4, охлаждают и фракционируют раствором ПЭГ молекул рного веса 1500 как указано в примере 1. Осадок, выпадающий при концентрации ПЭГ 5-10%, раствор ют и центрифугируют . Получают 173 мл раствора с удельной активностью 120 МЕ/мг белка. Провод т последовательно первую, вторую и третью кристаллизации аналогично примеру 1, с той разПример 3. 20 г лиофилизированного сырца L-аспарагиназы с удельной активностью 82 МЕ/мг белка раствор ют в 230 мл воды и фракционируют водным раствором ПЭГ молекул рного веса 1500 аналогично примеру 1. Осадок, выпадающий при концентрации ПЭГ 5-10%, раствор ют и центрифугируют. Получают 197 мл раствора с удельной активностью 170 МЕ/мг белка. Кристаллизацию провод т как в примере 1, с той разницей, что внос т

ницей, что внос т каждый раз 50%-ный раствор ПЭГ молекул рного веса 6000 до 1%, а изопропиловый спирт - до 10%. После первой кристаллизации получают

86 мл раствора с удельной активностью 177 МЕ/мг белКа. После второй кристаллизации получают 4,2 мл раствора с удельной активностью 200 МЕ/мг белка, после третьей кристаллизации раствор имеет удельную активность 205 МЕ/мг белка.

Результаты испытани на пирогенность представлены в табл. 2.

Т а б л и ц, а 2

каждый раз 50%-ный раствор ПЭГ молекул рного веса 6000 до 1,5%, изопропиловый спирт до 15%. После первой кристаллизации получают 93 мл раствора с удельной активностью 180 МЕ/мг белка. После второй кристаллизации препарат имеет удельную активность 170 МЕ/мг белка, после третьей кристаллизации - 180 МЕ/мг.

Результаты испытани на пирогенность представлены в табл. 3.

Пример 4. 20 г лиофилизированного сырца L-аспарагиназы с удельной активностью ПО МЕ/мг белка раствор ют в 230 мл воды и фракционируют водным раствором ПЭГ молекул рного веса 1500 аналогично цримеру 1.

Осадок, выпадающий при кондентрации ПЭГ 5-10% раствор ют, нерастворИ|Мую часть отдел ют центрифугированием. Получают 175 мл раствора с удельной активностью 200 МЕ/мг белка. Провод т три последовательные кристаллизации как в примере 1, с

Таблица 3

той разницей, что внос т каждый раз 50%-ный раствор ПЭГ молекул рного веса 6000 до 2,2%, изонропиловый спирт - до 10%, а кристаллический осадок первой, второй н третьей кристаллизации дважды промывают двойным объемом ацетона и высушивают до посто нного веса в вакуум-сушильном шкафу при температуре 40°С и остаточном давлении 30- 40 MiM рт. ст.

Результаты испытани на пирогенность представлены в табл. 4.

Таблица 4