SU507644A1 - Питательна среда дл культивировани продуцентов литических ферментов - Google Patents

Description

1

Изобретение относитс  к микробиолотии н может быть использовано дл  извлечени  ценных биологически активных веществ с преимущественной внутриклеточной локализацией , дл  обработки белково-витаминных кон центратов, дл  борьбы с некоторыми патогенными микроорганизмами и дл  1юлучени  чистых антигенов микроорганизмов кишечной группы.

Известна питательна  среда дл  культивировани  продуцентов литических ферментов, например Actindmyc9S rectfertsis содержаща  соевую муку, глюкозу, двузамешенный фосфорнокислый калий и воду.

Дл  получени  более активных ферментов предлагаема  питательна  среда дополнительно содержит азотнокислый аммоний, хлористый кальций, хлористый магний, сернокислый цинк и сернокислое железо, при этом указанные компоненты содержатс  в следу- юших количествах, %:

Соева  мука0,3-0,7

Глюкоза0,5-0,6

Азотнокислый аммоний 0,1

Двузамешенный фосфорно-

0,01

ОД1-0,О1 0,047-0,001 0,0012-0,0001 0,000016-0,ОО0001 0,000017-0,000001

Сернокислое железо 0,ОО152-О,ОООО1

Водаос гальное

Продуцент выращиваемс  на предлагаемой питательной среде в течение трех при посто нной аэрации среды при 25128 С. Накопление фермента в культураль ной жидкости происходит без введеии  ин|дукторов . Культуральна  жидкость после удалени  мицели  путем центрифугировани  при скорости вращени  6.ООО об/мин в те:Чение 15 мин служит исходным материалом дл  получени  ферментного препарата.

Пример. Ферментационна  среда, состава, %:

Соева  мука0,3

Глюкоза0,5

Л/Яу/VO;,0.1

KS НРОу0,01 С а ,11 ,0,0012 . ,047 hcSOif0,00152 СиВОч0,ОО0016 Zn.SOv0,000017 засеваетс  маточной культурой npofljTieHTa Actlnomyces recifensis trar. tijiicu.& 2435, предварительно выращенной в течение 2-3 суток на жидкой среде Чапека. В среду ввод т 8-10% посевного материала. Культивирование ведут трое суток в услови х активности аэрации и посто нном перемешивании среды при 25-28 С. После окончани  инкубации культуральную жидкость с рН 7.9-8,9 освобождают от мицели  и неиспользованных компонентов питательной cpe ды путем центрифугировани  при ско;рости. вращени  6000 об/ мин в течение 10-15 мин, при этом культуральна  жидкость содержит сырой литический фермент и используетс  в дальнейшем дл  его получени . Ферментный препарат извлекают путем насыщени  культуральной жидкости сернокислым аммонием до 0,4, солевой раст,вор ос- тавл ют при 4 в течение 16-3.8 час дл  формировани  осадка белка. Затем осадок собирают фильтрованием или центрифугированием при пониженной температуре , промывают холодным ацетоном, подсушивают и раствор ют в сукцинатном бу фере (рН -4,5, м-0,О2), раствор белка диализуют гкютив растворител , обесс07генный диализат высушивают при О под вакуумом . Литическую активность определ ют в прозрачной культуральной жидкости (активность сырого фермента) и в растворах ферментного белка следующим образом, К 2 мл суспензии живых клеток тесткультуры Stapfi а иге usдобавл ют 2 мл культуральной жидкости или фермент«ого раствора. Исходную плотность полученной суспензии измер ют на желтом светофильтре ФЭК-М (не должна превышать 2,О), термостатируют при 37 в течение бО мин, при этом изменени  мутности фиксируют через ка адые 15 мин. Степень лизиса клеток тест-культуры определ ют по формуле: at - аа. . 100, где: Ctt ajL плотность исходной суспензии, а - плотность суспензии через 6О мин. Об активности фермента суд т по степени лизиса и его скорости. Данные, характеризующие степень литической активности фермента-сырца, содержащегос  в культуральной жидкости в результате выращивани  продуцента ctinomyces recifensis tran fyttCUS 2435 на предлагаемой среде, приведены в таблице 1. Таблица 1

В таблице 2 приведены дшшые о вди ний 45 изменени  концентрации веществ, вход щих

Таблица 2. состав среды, на литическую активность получаемого ферментного препарата. Примечание. Активность фермента на

Предлагаема  питательна  среда дл  культивировани  продуцентов литических ферментов по сравнению с известной псюышает активность ферментного препарата более, чем в два раза, при уменьшении длительности ферментации также, примерно, в два раза.

Claims (1)

1. Питательна  среда дл  культивироваим  продуцентов литических ферментов, например , Acttnomycei recifensiS , содержаща  соевую муку, глюкозу, двузамещенный фосфорнокислый калий и воду, отличающа с  тем, что, с целью получеии  более активных ферментов, она дополнительно содержит азотнокислый аммоний.

Продолжение таблицы 2

хлористый кальций, хлористый магний, хлористый марганец, сернокислую медь, серкокислый цинк и сернокислое железо, при этОМ указанные компоненты содержатс  в следующих количествах, вес.%:

Соева  мукаО,3-О,7

Глюкоза0,5-0,6

Азотнокислый аммоний0,1

Двузамещеиный фосфорно0 .01

кислый калий

0,11-0,01 Хлористый кальций 0,047-0,001 Хлористый магний 0,0012-0,0001 Хлористый марганец О,ОООО16Сернокисла  медь О,ООО001

Сернокислый цинк ,0,000017-0,000001 Сернокислое железе 0,00152-0,00001 Водаостальное. предлагаемой среде прин та за 1ОО%.