SU433688A3

SU433688A3 - Способ получения стимулятора интерферопа

Info

Publication number: SU433688A3
Application number: SU1762525A
Authority: SU
Original assignee: Иностранец Ясукиё Накасе; Иностранна фирма; Китасато Институт
Priority date: 1971-03-22
Filing date: 1972-03-20
Publication date: 1974-06-25
Also published as: FR2130533B1; NL7203756A; JPS5133961B1; BE780976A; US3852423A; DE2213709A1; GB1387592A; FR2130533A1; NL154783B

Description

1

Изобретение относитс к области медицины.

Известен способ получени стимул тора интерферона из микроорганизмов путем выращивани их на жидкой или твердой питательной среде, выделени основных фракций дезинтеграфией , ультрафильтрацией и хроматографией .

Целью предложенного изобретени вл етс повышение активности препарата.

Дл достижени поставленной цели в качестве исходного сырь используют микроорганизмы типа Bordetella pertusis в I, И п III фазе развити .

Пример 1. Микроорганизмы вида Bordetella pertusis в III фазе развити подвергают взбалтыванию при 35-37° С в течение 72 часов в модифицированной культуральной среде Кохена-Вилера. После культивировани культуральную жидкость центрифугируют с получением 1,000 мл надосадочной жидкости, которую фильтруют в стерильных услови х, в результате чего получают 900 мл активной фракции А.

Аналогичным образом получают 900 мл активной фракции В при использовании микроорганизма вида Bordetella pertusis во II фазе развити .

Аналогичным образом получают 900 мл активной фракции С при использовании микроорганизма вида Bordetella pertusis в I фазе развити .

Вышеупом нутую активную фракцию А концентрируют до 50 мл, затем концентрат

подвергают очистке хроматографическим путем с применением ДсАУ-Сефадекса A-bU и получают 50 мл активной фракции. Аналогичной обработке подвергают активные фракции В и С.

Пример 2. Микроорганизмы вида Bordeteila pertHsis в 111 фазе развити культивируют при 35-3/ С в течение 48 часов в угольно-агаровой среде. Затем 10 г микробных клеток сооирают и суспендируют в ШО мл в солевом фосфатном буферном растворе, полученную суспензию подвергают в течение 30 минут звуковой обработке (10 кгц) с целью измельчени микробных клеток. Затем жидкость , содержащую измельченные микробные

клетки, центрифугируют. 90 мл верхнего сло жидкости обрабатывают хроматографическим путем с применением Сефадекса (J 150, получают 40 мл активной фракции D-1. Аналогично методике, приведенной выще, культивируют

микроорганизмы впда Bordetella pertusis в HI фазе развити при 35-37°С в течение 72 часов, получа 40 мл активной фракции D-2.

Аналогичным образом получают 40 мл активной фракции Е с применением микроорганизма вида Bordetella pertusis во II фазе развити .

Описанным выше сиособом иолучают 40 мл активной фракции F с применением микроорганизма вида Bordetella pertusis I фазы развити . Затем жидкость, содержащую измельченные микробные клетки фазы 1, центрифугируют и получают верхний слой жидкости , которую затем подвергают хроматографической очистке с применением ДЭАЭ-целлюлозы в качестве адсорбента, в результате чего получают 30 мл активной фракции G.

Результаты изучени получени интерферона из активных фракций А-G, иолучеииых по методикам примеров 1 и 2, приведены ниже со ссылкой на следующие сравнительные примеры.

Сравнительный пример 1.

Определение количества вырабатываемого интерферона (оныты in vitro).

Смешанный раствор, содержащий 1,4 объемных частей солевого фосфатного буферного раствора и 1 объемную часть раствора РинОценка вырабатываемости интерферона (в опытах in vifro)

гера, смешивают с 0,6 объемными част ми тел чьей сыворотки, полученную смесь смешивают с 3 объемными част ми дистиллированной воды с получением гипотонического раствора. Каждую из активных фракций А-G разбавл ют указанным гипотоническим раствором до различных концентраций с получением разбавленных образцов. С другой стороны приготовл ют клеточную суспензию таким

образом, чтобы ткаии селезеики и лимфатических узлов кролика весом 500-1000 г, убитого нроколом в сердце, были разорваны с номощью пинцета, и иолученные клетки суспендируют в культуральной среде до концентрации 5-10 клеток иа одну чащку (дл селезеики и лимфатических узлов). Затем каждый из вышеуказанных разбавленных образцов смешивают с вышеупом нутой клеточиой суспензией и культивируют при 25°С в течение

24 часов, культуральиую жидкость центрифугируют с получеиием верхнего сло жидкости, который затем подвергают оценке на вырабатываемость интерферона. Полученные результаты приведены в таблице 1.

Таблица 1

Титр интерферона выражаетс в отношении наивысшего разбавлени , вызывающего 50% ингибирование количества и размеров кров ных пластинок по сравнению с контролем.

Сравнительный пример 2.

Оценка вырабатываемости интерферона (в опытах in vitro),

Каждый из разбавленных образцов, полученных по методике сравнительного примера

Оценка вырабатываемости интерферона (в опытах In vitro)

1, ввод т в дозировке 0,5 мл путем внутривенного введени кроликам весом от 500 до 1000 г. На 2-й и 5-й час после инъекции отбирают по 3 мл крови у каждого кролика посредством прокола сердца, и сыворотку, выделенную из указанной крови, подвергают оценке на вырабатываемость интерферона, аналогично методике сравнительного примера 1. Полученные результаты приведены в таблице 2.

Таблица 2

Предмет изобретени

Способ получени стимул тора интерферона из микроорганизмов путем выращивани их на твердой или жидкой питательной среде с последующей дезинтеграцией, ультрафильтрацией и хроматографией, отличающийс тем, что, с целью увеличени активности препарата , в качестве исходного сырь используют микроорганизмы типа Bordetella pertusis в I, II и III фазе развити .

20