SU1750690A1 - Способ получени конъюгированного энтеротоксина ЕSснеRIснIа coLI - Google Patents
Способ получени конъюгированного энтеротоксина ЕSснеRIснIа coLI Download PDFInfo
- Publication number
- SU1750690A1 SU1750690A1 SU894788233A SU4788233A SU1750690A1 SU 1750690 A1 SU1750690 A1 SU 1750690A1 SU 894788233 A SU894788233 A SU 894788233A SU 4788233 A SU4788233 A SU 4788233A SU 1750690 A1 SU1750690 A1 SU 1750690A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- thermostable
- enterotoxin
- thermolabile
- toxin
- hours
- Prior art date
Links
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Изобретение относитс к биотехнологии и может быть использовано дл получени конъюгированного термостабильного энтеротоксина кишечной палочки. Сущность изобретени : культивирование токси- генных штаммов осуществл ют на среде следующего состава, г/л: перевар Хоттинге- ра 80-250; сернокислый магний 3,0-3.8: однозамещенный фосфорнокислый натрий 6,0-6,8; однозамещенный фосфорнокислый калий 3,0-3.8; глюкоза 5#-7,0; дистиллиро ванна вода до 1 л, отдел ют токсиносодер- жащий супернатант, термолабильный и термостабильный токсины осаждают сульфатом аммони при разной степени насыщени , выдерживают преципитаты 18-20 ч при 2-4°С, центрируют осадки термолабильного и термостабильного токсинов, раствор ют в дистиллированной воде и трис-HCI буфере соответственно и диализу- ют, после чего «х объедин ют в соотношении 100:1 и конъюгируют глутаровым альдегидом до конечной концентрации 2 г/л, конъюгат диализуют сначала против фосфатного буфера, а затем против трис- HCI буфера, конъюгат раствор ют в трис- HCI буфере, содержащем бычий сывороточный альбумин. 6 табл. Ън Ё
Description
Изобретение относитс к биотехнологии и касаетс способа получени конъюгированного термостабильного энтеротоксина кишечной палочки и может быть использовано в производстве вакцинных пре- паратов против колибактериоза и смешанной инфекции (колибактериоз, рота, коронавирусна инфекци ).
Кишечна палочка, котора выдел етс от больных и павших тел т, в основном продуцирует термостабильный энтеротоксин и в малой степени термолабильный. Термостабильный энтеротоксин не обладает им- муногенными свойствами. Он приобретает эти свойства лишь в сочетании с носителем с большей молекул рной массой.
Наиболее близким техническим решением вл етс способ получени конъюгированного энтеротоксина из термостабильного и термолабильного энтеротоксинов E.coli с помощью 1 этил 3/3 диметиламинопропил/ кар- бодиимида Предварительно очищенный термостабильный и термолабильный энтеро- токсины с помощью хроматографии (амбер- лит НАД-2), ацетонного фракционировани , последовательной гельфильтрации на сефа- дексе G25, конъюгировали в 0,1 М фосфатном буфере (рН 7,0) в течение 96 часов при 4°С. с последующим диализом против НгО в течение 48 ч при 4 °С.
Однако известный способ имеет следующие недостатки: термостабильный и терХ|
СЛ О Ч) О
молабильный энтеротоксины подвергали длительной очистке с использованием дорогосто щего оборудовани и реактивов: хроматографии (амберлит НАД-2), ацетонного фракционировани последовательной гель- фильтрации на сефадексе G25 и ионнооб- менной хроматографии (ДАЕ сефацил), повторной хроматографии на сефадексе G25. Вследствие больших потерь токсинов на этапах очистки, особенно на этапах ион- нообменной и тонкослойной хроматографии не удаетс собрать достаточного количества токсинов, необходимых дл проведени всего комплекса исследований по конъюгированию и дл иммунизации боль- ших групп животных. Конъюгацию энтеро- токсинов осуществл ют с использованием дорогосто щего реактива 1 этил 3/3 диме- тиламинопропил/ карбодиимида, который в нашей стране не производитс . Метод тре- бует строгого соблюдени оптимального соотношени карбодиимида и энтеротокси- нов при конъюгации. Так при повышении этого соотношени до 100:1 резко снижаетс антигенность коныогата. Увеличение времени конъюгации существенно не вли ет на увеличение процента содержани термостабильного энтеротоксина в конечном конъюгате. При сокращении времени конъюгации менее 18 ч резко снижаетс анти- генность конъюгата. Нз весь процесс конъюгации энтеротоксинов затрачиваетс более 260 ч.
Цель изобретени - повышение имму- ногенности целевого продукта, ускорение и упрощение способа.
Поставленна цель достигаетс тем, что культивирование штаммов E.cotl, продуцирующих термостабильный и термолабильный энтеротоксины, осуществл етс на среде, содержащей: перевар Хоттингера 80-250 мл (1000 мг% аминного азота), магний сернокислый 3,0-3,8 г, натрий фосфорнокислый однозамещенный 6,0-6,8, калий фосфорнокислый однозамещенный 3,0-3,8, глюкоза 5,0-7,0 (только дл термостабильного энтеротоксина), вода дистиллированна до 1 л.
18-24-часовые культуры центрифугируют при 6000-8000 об/мин, в течение 30-40 мин, удал ют биомассу, токсиносодержа- щий материал осаждают сульфатом аммони из расчета 650 г/л, Осажденный токсиносодержащий материал центрифугируют при 6000-8000 об/мин, в течение 30- 40 мин на холоду, надосадок удал ют, а суммарные белковыэ фракции энтеротоксинов обрабатывают смесью этанол-эфир (1:1) дл удалени липидов. Центрифугируют при 6000-8000 об/мин в течение 10-20
мин при 2-4°С. Верхний слой отбрасывали, а осадок перераствор ли в 0,05 М трис-НС буфере из расчета 1/10 от начального объема .
Обессоливание и фракционирование суммарной белковой фракции термостабильного энтеротоксина провод т на хрома- тографических колонках с сефадексом G-25, а термолабильного - G-150. Элюцию проводили 0,15 н NaCI. В ходе фракционировани выдел ют 5 белковых фракций термостабильного и термолабильного энтеротоксинов .
Концентрацию белка в выделенных фракци х определ ют с помощью спектрофотометра СФ-26 при 260 и 280 нм по методу Варбурга и Христиана.
Дл электрофоретического контрол гомогенности выделенных фракций их развод т в 50 мкл фосфатно-солевого буфера, содержащего 5% ДСП. Биологическую активность фракций термостабильного энтеротоксина определ ют с помощью теста анальной пробы на мышатах-сосунах, а термолабильного - с помощью теста отека лап белых мышей и Бикентеста.
Белковые фракции термостабильного и термолабильного энтеротоксинов, обладающие наибольшей биологической активностью , концентрируют против ПЭГ и используют дл конъюгации.
Готов т смесь термостабильного и термолабильного энтеротоксинов в соотношении 1001 в фосфатно-солевом буфере (рН 7,0-7,2). К смеси добавл ют 25%-ный раствор глутарового альдегида до конечной концентрации 1-3 г/л, полученную смесь выдерживают 1-2 ч при 18-20°С, и получают конъюгат. Конъюгат диализируют против фосфатно-солевого буфера (рН 7,0-7,2) в течение ч при 2-4°С. Провод т повторный диализ против 0,05 М трис-HCI буфера (рН 8,0-8,2) в течение 20-24 ч при 2-4°С,
С помощью диализных мешочков происходит задержка всего конъюгированного энтеротоксина и выдел етс непрореагировавший термостабильный энтеротоксин и глутара/ ьдегид.
Количество св занного термостабильного энтеротоксина в конъюгате определ ют посредством суммировани возрастани количества белка (по Лоури), присутствующего в диализате сверх количества термолабильного токсина, первоначально добавленного в конъюгат. Дл увеличени имму- ногенной активности полученного конъюгата к нему добавл ют раствор трис-HCI буфера, содержащий бычий сывороточный альбумин из расчета 10 г/л, рН 8,0-8,2.
Полученный конъюгат при необходимости концентрируют до 1/10 объема прошв ПЭГ.
Термостабильный и термолзбильный энтеротоксины концентрируют и очищают с 5 помощью более м гкого способа сульфатом аммони , в отличие от более грубого ацетон- ного фракционировани в прототипе, что зачастую приводит к значительным потер м активности токсиносодержащего материа- 10 лэ, вследствие денатурации белковых молекул .
Дл конъюгации термостабильного и термолабильного энтеротоксинов в предлагаемом способе используют глутаральде- 15 гид, который вл етс не только хорошим сдваивающим агентом, но и веществом, значительно снижающим токсические свойства конъюгата, при полном сохранении антигенных детерминант его составл ющих. 20 Использование глутаральдегида дл конъюгации энтеротоксинов E.coli позвол ет сократить врем конъюгации почти в 30 раз, по сравнению с прототипом.
Предлагаемый способ позвол ет пол- 25 учать конъюгированный энтеротоксин E.coli в количествах, достаточных дл иммунизации больших групп животных, а также добитьс увеличени на 10-20% выхода конечного продукта,30
Добавление к новому молекул рному образованию, конъюгированному энтеро- токсину E.coli, бычьего сывороточного альбумина позвол ет значительно увеличить его иммуногенную активность.35
Использование в за вл емом решении легкодоступных реактивов и оборудовани позвол ет ускорить способ получени конъ- югированного энтеротоксина E.coli более чем в 2 раза.40
Способ осуществл ют следующим образом .
Пример. Культуры кишечной палочки , выделенные от павших животных, продуцирующие термостабильный и 45 термолабильный энтеротоксины, высевают раздельно на питательную среду, содержащую следующие компоненты: перевар Хот- тингера 200 мл (содержание аминного азота 1000 мг%); калий фосфорнокислый одноза- 50 мещенный 3,5 г; натрий фосфорнокислый однозамещенный 6,5; сульфат магни 3,5; глюкоза 6,0 (только дл культивировани термолабильного штамма E.coli), вода дистиллированна до 1 л, рН 7,14 и культивиру- 55 ют в течение 20 ч при 37°С в услови х аэрации. Бульонные культуры центрифугируют при 8000 об/мин при 4°С в течение 40 мин и получают надосадочную жидкость, содержащую энтеротоксины.
Токсиносочержащий материал осаждают медленным добавлением сульфата аммони из расчета 650 г/л и оставл ют на 20 ч при непрерывном встр хивании при 4°С. Через 2 ч токсиносодержащий материал осаждают центрифугированием при 8000 об/мин в течение 30 мин на холоду. Осадки суммарных белковых фракций знтеротокси- нов обрабатывают смесью этанол-эфир (1:1) с целью удалени липидов. Центрифугируют при 8000 об/мин в течение 20 мин, верхнюю эфирсодержащую фазу удал ют, а осадок перераствор ют в 0-.05 М трис-HCI буфере (рН 8,0) из расчета 1/10 от начального объема .
Материал, содержащий термостабильный энтеротоксин, обессоливают и фракционируют на хроматографической колонке с сефадексом G-25, а термолабильный энтеротоксин - на колонке с сефадексом G-150. Элюцию провод т 0,15 н NaCI (рН 7,0), скорость удалени жидкости из колонки 2-3 капли в минуту. Элюатсобираютфракци ми по 5 мл. Количество белка в каждой фракции определ ют на спектрофотометре СФ-26 при 260 и 280 нм по методу Варбурга и Христиана.
Дл электрофоретического контрол гомогенности выделенных фракций их развод т в 50 мкл фосфатно-солевого буфера, содержащего 5% ДСН.
Биологическую активность выделенных фракций термостабильного энтеротоксина определ ют с помощью теста анальной пробы на мышатах-сосунах, а термолабильного - с помощью отека лап белых мышей и Бик- кентеста.
Белковые фракции, обладающие наибольшей биологической активностью, концентрируют против ПЭГ до 1/10 объема и используют дл конъюгации.
Готов т смесь термостабильного и термолабильного энтеротоксинов в фосфатно- солевом буфере рН 7,0 в соотношении 100:1. К смеси добавл ют 25%-ный раствор глутарового альдегида до конечной концентрации 2 г/л, полученную смесь выдерживают в течение 2 ч при 20°С и получают крнъюгат. Конъюгат диализируют против фосфатно-солевого буфера рН 7,0 в течение 20 ч при 4°С. Провод т повторный диализ против 0,05 М трис-HCI буфера рН 8,0 в течение 20 ч при 4°С.
Количество св занного термостабильного энтеротоксина в конъюгате определ ют посредством суммировани возрастани количества белка (по Лоури), присутствующего в диализате сверх количества термолабильного энтеротоксина, первоначально добавленного в конъюгат. Дл увеличени
иммуногенной активности полученного конъюгата к нему добавл ют раствор трис- HCI буфера, содержащего бычий сывороточный альбумин из расчета 10 г/л, рН 8,0.
Полученный конъюгат при необходимости концентрируют до 1/10 объема против ПЭГ.
Контроль стерильности и безвредности полученного препарата осуществл ют по общеприн той методике.
Иммуногенность препарата вместе с адъювантом (раствор гидроокиси алюмини ) провер ют на белых мышах массой 16 г. Вакцинирующий материал ввод т двукратно , подкожно в дозе 0,3 и 0,5 мл с интервалом в 7 дней. Через 20 дней после второй прививки животных заражают летальными дозами термостабильного и термолабильного энтеротоксинов и культурами гомологических и гетерологических штаммов E.coli.
Вакцинированные животные в 95% случаев про вл ют устойчивость против 2 ДЛМ токсинов и ЛДбО культур гомблогичного и в 80% случаев защита оставила против 2 ДЛМ токсинов и ЛДбо культур гетерологичных штаммов Е.соП.
В контрольных группах мыши, которых заражают 2 ДЛМ токсинов и ЛДво культур, пали в 90% случаев.
Сенсибилизирующую активность пр ё- пйрата исследуют в тесте активной системной анафилаксии на морских свинках по методу Немова.
Пример 2. Культивирование токси- генных штаммов Е.со, получение нативных токсинов, их концентрирование и очистку, контроль гомогенности и определение биологической активности провод т аналогично примеру 1.
Готов т смесь термостабилъното и термолабильного энтеротоксинов в фосфатно- солевом буфере в соотношении 50:1 (рН 7,0). К смеси добавл ют 25%-ный раствор глутарового альдегида до конечной концентрации 2 г/л, полученную смесь выдерживают при 20°С в течение 2 ч. Полученный конъюгат диализируют против фосфатно-солевого буфера (рН 7,0) в течение 20 ч при 4°С. Повторно диализируют против 0,05 М трис- HCI буфера (рН 8-0) в течение 20 ч при 4°С. В конъюгат добавл ют трис-HCI буфер, содержащий БСА.
Пример 3. Культивирование кишечной палочки продуцирующей термостабильный и термолабильный энтеротоксины, получение и очистку, определение гомогенности и биологической активности осуществл ли как в примере 1. В данном примере готов т смесь термостабильного и термолабильного энтеротоксинов в соотношении 150:1 в фосфатно-солевом буфере рН 7,0 Конъюгацию провод т аналогично примеру 1.
5Пример 4. В примере 4 изменена
концентраци глутарового альдегида с 2 г/л до 1,5 г/л. Смесь термостабильного и термолабильного энтеротоксинов готов т в соотношении 100:1 в фосфатно-солевом буфере
0 рН 7,0. В дальнейшем конъюгацию провод т аналогично примерам 1-3.
Пример 5. В этом примере концентраци глутарового альдегида вз та 2,5 г/л. Термостабильный и термолабильный энте5 ротоксины берут в соотношении 100:1. Режим конъюгации тот же, что и в примере 1. Данные, иллюстрирующие выше изложенные примеры, приведены в табл. 1-6. Изменение соотношени компонентов
0 питательной среды, времени культивировани бакмассы и изменение температуры культивировани оказывают существенное значение на содержание энтеротоксинов в культуральной жидкости.
5 П.р и м е р 6. Культуры кишечной палочки , выделенные от павших животных, продуцирующие термостабильный и термолабильный энтеротоксины, высевают раздельно на питательную среду, содержащую сле0 дующие компоненты: перевар Хоттингера - 80 мл (содержание аминного азота 1000 мг%), калий фосфорнокислый однозаме- щенный 3,0 г; натрий фосфорнокислый од- нозамещенный 6,0 г; сульфат магни 3,0 г;
5 глюкоза 5,0 г; вода дистиллированна до литра, рН 7,14 и культивируют в течение 18 ч при 36°С в услови х аэрации. Бульонные культуры центрифугируют при 6000 об/мин при 2°С в течение 40 мин и получают над0 осадочную жидкость, содержащую энтеротоксины .
Количество белка в на досад очной жидкости , содержащей энтеротоксины, составл ет 9000 мкг/мл.
5
Пример 7, Культуры кишечной палочки высевают раздельно на питательную среду , содержащую следующие компоненты: перевар Хоттингера 250 мл (содержание
0 аминного азота 1000 мг%), калий фосфорнокислый однозамещенный 3,8 г; натрий фосфорнокислый однозамещенный 6,8 г; магний сернокислый 3,8 г; глюкоза 7,0 г: вода дистиллированна - до литра, рН сре5 ды 7,14 и культивируют в течение 24 ч при 38°С, в услови х аэрации, Бульонные культуры центрифугируют при 6000 об/мин при 3°С, в течение 40 мин и получают надосадоч- ную жидкость, содержащую энтеротоксины. Количество белка в надосадочной жидкости,
содержащей энтеротоксины, составл ет 7000 мкг/мл.
Максимальное содержание белка в над- осадочной жидкости (11000 мкг/мл) отмечаетс при оптимальном соотношении компонентов питательной среды, времени и температуре культивировани , как в приме- ре 1, а наименьшее содержание белка - при соотношении компонентов, как в примере 7.
Изменение режима центрифугировани бульонных культур с 6000 до 8000 об/мин, позвол ет добитьс более полного осаждени бактериальных частиц. Увеличение скорости центрифугировани более 8000 об/мин не оказывает существенного вли ни на полноту осаждени . Поэтому-оптимальным режимом центрифугировани выбрана скорость 8000 об/мин.
Пример 8. После центрифугировани и определени биоактивности термостабильного и термолабильного энтеротокси- нов, в надосадочной жидкости по методике Романенковой Н.И. и в Биккен-тесте, токси- носодержащий материал осаждают медленным добавлением сульфата аммони до 65% насыщени дл термолабильного и до 90% насыщени дл термостабильного зн - теротоксинов и оставл ют на 18 ч при 2аС. Осадок, содержащий термостабильный эн- теротоксин, перераствор ют в 0,05 М трис- НС1 буфере (рН 8,0), а термолабильный - в дистиллированной воде из расчета 1/10 от начального объема. Растворенные осадки диалиэируют против дистиллированной воды в течение 48 ч.
После определени гомогенности полученных энтеротоксинов с помощью диск- электрофореза в полнакриламидном геле готов смесь термостабильного и термолабильного энтеротокеинов в соотношении 100:1 в фосфатно-солевом буфере (рН 7,0). К смеси добавл ют 25%-ный раствор глутаро- вого альдегида до конечной концентрации 2 г/ , реакционную смесь выдерживают 1 ч при 25°С. Конъюгационную смесь подвергают диализу против фосфатно-солевого буфера (рН 7) в течение 18ч при 4°С.
Уменьшение времени высаливани с 20 до 18 ч привадит, в некоторых случа х, к недоосаждению части энтеротоксинов. Диализ перерастворенных осадков токсинов, в течение 48 ч позвол ет добитьс полного освобождени материала от сернокислого аммони . Полноту освобождени от следов сульфат-ионов контролируют в реакции с 10%-ным BaCla.
Выдерживание реакционной смеси, энтеротоксинов и глутарового альдегида, в течение 1 ч, достаточно дл получени конъюгата, однако инкубаци смеси в течение 2 ч позвол ет добитьс более полного соединени термостабипьного и термолабильного энтеротоксинов.
Увеличение температуры при реакции 5 конъюгации с 20 до 25°С существенно не вли ет на скорость св зывани термостэ- бильного и термолабильного энтеротоксинов , однако, увеличение или уменьшение данного режима температур ведет к задер10 жке конъюгации и требует увеличени времени реакции.
Конъюгат термостабильного и термолабильного энтеротоксинов представл ет собой прозрачную жидкость бурого цвета (рН
5 8,0) без запаха, он не токсичен и безвреден дл животных, не обладает анафилактоген- ными свойствами. Контроль стерильности и безвредности полученного конъюгата осуществл ют по общеприн той методике.
0 Полученный конъюгат по своей биологической активности значительно превосходит прототип. Предлагаемый способ ускор ет получение препарата в 3 раза (вместо 260 ч, около 70). Он существенно сокра5 щает рабочее врем , зан тое соответствующими операци ми. Число процедур минимально , они лишены трудоемкости. Упрощена и ускорена процедура получени и очистки энтеротоксинов, а также самой
0 конъюгации.
Предлагаемый способ не нуждаетс в дорогосто щем и мало доступном оборудовании и реактивах: амберлит НАД-2, сефа- декс G-25. ДАН сефацил, 1 этил 3 /3 диметил5 аминопропил/ карбодиимид и др. Привитые конъюгатом лабораторные животные про в- « л ют высокую активность (95%) против ле- f тальных доз термолабильного и термостабильного энтеротоксинов и культур гомоло0 гичных и гетерологических штаммов кишечной палочки.
Claims (1)
- Формула изобретени Способ получени конъюгированного5 энтеротоксина Eschertchla colt, включающий культивирование штамма-продуцента в жидкой питательной среде, отделение ток- синосодержащего супернатанта центрифугированием с последующим осаждением,0 очисткой и конъюгацией энтеротоксина сшивающим агентом, отличающийс тем, что, с целью повышени иммуногенно- сти целевого продукта, ускорени и упрощени способа культивирование осущест5 вл ют в течение 18-24 ч в жидкой питательной среде следующего состава, г/л: перевар Хоттингера 80-250; сернокислый магний 3,0-3,8; однозамещенный фосфорнокислый натрий 6,0-6,8, однозэмещенный фосфорнокислый калий 3,0-3,Р. глюкоза 5 0-7,0;дистиллированна вода до 1 л, токсиносо- держащий супернатант дел т на две части, из одной осаждают термолабильный токсин раствором сульфата аммони при 60-65% насыщени , из другой - термостабильный токсин при 85-90% насыщени , каждый из полученных преципитатов выдерживают 18-20 ч при 2-4°С в режиме встр хивани , центрифугируют при 6000-8000 об/мин в течение 30-40 мин при 2-4°С, далее осадок термостабильного токсина раствор ют в дистиллированной воде, а осадок термолабильного токсина - в 0,05 М трис-НС буфере из расчета 1/10 от начального объе5ма, очистку токсинов провод т диализом, затем их объедин ют в объемном соотношении 100:1 соответственно в фисфатном буфере рН 7,0-7,2, конъюгацию провод т 25%-ным раствором глутарового альдегида при конечной концентрации 2 г/л при 20- 25°С в течение 1-2 ч, далее конъюгат двукратно диализуют против фосфатного буфера рН 7,0-7,2 в течение 18-20 ч при 2-4°С, а затем против 0,05 М трис-HCI буфера в течение 18-20 ч при 2-4 С, в полученный конъюгат добавл ют раствор трис-HCI буфера, содержащий бычий сывороточный альбумин в концентрации 10 г/л.Таблица 1Вли ние соотношени термостабильный/термола- бильный энтеротоксины на % содержаний термостабильного знтеротоксина в конечном конъюгате.Вли ние соотношени глутаральдегид/общий белокна % термостабильного энтеротоксина в конечномконъюгатеТаблица 2Иммуногенна активность конъюгированного энтеро- токсина E.coll в сравнении с энтеротоксинами гомологичных штаммов E.coll и прототипомСравнение токсинообразовани на предлагаемойсреде и известных в литературе средах: Финкельштейна , бульоне Хоттингера и среде АльдеретеВли ние режимов центрифугировани на полноту осаждени бактериальных клетокВли ние времени конъюгации на % термостабильного энтеротоксина E.coli в конечном конъюгатеТаблица 3Таблица 4Таблица 5Таблица 6Продолжение табл.6.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU894788233A SU1750690A1 (ru) | 1989-12-19 | 1989-12-19 | Способ получени конъюгированного энтеротоксина ЕSснеRIснIа coLI |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU894788233A SU1750690A1 (ru) | 1989-12-19 | 1989-12-19 | Способ получени конъюгированного энтеротоксина ЕSснеRIснIа coLI |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU1750690A1 true SU1750690A1 (ru) | 1992-07-30 |
Family
ID=21494537
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU894788233A SU1750690A1 (ru) | 1989-12-19 | 1989-12-19 | Способ получени конъюгированного энтеротоксина ЕSснеRIснIа coLI |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
SU (1) | SU1750690A1 (ru) |
-
1989
- 1989-12-19 SU SU894788233A patent/SU1750690A1/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Патент US № 4411888, КЛ.А61 К 39/108, 1983. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US5961975A (en) | Type I surface antigen associated with staphylococcus epidermidis | |
FI79024C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av haemophilus influenzae b-polysackaridexotoxoidkonjugatvaccin. | |
JPH0789950B2 (ja) | ジフテリア毒素と免疫交さ性を有するタンパク質の製法 | |
KR19990022748A (ko) | 변형된 메닝고코컬 다당류 접합백신 | |
US5667787A (en) | Purification of a pertussis outer membrane protein | |
JP2009173945A (ja) | Gbsトキシン/cm101の精製方法 | |
EP0041897B1 (en) | Polysaccharide antigen from streptococcus and vaccines | |
CA1280693C (en) | Purification of pertussis antigens | |
EP1748063B1 (en) | Protein A production and purification without using animal derived components | |
AU2006292700A1 (en) | Protein a production and purification without using animal derived components | |
US5989542A (en) | Capsular polysaccharides from enterococci | |
US4734403A (en) | Membrane polysaccharides which are useful as immunostimulants | |
GB2053233A (en) | Vaccinating cyclopeptidic antigenic fraction process for isolating it and vaccines containing it | |
KR970002614B1 (ko) | 백일해 내독소의 제거방법, 백일해 톡소이드 및 그 제조방법 | |
SU1732815A3 (ru) | Способ получени гипотриглицеридально-активных полисахаридов | |
SU1750690A1 (ru) | Способ получени конъюгированного энтеротоксина ЕSснеRIснIа coLI | |
AU690518B2 (en) | Tetanus vaccine production | |
RU2230325C2 (ru) | Способ приготовления очищенного препарата ботулинического токсина типа а | |
JPH04300898A (ja) | 新規糖タンパク複合体およびその製造方法 | |
CA1239104A (en) | Method for the purification of lpf-ha | |
RU1835294C (ru) | Способ получени энтеротоксина еSснеRIснIа coLI | |
RU2407792C1 (ru) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ IgAl-ПРОТЕАЗЫ ИЗ КУЛЬТУРЫ NEISSERIA MENINGITIDIS СЕРОГРУППЫ А И ИММУНОГЕННЫЙ ПРЕПАРАТ НА ЕЕ ОСНОВЕ | |
RU2039823C1 (ru) | Способ получения рекомбинантного лимфотоксина человека | |
JPS632415B2 (ru) | ||
JPS59110626A (ja) | B−オリゴマ−含有百日咳ワクチンおよびその製造方法 |