SU1734762A1 - Способ изготовлени вакцины дл профилактики дерматофитозов домашних и лабораторных животных - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к ветеринарной микологии, в частности к профилактике дерматофитозов животных. Цель изобретени  - повышение иммуногенности вакцины и создание иммунитета одновременно к три- хофтии и микроспории. Это достигаетс  тем, что в качестве вакцины используют инактивированные микроконидии вирулентных грибов Т. mentagrophytes, M. canis, M. gypseum при следующем соотношении: Т. mentagrophytes с содержанием микроконидий 1 млрд 200 мм - 2 млрд в 1 мл, M. canis и M. gypseum с содержанием каждой культуры по 600 мм - 1 млрд микроконидий в 1 мл, вз тых в соотношении 1:1:1 - 25-26%, 0,5-0,6%-ный раствор формалина - 25- 26%, 0,8-0,9%-ный раствор нуклеината натри  - 48-50%. Вакцину ввод т внутримышечно двухкратно с интервалом 10-14 дней в зоне 0,9-1,2 мл. 3 табл. (Л С

Description

Изобретение относитс  к ветеринарной микологии, в частности к профилактике де- рматофитозов животных.

Цель изобретени  - повышение иммуногенности вакцины и создание иммунитета одновременно к трихофитии и микроспории .

Поставленна  цель достигаетс  тем, что в качестве вакцинных штаммов используют вирулентные культуры грибов Microsporum canis, Microsporum gypseum, Trichophyton mentagrophytes, после их гомогенизации концентрацию микроконидий взвеси Т. mentagrophytes довод т до 1 млрд 200 млн - 2 млрд в 1 мл, M. canis 600 млн - 1 млрд в 1 мл, M. gypseum - 600 млн - 1 млрд в 1 мл, после чего их смешивают в равных объемах (1:1:1), инактивируют добавлением 0,5- 0,6%-ного раствора формалина из расчета 1:1 по объему в течение 3-4 сут в термостате

при Т + 37 - 38°С, затем добавл ют иммуно- модул тор - 0,8-0,9%-ный раствор нуклеината натри  в количестве 1:1 по объему, после чего взвесь расфасовывают и лиофи- лизируют.

Дл  изготовлени  вакцины используют вирулентные штаммы грибов Т. mentagrophytes, M. canis и M. gypseum, которые обладают следующими свойствами.

Штамм гриба Т. mentagrophytes.

Морфологические свойства. Штамм культивируетс  на сусло-агаре. При высеве уколом на чашку Петри с сусло-агаром и инкубировании при 24-28°С образует белую , бархатистую, с резко очерченными кра ми колонию, котора  к 20-25 дню занимает всю поверхность среды. С обратной стороны колонии возможно образование коричневого пигмента. При высеве споровой взвеси культуры в матрасы с питательной

XI

СО

vj О

к:

средой к 10-15 дню развиваетс  сплошна  ровна  бархатисто-пушиста , слегка поро- шиста  пленка белого цвета.

Вирулентные свойства. При нанесении на скарифицированную кожу кролика эле- ментов гриба на 10-15 день образуютс  корочки , плотно сросшиес  с кожным покровом, на 20-25 день часто образуютс  толстые астбестовидные корки, некротические поражени  кожной ткани, изъ звле- ни . Самовыздоровление наступает на 45-50 день.

Реактогенные свойства. Подкожное и внутримышечное введение инактивирован- ного корпускул рного антигена из культуры Т. mentagrophytes не приводит к изменению клинического состо ни  животных.

Антигенные свойства. Титры антител в РИГА на 20-25 день после иммунизации составл ют 1:320, 1:640.

Иммуногенна  активность. Иммунизаци  морских свинок, кроликов, собак и кошек инактивированным антигеном из культур гриба Т. mentagrophytes создает у них невосприимчивость к заражению дли- тельностью не менее 12 мес.

Была испытана иммуногенна  активность трех штаммов гриба Т. mentagrophytes, обладающих вышеуказанными свойствами. Данные представлены в табл.1.

Таким образом, иммунологическа  активность инактивированных антигенов из вышеуказанных штаммов не отличаетс , поэтому дл  изготовлени  вакцины можно ис- пользовать штаммы, обладающие вышеуказанными свойствами.

Штамм гриба М. canis.

Морфологические свойства, 18-дневна  культура представлена множеством палоч- ковидных микроконидий с утолщением на одном из концов размером 3,0-6,0x0,7-2,1 мкм ровными, пр мыми, извилистыми и обильноветв щимис  гифами толщиной 0,7-2,6 мкм. Часто встречаютс  3-8 камер- ные макроконидии.

Культуральные свойства. Штамм культивируетс  на сусло-агаре. При посеве уколом на чашку Петри с сусло-агаром и инкубировании при 24-28°С образует бе- лую бархатисто-пушистую колонию, котора  к 20-25 дню занимает всю поверхность среды. Возможно образование желтого пигмента с обратной стороны колонии.

Вирулентные свойства. При помещении на скарифицированную кожу кроликов элементов гриба на 7-10 день наблюдаетс  гипереми  и легкое шелушение на месте заражени . На 15 - 17 день образуютс  крошащиес  астбестовидные корки, плотно

сросшиес  с кожной поверхностью. На 20- 25 день наблюдени  образуютс  корки, некротические поражени  кожной ткани, изъ звлени . Самовыздоровление наступает на 35-60 день.

Реактогенные свойства, При подкожном и внутримышечном введении инактиви- рованного корпускул рного антигена из культуры М. canis клиническое состо ние животных не измен етс .

Антигенные свойства. Титры антител в РИГА на 20-25 день после иммунизации составл ют 1:160-1:640.

Иммуногенна  активность. Иммунизаци  морских свинок, кроликов, собак и кошек инактивированным антигеном из культуры гриба М. canis создаету них невосприимчивость к заражению длительностью не менее 10 мес.

Была испытана иммуногенна  активность инактивированных антигенов из трех Штаммов гриба М. canis, обладающих вышеуказанными свойствами. Данные представлены в табл. 2.

Таким образом, иммуногенна  активность инактивированных антигенов из вышеуказанных штаммов не отличаетс , поэтому дл  изготовлени  вакцины можно использовать штаммы, обладающие вышеуказанными свойствами.

Штамм М, gypseum.

Морфологические признаки. Зрела  18- дневна  культура представлена множеством палочковидных, овальных и круглых микроконидий размером 2,9-7,0x0,8-2,9 мкм, пр мыми, извилистыми и обильноветв щимис  гифами толщиной 0,7-2,6 мкм. Встречаютс  3-7-камерные сигаровидные макроконидии.

Культуральные свойства. Штамм культивируетс  на сусло-агаре. При посеве уколом на чашку Петри с сусло-агаром и инкубировании при 24-28°С образует белесоватую и белую бархатисто-пушистую колонию , котора  к 15-20 дню занимает всю поверхность среды. Возможно образование коричневого пигмента с обратной стороны колонии. При весеве споровой взвеси культуры в матрасы с питательной средой к 10- 12 дню развиваетс  сплошна  розова  бархатисто-пушиста  пленка.

Вирулентные свойства. При нанесении на скарифицированную кожу кролика элементов гриба на 7-10 день наблюдаетс  гипереми  и образование корок. На 20-22 день наблюдаетс  образование астбесто- видных корок, при отделении которых образуютс  эрозии кожи, Самовыздоровление наступает на 35-55 сут.

Реактогенные свойства. Подкожное и внутримышечное введение инактивирован- ного корпускул рного антигена из культуры гриба М. gypseum не приводит к изменению клинического состо ни  животных.

Антигенные свойства. Титры антител в РИГА на 20-25 день после иммунизации составл ет 1:160-1:640.

Иммуногенна  активность. Иммунизаци  морских свинок, кроликов, собак и ко- шек инактивированным антигеном из культуры гриба М.gypseum создает у них невосприимчивость к заражению длительностью не менее 12 мес.

Была испытана иммуногенна  актив- ность инактивированных антигенов из трех штаммов гриба М. gypseum, обладающих вышеуказанными свойствами. Данные представлены в табл.3.

Изобретение иллюстрируетс  следую- щими примерами.

П р и м е р 1. Культуру штаммов Т. mentagropytes, М. canis и М. gypseum выращивают в течение 15-20 дней на сусло-агаре при 26-28°С. Затем грибную массу каждой культуры снимают с поверхности питательной среды, помещают в отдельный гомогенизатор, добавл ют 200-250 мл стерильной дистиллированной воды на грибную массу с 3-10 матрасов и гомогенизируют. Затем гомогенаты культур Т. mentagrophytes, содержащей 1 млрд 200 млн микроконидий в 1 мл, М. canis и М. gypseum, содержащих по 600 млн микроконидий в 1 мл смешивают по 83,3 мл. После смешивани  гомогенатов добавл ют 250 мл 0,5%-ного раствора формалина и полученную взвесь помещают в термостат при 37°С на 3 сут. Затем к гомогенату добавл ют 500 мл 0,8 % - ного раствора нуклеината натри  расфасовывают по 2,1 мл. замораживают в течение 50 ч при -40°С и высушивают в сублимационной установке в течение 30 ч. При контроле вакцины установлено, что при высеве на МПА, МПБ, агар Сабуро, среду Китт- Тароцци она не содержит живых клеток грибов и микробной контаминации, остаточна  влажность была 2,0%, концентраци  в 1 мл - 200 млн микроконидий, при введении кроликам, морским свинкам, кошкам и собакам не вызывала местных и общих побочных реакций и обеспечивала создание иммунитета длительностью не менее 12 мес.

П р и м е р 2. Дл  изготовлени  1 л вакцины берут антигены Т. mentagrophytes, М. canis и М. gypseum из живой культуры, приготовленные гомогенизацией грибницы в миксере с добавлением дистиллированной воды. Затем гомогенаты культуры Т.

mentagrophytes, содержащей 1 млрд 600 млн микроконидий в 1 мл, смешивают по 83 мл. После перемешивани  гомогенатов культур добавл ют251 мл 0,5%-ного раствора формалина и полученную взвесь помещают в термостат при 37°С на 4 сут. Затем к гомогенату добавл ют 500 мл 0,8%-ного раствора нуклеината натри , расфасовывают по 2,0 мл, замораживают в течение 10 ч при -45°С и высушивают в сублимационной установке в течение 32 ч. При контроле вакцины установлено, что при высеве на МПА, МПБ, агар Сабуро и среду Китт-Тароцци она не содержит живых клеток гриба и микробной контаминации, остаточна  влажность 2,2%, концентраци  в 1 мл 220 млн микроконидий и при введении в организм животных не вызывает местных и общих побочных реакций и обеспечивает создание иммунитета длительностью не менее 12 мес.

П р и м е р 3. Дл  изготовлени  1 л вакцины берут антиген М. canis, Т. mentagrophytes, M. gypseum из живой культуры , приготовленной гомогенизацией грибницы в миксере с добавлением дистиллированной воды. Затем гомогенаты культуры Т. mentagrophytes, содержащей 1 млрд 600 мл микроконидий в 1 мл, культуры М. canis и М. gypseum, содержащие по 1 млрд микроконидий в 1 мл, смешиваютс  по 83 мл.. После перемешивани  гомогенатов культур добавл ют 250 мл 0,5%-ного раствора формалина и полученную взвесь помещают в термостат при 37°С сроком на 4 сут. Затем к гомогенату добавл ют 500 мл 0,8%- ного раствора нуклеината натри , расфасовывают по 1,9 мл, замораживают в течение 15 ч при -50°С и высушивают в сублимационной установке в течение 36 ч. При контроле вакцины установлено, что при высеве на МПА, МПБ, агар Сабуро и среду Китт-Тароцци она не содержит живых клеток грибов и микробной контаминации, при введении кроликам не вызывает местных и общих побочных реакций, остаточна  влажность составл ет 2,5%, концентраци  в 1 мл 240 млн микроконидий и при введении в организм животных обеспечивает создание иммунитета длительностью не менее 12 мес.

Дл  профилактической цели используют вакцину против дерматофитозов, ресуспен- зированную в 1,9-2,1 мл физиологического раствора, которую ввод т в область бедренной группы мышц двукратно с интервалом 10-14 дней в дозах - лабораторным животным , собакам и кошкам независимо от возраста 0,9-1.2 мл (200-250 млн микроконидий).

П р и м е р 4. П ть морских свинок, четыре кролика, п ть собак, три кошки иммунизированы против дерматофитозов внутримышечно в область  годичной группы мышц, двукратно s дозе 1 мл с содержанием 250 млн микроконидий.

При исследовании сыворотки крови в РИГА через 20 дней после второй иммунизации титры антител не вы влены При накожном заражении культурами Т. mentagrophytes, М. canis и М. gypseum через 30 дней после второй иммунизации иммунизированные животные заболели.

Две морские свинки, два кролика, две собаки и две кошки, не иммунизированные против дерматофитозов и одномоментно зараженные вирулентными культурами Т. mentagrophytes, М. canis и М. gypseum в различные участки кожи так же, как и иммунизированные , заболели дерматофитозами.

П р и м е р 5. Четыре морские свинки, три кролика, три собаки и три кошки иммунизированы внутримышечно в область бедренной группы мышц двукратно в дозе 0,9 мл с содержанием микроконидий 75 млн. При исследовании сыворотки крови в РИГА через 20 дней после второй иммунизации титры антител не превышали 1:80, При зара- жении культурами М. gypseum, М, canis и Т. mentagrophytes через 30 дней после второй иммунизации накожно не заболели дерматофитозом 2 иммунизированные морские свинки, две собаки, одна кошка, Две морские свинки, два кролика, две собаки и две кошки, не иммунизированные против дерматофитозов и засаженные вирулентнымикультурамиТ.

mentagrophytes, М. canis и М. gypseum в те же сроки и в тех же дозах, что и иммунизированные животные, заболели дерматофитозом с характерными клиническими признаками.

Длительность переболевани  составила 35-65 дней (срок наблюдени ).

П р и м е р 6. Восемь морских свинок, п ть кроликов, четыре собаки и три кошки были проиммунизированы вакциной против дерматофитозов внутримышечно двукратно в область бедренной группы мышц в дозе 1,1 мл с содержанием 200 млн микроконидий . При исследовании сыворотки крови в РИГА через 20 дней после второй иммунизации титры антител составили 1:160-1:320. При накожном заражении культурами М. gypseum, T. mentagrophytes, M. canis через 30 дней после второй вакцинации лабораторные животные, собаки и кошки не заболели .

Три морские свинки, два кролика, три собаки и две кошки, не иммунизированные

против дерматофитозов и зараженные виру- лентными культурами грибов Т. mentagrophytes, М. canis и М. gypseum в те же сроки в тех же дозах, что и иммунизиро- ванные животные, заболели дерматофитозами с характерными клиническими признаками. Длительность переболевани  составила 37-45 дней (срок наблюдени ). П р и м е р 7. П ть морских свинок,

четыре кролика, п ть собак и три кошки были иммунизированы вакциной против дерматофитозов внутримышечно, двукратно в область бедренной группы мышц в дозе 1,1 мл с содержанием микроконидий 250 млн,

При исследовании сыворотки крови в РИГА через 20 дней после второй вакцинации титры антител составили 1:320-1:640. При накожном заражении культурами Т. mentagrophytes, М. canis и М. gypseum через

30 дней после второй иммунизации лабораторные животные, собаки и кошки не заболели .

Две морские свинки, два кролика, две собаки и две кошки, не иммунизированные

против дерматофитозов и однократно зараженные вирулентными культурами М. canis, М. gypseum и Т. mentagrophytes в различные участки кожи так же, как и иммунизированные животные, заболели дерматофитозом с

характерными клиническими признаками заболевани . Длительность переболевани  составила 35-49 дней (срок наблюдени ).

Таким образом, изготовленна  предлагаемым способом вакцина позвол ет создать напр женный иммунитет у собак, кошек, кроликов и морских свинок без каких-либо побочных эффектов.

Claims (1)

1. Формула изобретени 

   Способ изготовлени  вакцины дл  профилактики дерматофитозов домашних и лабораторных животных, преимущественно собак, кошек, кроликов, морских свинок, включающий подбор штаммов, выращивание культуры грибов, приготовление гомоге- ната, лиофилизацию препарата, отличающийс  тем, что, с целью повышени  иммуногенности вакцины и создани  иммунитета одновременно к трихофитии и микроскории , в качестве штаммов используют вирулентные культуры грибов вида Microsporum canis, Microsporum gypseum, Trichophyton mentagrophytes, выращивание культур осуществл ют раздельно, гомогенаты смешивают в равных объемах, полученную смесь дополнительно инактивируют 0,5-0,6%-ным раствором формалина в течение 3-4 дней при 37-38°С и добавл ют 0,8- 0,9%-ный раствор нуклеината натри  в количестве 1:1.

   Таблица1

   Таблица2

   ТаблицаЗ