SU1730148A1 - Способ получени иммобилизованного коммерческого пепсина - Google Patents

Abstract

Использование: фармацевтическа  промышленность . Сущность изобретени : пепсин осаждают из ацетатного буфера с рН 3,9-4,5 раствором четыреххлористого титана из расчета 0,8-2,5 мкмоль на 1 мг препарата пепсина. 1 табл.

Description

Изобретение относитс  к фармацевтической промышленности и может быть использовано дл  промышленного получени  препаратов иммобилизованного пепсина.

Известны способы двухэтапной иммобилизации ферментов на гидроксидах переходных металлов, где в качестве носител  . используют гидроксид металла, который получают при гидролизе соответствующего хлорида.

Недостатком этих способов  вл етс  то, что в этих случа х иммобилизаци  фермента . происходит преимущественно за счет ад сорбции и не обеспечиваетс  необходима  прочность св зи с носителем как фермента, так и содержащегос  в коммерческом пепсине группоспецифического фактора крови А + Н (ГСФ) Такой иммобилизат не обеспечивает деконтаминации ферментируемого целевого продукта от группоспецифического фактора.

Цель изобретени  - получение чистого целевого продукта за счет одноэтапного формировани  прочного халатного комплекса гидроксида титана с иммобилизованным на нем пепсином и группоспеци- фичёским фактором крови А + Н. который

не сползает с носител  при дальнейшем ферментолизе целевого продукта (антитоксических сывороток) и не загр зн ет их.

Поставленна  цель достигаетс  тем, что к буферному раствору пепсина с концентрацией пепсина 8 мг/мл добавл ют раствор соли четырехвалентного титана, образовав- шийс  осадок с иммобилизованным пепсином и группоспёцифическим фактором крови А + Н отдел ют и промывают буферным раствором, причем пепсин используют в 0,2 М ацетатном буферном растворе с рН 3,9-4,5 и добавл ют раствор четыреххлористого титана из расчета 0,8-2,5 мкмоль на 1 мг препарата пепсина.

П р и м е р 1. К 1000 мл 0.2 М ацетатного буферного раствора (рН 4,15), содержащего препарат пепсина в концентрации 8 мг/мл, добавл ют при посто нном перемешивании 100мл 0,125 М кислого раствора четыреххлористого титана (на 1 мг препарата пепсина добавл ют 1,56 мкмоль четыреххлористого титана). Оставл ют при периодическом перемешивании на 4 ч, а затем без перемешивани  - на 16 ч при комнатной температуре. Образовавшийс  осадок с иммобилизованными пепсином и группоспеVI СА) О

м

4 00

цифическим фактором отдел ют фильтрацией и промывают на фильтре 0,2 М ацетатным буферным раствором с рН 4,15. Выход целевого продукта 32% от исходного веса пепсина. Присутствие в готовом препарате (антитоксической сыворотке) примеси ГСФ А + Н вы вл ют с помощью реакции торможени  гемагглютинации - ОТГА. Агглютинации в РТГА наблюдают во всех лунках, начина  с первой.

П р и м е р 2. Выполн етс  аналогично примеру 1, за исключением того, что используют ацетатный буферный раствор с рН 3,9, Выход целевого продукта 30%. Результаты реакции торможени  гемагглютинации, та- кие же как в примере 1.

П р и м е р 3. Выполн етс  аналогично примеру 1, за исключением того, что используют ацетатный буферный раствор с рН 4,5. Выход целевого продукта 31 %. Результаты реакции торможени  геммаглютинации, такие же как в примере 1.

П р и м е р 4, Выполн етс  аналогично примеру 1, за исключением того, что к раствору пепсина добавл ют 0,064 М раствор четыреххлористого титана, т.е. на 1мг препарата пепсина добавл ют 0,8 мкмоль этой соли. Выход целевого продукта 31%. Результаты реакции торможени  гемагглютинации такие же, как в примере 1,

При м°е р 5. Выполн етс  аналогично примеру 1, за исключением того, что добавл ют 0,200 М раствор четыреххлористого титана, т.е. на 1 мг препарата пепсина добавл ют 2,5 мкмоль этой соли. Выход целе- вого продукта 30%. Реакци  торможени  гемагглютинации показывает отсутствие группоспецифического фактора.

П р и м е р 6. Выполн етс  аналогично примеру 1, за исключением того, что исполь- зуют ацетатный буферный раствор с рН 3,5, Выход целевого продукта 24%. Результаты РТГА показывают отсутствие ГСФ.

Пример. Выполн етс  аналогично примеру 1, за исключением того, что исполь- зуют ацетатный буферный раствор с рН 5,0. Выход целевого продукта 26%. Результаты РТГА показывают отсутствие ГСФ.

Пример 8. Выполн етс  аналогично примеру 1, за. исключением того, что добавл ют 0.300 М раствор четыреххлористого титана , т.е. на 1 мг препарата пепсина добавл ют 3,75 мкмоль этой соли. Выход целевого продукта 26%. Результаты реакции РТГА показывают отсутствие ГСФ.

Л р и м е р 9. Выполн етс  аналогично примеру 1, за исключением того, что добавл ют 0.030 М раствор четыреххлористого титана , т.е. на 1 мг препарата пепсина добавл ют 0,375 мкмоль этой соли. Выход целевого продукта 30%. В реакции РТГА вы влен ГСФ.

Результаты проведенных опытов представлены в таблице.

Из результатов, приведенных в таблице , следует, что предлагаемый способ позвол ет получать иммобилизованный пепсин, не вызывающий при его использовании в ферментолизе антитоксических сывороток , контаминации этих сывороток группоспецифическим фактором А + Н.

Предлагаемые диапазоны параметров выполнени  способа  вл ютс  оптимальными . Выход за эти параметры приводит или к уменьшению выхода целевого продукта (при отклонени х рН и повышении количеств четыреххлористого титана), или к по влению в конечном продукте - очищенной концентрированной антитоксической сыворотке - примесей группоспецифического фактора крови А + Н.

Claims (1)

1. Формула изобретени 

   Способ получени  иммобилизованного коммерческого пепсина, предусматривающий осаждение пепсина из буферного раствора раствором четыреххлористого титана с последующим отделением и промыванием осадка этим же буфером, о тличающий- с   тем, что, с целью повышени  активности и чистоты целевого продукта за счет св зывани  группоспецифического фактора крови А + Н. растворение коммерческого пепсина ведут в ацетатном буфере с рН 3,9- 4,5, а раствор четыреххлористого титана добавл ют из расчета 0,8-2,5 мкмоль на 1 мг препарата пепсина.