SU1693060A1

SU1693060A1 - Питательна среда дл вы влени SтарнYLососсUS aUReUS

Info

Publication number: SU1693060A1
Application number: SU894737916A
Authority: SU
Inventors: Анатолий Павлович Федосеев; Рудольф Вадимович Киборт; Муза Вениаминовна Малетина; Анна Николаевна Мирскова; Галина Григорьевна Левковская; Светлана Анатольевна Гусева
Original assignee: Иркутский Государственный Медицинский Институт; Иркутский институт органической химии СО АН СССР
Priority date: 1989-08-09
Filing date: 1989-08-09
Publication date: 1991-11-23

Abstract

Изобретение относитс к области медицины , в частности к микробиологии, и касаетс вы влени Staphylococcus aureus. Цель изобретени - ускорение вы влени Staphylococcus aureus в исследуемом материале . К 900 мл расплавленного м со- пептонного агара (МПА) добавл ют 0,001-0,0001 г ВМ-3-86 и 70,0-75,0 г NaCI, рН полученного солевого агара довод т до 7,2-7,4. Затем в солевой агар внос т водный раствор ДНК, дл чего 0,25-0,5 г ДНК раствор ют в 7-10 мл дистиллированной воды. После стерилизации среды перед разливом в чашки Петри в среду добавл ют 0,2-0,3 г CaCIa и 50-100 г желточной взвеси. При посеве Staphylococcus aureus на среду видимый рост культуры отмечаетс через 6 ч в средах без препарата - через 9 ч; ДНК-на и лецитовителазна активность - через 9 ч (в средах без препарата - 24-48 ч). сл

Description

Изобретение относитс к медицине, а именно к микробиологии, и может быть использовано дл ускоренного вы влени в исследуемом материале Staphylococcus aureus.

Широко примен етс дл вы влени названных микроорганизмов питательна среда кров ной агар. Она содержит двухпроцентный м сопептонный стерильный агар, в который добавлено 5-10% дефибри- нированной стерильно вз той крови лошади , кролика или барана -1.

Однако при посеве материала от больного на данную среду выделенные культуры стафилококков требуют проведени допол- нительио1чьисследовани , чтобы их можно было отнести к виду Staphylococcus aureus.

Наиболее близкой в предлагаемой среде , позвол ющей культивировать стафилококки , вл етс питательна среда Чистовича, содержаща м сопептонный агар (рН 7,2-7,4), 10% поваренной соли и 20% стерильной желточной взвеси (1 желток куриного йца на 150-200 мл стерильного физиологического раствораА 2.

Через 48 ч после посева исследуемого материала на данную среду отмечают наличие лецитовителлазной активности исследуемой культуры стафилококков (по вление мутной зоны и радужных венчиков вокруг выросших колоний).

К недостаткам известной среды относитс медленный рост стафилококков и невозможность одновременного вы влени других факторов патогенности. Так, после

о о со

о о о

вы влени лецитовителлазной активности исследуемой культуры стафилококков на среде Чистовича необходима дальнейша идентификаци стафилококков, например Определение ДНК-ной активности на среде, содержащей ДНК, Следовательно, удлин етс врем проведени анализов, увеличиваетс расход питательных сред и трудоемкость исследовани возрастает.

Целью изобретени вл етс ускорение вы влени Staphylococcus aureus в исследуемом материале.

Используема в качестве компонента диагностической среды 1,3-ди- гидрокси-1-(4-нитрофенил)пропил-2- аммониева соль 4-хлор-фенилтиоук- сусной кислоты (ВМ-3-86) формулы 4- С1СбН45СН2СОО МНзСН(СНОН)СН20Н

C6H4N02 4

(вещество ВМ-3-86) - первые синтезированное соединение, водорастворимое, без запаха, слегка окрашенное, дешевое и доступное .

Соединение получают взаимодействием соответствующей кислоты с алканолами- ном в среде низших спиртов (этанол, метанол, пропанол) при 70-85°С и соотношении реагентов 1:1 в течение 0,1-0,5 ч по схеме

4-С1СбН45СН2СООН+ + Н2СН (СН2ОН(СНОН (СеН4М02-4) 4-С1СбН45СН2СОСГх х+МНзСН(СН2ОН)СНОН (СбН4МО2-4) Питательную среду готов т следующим образом.

К 900 мл расплавленного м сопептон- ного агара (МПА) добавл ют 0,0001 г ВМ- 3-86 и 70 г NaCI, учитыва , что при приготовлении МПА добавл ют 5 г NaC на 1 л МПА, рН полученного солевого агара довод т до 7,2-7,4. Затем в солевой агар внос т водный раствор ДНК. Дл этого 0,25-0,5 г ДНК раствор ют в 7-10 мл дистиллированной воды. Дл лучшего растворени ДНК в ее водный раствор добавл ют раствор 3--5 капель 10% NaOH. Стерилизацию среды, содержащей солевой агар и ДНК, провод т текучим паром в течение 30 мин.

Перед розливом в чашки Петри в среду добавл ют 0,2-0,3 г CaCI2 и 50-100 г желточной взвеси. Желточную взвесь готов т из свежего куриного йца известным путем (в стерильных услови х отдел ют желток и помещают в емкость с 150-200 мл физиологического раствора). Емкость энергично встр хивают в течение нескольких минут.

П р и м е р 1. Готов т питательную среду дл вы влени стафилококков следующего состава, г/л:

ДНК0.25

CaCI20,2

NaCI70,0

1,3-Дигидрокси-1 -(4-нитро- фенил)-пропил-2-аммоние- ва соль 4-хлор-фенилтиоуксусной кислоты0,0001

Желточна взвесь50

МПАДо 1 л

При посеве Staphylococcus aureus на данный вариант среды видимый рост куль- туры отмечаетс через 6 ч, ДНК-на и леци- товителазна активность - через 9 ч.

П р и м е р 2. Готов т питательную среду дл вы влени стафилококков следующего состава, г/л:

ДНК0,4

CaCI20,25

NaCI72,5

1,3-Дигидрокси-1-(4-нитро- фенил)-пропил-2-аммоние- ва соль 4-хлор-фенилтиоуксусной кислоты0,0015

Желточна взвесь75

МПАДо 1 л.

При посеве Staphylococcus aureus на данный вариант среды видимый рост культуры отмечаетс через 6 ч, ДНК-на и леци- товителазна активность - через 9 ч.

П р и м е р 3. Готов т питательную среду дл вы влени стафилококка следующего состава, г/л:

ДНК0,5

CaCI20,3

NaCI75,0

1,3-Дигидрокси-1-(4-нитро- фенил)-пропил-2-аммоние- ва соль 4-хлор-фенил- тиоуксусной кислоты0,001

Желточна взвесь100

МПАДо 1 л

При посеве Staphylococcus aureus на данный вариант среды видимый рост культуры отмечалс через 6 ч, ДНК-на и леци- товителазна активность - через 9 ч.

Из полученных данных следует, что среда предлагаемого состава дл идентификации Staphylococcus aureus обладает значительным преимуществом перед известными средами - средой Чистовича и Мордвиновой , а именно обеспечивает быстрое (в течение 9 ч вместо 48 ч) вы вление стафилококков в исследуемом материале и, следовательно , позвол ет ускорить врем проведени анализов при одновременном снижении материальных затрат.

Claims

Формула изобретени следующем соотношении ингредиентов,

г/л:

Питательна среда дл вы влени Хлористый натрий 70-75

Staphylococcus aureus содержаща м со-Желточна взвесь 50-100

пептонный агар, хлористый натрий, жел-5 ДНК 0,25-0,50

точную взвесь, отличающа с тем,Хлористый кальций 0,2-0,3

что, с целью ускорени вы влени 1,3-Дигидрокси-1-(4-нитроStaphylococcus aureus в исследуемом мате-фенил)пропил-2-аммониериале , она дополнительно содержит ДНК,ва соль 4-хлорфенилтиохлористый кальций и 1,3-дигидрокси-1-(4-10 уксусной

нитрофенил)пропил-2-аммониевую соль 4-кислоты 0,001-0,0001

хлорфенилтиоуксусной кислоты приМ сопептонный агар До 1 л,