SU1645300A1 - Штамм SтRертомYсеS FRaDIae - продуцент рестриктазы SFR I - Google Patents
Штамм SтRертомYсеS FRaDIae - продуцент рестриктазы SFR I Download PDFInfo
- Publication number
- SU1645300A1 SU1645300A1 SU884615754A SU4615754A SU1645300A1 SU 1645300 A1 SU1645300 A1 SU 1645300A1 SU 884615754 A SU884615754 A SU 884615754A SU 4615754 A SU4615754 A SU 4615754A SU 1645300 A1 SU1645300 A1 SU 1645300A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- restrictase
- sfr
- enzyme
- sac
- fradiae
- Prior art date
Links
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относитс к биотехнологии и генной инженерии. Целью изобретени вл етс вы вление ново го штамма - продуцента Streptomvces fradiae В1СПМ S-866, нетребовательно2X/ го к питательным средам и синтезирующего одну рестриктазу, способную узнавать и расцепл ть последовательность нуклеотидов CCGCGG с высоким выходом0 Штамм получен в результате поиска продуцентов рестрпктаз среди микроорганизмов группы стрептомицетов, растет на простой дешевой питательной среде отечественного производства, обеспечивает повышенный выход рестриктазы при более простом экономическом способе выделени фермента по сравнению с известной Из 1 г влажной биомассы выдел ют 30000-35000 уд, фермента с удельной активностью 30000 ед/мл,- Ытамм Streptomyres fradiae (303) S-866 продуцирует рестриктазу Sfr I, имеет сайт узнавани CCGCGG, идентич- HLDI сайту узнавани Sac .II, и может заменить Sac II во всех генно-инженерных работах„ % Л
Description
Изобретение относитс к биотехнологии и генной инженерии, в частности к вы влению микроорганизма, способного синтезировать эндонуклеазу рестрикции , узнающую и расщепл ющую последовательность нуклеотидов CCGCGG и названную согласно общеприн той номенклатуре Sfr 1„
Цель изобретени - вы вление штамма - продуцента Stireptomyces fradiae ВКПМ S-866 (303), нетребовательного к питательным средам и синтезирующего одну рестриктазу, способную узнавать и расщепл ть последовательность нуклеотидов CCGCGG с высоким выходом„
Ытамм So fradiae 303 получен в результате поиска продуцентов рестрнк- таз среди микроорганизмов группы стрептомицетов о
Предлагаемый штамм обладает следующими свойствамио
Морфологические: клетки нитевидные , неподвижные, грамположительные, на крахмало-аммиачной среде образуют вросиие колонки; воздушный мицелий белый или серо-розовый, субстратный- гр зно-желтоватый., Споры овальные
О
сд
со
спороносцы спиральные о На глицерин- нитратном агаре: воздушный мицелий (ВМ) - желтовато-белый, субстратный мицелий (СМ) - желтовато-рыжеватый, растворимый пигмент (РП) - отсутствует
На рыбно-питательном агаре: ВМ - отсутствует, колонии кожистого типа; СМ - рыжеватый; РП - нето
На овс ном агаре: ВМ - серо-розовый , СМ - лелтовато-бурый, РП - нет,,
На минеральном агаре: ВМ - бело- розовый, СМ - желто-розовый; РП-нет
Физиологические и биохимические свойства: факультативный аэроб, темг пературный оптимум 30°С, рН среды 7,0-7,5с Культура ферментирует глюкозу , галактозу, арабинозу, салицин; восстанавливает нитраты, разжижает желатин, не выдел ет индол, сероводород , амилазоположителен, тирозин не ферментируете Обладает антагонизмом по отношению к грамположительным и грамотрицательным бактери м, но не к дрожжамо Меланоидные пигменты не образует„
11тамм не усваивает маннит, инозит сахарозу: слабо усваивает рафинозу, обладает амилазной и желатиназной ак тивностью, растет на клетчатке; не содержит тирозиназуо
Устойчивость к антибиотикам: штам устойчив к пенициллину, мономицину, неомицину, карбенициллину, оксацилли ну, ампициллину, сульфатназолуо
Цтамм хранитс в лиофильно-высу- ыенном состо нии и в растворе 30%-го глицерина при -609С„
Дл культивировани S fradiae 303 примен ют питательную среду следующего состава, г/л дистиллированной воды: БВК 20, NaCl 5,0; глюкоза 3,0; рН 7,2с Культивирование провод т при 30°С с хорошей аэрацией в течение 48 ч. Выход сырой биомассы составл ет в среднем 40 г/л культуральной
ЖИДКОСТИо
Выход фермента составл ет 30000- 35000 ед0акт,,/г влажной биомассы, что в 15-17 раз больше, чем известного .
Полученна рестриктаза Sfr I характеризуетс следующими свойствами: узнает и специфически расцепл ют последовательность нуклеотидов CCGCG оптимальное значение рН дл действи рестриктазы 7,5-8,0; оптимальна температура действи 37 С, активность
сохран етс также при 50°С; оптимальна концентраци ионов Mg4 5-15 мМ„ NaCl 50 мМ.
Электрофореграмма продуктов гидролиза ДНК фага С1 857 рестриктазами Sfr I и Sac II и Sac II показывает, что картина гидролиза полностью совпадает как при параллельном, так и совместном гидролизе„ Следовательно, рестриктаза Sfr I вл етс изошизоме- ,ром рестриктазы Sac II, узнает и расцепл ет последовательность нуклеотидов CCGCGG„
Пример 10 Получение биомассы S. fradiae 303„ Клетки S. fradiae 303 хран циес в 30%-ном растворе глицерина в питательной среде при -20°С, высевают на чашку с плотной питательной средой и инкубируют при 30°С в течение 44-48 ч0 Затем клетки внос т бактериологической петлей в колбу с 50 мл жидкой питательной среды, г/л дистиллированной воды: БВК 20 г/л; NaCl 5,0 г/л, глюкоза 3,3 г/л; рН 7,2 и выращивают на качалке при 30°С в течение 30 чо Полученную культуру используют дл засева 200 мл среды Выращивание провод т также на качалке со скоростью 150-200 об/мин в течение 48 ч„ Клетки собирают центрифугированием при 5000 об/мин на центрифуге Mistral „ Выход сырой биомассы составл ет 38 г/л культуральной жидкости
Пример 2„ Выделение сайт-специфической эндонуклеазы рестрикции Sfr I.
10 г влажной биомассы суспендируют в 30 мл 0,01 М калий-фосфатного буфера рН 7,5, содержацего 0,01 М 2-мер- каптоэтанол и 1 мМ ЭДТА, озвучивают на дезинтеграторе УЗНД-2Т ч диапазоне 22 кГц 4-8 раз по 30 с, с таким же интервалом центрифугируют (18000 об/ми 60 мин., 4°С) и к полученному супер- натанту добавл ют сульфат аммони до 75%-го насыщени о Суспензию выдерживают 18 ч при 4°С и центрифугируюто Полученный осадок раствор ют в 20 мл 0,02 М калий-фосфатного буфера, содержацего 1 мМ 2-меркаптоэтанол, 0,5 мМ ЭДТА, 0,1% тритон Х-100 и 0,8 М NaCl (буфер А)„ Раствор нанос т на колонку с Ьиогелем А 0,5 М (Bio Had), объемом 500 мл, уравновешенную буфером А, и ведут элюцию тем же буфером со скоростью 20 мл/ч. Фракции объемом 10 мл собирают и анализируют на наличие
фермента„ Фракции, содержацие максимальную рестриктазную активность, объедин ют и диализуют против 2 л 0,02 М калий-фосфатного буфера рН 7,5, содержащего 1 мМ 2-меркаптоэта- нол и 0,5 мМ ЭДТА (буфер В), мен буфер дваждыJ Диализуют, нанос т на колонку объемом 30 мл с ДЕАЕ-целлкшо- зой (ДЕ-52, Whatman), уравновешенную буфером В„ Колонку промывают буфером В и адсорбированный фермент элюиру- ют 300 мл градиента NaCl (0,01-1,0 М в буфере В„ Фермент после диализа нанос т на колонку с фосфоцеллюло- зой (Р-II, Whatman) объемом 10 мл, уравновешенную буфером В, и промывают колонку тем же буфером Элюцию фермента провод т 200 мл градиента NaCl (0,0-1,0 М) в буфере В„ Фракции содержащие рестриктазу, элюируют при( 0,60-0,07 М NaCl, объедин ют и диализуют против буфера В, содержащего 0,1 М NaCl и 50%-ный глицерин
Ферментный препарат хранитс при
не менее 6 мес„, хорошо транспортируетс в термосе с сухим льдом„ Выход фермента ЗОООЭ ед.акт/г биомассы активность ЗОЭЭО ед/мл.
За единицу активности принимают минимальное количество фермента,
-20°С
.
0
5
0
5
необходимое дл полного расцеплени 1 мкг ДНК фага CI 857 в течение 1 ч при 37 аС„
Определение последовательности нуклеотидов, узнаваемой рестриктазой Sfr 1„
Дл определени последовательности нуклеотидов, узнаваемой рестриктазой Sfr I, провод т гидролиз ДНК фага ft CI 857 рестриктазами Sfr I и Sac II по отдельности, а также совместный гидролиз этими рестриктазамИо Наблюдаема картина полного совпадени фрагментов, полученных при параллельном и совместном гидролизе, указывает на то, что рестриктаза Sfr I вл етс нзопизомером рестриктазы Sac II, узнает и расщепл ет последовательность CCGCGC.
Поскольку рестриктаза Sfr I, имеет сайт узнавани CCGCGG, идентичный сайту узнаваннч Sac II, она может заменить Sac II в экспериментах по фрагментации ДНК п8 этим сайтам
Claims (1)
- Формула изобретениЦтамм Streptonycee fradiae ВКПМ S-066 - продуцент рестриктазы Sfr 1„
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU884615754A SU1645300A1 (ru) | 1988-12-06 | 1988-12-06 | Штамм SтRертомYсеS FRaDIae - продуцент рестриктазы SFR I |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU884615754A SU1645300A1 (ru) | 1988-12-06 | 1988-12-06 | Штамм SтRертомYсеS FRaDIae - продуцент рестриктазы SFR I |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU1645300A1 true SU1645300A1 (ru) | 1991-04-30 |
Family
ID=21413167
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU884615754A SU1645300A1 (ru) | 1988-12-06 | 1988-12-06 | Штамм SтRертомYсеS FRaDIae - продуцент рестриктазы SFR I |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
SU (1) | SU1645300A1 (ru) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
MD1180Z (ru) * | 2017-03-02 | 2018-03-31 | Институт Физиологии И Санокреатологии Академии Наук Молдовы | Способ стимулирования формирования условных рефлексов в период снижения функций |
CN113684144A (zh) * | 2021-07-22 | 2021-11-23 | 广东药科大学 | 一株昆虫蜚蠊肠道内生链霉菌wa5-1-7及其应用 |
-
1988
- 1988-12-06 SU SU884615754A patent/SU1645300A1/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Vani АоА„, et al, A seguence specific endonuclease from Micrococ- cus radiodurans. - 1982, 697, P. 178- 184. ,(54) ЫТАШ STREPTOMYCES FRADIAE - ПРОДУЦЕНТ РЕСТРИКТАЗЫ Sir I. * |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
MD1180Z (ru) * | 2017-03-02 | 2018-03-31 | Институт Физиологии И Санокреатологии Академии Наук Молдовы | Способ стимулирования формирования условных рефлексов в период снижения функций |
CN113684144A (zh) * | 2021-07-22 | 2021-11-23 | 广东药科大学 | 一株昆虫蜚蠊肠道内生链霉菌wa5-1-7及其应用 |
CN113684144B (zh) * | 2021-07-22 | 2023-01-31 | 广东药科大学 | 一株昆虫蜚蠊肠道内生链霉菌wa5-1-7及其应用 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US4258134A (en) | Novel hyaluronidase BMP-8231 and production thereof | |
SU1645300A1 (ru) | Штамм SтRертомYсеS FRaDIae - продуцент рестриктазы SFR I | |
Yoshida et al. | Production and application of maltose phosphorylase and trehalose phosphorylase by a strain of Plesiomonas | |
KAWADA et al. | Terpentecin and UCT4B, new family of topoisomerase II targeting antitumor antibiotics produced by Streptomyces: producing organism, fermentation and large scale purification | |
US3821081A (en) | Process for producing 7-amino desacetoxy cephalosporanic acid | |
HU181488B (en) | Process for the hydrolysis of racemic hydantoins into optically active n-carbamoyl-aminoacid derivatives and for preparing the hydrolyzing enzymatic complex | |
CN1816623B (zh) | 新型微生物、麦芽糖磷酸化酶和海藻糖磷酸化酶及其制造方法 | |
JPH0369278B2 (ru) | ||
JPS6362195B2 (ru) | ||
DK158316B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af 3-substituerede 7-amino-3-cephem-4-carboxylsyrederivater | |
US3826715A (en) | Novel amylase and process for preparing the same | |
JPH06292578A (ja) | 耐熱性マンノースイソメラーゼ及びその製造法並びにこれを用いたマンノースの製造法 | |
SU1659480A1 (ru) | Штамм бактерий КLевSIеLLа рNеUмоNIае-продуцент рестриктазы Кр @ 378 1 | |
SU1689400A1 (ru) | Штамм бактерий FLаVовастеRIUм ваLUSтINUм - продуцент рестриктазы FвL 1 | |
US4370414A (en) | Process for producing 6-aminopenicillanic acid and 6-aminopenicillanic acid S-oxide | |
SU1645293A1 (ru) | Штамм бактерий SтRертососсUS FaecaLIS - продуцент рестриктазы SFa N @ | |
SU1650697A1 (ru) | Штамм бактерий BacILLUS LIснеNI FоRмIS - продуцент рестриктазы В @ 13I | |
RU2077577C1 (ru) | Штамм бактерии delcya marina - продуцент щелочной фосфатазы и способ получения щелочной фосфатазы | |
Iizuka et al. | Synthesis of Fructan and Oligosaccharides by Microbial and Plant Fructosyltransf erasest | |
US4061541A (en) | Preparation of alkaline alpha-amylase | |
JPS6119483A (ja) | アルカリ性セルラ−ゼの製造法 | |
SU1631080A1 (ru) | Штамм бактерий BacILLUS меGатеRIUм - продуцент рестриктазы Вме 361 I | |
RU2057806C1 (ru) | Штамм бактерий bacillus coagulans - продуцент эндонуклеазы рестрикции, узнающей и расщепляющей последовательность нуклеотидов 5'-gatnnnnatc-3' | |
SU1686000A1 (ru) | Штамм бактерий BacILLUS SтеаRотнеRморнILUS - продуцент рестриктазы BSS TI | |
SU1440919A1 (ru) | Штамм бактерий кURтнIа ZopFII-продуцент рестрикционной эндонуклеазы кZо 91 |