SU1650697A1 - Штамм бактерий BacILLUS LIснеNI FоRмIS - продуцент рестриктазы В @ 13I - Google Patents
Штамм бактерий BacILLUS LIснеNI FоRмIS - продуцент рестриктазы В @ 13I Download PDFInfo
- Publication number
- SU1650697A1 SU1650697A1 SU4691191A SU4691191A SU1650697A1 SU 1650697 A1 SU1650697 A1 SU 1650697A1 SU 4691191 A SU4691191 A SU 4691191A SU 4691191 A SU4691191 A SU 4691191A SU 1650697 A1 SU1650697 A1 SU 1650697A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- strain
- restriction enzyme
- enzyme
- producing
- biomass
- Prior art date
Links
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относитс к биотехнологии и генной инженерии. Цель изобретени - вы вление штамма Bacillus lichenlformls ВКПМ В-4722(В-13), продуцирующего рестриктазу с более высоким выходом фермента . Штамм продуцирует эндонуклеазу рестрикции Bli 13 I, котора вл етс изо- шизомером рестриктазы Ssp. Ml Bli 13 I, узнает последовательность 5LTCCGGA-3 в составе двухцепочечной ДНК. Биомассу штамма выращивают в питательном бульоне на основе гидролизата кильки до поздней логарифмической фазы. Клетки разрушают ультразвуком и рестриктазу получают хро- матографической очисткой на биогеле А 05М, ДЕАЕ-целлюлозе и фосфоцеллюлозе. Выход фермента 5000 ед. на 1 г биомассы. Препарат пригоден дл генно-инженерных работ. 1 табл. сл С
Description
Изобретение относитс к биотехнологии и генетической инженерии и представл ет собой штамм, который можно использовать дл получени эндонуклеазы рестрикции (рестриктазы), узнающей последовательность нуклеотидов 5- TCC-GGA-3 в составе двухцепочечной ДНК и расщепл ющей ДНК в этой области.
Цель изобретени - вы вление штамма Bacillus llchenlformis ВКПМ В-4722 (В 13), продуцирующего рестриктазу заданной специфичности с более высоким выходом.
Штамм бактерий Bacillus llchenlformis В-13 выделен в результате поиска продуцентов оестриктаз среди микробов воздуха вне помещени .
Штамм бактерий Bacillus licheniformls имеет следующие характеристики.
Морфологические признаки. В молодой культуре (16-18ч) клетки подвижные, палочковидные , небольшие 0,5-0,7 мкм в поперечнике и 2-4 мкм в длину. Располагаютс поодиночке, парами. Споры эллиптические 0,6 х 1 мкм. Отчетливой раздутости споранги нет. Грамположительные.
Физиолого-биохимические признаки. Факультативный анаэроб, каталазоположи- тельный. Аэробно слабо образует кислоту из глюкозы, сахарозы, мальтозы, глицерина, маннита, но Ке из арабинозы, сорбита, рам- нозы, лактозы, этанола. Из глюкозы также образует ,ацетоин, но не газ. Анаэробно из
о сл
о о
VI
глюкозы образуют кислоту, Гидролизует крахмал, казеин, желатин, твин-80, Дезами- нирует аргинин. Сероводород и индол не образует. Восстанавливает нитрат в нитрит. Чувствителен к ампилициллину, хрорамфе- николу, канамицину, стрептомицину, тетрациклину (100 мкг/мл среды 1). Используют глюкозу в качестве единственного источника углерода и энергии дл роста. Растет при 10 - 55°С, оптимум 37°С, рН среды 6-8, оптимум рН 7,0, концентраци NaCI 0 - 7%, оптимум 0,7%. Содержание Г + Ц в ДНК 49% (по плавучей плотности).
Культуральные признаки. Среда 1, пита- тельный агар, г/д: панкреатический гидролизат кильки 17,9; NaCI 5,9; агар 11,2, рН 7,3± 0,1. После 17 ч инкубировани при 37°С образует плоские неправильной формы шероховатые, морщинистые, серые колонии диаметром 1 см и более, часто заполн ющие всю поверхность агара. Выращивание при 20°С позвол ет получить отдельные колонии, которые первоначально круглые, выпуклые, гладкие, блест щие, прозрачные, затем станов тс шероховатыми , серыми, неправильной формы.
Среда 2, питательный бульон, г/л: гидролизат кильки 33; NaCI 7, рН 7,2-7,4.
При выращивании с интенсивной аэрацией при 37°С штамм дает равномерное помутнение. Среду используют дл препаративного выращивани биомассы.
Среда 3, тверда минимальна , г/л: глюкоза 3; NH/iN030,3; KH2P040,1; taHPCM 0,1;МдЗСм 0.05; NaCI 0,05; СаСОз0,5; FeSC-4 0,0005; агар 15; водопроводна вода. После 50 ч инкубации при 30°С дает плоские колонии неправильной формы. Среду используют дл вы влени минимальных пищевых потребностей штамма.
Пример 1. Выращивание биомассы и выделение рестриктазы ВН 13 I.
Культуру выращивают на среде 2 при 37°С, аэрации 1,5 л/л мин, скорости вращени мешалки 200 об/мин. Когда оптическа плотность культуры достигает 4,5 при
550 нм, клетки осаждают центрифугированием и хран т при -20°С. Выход биомассы 7,0 г/л.
Рестриктазу выдел ют по известной схеме, включающей разрушение клетокультразвуком , гель-фильтрацию на биогеле А
0,5 М, хроматографию на ДЕАЕ-целлюлозе
и фосфоцеллюлозе. Фермент хран т при 20°С в буфере с 50%-ным глицерином.
Параметры получени рестриктаз из
Bacillus llchenlformis В 13 и Acinetobacter calcoaceticus приведены в таблице.
Пример 2. Определение активности рестриктазы ВИ 13 L
Реакционна смесь в 20 мкл содержит
0,5 мкг ДНК фага, Я0.05 М трис-HCI (рН 8), 0,2 М NaCI, 0,01 М MgCla. Дл определени активности аликвоты фермента 1 - 10 мкл внос т в реакционную смесь, инкубируют при 55°С в течение 1 ч, затем провод т электрофорез в 1 %-ном агарозном геле. За единицу активности фермента принимают минимальное количество фермента, необходимое дл полного расщеплени 1 мкг ДНК фага Я в услови х реакции.
Таким образом, предлагаемый штамм, по сравнению с известными, обеспечивает повышенный (в 5 раз) выход целевого фермента; продуцирует только одну рестрикта- зу и позвол ет сократить технологически
трудоемкие хроматографические стадии очистки (с 5 стадий в известном способе до 3 в предлагаемом).
Claims (1)
- Формула изобретени Штамм бактерий Bacillus licheniformis ВКПМ В-4722 - продуцент рестриктазы ВМ 13 I.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU4691191A SU1650697A1 (ru) | 1989-05-11 | 1989-05-11 | Штамм бактерий BacILLUS LIснеNI FоRмIS - продуцент рестриктазы В @ 13I |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU4691191A SU1650697A1 (ru) | 1989-05-11 | 1989-05-11 | Штамм бактерий BacILLUS LIснеNI FоRмIS - продуцент рестриктазы В @ 13I |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU1650697A1 true SU1650697A1 (ru) | 1991-05-23 |
Family
ID=48225201
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU4691191A SU1650697A1 (ru) | 1989-05-11 | 1989-05-11 | Штамм бактерий BacILLUS LIснеNI FоRмIS - продуцент рестриктазы В @ 13I |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
SU (1) | SU1650697A1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1062904C (zh) * | 1994-07-28 | 2001-03-07 | 宝酒造株式会社 | 限制性核酸内切酶 |
-
1989
- 1989-05-11 SU SU4691191A patent/SU1650697A1/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Roberts R.J. Restriction ensymes and their isoshlsomers. Nucleic Acids Res, 1988, 16,271-313. Kita K., Hirotoka N., Oshlma A., Kadonishi S., Obagashl A. Ace. Ill, a new.restriction, endonuclease, 1;rom Ac netobacter calcoacetlcus - Nucleic Acids Res, 1985, 13, 24.p.8685-8694. * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1062904C (zh) * | 1994-07-28 | 2001-03-07 | 宝酒造株式会社 | 限制性核酸内切酶 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JPH0364105B2 (ru) | ||
SU1650697A1 (ru) | Штамм бактерий BacILLUS LIснеNI FоRмIS - продуцент рестриктазы В @ 13I | |
US4420562A (en) | Method for producing creatinase | |
CA1336414C (en) | D-amidase and process for producing d--alanine and/or l--alanineamide | |
US4357425A (en) | Process for producing L-amino acid oxidase | |
EP0206595B1 (en) | Thermally stable tryptophanase process for producing the same, and thermally stable tryptophanase-producing microorganism | |
US4496655A (en) | Process for the production of tyramine oxidase | |
SU1659480A1 (ru) | Штамм бактерий КLевSIеLLа рNеUмоNIае-продуцент рестриктазы Кр @ 378 1 | |
RU2077577C1 (ru) | Штамм бактерии delcya marina - продуцент щелочной фосфатазы и способ получения щелочной фосфатазы | |
SU1645300A1 (ru) | Штамм SтRертомYсеS FRaDIae - продуцент рестриктазы SFR I | |
US5185257A (en) | Thermostable xanthine oxidase from Arthrobacter luteus | |
JP3642344B2 (ja) | クレアチンアミジノハイドロラーゼの製造法 | |
SU1532583A1 (ru) | Штамм бактерий PaRacoccUS DеNIтRIFIсаNS-продуцент эндонуклеазы рестрикции Р @ 121 | |
SU1645293A1 (ru) | Штамм бактерий SтRертососсUS FaecaLIS - продуцент рестриктазы SFa N @ | |
JP2597849B2 (ja) | リゾチーム阻害物質 | |
SU1631080A1 (ru) | Штамм бактерий BacILLUS меGатеRIUм - продуцент рестриктазы Вме 361 I | |
SU1486512A1 (ru) | ШТАММ БАКТЕРИИ ЗТАРНУЬОСОССиЗ 8АРКОРНУТ1Си5 ПРОДУЦЕНТ САЙТ-СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ЭНДОНУКЛЕАЗЫ РЕСТРИКЦИИ 5зг1 | |
SU1440919A1 (ru) | Штамм бактерий кURтнIа ZopFII-продуцент рестрикционной эндонуклеазы кZо 91 | |
RU2026347C1 (ru) | Штамм бактерии alteromonas haloplanktis - продуцент полиуридил-эндорибонуклеазы | |
JPH0898683A (ja) | 7−アミノセファロスポラン酸エステラーゼ | |
KR930008972B1 (ko) | 신균주 슈도모나스속 y-132 및 이로부터 생산되는 글루타릴-7-아미노세팔로스포린산 아실라아제 | |
SU1761803A1 (ru) | Штамм бактерий BacILLUS aLVeI - продуцент рестриктазы BaV В II | |
SU908793A1 (ru) | Штамм еSснеRIснIа coLI в834 ( @ , @ ),несущий плазмиду RSF 2124,-тест субстрат дл рестрикционной эндонуклеазы ecoR11 | |
SU1514774A1 (ru) | Штамм бактерий мокахееба брес1еб продуцент саит-специфической эндонуклеазы μ,,,αι | |
JP4752024B2 (ja) | 細胞壁分解酵素と産生する微生物、並びにそれを用いたプロトプラスト調製法 |