SU1582131A1

SU1582131A1 - Способ диагностики инфаркта миокарда

Info

Publication number: SU1582131A1
Application number: SU874341793A
Authority: SU
Inventors: Тимур Саимович Балмуханов; Светлана Галимбековна Шуратова; Илья Натанович Трахт
Original assignee: Казахский научно-исследовательский институт кардиологии
Priority date: 1987-10-21
Filing date: 1987-10-21
Publication date: 1990-07-30

Abstract

Изобретение относитс к медицине, а именно к области диагностики инфаркта миокарда. Цель изобретени заключаетс в повышении специфичности диагностики инфаркта миокарда. Сущность изобретени состоит в том, что с помощью иммуноферментного анализа с использованием моноклональных антител против митохондриальной креатинфосфокиназы, определ ют ее содержание в сыворотке крови и при величине концентрации фермента свыше 100 нг/мл диагностируют инфаркт миокарда, что позвол ет повысить специфичность диагностики инфаркта миокарда, за счет исключени заболеваний, не св занных с сердечно-сосудистой патологией.

Description

Изобретение относитс к медицине, а именно к диагностике инфаркта миокарда .

Целью изобретени вл етс повышение специфичности диагностики инфаркта миокарда.

Способ осуществл ют следующим образом .

Полученные с помощью гнбридомной технологии моноклональные антитела против митрхондриальной креатинфосфо- киназы (КФКмит) сорбируют на полистироловом планшете и инкубируют с сывороткой крови пациентов. Содержание КФКмит определ ют по калибровочной кривой с помощью стандартных приемов иммуноферментного анализа (ИФА). На основании количественного показател содержани КФКмит в сыворотке крови став т диагноз о наличии инфаркта миокарда (ИМ).

Способ иллюстрируетс примерами Пример 1. В 96-луночные план

.шеты из полистирола внос т поО,Змкг моноклональных антител в 200 мл фос- фатно-буферного физиологического раствора (ФБФР) в лунку и выдерживают 18 ч при 4°С, затем раствор слиi вают и планшет промывают 4 раза ФБФР, содержащим 0,05% Твин-20 (ФБФРТ), заливают на 30 мин ФБФРТ, содержащим 0,1% человеческого сывороточного альбумина , после чего планшеты готовы

к непосредственному тестированию. Пробы сывороток крови или очищенный препарат КФКмит, используемый дл построени калибровочной кривой, внос т по 200 мкл в лунку и инкубируют 3 ч при 37°С, после инкубации реакционную смесь сливают и 4 раза промывают ФБФРТ, после чего в лунки внос т конъюгат (КФКмит, конъюгиро з

L

«сл

Х

N9

JO

ванна методом периодатного окислени с пероксидазой хрена) и инкубируют 1 ч при 37°С, добавл ют индикаторный раствор, в состав которого входит перекись водорода и хромоген ортофенилендиамин, н определ ют интенсивность окраски при длине волны 492 нм. Количество КФКмит в тестируемой пробе обратно пропорционально интенсивности окраски. Чувствительность метода составл ет не менее 10 нг/мл.

Дл построени калибровочной кривой в лунки внос т сыворотку, полу- ченную от группы здоровых доноров. На этом фоне титруетс КФКмит таким образом, чтобы охватить диапазон от 1000 до 0 нг/мл.

Дл каждой калибровочной или не- известноп пробы рассчитывают В/В0, гд В - средн интенсивность окраски в пробах, содержащих калибровочные или неизвестные образцы,- Б0 - средн интенсивность окраски в пробах, соде жащих 0 нг/мл КФКмит.

Дл определени содержани КФКмит в тестируемых пробах стро т график зависимости В/В0 от концентрации КФКмит в координатах logit-log (ось

В/В0

ординат logit В/В0 In (

1 - В/В,

-),

ось абсцисс - логарифмическа . Концентрацию КФКмит в неизвестных пробах оп- 5 редел ют на основании значений logit В/В0 на калибровочном графике.

При определении содержани КФКмит в сыворотке крови здоровых доноров и пациентов,перенесших ИМ,были получены результаты, представленные в таблице.

В пробах № 1-5 сыворотки крови здоровых допоров logit 2,768 + 0,239, в пробах № 6-11 сыворотки крови пациентов , перенесших ИМ за 24-48 ч до определени , logit 1,270+0,160, концентраци КФК равн етс 7 и 130 нг/м соответственно, если брать среднее значение, определенное по калибровочному графику. В качестве граничных значений содержани КФКмит у здоровых доноров и пациентов, перенесших ИМ, установлены показатели до 50 и свыше 100 нг/мл соответственно. При значени х , близких к граничным, необходи- мо повторение опыта и привлечение результатов других методов диагностики.

Примечание. четырем параллельным тическа плотность, ска ошибка средней В/В0

logit In

1 - В/В„

Пример 2. Способ определени содержани КФКмит в сыворотке крови осуществл ют аналогично примеру 1. Тестируют сыворотку пациентов с ножевым ранением, желудочным кровотечением , нарушением сердечного ритма, артериальной гипертонией, бронхиальной астмой и при инфаркте миокарда через 72 ч после развити некроза. Во всех случа х содержание КФКмит не отличалось от ее содержани в сыворотках крови контрольной группы, составленной из здоровых доноров.

Таким образом, повышение специфичности способа диагностики инфаркта миокарда достигаетс за счет количественного определени именно КФКмит в сыворотке крови человека, тогда как изменени активности других форм кре- атинфосфокиназы, регистрируемые при диагностике инфаркта миокарда известным способом, могут быть обусловлены заболевани ми, не св занными с сердечно-сосудистой патологией.

Claims

Формула изобретени

Способ диагностики инфаркта миокарда , включающий определение содержани креатинфосфокиназы в сыворотке крови человека, отличающийс

тем, что, с целью повышени специфичности диагностики, в сыворотке крови определ ют содержание мнтохондриаль- ной креатинфосфокиназы с помощью

158213

иммуноферментного анализа с примене-и при концентрации фермента свьпие

ннем моноклональных антител против100 нг/кп диагностируют инфаркт миомитоховдриальной креатиифосфокиназыкарда.