SU1411336A1 - Способ получени гидрокортизона - Google Patents

Abstract

Изобретение относитс  к микробиологической промьгашенности и может быть использовано дл  получени  стероидных гормонов. Цель изобретени  - повышение выхода целевого продукта. Сущность способа сводитс  к тому, что осуществл ют трансформацию вещества S Рейхштейна с использованием культуры Curvularia lunata. Дл  этого мицелий и трансформируемый субстрат в кристаллической форме инкубируют в буферной среде при в течение 48-168 ч, при этом соотношение сухо- то мицели  и вещества S Рейхштейна в среде составл ет 1:0,2-1, т.е. на 10 г/л сухого мицели  - 2-10 г/л субстрата . Выход целевого продукта 55- 72,4%.

Description

Изобретение относитс  к микробиологической промышленности и касаетс  получени  стероидных гормонов, а имен :но гидрокортизона.

Цель изобретени  - повышение вы- Зсода целевого продукта. - П р и м е р 1. Культуру Curvularia lunata ВКМ F-644 хран т в пробирках на скошенной агаризованной среде еледующего состава, г/л:

Дрозкжевой экстракт4,0

Солодовый экстракт10,0

Глюкоза4,0

Агар30,0

Вода дистиллированна  Среду с рН 6,2-6,9 стерилизуют при 1 атм 30 мин. При пересеве гриб выращивают в течение 4 сут при 28 С. Срок хранени  культуры - не более мес ца.

Споры гриба смывают с поверхности агара стерильной водой, либо средой и внос т в колбы Эрлеимейера объемом 750 МП с 50 мл среды следующего состава , г/л: Сахароза 30,0 Дрожжевой автолизат 2,5 NaNOj 2,0 ( 3,0 KjHPO 1,0 i KCl 0,5 I , 0,5 i Вода дистиллированна , i pH среды 5,0-6,1

i Среду стерилизуют при 1 атм 30 ми 1 Культуру выращивают в течение 48-60 ч при и 220 об./мин. Полученным инокул том в объеме 10 мп засевают такие же колбы с 50 мл среды и выращивают культуру в указанных услови х. Затем мицелий отфильтровывают, отмывают от питательной среды буфером (0,05 М - NaOH, рН 6,0) и используют дл  проведени  процесса трансформации.

Реакцию трансформации провод т в 50 МП 0,05 М - NaOH-буфера, рН 6,0, куда внос т 5 г отмытого мицели  (0,5 г по- сухому весу) и 0,1 г вещества S Рейхштейна в кристаллической форме (2 г/л), соотношение мицели  (в расчете на сухой вес) и вещества S равно 1:0,2.

Реакционную смесь инкубируют при в услови х перемешивани  и аэрации в течение 48-168 ч. Затем из целой реакодонной смеси выдел ют гидрокортизон экстракцией хлороформом. Выход целевого продукта в лаборато15ных услови х равен 72,4%, содержание .остальных стероидов: 14в(-оксипроизвод ные вещества S Рейхштейна 5%; 6У, 1Ы-оксипроизводные вещества S 5%.

Пример 2. Выращивание мицели  гриба Curvularia lunata ВКМ F-644 (инокул та), услови  иммобилизации инокул та в Са-альгинатный гель, sbipa щивание мицели  в гранулах Са-альги- натного гел  описаны в примере 1.

Кристаллический субстрат - вещество S Рейхштейна, внос т в среду дл  трансформации в концентрации 10 г/л, т.е. 500 мг кристаллического субстрата внос т в 50 МП 0,05 М - NaOH-буфера, рН 6,5, содержащего 0,5 г мицели  (сухой вес) (соотношение 1:1)

Выход гидрокортизона при трансформации вещества s Рейхштейна в концентрации 10 г/л после 7 сут инкубации составл ет 55-60%, т.е. 5,5 - 6,0 г/л. Содержание остальных стероидов: I4ei оксипроизводные вещества S Рейхштейна 15-20%, суммарное содержание других побочных продуктов 8-10%.

Дл  осуществлени  способа можно использовать иммобилизованный мицелий

Пример 3. Культуру С. lunata ВКМ F-644 (инокул т) выращивают, как описано в примере 1.

Полученный инокул т в объеме 10 мл иммобилизуют в Са-альгинатный гель. С этой целью к 7 мл 6%-ного гомогенного раствора Na-альгината добавл ют 3 мл 0,9%-ного раствора хлористого натри  и 10 мл культуральной жидкости Тщательно перемешивают и при помощи шприца или перистальтического насоса по капл м при перемешивании внос т в 1%-ный раствор хлористого кальци . Образующиес  гранулы Са-альгинатного гел  ( мм), содержащие мицелий, вьщерживают в 1%-ном растворе хлористого кальци  в течение 2ч, отмывают 0,05 М - NaOH-буфером, рН 6,0, и внос т в колбы с 50 мл ростовой среды. Дл  сохранени  гранул в среду добавл ют 1 мл 1%-ного раст- .вора CaCl-. Выращивание иммобилизованного инокул та провод т в услови х аналогичных услови м вьфащивани  свободного мицели . После 48-60 ч роста гранулы гел  отдел ют от среды, промывают буфером и используют дл  трансформации .

Трансформацию вещества S Рейх- штейна в концентрации 2 г/л провод т при и 220 об./мин.

В колбы Эрленмейера объемом 750 мл с 50 мл 0,05 М - NaOH- буфера, рН 6,0, внос т 16,5 г гранул (сьфой вес), содержащих 5 г иммобилизованного мицели  и 100 мг кристаллического субстрата.

В процессе трансформации из реакционной среды отбирают аликвоты и провод т анализ образующихс  стероидных соединений методом ТСХ. Промытые гранулы используют дл  проведени  последующей трансформации.

Максимальное количество гидрокортизона накапливаетс  в среде за 48 ч инкубации субстрата с иммобилизован- 1ШМ мицелием. Выход гидрокортизона составл ет 60-65% или 1,2-1,3 г/л. Содержание других стероидов: 14о1-ок- сипроизводное вещество S Рейхштей

на 10-15%, -суммарное содержание других побочных соединений 5%.

Использование предлагаемого способа позвол ет повысить выход целевого продукта, упростить его и повысить концентрацию трансформируемого субстрата.

Claims (1)

1. Формула изобретени 

   Способ получени  гидрокортизона, включающий трансформацию вещества .S Рейхштейна с помощью мицели  гриба Curvularia lunata с последующей

   экстракцией и выделением целевого продукта , отличающийс  тем, что, с целью повьшени  выхода целевого продукта, вещество S Рейхштейна используют в кристаллическом виде

   при соотношении сухого мицели  и вещества S Рейхштейна в реакционной среде 1:0,2-1, а экстракции подвергают реакционную среду с мицелием.