Изобретение относитс к молекул ной биологии, а именно к способу по лучени нуклеазы S (КФ 3.1.30.1J о ноцепочной нуклеинат-5 -олигонуклео тид гидролазы), примен емой в молекул рной биологии при изучении первичной структуры дезоксирибонуклеиновых кислот и рибонуклеиновых кислот . Фермент также примен етс в ге нетической инженерии при получении рекомбинатных ДНК. Известен способ получени нуклеа зы S., основанный на использовании ионообменной хроматографии на ДЭАЭ- целлюлозе l Однако из-за недостаточной очист ки препарат содержит примесь других ферментов. Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемому положительному эффекту вл етс способ получени нуклеазы Sy из , амилоризина, включающий стадии экстракции , термообработки, фракционировани сульфатом аммони , диализа , хроматографии на диэтиламиноэти целлкшозе, концентрировани , гельфильтрации на сефадексе Г-75 и повторного концентрировани , причем концентрирование приводитс с помощью хроматографии на ДЭ-32 (3-кратной ) . Способ включает также стадию хроматографии на сульфо-сефадексе 2. Недостатками способа вл ютс ег сложность (16 стадий, причем 6 из них - хроматографи на ионоо0менниках ), использование импортных сор бейтов (ДЭ-32 фирмы Ватман, сульфосефадекс и сефадекс F-75 фирмы Fanaacia), а также неполное отделение от загр зн ющих целевой продукт ферментов, Цель изобретени - увеличение чистоты целевого продукта и упрощение способа. Поставленна цель достигаетс тем, что согласно способу получени нуклеазы S./ из амилоризина, включаю щему стадии экстракции, термообработки , фракционировани сульфатом аммони , дийлиза, хроматографии на д этиламиноэтилцеллкшоэе, Концентрировани , гель фильтрации на сефадексе Г-75 и повторного концентрировани , после диализа рдствор нуклеазы депигментируют активированным углем, при хроматографии на диэтиламиноэтилцеллюлозе сорбцию осуществл ют в 0,05-0,075 М ацетате аммони с рН 5,2-5,6, а десорбцию осуществл ют ацетатом аммони сначала с удельной электропроводностью (12-14) У .м дл Отделени балластных белков, а затем с электропроводностью (23-30) дл элюций нуклеазы, концентрирование провод т удьтрафиль рацией через мембрану из сополимера метилметакрилата и N-винилпиролидона с радиусом пор 50150 мкм, а повторное концентрирование - диализом против 45-60%-ного раствора глицерина. Сущность способа заключаетс в следующем. Амилоризин экстрагируют буфером ацетата натри рН 4,6 и экстракт подвергают термообработке при , провод т осаждение сульфатом аммони при 70 и 100% насыщени , осадок раствор ют, диализируют и провод т депигментацию активированным углем, очистку нуклеазы S продолжают сорбцией на ДЭАЭ-целлюлозе в стационарном режиме в буфере ацетата аммони рН 5,2-5,6 и элюцией буферами повышенной ионной силы с удельной элёктропроводимостью (12-14)10 см.м , (23-30)10 см-м . Концентрируют раствор фильтрацией через мембрану Рипор с радиусом пор 50-150 мкм, хроматографируют на сефадексе Г-75, и конечный продукт стабилизируют . диализом против 45-60%-ного раствора глицерина. В результате отдел етс основна масса пигмента и св занного с ним белка. Удельна активность при этом повьшаетс в 1,5-3 раза. Удаление ниэкомолекул рных белков позвол ет более эффективно проводить хроматографию на ДЭАЭ-целлюлозе и экономить материалы, в том числе ДЭАЭ-целлюлозу . На том же количестве ДЭАЭ-целлюлозы и сефадекса Г-75 можно осуществить разделение в 1,5-3 раза больших количеств фермента. Сорбцию 5д провод т на ДЭАЭ-целлюлозе , уравновешенной 0,05-0,075 буфером ацетата аммони рН 5,2-5,6, что позвол ет получить более хорошее отделение примесей РНКаз. Использование буфера ацетата аммони по сравнению с буфером ацетата натри вызывает улучшенное разделение белковой смеси и способствует получению нуклеазы S высокого качества. Концентрирование образцов ультрафильтрацией обеспечивает дополнитель ную очистку (отделение низкомолекул рных веществ), при этом активность нуклеазы S сохран етс на 80-100% и из процесса очистки исключаетс диализ или разбавление раствора с целью получени раствора с более низкой электропроводностью, необходимое дл сорбции на анионитах. Концентрирование образцов диализом против 45-50%-ного раствора глицерина позвол ет обеспечить процесс концентрировани и стабилизацию препаратов нуклеазы S. Объем раствора нуклеазы S снижаетс в 2-3 раза. Упрощение процесса достигаетс включением в технологию очистки стадни , позвол ющих улучщить контроль процесса и ускорить проведение отдельных стадий очистки. Замена стадий концентрировани на ДЭ-32-целлюлозы концентрированием на ультрафильтрах и диализом против глицерина, а также исключение хроматографии на сульфо-сефадексе позвол ет сократить число стадий с 16 до 14. В результате получают препарат с удельной активностью 20.00070 .000 ед/мг белка, выход 17%, практически не содержащий примеси неспецифических фосфатаз, фосфодиэстераз и экзонуклеаз, Пример 1. 160 г амилоризина экстрагируют 1,6 л 0,02 М буфера ацетата натри , содержащим 0,05 М NaCl и 0,1 1 Z п . Осадок отдел ют центрифугированием. Экстракт подвер гают термообработке, постепенно повыша температуру раствора до в вод ной бане с температурой 75°С. К раствору добавл ют сульфат аммони до насыщени 0,7 (800 г), переметивают и осадок отдел ют центрифугированием . К центрифугату добавл ют 320 г сульфата аммони (насыщение 1,0) и после формировани осадка . отдел ют осадок центрифугированием, раствор ют и провод т диализ против деминерализованной воды. К диализату добавл ют 3% по объему активированного угл и перемешивают 30-40 мин при . Уголь удал ют фильтрацией через ватный порощок и разбавл ют в 2 раза 0,05 М буферным раствором уксуснокислого аммони рН 5,2, содер жащего 0,1 мМ ионов цинка. К раствору добавл ют ДЭАЭ-целлкшоз- (1 г на 100 мг белка) и перемешивают 20 мин. ДЭАЭ-целлюлозу отдел ют фильтрацией, суспендируют в 0,05 М буфере ацетата аммони рН 5,2 и перенос т в колонку (425 см). Колонку промывают раствором ацетата аммони рН 5,2 с удельной электропроводностью 12 1СГ см. м и фермент элюируют буферным раствором ацетата аммони рН 5,2, содержащего 0,1 мМ ионов цинка с удельной электропроводимостью 23 . Раствор нуклеазы S. фильтруют через мембрану Рипор-4 с радиусом пор 50-100 мкм до объема 20 мл и нанос т на колонку с сефадексом Г-75 (4 хЮО см), уравновешенной буфером ацетата натри рН 4,6, содержащего 0,1 мМ ионов цинка. Активные фракции объедин ют и двухкратно диализируют при посто нном перемешивании при в течение 1 ч против 50%ного раствора глицерина (соотношение диализируемого раствора и диализирующего раствора - 1:10 по объему). Достигаетс 3-кратиое концентри-г рование раствора и стабилизаци нуклеазы в растворе 50%-ного глицерина. В результате получают препарат нуклеаза S с активностью 10000 ед/мл, удельной активностью 30.000 ед/мг белка. Фермент при проверке вызывает расщепление суЛёрспиральной ДНК плазг МИДЫ pBR 322 и образование кольцевой и линейной формы ДНК. На электрофореграмме не наблюдаютс размытые зоны продуктов расщеплени ДНК, по вление которых свидетельствует о наличии примесей эндонуклеаз. Выход составл ет 17%. Препарат нуклеазы S также не содержит примесей неспецифических: фосфатазы и фосфодиэкстеразы (субстраты п-нитрофенилфосфат и кальциева соль бис-п-нитрофенилфосфат ). Активность нуклеазы S, определена по расщеплению ферментом денатурированной ДНК при рН 4,6. За единицу активности принимают количество фермента, которое катализирует гидолиз t Mr денатирурованной дезоксирибонуклеиновой кислоты за 1 мин при и рН 4,6. Пример 2. 0,7 кг амилоризина экстрагируют 7 л буфера ацетата натри , провод т термообработку, высаливание сульфатом аммони , диализ и депигментацию, как в примере 1. К раствору, полученному при депигментации , добавл ют ДЭАЭ-целлнщозу (волокнистую), уравновешенную 0,075 М буфером ацетата аммони рН 5,6, перемешивают и перенос т в колонку (105(25 см), как описано в примере 1. Элюцню провод т буфером ацетата аммони , содержащим 0,1 мК ионов цинка и удельную электропроводимость 14x10 см.м и буфером с электропроводимостью ЗОЮ см. м. Активные фракции объедин ют и ко центрируют у ьтрафильтрацией через мембрану Рипор-3 (радиус пор 100150 мкм) до объема 100 мл, нанос т по порци м 20 мл на колонку с сефадексом и провод т :хррматографию , как описано в примере 1, Активные фракции объедин ют и провод концентрирование раствора диализом против 60%-ного глицерина, как описано в примере 1. В результате полу чают 200 мл раствора нуклеазы S. в 60%-ном растворе глицерина с активностью 21.000 ед/мл и удельной активностью 53.300 ед/мл. Выход сос тавл ет 20% по активности. Пример 3. О,16 кг амилоризииа экстрагируют 1,6 л буфера ацетата натри , провод т термообработку , высаливание сульфатом аммони , диализ и депигментацию, как в приме ре 1. К раствору, получейному 11ри депигментации, добавл ют ДЭАЭ-целлю позу, уравновешенную 0,055 М буферо ацетата аммони рН 5,5, промьшают и перенос т в колонку, как описано в примере 1. Элюируют колонку буфером ацетата аммони , содержащим 0,1 мМ ионы цинка, с удельной электропроводностью , 27«10см-М А1стивные фракции объедин ют и прово д т ультрафильтр ацию и гель-хромато графию, как описано в примере 1. Рас вор нуклеазы S,, полученный при гел хромато1рафга1, концентрируют диализом против 50%-ного раствора глицер на в буфере. В результате получают 12 МП раствора S,- с активностью 31.000 ед/мл и удельной активностью 70.000 ед/мг белка. Выход по активности составл ет 21%. Пример 4. 0,16 кг амилоризина экстрагируют 0,16 л буфера ацетата натри и провод т термообработку , высаливание сульфатом аммони , диализ, депигментацию, хроматографию на ДЭАЭ-целлюлозе, ультрафильтрацшо и хроматографию на сефадексе Г-75, как в примере 1. Активные фракции , полученные при гель-фильтрации бО мл), диализируют двухкратно при посто нном перемешивании против 45%-ного раствора глицерина. В результате получают 28 мл раствори нуклеазы S с активностью 18.000 ед/мл, удельной активностью 27. 000 ед/мг и выходом 20%. При проведении хроматографии при концентрации солей ниже 0,05 М рН 5,2-5,6 наблюдаетс снижение стабильности фермента, а при концентрации вьше 0,1 М часть фермента при рН 5,2-5,6 не сорбируетс . Значение рН 5,2-5,6 при хроматографии на ДЭАЭ-целЛюлозе обеспечивает высокую степень очистки, выход фермента и максимальное отделение примесных РНКаз. При рН 5,0 сн1 жаетс эффективность сорбции нуклеазы, -а при рН 5,9 и 7,0 в соответственно в 1,5 и 2,0 возрастает количество примеси РНКаз после хроматографии. Таким образом, изобретение обесДечивает получение препарата нуклеазы S высокого качества за счет увеличени его чистоты, а также упрощение способа за счет сокращени чис- ла стадий с 16 до 14 и облегчени проведени хроматографии и контрол за ней путем введени ступенчатой злюций фермента. Кроме того, способ позвол ет получать фермент без использовани импортной ДЭАЭ-целлюлозы фирмы Ватман. Себестоимость препарата составл ет 0,18 р. за 1000 ед. активности по сравнению с 0,82 р. за препарат, выпускаемый на НПО Биохимреактив. Препарат по качеству соответствует препаратам фирмы Sigma, P-L Biochemicals и др.