SU1052235A1 - Способ получени аденозин-5-монофосфата - Google Patents

Abstract

1.СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АДЕНОЗИН-5 - МОНОФОСФАТА из мышц рыб, включающий экстракцию сырь  водой, фильтрование, сорбцию на анионите с последующей элюцией сол ной кислот ,ой, осаждением и прокс ванием целевого продукта спиртом, отличающийс  тем, что, с целью упрощени  способа и повышени  чистоты целевого продукта, предварительно провод т экстракцию сырь  уксусной кислотой, а после элюции сол ной кислотой фракцию, содержащую адвнозин5 -монофосфат, дополннтильно пропускают через активированный уголь, из которого элюируют Целевой продукт раствором подщелоченного спирта, полученный раствор упаривают, подкисл ют и осаждают целевой продукт охлаждением раствора и после промывани  cnhpTOM осадок высушивают. 2.Способ ПОП.1, отличающийс  тем, что элюцию раствором подщелоченного спирта провод т при соотношении спирт I вода: аммиак 25: ( 22-24) :

Description

Изобретение относитс , к биохимии в частности к способу получени  сое динений из природных источников, и может быть использовано в медицин и биохимии, Известен способ получени  аденозин-5-монофосфата (Ah5P) из мышц кр ликов, в котором после охлаждени  мышц осуществл ют экстракцию трихло уксусной кислотой .и. фильтрован11е экстракта, при рН 8 осаждают аденозин-3-фосфат ,(АТР) с помощью хлорис того кальци . Монокальциевую соль АТР раствор ют и гидролизуют до AMP с помощью предварительно полученног фермента картофельной апиразы.Из гкдролизата AMP осаждают в виде ацетат ртути, который в последующих операци х раствор ют в серной кислоте, пропускают сероводо&од. Осадок сульфида ртути отфильтровывают, а из фильтрата после очистки осаждают AMP с помощью ацетона ij . Недостатками данного способа  вл ютс  использование фермента картофельной апиразы, получение кот рого требует осуществлени  дополнительной технологии, многостадийность процесса получени  AMP, применение  довитых веществ: трихлоруксусной кислоты, солей ртути и сет роводорода, использование дефицитных источников сырь : мышцы кролико или гов жьего м са. Известен также способ получени  аденозин-5 -монофосфата из мьпцц рыб включающий двухкратную-водную экстракцию , отделение балластных белков фильтрование, сорбцию на смоле, БАК с последующей сорбциейаденозиндифосфата и аденозинмонофосфата на смоле АРО с элюцией сол ной кислотой , осаждением и промыванием целевого продукта спиртом рЗ , -Однако известный способ не обеспечивает вьвделени  целевого продукта достаточной чистоты, поскольку н позвол ет получить целевой продукт в чистом виде, а технологический процесс  вл етс  продолжительным. .Цель изобретени  - упрощение спо соба и повышение чистоты целевого продукта. Поставленна  цель достигаетс  те что согласно способу получени  аденозин-5-монофосфата из мышц рыб включающему экстракцию сырь  водой, фильтрование, сорбцию на анионите с последующей элюцией сол ной кислотой , осаждением и промыванием целевого продукта спиртом, предваритель но провод т экстракцию сырь  уксусной кислотой, а-после элюции сол ной кислотой фракцию, содержащую аденозин-S -монофосфат, дополнитель но пропускают через активированный уголь, из которого элюируют целевой продукт раствором под1целоченного спирта, полученный раствор упаривают, подкисл ют и осаждёиот целевой продукт охлаждением раствора и после промывани  спиртом осадок высушивают. При этом, элюцию раствором подщелоченного спирта провод т при соотношении спирт:вода:аммиакч 25:(22i 24) : (1:3) , Упаривание осуществл ют до IS-izO ного содержани  целевого продукта, Подкисление провод т 10-15%-ной сол ной кислотой до рН 1,75-1,85, Охлаждение .провод т при 1-4° С. Пример, 1 кг мышц рыбы минтай измельчают, обрабатывают 1 л 8%-ной на прот жении часа при помешивании. Отжимают через ткань,. Осадок повторно обрабатывают 1 л дистиллированной воды на п{3от жении часа. Фильтраты объедин ют, фильтруют через бумажную пульпу до прозрачного состо ни  и пропускают через колонку, с аниони-том ЭДЭ-ЮП с зернением 0,25-0,5 мм со скоростью 0,7 мл/мин/см сечени  колонки, затем промывают водой и элюируют аденозин-5-монофосфат (5-AMP) с помощью 0,01 н неб. Кислые фракции, содержащие 5 -AMP, объедин ю.т и пропускают через колонку, заполненную дополнительно активированным углем АГ-4 ( размер зерен 0,25-0 ,5 мм) из расчета, что 1 г угл  сорбирует 80 мг , После промывки колонки водой провод т десорбцию 5 -AMP с помощью подщелоченного раствора спирта в соотношении спирт:вода:аммиак 25:24:1. Фракции, содержащие 5-АМР, объедин ют, упаривают под вакуумом при С до 15% содержани  основного продукта, . Раствор подкисл ют 10%-ной НС до рН 1,75, и при охлаждении до С . выпадает в осадок. Осадок дважды промывают этиловым спиртом , высушивают в эксикаторе над прокаленным хлористым кальцием. Выход 100 мг препарата 5-AMP, Пример 2. 1 кг- мышц рыбы .минтай обрабатывают, как и в .приме- . ре 1, и экстракт пропускают со скоростью 0,8 мл/мин/см через анионит ЭДЭ-10П, который предварительно перевод т в ацетатную форму прюпусканием 5%-ной СНзСООН. Элюируют 5 -AMP 0,05 н ней. Кислые фракции, содержащие , объеда н ют и пропускают через колонку с дополнительно активированным углем АГ-4 из расчета, что -1 г угл  сорбирует 75 мг 5-АМР. После промывки колонки водой пррвод т десорбцию 5-AMP-с помощью подщелоченного раствора спирта в соот- . ношении спирт:вода:аммиак 25.:23:2, Фракции, содержащие 5 -AMP объедин ют , упаривают под вакуумом при 48 С до 18% содержани  основного продукта. Раствор подкисл ют 12%-ной

неб до 1,, 8 f и при охлаждении до +2 С AMP выпадает в осадок, который дважды промывают этиловым спиртом, высушивают над прокаленным хлористым кальцием. Выход 110 мг препарата. .

П р и м е р 3. 1 кг рыбы навага обрабатывают, как в примере 1, и экстракт пропускают через анионит ЭДЭ-10П со скоростью 1 1 п/мин/см сечени  колонки, элюируют с помощью 0,1 н НС. Кислые фракции, содержащие объедин ют, определ ют содержание AMP и пропускают через колонку с дополнительно активированным углем АГ-4 из расчета , что 1 г угл  сорбирует 70 мг 5 -AMP.После промывки колонки водой провод т десорбцию раст;вором подщелоченного спирта в соот .-«ошении спирт вода:аммиак 25:22:3. Фракции, содержащие 5--AMP, упаривают под вакуумом при 49 С до 20% содержани  основного, продукта. Раствор подкисл ют 15%-ной НС8 до рН,1,8 и при охлаждении до +1 С AMP выпадает в осадок, который после двойной промывки этиловым спиртом высушивают jg эксикаторе над прокаленг,, ным хлористым кальцием. Выход 120 мг препарата 5 -AMP.

П р и м е р 4. 1 кг мышц рыбы

илвага обрабатывают, как, в приме-ре Г, и экстракт пропускают со скоростью 0,8 мл/мин/см пбперечного сечени  колонки через анионит

ЭДЭ-10П, который предварительно пер« :вод т в ацетатную форму пропусканием 5%-ной CHgCOOH. Элюируют 5-АМР 0,05. н HGf . Кислые фракции,, содержащие 5-AMP, объедин ют, и пропускают через колонку с дополнительно активированным углем АГ-4 из.расчета, что 1 г угл  сорбирует .75 мг 5-AMP. После „промывки колонки водой прово д т десорбцию с помощью

0 i подщелоченного раствора этилового ; спирта в соотношении 96%-ный этиловый спирт:вода:25%-ный аммиак 25:23:2. .

Фракции, содержащие 5-AMP объеди5 н ют, упаривают под вакуумом при 48 С до 18% содержани  основного продукта. Раствор подкисл ют 12%-ной НС8 до рН 1,8, и при охлаждении до +2 С AMP выпадает.в осадок,

0 который дважды промывают 96 этиловым спиртом, высушивают над прокаленным хлористым кальцием. Выход 110 мг препарата AMP.

Предложенный способ обеспечивает

5 упрощение технологического процесса за счет исключени  дефицитных реагентов ферментов и смол, а также .сокращени  времени проведени  технологического процесса, получение

0 высакоочищенного препарата 5 -AMP, который может примен тьс  при лечении хроническойкоронарной недостаточности , атеросклеротическом кардиосклерозе и других заболевани х.

Claims (5)

1.СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АДЕНОЗИН—Ь - МОНОФОСФАТА из мышц рыб, включающий экстракцию сырья водой, фильтрование, сорбцию на анионите с последующей элюцией соляной кислотой, осаждением й промыванием целевого продукта спиртом, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа и повышения чистоты целевого продукта, предварительно проводят экстракцию сырья уксусной кислотой, а после элюции соляной кислотой фракцию, содержащую аденозин5* -монофосфат, дополнительно пропускают через активированный уголь, из которого элюируют целевой продукт раствором подщелоченного спирта, полученный раствор упаривают, подкисляют и осаждают целевой продукт охлаждением раствора и после промывания спйртом осадок высушивают.

2. Способ поп.1, отличающийся тем, что элюцию раствором подщелоченного спирта проводят при соотношении спирт I вода: аммиак

25:(22-24) : (1:3)..

3. Способ поп.1, отличаю-g щ и й с я тем,что упаривание осуществляют до 15-20%-ного содержания целевого продукта.

4. Способ поп.1, отличающийся тем, что подкисление про- i водят 10-15%-ной соляной кислотой до pH 1,75*-1,85.

5. Способ поп.1, отличающийся тем, что охлаждение проводят при 1-4 ⁰ С.

сл ю ю СаЭ СЛ >