SU1028679A1 - Нитрофенилдисульфидное производное сшитой агарозы в качестве хемосорбента дл изучени белок-белкового взаимодействи и способ его получени - Google Patents
Нитрофенилдисульфидное производное сшитой агарозы в качестве хемосорбента дл изучени белок-белкового взаимодействи и способ его получени Download PDFInfo
- Publication number
- SU1028679A1 SU1028679A1 SU813332352A SU3332352A SU1028679A1 SU 1028679 A1 SU1028679 A1 SU 1028679A1 SU 813332352 A SU813332352 A SU 813332352A SU 3332352 A SU3332352 A SU 3332352A SU 1028679 A1 SU1028679 A1 SU 1028679A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- agarose
- protein
- crosslinked
- nitrophenyl
- epichlorohydrin
- Prior art date
Links
Landscapes
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Abstract
1. Нитрофенилдисульфидное производное сшитой агароэы формулы R)-omjCHCHj, $ciijCttcacHj- $рСИ . ЛО (Ж сшита 10 вес.% 2,3-да1бромпропан71-ола агароза формулы работки сшитой 10 вес.% 2,3-дибром- , пропан-1-ола агарозы эпихлоргидрином. 1 4-дитиб-2,3-диоксибутаном, в водной среде при рН 7,2-8,5, затем водным раствором 2-меркаптоэтанола и после промывки полученного производного раствором нитрофенилсульфенилхлорида в уксусной кислоте при соотношении лиитой агарозы, эпихлоргидрина, 1,4-дитио-2,3-диоксибутана и нитрофе №лсульфенилхлорида, равном 1000:30500:1-20:10-200 .
Description
Изобретение относитс к химической технологии, конкретно к хемосорбентам дл изучени белок-белкового взаимодействи и способам получени таких хемосорбентов и может быть использовано в научных исследовани х по химии и физической химии белков, в энзимологии и молекуч рной биологии . Известен хемосорбент, который использовалс .дл получени стабилизированного внутримолекул рными сшивками папаина и дл изучени , взаимодействи между различными группировками в молекуле этого белка GilСНг .:иX ч-- ( Т) БСнс;НгСн со1 н.сн.снг- 5-{О/ ооБнснгСоо СН„ COQH где(Я)- сшитый агарозный гель (ЦЛ-се фароза. Преимуществом хемосорбента вл ет то, что в качестве исходной матрицы дл него используют поперечно-сшитый гель агарозы - ЦЛ-сефароза, который в процессе производства подвергаетс щелочному десульфированию, что приводит к удалению сульфогрупп примесного агаропектина с полисахаридной основы. В данном продукте полимерные цепи ковалентного сшиты, поэтому имеетс возможность постепенного введени дегидратирующего органическс1го растворител убрать из гел воду и затем высушить его, что в дальнейшем дает возможность значительно повысить точность количественных экспериментов. Однако емкость данного кемосорбен та по активным группировкам (3,9 мкмоль/мл) значительно выше необходимой , структура промежуточной группировки ( так называемой ножки) содержит ионогенные группы: катионообменные (СООН ) и анионообменные ( третичные аминные)J активирующие дисульфидные св зи хемосорбента пиридильных группировок также облада ет анионообменными свойствами. Способ получени известного хемосорбента включает следующие стадии: 1.Окисление ЦЛ-сефарозы периодатом натри дл получени носител с альдехидными группировками. 2.Присоединение к носителю прйрбдного пептида глутатиона с образов нийм на носителе альдиминных структур . 3.Восстановление этих альдиминных группировок действием натрийборгидрида , удаление избытка восстановител от полученного тиолпроизводного .. 4.ОбрабЬтку тиолпроизводного 2,2-дипиридилдисульфидом с - целью получени способных к тиол-дисульфид ному обмену 2-пирйдилдисульфидных группировок хемосорбента. К недостаткам данного способа относитс неоднозначность получаемых Б результате синтеза структур, поскольку при обработке альдегидного производного ЦЛ-сефар.озы глутатионом реакци идет не только по NH -группам последнего, но и по тиольным группам Вследствие этого, образуютс не только необходимые структуры, но и нежелательные продукты побочной реакции - структуры с глутатионом , присоединенным-к матрице сульфидной св зью. Цель изобретени - повышение точности , экспериментов при изучении белок-белкового взаимодействи . Указанна цель достигаетс структурой нитрофенилдисульфидного производного сшитой агарозы формулы ( grOCKjCHCHj CKjCttOiCn - $Эо ко ок ло где(к)т- сшита 10 вес.% 2,3-дибромпропан-1-ола агароза формулы CKjffli о . с размерами пор в набухшем состо нии, обеспечивак цими пределы исключени по белкам до 4.10 дальтон, по полисахаридам - до 2.10 дальтон, что со .ответствует гидродинамическому диаметру пор до 500 . ( .. Нитрофенилдисульфидное производное оаитой агарозы получают путем последовательной обработки сшитой 10 вес.% 2,3-дибромпропан-1-ола агарозы эпихлоргидрином, 1,4-дитио-2,3диоксибутаном в водной среде при рН 7,2-8,5, затем водным раствором 2-меркаптоэтанола и после промывки полученного производного - раствором нитрофенилсульфенидхлорида в уксусной кислоте при соотношении сшитой агарозы, эпихлоргидрина, 1,4-дитио-2 ,3-диоксибутана и нирофенилсульфенилхлорида , равном 1000:30erOOtl-20:10-200 .
Последовательность химических превращений при получений предлагаемого
ClCHjdt-CHj. )-01t, CR
OR-
Q-oCHiCHCHj cHjCHCHCHjeK
OH HO Oft Схема синтеза разработана таким образом, чтобы исключить неоднознач ность получаемых структур, а исполь вание на каждой стадии точно рассчи танного количества реагентов обеспе чивает необходимую емкость хемосорбента по активным функциональньп группировкам. Синтез провод т следующим обраэом . Исходную матрицу - ЦЛ-сефарозу обрабатывают в щелочной среде эпи . хлоргидрином с целью введени на по сахаридную основу эпоксигрупп, при используетс весовое соотношение ЦЛ сефароза (суха ) - эпихлоргидрин, равное 1000:30-600, Далее при рН 7,2-8,5 при комнатной температуре обрабатывают эпокси проивводное ЦЛ-сефарозы в водной среде дитиотреитом (ДTT. Количеств реагента рахзчитано таким образом, чтобы в получаемом тиолпроизводном содержалось бы 0,01-0,2 мкмоль SHгрупп на 1 МП гел . Поэтому эпоксипроивводное обрабатывают ДТТ при ве вом соотношении ЦЛ-сефароза - ДТТ, равном 1000:.1-20, Врем реакции 424 ч. После отмывки от продуктов реакции провод т обработку тиолсодержащего носител большим избытком 11000-кратным 2-меркаптоэтанола (2-МЭ), чтобы обеспечить полное вое становление всех тиольных групп и .блокировать возможно оставшиес эпо сигруппы. Последнюю стадию в синтезе - акт вацию тиольных групп носител - про вод т обработкой в среде уксусной кислоты избытком нитрофенилсульфенилхлорида по методике получени смешанных дисульфидов из тиолов и сульфенилхлоридов. Используют весовое соотношение ЦЛ-сефароза - нитро фенилсульфенилхлорид, равное 1000j 10-200. После окончани реакции и отмывки гел от реагентов провод т :следовательную промывку целевого хе мосорбента дегидратирующими органическими растворител ми и сушку продукта . Пример. Влажный промытый дистиллированной водой гель ЦЛ-сефа
изображена на схехемогорбента ме:
1)н$СНгСнснсЯг$н но OR
-QCHjCHCHj
Y
ITOi розы в количестве, соответствующем 3 г сухого материала, помещают в колбу и заливают SO мл 0,1 н. NaOH. При интенсивном переметиивании внос т 90 мг эпихлоргидрина и нагревают реакционнуто массу при интенсивном перемешивании 2 ч при ЗЗ-бО С. Далее перенос т нерастворимое вещество на стекл нный фильтр, промывают его на фильтре 0,1 н. NaOH (2x50 мл), бидистиллированной дезаэрированной водой до нейтральной реакции и затем промывают 0,06 М Na-фосфатным буфером с рН 7,2 2x50 ьш). Влажный гель помещают в колбу, добавл ют 100 мл того же буфера и 3 мг ДТТ. Реакционную массу перемейиивают 4 ч при комнатной температуре. Затем нерастворимый продукт промывают на фильтре тем же буфером (2x50 мл), бидистиллированной цезаэрированной водой нейтральной реакции, 0,1 н. HCI ( 2x50 мл), такой же водой до нейтральной реакции. Помещают промытый гель в колбу, заливают буфером и прибавл ют 3 мл 2-МЭ. Перемешивают суспензию 2ч при комнатной температуре. Вновь перенос т вещество на фильтр, промывают бидистиллирован- ной дезаэрированной водой до отсутстви тиолов в промывках и суспендирук|т гель в 50 мл раствора 30 мг нит- , рофенидсульфенилхлорида в уксусной кислоте. Перемешивают реакционную массу 2 ч при комнатной температуре. Нерастворимый продукт отфильтровыЬают , промывают на фильтре уксусной кислотой {2x50 мл), 0,1 н. НС1(50мл), бидистиллированной водой до нейтральной реакции, 1р%-ным МеОН (2x50 мм),50%-ным МеОН (2x50 мл), 80%-ным МеОН (2x5-0 мл) ,МеОН(5х50 мл), смесью МеОН - ацетон 1:1 (2x50 мл) и ацетоном (0,5 л). Сушат вещество в вакуум-эксикаторе над CaCl2 при 0,1 торр. , . Выход 2,82 1. «йбухаемость продукта в 26 мл/г. Емкость полученного хемосорбента по нитрофенилдисульфидным группировкам, найденна фотометрическим анализом при исчерпывающем восстановлении точной навески вещества избытком 2-МЭ в водном буфере при рН 7,4, составл ет , : i 0,26 мкмоль на грамм сухого,или
Claims (2)
1. Нитрофенилдисульфидное производное сшитой агарозы формулы
Oft HO OH irfle(Rj- сшитая 10 вес.% 2,3-дибромпропан71-ола агароза формулы:
с размерами пор в набухшем состоянии, обеспечивающими пределы исключения по белкам до 4Ί01 дальтон,!· по полисахаридам - до 2.1О1 дальтон, что соответствует гидродинамическому диаметру пор до 500 А, в качестве хемосорбента для изучения белок-бел,кового взаимодействия.
2. Способ получения нитрофенилдисульфидного производного сшитой агарозы путем последовательной об- работки сшитой 10 вес.% 2,3-дибромпропан-1-ола агарозы эпихлоргидрином^,
1,4-дитио-2,3-диоксибутаном в водной среде при pH 7,2-8,5, затем водным раствором 2-меркаптоэтанола и после промывки полученного производного рас- : твором нитрофенилсульфенилхлорида· в уксусной кислоте при соотношении льитой агарозы, эпихлоргидрина, 1,4-дитио-2,3-диоксибутана и нитрофешлсульфенилхлорида, равном 1000:30500:1-20:10-200.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU813332352A SU1028679A1 (ru) | 1981-06-17 | 1981-06-17 | Нитрофенилдисульфидное производное сшитой агарозы в качестве хемосорбента дл изучени белок-белкового взаимодействи и способ его получени |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU813332352A SU1028679A1 (ru) | 1981-06-17 | 1981-06-17 | Нитрофенилдисульфидное производное сшитой агарозы в качестве хемосорбента дл изучени белок-белкового взаимодействи и способ его получени |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU1028679A1 true SU1028679A1 (ru) | 1983-07-15 |
Family
ID=20974754
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU813332352A SU1028679A1 (ru) | 1981-06-17 | 1981-06-17 | Нитрофенилдисульфидное производное сшитой агарозы в качестве хемосорбента дл изучени белок-белкового взаимодействи и способ его получени |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
SU (1) | SU1028679A1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4708944A (en) * | 1984-07-06 | 1987-11-24 | Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha | Protease adsorbent and process for purifying TPA utilizing the same |
-
1981
- 1981-06-17 SU SU813332352A patent/SU1028679A1/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
l.Royer G. P.,Ii:eda S-i, Aso К. Cross-linking of reversibly inmobi.lized enzymes. - ЬЕВЬ Zett, 1977, V. 80. 1, p. 89-94. с размерами пор в набухшем состо нии, обеспечивающими пределы исключени по белкам до 4:10 дальтон по полисахаридам - до 2.10 дальтон что соответствует гидродинамическому диаметру пор .до 500 А, в качестве хемосорбента дл изучени белок-белкового взаимодействи . 2. Способ получени нитрофенилдисульфидного производного сшитой агарозы путем последовательной об * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4708944A (en) * | 1984-07-06 | 1987-11-24 | Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha | Protease adsorbent and process for purifying TPA utilizing the same |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Harris | Laboratory synthesis of polyethylene glycol derivatives | |
KR100375299B1 (ko) | 히알루론산의 가교결합형 아마이드 유도체와 이의 제조방법 | |
Cuatrecasas | Protein purification by affinity chromatography: derivatizations of agarose and polyacrylamide beads | |
US5092992A (en) | Polyethyleneimine matrixes for affinity chromatography | |
EP0168363A2 (en) | Sulfone activated thioether adsorbents for the separation of proteins and the like | |
JPH0251533A (ja) | 水溶性ケラチン蛋白質の製造方法 | |
SU1028679A1 (ru) | Нитрофенилдисульфидное производное сшитой агарозы в качестве хемосорбента дл изучени белок-белкового взаимодействи и способ его получени | |
JP2016518481A (ja) | 表面の官能化のためのプロセス | |
WO2017189860A1 (en) | Preparation of functional homocysteine residues in polypeptides and peptides | |
US3846306A (en) | Bonding of enzymes,enzyme derivatives and other biologically active molecules to polymeric materials | |
JPS5844084B2 (ja) | イオン性プルランゲルの製造法 | |
Chun et al. | Extensive imprinting adaptability of polyacrylamide-based amphoteric cryogels against protein molecules | |
JP2703937B2 (ja) | チオール基を含有するポリマーおよびその製法 | |
US5866387A (en) | Method for immobilizing ligand or compound having ligand bonded thereto | |
JPH10505598A (ja) | C末端蛋白質配列分析のための無水酢酸活性化 | |
EP0403700B1 (en) | Polyethyleneimine matrixes for affinity chromatography | |
US9206224B2 (en) | Method for synthesizing proteins | |
EP2314646A1 (en) | Diselenide-resins for oxidative protein folding | |
JPH11217397A (ja) | ペプチドチオールエステルの製造方法 | |
US5665603A (en) | Thiohydantoin formation and selective modification of the carboxy terminus of an aspartic acid- and/or glutamic acid-containing protein | |
Lozinskii et al. | Chemospecific (covalent) chromatography of biopolymers | |
CN110551698B (zh) | 一种阳离子接枝聚合物的生物酶及其制备方法和固定方法 | |
CA2352066C (en) | Process for the preparation of derivatized polymers | |
SU565507A1 (ru) | Способ получени модифицированного лигнина | |
JP2009540082A (ja) | 新規な担持された酸化反応物、それらの製造方法、およびその使用 |