SK81097A3

SK81097A3 - Cyclic peptides inhibiting fibronectin adhesion, preparation method thereof and pharmaceutical compositions containing the same

Info

Publication number: SK81097A3
Application number: SK810-97A
Authority: SK
Inventors: Anand Swaroop Dutta
Original assignee: Zeneca Ltd
Priority date: 1994-12-24
Filing date: 1995-12-21
Publication date: 1997-12-10
Also published as: IL116512A0; US6034056A; PL320995A1; CA2204793A1; NO972930D0; CN1171118A; AU4269896A; JP3248584B2; CZ198497A3; MX9704767A; GB9524630D0; NZ297530A; EP0800535A1; NO972930L; BR9510284A; TR199501656A2; HUT77120A; WO1996020216A1; JPH10508315A; AU705717B2

Description

Oblasť techniky

Vynález sa týka cyklických peptidov inhibujúcich fibronektínovú adhéziu, spôsobu ich prípravy a farmaceutických prostriedkov ktoré ich obsahujú.

Doterajší stav techniky

Mnohé z interakcií bunka-bunka a bunka-extracelulárny matrix sú sprostredkované proteínovými ligandami (napríklad fibronektínom, vitronektínom a VCAM-1) a ich integrínovými receptormi (napríklad VLA-4 (a4Bl)). Najnovšími výskumami sa zistilo, že tieto interakcie hrajú dôležitú úlohu v mnohých fyziologických stavoch (napríklad embryonálnom vývoji a hojení rán) a patologických stavoch (napríklad invázii nádorových buniek a metastáz, zápaloch, ateroskleróze a autoimunitných ochoreniach). 0 činidlách, ktoré selektívne môžu inhibovať niektoré z týchto interakcií, sa predpokladá, že budú vhodné na liečenie radu ochorení.

Integríny sú heterodimérne bunkové povrchové receptory, ktoré sú zložené z nekovalentne spojených (asociovaných) podjednotiek a a B. Pomocou molekulárnej biológie a chémie proteínov bol identifikovaný rad podjednotiek a a B. Integríny sa môžu rozdeliť do skupín na základe podjednotiek B, ktoré môžu byť spojené s jednou alebo viacerými podjednotkami a. Najrozšírenejšie integríny patria do skupiny BI, rovnako známe ako velmi oneskorené antigény (very late antigens, VLÄ). Druhou skupinou integrínov sú pre leukocyty špecifické receptory, ktoré sa skladajú z jednej z troch podjednotiek a (aL, aM alebo aX) v komplexe s proteínom B2. Tretiu skupinu integrínov tvoria cytoadhezíny aIIbB3 a avB3.

Ako ligandy pre integrínové receptory slúži rozsiahly rad proteínov. Všeobecne spadajú proteínmi rozpoznávané integríny do jednej z troch skupín: medzi extracelulárne matricové proteíny, plazmové proteíny alebo molekuly bunkového povrchu. Extracelulárne matricové proteíny, ako je kolagén, fibronektín, fibrinogén, laminín, trombospondín a vitronektín, sa viažu na rad integrínov. Mnohé z týchto adheživných proteínov rovnako cirkulujú v plazme a viažu sa na aktivované krvné bunky. Medzi ďalšie zložky v plazme, ktoré sú ligandami pre integríny, patrí fibrinogén a faktor X. Na bunku viazaný komplement C3bi a niektoré transmembránové proteíny, ako je bunková adhézna molekula podobná Ig (ICAM-1,2,3) a vaskulárna bunková adhézna molekula (VCAM-1), ktoré sú členmi rodiny Ig, rovnako slúžia ako ligandy na povrchu buniek pre niektoré integríny.

Boli identifikované cieľové aminokyseliny sekvencie na mnohé integríny. Napríklad cieľovou sekvenciou v α5Β1, aIIB3 a ανβ3 je tripeptid Arg-Gly-Asp, ktorý na nachádza v proteínoch ako je fibronektín, fibrinogén, trombospondín, kolagén typu 1, vitronektín a vWF. Viacmenej sekvencia Arg-Gly-Asp nie je jediným rozpoznávacím motívom integrínov, ktorí používajú adhézne ligandy. Ďalší integrín u4Bl viaže variabilnú oblasť (CS1) fibronektínu pomocou sekvencie Leu-Asp-Val a integrín z krvných doštičiek aIIbB3 rovnako rozpoznáva sekvenciu His-His-Leu-Gly-Gly-Ala-Lys-Gln-Ala-Gly-Asp-Val na C-konci gama-reťazca fibrinogénu.

Vynález sa v princípe týka činidiel, ktoré blokujú interakciu ligandu VCAM-1 s jeho integrínovým receptorom VLA-4 (α4β1). [Súhrnná práca o VLA-4: Structure of the Integrín VLA-4 and Its Cell-Cell and Celí Matrix Adhesion Functions,

M.E.Hemler, M.J.Elices, C.Parker a Y.Takada, Immunological Reviews, 114 (1990) 45 - 65.] Integrín a4ôl je exprimovaný na rad hematopoietických buniek a zavedených bunkových línií, vrátane hematopoietických prekurzorov, periférnych a cytotoxických T-lymfocytov, B-lymfocytov, monocytov, tymocytov a eozinofilov. Na rozdiel od ostatných Bl-integrínov, ktoré sa podieľajú iba na interakciách bunka-extracelulárny matrix, sprostredkováva a4ôl ako interakcie bunka-bunka tak aj bunka-extracelulárny matrix. Bunky exprimujúce aktivovaný α4β1 sa viažu na C-koncovú bunky viažúcu doménu fibronektónu (táto väzba nie je sprostredkovaná Arg-Gly-Asp), na VCAM-1 exprimovaný na endoteliálnych bunkách a navzájom k sebe, v dôsledku čoho dochádza k homotypickej agregácii. Expresia VCAM-1 endoteliálnymi bunkami je zvyšovaná prezápalovými cytokínmi ako je INF-r, TNF-α a IL-Ιβ.

Regulácia adhézie buniek sprostredkovanej α4β1 je dôležitá pri rade fyziologických procesov, vrátane proliferácie T-buniek, lokalizácie B-buniek do germinatívnych centier a adhézie aktivovaných T-buniek a eozinofilov k endoteliálnym bunkám. Okrem toho sa integrínom α4β1 sprostredkované procesy podieľajú na rôznych ochoreniach ako je invázia melanómových buniek v metastázach, infiltrácia synoviálnych membrán T-bunkami pri reumatickej artritíde, autoimunitný diabetes, kolitída a penetrácia leukocytov cez bariéru medzi krvou a mozgom pri experimentálnej autoimunitnej encefalomyelitíde, ateroskleróza, periférne vaskulárne ochorenie, kardiovaskulárne ochorenie a roztrúsená skleróza. Dôkazy toho, že sa interakcia VLA-4/VCAM-1 podieľa na vyššie uvedených chorobných procesoch boli získané skúmaním úlohy peptidu CS-1 a protilátok špecifických pre VLA-4 alebo VCAM-1 v rôznych in vitro a in vivo experimentálnych modeloch zápalov (ako je napríklad kontaktná kožná hypersenzitívna odpoveď u myší), experimentálne autoimunitné encefalomyelitídy, pľúcna expozícia antigénu, diabetes, ulceratívne kolitídy, nefritídy a odmietnutie aloštepov. Medzi ďalšie relevantné ochorenia patrí astma, psoriáza, restenóza, myokarditída a zápalové ochorenie čriev.

Napríklad v experimentálnom modeli artritídy (artritídy vyvolanej u inbredných samíc krýs (Lewis) jedinou intraperitoneálnou injekciou peptidoglykán-polysacharidových fragmentov zo skupiny A streptokokálnych bunkových stien) sa zistilo, že intravenózne podanie CS-1 na začiatku artritídy (dny 0-4, 300 Mg/deň) alebo v dňoch 11 - 16 zvieratám s rozvinutou artritídou, potláča ako akútny tak aj chronický zápal (viď.: Synthetic Fibronectin Peptides Suppress Arthritis in Rats by Interrupting Leukocyte Adhesion and Recruitment,

S.M.Wahl, J.B. Alien, K.L.Hines, T.Imamichi, A.M.Wahl, L.T.Furcht a J.B.McCarthy, J.Clin.Invest., 94 (1994) 655-662).

V ďalšom modeli zápalu ( kontaktná hypersenzitívna odpoveď u oxazolónom alebo 2,4-dinitrofluórbenzénom senzitizovaných myší) intravenózne podanie monoklonálnych protilátok Rl-2 alebo P2/2 špecifických proti a-4 (4 až 6 hodín pred expozíciou) podstatne inhibovalo eferentnú odpoveď (50 - 60 % zníženie opuchu ucha ako odpovedi), (viď. Monoclonal Antibodies to the Integrin a-4 Subunit Inhibit the Murine Contact Hypersensitivity Response, P.L.Chisholm, C.A.Williams a R.R.Lobb, Eur. J.Immunol., 23 (1993) 682 - 688). V modeli zápalu čriev (akútna kolitída u kosmáča), mala monoklonálna protilátka HP1/2 proti integrínu a4, ktorá viaže VLA-4, za následok podstatné zoslabenie akútnej kolitídy. Naproti tomu dve monoklonálne protilátky proti E-selektínu (BB11 a EH8) u kosmáča mierne obmedzovali kolitídu po desaťdňovom čase ošetrovania (viď.: Attenuation of Colitis in the Cotton-top Tamarin by Anti-a4 Integrin Monoclonal Antibody, D.K.Podolsky, R.Low, N.King, C.D.Benjamín, B.Pepinsky, P.Sehgal a M.deBeaumont, J.Clin. Invest., 92 (1993) 372 až 380).

Takisto sa zistilo, že tieto protilátky sú účinné v modeli autoimunitnej encefalomyelitídy (EAE), zápalového stavu centrálneho nervového systému, ktorý je podobný roztrúsenej skleróze. Pri obidvoch ochoreniach cirkulujúce leukocyty penetrujú cez bariéru medzi krvou a mozgom a poškodzujú myelín, čo má za následok narušenie nervového vedenia a paralýzu. Autoimunitnú encefalomyelitídu možno vyvolať aktívne primárnou imunizáciou zvieraťa proteínmi CNS, ako je myelínový bázický proteín (MBP), alebo adoptívne injekciou aktivovaných lymfocytov, ktoré sú špecifické pre tieto antigény CNS. Po injekcii do ožiarenej samice myši (PL/J x SJL)F1 odďaľovali nástup ochorenia rôzne monoklonálne protilátky (MK/1 (proti VCAM-1) a PS/2 a LPAM-1 (proti a4-integrínu)). Pokial sa v injekciách protilátok proti a4-integrínu (LPAM-1 a PS/2) pokračovalo každé 3 dni až do času po nástupe ochorenia, nielenže bol nástup ochorenia oddialený, ale v tomto prípade bola rovnako podstatne znížená závažnost ochorenia (viď.: Surface Expressioin of a4 Integrín by CD4 T Cells Is Required for Their Entry into Brain Parenchyma, J.L.Barón, J.A.Madri, N.H.Ruddle, J.Hashim a C.A.Janeway, Jr., J.Exp.Med., 177 (1993) 57 - 68).

Takisto sa zistilo, že protilátky špecifické ako proti a4-integrínu (LPAm-1) tak aj proti jednému z jeho ligandov, VCAM-1, sú účinné pri liečení inzulín-dependentnej diabetes mellitus u neobéznych diabetických myší. Má sa zato, že inzulín-dependentný diabetes mellitus je autoimunitné ochorenie, pri ktorom aktivované T-lymfocyty ničia β-bunky pankreatických ostrovčekov produkujúcich inzulín. Protilátka Rl-2 bránila v závislosti na dávke nástupu inzulitídy u neobéznych diabetických myší. Blokovanie ochorenia bolo sprevádzané výrazným znížením infiltrácie lymfocytov do Langerhansových ostrovčekov (viď.: The Pathogenesis of Adoptive Murine Autoimmune Diabetes Requires and Interaction Between a4-Integrins and Vascular Celí Adhesion Molecule-1, J.L.Barón, E.P.Reich,

I.Visintin a C.A.Janeway, Jr., J.Clin. Invest., 93 (1994) 1700 - 1708).

Zistilo sa, že bunky exprimujúce integrín a4Bl sa viažu na sekvenciu vo väzbovej doméne heparínu II a alternatívne zostrihnutom spojovacom segmente typu III (type III connecting segment, IIICS), ktorý sa nachádza v C-koncovej bunky viažúcej doméne fibronektínu. V oblasti IIICS sa a4Bl viaže s vysokou afinitou na peptidové sekvencie označené CS-1 (peptid obsahujúci 25 aminokyselín), čo svedčí o tom, že toto miesto je hlavným miestom interakcie s a4Bl vo fibronektíne. Tripeptid Leu-Asp-Val je minimálnou sekvenciou v CS-1 schopnou podporovať adhéziu hematopoietických buniek alebo inhibovať väzbu buniek na fibronektín sprostredkovanú a4Bl (CS1 viď.: The Minimal Essential Sequence for a Major Celí Type-Specific Adhesion Site (CS1) Within the Alternatively Spliced Type III Connecting Segment Domain of Fibronectin is Leucine-Aspartic Acid-Valine, A.Komoriya, L.J.Green, M.Mervic, S.S.Yamada,

K.M.Yamada a M.J.Humphries, J.Biol. Chem., 23 (1991) 150756

15079; Activation-Dependent Recognition by Hematopoietic

Cells of the LDV Sequence in the V Región of Fibronectin,

E.A. Wayner a N.L.Kovach, J.Celí Biol., 116 (1992) 489 - 497).

Okrem vyššie uvedených sekvencií obsahujúcich Leu-Asp-Val bolo opísané, že cyklický oktapeptid 1-adamantanacetyl-CysGly-Ar-Gly-Asp-Ser-Pro-Cys (obsahujúci disulfidový môstik medzi uvedenými dvoma cysteínovými zvyškami) je rovnako účinný ako peptid Cys-Leu-His-Gly-Pro-Glu-Ile-Leu-Asp-Val-Pro-Ser-Thr obsahujúci sekvenciu Leu-Asp-Val pri blokovaní adhézie buniek Jurkat na dosky potiahnuté CS-1 (IC_5o 30 Mmol). Tento cyklický peptid rovnako inhiboval väzbu buniek Jurkat na dosky potiahnuté fibronektínom. Okrem inhibície adhézie indukovanej a4Bl tento oktapeptid rovnako inhiboval funkciu v avB3- ako aj alIbBIIIa-dependentných testoch. Tento peptid teda nie je selektívny pre adhéziu sprostredkovanú a4Bl. (viď.: Cyclic RGD Peptide Inhibits a4Bl Interaction with Connecting Fragment 1 and Vascular Celí Adhesion Molecule, P.M.Cardarell, R.R.Cobb, D.M.Nowlin, W.Scholz, F.Gorcsan, M.Moscinski, M.Yasuhara,

S-L-Chiang a T.J.Lobl, J. Biol. Chem. 269 (1994) 18668

-18673).

Takisto bolo opísané, že adhéziu indukovanú a4Bl inhibujú niektoré malé nepeptidické zlúčeniny (viď.:Non-peptidic Surrogates of the Leu-Asp-Val Sequence and Their Use in the Treatment of Inflammation, Autoimmune Diseases and Tumour progression, YEDA Research and Development Co. Ltd., WO 94/02445, zverejnené 3. februára 1994).

Takisto bolo opísané, že disulfidový cyklický pentapeptid, Arg-Cys-Asp-tioprolín-Cys (tioprolín = tiazolidín-4-karboxylová kyselina) je inhibítorom bunkovej adhézie leukocytov k fibronektínu. Okrem toho tento cyklický peptid rovnako inhiboval väzbu na chymotryptický fragment fibronektínu s veľkosťou 120 kDa, ktorý obsahuje centrálne bunky viažúce doménu Arg-Gly-Asp. Tento peptid nebol rovnako selektívny, viaže sa ako na a4Bl tak aj na a5fil (viď.: A Novel Cyclic Pentapeptide Inhibits α4β! and α5β! Integrin-Mediated Celí

Adhesion, D.M. Nowlin, F.Gorcsan, M.Moscinski, S-L.Chiang,

T.J.Lobl a P.M.Cardarelli, J.Biol. Chem., 268 (1993) 20352 -20359) .

Podstata vynálezu

Vynález je založený na zistení, že relatívne malé cyklické peptidy môžu účinne inhibovať interakciu VCAM-1 a fibronektínu s integrínom VLA4.

Podľa jedného uskutočnenia vynález opisuje cyklický peptid všeobecného vzorca 1

LINKER

d) v ktorom

AA1 predstavuje L·- alebo D-aminokyselinu vybranú zo súboru zahŕňajúceho íle, Leu, Pro, Gly a Tie a ich aminokyselinové analógy,

AA2

znamená L^-aminokyselinu vybranú zo súboru zahŕňajúceho Leu, íle, Phe a Val a ich aminokyselinové analógy,

AA3 predstavuje L-aminokyselinu vybranú zo súboru zahŕňajúceho Asp a Glu a ich aminokyselinové analógy,

AA4 znamená ^-aminokyselinu vybranú zo súboru zahŕňajúceho Val, Leu, íle, Phe a Cha (cyklohexylalanín) a ich aminokyselinové analógy, a

LINKER predstavuje spojovací zvyšok na spojenie AA1 až AA4 za vzniku cyklického peptidu, pričom spojovací zvyšok je na dĺžku menší ako “(^CH ₂)_1X“ (výhodne menší ako

-C(O)-(CH₂)_i:l-NH-, výhodne menší ako -C(0)-(CH₂)_io-NH-, výhodne menší ako -C(0)-(CH_a)_Q-NH-, výhodne menší ako —C(O)-(CH₂)θ-ΝΗ-, výhodne menší ako -C(O)-(CH₂)₇-NH-), pričom tento peptid výhodne vykazuje v opísanom teste bunky M0LT-4/fibronektín hodnotu IC_so menej ako 20 μπιοί, výhodnejšie menej ako 15 gmol alebo vykazuje v opísanom teste bunky MOLT-4/rekombinantný rozpustný VCAM-1 hodnotu IC_so menej ako 100 μιηοΐ, výhodne menej ako 50 μιηοΐ, a AA1-4 majú všeobecný vzorec 2

R

(2) v ktorom

R¹ predstavuje postranný reťazec aminokyseliny, a symboly R² a R³ nezávisle na sebe znamenajú vždy atóm vodíka alebo alkylovú skupinu s 1 až 4 atómami uhlíka (výhodne atóm vodíka alebo metylovú skupinu, najmä atóm vodíka).

Aminokyselinový analóg je tu definovaný ako aminokyselina s rovnakými charakteristikami postranného reťazca, napríklad hydrofóbnosťou alebo prítomnosťou funkčnej skupiny (napríklad karboxylovej skupiny) alebo ju napodobňujúcej skupiny (ako je napríklad tetrazolový zvyšok v prípade karboxylovej skupiny), ako má aminokyselina, ktorú tento analóg nahrádza.

Výhodne je spojovací zvyšok na -C(O)-(CH₂)₂-NH-. (Je potrebné vziať do tetrapeptid Ile-Leu-Asp-Val spojený N dĺžku väčší ako úvahy, že cyklický k C-koncu skupinou

-C(O)~(CH₂) -NH- (B-alanín) bol neúčinný v biologickom teste pri 200 gmol). Termín LINKER nezahŕňa opakovanie zvyšku

AA1-AA4 ako takého. (Ďalšie uskutočnenie vynálezu, v ktorom je

LINKER definovaný ako súčasť heterocyklického kruhu vytvoreného s AA1-AA4, je uvedené nižšie. Tam kde to prichádza do úvahy, vzťahujú sa výhodné významy symbolov a vysvetlenia termínov k obidvom spôsobom definície vynálezu).

V tomto opise zahŕňa generický termín alkyl alkylové skupiny ako s priamym tak aj s rozvetveným reťazcom. Predsa len pokiaľ sú uvedené konkrétne alkylové skupiny, ako je propyl, jedná sa iba o skupiny s priamym reťazcom a pokiaľ sú uvedené konkrétne rozvetvené alkylové skupiny, ako je izopropyl, jedná sa iba o skupiny s rozvetveným reťazcom. To isté platí analogicky pre ostatné generické termíny. Zlúčeniny podľa vynálezu zahŕňajú solváty, ako sú napríklad hydráty. Zlúčeniny podľa vynálezu zahŕňajúce profarmaká, ako sú napríklad in vivo hydrolyzovateľné estery. Termíny aryl a heteroaryl zahŕňajú skupiny prípadne mono- alebo disubstituované skupinami nezávisle na sebe vybranými zo súboru zahŕňajúceho alkylové skupiny s 1 až 4 atómami uhlíka, alkoxyskupiny s 1 až 4 atómami uhlíka, hydroxyskupinu, atómy halogénov, kyanoskupinu a trifluórmetylovú skupinu.

Výhodné významy jednotlivých symbolov sú nasledujúce :

AA1 predstavuje íle, D-Ile alebo Melie (najmä D-Ile alebo

Melie); (skratka Me znamená metyl),

AA2 znamená Leu,

AA3 predstavuje Asp, a

AA4 znamená Val.

Výhodné analógy íle sú znázornené na obrázku 5. Výhodným analógom íle je D-Ile.

Medzi výhodné významy symbolov LINKER nepatria disulfidové väzby, hlavne medzi zvyšky Cys. V tomto opise má tetrapeptid -AA1-AA2-AA3-AA4- svoj N-koniec na AA1 a svoj C-koniec na AA4, pokiaľ nie je uvedené inak alebo pokiaľ niečo iné implicitne nevyplýva z kontextu. Aminokyseliny sú v L-konfigurácii pokiaľ nie je uvedené inak alebo pokiaľ niečo iné implicitne nevyplýva z kontextu.

Medzi vhodné významy AA1 patrí terc-Leu a terc-butyl-Ala.

Symbol LINKER výhodne predstavuje skupinu všeobecného vzorca 4

(4) v ktorom n má hodnotu 3-5 (najmä 3), a symboly R⁴ a R^s predstavujú vždy atóm vodíka, alebo

R⁴ znamená skupinu NH₂, ktorá je prípadne substituovaná skupinou C acyl alebo C .O.CO (kde C znamená alkylovú, arylovú, heteroarylovú, arylalkylovú alebo heteroarylalkylovú skupinu s 1 až 10 atómami uhlíka), ako alkanoylovú skupinu s 2 až 5 atómami uhlíka (hlavne izobutylkarbonylovú skupinu, skupinu CH₃C(O)-, CH₃CH₂C(O)-, cyklopropylkarbonylovú skupinu, cyklobutylkarbonylovú skupinu), terc-butoxykarbonýlovú skupinu (Boe), benzyloxykarbonylovú skupinu alebo pyridylkarbonylovú skupinu (hlavne pyridyl-3-yl-karbonylovú skupinu), alebo je skupina NH₂ prípadne substituovaná aminokyselinami cez α-karboxylovú skupinu, napríklad Glu, Asp, Pro-Glu alebo Pro-Asp, pričom N-koniec aminokyseliny je prípadne chránený skupinou C_x__ioacyl alebo C _xo.0.C0 (kde C znamená alkylovú, arylovú, heteroarylovú, arylalkylovú alebo heteroarylalkylovú skupinu s 1 až 10 atómami uhlíka), ako je napríklad skupina CH₃C(O)-, CH₃CH₂C(O)-, cyklopropylkarbonylovou skupinou, cyklobutylkarbonylovou skupinou alebo terc-butoxykarbonylovou skupinou (Boe), alebo je skupina NH₂ prípadne mono- alebo disubstituovaná alkylovou skupinou s 1 až 4 atómami uhlíka (hlavne sa jedná o dietylaminoskupinu), alebo je skupina NH_a prípadne substituovaná benzylovou skupinou, pyridylovou skupinou, karboxyalkanoylovou skupinou s 2 až 5 atómami uhlíka v alkanoylovej časti (hlavne 3-karboxypropionylovou skupinou) alebo aminoalkanoylovou skupinou s 2 až 5 atómami uhlíka (hlavne 3-aminopropionylovou skupinou), a

R^s predstavuje atóm vodíka, alebo R⁴ znamená atóm vodíka, a

R³ predstavuje karboxylovú skupinu prípadne substituovanú za vzniku esteru, ako napríklad za vzniku skupiny -COO-metyl, -COO-etyl, -COO-propyl alebo -COO-butyl, alebo R³predstavuje amidovú skupinu ako je napríklad skupina -CONH₂, -CONH-metyl, -CONH-etyl, -CONH-propyl alebo -CONH-butyl.

Hlavne výhodné je, pokial obidva symboly R⁴ a R^s predstavujú atómy vodíka.

Medzi vhodné hodnoty symbolu n patrí 3-9, 3-8, 3-7, 3-6,

3-5, 3-4, 3, 4, 5, 6, 7, 8 a 9.

Ďalšie výhodné významy symbolu LINKER sú uvedené na obrázkoch 8 alebo/a 13.

Podía jedného uskutočnenia vynález opisuje cyklický peptid všeobecného vzorca I, v ktorom

AA1 predstavuje L- alebo D-aminokyselinu vybranú zo súboru zahŕňajúceho íle, Leu a ich aminokyselinové analógy,

AA2 znamená L“aminokyselinu vybranú zo súboru zahŕňajúceho Leu a jeho aminokyselinové analógy,

ΑΑ3 predstavuje L-aminokyselinu vybranú zo súboru zahŕňajúceho Asp a jej aminokyselinové analógy, ktoré obsahujú v postrannom reťazci karboxylovú skupinu (alebo prípadne skupinu napodobňujúcu karboxylovú skupinu, hlavne tetrazolový zvyšok),

AA4 znamená L-aminokyselinu vybranú zo súboru zahŕňajúceho Val a jeho aminokyselinové analógy, a

LINKER predstavuje spojovací zvyšok na spojenie N-konca AA1 s C-koncom AA4 za vzniku cyklického peptidu obsahujúceho heterocyklický kruh so 17 až 30 členmi, pričom tento cyklický peptid vykazuje v opísanom teste bunky MOLT-4/fibronektín hodnotu IC_so menej ako 20 gmol (a výhodne, pričom výhodnosť postupne rastie, menej ako 10, menej ako 3, menej ako 1, menej ako 0,3, menej ako 0,1 a menej ako 0,03 gmol) alebo/a vykazuje v opísanom teste bunky M0LT-4/rekombinantný rozpustný VCAM-1 hodnotu IC_so menej ako 100 gmol (a výhodne, pričom výhodnosť postupne rastie, menej ako 50, menej ako 30, menej ako 10, menej ako 3, menej ako 1, menej ako 0,3, menej ako 0,1 a menej ako 0,03 gmol), a AA1-4 majú všeobecný vzorec 2, v ktorom

R¹ predstavuje postranný reťazec aminokyseliny, a symboly R² a R³, ktoré môžu byť rovnaké alebo rozdielne pre každú z AA1 - AA4 nezávisle na sebe znamenajú vždy atóm vodíka, a jeho soli.

Výhodne predstavuje počet členov v heterocyklickom kruhu vytvorenom spojovacím zvyškom (LINKER) na spojenie N-konca AA1 s C-koncom AA4 17 až 29, výhodnejšie 17 až 28 členov, ešte výhodnejšie 17 až 27 členov, ešte výhodnejšie 17 až 26 členov, ešte výhodnejšie 17 až 25 členov, ešte výhodnejšie 17 až 24 členov, ešte výhodnejšie 17 až 23 členov, ešte výhodnejšie 17 až 22 členov, ešte výhodnejšie 17 až 21 členov, ešte výhodnejšie 17 až 20 členov, ešte výhodnejšie 17 až 19 členov, ešte výhodnejšie 17 až 18 členov, a hlavne výhodne 18 členov.

Ak heterocyklický kruh vytvorený spojovacím zvyškom (LINKER) na spojenie N-konca AA1 s C-koncom AA4 sám obsahuje kruh (vnútorný kruh), počíta sa počet členov v heterocyklickom kruhu tak, že zahŕňa len tie členy vnútorného kruhu, ktoré tvoria najkratšiu cestu na uzatvorenie heterocyklického kruhu. Napríklad zlúčenina 16 v tabuľke 2 má v rámci tejto definície vo svojom heterocyklickom kruhu 20 členov a podobne zlúčenina 17 má 18 členov.

Výhodný je vyššie opísaný jednotlivé symboly nasledujúce cyklický peptid, v ktorom majú významy:

pre analóg vybraný zo súboru

AA1 je aminokyselinový zahŕňajúceho Val, Pro. Gly, Tie, terc-Leu, terc-butyl-Ala, Phe, Nie, Met, Arg, Lys a Ala, pre

AA2 je aminokyselinový analóg vybraný zo súboru zahŕňajúceho íle, Phe, Val, terc-Leu, Nie, Cha a terc-butyl-Ala, pre

AA3 je aminokyselinovým analógom Glu, a pre

AA4 je aminokyselinový analóg ceho Leu, íle, Phe, Cha, Nie a vybraný Nva, zo súboru zahŕňajúa jeho soli.

Ešte výhodnejší je vyššie opísaný ktorom majú jednotlivé symboly nasledujúce cyklický peptid, v významy :

AA1 je vybraný zo súboru zahŕňajúceho íle a Leu, pričom obidva tieto zvyšky sú prípadne N-metylované,

AA2 predstavuje Leu,

ΑΑ3 znamená Asp, a

AA4 predstavuje Val, a jeho soli.

Výhodný je vyššie opísaný cyklický peptid, v ktorom LINKER predstavuje skupinu všeobecného vzorca 4, kde n má hodnotu 3 - 5, a

symboly R⁴ a R^s predstavujú vždy atóm vodíka, alebo

R⁴ znamená skupinu NH₂, ktorá je prípadne substituovaná skupinou C _x C(0)-, alebo je skupina NH^ prípadne substituovaná prirodzenými aminokyselinami cez α-karboxylovú skupinu, pričom N-koniec aminokyseliny je prípadne substituovaný skupinou alebo je skupina NH_a prípadne mono- alebo disubstituovaná alkylovou skupinou s 1 až 4 atómami uhlíka, alebo je skupina NH₂ prípadne substituovaná benzylovou skupinou, pyridylovou skupinou, karboxyalkanoylovou skupinou s 2 až 5 atómami uhlíka v alkanoylovej časti alebo aminoalkanoylovou skupinou s 2 až 5 atómami uhlíka, a

R^s predstavuje atóm vodíka, alebo R⁴ znamená atóm vodíka, a

R^s predstavuje karboxylovú skupinu prípadne substituovanú alkylovú skupinu s 1 až 4 atómami uhlíka za vzniku esteru, alebo R^s predstavuje amidovú skupinu všeobecného vzorca -C0NR^eR’⁷, kde symboly R^e a R ⁷ nezávisle na sebe znamenajú vždy atóm vodíka alebo alkylovú skupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, a jeho soli.

V tomto opise označujú väzby nakreslené so šípkami priame väzby alebo miesta naviazania, a neznamenajú teda skupiny -CH₂“, pokiaľ nie je uvedené inak alebo pokiaľ niečo iné nevyplýva z kontextu. V tomto opise sa aminokyseliny spájajú bežným spôsobom, pokiaľ nie je uvedené inak alebo pokiaľ niečo φ iné nevyplýva z kontextu, a aminokyseliny sú v L-konfigurácii, pokiaľ nie je uvedené inak alebo pokiaľ niečo iné implicitne nevyplýva z kontextu.

Výhodný je vyššie opísaný cyklický peptid, v ktorom

LINKER predstavuje ľubovoľný zo zvyškov vzorcov 6-44 uvedených na obrázku 13, a jeho soli.

Ešte výhodnejší je vyššie opísaný cyklický peptid, v ktorom

LINKER predstavuje ľubovoľný zo zvyškov vzorcov 6, 7, 8, 13, 17, 18, 19, 20 alebo 21 - 44 uvedených na obrázku 13, a jeho soli.

Výhodnými cyklickými peptidmi, v ktorých sa poznámky v hranatých zátvorkách dotýkajú ich časti zodpovedajúcej symbolu LINKER a Melie predstavuje N-metyl-Ile, sú:

c(Ľe-Leu-Asp-VaI-NH-(CH2)5*CO')

[D-Lys-analóg]

NH [L-Om-analóg]

H O [D-Lys-analóg] /NH

Ile-Leu-Asp-Val—

Ile-Leu-Asp-val

Leu-Asp-Val-NH(CH₂)₅CO-^|

-D-lle-Leu-Asp-Val q [L-Om-analóg] ^AC>Y

H L zjy-D-lle-Leu-Asp-Val-NH(CH₂)₄COz|r-MeLeu-Leu-Asp-Val-NH(CH₂)_sCO^

ch₂r~\

CH_CO-lle-Leu-Asp-Val—N N—

I ^>0

N

H

NH

D-lle-Leu-Asp-Val ^H'N

H O [D-Lys-analóg]

NH .Q-lle-Leu-Asp-Vai^ ⁰ ? Y

H O [D-Lys-analog]

CHHN—CO

CH₂-CO—Ile-Leu-Asp-Vaí—N N

CH₂-CH—NH-CO ch₂ ¹

CH₂-CO—Ile-Leu-Asp-Val—N N

CH₂-CH₂-CH—NH-CO ch₂

CO ch₂

Melle-Leu-Asp-Val-D-Lys^—N

CO

D-Lys

Mélle-Leu-Asp-Val-D-Arg“

CQ-------------D-Arg-Melle-Leu-Asp-Val

CO

CH₂

H O [beta-Ala-D-Lys-analóg]

NH

. >x.D-Leu-Leu-Asp-Vá í Y

H O [N-Pyr-D-Lys-analóg]

q·^· n O'Leu-Leu-Asp-\

H O [N-Pyridyikarbonyl-D-Lys-analóg] < ^v NH lu\/\ D-Leu-Leu-Asp-VaH

Y Y

H O [alfa -Glu-D.-Lys-analóg] .p D-Leu-Leu-Asp-Val-NHCHjCH^—S

OCch

Melle-Leu-Asp-Val-NH(CH₂)₄CO |-lle-l_eu-Asp-Val-NH-CH₂-CH₂S

O C------------CH₂CH c(D-Leu-Lcu-Asp-Val-P-Ala-Pro) c(T)-Leu-Leu- Asp- V al-D-Aia-D-Ala) c(D-Leu-Leu-Asp-Val-P-Ala-D-Ala)

c(Melle-LeurAsp-Val-P-Ala-Pro) c(Melle-Leu-Asp-Val-P-Ala-D-Ala) c(MeIle-Leu-Asp-V al-D-Ala-D-Ala) c(Melle-Leu-Asp-Val-P-Ala-D-Om) c(Melle-Leu-Asp-Val-P-Ala-D-Lys) c(Melle-Leu-Asp-Val-D-Arg-Q-Ala) c(Melle-Leu-Asp-Val-D-Ala-D-Arg) c (Me íle - Leu - Asp- V al-D-O m-D-Ala) c(MelIe-Leu-Asp-Val-D-Lys-D-Ala) c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Om(CHMe2)-D-Ala) c(MeIle-Leu-Asp-Val-X)-Orn(cyklohexyl)-D-Ala) c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Om(4-chlór-benzyl)-D-Ala) c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Om(Et2)-D-Ala) c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Lys(CHMe2)-D-Lys(CHMe2)) c(Melle-Leu-Asp-Val-D-Lys-n-Lys) c(Melle-Leu-Asp-Val-D-Ala-D-Lys) c(MeIle-Leu-Asp-Val-l)-Phe-D-Lys) c(Melle-Leu-Asp-Val-D-Trp-D-Lys) c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Phe-D-Arg) c(MeIle-Leu-Asp-V al-D-Trp-D- Arg) c(MeI!e-Leu-Asp-Val-D-Arg(Pmc)-D-Ala) c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Ala-D-Arg(Pmc)) c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Phe-D-Arg(Pmc)) c(MeĽe-Leu-Asp-Val-D-Trp-D-Arg(Pmc)) c(MeĽe-Leu-Asp-Val-D-His-D-Lys) c(MeIle-Leu-Asp-V al-D-Arg-D-Arg) c(MeĽe-Leu-Asp- V al-D-His-D-Arg) c(MeIle -Leu-Asp-V al-D-Arg-D-His) c(MeĽe-Leu-Asp- V al-D- Ala-D-Om) c(Melle-Leu-Asp-Val-D-Oni-D-Om) a ich soli.

Podľa ďalšieho uskutočnenia vynález opisuje cyklický peptid všeobecného vzorca 5

LINKER v ktorom jednotlivé symboly majú významy všeobecnom vzorci 1, a ďalej definované vo

AAO predstavuje Glu, a

AA5 znamená Pro.

Cyklické peptidy podľa vynálezu vykazujú aspoň jednu z nasledujúcich výhod: sú v testoch účinnejšie ako známe zlúčeniny, napríklad CS-1; sú menšie ako CS-1, čo je peptid obsahujúci 25 aminokyselín, a teda sa ľahšie syntetizujú; a cyklické peptidy sú stabilnejšie voči enzýmovému odbúravaniu.

Niektoré výhodné zlúčeniny sú uvedené na obrázku 2.

Najmä výhodné zlúčeniny vykazujú účinnosť v in vivo tes21 toch (napríklad v in vivo modeli kontaktnej hypersenzitivity (CHS) na myšiach - príklad 2.3), ako sú opísané nižšie. CS1 v dávke 10 mg/kg/deň a 1 mg/kg/deň vykazoval inhibíciu 0 %.

Zlúčeniny 3a 4 (viď obrázok 2) boli účinné v dávke 10 mg/kg/deň (inhibícia 39 %) a 1 mg/kg/deň (inhibícia 19 %). U testovaných zlúčenín podľa vynálezu nebola pri podaní účinnej dávky pozorovaná žiadna toxicita.

Podľa ďalšieho uskutočnenia vynález opisuje farmaceutický prostriedok, ktorý obsahuje cyklický peptid podľa vynálezu v kombinácii s farmaceutický prijateľným riedidlom alebo nosičom.

Tento prostriedok môže byť vo forme vhodnej na orálne použitie, napríklad vo forme tablety, kapsule, vodného alebo olejového roztoku, suspenzie alebo emulzie; na nasálne použitie, napríklad vo forme šňupacieho prášku, nosného spreja alebo nosných kvapiek, na vaginálne alebo rektálne použitie, napríklad vo forme čapíku, na podanie inhaláciou, napríklad vo forme jemne rozomletého prášku alebo kvapalného aerosólu, na sublingválne alebo bukálne použitie, napríklad vo forme tablety alebo kapsule, alebo na parenterálne použitie (vrátane intravenóznej, subkutánnej, intramuskulárnej, intravaskulárnej aplikácie alebo aplikácie infúziou), napríklad vo forme sterilného vodného alebo olejového roztoku alebo suspenzie, alebo vo forme depotnej formulácie, v ktorej je liečivo zapracované do biologicky odbúrateľného polyméru. Prostriedok môže byť vo forme vhodnej na miestne podanie, ako napríklad vo forme krémov, mastí a gélov. Takisto je možná aplikácia formou náplastí na kožu. Formulácie sú všeobecne opísané v kapitole

25.2 práce Comprehensive Medicinal Chemistry, zväzok 5, editor Hansch a kol., Pergamon Press 1990.

Všeobecne sa môžu vyššie uvedené prostriedky pripraviť bežným spôsobom s použitím bežných nosných alebo/a pomocných látok. V prípade prostriedku na orálne podanie môže však byť účelné, aby bol prostriedok potiahnutý povlakom chrániacim cyklický peptid, ktorý je účinnou látkou, pred pôsobením enzýmov v žalúdku.

Výhodným prostriedkom vhodný na orálne podanie napríklad v tablete alebo v podľa vynálezu je prostriedok v jednotkovej dávkovacej forme, kapsuli, ktorý obsahuje od 2,5 do

500 mg, a výhodne 10 až 100 mg, cyklického peptidu v každej dávkovacej jednotke, alebo prostriedok vhodný na parenterálne podanie, ktorý obsahuje od 0,5 do 100 mg cyklického peptidu na ml a výhodne 1 až 10 mg cyklického peptidu na ml roztoku.

Parenterálnym prostriedkom je výhodne roztok v izotonickom roztoku chloridu sodného alebo izotonickom roztoku dextró-

zy, pokiaľ je to nutné pufrovaný n a pH 5 až 9. Alternatívne môže byť parenterálny prostriedok upravený na pomalé uvoľňovanie účinnej látky, v tomto prípade je množstvo cyklického peptidu na jednotkovú dávku všeobecne väčšie ako je to potrebné pri použití bežnej injikovateľnej formulácie. Výhodnou formuláciou s pomalým uvoľňovaním účinnej látky je formulácia s kontinuálnym uvoľňovaním, napríklad formulácia typu opísaného v európskom patente č. 58481. Na formulácie s pomalým uvoľňovaním účinnej látky, ktoré obsahujú polyméry na báze polymliečnej kyseliny alebo polyglykolovej kyseliny, je výhodný cyklický peptid podľa vynálezu obsahujúci v symbole LINKER zásaditú skupinu. Ďalšími výhodnými tu opísanými cyklickými peptidmi sú tie cyklické peptidy, v ktorých LINKER predstavuje dipeptid ( všeobecného vzorca 4—NH-CHR·-CO-NH-CHR'·-CO—>, kde symboly R' a R' ' predstavujú aminokyselinové postranné reťazce a tento peptid je prípadne substituovaný alkylovou skupinou s 1 až 4 atómami uhlíka (najmä metylovou skupinou) na atóme dusíka v hlavnom reťazci peptidu alebo/a postrannom reťazci), ktorý výhodne obsahuje aspoň jednu zásaditú aminokyselinu alebo jej soľ. Výhodnejšie sú aminokyselinami v tomto dipeptide D-aminokyseliny alebo ich soli a hlavne je tento dipeptid vybraný zo skupiny zahŕňajúcej dipeptidy vzorcov 24 - 38, 43 a 44, ako sú uvedené na obrázku 13, a ich soli. Zásaditá aminokyselina je definovaná ako aminokyselina obsahujúca vo svojom postrannom reťazci zásaditú funkčnú skupinu, ako je na23 príklad aminoskupina alebo guanidi- noskupina, pričom ktorákoľvek z týchto skupín môže byť prípadne substituovaná alkylovou skupinou s 1 až 4 atómami formulácia s pomalým uvoľňovaním do 100 mg cyklického peptidu na uhlíka. Výhodná parenterálna účinnej látky obsahuje od 10 jednotkovú dávku. Podľa ďalšieho uskutočnenia vynálezu v ktorom LINKER predstavuje di peptid, môže prípadne byť jednou aminokyselinou v tomto dipeptide aminokyselina bez postranného reťazca, ako je napríklad

B-alanín.

Prostriedok podľa vynálezu sa normálne podáva tak, že denná orálna dávka predstavuje od 0,1 mg/kg do 50 mg/kg a denná parenterálna dávka predstavuje od 20 gg/kg do 10 mg/kg.

Podľa ďalšieho uskutočnenia vynález opisuje spôsob inhibície interakcie medzi VCAM-1 alebo/a fibronektínom a integrínovým receptorom VLA-4 u teplokrvného živočícha, ako je človek, ktorý takéto ošetrenie potrebuje, tento spôsob zahŕňa podanie účinného množstva cyklického peptidu všeobecného vzorca I alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli uvedenému živočíchovi. Vynález rovnako zahŕňa použitie takého cyklického peptidu všeobecného vzorca I alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli na prípravu nového liečiva pre použitie na liečenie ochorení alebo stavu sprostredkovaného interakciou medzi fibronektínom alebo/a VCAM-1 (hlavne VCAM-1) a integrínovým receptorom VLA-4. Takisto sa predpokladá jeho využiteľnosť ako výskumného nástroja.

Podľa ďalšieho uskutočnenia vynález opisuje farmaceutický prostriedok obsahujúci cyklický peptid, ako je tu opísaný, v kombinácii s farmaceutický prijateľným riedidlom alebo nosičom. Výhodný je farmaceutický prostriedok na parenterálne podanie vytvorený na pomalé uvoľňovanie účinnej látky počas aspoň 5 dní.

Podľa ďalšieho uskutočnenia vynález opisuje cyklický peptid, ako je tu opísaný, na použitie ako liečiva. Podľa ešte ďalšieho uskutočnenia sa vynález týka spôsobu inhibície inte24 rakcie medzi VCAM-1 alebo/a fibronektínom a integrínovým receptorom VLA-4 u cicavca, ktorý takéto ošetrenie potrebuje, tento spôsob zahŕňa podanie účinného množstva farmaceutického prostriedku, ako je tu opísaný, alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli uvedenému cicavcovi. Podľa výhodného uskutočnenia tento cicavec vyžadujúci ošetrenie trpí roztrúsenou sklerózou alebo reumatickou artritídou.

Podľa ďalšieho uskutočnenia vynález opisuje použitie cyklického peptidu všeobecného vzorca I alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli na prípravu liečiva pre použitie na liečenie ochorenia alebo stavu sprostredkovaného interakciou medzi VCAM-1 alebo fibronektínom a integrínovým receptorom VLA-4.

Podrobnosti o syntéze

Cyklický peptid všeobecného vzorca I podľa vynálezu sa môže pripraviť ľubovoľným spôsobom o ktorom je v odbore chémie peptidov známe, že je použiteľný na syntézu analogických zlúčenín. Tak sa môže napríklad cyklický peptid podľa vynálezu získať pomocou analogických postupov ako sú opísané v práci Solid Phase Peptide Synthesis: A practical approach”, ktorú napísali Atherton a Sheppard (publikoval IRL press u Oxford University Press, 1989), Solid Phase Peptide Synthesis, ktorú napísali Stewart a Young (publikoval the Pierce Chemical Company, Illinois, 1984), Principles of Peptide Synthesis, ktorú napísal M.Bodanszky (publikoval Springer-Verlag, Berlín Heidelberg, 1984), The Practice of Peptide Synthesis, ktorú napísali M.Bodanszky a A.Bodanszky (publikoval Springer-Verlag, Berlín Heidelberg, 1984), a v sérii kníh Amino Acids, Peptides and Proteins (zväzky 1 až 26, zväzok 26 publikovaný v roku 1995) (publikoval Royal Society of Chemistry, Cambridge, Veľká Británia). Okrem kníh bol o syntéze peptidov zverejnený rovnako rad zhrňujúcich článkov (napríklad Solid Phase Peptide Synthesis: a Silver Anniversary Report, G.Barany, N.Kneib-Cordonier a D.G. Mullen, International Journal of Peptide and Protein Research, 30 (1987, 705 - 739; Solid Phase Peptide Synthesis Utilising 9-Fluorenylmethoxycarbonyl

Amino Acids, G.B. Fields a R.L.Noble, International Journal of Peptide and Protein Research, 35 (1990), 161 - 214). Pokroky v syntéze sú rovnako publikované v správach zo sympózií Američan, European and Japanese Peptide Symposiums. Syntéza sa môže uskutočňovať automaticky alebo manuálne.

Podľa ďalšieho uskutočnenia vynález opisuje spôsob prípravy cyklického peptidu všeobecného vzorca 1, ktorý spočíva v tom, že sa (a) odstráni jedna alebo niekoľko obvyklých ochranných skupín pre peptidy z chráneného cyklického peptidu všeobecného vzorca

(3)

v ktorom Pri predstavuje ochrannú skupinu na kyslej skupine v postrannom reťazci aminokyseliny AA3, a vzniká cyklický peptid podľa vynálezu všeobecného vzorca 1 a prípadne sa súčasne alebo následne rovnako odstránia ľubovoľné ďalšie obvyklé ochranné skupiny pre peptidy prítomné v skupine LINKER a prípadne sa, pokiaľ je to žiadúce, premení takto získaný produkt na jeho soľ, alebo že sa (b) vytvorí amidová väzba kondenzáciou dvoch peptidových jednotiek, z ktorých jedna obsahuje karboxylovú skupinu alebo jej reaktívny derivát a druhá obsahuje aminoskupinu, takže sa vytvorí chránený alebo nechránený cyklický peptid, ktorý má sekvenciu uvedenú vo všeobecnom vzorci 1, a pokiaľ je to nutné odstránia sa ochranné skupiny s použitím vyššie opísaného spôsobu (a) a prípadne sa, pokiaľ je to žiadúce, premení takto získaný produkt na jeho soľ, alebo že sa (c) na prípravu cyklického peptidu všeobecného vzorca 1, ktorý obsahuje v symbole LINKER skupinu -S(O)- alebo -S(0₂)-, oxiduje atóm síry (alebo ďalej skupina -S(0)- v prípade prípravy skupiny -S(0₂)- v symbole LINKER prekurzorového cyklického peptidu, a vzniká cyklický peptid obsahujúci v symbole LINKER skupinu -S(0)~ alebo -S(0_a)-, a prípadne sa pokial je to žiadúce, zmení takto získaný produkt na jeho sol.

Vyššie uvedené stupne odstraňovania ochranných skupín a kondenzácia sa môžu uskutočňovať alebo na pevnom nosiči (syntéza peptidov na pevnej fáze) alebo v roztoku s použitím obvyklých postupov používaných pri syntéze organických zlúčenín. S výnimkou pevného nosiča sú všetky ďalšie ochranné skupiny, kondenzačné činidlá, deblokačné činidlá a purifikačné postupy podobné ako v prípade syntézy peptidov na pevnej zásade tak aj v prípade syntézy peptidov v roztoku.

V prípade syntézy peptidov na pevnom nosiči sa vyberie vhodná živica, ktorá môže poskytovať buď volnú karboxylovú skupinu po odštiepení od živice alebo peptidový derivát, z ktorého sa dá selektívne odstrániť ochranná skupina a vznikajú C-koncové karboxylové skupiny. Pevný nosič môžu tvoriť polystyrénové guľôčky, polydimetylakrylamidové guľôčky, kompozitný polymér polydimetylakrylamid/polystyrén (Polyhip) alebo polystyrén-polyoxyetylénová živica (živica Tentagel). Niekoľko príkladov vhodných spojovacích skupín obsahujúcich pevné nosiče, používaných pri syntéze peptidov na pevnej zásade, je znázornených nižšie. Okrem znázornených spojovacích skupín možno použiť rovnako niektoré ďalšie spojovacie skupiny, ako je hydroxykrotonoylamidometylová skupina (HYCRAM). Prvá aminokyselina sa potom nakondenzuje na živicu pomocou spôsobov opísaných v tejto prihláške pre syntézu peptidov alebo pomocou ľubovoľného z kondenzačných činidiel používaných v syntéze peptidov. Príklady niektorých kondenzačných činidiel sú rovnako opísané v tejto prihláške.

polymér (živica Wang) polymér (živica Sasrin)

,CH₂-polymér (kyslá živica Rink)

(chlórmetylová a hydroxymetylová živica Merrifield)

V priebehu zostavovania peptidov sa aminokyselinové funkčné skupiny, ktoré sa nepodieľajú na reakcii, chránia rôznymi ochrannými skupinami. Napríklad N-koncové aminoskupiny a aminoskupiny postranného reťazca sa môžu chrániť s použitím 9-fluorenylmetoxykarbonylovej skupiny (Fmoc), terc-butoxykarbonylovej skupiny (Boe), bifenylizopropoxykarbonylovej skupiny (Bpoc), 2-[3,5-dimetoxyfenyl]propyl-2-oxykarbonylovej skupiny (Ddz), adamantyloxykarbonylovej skupiny (Adoc), alyloxykarbonylovej skupiny (Aloc), 2,2,2-trichlóretoxykarbonylovej skúpi28 ny (Troc), benzyloxykarbonylovej skupiny a rôzne substituovaných benzyloxykarbonylových skupín. Tieto ochranné skupiny sa môžu, ak je to potrebné, odštiepiť pomocou štandardných postupov (napríklad reakciou s kyselinou alebo zásadou, katalytickou hydrogenolýzou a pomocou Pd(O) alebo reakciou so zinkom a kyselinou octovou.

Medzi vhodné ochranné α-karboxylovej skupiny alebo reťazca patria rôzne skupiny lová, etylová, terc-butylová, skupiny používané na chránenie karboxylovej skupiny postranného tvoriace estery (napríklad metybenzylová, nitrobenzylová, alylová a 9-fluorenylmetylová skupina).

Medzi vhodné ochranné skupiny používané na chránenie guanidinoskupiny v postrannom reťazci v peptidoch obsahujúcich arginínový zvyšok patrí nitroskupina, adamantyloxykarbonylová skupina, 4-metoxy-2,3,6-trimetylbenzénsulfonylová skupina, 2, 2,4,6,7-pentametyldihydrobenzofurán-5-sulfonylová skupina (Pbf) a 2,2,5,7,8-pentametylchroman-6-sulfonylová skupina (Pmc).

Medzi vhodné ochranné skupiny používané na chránenie imidazolovej skupiny v postrannom reťazci v peptidoch obsahujúcich histidínový zvyšok patrí tritylová skupina, tozylová skupina, dinitrofenylová skupina, adamantyloxykarbonylová skupina (Adoc), terc-butoxykarbonylová skupina (Boe) alebo 9-fluorenylmetoxykarbonylová skupina (Fmoc).

Reakcie na odštiepenie ochrannej skupiny sa mozu uskutočniť pri teplotách medzi 4 ’C miestnosti, okolo 25 ’C). Toto od 10 minút do 24 hodín.

Medzi vhodné kondenzačné jednotlivých aminokyselín alebo a 40 ’C (výhodne pri teplote odštiepovanie môže trvať počas postupy používané na spájanie peptidových fragmentov patria bežne používané azidové metódy, metódy symetrických anhydridov, zmesných anhydridov a rôznych aktívnych esterov a karbodiimidov. V prípade rôznych karbodiimidov (napríklad dicyklohexyl- alebo diizopropylkarbodiimidu) sa môže rovnako pridávať rad ďalších aditív (napríklad 1-hydroxybenzotriazol a

N-hydroxysukcínimid). Okrem toho sa môže spájanie aminokyselín alebo fragmentov dosiahnuť rovnako s použitím radu iných činidiel, napríklad lH-benzotriazol-l-yloxytris-pyrolidínfosfónium-hexafluórfosfátu (PyBOP), 2-(lH-benzotriazol-l-yl)-1,1,1,3,3-tetrametylurónium-tetrafluóroborátu (TBTU) a 2-(1H-benzotriazol-l-yl)-1,1,3,3-tetrametylurónium-hexafluórfosfátu (HBTU).

Kondenzačná reakcia sa môže uskutočniť pri teplotách medzi - 20 ’C a 40 ‘C. Čas potrebný na dokončenie reakcie môže byť medzi 10 minútami a 24 hodinami.

Medzi vhodné purifikačné metódy pre medziprodukty a konečné produkty patrí protiprúdové rozdeľovanie, iónová výmena, gélová filtrácia a rôzne ďalšie chromatografické postupy vrátane HPLC (vysokotlakovej kvapalinovej chromatografie) spolu s mnohými ďalšími štandardnými postupmi používanými v organickej chémii (napríklad extrakcia rozpúšťadlami a kryštalizácia) .

Soli sa môžu pripraviť ľubovoľným vhodným spôsobom známym v odbore. Medzi farmaceutický prijateľné soli patrí, bez toho aby sa na ne rozsah vynálezu obmedzoval, anorganické soli ako je sodná soľ, draselná soľ, vápenatá sol a podobne a organické soli s amínmi alebo organickými zásadami.

Prehľad obrázkov na výkresoch

Na obrázku 1 sú zhrnuté chemické všeobecné vzorce.

Na obrázku 2 sú znázornené niektoré výhodné zlúčeniny podľa vynálezu.

Obrázok 3 znázorňuje všeobecný postup používaný na syntézu cyklických peptidov, pri ktorom bol východiskový materiál pripravený syntézou na pevnej zásade na chlórtritylovej živici. Čísla 1 až 6 znamenajú stupeň 1 až 6.

Obrázok 4 znázorňuje vzorce Tie (1,2,3,4-tetrahydroizochinolín-3-karboxylovej kyseliny), Pyr (pyroglutámovej kyseliny) a podrobný vzorec zlúčeniny 3 z obrázku 2.

\

Obrázok 5 znázorňuje analógy íle.

Na obrázku 6 sú znázornené zlúčeniny uvádzané v príklade 1, časti 7. Čísla 1 až 6 na obrázku označujú stupeň, v ktorom bola daná zlúčenina pripravená.

Obrázok 7 znázorňuje konečné produkty uvádzané v príklade 1, častiach 17 a 16.

Na obrázku 8 sú znázornené niektoré výhodné spojovacie skupiny označované symbolom LINKER.

Na obrázku 9 sú znázornené zlúčeniny uvádzané v príklade 1, časti 22.

Na obrázku 10 sú porovnané rôzne zobrazenia rovnakého cyklického peptidu.

Obrázok 11 znázorňuje syntézu konečného produktu 11 (z tabuľky 2). Čísla 1 až 6 znamenajú stupeň 1 až 6.

Obrázok 12 znázorňuje syntézu konečného produktu 17 ( z tabuľky 2). Čísla 1 až 5 znamenajú stupeň 1 až 5.

Obrázok 13 znázorňuje niektoré výhodné spojovacie skupiny označované symbolom LINKER. Vzorce 6 až 18 sú znázornené od C-konca ku N-koncu a zvyšné vzorce obrátene.

Obrázok 14 znázorňuje vzorec Fmoc-Arg(Pmc).

Obrázok 15 znázorňuje vzorce N-MeAla a Asp(OBu^fc).

Obrázok 16 znázorňuje vzorce norleucínu (Nie), norvalínu (Nva) a cyklohexylalanínu (Cha).

Skratky používané na obrázkoch majú rovnaký význam ako v príkladoch. Ich vysvetlenie je uvedené na začiatku príkladovej časti.

Nižšie uvedená tabuľka 1 ilustruje syntézu a purifikáciu cyklických peptidov. Poznámky v hranatých zátvorkách sa týkajú časti cyklického peptidu zodpovedajúceho symbolu LINKER. V tabuľke 2 sú charakterizované cyklické peptidy. Poznámky v hranatých zátvorkách sa týkajú časti cyklického peptidu zodpovedajúceho symbolu LINKER.

Na obrázkoch a v tabuľkách označujú väzby nakreslené so šípkami iba miesta naviazania alebo priamej väzby (teda nie skupinu -CH₂~), pokiaľ nie je uvedené inak alebo pokiaľ niečo iné implicitne nevyplýva z kontextu. Znázornenie miest naviazania označených šípkami na spojovaciu skupinu je nasledujúce: atóm dusíka sa viaže na skupinu -C(0)- na C-konci zodpovedajúceho peptidu a podobne sa skupina -C(0)- viaže na atóm dusíka na N-konci zodpovedajúceho peptidu, pokiaľ nie je uvedené inak alebo pokiaľ niečo iné implicitne nevyplýva z kontextu. Na získanie podrobnejšej predstavy môžeme porovnať vzorec lineárneho prekurzora s príslušným výsledným cyklickým peptidom v tabuľke 1, a na obrázku 10 sú porovnané rôzne zobrazenia rovnakého vzorca.

Vynález ilustrujú nasledujúce príklady, ktorými sa však rozsah vynálezu v žiadnom smere neobmedzuje.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Používajú sa nasledujúce skratky:

Ac = acetyl,

Ahx = 6-aminohexánová kyselina, Boe = terc-butoxykarbonyl,

But alebo Bu^fc = terc-butyl

Cha = cyklohexylalanín,

Dab = 2,4-diaminomaslová kyselina,

Et = etyl,

Fmoc = 9-fluorenylmetoxykarbonyl,

HPLC = vysokotlaková kvapalinová chromatografia,

Me = metyl,

Nie = norleucín,

Orn = ornitín,

Pmc = 2,2,5,7,8-pentametylchroman-6-sulfonyl,

Pyr = pyroglutámová kyselina (viď obrázok 4),

Tie = 1,2,3,4-tetrahydroizochinolín-3-karboxylová kyselina, a Z = benzyloxykarbonyl.

Príklad 1

Podrobnosti syntézy zlúčenín 1 - 114 uvedených v tabuľkách a 2

Cyklické peptidy ako konečné produkty uvedené v tabuľkách 1 a 2 (systém číslovania viď tabuľka 2) sa získajú cyklizáciou zodpovedajúcich prekurzorových (všeobecne lineárnych) peptidov uvedených v tabuľke 1. (Hlavne je potrebné uvážiť, že konečná amidová väzba sa môže vytvoriť medzi ľubovoľnými aminokyselinami alebo polohami v symbole LINKER a vzniká rovnaký cyklický peptid). Všeobecný postup použitý pre jednu zo zlúčenín, c(Ile-Leu-Asp-Val-NH-(CHJ_s-CO) (zlúčenina 3, tabuľka 2) je znázornený na obrázku 3 a je podrobne opísaný nižšie. V prípade ďalších zlúčenín sú uvedené iba odchýlky od štandardného postupu.

1. Syntéza c(Ile-Leu-Asp-Val-NH-(CH₂)_s-CO) (zlúčenina 3, obrázok 3)

Tento cyklický peptid sa pripraví postupom syntézy na pevnej fáze s použitím 2-chlórtritylchloridovej živice. Po zostavení čiastočne chráneného lineárneho peptidu na živici sa peptid odštiepi od živice a použije sa v nasledujúcich stupňoch bez akéhokoľvek čistenia. Výsledný produkt sa pred charakterizáciou dôkladne purifikuje pomocou vysokotlakovej kvapalinovej chromatografie (HPLC) s obrátenými fázami.

1.1 Príprava c(Ile-Leu-Asp-Val-NH-(CH__s)_s-CO) (zlúčenina 3) (stupeň 6, obrázok 3)

Na 125 mg (0,2 mmol) chráneného cyklického peptidu c(Ile-Leu-Asp(0Bu‘^t)-Val-NH-(CH_;2)_s-C0) sa počas 30 minút pôsobí 15 ml zmesi kyseliny trifluóroctovéj a vody v pomere 95 : 5 a 200 μΐ triizopropylsilánu na odstránenie ochrannej skupiny z postranného reťazca kyseliny asparágovej. Odparením na malý objem a nasledujúcou trituráciou s éterom sa získa 75 mg surového cyklického peptidu. Tento surový produkt sa vyčistí preparatívnou vysokotlakovou kvapalinovou chromatografiou s obrátenými fázami na kolóne Vydac 218TP1022 s použitím gradientovej elúcie zmesí 15 - 55 % acetonitrilu a vody s obsahom 0,1 % kyseliny trifluóroctovéj počas 65 minút s rýchlosťou prietoku 10,0 ml za minútu. Frakcie obsahujúce produkt sa zmiešajú a vysušia vymrazením a vzniká 50 mg purifikovaného cyklického peptidu. Tento peptid (vykazujúci pri vysokotlakovej kvapalinovej chromatografii jediný pík, retenčný čas 18,03 minút na kolóne Novapak C s použitím gradientovej elúcie zmesí 10 - 60 % acetonitrilu a vody s obsahom 0,1 % kyseliny trifluóroctovej počas 30 minút s rýchlosťou prietoku 1,0 ml za minútu) sa charakterizuje aminokyselinovou analýzou a hmotnostnou spektroskopiou (viď tabuľka 2).

Chránený cyklický peptid používaný ako východiskový materiál sa pripraví nasledovne:

1.2 Príprava Fmoc-NH(CH₂)_s-COO-chlórtritylživica (stupeň 1, obrázok 3) g 2-chlórtritylchloridovej živice (Nová Biochem,

1,6 mml Cl/g) sa nechá napučiavať v 10 ml dichlórmetánu (vysušeného s použitím molekulárneho sita) počas 5 minút.

Pridá sa roztok 355 mg (1 mmol) Fmoc-NH-(CH₂)_s-COOH a 560 μΐ (3,2 mmol) diizoropyletylamínu v 5 ml dichlórmetánu a suspenzia sa mechanicky trepe počas 45 minút. Pridá sa 9 ml metanolu a 1 ml diizopropyletylamínu a v trepaní sa pokračuje počas ďalších 5 minút. Živica sa izoluje filtráciou a premyje sa postupne dichlórmetánom, dimetylformamidom, dichlórmetánom, izopropanolom a éterom, a nakoniec sa vysuší pri teplote 50 ‘C vo vákuovej sušiarni. Hmotnost produktu predstavuje 1, 33 g.

1.3 Príprava Ile-Leu-Asp(OBu^fc)-Val-NH(CH ) -COO-chlórtritylži2 5 vica (stupne 2 a 3, obrázok 3)

Vyššie uvedená živica sa umiestni do reakčnej nádoby vybavenej doštičkou zo spečeného skla. Potom sa manuálne uskutoční nasledujúca séria reakcií na získanie požadovanej peptidyl-živice:

(a) Odstráni sa skupina Fmoc dvoma reakciami s 20 % piperidínom v dimetylformamide (raz počas 5 minút a raz počas 15 minút) , potom sa zmes päťkrát premyje dimetylformamidom na odstránenie nadbytočných reakčných činidiel a produktov ktoré vznikli štiepením.

(b) Uskutočňuje sa acylácia 678 mg (2 mmol) Fmoc-Val aktivovaného 760 mg (2 mmol) 0-(benzotriazol-l-yl)-l,1,3,3-tetrametylurónium-hexafluórfosfátu (HBTU) a 700 μΐ (4 mmol) diizopropyletylamínu v 4 ml dimetylformamide počas 1 hodiny. Živica sa znova päťkrát premyje dimetylformamidom na odstránenie nadbytočných reakčných činidiel.

Vyššie uvedené cykly deprotekcie a kondenzácie sa opakujú s použitím 822 mg (2 mmol) Fmoc-Asp(0Bu^fe)-OH, 700 mg (2 mmol) Fmoc-Leu-OH a 700 mg (2 mmol) Fmoc-Ile-OH, čím sa získa Fmoc-Ile-Leu-AspfQBu*¹ )-Val-NH(CH_a)_s-COO-chlórtritylživica. N-koncová skupina Fmoc sa odštiepi (stupeň 3) 20 % piperidínom v dimetylformamide (raz 5 minút a raz 15 minút) a peptidyl-živica Ile-Leu-Asp(OBu^t)-Val-NH(CH ) -COO-chlórtritylživica sa

5 postupne premyje dimetylformamidom, dichlórmetánom a éterom a vysuší sa vo vákuovej sušiarni pri teplote 50 ’C. Výťažok predstavuje 1,51 g.

1.4 Príprava hydrochloridu Ile-Leu-Asp(QBu^t)-Val-NH(CH₂)_s-COOH (stupeň 4, obrázok 3)

Peptidyl-živice Ile-Leu-Asp(OBú^t)-Val-NH(CH ) -COO-chlór2 5 tritylživice sa suspenduje v 25 ml zmesi kyseliny octovej, trifluóretanolu a dichlórmetánu v pomere 2:2 : 6 počas hodín. Živica sa odstráni filtráciou a premyje sa vyššie uvedenou zmesou rozpúšťadiel. Zmiešané filtráty sa odparia a živica sa trituruje s éterom, čím sa získa Ile-Leu-AspfOBu^)-Val-NH(CH₂)_s-COOH vo forme acetátu (428 mg).

Hmotnostná spektroskopia: [M+HJ* 628,4; [M+Na]* 650,5.

Acetát sa potom zmení na hydrochlorid tak, že sa rozpustí v 60 ml zmesi vody a acetonitrilu v pomere 2 : 1, zmes sa ochladí na teplotu 0 ’C, pridá sa 1,05 ekvivalentov IN kyseliny chlorovodíkovej a obsah sa vysuší vymrazením.

1.5 Príprava c(Ile-Leu-AspíOBu^J-Val-NH-fCH ) -CO) (stupeň 5,

5 obrázok 3)

Časť vyššie uvedeného hydrochloridu lineárneho peptidu, Ile-Leu—Asp (OBu^) —Val-NH (CH,,) ₅~COOH. HC1 (190 mg; 0,288 mmol) sa rozpustí v 300 ml dimetylformamidu a k tomuto roztoku sa pridá 109 mg (0,288 mmol) 0-(benzotriazol-l-yl)-l,l,3,3-tetrametylurónium-hexafluórfosfátu (HBTU), 45 mg (0,288 mmol)

1-hydroxybenzotriazolu a 117 μΐ (0,86 mmol) diizopropyletylamínu. Reakčná zmes sa mieša počas 3 hodín pri teplote miestnosti a potom sa odparí do sucha vo vákuu. Zvyšok sa roztrepe medzi etylacetát a vodu. Organická vrstva sa postupne premyje IM kyselinou citrónovou, nasýteným roztokom chloridu sodného, 10 % roztokom hydrogénuhličitanu sodného a nasýteným roztokom chloridu sodného, vysuší sa nad síranom horečnatým a zahustí do sucha vo vákuu. Produkt sa izoluje a vysuší nad zmesou oxidu fosforečného a hydroxidu draselného, čím sa získa

125 mg surového produktu (retenčný čas 20,71 minút na kolóne Vydac 218TP54 s použitím gradientovej elúcie zmesí 20 - 80 % acetonitrilu a vody s obsahom 0,1 % kyseliny trifluóroctovej počas 30 minút pri rýchlosti prietoku 1,0 ml za minútu), ktorý sa použije v poslednom stupni (viď bod 1.1) bez akéhokoľvek čistenia.

2. Syntézy zlúčenín 1, 2 a 4

Tieto tri zlúčeniny sa syntetizujú spôsobom použitým v prípade zlúčeniny 3 s tým rozdielom, že sa na 2-chlórtritylchloridovú živicu namiesto Fmoc-NH(CH₂)_s-COOH použitú v prípade zlúčeniny 3 najskôr napojí Fmoc-NH(CH₂)₃~C00H (na získanie zlúčeniny 1), Fmoc-NH(CH₂)₄-C00H (na získanie zlúčeniny 2) a Fmoc-NH(CH₂)_?-COOH (na získanie zlúčeniny 4).

3. Syntézy zlúčeniny 5-10

Tieto zlúčeniny sa syntetizujú spôsobom použitým v prípade zlúčeniny 3 s tým rozdielom, že sa namiesto Fmoc-Ilepoužijú Fmoc-fi-Ile (na získanie zlúčeniny 5), Fmoc-Q-Leu ( na získanie zlúčeniny 6), Fmoc-Pro (na získanie zlúčeniny 7), Fmoc-Gly (na získanie zlúčeniny 8), Fmoc-terc-butylglycín (na získanie zlúčeniny 9) alebo Fmoc-terc-butylalanín (na získanie zlúčeniny 10). Vzorce terc-butylglycínu (terc-leucínu) a tercbutylalanínu (neopentylglycínu) sú znázornené na obrázku 5.

4. Syntéza zlúčeniny 11

Postup použitý pre syntézu zlúčeniny 11 je znázornený na obrázku 11.

4.1 Syntéza zlúčeniny

Ile-Leu-Asp-Val-NH (stupeň 6, obrázok 11) [D-Lys-analóg]

Surový cyklický peptid použitý ako východiskový materiál sa rozpustí v 20 ml zmesi kyseliny trifluóroctovej a vody v pomere 95 : 5 a po pridaní 200 μΐ triizopropylsilánu sa zmes mieša pri teplote miestnosti počas 30 minút. Rozpúšťadlo sa odparí vo vákuu a surový produkt sa vyčistí vysokotlakovou kvapalinovou chromatografiou s obrátenými fázami, čím sa získa požadovaný konečný produkt, s výťažkom 28 mg.

Surový cyklický peptid použitý ako východiskový materiál sa pripraví nasledovne:

4.2 Príprava Z-D-Lys(Fmoc)-Ile-Leu-Asp(OBu^fe)-Val-chlórtritylživica (stupeň 1, obrázok 11)

Z-β-Lys(Fmoc)-Ile-Leu-Asp-Val sa zostaví na chlórtrityl-živici podobným postupom ako je opísaný vyššie pre Ile-Leu-AsptOBu^)-Val-NH(CH ) -COO-chlórtrityl-živicu používanú pri syntéze zlúčeniny 3, s tým rozdielom, že sa živica najskôr podrobí reakcii s Fmoc-Val namiesto Fmoc-NH(CH₂)_s-COOH.

4.3 Príprava hydrochloridu Z-D-Lys-Ile-Leu-Asp(OBu^)-Val (stupne 2 a 3, obrázok 11)

Podobným postupom ako je opísaný vyššie na prípravu hydrochloridu Ile-Leu-Asp(OBu^e)-Val-NH(CH__s)_s-COOH sa Z-D-Lys(Fmoc)-Ile-Leu-Asp(OBu^fc)-Val-chlórtrityl—živica najskôr podrobí reakcii s piperidínom na odštiepenie skupiny Fmoc a peptid sa potom odštiepi zo živice, čím sa získa Z-D-Lys-Ile-Leu-AspíOBu^)-Val, ktorý sa zmení na hydrochlorid.

4.4 Príprava zlúčeniny

Z (stupeň 4, obrázok 11)

Ile-Leu-AsptOBuQ-VaT^NH [D-Lys-analóg]

236 mg (0,291 mmol) hydrochloridu lineárneho peptidu sa rozpustí v 350 ml dimetylformamide, pridá sa 110,5 mg (0,291 mmol) 0-(benzotriazol-l-yl)-1,1,3,3-tetrametylurónium-hexafluórfosfátu (HBTU), 39,3 mg (0,291 mmol) 1-hydroxybenzotriazolu (HOBt) a 152 μΐ (0,873 mmol) diizopropyletylamínu a reakčná zmes sa mieša počas 2 hodín pri teplote miestnosti. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa roztrepe medzi etylacetát a vodu. Organická fáza sa premyje IN kyselinou citrónovou, nasýteným roztokom chloridu sodného, 10 % vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného a nasýteným roztokom chloridu sodného. Organická fáza sa vysuší nad síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Surový produkt (retenčný čas 25,24 minúty na kolóne Vydac s použitím gradientovej elúcie 20 - 80 % acetonitrilom vo vode počas 30 minút) sa použije v nasledujúcom stupni bez ďalšieho čistenia.

4.5 Syntéza zlúčeniny (stupeň 5, obrázok 11)

157 mg (0,207 mmol) surového cyklického peptidu sa rozpustí v zmesi 40 ml etanolu, 6 ml vody a 10 ml kyseliny octovej a pridá sa paládium na uhlí (asi 200 mg). Miešanou reakčnou zmesou sa nechá potom prebublávať vodík počas 2 hodín, na odštiepenie N-koncovej benzyloxykarbonylovej skupiny. Katalyzátor sa odstráni filtráciou a filtrát sa odparí do sucha. Ku zvyšku, rozpustenému v 10 ml dimetylformamidu, sa pridá nadbytok acetanhydridu a roztok sa nechá stáť pri teplote miestnosti počas 16 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a zvyšok sa izoluje z éteru, premyje sa éterom a použije sa v stupni 6 (viď 4.1).

5. Syntézy zlúčenín 12, 13 a 14

Všetky tieto zlúčeniny sa pripravia podobnými postupmi ako sú opísané vyššie v prípade zlúčeniny 11. Vzorce zodpovedajúcich lineárnych peptidov zostavených na živici sú uvedené v tabuľke 1.

6. Syntéza zlúčeniny 15

Zlúčenina 15 sa syntetizuje spôsobom použitým pre zlúčeninu 3, s tým rozdielom, že sa na 2-chlórtritylchloridovú živicu namiesto Fmoc-NH(CH₂)_s-COOH použitú v prípade zlúčeniny 3 najskôr naviaže N-Fmoc-aminometylbenzoová kyselina.

7. Syntéza zlúčeniny 16 (obrázok 6)

7.1 Príprava cyklického peptidu 16 (stupeň 6, obrázok 6)

Lineárny peptid použitý ako východiskový materiál sa cyklizuje a odstráni sa z neho ochranná skupina postupmi opísanými vyššie pre prípravu c(Ile-Leu-Asp-Val-NH-(CH₂)_s-CO) v zodpovedajúcich stupňoch v príklade 1 (zlúčenina 3), čím sa získa výsledný cyklický peptid ako konečný produkt (zlúčenina

16) .

Lineárny peptid použitý ako východiskový materiál sa pripraví nasledovne:

7.2 Príprava N*-Boc-histamínu (stupeň 1, obrázok 6)

K roztoku 10 g (54,3 mmol) histamín-dihydrochloridu a 15, ml (109 mmol) trietylamínu v 100 ml metanolu sa za miešania počas 15 minút pridá 24 g (110 mmol) diterc-butyldikarbonátu v 50 ml metanolu. Zmes sa mieša pri teplote miestnosti počas hodín, rozpúšťadlo sa odstráni odparením a zvyšok sa roz40 trepe medzi dichlórmetán a vodu. Organická fáza sa dvakrát premyje IM roztokom kyseliny citrónovej a nasýteným roztokom chloridu sodného, vysuší sa nad síranom horečnatým a odparí, získa sa pevná látka. Prekrystalizovanim z etylacetátu sa získa 12,99 g (76 %) H* ,H^r-Boc-histamínu s teplotou topenia 125 - 126 ’C. Pri chromatografii na tenkej vrstve na silikagélových doskách sa vytvorí jediná škvrna.

R^f: 0,25 v zmesi etylacetátu a izohexánu v pomere 1:1a 0,62 v zmesi metanolu a chloroformu v pomere 1:9.

K roztoku 8,3 g (26,7 mmol) N^x, N^-Boc-histamínu v 150 ml metanolu sa pridá 1 ml diizopropyletylamínu a roztok sa mieša pri teplote miestnosti počas 24 hodín. Rozpúšťadlo sa odstráni odparením a zvyšok sa vyzráža zo zmesi etylacetátu a izohexánu. Výťažok predstavuje 5,46 g (97 %), teplota topenia produktu je 93 - 95 ’C. Pri chromatografii na tenkej vrstve na silikagélových doskách sa vytvorí jediná škvrna.

R^£: 0,53 v zmesi acetonitrilu a vody v pomere 3 : 1, 0,23 v zmesi metanolu a chloroformu v pomere 1 : 9 a 0,73 v zmesi chloroformu, metanolu a vody v pomere 55 : 40 :

10.

7.3 Príprava zlúčeniny

Boe—NHCH₂-CH

CH₂COOC(CH₃)₃ (stupeň 2, obrázok 6)

K miešanému roztoku 2,5 g (11,8 mmol) N*-Boc-histamínu a 2,06 ml (11,8 mmol) diizopropyletylamínu v 50 ml dichlórmetánu sa pridá 2,31 g (11,80 mmol) terc-butyl-brómacetátu v 6 ml dichlórmetánu. V miešaní sa pokračuje počas 24 hodín pri teplote miestnosti. Pridá sa ďalších 200 ml dichlórmetánu a roztok sa premyje IM roztokom kyseliny citrónovej a nasýteným roztokom chloridu sodného, vysuší sa nad síranom horečnatým a odparí do sucha. Zvyšný olej sa použije v nasledujúcom stupni bez ďalšieho čistenia.

7.4 Príprava zlúčeniny

(stupeň 3, obrázok 6)

Vyššie uvedený imidazolový derivát sa rozpustí v 100 ml zmesi kyseliny trifluóroctovej a vody v pomere 95 : 5 s obsahom 1 ml triizopropylsilánu a zmes sa nechá stáť pri teplote miestnosti počas 90 minút. Rozpúšťadlo sa odstráni odparením pri zníženom tlaku a zostávajúci olej sa trituruje s éterom a vysuší sa vo vysokom vákuu nad oxidom fosforečným a hydroxidom draselným, čím sa získa 3,9 g pevnej látky.

Hmotnostné spektroskopia: (M+H)* 170

Pri chromatografii na tenkej vrstve na silikagélových doskách sa vytvorí jediná škvrna.

R^£: 0,35 v zmesi acetonitrilu a vody v pomere 3 : 1 a 0,37 v zmesi chloroformu, metanolu a vody v pomere 55 : 40 : 10.

3,9 g (14 mmol) imidazolového derivátu, z ktorého bola odštiepená ochranná skupina sa rozpustí v 50 ml vody, 30 ml acetónu a 30 ml IM uhličitanu sodného a roztok sa ochladí v ľadovom kúpeli. Počas 20 minút sa za miešania po kvapkách pridá 4,76 g 9-fluorenylmetyl-H-hydroxysukcínimidu v 30 ml acetónu, pričom sa pH udržiava na hodnote 9 pridávaním IM roztoku uhličitanu sodného, a v miešaní sa pokračuje cez noc. Acetón sa odstráni odparením, vodný roztok sa okyslí IM hydrogénsíranom draselným a produkt sa extrahuje etylacetátom. Organická fáza sa premyje vodou a nasýteným roztokom chloridu sodného, vysuší sa nad síranom horečnatým a odparí za vzniku oleja. Trituráciou s éterom a zmesou éteru a izohexánu sa získa 3,66 g (66 %) pevnej látky.

Hmotnostná spektroskopia: (M+H)* 392

7.5 Príprava zlúčeniny lle-Leu-Asp(OBut)-Val—NHCH -CH

CH₂COOH

(stupne 4 a 5, obrázok 6)

K 2 g 2-chlórtritylchloridove j živice (Nová Biochem.) nabobtnalej v 25 ml dichlórmetánu sa pridá 782 mg (2 mmol) uvedeného Fmoc-histamínového derivátu v 10 ml dichlórmetánu a 1,05 ml (6 mmol) diizopropyletylamínu a reakčná zmes sa mierne trepe počas 75 minút. Pridá sa 20 ml 10 % roztoku diizopropyletylamínu a v trepaní sa pokračuje počas 15 minút. Živica sa odfiltruje, premyje sa postupne dichlórmetánom, dimetylformamidom, dichlórmetánom, metanolom a éterom a suší sa pri teplote 50 ’ C vo vákuovej sušiarni počas 16 hodín. Výťažok predstavuje 2,16 g.

Vyššie uvedená živica sa umiestni do reakčnej nádoby vybavenej doštičkou zo spečeného skla a pomocou štandardných postupov sa na živici syntetizuje tetrapeptid (viď zodpovedajúce stupne v príklade 1 na živica odštiepi, čím sa získa

8. Syntéza zlúčeniny 17 prípravu zlúčeniny 3). Potom sa požadovaný lineárny peptid.

Postup syntézy zlúčeniny 17 je znázornený na obrázku 12.

8.4 Syntéza zlúčeniny 17 (stupeň 5, obrázok 12)

Lineárny peptid použitý ako východiskový materiál sa cyklizuje a odstráni sa z neho ochranná skupina postupmi opísanými vyššie na prípravu c(Ile-Leu-Asp-Val-NH-(CH₂)_s-CO) v zodpovedajúcich stupňoch v príklade 1 (zlúčenina 3), čím sa získa výsledný cyklický peptid ako konečný produkt (zlúčenina 17).

8.1 Syntéza zlúčeniny 17 (stupeň 1, obrázok 12) (CH₃)₃COCO-N N-CH₂-COOC(CH₃)₃

K roztoku 4,65 g (25 mmol) terc-butyl-l-piperazin-karboxylátu a 3,5 ml (25 mmol) trietylamínu v 30 ml dichlórmetánu sa pridá 4,88 g (25 mmol) terc-butyl-brómacetátu v 50 ml dichlórmetánu. Reakčná zmes sa mieša cez noc, sfiltruje sa, čím sa odstránia pevné látky ktoré sa oddelili cez noc a filtrát sa odparí do sucha. Zvyšok sa roztrepe medzi etylacetát a vodu, organická vrstva sa potom premyje vodou, vysuší sa nad síranom horečnatým a odparí sa do sucha. Zvyšok sa vykryštalizuje zo zmesi éteru a izohexánu, čím sa získa 5,66 g (75 %) produktu s teplotou topenia 99 - 100 ’C.

Elementárna analýza pre C H N 0 :

-* ^r 15 28 2 4 vypočítané: 60,0 % C, 9,4 % H, 9,33 % N , nájdené : 59,8 % C, 9,6 % H, 9,1 % N.

R^£: 0,38 v zmesi etylacetátu a izohexánu v pomere 1:1a

0,68 v zmesi metanolu a chloroformu v pomere 1 : 9

8.2 Syntéza zlúčeniny 17 (stupeň 2, obrázok 12)

Fmoc—N N-CH₂-COOH

Na 5 g (16/6 mmol) zlúčeniny opísanej v časti 8.1 sa nechá počas 1 hodiny pôsobiť 50 ml zmesi kyseliny trifluóroctovej a vody v pomere 95 : 5. Kyselina sa odstráni odparením vo vákuu a olej ktorý zostane sa trituruje s éterom, čím sa získa pevná látka, ktorá sa odfiltruje, premyje sa éterom a vysuší sa nad oxidom fosforečným a hydroxidom draselným vo vákuu. Získa sa 6,25 g pevnej látky s teplotou topenia 177 až 182 ’C. Táto pevná látka sa potom rozpustí v 150 ml zmesi vody a acetónu v pomere 1 : 1 s obsahom 6,92 g (3 ekvivalenty) uhličitanu draselného. Počas 20 minút sa za miešania pridá 5,66 g (16,7 mmol) 9-fluorenylmetyl-JI-hydroxysukcínimidu v 30 ml acetónu. Hodnota pH roztoku sa udržiava na približne 9 pridávaním IM roztoku uhličitanu draselného. Zmes sa mieša cez noc pri teplote miestnosti, potom sa acetón odstráni odparením vo vákuu a vodný roztok sa okyslí roztokom hydrogénsíranu draselného. Produkt sa extrahuje etylacetátom a roztok sa premyje šesťkrát vodou a potom nasýteným roztokom chloridu sodného. Organická vrstva sa vysuší nad síranom horečnatým a odparí sa, čím sa získa olej, ktorý stuhne trituráciiou s izohexánom a éterom. Výťažok predstavuje 3,72 g (60 %). Vzorka tejto látky sa prekryštalizuje zo zmesi etanolu a éteru, teplota topenia predstavuje 179 - 182 ’C.

Hmotnostná spektroskopia: (M+H)* 367

8.3 Syntéza zlúčeniny 17 (stupňa 3 a 4, obrázok 12)

D-Leu-Leu-Asp(OBut)-Val—N N-CH₂COOH

K 1 g 2-chlórtritylchloridovej živice (Nová Biochem.) sa pridá 366 mg (1 mmol) uvedeného Fmoc-piperazínového derivátu v ml dichlórmetánu a 525 μΐ (3 ekvivalenty) diizopropyletylamínu a reakčná zmes sa mierne trepe počas 75 minút. Pridá sa ml 10 % roztoku diizopropyletylamínu a v trepaní sa pokračuje počas 10 minút. Živica sa odfiltruje, premyje sa postupne dichlórmetánom, dimetylformamidom, dichlórmetánom a éterom a vysuší sa pri teplote 50 ’C vo vákuovej sušiarni. Výťažok predstavuje 1,13 g.

Vyššie uvedená živica sa umiestni do reakčnej nádoby vybavenej doštičkou zo spečeného skla. Potom sa manuálne vykoná nasledujúca séria reakcií, čím sa získa požadovaná peptidyl-živica:

(a) Odstráni piperidínom 15 minút) a odstránenie vzniknutých sa skupina Fmoc dvoma v dimetylformamide (raz počas potom sa zmes päťkrát premyje nadbytočných reakčných štiepením.

reakciami s 20 % minút a raz počas dimetylformamidom na činidiel a produktov (b) Uskutočňuje sa acylácia 678 mg (2 mmol) Fmoc-Val aktivovaného 760 mg (2 mmol) 0-(benzotriazol-l-yl)-l,1,3,3-tetrametylurónium-hexafluórfosfátu (HBTU) a 700 μΐ (4 mmol) diizopropyletylamínu v 4 ml dimetylformamidu počas 1 hodiny. Živica sa znova päťkrát premyje dimetylformamidom na odstránenie nadbytočných reakčných činidiel.

Vyššie uvedené cykly deprotekcie a kondenzácie sa opakujú s použitím 822 mg (2 mmol) Fmoc-Asp (OBu*¹)-OH, 700 mg (2 mmol) Fmoc-Leu-OH a 700 mg (2 mmol) Fmoc-D-Leu-OH, čím sa získa chránený tetrapeptid naviazaný na chlórtrityl-živicu (stupeň

3). N-koncová skupina Fmoc sa odštiepi 20 % piperidínom v dimetylformamide (raz 5 minút a raz 15 minút) a peptidyl-živica sa postupne premyje dimetylformamidom, dichlórmetánom a éterom a vysuší sa vo vákuovej sušiarni pri teplote 50 ’C.

Peptidyl-živica sa suspenduje počas 2 hodín v 25 ml zmesi kyseliny octovej, trifluóretanolu a dichlórmetánu v pomere 2 : 2:6. Živica sa odstráni filtráciou a premyje sa vyššie uvedenou zmesou rozpúšťadiel. Zmiešané filtráty sa odparia a zvyšok sa trituruje s éterom, čím sa získa lineárny tetrapeptid vo forme acetátu. Tento acetát sa potom zmení na hydrochlorid rozpustením v 60 ml zmesi vody a acetonitrilu v pomere 2:1, ochladením na teplotu 0 ‘C, pridaním 1,05 ekvivalentu IN kyseliny chlorovodíkovej a vysušením obsahu vymrazením.

9. Syntézy zlúčeniny 18 a 19

Obidve tieto zlúčeniny sa syntetizujú postupmi opísanými vyššie v prípade zlúčeniny 17. Lineárne peptidy (ich štruktúry sú znázornené v tabuľke 1) sa cyklizujú a odstránia sa z nich ochranné skupiny pomocou postupov opísaných vyššie na prípravu c(Ile-Leu-Asp-Val-NH-(CH₂)_s-CO) v zodpovedajúcich stupňoch v príklade 1 (zlúčenina 3), čím sa získajú výsledné cyklické peptidy ako konečné produkty (zlúčeniny 18 a 19).

10. Syntézy zlúčenín 20 až 27

Všetky tieto zlúčeniny sa pripravia podobnými postupmi ako sú opísané vyššie pre zlúčeninu 11 (obrázok 11). Vzorce zodpovedajúcich lineárnych peptidov pripravených na živici sú znázornené v tabuľke 1.

11. Syntézy zlúčenín 28 až 38

Tieto zlúčeniny sa syntetizujú postupom použitým na prípravu zlúčeniny 3 (obrázok 3).Prvou aminokyselinou na živici je v prípade zlúčenín 30 - 32 aminohexánová kyselina a v prípade zlúčeniny 28-29 a 33 - 38 aminovalérová kyselina. Požadované lineárne peptidy, ktorých aminokyselinové sekvencie sú znázornené v tabuľke 1, sa pripravia náhradou zvyškov íle alebo Val v zlúčenine 3 aminokyselinou prítomnou v zodpovedajúcej polohe v zlúčeninách 28 - 38. Vzorce neprirodzených aminokyselín (E-Me-Ala, Jí-Me-Ile, terc-butylglycínu (terc-leucínu) a terc-butylalanínu (neopentylglycínu) sú znázornené na obrázkoch 5 a 15.

12. Syntézy zlúčenín 39 a 40

Zlúčenina 40 sa pripraví podobným postupom ako je opísaný vyššie v prípade prípravy zlúčeniny 11 (obrázok 11). Na získanie zlúčeniny 39 sa postupom opísaným na zodpovedajúci stupeň v prípade zlúčeniny 11 odštiepi N-koncová benzyloxykarbonylová skupina.

13. Syntéza zlúčeniny 41

Spôsobom použitým na syntézu zlúčeniny 11 (obrázok 11) sa syntetizuje čiastočne chránený cyklický peptid obsahujúci na N-konci aminoskupinu, ktorého vzorec je uvedený nižšie. Tento peptid sa používa na syntézu zlúčeniny 14.

NH

ⁿ-lle-Leu-Asp(OBut)-Vaí _H g [D-Lys-analóg]

K roztoku 80 mg (0,141 mmol) vyššie uvedeného peptidu v 7 ml dimetylformamidu sa pridá 72 μΐ (0,563 mmol) anhydridu kyseliny propiónovej. Zmes sa mieša cez noc pri teplote miestnosti, potom sa rozpúšťadlo odparí vo vákuu a zvyšok sa vyčistí vysokotlakovou kvapalinovou chromatografiou, čím sa získa požadovaný peptid 41.

14. Syntézy zlúčenín 42 a 43

Obidve tieto zlúčeniny sa syntetizujú rovnakým spôsobom a s použitím rovnakého množstva intermediárneho peptidu ako je opísané vyššie v prípade prípravy zlúčeniny 41. Namiesto anhydridu kyseliny propiónovej sa v prípade zlúčeniny 42 použije 56,3 mg (0,564 mmol) anhydridu kyseliny jantárovej a v prípade zlúčeniny 43 potom 105 mg (0,564 mmol) anhydridu kyseliny izovalérovej.

15. Syntéza zlúčeniny 44

Čiastočne chránený cyklický peptid použitý na syntézu zlúčeniny 44, ktorého vzorec je uvedený nižšie, sa syntetizuje rovnakým spôsobom ako je opísaný pre zlúčeninu 11 (obrázok 11), s tým rozdielom, že sa namiesto Fmoc-Ile použije Fmoc-Q-Leu.

NH

>\^D-Leu-Leu-Asp(OBut) q [D-Lys-analóg]

100 mg (0,16 mmol) vyššie uvedeného peptidu sa rozpustí v 5 ml dimetylformamidu, pridá sa 50 mg (0,16 mmol) Fmoc-B-Ala, 60,7 mg (0,16 mmol) 0-(benzotriazol-l-yl)-1,1,3,3-tetrametylurónium-hexafluórfosfátu (HBTU), 22 mg (0,16 mmol) 1-hydroxybenzotriazolu (HOBt) a 83 μΐ (0,48 mmol) diizopropyletylamínu a reakčná zmes sa mieša počas 16 hodín pri teplote miestnosti. Rozpúšťadlo sa odparí vo vákuu, zo surového peptidu sa odstránia ochranné skupiny (ako skupina Fmoc tak aj OBu^fc) a vyčistí sa pomocou štandardných spôsobov, čím sa získa zlúčenina 44.

16. Syntéza zlúčeniny 45

100 mg prekurzorového cyklického peptidu (z ktorého bola na N-konci odštiepená ochranná skupina) sa rozpustí v 5 ml dimetylformamidu a pridá sa 9 μΐ acetaldehydu. Zmes sa mieša pri teplote miestnosti počas 5 minút, potom sa pridá 11,1 mg nátriumkyanborohydridu a kvapka kyseliny octovej a v miešaní sa pokračuje počas 30 minút. Rozpúšťadlo sa odstráni odparením a surový produkt sa odblokuje (na odštiepenie terc-butylovej esterovej skupiny z Asp) a vyčistí sa vysokotlakovou kvapalinovou chromatografiou.

17. Syntéza zlúčeniny 46

120 mg prekurzorového cyklického peptidu (z ktorého bola na N-konci odštiepená ochranná skupina) sa rozpustí v 10 ml dimetylformamidu a pridá sa 20 μΐ benzaldehydu. Zmes sa mieša pri teplote miestnosti počas 5 minút, potom sa pridá 11,1 mg nátriumkyanborohydridu a kvapka kyseliny octovej a v miešaní sa pokračuje počas 30 minút. Rozpúšťadlo sa odstráni odparením a surový produkt sa odblokuje (na odštiepenie terc-butylovej esterovej skupiny z Asp) a vyčistí sa vysokotlakovou kvapalinovou chromatografiou.

18. Syntézy zlúčenín 47, 48 a 49

Tri vyššie uvedené zlúčeniny sa syntetizujú rovnakým spôsobom a s použitím rovnakého čiastočne chráneného peptidového medziproduktu ako je opísaný vyššie v prípade zlúčeniny 44. Namiesto Boc-Ô-Ala sa pre zlúčeniny 47, 48 a 49 použije 3-pyridyloctová kyselina, Fmoc-Glu(OBu'^t) respektíve pyroglutámová kyselina.

19. Syntézy zlúčenín 50 - 53

Štyri vyššie uvedené zlúčeniny sa syntetizujú spôsobom použitým pre zlúčeninu 3, s tým rozdielom, že sa na 2-chlórtritylchloridovú živicu namiesto Fmoc-NH(CH₂)_s-COOH použitú v prípade zlúčeniny 3 najskôr naviaže Fmoc-NH(CH₂)₂~C00H (v prípade zlúčeniny 50), Fmoc-NH(CH₂)₄~C00H (v prípade zlúčeniny 51), Fmoc-NH(CH₂)_s-COOH (v prípade zlúčeniny 52) a

Fmoc-NH(CH₂)^-COOH (v prípade zlúčeniny 53). Na živici sa potom zostavia lineárne peptidy, ktorých sekvecie sú uvedené v tabuľke 1, a požadované cyklické peptidy sa získajú pomocou štandardných; postupov. V koncovom stupni odblokovania sa odstránia ochranné skupiny ako z Glu(0Bu^fe) tak aj AspfOBu^) v postrannom reťazci.

20. Syntéza zlúčeniny 54

Zlúčenina 54 sa syntetizuje postupom použitým v prípade zlúčeniny 3, s tým rozdielom, že sa na 2-chlórtritylchloridovú živicu namiesto Fmoc-NH(CH₂)_s-COOH použitú v prípade zlúčeniny 3 najskôr naviaže Fmoc-NH(CH₂)₂-S-CH₂~COOH. Na živici sa potom zostaví lineárny peptid, ktorého sekvencia je uvedená v tabuľke 1, a požadovaný cyklický peptid sa získa pomocou štandardných postupov.

Vyššie použitá Fmoc-NH(CH₂)^-S-CH^-COOH sa získa z

2-aminoetántiolu a 2-brómoctovej kyseliny. 5,68 g (50 mmol)

2-aminoetántiol-hydrochloridu sa rozpustí v 200 ml vody a pridá sa 25,2 g (300 mmol) hydrogénuhličitanu sodného. K takto pripravenému roztoku sa za miešania počas 30 minút po častiach pridá 6,95 g (50 mmol) kyseliny 2-brómoctovej rozpustenej v 100 ml acetonitrilu. Po 1 hodine pri teplote miestnosti sa pridá roztok 16,85 g (50 mmol) 9-fluorenyImety1-N-hydroxysukcínimidu (Fmoc-OSu) v 150 ml acetonitrilu a v miešaní sa pokračuje počas 16 hodín. Mierne zakalený roztok sa odparí, čím sa odstráni väčšina acetonitrilu, a zvyšný vodný roztok sa extrahuje trikrát vždy 50 ml etylacetátu a okyslí sa na pH 2 pridaním kyseliny chlorovodíkovej. Biela pevná látka sa izoluje, premyje sa vodou a vysuší sa vo vákuu pri teplote 45 ’C. Výťažok predstavuje 17 g (95 %).

Hmotnostná spektroskopia: (M+H)* 358,0

21. Syntézy zlúčenín 55 a 56

Obidve tieto zlúčeniny sa syntetizujú spôsobom opísaným pre zlúčeninu 3, s tým rozdielom, že sa na 2-chlórtritylchloridovú živicu namiesto Fmoc-NH(CH₂)_s~COOH použitú v prípade zlúčeniny 3 najskôr naviaže Fmoc-NH(CH_a)_a-COOH. Zostavia sa lineárne peptidy, ktorých sekvencie sú uvedené v tabuľke 1, a cyklické peptidy sa získajú pomocou štandardných postupov.

22. Syntéza zlúčeniny 57

266 mg zlúčeniny 54, cyklického peptidu použitého ako východisková látka sa rozpustí v 50 ml zmesi vody a acetonitrilu v pomere 1 : 1 a k miešanému roztoku sa v piatich rovnakých častiach počas piatich dní pridá 150 μΐ peroxidu vodíka. Rozpúšťadlo sa potom odstráni odparením a zvyšok sa vyčistí vysokotlakovou kvapalinovou chromatografiou, čím sa získa 140 mg produktu.

23. Syntéza zlúčeniny 58

Zlúčenina 58 sa syntetizuje postupom použitým v prípade zlúčeniny 3, s tým rozdielom, že sa na 2-chlórtritylchloridovú živicu namiesto Fmoc-NH(CH₂)_s-COOH použitú v prípade zlúčeniny 3 najskôr naviaže Fmoc-NH(CH₂)₂-S-(CH₂)₂-COOH. Na živici sa potom zostaví lineárny peptid, ktorého sekvencia je uvedená v tabuľke 1, a požadovaný cyklický peptid sa získa pomocou štandardných postupov.

Fmoc-NH(CH₂)₂-S-(CH₂)₂-COOH sa získa postupom opísaným vyššie pre Fmoc-NH(CH₂)₂-S-CH₂-COOH (viď syntéza zlúčeniny 54) s použitím 3-brómpropiónovej kyseliny a 2-aminoetántiolu.

Hmotnostná spektroskopia: (M+H)* 372

24. Syntézy zlúčenín 59 - 69

Tieto zlúčeniny sa syntetizujú pomocou postupov opísaných vyššie v prípade zlúčeniny 3. Na živici sa syntetizujú lineárne peptidy, ktorých vzorce sú znázornené v tabuľke 1, cyklizujú sa pomocou štandardných postupov, odstránia sa z nich ochranné skupiny a vyčistia sa vysokotlakovou kvapalinovou chromatografiou, čím sa získajú výsledné cyklické peptidy ako konečné produkty 59 - 69.

25. Syntéza zlúčeniny 70

Lineárny peptid potrebný na syntézu tejto zlúčeniny (viď tabuľka 1) sa pripraví naviazaním Fmoc-izoglutamínu na He-Leu-AspíOBu*¹) -Val-OTrt-živici. Táto tetrapeptidyl-živica sa pripraví obvyklým spôsobom (viď príprava zlúčeniny 3), začínajúc od 2-chlórtritylchloridovej živice. Lineárny peptid sa potom cyklizuje, odstráni sa z neho ochranná skupina a vyčistí sa štandardným spôsobom, čím sa získa cyklický peptid

70.

26. Syntézy zlúčenín 71 - 77

Tieto zlúčeniny sa syntetizujú pomocou postupov opísaných vyššie v prípade zlúčeniny 3. Na živici sa syntetizujú lineárne peptidy, ktorých vzorce sú znázornené v tabuľke 1, cyklizujú sa pomocou štandardných postupov, odstránia sa z nich ochranné skupiny a vyčistia sa vysokotlakovou kvapalinovou chromatografiou, čím sa získajú výsledné cyklické peptidy ako konečné produkty 71 - 77.

27. Syntézy zlúčenín 78 a 79

Obidve tieto zlúčeniny sa syntetizujú pomocou postupov opísaných vyššie v prípade zlúčeniny 17 (obrázok 12). Na živici sa syntetizujú lineárne peptidy, ktorých vzorce sú znázornené v tabuľke 1, cyklizujú sa pomocou štandardných postupov, odstránia sa z nich ochranné skupiny a vyčistia sa vysokotlakovou kvapalinovou chromatografiou, čím sa získajú výsledné cyklické peptidy ako konečné produkty 78 a 79.

28. Syntéza zlúčeniny 80

Lineárny peptid potrebný na syntézu tohto peptidu (viď tabuľka 1) sa zostaví na 2-chlórtritylchloridovej živici.

3-brómpropiónová kyselina sa podrobí reakcii so živicou podobným spôsobom ako je opísaný v príklade 1 (na prípravu zlúčeniny 3) pre Fmoc-NH(CH₃) _s-COOH. K 3-brómpropionyl-O-( 2-chlórtrityl)-živici sa potom pridá päťnásobný nadbytok piperazínu, čím sa získa piperazin-JJ-propionylderivát naviazaný na živicu, ktorého vzorec je uvedený nižšie:

Potom sa na živici zostaví lineárny peptid, odštiepi sa a cyklizuje pomocou postupov opísaných pre zlúčeninu 11 (obrázok 11). N-koncová benzyloxykarbonylová skupina sa odstráni katalytickou hydrogenolýzou s použitím 5 % paládia na uhlí, pomocou postupu opísaného pre zodpovedajúci stupeň pri zlúčenine 11. N-koncová aminoskupina sa potom acetyluje reakciou cyklického peptidu s acetanhydridom v dimetylformamide. Odštiepením ochrannej skupiny z AspíOBu^) a následným vyčistením surového peptidu vysokotlakovou kvapalinovou chromatografiou sa získa požadovaná cyklická zlúčenina 80.

29. Syntéza zlúčeniny 81

Zlúčenina 81 sa syntetizuje pomocou postupov opísaných vyššie v prípade zlúčeniny 16 (obrázok 6). Na živici sa syntetizuje lineárny peptid, ktorého vzorec je znázornený v tabuľke 1, cyklizuje sa pomocou štandardných postupov, odstráni sa z nej ochranná skupina a vyčistí sa vysokotlakovou kvapalinovou chromatografiou, čím sa získa výsledný cyklický peptid ako konečný produkt 81.

30. Syntéza zlúčeniny 82

Analóg zlúčeniny 11 obsahujúci benzyloxykarbonylovú skupinu na N-konci a D-leucínový zvyšok namiesto íle, ktorého vzorec je uvedený nižšie, sa syntetizuje rovnakým spôsobom ako je opísaný pre zlúčeninu 11 (obrázok 11).

/\.D-Leu-Leu-Asp(OBut)-Va! q [D-Lys-analóg]

N-koncová benzyloxykarbonylová skupina sa odštiepi rovnakým spôsobom a výsledná zlúčenina (350 mg, 0,56 mmol) sa rozpustí v 15 ml dimetylformamidu. Pridá sa 86 mg 2-brómoctovej kyseliny a následne 97 μΐ diizopropylkarbodiimidu. Po 16 hodinách pri teplote miestnosti sa pridá päťnásobný nadbytok piperazínu a reakčná zmes sa nechá stáť pri teplote miestnosti počas ďalších 24 hodín. Rozpúšťadlo sa odparí vo vákuu a zo surového peptidu sa odštiepi ochranná skupina a vyčistí sa po54 mocou štandardných spôsobov.

31. Syntézy zlúčenín 83 a 84

Cyklický peptid obsahujúci D-Lys-D-Leu, ktorého vzorec je uvedený vyššie pri syntéze zlúčeniny 82, sa nechá počas 30 minút reagovať s kyselinou trifluóroctovou, čím sa získa cyklický peptid bez ochranných skupín, ktorého vzorec je uvedený nižšie. Tento peptid sa použije na prípravu zlúčenín 83 a 84.

Pre syntézu peptidu 83 sa 55 mg Boc-4-aminomaslovej kyseliny rozpustí v 2 ml dimetylformamidu a podrobí sa reakcii s 41 μΐ diizopropylkarbodiimidu a 36 mg HOAt. Po 30 minútach pri teplote miestnosti sa reakčná zmes pridá k roztoku 177 mg (0,26 mmol) vyššie uvedeného cyklického peptidu a 92 μΐ diizopropyletylamínu v 10 ml dimetylformamidu a zmes sa mieša počas 6 hodín pri teplote miestnosti. Rozpúšťadlo sa potom odparí vo vákuu a ku zvyšku sa pridá kyselina trifluóroctová na odštiepenie N-koncovej skupiny Boe a surový peptid sa vyčistí vysokotlakovou kvapalinovou chromatografiou, čím sa získa čistá zlúčenina 83.

Cyklický peptid 84 sa pripraví rovnakým spôsobom ako zlúčenina 83, s tým rozdielom, že namiesto Boc-4-aminomaslovej kyseliny sa použije hydrochlorid Να-Boc-Arg.

32. Syntézy zlúčenín 85 až 89

Zlúčeniny 85 až 89 sa syntetizujú pomocou postupov použitých v prípade zlúčeniny 17 (obrázok 7). Vzorce lineárnych peptidov zostavených na živici sú uvedené v tabuľke

1.

33. Syntézy zlúčenín 90 až 105

Tieto zlúčeniny sa syntetizujú pomocou postupov opísaných vyššie v prípade prípravy zlúčeniny 3. Lineárne peptidy, ktorých vzorce sú uvedené v tabulke 1, sa syntetizujú na

2-chlórtritylchloridovej živici, cyklizujú sa pomocou štandardných postupov, odstránia sa z nich ochranné skupiny a vyčistia sa vysokotlakovou kvapalinovou chromatografiou, čím sa získajú výsledné cyklické peptidy ako konečné produkty 90 až 105. V zlúčeninách obsahujúcich zvyšok Π-Arg (zlúčeniny 90, 91, 97, 98, 101, 102 a 103) sa arginínový zvyšok zavedie pri použitia derivátu Fmoc-Arg(Pmc) (viď obrázok 14). Počas záverečného postupu odštiepovania ochranných skupín s použitím kyseliny trifluóroctovej sa rovnako izolujú a bežnými spôsobmi charakterizujú niektoré čiastočne chránené zlúčeniny (zlúčeniny 106 - 109, ktoré stále obsahujú skupinu Pmc).

34. Syntézy zlúčenín 110 až 114

Vyššie uvedené cyklické peptidy sa pripravia reakciou cyklického peptidu c(Melle-Leu-Asp-Val-D-Orn-p-Ala) (zlúčeniny 92) alebo c(Melle-Leu-Asp-Val-fi-lys-n-Lys) (zlúčeniny 95) so zodpovedajúcim aldehydom alebo ketónom a nátriumkyanborohydridom. Napríklad zlúčenina 111 sa pripraví tak, že sa 64 mg (100 gmol) cyklického peptidu 92 rozpustí v 2 ml suchého acetónu a podrobí sa reakcii so 63 mg (10 ekvivalenty) nátriumkyanborohydridu. Po jednej hodine sa reakčná zmes odparí do sucha a zvyšok, rozpustený v 5 ml vody, sa okyslí kyselinou octovou a odparí vo vysokom vákuu. Surový peptid sa vyčistí vysokotlakovou kvapalinovou chromatografiou.

Príklad 2

Testy in vitro a in vivo

V tomto príklade sa používajú nasledujúce skratky a zdroje materiálov:

Bunky MOLT-4 sú líniou lymfocytických T-buniek (získanou zo zbierky kultúr ATCC).

Fibronektín: ľudský fibronektín v čistote reakčného činidla. Purifikuje sa z ľudskej plazmy afinitnou chromatografiou na želatínovej sefaróze. Dodávateľom je Bio Products Elstree Veľká Británia, produkt č. 9136. Súhrnným článkom o fibronektínoch je Fibronectins - Adhesive Glycoproteins of Celí Surface and Blood, K.M.Yamada a K.Olden, Náture, 275 (1978) 179 - 184.

rsVCAM-1 je rekombinantný rozpustný VCAM-1 (viď: Biochem Biohpys Res Comm 1991 178 N3; 1498 - 1504). VCAM-1 je bunkový povrchový glykoproteín produkovaný vaskulárnym endotelom, ako aj na bunkách podobných makrofágom a bunkách dandritického typu, ako odpoveď na určité zápalové stimuly. VCAM-1 interaguje s integrínom VLA-4 prítomným na jednojadrových leukocytoch.

cDNA pre VCAM-1 bola izolovaná screningom cDNA-knižnice z ľudských endoteliálnych buniek aktivovaných IL-Ιβ. V bunkách hmyzu bolo exprimované veľké množstvo tohto proteínu s použitím bacilovírusového expresívneho systému. Zistilo sa, že bunky exprimujúce VCAM-1 sa špecificky viažu na rad bunkových línií exprimujúcich VLA-4 (Jurkat, THP-1, U937).

Ďalšou prácou o VCAM-1 je Expression and Functional Characterisation of Recombinant Human Vascular Celí Adhesion Molecule-1 (VCAM-1) Synthesised by Bacilovirus-Infected Insect Cells, J.K.Stoltenborg, R.A.Straney, R.J.Tritch, W.M.Mackin a H.J. George, Protein Expression and Purification, 4 (1993) 585 - 593.

RPMI 1640 je médium na kultiváciu buniek. Dodávateľom je Gibco BRL (Life technologies, katalógové číslo 31870-025).

Skratka FCS označuje teľacie fetálne sérum. Dodávateľom je Advanced proteins products (West Midlands, Veľká Británia), katalógové číslo AS-302-50.

5Ί

Skratka BCECF-AM označuje acetoxymetylester 2', 7’-bis-(2-karboxyetyl)-5-(e 6)-karboxyfluorosceínu. Dodávateľom je Molecular Probes Inc USA, katalógové číslo B-1150.

CHO DG44 je vaječníková bunková línia čínskeho škrečka (získaná zo zbierky kultúr ATCC; viď: Som Celí Mol Gen 1986, 12, 555 - 666).

Skratka DMEM označuje Dulbeccom modifikované Eaglove médium. Dodávateľom je Gibco BRL (Life technologies, katalógové číslo 41966-029).

Antibiotikom je penicilín-streptomycín. Dodávateľom je Gibco BRL (Life technologies, katalógové číslo 15070-022).

Prístroj Fluorskan (názov je ochrannou známkou) je fluorimeter.

HUVEC sú endoteliálne bunky z ludskej pupočnej šnúry. Primárne kultúry sa pripravia zo vzoriek tkaniva, (viď: J.Clin Invest. 1973, 52, 2745 - 2747).

Rekombinatný ľudský TNFa je faktor nádorovej nekrózy (tumor necrosis factor).

Alzetová osmotická minipumpa je subkutánne implantovaná mikroosmotická pumpa, ktorú dodáva Alza Corporation Palo Alto, Kalifornia, USA.

2.1 Test adhézie bunky MOLT-4/fibronektín-VCAM-1

Test adhézie bunky MOLT-4/fibronektín-VCAM-1 sa používa na skúmanie interakcie integrínu VLA4 (veľmi neskorý antigén, a4/Bl), exprimovaného na bunkovej membráne buniek MOLT-4, s fibronektínom alebo rekombinantným rozpustným VCAM-1 (rsVCAM-1). Polystyrénové mikrotitračné dosky s 96 jamkami sa nechajú pri teplote 4 ’C cez noc poťahovať fibronektínom alebo rsVCAM-1 v koncentráciách 20 Mg/ml alebo 1 Mg/ml. Potom sa na

blokovaniu nešpecifických väzbových miest pridá koncentrovaný (10 mg/ml) roztok albumínu hovädzieho séra (BSA). Po odsatí týchto roztokov sa pridajú rovnaké objemy testovanej zlúčeniny a suspenzie buniek MOLT-4 v koncentrácii 1χ10^β buniek na ml. Adhézia sa uskutočňuje počas 2 hodín inkubáciou pri teplote 37 ’C, neprichytené (neaderentné) alebo zle prichytené bunky sa odstránia jemným pretrepaním a následným vákuovým odsatím. Stanovenie množstva zostávajúcich prichytených buniek sa uskutoční pomocou kolorimetrického testu kyslej fosfatázovej aktivity, ktorá sa odmeria spektrofotometrom. Zlúčeniny, ktoré inhibujú adhéziu, spôsobujú zníženie absorbancie. Štandardné, kontrolné a testovacie pokusy sa vykonávajú v troch opakovaniach a vypočíta sa percento inhibície vzhľadom k úplným štandardom (bez inhibítora) a nešpecifickým štandardom (bez fibronektínu) na každej doske.

2.2 Testy bunka-bunka

2.2.1 VCAM-1 CHO bunky

Bunky MOLT-4 (kultivované v médiu RPMI 1640 doplnenom 5 % FCS a 2 mmol L-glutamínu) sa označia fluorescenčným farbivom BCECF-AM v množstve 30 gg/ml na 3xl0⁶ buniek. CHO DG44 transfektovanej cDNA pre VCAM-1 s plnou dĺžkou sa selektujú na základe expresie VCAM-1 pomocou analýzy FACS a nechajú sa rásť do konfluencie v doskách pre tkanivovú kultiváciu s 96 jamkami. Pred použitím v teste adhézie sa bunky CHO DG44 trikrát premyjú DMEM doplneným 5 % FCS, 2 mmol L-glutamínu a 2 % antibiotika. CHO bunky exprimujúce VCAM-1 sa prekryjú bunkami MOLT-4 v množstve 10^s buniek na jamku a vykonáva sa inkubácia počas 30 minút pri teplote 37 ’C, za obsahu oxidu uhličitého 5 %. Nezachytené (neaderentné) bunky sa odstránia trojnásobným omytím dosiek médiom RPMI 1640 doplneným 5 % FCS a 2 mmol L-glutamínu, a potom sa dosky blotujú za sucha na tkanivový papier. Do každej jamky sa pridá 100 μΐ 2 % prípravku Triton X-100 a dosky sa odmerajú s použitím fluorimetra Fluoroskan (excitácia: 485 nm; emisia: 538 nm). Testované zlúčeniny sa rozpustia v zodpovedajúcich rozpúšťadlách a pridajú sa k bunkám MOLT-4 pred pridaním ku kultúram CHO DG44. Inhibícia adhézie sa vypočíta porovnaním úrovne adhézie (fluorescencie) kontrolných buniek ošetrených iba nosnou látkou a buniek ošetrených testovanou zlúčeninou.

2.2.2 Endoteliálne bunky ľudskej pupočnej žily

Bunky MOLT-4 (kultivované v médiu RPMI 1640 doplnenom 5 % FCS a 2 mmol L-glutamínu) sa označia fluorescenčným farbivom BCECF-AM v množstve 30 gg/ml na 3x10® buniek. Primárne kultúry HUVEC sa nechajú rásť do konfluencie v doskách na tkanivovú kultiváciu s 96 jamkami a inkubujú sa počas 18 hodín s 2 U/ml rekombinantného ľudského TNFa. Pred použitím v teste adhézie sa jednovrstvový povlak primárnych buniek HUVEC premyje M199 doplneným 5 % FCS, 2 mmol L-glutamínu a 2 % antibiotika. Primárne bunky HUVEC sa prekryjú bunkami MOLT-4 v množstve 10^s buniek na jamku a vykonáva sa inkubácia počas 30 minút pri teplote 37 ’C, s obsahom oxidu uhličitého 5 %. Nezachytené (neaderentné) bunky sa odstránia trojnásobným omytím dosiek médiom RPMI 1640 doplneným 5 % FCS a 2 mmol L-glutamínu, a potom sa dosky blotujú za sucha na tkanivový papier. Do každej jamky sa pridá 100 μΐ 2 % prípravku Triton X-100 a dosky sa odmerajú s použitím fluorimetra Fluoroskan (excitácia: 485 nm; emisia: 538 nm). Testované zlúčeniny sa rozpustia v zodpovedajúcich rozpúšťadlách a pridajú sa k bunkám MOLT-4 pred pridaním ku kultúram HUVEC. Inhibícia adhézie sa vypočíta porovnaním úrovne adhézie (fluorescencie) kontrolných buniek ošetrených nosnou látkou a buniek ošetrených testovanou zlúčeninou.

2.3 Kontaktná hypersenzitívna odpoveď in vivo

Samci myší Balb/c s hmotnosťou 20 - 25 g sa senzitizujú 50 μΐ 0,24 % roztoku oxazolónu v zmesi acetónu a olivového oleja miestnou aplikáciou na oholenú časť kože na chrbte. 0 sedem dní neskôr sa myšiam miestne provokačne aplikuje 25 μΐ 0,25 % roztoku oxazolónu v zmesi acetónu a olivového oleja na povrch ucha. Ucho opuchá počas 24 hodín a potom sa odmeria hrúbka ucha a porovná sa s hrúbkou pred provokačnou aplikáciou oxazolónu. Vypočíta sa percento zvýšenia hrúbky ucha. Testované zlúčeniny sa podávajú raz denne Alzetovou osmotickou minipumpou, ktorá sa implantuje 24 hodín pred provokačnou aplikáciou oxazolónu. Inhibícia zápalovej odpovedi sa vypočíta porovnaním hodnôt nameraných u skupiny zvierat ošetrených nosnou látkou a skupiny ošetrenej testovanou zlúčeninou (počet zvierat v skupine je 6).

2.4 Ovalbumínový model hypersenzitivity oneskoreného typu in vivo

Samice myší Balb/C s hmotnosťou 20 - 25 g sa imunizujú na boku emulziou ovalbumínu (od firmy Sigma; 0,1 ml subkutánnej injekcie roztoku s koncentráciou 2 mg/ml zmiešaného v pomere 1:1 s kompletným Freundovým adjuvansom od firmy Difco). 0 sedem dní neskôr sa myšiam subplantárne podá provokačná injekcia ovalbumínu (30 μΐ 1 % teplom agregovaného ovalbumínu vo fyziologickom roztoku) do ľavej zadnej labky. Labka opuchá počas 24 hodín a potom sa odmeria hrúbka labky a porovná sa s hrúbkou pred provokačnou injekciou ovalbumínu. Vypočíta sa percento zvýšenia hrúbky labky. Testované zlúčeniny sa podávajú raz denne Alzetovou osmotickou minipumpou, ktorá sa implantuje 24 hodín pred provokáciou ovalbumínom. Inhibícia zápalovej odpovedi sa vypočíta porovnaním hodnôt nameraných u skupiny zvierat ošetrených nosnou látkou a skupiny ošetrenej testovanou zlúčeninou (počet zvierat v skupine je 5).

2.5 Model antigénom vyvolanej artritídy in vivo

Myši sa imunizujú a o 7 dní neskôr sa im subkutánne aplikuje kombinácia 100 μg metylovaného albumínu hovädzieho séra (BSA) v kompletnom Freundovom adjuvanse a potom sa im intraperitoneálne injikujú organizmy Bordetella pertussis. Dva týždne po tejto aplikácii sa zvieratá intraartikulárne provokujú 100 μg metylovaného albumínu hovädzieho séra (BSA) a meraním opuchu kolenného kĺbu, histologickým meraním a meraním zmien v obsahu proteínov akútnej fázy sa stanoví stupeň zápalu a artritídy. Testované zlúčeniny sa podávajú počas 7 až 14 dní začínajúc deň pred provokačnou aplikáciou a stupeň zápalu a artritídy sa porovná s kontrolnými zvieratami a druhým kolenom.

2.6 Model experimentálnej autoimunitnej encefalomyelitídy

Ochorenie sa vyvolá subkutánnou injekciou zmesi miechového homogenátu, myelínového zásaditého proteínu (MBP) alebo encefalogénnych peptidov s kompletným Freudovým adjuvansom (CFA), v kombinácii s intraperitoneálnou injekciou pertusis-toxínu. Na vyvolanie akútneho ochorenia sa injekcia pertusis-toxínu opakuje 2 dni po imunizácii. Na vyvolanie chronického ochorenia sa podanie pertusis-toxínu vynechá a myšiam sa podajú dve injekcie antigénu v kompletnom Freundovom adjuvanse, s intervalom 7 dní. Ochorenie sa hodnotí klinickým pozorovaním, doplneným histologickým rozborom. Testované zlúčeniny sa podávajú počas 7 až 14 dní začínajúc deň pred provokačnou aplikáciou a symptómy sa porovnajú so symptómami u kontrolných zvierat.

Poznámky k tabuľkám 1 a 2:

prehľadnosť bolo každej zlúčenine uvedenej v pridelené zvláštne číslo. Viacmenej niektoré s rozdielnymi číslami sú v skutočnosti rovnaké.

Pre tabuľkách zlúčeniny

Tieto zlúčeniny sú uvedené nižšie:

= 224 = 225 = 226 = 227 = 228

155 = 156 = 157 = 161

158 = 159 = 160 = 162 = 163 = 196 = 197 = 198 = 171

Tabuľka 1

Syntéza a purifikácia cyklických peptidov

ω >O

1 o

1 Q

1 o

1 0

1

1 0

*

4J

4-J ***

4-J

4J —

P

4J

0

(D 4-J

Φ P

φ 4J

Φ -P

φ P

Φ u

i

4->

4J

Φ 4J

'Φ

ô ‘3

O ‘2

U -3

U '3

U'3

O '3

u

J

$

J

0* □

O

4-> ω > ω

Π3 C ‘>n E: Q

03 C •rH '>i E c

03 C c

<U C

03 C '>'c c

(Q C '> É; c

<o c =>’g C

Q rtJ '>

t

HJ c '> i c

t-3

rn lH

«τι in

tj m O vo

'U m

tj tn

TJ tH

Ό C

)

c

O

3? í

(L

o o

0

0 <£>

0 ^0

0 \O

0

3?

x

c

> ·*-*

5 —

> —

> ~

> -

> —

>

0 >

>

Φ

40

dP r-4

dP

40 f-4

dP -

4

40

40 r-H

if) ·Η

m -H

LT) -H

lf> -H

m ·η

LH -H

O —

4

• t

-i

ιη ·*μ

tH J-4

in Ui

Lf> Ul

in m

in Ui

Ul

Lfl

4

Lfl Ul

Π5

1 4J

i -U

1 4->

1 P

1 4-1

I 4-

J

CM

4J

1 4-J

tn ·γΗ

lH *r4

Uf) -H

O -H

m -p

m -h

O -H

1 lD

-4

lO Ή

,0?

«— c

— c

CM C

— c

»— c

— C

C

*

__________ϊ_

Q

-r

ΐ

Ť '

•H

O

ú

O

o

75

O

o

<<n

O

(J,

O Ml

Q, SL

u r—» ΓΜ

U 'T CM

O CM

u (—· r* -r

CM Ô

cm u

CM r o

CM X o

Π o

Q

o

u

¹

X

-π

o Ή 1—^ >

z

3

Z Ή

X z 75

z č5

z *rt

1 *75 >

75 > Q.

> Q. (O < □ <0

O

> t o.

> C.

> cx

> t c.

(D-lle-Leu-Asp

<

ω <

c f“♦ ω £

(Λ < u jó

Vi < t <υ 1 1 _o

<Λ < «5 1 JU

Vi < 2 o _1 j;

ΰ _j ΰ _! á

ω ό CL 1 .

3 <D _1 > 0 1

2

χ”ω )=o o z <n m-

Q

CJ

o

(J

u

U —7

-¹-

>o

CM

m

ΤΓ

un

o

r*·

OO

c\

x

X o

o

Ί-

·+·

Ό

!

X

o

u

Ο

o

O

o

kj

o Ή CM

ο

o

CJ

o o

o u

u

r<

ο

u

*1 P*

r-

-r*

o x z 1 C3 >

**P‘_|

ľ·

u

CM X G>

CM X u

r* •T“ MM O

' r« X JJ

ó *«M*

*Γ· υ r X ζ Ή

X u

U x

0 N Ul □

Ž t

*r ž 1

x z

1 •r z

Z 75 > á CQ

z 1 75

z 7ô > = CQ

(D Ui

rt >

CQ >

«0 >

Λ > 1 Z“X

~3 m o

> i *2

> 3

Q,

2

s

2

o

C3

CQ

O

ca O

CQ O

m O *—✓

Q O

s—* cx (/>

Q. Vi <

Ο 'SÚ

O x»* a.

'MM' Q. Vi

o.

O.

o.

cx

i 2 S

Vi

(/5 < >

Vi < 1

Vi < >

V U

<

< 1 □

2 O -J 1 2 s

2 u •J

2 3 1

2 t

J 1

M<J _ó

2

? ó

J i

JJ

O

JU MM

á

ä

u> cu

o

t

V>

Ό

r*·

oo

o

CM

m

>O

CN

04

CM

I ο 4_J ---

4-> —~ φ 4-> O '3 ra C

Φ 4-) 0-3 <a c s c n m O c*¹<_ΓΊ ή ’S' u

I 4J lT> -r4 — c

O -H •V L

I 4-> O -h — C

4P O -H >T L

I 4J O -H — C

O Ή M U

I 4-> O -H <- C

1 0

I 0

1 0

1 ô

1 0

ľ 0

*

4—¹

X —

X

x) *-*

X

-P *-*

4J

P

X ^Λ

P

J*-*

P —

(U χ

Φ

X

Φ P

φ P

Φ P

Q) X

Φ 4->

Φ

P

Φ P

Φ

P

Φ P

U

* 3

0-3

0’3

0-3

o ‘n

Q-3

O '3

u

3

O '3

u

'3

O*'

3

Q '3

Φ c

03

Lm

Φ c

Φ C

Φ c

«5 c

Φ c

(Q C

φ

C

Φ C

Φ

C

<c

Φ 3

e

'>.

•g

♦H '> £

'> E

'>> E

'> É=

'>

•P '>, E

'> í

M

• P £

C

c

C

c

C

c

C

c

*5 s

T2

o

3? o

T5 o

Ό o O

ΤΊ O

Ό o

*5

O

Ό m

32

o

ηπ id

Ό C

0

<P

0 lo

0

0 kO

0 xo

0

vo

0 xo

0

U3

0 Ό

5 U5

> —-

>

> —

> “

>

***

> —

>

> —

Ofi —r

o¥>

fp

0*P p

de P

de ή

de rH

de

<—í

de

de »—4

de >“4

O Ή

O

•H

O ·ρ

O X

O -H

o

•H

id ·ρ

o

•X

ld ·Ρ

O -P

P

p

in u

in p

P

*T P

S-i

o

P

«r P

td

P

T !

•4

•^r x

I X

X

1 X

l -P

1 -P

I x

1 -P

1

P

1 P

1

x

1 X

O «Ρ

o

Ή

O -H

O X

Ó X

O -H

o

•P

lň Ή

o

•H

o -p

O -P

·“ c

C

<- c

<— c

— c

·— c

<N

c

>- c

c

<N C

— c

x

cm

T“

/T!?

es

r*

1

z

1

<

CC

CS

es

u

es

o Q

o o

ex

< ex

>> O

< O Σ

2 ex

< Ql

ž

< á

2

o u ex

ΛΙ -r

1 <\t -r -r o-o

<M X

Ó U

CZ

<c

<C

cc

«J

ex

Ql

o

I

o

S—*

< <A

< ex

< 1 ex

1 ex

< á

< 4 ex

ô Lex

Ó k. ex

z z

x z

ô

Val-

Cí >

ez >

eš >

ex >

CC >

3 Φ pj

CQ >

ΰ c. Q.

z

CX

Q.

ex U7

ex V)

ex y*

ex V)

ex l/l

ex y»

ex <Z)

Q.

Q. 03

Q.

es

<

ω <

<

ω <

čx

2

□

3

□

—4

CZ)

o

<o

q

4)

q

OJ

s

3

Φ

i

<

J

X 3

u

J

u

J

-J

Φ

—J

<0

3

s

3

x

3

-J

<Ď

-J

q

O X

q X

O X

3

q X

3

<υ X

1) X

Φ

T

_φ

o

Ql

á

Ql O

á

Ql

ά

L

O 2

C

I

jq

7j U

X-/

0-0

L· \

Ó

U

<_)

Q

Ô

U

u

-

Q

o

CM

(-Ί

ΤΓ

V)

Ό

r-

CO

Ol

o

CM

o

Ό

vQ

Ό

O

Ό

o

r-

Γ-

ex

05

Z o

rt

> 4 a QQ O

o

C3 < t d

C3

3 ά

CC < á

> z> 3 ffl O

<9 4 ex i 73

3

5

E O O u

*r δ o O

o _f CM O

1

ex

es

Ala-Pro-D-i

7c

ex

3

ά

P

ω

n

x

> f 3 ra o

Ί3 > z-s 3 m

3 v Σ 1 <9

> 3 en o

v> < 4 3 3

> 3 CQ ' O

á 4 O u ex 4 p

1 o w ex Ql O

I x z 4 s

< 1 3 Φ —1 1

“Z o z z t o

z > 3

u-Asp(

o ex CÔ < 1 s d t 5 3

1 ex 1 Λ >

4 CL * Λ >

ex V> < 1 3

3 á

ex ys < t 3

tx 4 “S >

cu •a >

i 3

T o o

x: CP < 3

ra O X VI

3 t 3 3 ά

1 z—» 3 en o Z ex <Λ

1 3 ra o ex yj

3 3 á

ó u 4 n Z^> n Ä o

3 t 3 Ql •

z-s 3 n o ex v>

s ra o X VI

ra O X V3 < 4 3

'4 CM z o « CM Z .. ΓΊ

CM Z z

ra O ČÚ y> < 4 3

< 4 3 k—»

i CQ

Ql

<

C3 “Π

• Γ4

<0

< <

<í 4

Z

l

ô

β 3

<1

>%

3

<.

<S

S

4

Z—

0—0

4

1 CX

□

J

ά

Z 5

á

J3

z

ex

r*

00

O

o

CM

en

•cy

ΜΊ

Ό

r*

r-

00

1 0	1 0	1 0 4J Φ 4-1	1 0	1 o	δ	1 0	1 0
Φ 4J	Φ 4J	<D 4J	Φ 4->	Φ 4J		«W Φ 4->			4-» Φ JJ
0-3	U '2	O -2	0'5	u ·=	0'2		o- 2			0^2
05 C	05 C	05 c	05 C	«J C	(B C		05 C			05 C
'>Ί=	'>ils	'> ’É:	'> §	'>’Í	'>		'> És			'c
Τ3 Ο 5 <ο	T5 O 5 vo	'U O 0 O	Έ O 0 o	'S o O \p	0 vc		C Ό m O <0			'S ° 0 <0
> —	>	> —	> —	> —	> —·		> —			> —
ΟΝΟ r—\|	op »—i	do <—I	tfp »—1	C*> Ή	0P r-d		dP z-4			dP cH
α -η	O -H	O -H	m -h	in -h	O -H		O -H			O -H
W 5-1	un tu	m n	m n	m kí	m M		m			0Ί $>4
1 4->	l -U	1 4J	1 4-1	1 4J	1 4->		1 L>			1 4->
Ο —!	O -H	O -H	O -H	O -H	ΙΑ -r4					O -H
— c	— C	«- c	— C	«- C	— c		— c			-- c
					CM X z—o	CM Z z—o	T~ 9---?
	cs	C3	C	tA	Q		Q		c c	0
x—v o	<	<	o							< y
u.	Č!	á	Ól	á	_l_		J_			1
CZ	cZ	ťC	¢3	cs	03 >		03 >			05
<	<	< ái	<	<	CL		Q. O		>
cl	CL	CL	CL	ω		ω Q		Q-
ΊΞ		“S	“S	č5	A O	5 ±		<
>	>	>	>	>	5 o			Z3
ó. «Λ < 3	i. ift < 3	cl <Λ < i •x	cl <Λ < 3	CL 4Λ < « 3	-? z OJ z T I	1 1~ 1 O	<^:	r-z 4
J t	3	3 f	J		1 L o I	1 O Z	CM	\	)=^o
	jD	4J		o o	O o		<-<
4J	c	o	4)	o	4 CM	CM	CM	CM		\
Σ	Σ	Σ	Σ	Σ	Z' T	Z z			o
Q	U	Q	U	U	o—o	o—o		<
m	ΤΓ	vn	Ό	r*	00		Os		o
r-	Γ**	r*	r*	r*·	r*		C*
	“rt		“rt	<3						CM CM
__	>		>	> 1					x x

>			5	s	CM Z	CM Z	-----------S-/ ô Λ
o 'S. «Λ < l □ s	á O >^x CL (A < t 3 J 1	S > 1 s Q O ·<✓ o.	X o 'oí tA < t 3 3 1 C	m O Q. vi < t 3 ·? o	C Ί § Ύ° OJ >	0-000H l·/ \1-PA'	O χ·²\ ^š Q 1 > t
	^-4 O Σ 1 C3	< 3	*5 Σ	«J Σ	Έ5 CQ		ľ i	M		3 ' CD O
Σ ô Ui CL		é	>N	-O S-/	N	O ²	M		CL
< á	o a o	o á	•J á	CL Z « -z < 4	CL I 9			< t « 2
Ó	ó	Σ	ó	ó	1 = T	CM	« <	M	x ® -r
O 1 CM	u t c<	CJ 3	u t «	o 1 r<	® o	% O • <	M	/ <g
z~\ CM x	z~\ e* z	á 1	Γ4 X	Γ4 X	® z T o	® z T o		\	--\ / ^O
o x	o x	od	u x—z x	u V—z x	I o z	M	i o z		Nl
z	z	á	z	z	o—o	o—o
187	00 00	Os OO	o Os	Os	C4 Os	on Os	XT Os

1 0 —

1

1 0

1 •α

1 0

0

*·*

4-1 —

x- —*

XJ

—»

xJ

f**

±J

X^ XJ

xJ

Φ 4->

φ 4-J

φ xJ

(1)

XJ

o

Φ

XJ

Φ xJ

d) ‘3

(U

□

0-3

0'3

o

'3

XX TJ

0

'3

0 *3

O c

o

c

«3 C

03 C

«3 C

Φ

C

(0 -H

Φ

C

Φ c

-a

<n

* w

•F·

•H

•w

4->

ε

'>· S

'X =

'> ε

'> s

-x a

'X

p

'X

C

c

§ SL

c

c a

d

c

Ό C

T? ιΓ)

Ό C

o

Ί7

C

TJ o 5

'Č

U2

0 <x:

0 <Ο

□

0

<X3

>

Π

<0

g —

5

«—·

> —

> -

>

«—O

0 '>-

>

> —

>

XX c

^4

dP —í

σΡ —*

dP »—1

oo

•H Φ

c*P

Gfi

dP

<3 -4

Ο ·Η

O -^4

C

•H

c

cH

Q »f4

iD U

in

u

m u

ΓΊ U

m u

m

u

'<0

ΓΊ

L

CN .U

CN

4-1

1 4-í

1 4J

1

XJ

u u

4J

1 -U

1 -H

1

•H

lT> -H

Ο —t

<3 -H

c

•w

3 4=

o

O -H

Lf> C

ďl

c

— C

— c

— C

**“

s

CL O

C

— c

ťU

CM

ο

.ZL~---

Ô

Z--O

o*

ť

< >

r j

rt

CD

Λ

es

<n

o

k

J

k J

<

>s -J

k_J

1 1

zí

ζ_

ά

á

ά

á

r-

ί

1 qj

1

Λ

cn

es

x

<

>

<

o

_J

< ά

Ql

k

J

Ql

ó.

á

Ql

á

z.

<

es

rt

es

e3

CO

1

CC x

>

05

Φ

Q.

C-

c.

L·

ó. ω

>

Q. (Λ

—1

ΙΛ <

cn <

m <

cn <

<

Q.

<

_φ

J,

Λ

z? Q)

CD <

3

Φ

-ľ

3

2i

—1

Φ -J

—1

-z

_u

—

OJ

<u

_o

<D

>»

<J

<o

ej

o

φ C

D

i

φ

ο

<

o

Σ

S* ΓΊ

ά

Σ--

Q

Ql--

o

****

-Z

Ό

r*

O0

C\

o

CM

cn

ΤΓ

CO

oo

00

CO

C\

r~\ z z

r\

r~\ ~Z. -Z.

r~\ z z

>

7Ξ >

>

es >

L\ /L·

z.

Z_

1 x

I

_L\__ZU

o

ό

$5 o o m .

i>— co O

E Q-

Ί- Ο

« x > o

cn O

(S O

G3 O

Q O

— tn O

'čn O >> O -? o Q| X 1 S > m O

3 m £ cí <z> < 1 3 Φ —1 i Φ

i o o o J-

S L— < Λ > « m O

ό ο ο X

— o m o ž s CD < 1 3 Φ _1 1 Φ φ

Q. cn < j i JJ o s ca

cx cn < S J 4J T Σ E

Q. <n < 1 3 ·? ji *5 s 1 CB C

*cx cn < S 4J Σ es <

S cn < 1 S U -J t JJ *c Σ 1 o O

c_ CD

a CD

á

CL

á

Ql

Q S—✓

<

*-

<

x«k

00 u.

1

>>

3

Q Q

i

Q e

E

<

O C

a O

Q á

Φ _J

ca

<0 -1

Q.

CL

a

o

e

5

<0 >*

Φ Φ

CJ < 1

00 t

02 t

ε o 1

<D >x O 1

«3 S 1

Σ

□1

Σ

Q|

Q

Ql

Qí

a

Q

CM

<n

wn

Ό

r·»

00

O

o

O

o

CM

1 ό

1 0

o

1 0

L—

-U·

jj —*

4J ~

4J —'

4J *-*

4J

4J —

φ -u

Φ

4J

Φ 4->

(D 4J

Q) 4->

Φ 4J

(D 4J

<1>

4J

Φ 4J

n

U* 2

0

-3

0-3

U~3

o-s

U'3

u

'3

0'3

n

/o c

ÍU

C _<fj

<o c

<n C

O C

Π3 C

«J C

<0 C

(B

C

<XJ C

05

•»4

ε

'>

i

'>1-

'>§

'Sn’ís

'>1=

'>£

'>

Ή '> ε

'X

4-1 Q

TJ o 5 vo

c Έ

o vo

4? o 0 VO

c TJ o O VO

C TJ O O VO

c T5 O 0 vo

C TJ o 0 vo

C 'B

O vo

C Ί3 lTi 3

ď to >

S

>

> ’

> —

> ~

> —

>

> —

0

dP r—

dP

«-H

dP r-»

dP »—4

<*> r-4

<K> I-I

<*> Ή

dP ^-4

c*>

c íl)

O Ή

O

Ή

O Ή

O -H

ιΓι -H

O -H

O -M

O

O -H

U-J

c

CO Ui

<r

Ui

m u

m μι

t μι

m μι

m

u

m Ui

Ή

ffj

1 -U

1

4-)

1 4-1

1 4->

1 4J

1 +J

1 4->

1 4J

I

1 4J

Ui

O ·Η

o

Ή

O -M

O -H

iD -H

ď>

un -h

□ X

— C

r^-

C

c

— C

— c

c

— c

Q. O

rc

¹

<

P

c

Ul >x

vo >>

<

ΙΛ >> -J

z-x 4/5 >\

CO u. C

To u* <

vo

k_ o

c L. O

á υ

c_ Ήο <

x Eo <

Ql

Q!

á

ά

á

á 1 VZ

á

á vO

á

ά

a.

Ql

LO >x

tí ΞΖ

a x

Q. u.

ΟνH

ôa u. <

CO V» <

rc <

É O

ao v. <

rc <

tí ΞΖ

á

ά

a

á

Ql

ά

Q!

Ql

Q(

Q!

á

ΓΧ

rc

-

Λ

Γ3

rc

rc·

rc

>

cl

Cl

C-

c.

i-

CL

á.

CL

cx

a.

CL

x

CL

ó.

<

Λ

2

—

3

J

tí -J

J

js

J

2i

tí -1

25

2i

tí U

ύ

tí

ύ

tí

ύ

tí

ύ

tí

ω

tí

Ό

o

tí

a

tí

Σ

2

Σ

2

Σ

2

tí

Ó

tí

Q

(J

O

Q

tí

o

CM

m

rr

KH

Ό

r*

ao

vn

Ό

r-

CO

C\

o

O

o

Ch

o

á Q

*rc ľ>

> z—x

”č > z“x

7; >

a O

”rt >

7S >

Ql z—x.

CU vc <

. O Q O

C2 O

ta p.

w Q O

Έμ VI <

« 3

L· V) <

CL v> <

É t

Ql

-Leu

*e2 v> < 1

CL vz <

Ονο <

7x 00 <

□ 2i

2i ύ

□ 2i

3 2i

75 >

rc > CL

ao Lm <

rc <

tí Ξ

_tí

5 Q

5 c

4 3

1 tí

o

tí

Ql 4

Ql 1

ά 1

o Σ Q

_o 73

J 1 Jj 73

J * ^tí 73

d 1 tí 73

73 2 z—x Q

Σ 4 υ E

tí Σ Q

73 Σ t;

4Λ < ä 2i

V) < 3

rc > 1 3

rc >

rc > 3

CC

Σ o o Q

Σ

O

X

E

H

1

m

c5

ta

vo >> -J ώ

O r· £ >—z

O E Cl.

7? o CQ

ffl VI >» J 1

eo á3

X ao 3

vo x á

o CC tí Σ i

=3 u Σ 4

O a. V3 <

o V-Z> Q. V3 <

O 7£ V) <

vo >S

oo l·

CO u*

VO >S

Cl

Q

z—\

E

3

□

D-Lys(Boc) Val

u qi 1 tí JZ CL. ά

< á ô aL á

< ä é· Eá

J á & E— ä

x? b CO 2-s a>

y -E s “O -5 Ή 1 v> a<

t? b V) x á

r· c e. eo L. C á

O Ql t CT5 3 ά

O á t E O ά

23 4 tí CC v 2 S*/ Q

rc 3

_tí ►— tí B a

z—* O E oc t— <

2i tí τ 2 s_z Q

z—* Q E c>taZ ac u. <

Ch

o

<S

cn

<n

Ό

r*

ao

O\

o

CM CM CM

o CM

CM

ČM

1 0	1 0	1 0	1 0	1 0
U	jj —s.	4J <-*	4J —*	JJ
Φ jj	φ JJ	Φ JJ	Φ JJ	Φ Jj
0'3	0’2	0-3	0-3	0'3
<0 c	<o C	<0 c	Φ C	ta c
•H	•H	*r4	-H	M
'>> É	'>· e	'>> E	g	'> E
C	c	C	C	C
od 60	09 po	09 po	od 60	Od 60
> —	> —-	> —	> —	> —
SP —i	00	CŕP	00 -4	00 -1
C -H	o —i	O -H	O -H	O -H
ΤΓ U	5Γ u	5J· )_l	T U	•M· A
1 4J	1 4-J	1 JJ	1 Jj	1 JJ
in -j	lD ·Η	lH -H	m ·η	O -H
CM C	CM C	CM C	CM C	— C

0	d)	r4 1 ·
	«J	> ·	<U «0 3
		Ό ^Λ	•H A 44
	>1	•H Ό	Ό 44 '3
	>	42 d)	<0 G C
		0 >	+4 φ -H
		0	κη o E
	>1	S -P	'3 C
	c	0 0	Pj 0 3
	Ό ·	>O 0	N 44 N
	rH	•H A	0
	0 to	U '0	A r-4
	44 d	Pj 3	3 E
	U	'—· r—1	A cn
	e --	<a	d) o	«j
	Ή	r-4 -H	E -H H	•H
	4->-H	•H P	0 E	<A
	•H E	A -P	Pj-H (0	CO
	>N (0	P	— O -H	A
	3 N	•H >1	'3 C	Cn
	0 VQ	S C	3 τι <o	o
	Pj<W	O -H	4J 3 > c >cn '>	4J
		P r4	to
	•H	d) d)	d) S E	E
	S	o cn	•H > d»	O
	(0 >	ONA	A
	d) C	44	<0 Pj	43
	•1“1 d)	<β	A 0	o
	3 44	<W>	cn cn 3
	>C MÚ	(β	0	M0
	>0 k	Ό H	P	>
	0 Λ	0 '	E - cn	0
	-P 0	> O	Ή — 0	c
	3		44 dJ H	•H
	44 (D	M '3	•H 44 42	r-4
	in	A ·π	>N PH o	(0
		O 3	3 3	Pj
	e	> JC	O 43 A	m
	E	44 3	Pj 3	>
	<0	(0	44 m	44
··	(Q O	E Λ	m
rH	in	MU 0	> '	vú
	U CM	4J	(B 3	>
Φ	J	cn MO	> >11-4	0
44	Oj X	r-4	'S, C -H	4>á
r4	X	cn ·ϋ	E d) A	10
3	CM	<0	dl Ό 44	r-l
Λ	CM	>j3J > >cn	A Φ-Η	4J
(ϋ	(Q	pj > G	0
44	G '	O '3	3 O	44
	> CM	r-4 Pt		0
44	M CM	75 N	(0 Φ	tn
	-P O	<0 O	cn d) o	>5
to	Λ H	+J A	•n «j	>
Ό	P Oj	>cn	to
C	(0 Eh	'3 0	C cn -h	O J
d)	Oj CO	CU4J	Ό <0 E
cn 0)	d) H A CM	N d) O -H	H >0 (B 0 -H	1—1 Oj X
Al	Oj —	X -P	« ra u

Tabuľka 2

Syntéza a charakterizácia cyklických peptidov

hmotnostná spektoskopia (M+H)*

CM vn

o ΤΓ tn

v tn tn

CM OO »n

554

538

OO C\ vr

M <σ x:

z—x

z**x

z*>

ζ·Μ

z·^

44

é

c

44

_c

44

_C

_c

e

. c

é

HPLC íčný č Ínútac

S

ε

a

ε

ae

a ε

r* C

ε

Ό en

rtj >

O

CA

T > Q

O cn

m O

(0 > -η

O cn

T* o

<13 >

Q cn

oo.

o m

CO CM

O m

— o co n

cn

O cn

CM CM

Ž

£

Ό

Z

ŕ

co’

Ž

ž

CM

ž

tn

í

vo

í

2'J

cm'

Ä

t7 ’·-

OJ

o

«3

o

σι

o

<15

o

c

5

c

>

K

Ό

c

Ό

c

VO

C

VO Ó

Ό Ó

VO

Ό

+J

0

Ó

'0

Ó

•o

'0

ó

Φ >

^-4

Ó

c

2

0

—*

0

—-

o

—

—·

—-

44

m

<N

tt

o

Q

(fl o

c

V)

cn

c

—

>V3 U

c

o

ϋ T-iO

_r

___*

S

3 O

3

O

o

XJ m

D

β

<υ

-J

_J

(0 (Q rH

o

0)

t)

N U)

«M

_

-J

m

tn

-

—

_Λ

tn

_w

o

Cn

C\

HOC (B H

c.

o_

<D

CM

o'

o*

CHtJ

·

——

“

o

·“*·

—

-M

OU 0

o

<υ

o

O

¢5

<3

X X3

)

>

> 55

n

w-T

r-

ca

OO

r~*

o

nr

r-

β

o

Cs

C\

c\

CA

o

♦H | *·

o'

O

o

c

o'

_- c

)

—'

c

^1 3

e

K

Q) (Ú r—1

Cí

¢5

Ä

cs

es

Ä

—I-

z·

W N o >i'>i C

>

0- <

<4

O

<

rH φ

-

•

-

•

0 0 <M

r-

tn

—M

O t

o

T·

C M

o

O

o C

o

c

•H Ό c* S >1 <0 Λ <—<

c'

—

-J*

Q.

c.

G.

Q.

O_

Cl.

u?

cn

Vi

Vi u

ví

4

i

<

< J

<

5

X

Δ,

jf. '

7

x—

o

1

o

u 1 •n

o

z^-** o

o

u

o

TJ

u

o

u

v-l

CM *r

CM

•fi

ΓΊ

jr

_r·

n·*

ô 1 s

T

cl &

’ CM H* ČJ

CM E O

CM o

' CM T· u

δ 1

o x

44

E

s-/ *7*

Vz* 1 *r*

Um Z 1

z t

z 75 >

z 1

i) •H

z

Z

Z í

ctí >

>

CQ >

v*

¢5

es

<s

1

Q.

> u

> c.

> C.

> c.

> t Q.

Q« Vi <

< 1

CO < I

<0 <

c

</5 <

Vi <

t □

S

= Φ

3 Φ

výsled

x

s

3

-J

(Ile-Le

JJ

1 2J 33

(D-íle-

33 3 Ql

O k— CĽ L.

L

>

(J

ω

Q

o

(J

Q

ΤΓ

lúč. •

04

n

v

m

Ό

00

N >U

Ό

ΤΓ r** uc

592.6

567,5

638,4

cc oo* CC vO

x-s

z—M

zs

C

c

C

c

e

E

. E

E

É

E

— ο

r- o

— o

on

o

CM

O

o

r* cc

cc cc

O ΓΊ

tT

cc

CO

CC

c**

CC

CM

c

í

o

i

oo

5

ο

O

o

c

π

o

Ό

vo

VO

ό

ó

Ó

ó

ω

>-

Ο

ΤΓ

vn

c\

ο.

2 '03

o

Cv

Ä

—

— >

—

o'

<

= s _

ŕ 2

V X '<0 -¹ c S

<u

cL

_J

d

- Φ 5

_

cc

VO

Q

oc ň Ž

c

r*

Cv

—T

cv zq g

c\

cm'

Cv

__

o X 0

o

O

o

« 4J E

u

s

<υ

o

-J

—

-J

—

—1

wn

<< 3 $

VO*

o

T7

vri

Cv

O. c c

Cv

o

c

o

o'

~ e <n

O*

—

75

« <P d

75

>

> 4 *°

>

vo

>

2* r-

^'2

CM*

CC

o*

cv

CM*

2 cv

2 S g

O

c *»

p.

o

<p

— o Cm LO

-o 3

Q.

X

CC <

x

izi

>>

«« x n

cn

«Λ

cn

LO

c\

< -

J

< J &

<

ex

<

o'

CM X o

O

CM -L·

o

o-c t

J

CM T

O

Ä.

T

o-

o

[ΓΛ

o—c

J

r

7'

|

J

ΰ >

’ct Ό

v * «Μ

r

1 ^ΖΊ

r

I z.

Ί

r

z x

z

T

/ CL ' ω f i Ϊ ) R¹

03 C CO

Z o CM

L

š)

k

z t

J

k

z'

J

[D-Lys-

f\ ,¹ *Č5 > \ Q_ / ω /

p-Val-NHCh

CO > 1 Q. <n < 1 □

1 ä > Q. v> < t 3

> 1 c. (Λ < 1 3 ® _1 t 3 Φ

>

=O

< /=\

3

<D _J

Φ

r

® yj/ ô /

t □

i

\ Z. /

-Z

le-Le

Q —f Ql

ό Q

Ql Ó O

\\

CM

<

□

Z

z

Z

<

o

L·_____

•

o—o

o-

o

rr

ΙΛ

Ό

r~

00

c\

Ο ΤΓ νη

Ο οο

ΓΊ cC Ό νη w> υη

CM Ό c ε <η Ο cm η

ο χο ό

<Ν <3

Cx σχ ο' ω ι vô σχ θ' u m Ο_ υ

\ο

CX

Ου ο_ ττ ο

CL <Λ <

οο σχ c' (Λ >Λ

οχ •s σχ ΓΓ-

o Γ' o CO

1 X Ό 1 2

1 r X T ⁰⁴L <n 2

1 O *n t °° Λ n S *««<*

1 2

CX CM* ΓXT>

T 2

cn O* r* *n

(-Ί cn cn 1 Ύ 2

1 ’ 00

I>’Í9S -(i-l-W)

00 V? c\ tn 1 T 2

z*>.

z—S

z—\

z—*>

z—\

Z^X

d

C

č

c

—

c

d

>L

zL

E

š

E

f“ c

E

’g

E

c

r“ C

r“

CM

o

CO

o

m <

o

n O

v-1 o

v>

o

r*

o

o o

c o

CM O

CM

ΤΓ

CM

co rn

CM C*»

CM

'’T

ΓΊ

o

*^r

CM

CM. ΤΓ

un

tn

r*

£

fM S>

° -s

o'

έ

m

í

ΤΓ

c-*

^'ŕ

- δ5

o

O

o

c

o

oo

00

Ό

XO

m

OO

00

ó

ό

Ó

ό

ó

CM

CL

*

tn

_w

o

CM

c

un

Cx

ď

<

CM*

Ä

CZ

Ο 7Ξ

7Ξ >

iH O

m <3

3

O 1

< cL

3

<

>

_e

• ww

.

1

CL

ΓΊ

—

m

tn

xo

_

o

O m

Λ3

a

CX

Cx

CX

CO

ο_

_

cm

— ’ í

— c

CM

CX

o*

•x

c\_

—*

o

-

₁ ·Η

_, ·Η

—

<

o

—

CZ >

—

ο

u. CL

o

« <u -J tn

«4 oj —¹ tn

<u . 1

>

o

Ôj

Cl

•

>

- >

_

-

tn

W-) xz

tr> x

tn

XO

xo

ΤΓ

ο

O

o

tn

CX

c\

cx

CX

o

C\

o

—

o_

—‘

o_

o'

o' '5

o'

c

o“

CM*

ó

, _Ί

CZ

« 2

CC

C3

CZ

>x

—

ο

o

b

>

'D

> χφ

>

□

>

C

>

•

-J

J

A

- f—i.

ο

o

co (tj

cx (XJ

a

(

—>

T7

U-) xo

m

ο

XO

o

m

o

cx

>

cx >

o

<

3

a

o

G

o

—'

cx

—

o_

°' c

o g

_' o’

C.

o

a.

—·

cl

e.

C-

<x

CL

e.

CL ·

CL ^re

ČL'C

CO

o

CO

o

CO

ίΛ C

co c

CO

CZ, CJ

< <

CO

<

—

<

< §

<

< cm'

< a'

CM

x

CM

ο

o

z

T ' o o

o

Z

υ 1 ν-»

u r*

(D-C l 04

J

4^ O

kn- L

<·

J

c

0—

<

í

*r

22

ω

•v

eM

—

Ä

ο 1 X ζ i ο U. Cm t S > f cl CO

b *T* ž o L·. a. CZ > 1 CL co

ω CM J, O ~r Z 1 «3 > Q. ω <

CM T o ~T~ Z t > 1 Q. ω

T Q T Z 1 <S > 1 Q. ω <

O CM z Q tc Z t Λ > f a. <n <

z Q 1 CM Z o 1 z 1 CO > i CL

c

CM 5

z—\ >x o 1 >> o *« > 1 c.

Λ < CL 1 ca < 1 C2. 1 “as > CL

>x O « < CL 1 “S > t CL

< <J 2 1 CZ < « C2. čš > i CL

< 1 3 3 1 JU 1 3

< 3 3 t JJ t 3

□ Φ —1 1 3 <0 -J Ql

< 1 □ Φ _! 1 _® Έ

3 Φ qj¹nfo V=o “Ή? .

ZJ Φ —1 < = Φ _1 Ql

cn < 1 =J Φ —J < _φ

CO < i f J

CO < 1 3 3 1 3 3

co < 1 3 3 t j

co < 1 3 1 3

č

C

D

?

o z

c

J

j

Ql

á

<z Q

Q

O

k '

z -¹-

o

>o^ Q

Q

**z U

cm

m

ΤΓ

<n

r-

oo

C\

a

CM

m

tn

m

U1

m

in

XC

VO	1	1 C? co	1 O <n
rn	T v-T		•X· —?
58	M- 59	M- 58	JL m S vo

ττ		’C*	ΤΓ	1 ο ⁰⁰	'’Τ
θ'		(X	Ό~	•f θ'	Γ?
ΤΓ		νη	Ό	J* V	\ο
Ό	Ό	\Ο	VO	S t	Ό

ττ

τ

’C

vn

V->

V-)

vn

νη

Γ-~

r*^w

cn

<n“

d

ď

tf

—T

o*

Ο

cn

m

oo

-cr

vn

—·

cň

V©

r-

r*

Ό

M3

c-

r~

X“·*

z—».

_z—s

c

d

c

C

c

r·

c

Ξ

E

r· r·

E

οο Ο

ο

o

r*

o

cn

o

Ό

o

vO

o

<7\

o

Γ- O

Ch O

Ο m

V

m

cn

ΤΓ

q-

CN

cn

XD

’C

un

CM 'T

O\

CM

00

£

00 CM

£

CN

£

c?

£

27 %

ο

o

’CT

'«T

ΤΓ

oo

cn

00

ό

ô

ό

ó

CN

CM

CN

96.

CC

m Ο

TF

vn

<

o

r*

Ο*

o

Ch

CN

T?

*·

o

C/J

00

—T

o'

CM o

O_

o

cn

CN^-

>s

00

>x

cn

u

Ί

<

Ar

1— <

00

c L.

cn >>

Ί

>>

ΞΖ

—

Uw

O

—

ο

00

r-

<

_e

o

c

Cx

Ch

•

o

—

o

θ'

o_

1)

y

—

*

—

y

CJ

y

_!

-J

u

y

o

_]

mU

•J

—J

<U

υη

Ό

•

1—1

_e

Ch

c\

Ch

00

r*

o

c

σ\

c\

Ch

ο~

Ο

Q*

c\ cf

o_

o

c“

o

7Ξ

cc

CC

>

Va

cc >

Va

>

cn

CN

•

O\

<N

cn

CN

un

·* O\

Ο CO —' ch

ο_

__o

O.

cx

o

O

ô

o

ô

o_

ó

c

O o

·“

—*

o'

·“·

—·

—

-J*

—

— o

cl ^σ

C-

CL

xd

CL

cc

CL

cC

a.

CL

O. v}

«Λ ϋ

V)

Ul

cn

V)

Gv

V)

Vi

•Λ >

< =

<

o

<

< _J

CM

T

ez.—o

,z—o

CM

<

>

s

“Γ

]

1

J

1

f

CC

00

CC

vi

|

ο ·( Ί

k x

J

x ,

J

-A1

u <

<

>x

Ly

1

z f

Έ.

a

Ól

-Lys-D-

Ql

Α

1 CD U<

1 Tn >

-Arg-

CC

l-D-0m-

l-D-Lys-

CC < Ól 1

ý C-.

υ

9«

CL ω

l-D

á 1

a i

I-D

<

CC

cc

ca

CC

J_

Cu >

f ZJ

> t

>

cn

1

Φ

Q.

c.

CL

>

Q.

-J

«Λ

«n

Vi

1

CO

1 Φ

·<

<

CL

<c

t

1

t

1

(β

t

——

3

s

3

s

3

<

eu

-Mel

Le

3

Le

S

i

_t

O

4)

y

O

y

o

φ

tn

_Φ

O

s

PS

S

—1

>

k.

O

4)

o

aj

υ

y

u

φ

—1

®

o

<

o

S

s

S

s

_________/··»

Ól

—o

>·✓

ι—11

Q

y

Q

O

o

O

>·

00

C\

o

CN

cn

TT

m

Ό

ΟΟ

oo

σχ

OX

Ch

OX

C\

Ch

'O

ΤΓ

m

0

ΤΓ

c\

u-l

m

VO

vn

XO

CC

Cv

c

r-

CA

cC

0'

cn

00

ôď

'’T

cn

VI

Cx

VC

CM

VO

rr

T-

00

ΤΓ

ττ

CM

xo

O\

c**

r**

r*·

r*

Ό

Ov

CA

O

VO

z—\

Z—\

Z^.

z—x

z-v

s

Λ“ ‘g

e

«β E

c e

a E

e E

C E

C ε

č E

a E

č E

c E

—

0 ΤΓ

©.

0 V.

c_

0 ’C

c

O ΤΓ

r*

O

O0

O

0 00

O tt

r** χο

O m

O •<T

o m

-s

n?

m O cm m

ľ*“'

’C“

W-J

0

.·

«Μ

m*

00

r**

CM

•s?

£

CM

£

CM CM

O CM

£

s?

CM

0

C

0

c

0

Q

0

00

υη

00

T7

ΤΓ

T7

ΤΓ

00

VO

c

é

ό

c:

ó

Ó

CM

vo*

xc

vC

CA

r*

Cx

VÍ

V-T

_e

vn

r***

CM

o

0

a

CA

c'

Cv

CA

<A

0

—

CA

ĽL’

c

—'

θ'

co

sa

c

c'

o

O x

O

θ'

c

sa

QQ

cn

L-

U.

en

c

00

cn

u.

k—

>\

<

L.

Lm

L·.

en

u.

Um

0

<

—

qi

<

0

<

ľ_ <

<

c\

Ό

vC

r-

O

.

a

r-’

Ό

VO

Ό*

VO

r-’

CX

O

CľX

c\

OV

c

*·

CV

CA

MM·

cx

Cx

c‘

c

_v.

c?

g'

θ'

a *»

0

0'

0

•

s

—

s

c

—

-7

O

3

—*

—

0

4ý

4J

<u

4ý

4J

O

0

OJ

_1

)

_1

-J

_!

J

u

5J

1

•

.

M

00

M

J

CO

oo

00

VO

wn

00

Cv

00

oo

00

VO

00

Cx

o 0'

CA ©

CA a'

CA θ'

CV c'

C

Qv a'

CA ©*

CA θ'

Cv O^-

cq

CA θ'

Cv c'

cT — m

CC

·=

CC

CC >

Ä

<c

CC

cč

Ä

CC

>

cT

r- 0

©‘

CM 00

o* «Μ

r-

a*

vo c\

cq

Ό Cv

r* cx

o*

\d c\

q

t*-· CA

cq

°* <A

.0. 97.

<5 S

c

0

—·

0'

MM

O

0'

cT

—

O

—

0'

~ O'

— 0

— 0'

Q.

0

Q_

Q.

q.

cn

e.

c_

Cl

Q.

C

CL

— «

CL «

Om t)

CL q.

n un

u.

Cn

U

cn

>.

cn

U«

cn

cn —

cn <-

cn u7

cn CX

<

Q_

<

?

<

E-

<

1

<

s

<

< 0

<

< <

< Cl

< H

< 0'

CC

3

Tj

ω

en Um < Ó1

í_ <

cn >A U

(Λ >>

äo 1— <

Arg)

cn á 1

Orn)

-D-Orn)

< a 1 s

E a. 'So u. <

Arg(Pm

r- Γ £ 'en Um <

< á 1 z*x CM

a 1

á 1

á

á t

OJ

a

Cm \m/

ώ

Ql

ά

S

e_

CL

cn

so

cn

sa

CC

c

sa

Qu

_:___

, L··

U

·—

U.

U·

c_

r-

E-

<

—

<

0

<

a.

EQl

0

ói

á

Ql

Ql 1

—·

«L·

MM

«L

*1·

_1.

_L

CQ

CC

CQ

CC

«G

CC

CQ

>

0.

e_

0.

cl

CL

0.

cl

Q.

á.

CL

cx

CX

Cn

cn

V)

cn

<

3

—

3

i

3

4ý 1

4J —1

ej -J

3

S

3

25

jj

JJ

JL)

Jý

_ύ

JU

jj

_ύ

JU

4J

jý

«ý

3

Q

3

4ý

3

“o

>—* 0

»—J aý

3

s

S

s

S

s

S

s

Σ

s

S

XmZ

^^z

x-z

^^z

K-Z

s_z

\^Z

*mm/

\_z

υ

4J

Q

CJ

Cý

0

Q

u

0

U

O

0

o

OO GX

e

CM

m

tt

m

vo

Γ'·

oo

O\

a

cx

Cx

0

o

0

c

682,5	Ό * CM CM r**	tt K ΤΓ Ό C-	m Cl r*
Z—S
c	c	c		c

E·	E	G		E
o o	m O	Ό O		o
Γ- ΓΩ	O Cl	m n
	x-'	S. Sm*
	C4			£
O	O	o		o
ΤΓ	ΤΓ	r*		c-
V)		ό		ό
CM	CM	m
		CM
“w	CM	o
Q.	O

C		-5
L·
O		<
	<
—		cx
o	e	cx		Cl
—*		θ'		o
		_		c

X)	X)	X)		2
)	-J	Ί		e
				J
vri	00	OQ		_e
Cx	CX	CX		o

C	o	o		—
— wn
«5 O	CQ	C3		C
> Z-	>	>		>
	*	•
r*	Cx	—		m
	cx	o_		o_
o	o	—		—
Ľ- M=	Q.			CL
c/) GN	ΙΛ	V3		vi
< o'	<	<		<
	ά	ó 1

ΩΙ		>x	Cd
		N
	x
	<u	D	ΓΝ
OJ	ô	.Ω c	X)
T	44	o
u	>% Q		ΰ

C	C	a	Λ
u.	U	u.	>S
o	o	o	-J
01	ά	Q!	á
«Jb		_L	_L
CC	es		ca
> 1	> 1	> 1	> 1
e.	c.	c.	a.
Vi	C/3	4Λ	V3
<	<	<	<
—	i			CM
	3	·?	J	X) Σ
o	ύ	υ	íj

M·*	MM	MM		rj
X)	t)	OJ	X)	N·/
	S S	Σ S	Σ	Vi >S
v <	θ' <	u <	q”	J
	C4	m	ΤΓ
	M		w

CM

S

Λ (O <o Ό c Φ &> d) A

ΟΙ I I E · H I -H Λ I to O <0 >i O —· Φ (0 Cm ϋ O TJ 44 44 > >0 T-i-h -H CL '>» >

O ľ <0 MO _ _ „ 34 C4 44 44 10 >03 44 \S 44 44 '3 G C Φ a q) -h ή “G •H φ M > CL O ^44 O H O (β o

£ M 4->

i—f Φ H (0 TJ O _ Φ 44 -H Cm > Cm Ό 03 3 44 3 d

U φ tM '—H c >(0 Φ >ffl >0 s-s N O > '3 G

Φ <0 . 44 TJ TJ O Φ > Cm 0<Ή

Cm O > 44

-H £ <0

N MO <W >N 3 H O £ CL>i

C Φ (0 Φ-Η 44 G Φ MO •O C4 44 3 Λ < “ O >G >0 o 44 3 44 ω <0 (0

U A CL

X

MO

U

O in rM t3 in CM vo tn Λ +> . . >iFt r-f « (0 C <

CM

N O Cm

O G O 44 ω (D c to N

C-H H G <u O-H 44 C4 Φ 44 ϋ (0 >i

C (0 M rM Φ .

<0 <0 Φ 3 > TJ >Ί·Η ho . ‘ 44 TJ S £ -H <0 > Φ 44 Cm ’ (0 m

(0 <0 r·I <Β tfl

O MO > E 44 O (0 44 >N Ή O L G CL E <0 A <H U •rt (0 <0 £ vM '3 44

O to

Cm U CL-h N

O L>

<0 (0 (U (B ýmmO φ «j > h

- c * n -H

Φ <0

O

S Ä ň >N

O__. . „

CLA ϋ <—I >,

O C •H £

.... -“-fi <0 £ G 3 Φ φ Φ H ‘ '

Cm TJ -H__

CL Φ Cm G '><

G Φ N

- TJ > O

Cm m -p <0 <0

Cm “ tO > . - > O TJ >i>i H (Q <0 34 tO >ffl P '3

Ml)

G <B Φ >io CLTJ <3 N β - > O Z

0« O

Cm

d) c to

Φ >44 C A Ό 3 H Λ <0 <0

Φ to tO C

Φ > ..

TJ Ό . O -H r-l >Ô (ΟΛΟ TJ O W <0

U) <0 o (0 •H £ £ <0

CM -H CLrM Φ to G >

Poznámky na zobrazenie sekvencii

V tabuľkách 1 a 2 v opise je uvedený číslovaný zoznam

zlúčenín. Patentin,

Nižšie sú zobrazené sekvencie s použitím softwaru ale aj tak nie sú tu uvedené niektoré peptidy

obsahujúce D-aminokyselinu.

V súlade s tým, časť Zobrazenie sekvencii nezahŕňa všetky peptidy uvedené v tabuľkách 1 a 2.

Na účely prehľadnosti a jasnosti je v nasledujúcej tabuľke uvedený vzťah medzi číslami zlúčenín použitými v

tabuľkách

la 2a číslami sekvencii SEQ ID č. uvedenými v

časti Zobrazenie sekvencii.

zlúč.č.	SEQ ID Č.
1-85	1-85 (poznámka:niektoré obsahujú D-aminokyselinu)
86 - 114	neuvedené pretože všetky obsahujú D-aminokyselinu)
115	86
116	87
117	88
118	89
119 - 120	neuvedené pretože všetky obsahujú D-aminokyselinu
121	90
122	91
123	92
124	93
125 - 126	neuvedené pretože všetky obsahujú D-aminokyselinu
127	94
128	neuvedená pretože obsahuje D-aminokyselinu
129	95
130	96
131	neuvedená pretože obsahuje D-aminokyselinu
132	97
133	neuvedená pretože obsahuje D-aminokyselinu
134	98

zlúč.č.

SEQ ID č.

135 - 138

139

140 - 144

145

146

147

148

149

150

Φ 151

152 neuvedené pretože neuvedené pretože

153 - 163	neuvedené	pretože
164
165
166
167
168	neuvedená	pretože
169
170 - 171	neuvedené	pretože
172
173 - 182	neuvedené	pretože

183

184

185

186

187

188 - 191	neuvedené	pretože
192 193 194 195 196 - 228	neuvedené	pretože

všetky obsahujú D-aminokyselinu všetky obsahujú D-aminokyselinu

100

101

102

103

104

105

106

107 všetky obsahujú D-aminokyselinu

108

109

110

111 obsahuje D-aminokyselinu

112 všetky obsahujú D-aminokyselinu

113 všetky obsahujú D-aminokyselinu

114

115

116

117

118 všetky obsahujú D-aminokyselinu

119

120

121

122 všetky obsahujú D-aminokyselinu

Zobrazenie sekvencií

Informácie o sekvencií SEQ ID č. 1:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) dĺžka: 5 aminokyselín (B) typ: aminokyselinová (C) počet reťazcov: jednoreťazcová (D) topológia: cirkulárna (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: modifikované miesto (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = iný”, = 4-aminomaslová kyselina” (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 1:

poznámka = íle Leu Asp Val Xaa

5

Informácie o sekvencií SEQ ID č. 2:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = 4-aminopentánová kyselina (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 2:

poznámka = íle Leu Asp Val Xaa

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 3:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) dĺžka: 5 aminokyselín (B) typ: aminokyselinová (C) počet retazcov: jednoreťazcová (D) topológia: cirkulárna (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = 6-aminohexánová kyselina” (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 3:

íle Leu Asp Val Xaa

5 poznámka =

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 4:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = 7-aminoheptánová kyselina (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 4:

poznámka = íle Leu Asp Val Xaa

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 5:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = 7-aminohexánová kyselina (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = D-konfigurácia (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 5:

poznámka = poznámka =

íle Leu Asp Val Xaa

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 6:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = D-konfigurácia (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid poznámka =

(B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = 6-aminohexánová kyselina (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 6:

Leu Leu Asp Val Xaa

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 7:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = 6-aminohexánová kyselina (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 7:

Pro Leu Asp Val Xaa

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 8:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = 6-aminohexánová kyselina poznámka = poznámka = poznámka = (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 8:

Gly Leu Asp Val Xaa

5

Informácie o sekvencií SEQ ID č. 9

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 1 (D) ďalšia informácia: produkt = iný”, = terciárny leucín (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšia informácia: produkt = iný, = 6-aminohexánová kyselina (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 9:

poznámka = poznámka =

Xaa Leu Asp Val Xaa

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 10:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid

(B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = iný”, = terc-butylalanín (ix) vlastnosť:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = iný”, = 6-aminohexánová kyselina (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 10:

Xaa Leu Asp Val Xaa

5

Informácie o sekvencií SEQ ID č. 11:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = N-acetyl-D-lyzín (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 11:

Xaa íle Leu Asp Val

5

Informácie o sekvencií SEQ ID č. 12:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) dĺžka: 5 aminokyselín (B) typ: aminokyselinová (C) počet reťazcov: jednoreťazcová (D) topológia: cirkulárna (ii) typ molekuly: peptid poznámka = poznámka = poznámka =

100 (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = N-acetyl-D-ornitín (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 12:

Xaa íle Leu Asp Val

5 poznámka =

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 13:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = N-acetylornitín (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 13:

poznámka =

Xaa íle Leu Asp Val

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 14:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 1

101

(D) ďalšie informácie: produkt = iný”, = N-acetyl-D-lyzín (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 2 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = D-konfigurácia (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 14:

Xaa íle Leu Asp Val

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 15:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = 4-aminometylbenzoová kyselina (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 15:

íle Leu Asp Val Xaa

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 16:

(i) charakteristiky sekvencie:

poznámka = poznámka = poznámka =

102 (A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka = = (4-(2-aminoetyl)imidazol-l-yl)octová kyselina (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 16:

íle Leu Asp Val Xaa

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 17:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka = = D-konfigurácia (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka = = piperazin-l-yloctová kyselina (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 17:

Leu Leu Asp Val Xaa

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 18:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) dĺžka: 6 aminokyselín (B) typ: aminokyselinová (C) počet reťazcov: jednoreťazcová

103

(D) topológia: cirkulárna (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = iný”, = piperazin-l-yloctová kyselina (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 6 (D) ďalšie informácie: produkt = BAla (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 18:

íle Leu Asp Val Xaa Ala

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 19:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) dĺžka: 6 aminokyselín (B) typ: aminokyselinová (C) počet reťazcov: jednoreťazcová (D) topológia: cirkulárna (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnosť:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = piperazin-l-yloctová kyselina (ix) vlastnosť:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 6 (D) ďalšie informácie: produkt = BAla poznámka = poznámka = poznámka =

104 (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 19:

Leu Leu Asp Val Xaa Ala

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 20:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = iný”, = N-acetyl-D-lyzín (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 20:

Xaa íle Leu Asp Val

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 21:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = iný”, = N-acetylornitín (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 2 poznámka = poznámka =

105

(D) ďalšie informácie: produkt = iný”, = D-konfigurácia (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 21:

Xaa íle Leu Asp Val

5

Informácie o sekvencií SEQ ID č. 22:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = N-acetyl-D-ornitín (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 2 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = D-konfigurácia (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 22:

Xaa íle Leu Asp Val

5

Informácie o sekvencií SEQ ID č. 23:

(i) charakteristiky sekvencie:

poznámka = poznámka = poznámka =

106

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka = = N-acetyllyzín (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 2 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka = = D-konfigurácia (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 23:

Xaa íle Leu Asp Val

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 24:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka = = N-acetyl-2,4-diaminomaslová kyselina

I (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 2 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka = = D-konfigurácia (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 24: ¹

Xaa íle Leu Asp Val

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 25:

107 (i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka = = N-acetyl-2,4-diaminomaslová kyselina (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 25:

Xaa íle Leu Asp Val

5

Informácie o sekvencií SEQ ID č. 26:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka = = N-acetyl-2,4-diaminomaslová kyselina, D-konfigurácia (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 26:

Xaa íle Leu Asp Val

5

Informácie o sekvencií SEQ ID č. 27:

(i) charakteristiky sekvencie:

108

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka = = N-acetyl-2,4-diaminomaslová kyselina, D-konfigurácia (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 2 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka = = D-konfigurácia (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 27:

Xaa Leu Leu Asp Val

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 28:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 5

109 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = 5-aminopentánová kyselina (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 28:

íle Leu Asp Val Xaa

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 29:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = D-konfigurácia (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = 5-aminopentánová kyselina (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 29:

Leu Leu Asp Val Xaa

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 30:

(i) charakteristiky sekvencie:

poznámka = poznámka = poznámka =

110 (A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = iný”, = D-konfigurácia (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = iný”, = 6-aminohexánová kyselina (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 30:

Val Leu Asp Val Xaa

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 31:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = N-metylalanín (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = 6-aminohexánová kyselina (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 31:

poznámka = poznámka = poznámka = poznámka =

Xaa Leu Asp Val Xaa

5

111

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 32:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = N-metylleucín (ix) vlastnosť:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = 6-aminohexánová kyselina (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 32:

Xaa Leu Ala Val Xaa

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 33:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 2 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = terc-butylalanín (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid poznámka = poznámka = poznámka =

112 (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = iný”, = 5-aminohexánová kyselina (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 33:

íle Xaa Asp Val Xaa

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 34:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = 5-aminopentánová kyselina (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 34:

poznámka = poznámka = íle íle Asp Val Xaa

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 35:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 2 (D) ďalšie informácie: produkt = Nie (ix) vlastnosť:

113 (A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = iný”, = 5-aminopentánová kyselina (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 35:

íle Leu Asp Val Xaa

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 36:

poznámka =

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = 5-aminopentánová kyselina (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 36:

poznámka =

íle Val Asp Val Xaa

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 37:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 2 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka =

114

= cyklohexyl-alanín (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = 5-aminopentánová kyselina (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 37:

íle Xaa Asp Val Xaa

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 38:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 2 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = terc-leucín (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = 5-aminopentánová kyselina (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 38:

íle Xaa Asp Val Xaa

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 39:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) dĺžka: 5 aminokyselín (B) typ: aminokyselinová poznámka = poznámka = poznámka =

115

(C) počet reťazcov: jednoreťazcová (D) topológia: cirkulárna (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnosť:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = D-konfigurácia (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 39:

Lys íle Leu Asp Val

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 40:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = Z-D-lyzín (ix) vlastnosť:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 2 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = D-konfigurácia (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 40:

Xaa íle Leu Asp Val

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 41:

(i) charakteristiky sekvencie:

poznámka = poznámka = poznámka =

116 (A) dĺžka: 5 aminokyselín (B) typ: aminokyselinová (C) počet reťazcov: jednoreťazcová (D) topológia: cirkulárna (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka = = N-(CH₃-CH₂-CO)-lyzín, D-konfigurácia (ix) vlastnosť:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 2 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka = = D-konfigurácia (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 41:

Xaa íle Leu Asp Val

5

Informácie o sekvencií SEQ ID č. 42:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka = = N-(HOOC-CH₂-CH₂-CO)-lyzín, D-konfigurácia (ix) vlastnosť:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 2 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka = = D-konfigurácia (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 42:

117

Xaa íle Leu Asp Val

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 43:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka = = ”N-((CH₃)₂.CH.CO)-lyzín, D-konfigurácia (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 2 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka = = D-konfigurácia (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 43:

Xaa íle Leu Asp Val

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 44:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka =

118 = N-(H_N.CH₂CH₂.CO)-lyzín, D-konfigurácia (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 2 (D) ďalšie informácie: produkt = iný”, poznámka = = D-konfigurácia (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 44:

Xaa Leu Leu Asp Val

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 45:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka = = N-(dietyl)lyzín, D-konfigurácia (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 2 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka = = D-konfigurácia (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 45:

Xaa Leu Leu Asp Val

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 46:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) dĺžka: 5 aminokyselín (B) typ: aminokyselinová

119 (C) počet reťazcov: jednoreťazcová (D) topológia: cirkulárna (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = iný”, poznámka = = N-benzyllyzín, D-konfigurácia (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 2 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka = = D-konfigurácia (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 46:

Xaa Leu Leu Asp Val

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 47:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka = = N-(pyridylkarbonyl)lyzín, D-konfigurácia (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 2 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka = D-konfigurácia (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 47:

120

Xaa íle Leu Asp Val

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 48:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka = = N-(L-Glu)-D-lyzín (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 2 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka = = D-konfigurácia (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 48:

Xaa Leu Leu Asp Val

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 49:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka = = N-(pyroglutámová kyselina)-D-lyzín

121 (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 2 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka = = D-konfigurácia (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 49:

Xaa Leu Leu Asp Val

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 50:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) dĺžka: 7 aminokyselín (B) typ: aminokyselinová (C) počet reťazcov: jednoreťazcová (D) topológia: cirkulárna (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 7 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka = = 3-aminopropiónová kyselina (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 50:

Glu íle Leu Asp Val Pro Xaa

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 51:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 7

122 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = 5-aminopentánová kyselina (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 51:

Glu íle Leu Asp Val Pro Xaa 1 5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 52:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 7 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = 6-aminohexánová kyselina (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 52:

Glu íle Leu Asp Val Pro Xaa

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 53:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 7 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = 8-aminooktánová kyselina (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 53:

poznámka = poznámka = poznámka =

123

Glu íle Leu Asp Val Pro Xaa

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 54:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) dĺžka: 5 aminokyselín (B) typ: aminokyse1inová (C) počet reťazcov: jednoreťazcová (D) topológia: cirkulárna (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = iný”, = D-konfigurácia (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = -NH.CH .CH .S.CH .C0-

2 2 (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 54:

Leu Leu Asp Val Xaa

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 55:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = 5-aminopentánová kyselina poznámka = poznámka = poznámka =

124 (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 55:

íle Leu Asp Val Xaa

5

Informácie o sekvencií SEQ ID č. 56:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = terc-leucín, D-konfigurácia (ix) vlastnosť:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = 5-aminopentánová kyselina (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 56:

poznámka = poznámka =

Xaa Leu Asp Val Xaa

5

Informácie o sekvencií SEQ ID č. 57:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 1

125 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = D-konfigurácia (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = -NH.CH .CH .SO.CH .C0-

2 2 (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 57:

poznámka = poznámka =

Leu Leu Asp Val Xaa

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 58:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = -NH.CH .CH .S.CH .CH .C0-

2 2 2 (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 58:

íle Leu Asp Val Xaa

5 poznámka =

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 59:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid

126 (B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = iný”, = D-konfigurácia (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 59:

Leu Leu Asp Val Gly Gly

5 poznámka =

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 60:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = BAla (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 6 (D) ďalšie informácie: produkt = BAla (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 60:

Leu Leu Asp Val Ala Ala

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 61:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 1

127 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = D-konfigurácia (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = BAla (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 61:

Leu Leu Asp Val Ala Gly

5 poznámka =

Informácie o sekvencii SEQ ID č.62:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = D-konfigurácia a (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = BAla (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 6 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = N-metylalanín (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 62:

poznámka = poznámka =

Leu Leu Asp Val Ala Xaa

5

128

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 63:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = iný”, = ”D-konfigurácia (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = BAla” (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 63:

poznámka =

Leu Leu Asp Val Ala Pro

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 64:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia; 1 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = ”D-konfigurácia (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 5 poznámka =

129 (D) ďalšie informácie: produkt = iný”, = D-konfigurácia” (ix) vlastnosť:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 6 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = D-konfigurácia (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 64:

Leu Leu Asp Val Ala Ala

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 65:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 6 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = 4-aminomaslová kyselina (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 65:

Leu Leu Asp Val Ala Xaa

5 poznámka = poznámka = poznámka = poznámka =

130

Informácie o sekvencii SEQ ID č.66:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 1 ™ (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = D-konfigurácia (ix) vlastnosť:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 6 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = D-konfigurácia (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 66:

Leu Leu Asp Val Ala Ala

5 poznámka = poznámka =

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 67:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / klúč: peptid

131

(B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = D-konfigurácia (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 67:

Leu Leu Asp Val Pro Pro

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 68:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 6 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = D-konfigurácia (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 68:

Leu Leu Asp Val Pro Pro

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 69:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) dĺžka: 5 aminokyselín (B) typ: aminokyselinová (C) počet reťazcov: jednoreťazcová (D) topológia: cirkulárna (ii) typ molekuly: peptid poznámka poznámka = poznámka =

132 (ix) vlastnosť:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka = = 5-aminopentánová kyselina” (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 69:

íle Leu Asp Leu Xaa

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 70:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = iný”, poznámka = = -NH.CH(CONH_a).ch₂.ch₂.co- (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 70:

íle Leu Asp Val Xaa

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 71:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 5

133 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka = = 5-aminopentánová kyselina (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 71:

íle Leu Asp Phe Xaa

5

(D) ďalšie informácie: produkt = Metyllle (ix) vlastnosť:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = BAla (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 73:

íle Leu Asp Val Ala Pro

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 74:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = metyllle (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 6 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka = = D-konfigurácia

134 (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 74: íle Leu Asp Val Ala Ala

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 75:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = metyllle (ix) vlastnosť:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka = = D-konfigurácia (ix) vlastnosť:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 6 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka = = D-konfigurácia (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 75:

íle Leu Asp Val Ala Ala

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 76:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) dĺžka: 6 aminokyselín (B) typ: aminokyselinová (C) počet reťazcov: jednoreťazcová (D) topológia: cirkulárna

135 (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 6 (D) ďalšie informácie: produkt = iný”, poznámka = = D-konfigurácia'’ (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 76:

íle Leu Asp Val Ala Xaa

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 77:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 6

136 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = D-konfigurácia (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 77:

íle Leu Asp Val Ala Lys

5 poznámka =

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 78:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = piperazin-l-yloctová kyselina (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 6 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = -NH.CH .CH .CH .C0-

2 2 (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 78:

íle Leu Asp Val Xaa Xaa

5 poznámka = poznámka =

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 79:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) dĺžka: 6 aminokyselín (B) typ: aminokyselinová (C) počet reťazcov: jednoreťazcová (D) topológia: cirkulárna (ii) typ molekuly: peptid

137 (ix) vlastnosť:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka = = piperazin-l-yloctová kyselina (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 6 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka = = -NH.CH .CH .CH .CH .C0-

2 2 2 (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 79:

íle Leu Asp Val Xaa Xaa

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č.80:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka = = piperazin-l-ylpropiónová kyselina (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 6 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka = = N-acetyllyzín (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 80:

íle Leu Asp Val Xaa Xaa

5

138

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 81:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) dĺžka: 6 aminokyselín (B) typ: aminokyselinová (C) počet retazcov: jednoreťazcová (D) topológia: cirkulárna (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = iný”, poznámka = (4-(2-aminoetyl)imidazol-l-yl)octová kyselina (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 6 (D) ďalšie informácie: produkt = BAla (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 81:

íle Leu Asp Val Xaa Ala

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 82:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka = = N-(piperazin-l-ylacetyl)lyzín, D-konfigurácia (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid

139

(B) lokácia: 2 (D) ďalšie informácie: produkt = iný = D-konfigurácia (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 82:

Xaa Leu Leu Asp Val

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 83:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) dĺžka: 5 aminokyselín (B) typ: aminokyselinová (C) počet retazcov: jednoretazcová (D) topológia: cirkulárna (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnosť:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = iný = N-(NH₂.CH₂.CH₂.CH₂.CO)-lyzín, D (ix) vlastnosť:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 2 (D) ďalšie informácie: produkt = iný = D-konfigurácia (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 83:

Xaa Leu Leu Asp Val

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 84:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) dĺžka: 5 aminokyselín (B) typ: aminokyselinová (C) počet reťazcov: jednoreťazcová (D) topológia: cirkulárna (ii) typ molekuly: peptid poznámka = poznámka = konfigurácia poznámka =

140 poznámka = (ix) vlastnosť:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = N-(Arg)-D-Lys (ix) vlastnosť:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 2 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = D-konfigurácia (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 84:

Xaa Leu Leu Asp Val

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 85:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = D-konfigurácia (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 6 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = piperazin-l-yloctová kyselina (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 85:

íle Leu Asp Val Lys Xaa

5 poznámka = poznámka = poznámka =

141

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 86:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) dĺžka: 5 aminokyselín (B) typ: aminokyselinová (C) počet reťazcov: jednoreťazcová (D) topológia: lineárna (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 3 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka = = 0-(terc-buty1)-Asp (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = 4-Abu (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka = = -NH.CH .CH .CH .COOH

2 2 (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 86:

íle Leu Xaa Val Xaa

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 87:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 3 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka =

142 poznámka = = O-(terc-butyl)-Asp (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = iný”, = -NH.CH .CH .CH .CH .COOH

2 2 2 (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 87:

íle Leu Xaa Val Xaa

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 88:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = -NH.CH .CH .CH .CH .CH .COOH

2 2 2 2 (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 3 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = O-(terc-butyl)-Asp (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 88:

poznámka = poznámka = íle Leu Xaa Val Xaa

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 89:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) dĺžka: 5 aminokyselín (B) typ: aminokyselinová (C) počet reťazcov: jednoreťazcová

143 poznámka =

(D) topológia: lineárna (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnosť:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 3 (D) ďalšie informácie: produkt = iný = O-(terc-butyl)-Asp (ix) vlastnosť:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = iný = -NH.CH .CH .CH .CH .CH .CH .CH

2 2 2 2 2 2 (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 89:

íle Leu Xaa Val Xaa

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 90:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = iný = -NH.CH .CH .CH .CH .CH .COOH

2 2 2 2 (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 90:

Pro Leu Xaa Val Xaa

5 poznámka =

COOH , poznámka = , poznámka =

144

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 91:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 3 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = O-(terc-butyl)-Asp (ix) vlastnosť:

2 2 2 2 (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 91:

poznámka = poznámka =

Gly Leu Xaa Val Xaa

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 92:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = terc-Leu poznámka = (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid

145

(B) lokácia: 3 (D) ďalšie informácie: produkt = iný”, = O-(terc-butyl)-Asp (ix) vlastnosť:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = -NH.CH .CH .CH .CH .CH .COOH

2 2 2 2 (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 92:

Xaa Leu Xaa Val Xaa

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 93:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = terc-butylalanín (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 3 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = 0-(terc-butyl)-Asp (ix) vlastnosť:

2 2 2 2 (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 93:

poznámka = poznámka = poznámka = poznámka = poznámka =

146

Xaa Leu Xaa Val Xaa

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 94:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = Z-Orn (ix) vlastnosť:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 4 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = O-(terc-butyl)-Asp (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 94:

poznámka = poznámka =

Xaa íle Leu Xaa Val

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 95:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 3 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = O-(terc-butyl)-Asp poznámka =

147 (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka = = ”4-aminometylbenzoová kyselina (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 95:

íle Leu Xaa Val Xaa

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 96:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 3 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka = = O-(terc“butyl)-Asp (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka = = (4-(2-aminoetyl)imidazol-l-yl)octová kyselina (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 96:

íle Leu Xaa Val Xaa

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 97:

(i) charakteristiky sekvencie:

148 (D) topológia: lineárna (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = BAla (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 4 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = O-(terc-butyl)-Asp (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 6 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = piperazin-l-yloctová kyselina (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 97:

Ala íle Leu Xaa Val Xaa

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 98:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = Z-Lys (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 4 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = O-(terc-butyl)-Asp poznámka = poznámka = poznámka = poznámka =

149 (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 98:

Xaa íle Leu Xaa Val

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 99:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = iný”, poznámka = = Z-(2,4-diaminomaslová kyselina) (ix) vlastnosť:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 4 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka = = O-(terc-butyl)-Asp (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 99:

Xaa íle Leu Xaa Val

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 100:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) dĺžka: 5 aminokyselín (B) typ: aminokyselinová (C) počet reťazcov: jednoreťazcová (D) topológia: 1ineárna (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnosť:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 1

150

(D) ďalšie informácie: produkt = iný, = N-metylalanín (ix) vlastnosť:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 3 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = O-(terc-butyl)-Asp (ix) vlastnosť:

2 2 2 2 (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 100:

poznámka = poznámka = poznámka =

Xaa Leu Xaa Val Xaa

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 101:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka = poznámka = poznámka =

151 = -NH.CH .CH .CH .CH .CH .COOH

2 2 2 2 (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 101:

Xaa Leu Xaa Val Xaa

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 102:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) dĺžka: 5 aminokyselín (B) typ: aminokyselinová (C) počet retazcov: jednoreťazcová (D) topológia: lineárna (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnosť:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 2 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = terc-butylalanín (ix) vlastnosť:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 3 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = O-(terc-buty1)-Asp (ix) vlastnosť:

2 2 2 2 (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 102:

íle Xaa Xaa Val Xaa

5 poznámka = poznámka = poznámka =

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 103:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) dĺžka: 5 aminokyselín (B) typ: aminokyselinová

152

(C) počet reťazcov: jednoreťazcová (D) topológia: lineárna (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 3 (D) ďalšie informácie: produkt = '•iný, = O-(terc-butyl)-Asp (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = -NH.CH .CH .CH .CH .COOH

2 2 2 (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 103:

poznámka = poznámka = íle íle Xaa Val Xaa

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 104:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka = poznámka =

153 = -NH.CH .CH .CH .CH .COOH

2 2 2 (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 104:

íle Leu Xaa Val Xaa

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 105:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = -NH.CH .CH .CH .CH .COOH

2 2 2 (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 105:

íle Val Xaa Val Xaa

5 poznámka = poznámka =

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 106:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / klúč: peptid

154

(B) lokácia: 2 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = cyklohexylalanín'* (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 3 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = O-(terc-buty1)-Asp (ix) vlastnosť:

2 2 2 (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 106:

íle Xaa Xaa Val Xaa

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 107:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 2 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = ”terc-leucín (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 3 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = O-fterc-butylJ-Asp’’ (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 5 poznámka poznámka = poznámka = poznámka = poznámka =

155

(D) ďalšie informácie: produkt = iný, = -NH.CH .CH .CH .CH .COOH

2 2 2 (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 107:

íle Xaa Xaa Val Xaa

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 108:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) dĺžka: 7 aminokyselín (B) typ: aminokyselinová (C) počet reťazcov: jednoreťazcová (D) topológia: lineárna (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = O-(terc-butyl)-Glu (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 7 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = -NH.CH .CH .COOH

2 (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 108:

Xaa íle Leu Xaa Val Pro Xaa

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 109:

(i) charakteristiky sekvencie:

poznámka = poznámka = poznámka = poznámka =

156

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = O-(terc-butyl)-Glu (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 4 (D) ďalšie informácie: produkt = iný'·, = 0-(terc-butyl)-Asp (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 7 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = -NH.CH .CH .CH .CH .COOH

2 2 2 (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 109:

Xaa íle Leu Xaa Val Pro Xaa

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 110:

(i) charakteristiky sekvencie:

poznámka = poznámka = poznámka = poznámka =

157 (A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 4 (D) ďalšie informácie: produkt = iný” = O-(terc-butyl)-Asp (ix) vlastnosť:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 7 (D) ďalšie informácie: produkt = iný = -NH.CH .CH .CH .CH .CH .COOH

2 2 2 2 (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 110:

Xaa íle Leu Xaa Val Pro Xaa poznámka = poznámka =

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 111:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = iný = O-(terc-butyl)-Glu (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 4 (D) ďalšie informácie: produkt = iný = O-(terc-butyl)-Asp (ix) vlastnosť:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 7 (D) ďalšie informácie: produkt = iný = -NH.CH .CH .CH .CH .CH .CH .CH

2 2 2 2 2 2 (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 111:

poznámka = poznámka = poznámka =

COOH

158

Xaa íle Leu Xaa Val Pro Xaa 1 5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 112:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 3 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka = = O-(terc-butyl)-Asp (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = iný”, poznámka = = -NH.CH .CH .CH .CH .COOH

2 2 2 (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 112:

íle Leu Xaa Val Xaa

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 113:

(i) charakteristiky sekvencie:

159 (A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 3 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = 0-(terc-butyl)-Asp (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = -NH.CH .CH .S.CH .CH .COOH

2 2 2 (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 113:

íle Leu Xaa Val Xaa poznámka = poznámka =

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 114:

(i) charakteristiky sekvencie:

2 2 2 (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 114:

poznámka = poznámka = íle Leu Xaa Leu Xaa

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 115:

160

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = NH .CH(C0.NH ).CH .CH .CO- (ix) vlastnosť:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 4 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = O-(terc-butyl)-Asp (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 115:

Xaa íle Leu Xaa Val

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 116:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = -NH.CH .CH .CH .CH .COOH poznámka = poznámka = poznámka = poznámka =

161 (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 116:

íle Leu Xaa Phe Xaa

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 117:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) dĺžka: 6 aminokyselín (B) typ: aminokyselinová (C) počet reťazcov: jednoreťazcová (D) topológia: lineárna (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 4 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = 0-(terc-butyl)-Asp (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 6 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = -NH.CH .CH .CH .CH .COOH

2 2 2 (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 117:

poznámka = poznámka =

Ala íle Leu Xaa Val Xaa

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 118:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) dĺžka: 6 aminokyselín (B) typ: aminokyselinová (C) počet reťazcov: jednoreťazcová (D) topológia: lineárna

162

(ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnosť:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = BAla (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 3 (D) ďalšie informácie: produkt = '•metyllle” (ix) vlastnosť:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 5 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka = = O-íterc-butylJ-Asp'’ (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 118:

Ala Pro íle Leu Xaa Val

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 119:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = 4-Abu (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 4 (D) ďalšie informácie: produkt = iný”, poznámka = = ”O-(terc-butyl)-Asp'· (ix) vlastnosť:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 6

163 (D) ďalšie informácie: produkt = iný”, = piperazin-l-yloctová kyselina (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 119:

Xaa íle Leu Xaa Val Xaa

5 poznámka =

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 120:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / klúč: peptid (B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = NH .CH .CH .CH .CH .C0-

2 2 2 2 (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 6 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, = piperazin-l-yloctová kyselina (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 120:

poznámka = poznámka = poznámka =

Xaa íle Leu Xaa Val Xaa

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 121:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) dĺžka: 6 aminokyselín

164

(B) typ: aminokyselinová (C) počet reťazcov: jednoreťazcová (D) topológia: lineárna (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 1 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka = = NH .CH .CH .CH .CH ..CH(Z).CO-

2 2 2 2 ' ' (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 4 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka = = O-(terc-butyl)-Asp (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 6 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka = = piperazin-l-ylpropiónová kyselina (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 121:

Xaa íle Leu Xaa Val Xaa

5

Informácie o sekvencii SEQ ID č. 122:

(i) charakteristiky sekvencie:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 4

165 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka = = O-(terc-butyl)-Asp (ix) vlastnosť:

(A) meno / kľúč: peptid (B) lokácia: 6 (D) ďalšie informácie: produkt = iný, poznámka = = (4-(2-aminoetyl)imidazol-l-yl)octová kyselina (xi) znázornenie sekvencie SEQ ID č. 122:

Ala íle Leu Xaa Val Xaa

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Cyklický peptid všeobecného vzorca 1 v ktorom

AA1 predstavuje L- alebo β-aminokyselinu vybranú zo súboru zahŕňajúceho íle, Leu a ich aminokyselinové analógy,

AA2 znamená L-aminokyselinu vybranú zo súboru zahŕňajúceho Leu a jeho aminokyselinové analógy,

AA3 predstavuje L-aminokyselinu vybranú zo súboru zahŕňajúceho Asp a jej aminokyselinové analógy obsahujúce vo svojom postrannom reťazci karboxylovú skupinu alebo skupinu napodobňujúcu karboxylovú skupinu,

AA4 znamená L-aminokyselinu vybranú zo súboru zahŕňajúceho Val a jeho aminokyselinové analógy, a

LINKER predstavuje spojovací zvyšok na napojenie N-konca AA1 na C-koniec AA4 za vzniku cyklického peptidu obsahujúceho heterocyklický kruh so 17 až 30 členmi, pričom tento cyklický peptid vykazuje v tu opísanom teste bunky MOLT-4/fibronektín hodnotu IC_so menej ako 20 gmol, alebo/a

167 tento cyklický peptid vykazuje v tu opísanom teste bunky M0LT-4/rekombinantný rozpustný VCAM-1 hodnotu IC_so menej ako 100 gmol, a AA1-4 majú všeobecný vzorec 2 (2) v ktorom

R^x predstavuje postranný reťazec aminokyseliny, a symboly R^a a R³, ktoré môžu byť pre každú z AA1 až AA4 rovnaké alebo rôzne, nezávisle na sebe znamenajú vždy atóm vodíka alebo alkylovú skupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, alebo jeho soľ.
2. Cyklický peptid všeobecného vzorca 1 podľa nároku 1, v ktorom aminokyselinový analóg pre AA1 je vybraný zo súboru zahŕňajúceho Val, Pro, Gly, Tie, terc-Leu, terc-butylAla, Phe, Nie, Met, Arg, Lys a Ala, aminokyselinový analóg pre AA2 je vybraný zo súboru zahŕňajúceho íle, Phe, Val, terc-Leu, Nie, Cha a terc-butylAla, aminokyselinovým analógom pre AA3 je Glu, a aminokyselinový analóg pre AA4 je vybraný zahŕňajúceho Leu, íle, Phe, Cha, Nie a Nva, zo súboru alebo jeho soľ.

168
3. Cyklický peptid všeobecného vzorca 1 podľa nároku 1, v ktorom

AA1 je vybraný zo súboru zahŕňajúceho íle a Leu, pričom obidva tieto zvyšky sú prípadne N-metylované,

AA2 znamená Leu,

AA3 predstavuje Asp, a

AA4 znamená Val, alebo jeho soľ.
4. Cyklický peptid všeobecného vzorca 1 podľa ľubovoľného z nárokov 1 až 3, v ktorom

LINKER predstavuje skupinu všeobecného vzorca 4 (4) v ktorom n má hodnotu 3 - 5, a symboly R⁴ a R^s predstavujú vždy atóm vodíka, alebo

R⁴ znamená skupinu NH₂, ktorá je prípadne substituovaná skupinou C_x__iQC(O)-, alebo je skupina NH₂ prípadne substituovaná cez α-karboxylovú skupinu prirodzenými aminokyselinami, pričom N-koniec aminokyseliny je prípadne substituovaný skupinou

169 alebo je skupina NH_a prípadne mono- alebo disubstituovaná alkylovou skupinou s 1 až 4 atómami uhlíka, alebo je skupina NH₂ prípadne substituovaná benzylovou skupinou, pyridylovou skupinou, karboxyalkanoylovou skupinou s 2 až 5 atómami uhlíka v alkanoylovej časti alebo aminoalkanoylovou skupinou s 2 až 5 atómami uhlíka, a

R^s predstavuje atóm vodíka, alebo R⁴ znamená atóm vodíka, a

R^s predstavuje karboxylovú skupinu prípadne substituovanú alkylovou skupinou s 1 až 4 atómami uhlíka za vzniku esteru, alebo R^s predstavuje amidovú skupinu všeobecného vzorca -CONR⁶R⁷, kde symboly R⁶ a R⁷ nezávisle na sebe znamenajú vždy atóm vodíka alebo alkylovú skupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, alebo jeho soľ.
5. Cyklický peptid všeobecného vzorca z nárokov 1 až 3, v ktorom

LINKER predstavuje skupinu ľubovoľného uvedených na obrázku 13, alebo jeho soľ.
6. Cyklický peptid všeobecného vzorca z nárokov 1 až 3, v ktorom

1 podľa ľubovoľného zo vzorcov 6-44

1 podľa ľubovoľného vzorcov 6, 7, 8,13,

LINKER predstavuje skupinu ľubovoľného zo

17, 18, 19, 20 alebo 21 - 44 uvedených na obrázku 13, alebo jeho soľ.

170
7. Cyklický peptid všeobecného vzorca 1 podľa ľubovoľného z nárokov 1 až 3, v ktorom

LINKER predstavuje dipeptid obsahujúci aspoň jednu zásaditú aminokyselinu, alebo jeho soľ.
8. Cyklický peptid všeobecného vzorca 1 podľa nároku 7, v ktorom sú aminokyselinami v dipeptide predstavovanom symbolom LINKER ^-aminokyseliny, alebo jeho soľ.
9. Cyklický peptid všeobecného vzorca 1 podľa nároku 8, v ktorom je dipeptid vybraný zo súboru zahŕňajúceho dipeptidy vzorcov 24 - 38, 43 a 44 uvedených na obrázku 13, alebo jeho soľ.
10. Cyklický peptid všeobecného vzorca 1 podľa nároku 1, vybraný zo skupiny zahŕňajúcej cyklické peptidy nasledujúcich vzorcov, v ktorých sa údaje v hranatých zátvorkách týkajú časti zodpovedajúcej symbolu LINKER