SK5922003A3 - Repinotan kit - Google Patents

Description

Oblasť techniky

Vynález sa týka súpravy obsahujúcej farmaceutickú kompozíciu obsahujúcu repinotan alebo fyziologicky prijateľnú soľ repinotanu a prostriedok na stanovenie koncentrácie repinotanu alebo jeho metabolitov v telových tekutinách, ako i nových farmaceutických kompozícií obsahujúcich repinotan alebo fyziologicky prijateľnú soľ repinotanu a spôsobu ich výroby.

Doterajší stav techniky

Na akútne liečenie neurodegeneratívnych ochorení, medzi ktoré patrí záchvat mŕtvice a poranenie lebky a mozgu, ktorá u pacientov často vedie k dlhodobým neurologickým a funkčným deficitom, až doteraz nebol vo svete prijatý ako účinný žiadny liečebný princíp. Okrem nasadenia trombolytík (napríklad t-PA) v prvých troch hodinách po ischemickom záchvate mŕtvice, prípadne použitie nimodipínu u pacientov s traumatickým subarachnoidálným krvácaním ešte neexistujú žiadne medikamentózne prístupy, ktoré by v patologickej kaskáde poskytovali dostatočný záchranný mechanizmus.

Patentový dokument EP-A-0 352 613 popisuje použitie 2-[4-({[ (2R)chróman-2-yI]metyl}amino)butyl]-1,2-benzizotiazol-3(2H)-ón-1,1 -dioxidu (generické meno: repinotan) a repinotanových solí na liečenie ochorení centrálnej nervovej sústavy, predovšetkým záchvatu mŕtvice.

V patentovom dokumente DE-A-195 43 476 je popísaná vhodnosť repinotanu a jeho solí na liečenie mozgovo-lebečných poranení.

PP 0592-2003

32128/H

Repinotan preukázal pri početných klinických štúdiách veľmi dobrú znášanlivosť zdravých probantov a pacientov po záchvate mŕtvice alebo po mozgovolebečných poraneniach. Okrem toho je zo získaných klinických údajov zjavné, že neurologické a funkčné deficity môžu byť zlepšené (po 3, prípadne 6 mesiacoch, podľa indikácie). Predovšetkým u pacientov s dosiahnutými koncentráciami v krvnej plazme v rozmedziach od asi 5 do 20 mikrogramov na liter bol výsledok výrazne lepší než u pacientov, ktorým bolo podané placebo.

Podstata vynálezu

Obzvlášť dobrý výsledok liečenia je možné dosiahnuť použitím súpravy podľa vynálezu, ktorá zahrňuje farmaceutickú kompozíciu obsahujúcu repinotan alebo fyziologicky prijateľnú soľ repinotanu a prostriedok na stanovenie koncentrácie repinotanu alebo jeho metabolitov v krvných tekutinách.

Použitie súpravy podľa vynálezu umožňuje aplikovať liečivo, ktoré obsahuje ako účinnú látku repinotan vo forme voľnej bázy alebo vo forme adičnej soli s kyselinou, a v krátkej dobe stanoviť skutočné koncentrácie repinotanu alebo jeho metabolitov v telových tekutinách liečeného pacienta. V dôsledku toho je možné bez straty času a pri nepatrných nárokoch na personál a zariadenie prispôsobiť dávky podávanej účinnej látky tak, aby bola dosiahnutá optimálna terapia. Súprava podľa vynálezu takto predstavuje výrazný pokrok v akútnej terapii neurodegeneratívnych ochorení, predovšetkým záchvatu mŕtvice a mozgovolebečného poranenia.

Farmaceutické kompozície obsiahnuté v súprave podľa vynálezu môžu byť napríklad vo forme tabliet, dražé, piluliek, granulátov, aerosolov, sirupov, emulzií, suspenzií, roztokov alebo lyofilizátov, ktoré môžu byť rekonštituované do formy roztoku. Tieto farmaceutické kompozície obsahujú ako účinnú látku repinotan alebo fyziologicky prijateľnú soľ repinotanu. V tejto kompozícii by mala byť uvedená účinná látka obsiahnutá v koncentrácii asi 0,05 až 95%

PP 0592-2003

32128/H hmotn., výhodne v koncentrácii asi 0,5 až 90% hmotn., vztiahnuté na celkovú hmotnosť zmesi, t.j. v množstvách, ktoré sú dostatočné na to , aby bolo dosiahnuté uvedené dávkovacie rozmedzie. Popri účinnej látke obsahujú farmaceutické kompozície ešte inertné, netoxické, farmaceutický vhodné pomocné látky.

Repinotan má nasledujúci štruktúrny vzorec:

Fyziologicky prijateľné soli repinotanu môžu byť tvorené soľou repinotanu s minerálnymi kyselinami, karboxylovými kyselinami alebo sulfónovými kyselinami. Výhodné sú soli repinotanu s kyselinou chlorovodíkovou, kyselinou bromovodíkovou, kyselinou sírovou, kyselinou fosforečnou, kyselinou metánsulfónovou, kyselinou etánsulfónovou, kyselinou toluénsulfónovou, kyselinou benzénsulfónovou, kyselinou naftaléndisulfónovou, kyselinou octovou, kyselinou propiónovou, kyselinou mliečnou, kyselinou vínnou, kyselinou citrónovou, kyselinou fumarovou, kyselinou maleinovou, alebo kyselinou benzoovou. Výhodnou soľou repinotanu je repinotan hydrochlorid.

Voľba pomocných látok je závislá na type prípravku. Ako pomocné látky možno uviesť napríklad vodu, netoxické organické rozpúšťadlá, ako parafíny (napr. ropné frakcie), rastlinné oleje (napríklad podzemnicový olej/sezamový olej), alkoholy (napríklad etylalkohol, glycerín), nosičové látky, ako napríklad prírodné horninové múčky (napríklad kaolíny, hlinky, mastenec, kriedy), syntetické horninové hlinky (napríklad vysoko disperzná kyselina kremičitá, kremičitany), cukry (napríklad trstinový, mliečny a hroznový cukor), emulgačné činidlá (napríklad estery polyoxyetylénu a mastných kyselín, étery

PP 0592-2003

32128/H polyoxyetylénu a mastných alkoholov), dispergačné činidlá (napríklad lignín, sulfitové lúhy, metylcelulóza, škroby a polyvinylpyrolidón) a mazivá (napríklad stearát horečnatý, mastenec, kyselina stearová a síran sodný).

Výhodne súprava podľa vynálezu obsahuje ako farmaceutickú kompozíciu infúzny roztok obsahujúci účinnú látku alebo pevnú farmaceutickú kompozíciu, z ktorej môže byť získaný infúzny roztok pridaním vody alebo izotonického roztoku elektrolytu.

Obzvlášť výhodným pevným farmaceutickým prípravkom je lyofilizát, ktorý môže byť pridaním vody alebo izotonického roztoku elektrolytu rekonštruovaný napríklad na infúzny roztok. V lyofilizáte má účinná látka zvýšenú skladovaciu stabilitu, pričom z lyofilizátu môže byť ľahko a rýchle za sterilných podmienok získaný roztok bez pevných častíc, ktorý môže byť priamo používaný pri liečení chorých, napríklad vo forme infúzneho roztoku. Okrem účinnej látky výhodne lyofilizát obsahuje ďalšie farmaceutické vhodné pomocné látky, predovšetkým štruktúrotvorné činidlá.

Štruktúrotvornými činidlami v rámci vynálezu sú aminokyseliny, ako napríklad glycín, alanín, alebo kyselina asparágová, peptidy, ako želatína, kolagén alebo albumín, monosacharidy, ako glukóza alebo laktóza, disacharidy, ako maltóza, sacharóza alebo trehalóza, oligosacharidy, ako cyklodextríny alebo maltodextríny, polysacharidy, ako škroby a deriváty škrobu alebo celulóza a deriváty celulózy, polymérn štruktúrotvorné činidlá, ako polyvinylpyrolidón alebo polyetylénglykol, soli, ako chlorid sodný alebo uhličitan vápenatý, alkoholické cukry, ako mannit, sorbit, alebo xylit. Výhodnými štruktúrotvornými činidlami sú mannit, kuchynská soľ, glycín, sacharóza, maltóza, alebo laktóza. Obzvlášť výnosným štruktúrotvorným činidlom je mannit.

PP 0592-2003

32128/H

V prípade, že sa lyofilizát rekonštituuje na infúzny roztok, je takto získaný roztok výhodne izotonickým roztokom. To sa môže dosiahnuť tým, že už lyofilizát obsahuje dostatočné množstvo elektrolytu, akým je napríklad kuchynská soľ, mannit alebo glukóza, alebo tým, že sa na rekonštrukciu a zriedenie roztoku použije izotonický roztok elektrolytu.

Izotonickými roztokmi elektrolytov sú napríklad vodné 0,9%-né (hmotn.) roztoky kuchynskej soli alebo 5%-né (hmotn.) roztoky glukózy.

Podiel účinnej látky v infúznom roztoku by mal predstavovať asi 0,1 mikrogramu/ml až 1 miligram/ml, výhodne asi 0,5 až 5 mikrogramov/ml.

Výroba repinotanu a solí repinotanu je popísaná v patentovom dokumente EP-A-0 352 613. Repinotan hydrochlorid v tomto dokumente zodpovedá príkladu 92H.

Soli podľa vynálezu môžu byť okrem toho získané tak, že sa repinotan vo forme voľnej bázy uvedie v reakcii vo vhodnom rozpúšťadle so stechiometrickým alebo nadstechiometrickým množstvom príslušnej kyseliny pri teplote 0°C až teplote varu rozpúšťadla. Vhodnými rozpúšťadlami sú napríklad voda, alifatické alkoholy, ako metanol, etanol alebo 2-propanol, alifatické étery s otvoreným reťazcom alebo alifatické cyklické étery, ako dietyléter, terc-butyl-metyléter, dioxán, tetrahydrofurán alebo alifatické ketóny, ako 2-propanón, 2-butanón, ako aj ich zmesi. Uvedené soli sa získajú priamo z reakčnej zmesi, prípadne po čiastočnom alebo úplnom oddestilovaní rozpúšťadla, vo forme pevnej látky; získanej soli môžu byť prečistené rekryštalizáciou alebo prezrážaním, napríklad za použitia vyššie uvedených rozpúšťadiel alebo ich zmesí.

Farmaceutické kompozície podľa vynálezu obsiahnuté v súprave môžu predstavovať zmesi repinotanu a jeho solí alebo zmesi rôznych solí repinotanu.

PP 0592-2003

32128/H

Repinotan alebo jeho fyziologicky prijateľné soli môžu byť prevedené o sebe známym spôsobom na obvyklé prípravky, akými sú napríklad tabletky, dražé, pilulky, granule, aerosóly, sirupy, emulzie, suspenzie a roztoky, a to za použitia intertných, netoxických, farmaceutický vhodných nosičov alebo rozpúšťadiel. Výhodné sú roztoky účinnej látky alebo pevné farmaceutické kompozície, ktoré môžu byť prevedené do roztoku a ktorými sú napríklad lyofilizáty. Pritom bude terapeuticky účinná látka vždy k dispozícii v koncentrácii asi 0,05 až 95% hmotn., výhodne asi 0,5 až 90% hmotn., vzťahujúc na celkovú hmotnosť zmesi, t.j. v množstve, ktoré je dostatočné na to , aby sa dosiahlo uvedené dávkovacie rozmedzie.

Uvedené prípravky sa napríklad vyrobia nastavením účinných látok rozpúšťadlami alebo/a nosičmi, prípadne za použitia emulgačných činidiel alebo /a dispergačných činidiel, pričom napríklad v prípade použitia vody ako rozpúšťadla môžu byť prípadne ako pomocné solubilizačné činidlá použité organické rozpúšťadlá.

Okrem toho súprava podľa vynálezu obsahuje prostriedok na stanovenie koncentrácie repinotanu alebo jeho metabolitov v telesných tekutinách.

Môže byť výhodné stanoviť ako analyt namiesto použitej účinnej látky metabolit repinotanu. Metabolity repinotanu sú popísané v literatúre.

Telovými tekutinami sú v rámci vynálezu napríklad moč, krv a z krvi získané frakcie, ako sérum a plazma. Výhodné sú krv a z krvi získané frakcie, obzvlášť výhodne krvná plazma.

Stanovenie koncentrácie repinotanu sa uskutočňuje v krvi alebo vo frakciách získaných z krvi, výhodne v krvnej plazme.

Ako prostriedky na stanovenie koncentrácie repinotanu sú vhodné napríklad chromatografické postupy, akými sú kvapalinová alebo plynová

PP 0592-2003

32128/H chromatografia a na to potrebné zariadenie, ktoré môže byť prípadne spojené s hmotnostným spektrometrom (LC-MS alebo GS-MS). Rovnako sú na to výhodné prostriedky, ktoré pracujú na báze imunologických metód, ako napríklad stanovenie ELISA (Enzýme linked Immunosorbent Assays). Prostriedky tohto typu sú známe.

Obzvlášť výhodné sú prostriedky, ktoré môžu byť použité priamo v mieste, kde prebieha liečenie (bedside - alebo poin-of care-tests), pretože v tomto prípade môže byť bez časového oneskorenia určené dávkovanie, ktoré je prispôsobené na dosiahnutie optimálnej terapie.

Výhodne sa v súprave podľa vynálezu použijú prostriedky na stanovenie koncentrácie analytov popísané v patentovom dokumente WO-A-99/46591. Tieto zariadenie môže byť vyrobené a použité spôsobom rovnako popísaným v uvedenom dokumente a umožňujú bez časového oneskorenia a pri malých nárokoch na personál a zariadenia prispôsobiť potrebné dávkovanie účinnej látky požiadavkám optimálnej terapie.

Obzvlášť vhodná je súprava podľa vynálezu na akútne liečenie neurodegeneratívnych ochorení, predovšetkým záchvatu mŕtvice alebo mozgovolebečného poranenia.

Podanie kompozície podľa vynálezu sa uskutočňuje obvyklým spôsobom, napríklad orálne alebo parenterálne, predovšetkým perlinguálne alebo intravenózne. V prípade použitia orálneho podania môžu samozrejme tabletky popri menovaných nosičových látkach obsahovať také prísady, akými sú citran sodný, uhličitan vápenatý a hydrogénfosforečňan vápenatý spoločne s ďalšími rôznymi prísadami, akými sú škroby, napríklad zemiakový škrob, želatína a podobné látky. Ďalej tu môžu byť pri tabletízácii súčasne použité mazivá, ako napríklad stearát horečnatý, laurylsulfát sodný a mastenec. V prípade vodných suspenzií môžu byť k účinným látkam okrem ich vyššie uvedených pomocných látok pridané taktiež rôzne prísady zlepšujúce chuť

PP 0592-2003

32128/H alebo farbivá. V prípade parenterálneho podávania môžu roztoky účinnej látky obsahovať vhodné kvapalné nosičové materiály.

Všeobecne sa ako výhodné pri intravenóznom podávaní ukázalo podať na dosiahnutie účinných výsledkov účinnú látku v množstve od asi 0,01 ng/kg/h do 10 pg/kg/h (μο alebo mg na kilogram telesnej hmotnosti za hodinu), výhodne asi 0,05 μg/kg/h až 2 μg/kg/h.

Pri orálnom podávaní predstavuje denná dávka účinnej látky 0,001 až 0,2 mg/kg telesnej hmotnosti, výhodne 10 až 100 pg/kg telesnej hmotnosti.

Napriek tomu môže byť niekedy žiaduce odchýliť sa od uvedených dávok a síce v závislosti na telesnej hmotnosti, prípadne spôsobe podania, individuálnej znášanlivosti liečiva, spôsobu jeho prípravy a dobe, prípadne intervalu, v ktorom sa podanie uskutočňuje . Tak môže byť v niektorých prípadoch dostatočné vychádzať z dávok, ktoré sú menšie než vyššie uvedené najnižšie dávky, zatiaľ čo v iných prípadoch musí byť prekročená vyššie uvedená horná hranica. V prípade podania väčších množstiev možno doporučiť rozdeliť takéto množstvá do niekoľkých čiastkových menších dávok podaných v priebehu dňa.

Aby bola u pacienta nastavená terapeuticky priaznivá koncentrácia repinotanu, podá sa pacientom definovaná východisková dávka repinotanu a po uplynutí určitej vopred určenej doby sa skontroluje pomocou prostriedkov podľa vynálezu koncentrácia repinotanu a potom sa prípadne dávkovanie na základe takto stanovenej koncentrácie upraví.

Pacienti sa napríklad podrobia infúzii roztokom, ktorý obsahuje repinotan hydrochlorid, pričom sa infúzia uskutočňuje takou rýchlosťou, že pacienti príjmu 1,25 mg repinotanu za deň. Po šiestich hodinách sa pomocou prostriedkov podľa vynálezu stanoví, či koncentrácia repinotanu v plazme leží nad alebo pod asi 17 pg/l. V prípade, že koncentrácia repinotanu v krvnej

PP 0592-2003

32128/H plazme leží pod uvedenou hraničnou koncentráciou,vykonáva sa ďalšia infúzia zvýšenou rýchlosťou. Ak naopak prestúpi koncentrácia repinotanu v krvnej plazme uvedenú hraničnú koncentráciu zníži sa rýchlosť infúzie tak, aby poskytovala 0,5 mg repinotanu za deň. 12 hodín od počiatku infúzie sa koncentrácia repinotanu v krvnej plazme stanoví znovu, pričom sa zachová infúzna rýchlosť v prípade, že koncentrácia repinotanu v krvnej plazme leží pod 17 f-ig/l, a táto rýchlosť sa naopak zvýši na 0,625, prípadne 0,25 mg repinotanu za deň v prípade, že koncentrácia repinotanu v krvnej plazme prekročí uvedenú hraničnú hodnotu asi 17 μ9/Ι. Týmto spôsobom sa u maximálneho počtu pacientov podarí udržať koncentráciu repinotanu v krvnej plazme v priaznivom terapeutickom dávkovom rozmedzí, ktoré sa pohybuje od asi 5 do 20 pg/l.

V rámci ďalšieho predmetu vynálezu sa vynález týka pevnej farmaceutickej kompozície obsahujúcej repinotan alebo jeho fyziologicky prijateľnú soľ a fyziologicky prijateľnú kyselinu.

S prekvapením sa zistilo, že prídavok fyziologicky prijateľnej kyseliny zvyšuje skladovaciu stabilitu pevných farmaceutických kompozícií obsahujúcich repinotan alebo jeho fyziologicky prijateľné soli.

Fyziologicky prijateľné soli sú v rámci vynálezu napríklad kyselina jablčná, kyselina asparágová, kyselina askorbová, kyselina benzoová, kyselina jantárová, kyselina pyrohroznová, kyselina citrónová, kyselina fumarová, kyselina glutamová, kyselina glykolová, kyselina hippurová, kyselina maleinová, kyselina mliečna, kyselina sírová, kyselina sorbová, kyselina vínna alebo kyselina škoricová. Výhodnými fyziologicky prijateľnými kyselinami sú kyselina jablčná, kyselina pyrohroznová, kyselina citrónová, kyselina fumarová, kyselina maleinová, kyselina mliečna a kyselina vínna. Obzvlášť výhodnými fyziologicky prijateľnými kyselinami sú kyselina citrónová a kyselina vinná.

Účinok podľa vynálezu sa predovšetkým dosiahne u pevných farmaceutických kompozícií, u ktorých obsah účinnej látky, t. j. repinotanu alebo

PP 0592-2003

32128/H jeho fyziologicky prijateľných solí predstavuje 0,01 až 15% hmotn. a obsah fyziologicky prijateľnej kyseliny predstavuje 0,5 až 15% hmotn., vzťahujúc na celkovú hmotnosť kompozície.

Obzvlášť výhodné sú pritom pevné farmaceutické kompozície obsahujúce repinotan hydrochlorid a kyselinu citrónovú alebo kyselinu vínnu.

Pevné farmaceutické kompozície môžu byť pripravené obvyklými spôsobmi.

Ďalší predmet vynálezu sa týka lyofilizátov obsahujúcich repinotan alebo jeho fyziologicky prijateľné soli a fyziologicky prijateľnú kyselinu, pričom ako účinnú látku tento tyofilizát obsahuje repinotan hydrochlorid a ako fyziologicky prijateľnú kyselinu tento lyofilizát obsahuje kyselinu jablčnú, kyselinu pyrohroznovú, kyselinu citrónovú, kyselinu fumarovú, kyselinu maleinovú, kyselinu mliečnu a kyselinu vínnu, pričom obzvlášť výhodnými fyziologicky prijateľnými kyselinami sú v danom prípade kyselina citrónová a kyselina vínna. Dodatočne môžu tieto lyofilizáty výhodne obsahovať farmaceutické pomocné látky, akými sú napríklad vyššie uvedené štruktúrotvorné činidlá.

Pri príprave lyofilizátu sa napríklad vyššie uvedené množstvo repinotanu alebo solí repinotanu, fyziologicky prijateľnej kyseliny a prípadne ďalších farmaceutických pomocných látok rozpustí vo vode a/alebo ďalších vhodných rozpúšťadlách, získaný roztok sa sterilizuje, potom sa naplní do vhodných nádobiek, v ktorých sa potom lyofilizuje.

Vhodnými rozpúšťadlami v rámci vynálezu sú napríklad kyselina octová, alebo ŕerc-butanol.

Uvedený roztok môže byť obvykle pripravený pri teplotách 5 až 35°C, výhodne pri teplote 20 až 25°C. Sterilizácia roztoku v rámci vynálezu znamená prevedenie roztoku do sterilného stavu, napríklad sterilizujúcou filtráciou cez

PP 0592-2003

32128/H filter s najväčšou šírkou pórov 0,2 pg a zhotovený z vhodných materiálov, medzi ktoré napríklad patrí polyétersulfón alebo nylon 6.6.

Vhodnými nádobkami na lyofilizáciu sú napríklad fľaštičky z hutného skla alebo rúrkového skla. Plniaci objem roztoku sa pohybuje medzi 0,2 ml a 20 ml, výhodne medzi 0,5 ml až 5 ml a obzvlášť výhodne medzi 0,7 ml a 3,0 ml:

Roztok sa v nádobkách lyofilizuje. Na to sa nádobky s roztokom uložia do vopred vychladnutých alebo vopred nevychladnutých stojanov a zmrazia. Následná lyofilizácia sa vykonáva vo vákuovej komore pri tlaku 0,005 a 0,18 kPa a teplote -40 až 60°C. Ďalej sa lyofilizácia vykonáva vo vákuovej komore pri tlaku 0,1 Pa až 0,18 kPa a teplote -20 až 70°C.

Alternatívne môže byť lyofilizačný proces uskutočnený spôsobom popísaným v medzinárodnej prihláške PCT/EP00/07034. Lyofilizáciou sa získa stabilný skladovateľný lyofilizát vyššie uvedenej kompozície.

Okrem toho sa vynález týka infúzneho roztoku obsahujúceho repinotan alebo fyziologicky prijateľnú soľ repinotanu a jednu alebo viac kyselín zvolených z množiny zahrňujúcej kyselinu jablčnú, kyselinu pyrohroznovú, kyselinu citrónovú, kyselinu fumarovú, kyselinu maleinovú, kyselinu mliečnu a kyselinu vínnu, výhodne kyselinu citrónovú alebo kyselinu vínnu.

Infúzne roztoky podľa vynálezu majú neočakávane vysokú skladovaciu stabilitu.

Infúznym roztokom je v rámci vynálezu roztok, ktorý obsahuje ako rozpúšťadlo prevažne vodu a normálne má osmolalitu v rozmedzí 250 až 500 mOsmol/kg, výhodne 280 až 350 mOsmol/kg. Vyššie uvedené osmolality sa môžu dosiahnuť tak , že zložku pevnej farmaceutickej kompozície už tvorí potrebné množstvo napríklad kuchynskej soli, mannitu alebo glukózy a že sa potom táto pevná farmaceutická kompozícia rekonštituuje vodou alebo/a zriedi

PP 0592-2003

32128/H vodou, alebo tým, že sa potrebné množstvo uvedených látok pridá spoločne s rekonštitučným alebo zried’ovacím médiom. Koncentrácia repinotanu v uvedenom infúznom roztoku predstavuje obvykle 0,1 až 500 pg repinotanu/ml roztoku, pričom táto koncentrácia výhodne predstavuje 0,5 až 5pg/ml infúzneho roztoku. Uvedený roztok obsahuje také množstvo kyseliny, že jeho hodnota pH pri teplote 20°C je 3,5 až 5, výhodne asi 4.

Normálne sa tento roztoku pridáva pri teplote miestnosti.

V nasledujúcej časti opisu bude vynález bližšie objasnený pomocou konkrétnych príkladov jeho uskutočnenia, pričom tieto príklady majú iba ilustračný charakter a nijako neobmezujú rozsah vynálezu, ktorý je jednoznačne vymezený definíciou patentových nárokov a obsahom popisnej časti.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Príklad 1

Lyofilizát kompozície obsahujúci repinotan hydrochlorid

Zmes 55 mg repinotanu hydrochloridu (zodpovedá 50 mg repinotanu), 20 mg mannitu a 3,7 kyseliny citrónovej sa doplní vodou na objem 1000 ml. Získaný roztok sa sterilizáciou sfiltruje cez filter s maximálnou šírkou pórov 0,2 pm, zhotovený z polyétersulfónu a naplní do fľaštičiek z rúrkového skla. Každá fľaštička obsahuje 1 ml roztoku.

Roztok sa v uvedených fľaštičkách lyofilizuje. Na to sa fľaštičky s roztokom pri teplote miestnosti uložia do stojanu lyofilizačného zariadenia a zmrazia pri teplote -40°C. Následná mrazová sublimácia sa uskutočňuje pri tlaku v lyofilizačnej komore 0,02 kPa a teplote stojanového bloku v lyofilizačnej

PP 0592-2003

32128/H komore 1 Pa a teplote stojanového bloku 40°C. Takto vykonanou lyofilizáciou sa získa stabilný skladovateľný lyofilizát.

Alternatívne môže byť lyofilizácia vykonaná spôsobom, ktorý je popísaný v medzinárodnej prihláške PCT/EP00/07O34.

Analogicky ako v príklade 1 sa počas použitia potrebného množstva mannitolu, kyseliny citrónovej a vody pripravia lyofilizáty s obsahom 0,26 g, 0,681 g, 1,36 g a 2,73 g repinotan hydrochloridu, čo zodpovedá 0,25 g, 0,625 g, 1,25 g, resp. 2,5 g repinotanu.

Príklad 2

Infúzny roztok obsahujúci repinotan hydrochlorid

Z lyofilizovaného produktu získaného v príklade 1 sa pripraví infúzny roztok schopný okamžitého použitia tak, že sa uvedený lyofilizát rekonštituuje pomocou 0,9% (hmotn.) roztoku chloridu sodného, načo sa tento roztok zriedi na celkový objem 500 ml. Získaný roztok schopný okamžitého použitia je chemicky stabilný pri skladovaní po dobu 30 hodín pri teplote miestnosti, čo znamená, že tento roztok po skladovaní za uvedených podmienok obsahuje ešte aspoň 90% nerozloženého repinotanu.

Príklad 3

Stanovenie repinotanu pomocou testu ELISA na mikrotitračnej platni

Tento test sa vykonáva na báze konkurenčného stanovenia ELISA. Proteínový konjugát haptenu, ktorý je analogický s repinotanom sa v konštantnom množstve privedie do reakcie s konštantným množstvom monoklonálnej alebo polyklonálnej protilátky fragmentu Fab alebo Fab2, ktorý

PP 0592-2003

32128/H je špecifický k chemickej štruktúre repinotanu, a konštantným objemom vzorky obsahujúcej repinotan. Z pomeru viazaného a voľného proteínového konjugátu môže byť potom stanovená na základe paralely s kalibračnou krivkou získanou pri stanovení známych koncentrácií repinotanu koncentrácia repinotanu v skúmanej vzorke.

Kozí IgG bol chemicky naviazaný k ďalšiemu uvedenému repinotanovému analógu v molárnom pomere 1:7,5. Tento konjugát bol inkubovaný v 0,1 molárnom natriumkarbonátovom pufre s pH=9,6 po dobu jednej hodiny pri teplote 37°C na mikrotitračnej platni (napríklad na platni Dynex Immulon 2HB). Potom bol blokovaný po dobu 30 minút pri teplote miestnosti pomocou fyziologického roztoku, ktorý bol pufrovaný fosfátom a obsahoval kazeín (1%). Konjugát bol potom trikrát premytý fosfátom pufrovaným fyziologickým roztokom s obsahom tweenu (0,05%).

Na takto pripravenej platni bol uskutočnený konkurenčný test. Na to sa do každej jamky mikrotitračnej platne predložila 100 μΙ vzorka, ku ktorej sa pridalo 100 μΙ roztoku protilátky (myšia anti-repinotanová protilátka, 10 ng/ml vo fosfátom pufrovanom fyziologickom roztoku). Obsah jamiek bol potom inkubovaný pri teplote miestnosti po dobu jednej hodiny. Po trojnásobnom premytí premývacím pufrom (viď vyššie) sa do jamiek mikrotitračnej platne v rámci ďalšej reakcie odpipetuje sekundárna protilátka kopulovaná s chrenovou peroxidázou (1:1; Zymed kozí-anti-myší IgG; zriedené 1:1000). Táto sa viaže na myšiu protilátku špecifickú pre repinotan, ktorá je viazaná na repinotan-analogický haptenový konjugát. Množstvo takto viazanej repinotanšpecifickej myšej protilátky je nepriamo úmerné množstvu voľného repinotanu vo vzorke. Po troch premytiach sa vymyje nadbytočný konjugát protilátkaenzým a po pridaní enzýmového substrátu (TMB) sa zvyšné viazané množstvo fotometrický stanoví kinetickým meraním. S použitím tohto protokolu je možné stanoviť pomocou zodpovedajúcich kalibračných kriviek koncentrácie repinotanu v rozmedzí 1 a 100 ng/ml.

PP 0592-2003

32128/H

Príklad 4

Repinotanový test Point-of-Care

Tento repinotanový test je určený na použitie v oblasti intenzívnej starostlivosti a ďalších oblastiach nemocníc na stanovenie koncentrácie repinotanu nad a pod definovanou hraničnou koncentráciou 17 ng/ml v krvi, krvnom sére a v krvnej plazme. Pritom sa jedná o jednorazový test s vizuálnym odčítaním.

Popis zariadenia

Test je uskutočňovaný na báze vyššie popísaného konkurenčného imunologického procesu na stanovenie menšej molekuly. Ako odčítací mechanizmus sa namiesto enzymatického spektroskopiského postupu použije odrazový signál koloidných zlatých častíc. Všetky potrebné komponenty testu a mechanickej manipulačnej zložky, ktoré sú potrebné na uskutočnenie konvenčného imunologického stanovenia, sú uložené v plastovom zariadení. Toto zariadenie obsahuje mechanizmus na oddelenie krvných buniek od séra a mechanizmus na presné odmeranie určitého množstva takto oddeleného séra. Zásobník pufru obsahuje na reakciu potrebnú kvapalnú fázu, ktorá umožňuje kapilárny pohyb vo vnútri systému. Anti-repinotan-protilátka a hapténkozí-lgG-Au-konjugát sa lyofilizujú v reakčnej komôrke plastového zariadenia. Zmiešavacia komora na konci kapiláry, ako i imunochromatografický testovací pásik doplňujú systém. Na testovacom pásiku sú nanesené stacionárne reakčné zóny: oslia-anti-myšia protilátka a králičia-anti-kozia protilátka.

Pri neprítomnosti repinotanu zachytí oslia-anti-myšia protilátka prevažný podiel zlatého konjugátu a vytvorí červenú farebnú zónu. So stúpajúcou koncentráciou repinotanu v skúmanej vzorke se úmerne tomu anti-repinotanPP 0592-2003

32128/H protilátkou vytesnený zlatý konjugát zachytí reakciu s králičou-anti-kozou protilátkou.

Na konci imunochromatografického testovacieho pásika sa nachádza absorpčná zóna, na ktorej začiatku je nanesené vo vode rozpustné farbivo. Toto farbivo sa pohybuje dopredu spoločne s čelom kvapaliny až na koniec absorpčnej zóny. To ukazuje koniec testovacej reakcie.

Doba testu trvá asi 15 minút a to od aplikácie vzorky až do odčítania výsledku. Test môže byť uskutočnený s použitím 100 až 150 μΙ krvi, čo poskytuje asi 15 μΙ krvného séra.

Na výrobu testovacieho zariadenia sú potrebné nasledujúce reakčné zložky:

a) monoklonálna anti-repinotanová protilátka,

b) Au-repinotanový analóg-kozí IgG-konjugát,

c) koloidné zlato, 20 nm,

d) nitrocelulózové membrána,

e) oslia-anti-myšia protilátka,

f) králičia-anti-kozia protilátka,

g) repinotanový štantard,

h) 0,2% Triton x 305 vo fosfátom pufrovanom fyziologickom roztoku,

i) 0,4% Nonodetu P-40, 2% BSA, 2,5% sacharózy, 1,25% trehalózy vo fosfátom pufrovanom fyziologickom roztoku,

j) 2,5 cm zostupný materiál,

k) plastová základná doštička široká 5,3 cm a hrubá 0,2 mm,

l) ľudské sérum.

PP 0592-2003

32128/H

Uskutočnenie testu

Asi 150 μΙ krvi (5 kvapiek), krvného séra alebo krvnej plazmy sa nanesie na skúšobnú misku testovacieho zariadenia. Testovacie zariadenie sa ponechá asi 3 minúty v horizontálnej polohe. Potom sa držadlo dávkovacieho piestu otočí o 90°C kým dosadne na plocho na dno testovacieho zariadenia. Zariadenie sa potom ponechá po dobu 15 minút pri teplote miestnosti v horizontálnej polohe. Keď sa v okienku ukazovateľa objaví modré znamienko, test je ukončený a je možné pristúpiť k odčítaniu výsledku.

Okrem nanesenia vzorky a uvedenia dávkovacieho piestu do činnosti , nie je potrebné v priebehu celého testu vykonávať žiadne manipulácie so vzorkou, alebo zariadením . Tento test môže preto vykonávať i netechnický personál.

Interpretácia výsledkov.

Ako je opísané v medzinárodnej patentovej prihláške WO-A-99/46591, možno porovnaním intenzít obidvoch pásov v okienkach A a B uskutočniť jednoduché hemikvantitatívne stanovenie koncentrácie repinotanu. Ak je signál v okienku A intenzívnejší ako signál v okienku B , leží koncentrácia repinotanu nad uvedenou hraničnou hodnotou a naopak ak je signál v okienku B intenzívnejší ako v okienku A, potom koncentrácia repinotanu leží pod uvedenou hraničnou hodnotou . Uvedená hraničná hodnota môže byť určená z pomeru koncentrácie anti-repinotan-protilátky a koncentrácie Au-repinotanový analóg-kozí IgG v lyofilizáte.

Repinotanový analóg v Au- (repinotanový analóg)-kozí IgG-konjugáte je tvorený zlúčeninou vzorca

PP 0592-2003

32128/H

Táto zlúčenina je novou zlúčeninou, ktorá môže byť pripravená spôsobom popísaným v patentovom dokumente EP-A-0-352 613, napríklad reakciou repinotanu s ŕerc-butylesterom kyseliny 6-brómhexánkarboxylovej v prítomnosti bázy vo vhodných rozpúšťadlách a následným kyslým štiepením esteru.

Claims (19)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Súprava vyznačujúca sa tým, že obsahuje

   a) farmaceutickú kompozíciu obsahujúcu repinotan a/alebo fyziologicky prijateľnú soľ repinotanu a

   b) prostriedok na stanovenie koncentrácie repinotanu, alebo jeho metabolitov v telových tekutinách.
2. 2. Súprava podľa nároku 1, vyznačujúca sa tým, že farmaceutická kompozícia obsahuje repinotan hydrochlorid.
3. 3. Súprava podľa nároku 1, alebo 2, vyznačujúca sa tým, že obsahuje prostriedok na stanovenie koncentrácie analytov v krvi, alebo vo frakciách získaných z krvi.
4. 4. Súprava podľa nároku 3, vyznačujúca sa tým, že obsahuje prostriedok na stanovenie koncentrácie analytov v krvnej plazme.
5. 5. Súprava podľa niektorého z nárokov 1 až 4, vyznačujúca sa tým, že uvedený prostriedok funguje imunologickým spôsobom.
6. 6. Súprava podľa niektorého z nárokov 1 až 5, vyznačujúca sa tým, že uvedený prostriedok môže byť použitý v mieste liečenia.
7. 7. Súprava podľa niektorého z nárokov 1 až 6, vyznačujúca sa tým, že je určená na akútne liečenie neurodegeneratívnych ochorení.
8. 8. Súprava podľa niektorého z nárokov 1 až 6, vyznačujúca sa tým, že je určená na akútne liečenie záchvatu mŕtvice alebo mozgovolebečného poranenia.

   PP 0592-2003

   32128/H
9. 9. Pevná farmaceutická kompozícia, vyznačujúca sa tým, že obsahuje repinotan alebo fyziologicky prijateľnú soľ repinotanu a fyziologicky prijateľnú kyselinu.
10. 10. Pevná kompozícia podľa nároku 9, vyznačujúca sa tým, že hmotnostný podiel účinnej látky predstavuje 0,01 až 15% hmotn. a hmotnostný podiel kyseliny predstavuje 0,5 až 15% hmotn..
11. 11. Kompozícia podľa nárokov 9 až 10, vyznačujúca sa tým, že ako účinnú látku obsahuje repinotan hydrochlorid a ako fyziologicky prijateľnú kyselinu obsahuje kyselinu citrónovú alebo kyselinu vínnu.
12. 12. Spôsob výroby pevnej farmaceutickej kompozície podľa niektorého z nárokov 9 až 11, vyznačujúci sa tým, že sa účinná látka, fyziologicky prijateľná kyselina a ďalšie farmaceutické pomocné látky rozpustia vo vode a/alebo iných vhodných rozpúšťadlách, získaný roztok sa prípadne sterilizuje a potom lyofilizuje.
13. 13. Pevná farmaceutická kompozícia, vyznačujúca sa tým, že je pripraviteľná spôsobom podľa nároku 12.
14. 14. Infúzny roztok, vyznačujúci sa tým, že obsahuje repinotan alebo fyziologicky prijateľnú soľ repinotanu a jednu alebo viac kyselín zvolených z množiny zahrňujúcej kyselinu jablčnú, kyselinu pyrohroznovú, kyselinu citrónovú, kyselinu fumarovú, kyseslinu maleinovú, kyselinu mliečnu a kyselinu vínnu.
15. 15. Infúzny roztok podľa nároku 14, vyznačujúci sa tým, že ako kyselinu obsahuje kyselinu citrónovú alebo kyselinu vínnu.

    PP 0592-2003

    32128/H
16. 16. Spôsob výroby infúzneho roztoku obsahujúceho repinotan alebo fyziologicky prijateľnú soľ repinotanu a jednu alebo viac kyselín zvolených z množiny zahrňujúcej kyselinu jablčnú, kyselinu pyrohroznovú, kyselinu citrónovú, kyselinu fumarovú, kyselinu maleinovú, kyselinu mliečnu a kyselinu vínnu, vyznačujúci sa tým, že sa ku kompozícii podľa nároku 13 pridá voda alebo izotonický roztok elektrolytu.
17. 17. Infúzny roztok, vyznačujúci sa tým, že je pripraviteľný podľa nároku 16.
18. 18. Použitie kompozície podľa nároku 13 na výrobu infúznych roztokov.
19. 19. Zlúčenina vzorca